CN102669669A - 一种鹿脾提取物制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种鹿脾提取物制剂及其制备方法，通过鹿脾加水或生理盐水或缓冲液进行胶体磨搅碎，通过酶解，离心，取上清，浓缩，喷雾干燥得干粉；此干粉也可与其它一种或多种中药混合制成复方制剂，经同法制得干粉：上述干粉加入保健食品中可接受的辅料后，制成方便服用的口服制剂。本发明具有辅助提高人体免疫力等保健功能，将鹿脾变废为宝，提高鹿脾的利用率。
Description
技术领域
本发明提供一种鹿脾提取物制剂及制备方法，同时还公开了其在提高免疫力方面的应用，属于保健营养食品领域。
背景技术
鹿脾是鹿科动物梅花鹿或马鹿的脾，脾具有促进消化、改善脾胃功能和提高人体免疫力等功能。鹿产品作为药用资源在我国得到大众普遍认可，现在市场上有鹿茸、鹿胎等鹿的相关产品，并且还有脾的相关产品，比如牛脾、猪脾等，但对于鹿脾却是弃之不用，对鹿脾资源造成严重浪费，对鹿脾提取物制剂的研究能够提高鹿脾的利用度，提高鹿资源综合效益。
目前，有关脾的专利主要集中于小牛脾、猪脾等，从中提取多肽或核酸等小分子，主要应用于生物医药领域，应用领域和人群局限。将鹿脾经过酶水解等工艺的提取，制成制剂，用于提高人体免疫力等保健功能，应用人群范围变大。
随着社会进步和经济发展，人类对自身的健康日益关注。90年代以来，全球居民的健康消费逐年攀升，对营养保健品的需求十分旺盛。在按国际标准划分的15类国际化产业中，医药保健是世界贸易增长最快的五个行业之一，保健食品的销售额每年以13%的速度增长，具有多项保健功能的鹿脾提取物的制剂也将会收到人们的青睐。
发明内容
本发明提供了一种鹿脾提取物，具有提高人体免疫力等多种保健功能，用于制备保健营养食品。
本发明提供了一种鹿脾提取物的制备工艺，操作工艺简单，适于工业化生产。
本发明公开了该鹿脾提取物在制备提高免疫力保健营养食品的应用，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服剂型，方便服用，用于辅助提高免疫力。
本发明所述鹿脾提取物的制备方法：称取一定重量的鹿脾，按重量比加入2-15倍去离子水、生理盐水或磷酸缓冲液，采用胶体磨搅碎3-15 min，然后对得到的鹿脾混悬液采用酶水解，水解酶用量为300-3000 U/g，水解时间1-16h，温度为35-40℃，对酶解后溶液进行离心，取上清，测10 KD以下的多肽含量，同时再将上清旋转浓缩蒸发，浓缩液进行喷雾干燥，得鹿脾提取物干粉。
在上述制备工艺中，也可另加入一味或多味具有提高免疫力的中药作为原料，制备工艺同上。
本发明鹿脾提取物在制备提高免疫保健营养食品中的应用：
本发明的药物制剂可制成适于口服给药的各种剂型，例如片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂等剂型，这些口服单位剂量一般包含10-500mg 本提取物。
制备口服制剂：将鹿脾提取物与一种或多种保健营养食品中可接受的载体或赋形剂按（1-5）/（5-1）的质量比例混合，制成适用于临床上使用的不同剂型的药物组合物，再根据需要加入适当的稀释剂、分散剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、混滑剂、增溶剂、抗氧化剂、矫味剂等赋形剂，制成适于口服给药的剂型。
其中，保健营养食品中可接受的载体或赋形剂可以是：蔗糖、半乳糖、淀粉、糊精、明胶、硬脂酸镁、硫酸钙、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素等。
以下实验表明：本发明鹿脾提取物提高免疫力活性可以通过淋巴转化实验和对小鼠胸腺、脾脏质量的影响来观察。
实验例1
鹿脾提取物对细胞免疫活性的作用
1 实验材料与方法
1.1 实验材料
实验动物，采用4周龄的昆明小鼠，体重20±2g,饲养在12h白天/黑夜循环的条件下，温度湿度适宜，喂食标准的颗粒饲料，自由摄食和饮水。复方黄芩提取物（如实施例1）由本实验室制备。
1.2 实验方法
1.2.1 分组：选健康小鼠50只，雌雄各半，分为5组，每组10只。一组为空白对照组，灌胃生理盐水10ml/kg，一组为阳性对照组，灌胃安利纽崔莱80mg/kg，另三组为实验组，灌胃高中低三种浓度的鹿脾提取物，分别为120mg/kg，80mg/kg和40mg/kg。
1.2.2 MTT实验：将小鼠按1.2.1分组后按每10g体重0.2mL灌胃,每天2次,持续灌胃30天，第31天无菌取脾, 于无菌Hank液中制成细胞悬液,200目筛网过滤,Hank液洗3次。用RPMl1640培养液调整细胞浓度为3 ×106 个/mL。而后分两孔加入24孔培养板, 每孔1.0mL,一孔加ConA液50μL,一孔作对照,置 5%CO2、37℃ 培养72h。培养结束前4h, 每孔吸去上清液0.7mL,加入不含小牛血清的RPMI1640培养液和MTT(5mg/mL,每孔50μL)，培养结束后，每孔加入二甲基亚砜200μL，测其在630nm下的吸光度（OD值）。 
实验结果：
表1 不同组对细胞免疫力活性的影响
2 结果：本实验鹿脾提取物高中低剂量组都有提高淋巴细胞免疫力的效果，且高剂量组的效果较阳性对照组还要好些。本发明鹿脾提取物具有辅助提高细胞免疫力的作用。
实验例2
鹿脾提取物对小鼠胸腺、脾脏质量的影响
2 实验材料与方法
2.1 实验材料
实验动物，采用4周龄的昆明小鼠，体重20±2g,饲养在12h白天/黑夜循环的条件下，温度湿度适宜，喂食标准的颗粒饲料，自由摄食和饮水。复方黄芩提取物（如实施例1）由本实验室制备。
2.2 实验方法
2.2.1 分组：选健康小鼠50只，雌雄各半，分为5组，每组10只。一组为空白对照组，灌胃生理盐水10ml/kg，一组为阳性对照组，灌胃安利纽崔莱80mg/kg，另三组为实验组，灌胃高中低三种浓度的鹿脾提取物，分别为120mg/kg，80mg/kg和40mg/kg。
2.2.2 实验
分别设置鹿脾提取物高、中、低三个浓度组，以及一个空白对照组（以蒸馏水为对照），经口给予小鼠不同剂量的鹿脾提取物30天后，与对照组小鼠比较胸腺、脾脏质量的差异。
实验结果：
表2 不同的设置组对小鼠胸腺、脾脏质量的影响
2 结果：从实验数据中可以看出，本实验鹿脾提取物高中低剂量组都有提高小鼠胸腺、脾脏/体重比值的效果，且高剂量组的效果与阳性对照组效果接近。本发明鹿脾提取物具有辅助提高免疫力的作用。
具体实施方式
以下给出几个具体实施例，但本发明不受具体实施例限制。
实施例1
取200 g鹿脾，去离子洗净，去血，将筋膜去掉，剪碎后加入5倍的去离子水，放入胶体磨中搅碎，3000 rpm，时间为10 min。将搅碎后混悬液pH至2.4，然后加入500 U/g 的胃蛋白酶，在37℃下水解4 h 。然后将水解后混悬液离心，3000 rpm离心10 min，收集上清，旋转蒸发浓缩，喷雾干燥既得鹿脾提取物干燥粉末。
实施例2
取200 g鹿脾，去离子洗净，去血，将筋膜去掉，剪碎后加入5倍的生理盐水，放入胶体磨中搅碎，3000 rpm，时间为10 min。将搅碎后混悬液pH至8.5，然后加入756 U/g 的胰蛋白酶，在37℃下水解4 h 。然后将水解后混悬液离心，5000 rpm离心10 min，收集上清，旋转蒸发浓缩，喷雾干燥既得鹿脾提取物干燥粉末。
实施例3
取200 g鹿脾，去离子洗净，去血，将筋膜去掉，剪碎后加入5倍的去离子水，放入胶体磨中搅碎，3000 rpm，时间为10 min。将搅碎后混悬液pH至7.0，然后加入1200 U/g 的中性蛋白酶，在37℃下水解4 h 。然后将水解后混悬液离心，5000 rpm离心10 min，收集上清，采用3KD的超滤管进行离心，测上清中低于10KD的多肽含量，其余上清旋转蒸发浓缩，喷雾干燥既得鹿脾提取物干燥粉末。
实施例4
取200 g鹿脾，去离子洗净，去血，将筋膜去掉，剪碎后加入2-3倍的去离子水，放入胶体磨中搅碎，3000 rpm，时间为10 min。将搅碎后混悬液pH至7.5，然后加入378 U/g 的胰蛋白酶和600 U/g 的中性蛋白酶，在37℃下水解4 h 。然后将水解后混悬液离心，5000 rpm离心10 min，收集上清，旋转蒸发浓缩，喷雾干燥既得鹿脾提取物干燥粉末。
实施例5
称取实施例4中得到的干燥粉末0.50g，溶于10mL的PBS溶液中，采用Folin-酚试剂法测定干燥粉中的蛋白浓度，测定鹿脾提取物干燥粉末中蛋白浓度为45.56%，原材料鹿脾中蛋白的提取率为0.12%。
实施例6
将制备的鹿脾提取物干燥粉70g，环糊精26g，再加入3 的硬脂酸镁和1g的卡波姆，混合均匀，以每粒中1.2g的量装入空的胶囊中。
实施例7
将制备的鹿脾提取物干燥粉70g，淀粉26g，再加入3g的硬脂酸镁和1g的卡波姆，混合均匀，采用干法制粒机制粒，然后压片既得。
实施例8
将制备的鹿脾提取物干燥粉70g，环糊精24g，再加入3g的硬脂酸镁，混合均匀，以每粒中1.2g的量装入空的胶囊中。
Claims (5)
1.一种具有提高免疫力的鹿脾提取物，是通过以下方法制成的：
称取鹿脾加入2-15倍重量的去离子水、生理盐水或磷酸缓冲液，采用胶体磨搅碎3-15 min，然后对得到的鹿脾混悬液采用酶水解，水解酶用量为300-3000 U/g，水解时间1-16h，温度为35-40℃，对酶解后溶液进行离心，取上清，测10 KD以下的多肽含量，同时再将上清旋转浓缩蒸发，浓缩液进行喷雾干燥，得鹿脾提取物干粉。
2.根据权利要求1所述鹿脾提取物，其特征在于：鹿脾提取物中10KD以下的多肽含量为0.3-20%。
3. 一种具有提高免疫力的鹿脾提取物，是通过以下方法制成的：
称取鹿脾加入2-15倍重量的去离子水、生理盐水或磷酸缓冲液，采用胶体磨搅碎3-15 min，然后对得到的鹿脾混悬液采用酶水解，水解酶用量为300-3000 U/g，水解时间1-16h，温度为35-40℃，对酶解后溶液进行离心，取上清，测10 KD以下的多肽含量，同时再将上清旋转浓缩蒸发，浓缩液进行喷雾干燥，得鹿脾提取物干粉。
4. 根据权利要求2所述鹿脾提取物的制备工艺，其特征在于：所使用的蛋白水解酶包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶或其几种酶组成的混合酶。
5.根据权利要求1或2的鹿脾提取物在制备提高免疫力保健品中的应用。
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