CN102665754B - 衍生自il-2的免疫调节多肽及其在治疗癌症和慢性感染中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明总体上涉及多肽，其具有与人白细胞介素2(IL-2)的序列具有高度同源性的初级序列，在天然IL-2的序列中具有一些点突变。本发明的多肽对于免疫系统具有免疫调节效应，其选择性/优先作用于调节型T细胞。本发明还涉及氨基酸序列如本发明所公开的具体多肽。本发明还涉及包含作为活性成分的本文公开的多肽的药物组合物。最后，本发明涉及所述多肽和药物组合物的治疗性用途，因为它们对于疾病例如癌症和慢性感染性疾病具有免疫调节效应。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术、尤其是免疫学领域。本发明涉及对于人类健康具有治疗性应用的技术方案。本发明特别涉及使用天然分子的类似物治疗性调节免疫系统。
背景技术
白细胞介素2(IL-2)是就T细胞描述的首个生长因子。自其被发现以来，其显示出强烈的体外促进T细胞增殖和存活的能力(Smith,KA(1988)Science.240,1169-76)和在病毒感染的情况下在体内增强T细胞免疫应答的能力(Blattman,JN,et al.(2003)Nat Med 9,540-7)或在疫苗的情况下的此能力(Fishman,M.,et al.(2008)J Immunother.31,72-80,Kudo-Saito,C.,et al.(2007)Cancer Immunol Immunother.56,1897-910;Lin,CT,et al.(2007)Immunol Lett.114,86-93)。然而，最近，多项实验数据质疑了IL-2作为T免疫应答的促进剂的这种经典作用(Almeida,A.R.,et al.(2002)J Immunol.169,4850-60;de la Rosa,M.,etal.(2004)Eur J Immunol.34,2480-8;Malek,T.R.,et al.(2004)Nat RevImmunol.4,665-74)，这些数据表明该细胞因子是天然调节型T细胞TCD4+CD25+FoxP3+(Treg)的自身稳定性生长因子。
白细胞介素-2是调节型T细胞抑制其它效应子细胞、例如CD4辅助T细胞、CD8细胞毒性T细胞和NK细胞的活性和扩增的机制中的主要参与者。特别地，最近有人提出调节型T细胞抑制其它T细胞，诱导IL-2水平的局部降低(Pandiyan,P.,et al.(2007)Nat Immunol.8,1353-62)。这种抑制性效应是基于：a)它们直接抑制它们所抑制的效应子T细胞产生IL-2(Almeida,A.R.,et al.(2002)J Immunol.169,485060;Takahashi,T.,et al.(1998)Int Immunol.10,1969-80;Thornton,A.M.,et al.(1998)J Exp Med.188,287-96;Wolf， M.,et al.(2001)Eur JImmunol.31,1637-45);b)迅速且有效消耗它们的微环境中的IL-2的能力(Pandiyan,P.,et al.(2007)Nat Immunol.8,1353-62);和c)过表达IL-2α链受体的能力(Kuniyasu,Y.,et al.(2000)Int Immunol.12,1145-55)，这使它们能够在IL-2为低浓度时更有效使用IL-2。
总之，IL-2是非常多效性的细胞因子，其对于不同细胞群体的生物活性具有非常重要的意义。该性质使IL-2成为免疫应答调节中的重要节点，使其成为免疫调节治疗的受关注的和复杂的靶标。特别地，该细胞因子的作用的多效性使其对于治疗策略(在不同细胞群体中以选择性/优选性方式调节该细胞因子的活性)的设计具有非常重要的意义。
IL-2已经被用于癌症治疗有好几年了。特别地，其在数个国家被批准以高剂量用于治疗黑色素瘤和肾细胞癌。然而，IL-2在患者中的直接使用是严重受限制的，因为其毒性效应。所以仅有20%的适合的患者接受进一步的治疗，仅有17%的患者显示出相关的客观反应。临床阶段中这种显著性失败的一个可能的解释是：使用天然IL-2的治疗也刺激调节型T细胞群体，其阻碍使用它所追求的免疫刺激(Ahmadzadeh,M.,etal.(2006)Blood.107,2409-14)。
已经开发了数种策略来减轻IL-2治疗的毒性效应。这些策略中的一些是基于使用IL-2的突变体，所述变体被设计为增强该分子的信号传导能力，主要是通过高亲和性受体(α、β和γ链)，而不是通过中等亲和性受体(β和γ链)。基本的想法是：相对于NK细胞(其被认为是导致所观察到的毒性效应的细胞)中的信号传导，优先促进T细胞上的信号传导。下列发明处于相同的研究路线：美国专利7,186,804、美国专利7,105,653、美国专利6,955,807、美国专利No.5,229,109、美国专利申请20050142106。重要的是要注意：这些发明中没有一项涉及具有差别化调控调节型T细胞活性的能力的IL-2突变体。此外，这些发明中的突变体是IL-2的激动剂，不是拮抗剂/抑制剂，例如本申请中描述的那些。
已经为了增强IL-2的药理学活性的目的产生了其它的IL-2突变体。例如，为了改善其折叠或延长其在血液中的寿命。其中，下列发明涉及该研究路线：美国专利号4,959,314、美国专利号5,116,943、美国专利号4,853,332。同样地，这些突变体中没有一个显示出差别化调控调节型T细胞的活性的能力。
其它现有的发明涉及IL-2活性的抑制剂，主要是为了治疗自身免疫疾病或为了预防器官移植排斥。其中有下列发明：美国专利5,876,717、美国专利5,635,597、美国专利6,906,170、美国专利6,168,785。
最后，应该提及，在文献中有很多治疗剂的提议(Kreitman,R.J.(2009)Curr Pharm Des.15,2652-64;Litzinger,M.T.,Fernando,R.,Curiel,T.J.,Grosenbach,D.W.,Schlom,J.and Palena,C.(2007)Blood.110,3192-201;Morse,M.A.,Hobeika,A.C.,Osada,T.,Serra,D.,Niedzwiecki,D.,Lyerly,H.K.and Clay,T.M.(2008)Blood.112,610-8;Onizuka,S.,Tawara,I.,Shimizu,J.,Sakaguchi,S.,Fujita,T.andNakayama,E.(1999)Cancer Res.59,312833;Quezada,S.A.,Peggs,K.S.,Curran,M.A.and Allison,J.P.(2006)J Clin Invest.116,1935-45)，它们提出在体内调节或降低调节型T细胞的活性。这些治疗剂已经在动物模型、甚至在患者中进行了测试，以进行直接癌症治疗或增强疫苗的效应。还有一些报告提议调节IL-2的活性，特别是通过单克隆抗体(Boyman,O.,Kovar,M.,Rubinstein,M.P.,Surh,C.D.and Sprent,J.(2006)Science.311,1924-1927;Boyman,O.,et al.(2006)Expert OpinBiol Ther.6,1323-31;Kamimura,D.,et al.(2006)J Immunol.177,306-14;Murakami,M.,Sakamoto,A.,Bender,J.,Kappler,J.andMarrack,P.(2002)Proc Natl Acad Sci USA.99,8832-7;Tomala,J.,Chmelova,H.,Mrkvan,T.,Rihova,B.and Kovar,M.(2009)J Immunol.183,4904-4912)，以促进更好的或更有效的免疫应答。然而，据我们所知，在文献中没有关于这样的IL-2的突变体的报道：支持它们用于选择性或优先调控调节型T细胞的活性的可能性。特别地是这样的IL-2突变蛋白：能够选择性/优先拮抗调节型T细胞上的IL-2的活性，从而影响其功能并促进免疫应答的治疗性增强。
发明内容
本发明是基于以下科学发现：IL-2的突变体变体能够产生对于调节型T细胞的优先抑制。本发明人首次发现：在体外实验中，IL-2的突变体能够实质上抑制调节型T细胞(T CD4+CD25+FoxP3+)的活性，同时对于具有效应子功能的其它淋巴细胞的激活和/或增殖几乎无影响。该发现提供了在这些细胞相关的疾病、例如癌症或慢性感染中免疫调控调节型T细胞的新的策略。
本发明涉及与人IL-2共有初级序列的多肽，但是，其中数个氨基酸发生突变，消除或实质上降低它们通过不同形式的IL-2受体的信号传导。
这些IL-2的突变体变体保持与IL-2受体的一个或多个组分结合的能力，并且对于调节型T细胞群体具有优先的抑制活性，在那里它们阴性地调节它们的功能。提供了对于调节型T细胞具有优先抑制性特性的数种具体的IL-2突变体变体。本发明还包括这些突变体的治疗性应用：单独使用或与疫苗组合用于治疗其中调节型T细胞(Treg)的活性相关的疾病、例如癌症或慢性感染。
本发明提出了在疾病中调控调节型T细胞的活性的新的策略，其中，在所述疾病中，通过这些细胞的抑制减少天然诱导的或由疫苗诱导的保护性免疫应答。该新的治疗策略的优点相对于调控Treg的活性的其它提议的优点是多方面的，例如：
●IL-2突变体实质上是自身蛋白(除了一些突变)。该事实降低了预料不到的毒性的风险(这在基于小的抑制剂的策略中是常见的)，或产生针对所注射的药物的免疫应答的风险(这在例如Ontak的策略中将会发生，其中IL-2偶联于外源的和毒性的分子，例如白喉毒素)。
●这些IL-2的突变体变体保持对于IL-2的受体的结合亲和性，至少为天然IL-2的亲和性的数量级(对于高亲和性受体为10pM)。使用受体抑制剂或配体、使用单克隆抗体或其它药物的策略难以达到该亲和性。
●这些突变体的尺寸小(15kD)，可使它们具有高移动性并易于刺入肿瘤微环境。已知这对于较大的分子例如抗体等是复杂的。
发明详述
获得IL-2的类似物多肽
本发明涉及100至500个氨基酸的多肽，优选是大小为140个氨基酸的多肽，其表观分子量是至少15kD。这些多肽保持与天然IL2的高水平的序列同一性，超过90%的同一性，在它们的序列区域中，相对于天然IL-2包括2至6个突变。
在这些位置中，通过插入不同于天然IL-2的相同位置处的那些氨基酸的氨基酸残基而使这些多肽突变。选择替换原始残基的残基是因为它们具有与原始氨基酸非常不同的理化性质：残基从极性变为非极性，从带电变为不带电，从大的变为小的，从酸性变为碱性，等等。
本发明的多肽还可以被称作内在的免疫调节多肽，IL-2的类似物或IL-2的突变蛋白，等等。这些多肽是根据IL-2的3D结构(储存于PDB数据库中)设计的，仅在IL-2的那些对应于显著暴露于溶剂的氨基酸的位置处导入突变，这些位置是通过使用公众域的生物信息学程序例如RASMOL,SwissPDBviewer等鉴定的。
本发明的多肽可以通过数种方式获得，例如通过蛋白合成。它们也可以通过遗传工程技术获得，例如在细菌例如大肠杆菌中的包涵体中表达它们。还可以使用聚合酶链式反应通过定向诱变技术获得特定位置处的点突变。
通过其生物活性选择IL-2的类似物多肽
在体外或体内实验中选择同时具有以下特征的本发明的多肽：
1）这些IL-2的突变体变体丧失对于不同形式的IL-2受体的信号传导能力，或该能力实质上降低。该性质可以通过使用IL-2依赖性的细胞系(例如CTLL2或Kitt225)，或使用鼠和/或人来源的T淋巴细胞或NK细胞在体外增殖测定法中直接测定。这些突变体在这些测定法中应该具有至少为天然IL-2的1/100的刺激活性。
2）这些IL-2的突变体(突变蛋白)保持与IL-2受体的一个或多个分子组分结合的能力。该结合能力可以这样测定：通过ELISA针对商业上可获得的受体的链、例如受体的α和β链而直接测定；或在受体为阳性的细胞群体上间接进行。在这些测定中，IL-2突变蛋白的识别率应该与天然IL-2相当。
3）IL-2的突变体对于淋巴细胞上的天然IL-2活性具有抑制性活性，对于调节型T细胞群体是优先的(至少在T CD4+CD25+FoxP3+细胞中)。本发明中包括的IL-2的突变蛋白在一定浓度范围内能够优先或选择性抑制调节型T细胞的活性或扩增，而不影响或仅极小地影响具有效应子功能的其它淋巴细胞(例如T辅助细胞、细胞毒性T细胞或NK细胞)的活性和/或扩增。这些突变蛋白的优先或选择性抑制活性可以在数种体外测试中证实，其中测定在存在数量渐增的突变蛋白的情况下，效应子和调节型群体的混合物对于刺激的应答。在合适浓度范围下，相对于它们对于实验中使用的效应子群体、例如T辅助细胞、细胞毒性T细胞或NK细胞的活性或扩增的抑制，它们对于调节型T细胞的生长或活性的抑制强至少3倍。
本发明还包括IL-2突变蛋白的数种具体变体(在表1中公开了具体的突变)，它们具有上述特征而被选择。这些突变蛋白包括显著降低它们的刺激鼠和人淋巴细胞的能力的多个氨基酸置换。然而，它们与受体的α和β链结合的能力保持完整，并且它们获得了抑制（拮抗）IL-2的天然活性的能力。这些突变蛋白的最显著的方面是：在包含调节型T细胞和其它效应子T细胞的淋巴细胞的培养物中，它们在一定浓度范围内显示出显著的优先抑制调节型T细胞(CD4+CD25+FoxP3+)的能力。
| 突变 | 名称 |
| Q22V,Q126A,I129D,S130G | M1 |
| L18N,Q126Y,S130R | M2 |
| Q13Y,Q126Y,I129D,S130R | M3 |
| L18N,Q22V,T123A,I129D,S130R | M4 |
表1：构建的突变体，根据人IL2的编号来指称突变
本发明还包括如上所述的尤其是表1中公开的那些类型的IL-2突变体的另外的修饰。要么是为了增加它们对于IL-2的特定成分的亲和性但不影响或甚至是增强其优先抑制特性，要么是为了改善它们的体内药效学：延长生命周期或减少其被T细胞的内化。这些另外的突变可以通过使用生物信息学工具进行合理设计而获得，或通过使用不同性质的组合分子文库(噬菌体显示文库、酵母或细菌中的基因表达文库)来获得。
IL-2类似物多肽的治疗性应用
本发明还包括：包含作为活性成分的如本发明中描述的IL-2突变蛋白及其类似物的药物组合物，以及其旨在选择性调控调节型T细胞上的IL-2活性的潜在的治疗性应用。特别地，本发明要求保护这些突变蛋白用于在其中调节型T细胞特别相关的疾病、例如癌症或慢性感染中促进天然诱导的或由疫苗诱导的免疫应答的用途。
对于治疗性用途，本发明的多肽应该独立地或与促进或增强其治疗作用的其它多肽或其它物质组合而向疾病的携带者施用。施用途径可以是现有技术中描述的用于胃肠外施用药物的任何施用途径。优选地，可以通过静脉内、肌内、皮下或肿瘤内途径施用。
本发明描述的多肽或融合蛋白也可以作为用于治疗癌症和慢性感染性疾病的药物组合物的一部分来施用。
为了获得希望的治疗效应，本发明的多肽应该以足以确保在所研究的疾病的淋巴结或相关外周位点处的足够浓度的高剂量来施用。其应该是足够的浓度以使突变蛋白显示出对于调节型T细胞的优先抑制性效应。因此，必须根据疾病类型和研究中的施用途径来调整所述剂量。例如，在肿瘤治疗的情况下，应该调整剂量直至肿瘤和/或局部区域淋巴结内的突变体的浓度足以确保对于调节型T细胞的优先抑制效应。所采用的剂量范围可以是十几微克至数毫克/剂。
还应该根据所研究的突变蛋白的生物分布来调整所施用的次数。一般地，上述有效浓度应该维持在2天至连续30天的时间段。注意，例如，如果突变蛋白偶联于载体蛋白，则要相应地调整施用频率。“治疗作用”的意思是疾病症状的全部或部分缓解。对于癌症而言，肿瘤体积的减小或距离复发时间的延长将被认为是缓解指标。最后，应该注意，这种新的治疗策略相对于其它的调节Treg活性的提议的优点是多方面的。例如：
●IL-2突变体实质上是自身蛋白(除了一些突变)。该事实降低了预料不到的毒性的风险(这在基于小的抑制剂的策略中是常见的)，或产生针对所注射的药物的免疫应答的风险(这在例如Ontak的策略中将会发生，其中IL-2偶联于外源的和毒性的分子，例如白喉毒素)。
●这些IL-2的突变体变体保持对于IL-2的受体的结合亲和性，至少为天然IL-2的亲和性的数量级(对于高亲和性受体为10pM)。使用受体抑制剂或配体、使用单克隆抗体或其它药物的策略难以达到该亲和性。
●这些突变体的尺寸小(15kD)，可使它们具有高移动性并易于刺入肿瘤微环境。已知这对于较大的分子例如抗体等是复杂的。
实施例
实施例1
使用Wang,X.,Rickert,M.and Garcia,K.C.in Structure of thequaternary complex of interleukin-2 with it salpha，beta，and gammareceptors.Science,2005.310(5751):p.1159-63中所报告的人IL-2偶联至受体的复合物的四级结构作为基础，以及公众域中关于蛋白质-配体相互作用的能量计算算法，通过生物信息学技术，通过计算机设计了突变体。最初预测突变蛋白的不同变体不会影响与受体的α和β链的结合能力。在大肠杆菌中从pET28a载体的遗传构建体表达这些突变蛋白，其在氨基末端包括6个组氨酸的鉴定序列。使用反相(图1)纯化突变蛋白，获得高纯度(>95%)。根据它们在体外实验中的性质选择所获得的突变蛋白。在表1所示的所构建的突变蛋白中，描述了具有优先抑制Treg的活性的性质的一组特定突变。
实施例2
所选择的突变蛋白保持与IL2受体的不同组分、尤其是受体的α和β链结合的能力。图2显示：使用ELISA测试，表1中所示的数个突变体实质上完整保持与IL-2人受体的α链(见图2)和β链(图2b)结合的能力。图3显示进一步确认了这些突变体与细胞表面上的受体的结合(见图3a)，并且这种结合可以通过加入天然IL-2而被逐渐替换(图3b)。
实施例3
所选择的突变蛋白通过IL-2受体的信号传导的能力显著降低。图3通过测定它们从总脾淋巴细胞刺激CTLL2细胞系生长(图4a)或从总脾淋巴细胞刺激NK细胞分化(图4b)的能力而证明了这一点。在高浓度时，这些突变蛋白抑制T淋巴细胞上的(图5a)和NK细胞上的(图5b)天然IL-2的活性。
实施例4
所选择的突变蛋白优先抑制调节型T细胞(CD4+CD25+FoxP3+)的体外扩增。图6证明了表1中的一种突变体的这种性质，特别是显示了，在以抗-CD3抗体刺激的淋巴细胞培养物(其中有效应子和调节型T细胞的混合物)中，加入中等剂量的该突变蛋白实质性抑制了CD4+FoxP3+的增殖，而不显著影响CD4+FoxP3-效应子群体的扩增。
实施例5
所选择的突变蛋白优先被培养物中的调节型T细胞捕获，使其影响效应子T细胞的能力降低。这些突变蛋白抑制IL-2(由纯化的、经抗-CD3抗体刺激的CD4+CD25-FoxP3-辅助T细胞群体内源地产生)介导的信号传导(刺激)。然而，向这些培养物中加入数量渐增的CD4+CD25+FoxP3+调节型T细胞之后，减少了突变体介导的对于T效应子群体的抑制(图7)。该效应被解释为：突变蛋白优先抑制调节型T细胞群体上的IL-2的活性。即使是少量的调节型T细胞的存在也会使突变体的活性靶向这些细胞，从而降低突变体对于效应子群体的抑制活性。
实施例6
所选择的突变蛋白在移植肿瘤小鼠模型中显示出抗肿瘤活性。图8显示了表1中的一种突变蛋白的这种性质。在具有黑色素瘤MB16F10细胞系(皮下移植于右腰窝)的原代肿瘤模型中评价突变蛋白。图8显示：以突变蛋白处理的小鼠中的肿瘤体积相对于以PBS处理的对照组减小。此外，包括了以抗CD25单克隆抗体(MAb)处理的对照组，其显示该实验系统对于Treg细胞耗竭是可感知的。
附图说明
图1.人IL-2的突变体的产生和纯化。a：蛋白印迹，其显示了在以所构建的基因构建体转染的大肠杆菌菌株中，一些突变体和对照的天然IL-2的表达。b：使用反相纯化获得的典型的纯化谱的实例。
图2.通过ELISA评价表1中所述的几种突变体对于IL-2受体的α(a)和β(b)链的识别。天然IL-2用作阳性对照。可以看出所测的所有突变蛋白保持与天然IL-2相当的识别率。
图3.通过流式细胞术检测表1中所述的几种突变蛋白与细胞、尤其是鼠CTLL2细胞系表面上的IL-2受体结合的能力。使用识别组氨酸头部(包括在这些分子的遗传构建体中)的抗-6-His-PE抗体检测到细胞表面上的突变体和天然IL-2对照。a)：柱状图：显示了检测到的直接结合的水平；b)：突变蛋白与细胞的结合的减少，通过所检测到的平均荧光强度的降低而测定，其是通过添加浓度渐增的天然IL-2(不具有组氨酸头部的该分子的变体，并且不干扰染色)而引起的。
图4.表1所示的几种突变蛋白的信号传导能力的评价。a)：使用MTT通过比色法测定CTLL2细胞系的增殖以评价突变蛋白的活性；b)：还在来自总小鼠脾细胞的NK1.1+细胞的分化测试中评价突变蛋白。在这两种情况下，我们比较了在完全相同的实验系统中(相同的遗传构建体、大肠杆菌生产菌种、纯化系统)产生的突变蛋白和天然IL-2对照的刺激能力。使用Kitt225细胞系获得了与图3a所示结果相似的结果，其中受体系统是人的。
图5.表1所述的几种突变蛋白在体外抑制天然IL-2活性的能力的评价。a：浓度渐增的突变蛋白对于以抗-CD3单克隆抗体(克隆2C11，10μg/mL)刺激的总神经节淋巴细胞增殖的抑制。b：通过在培养物中加入数量渐增的突变蛋白，对于以500IU/mL天然IL-2刺激的来自总小鼠脾细胞的NK1.1+细胞的分化的抑制。
图6.突变蛋白优先抑制CD4+Foxp3+淋巴细胞的能力的评价。在体外在存在所示数量的M1突变蛋白(如在表1中所指称)的情况下，以抗-CD3单克隆抗体(克隆2C11，10μg/mL)刺激小鼠淋巴结淋巴细胞。培养72小时之后，使用参考珠子通过流式细胞术测定活的CD4+Foxp3+调节型淋巴细胞和CD4+Foxp3效应子淋巴细胞的数目。a中的图显示了用于区分调节型细胞和效应子细胞群体的流式细胞术中的基础染色。b中的图显示了由所添加的不同数量的突变蛋白诱导的对于增殖的抑制水平。该抑制是根据不存在突变蛋白的情况下回收的活细胞的数目计算的。如b中所示，存在这样的中等浓度范围的M1突变蛋白：对于CD4+FoxP3+调节型群体的抑制显著高于对于CD4+FoxP3-辅助T细胞或效应子T细胞的抑制。
图7.调节型T细胞优先捕获所设计的IL-2突变蛋白(释放对于效应子T细胞的抑制效应)的能力的评价。使用以CFSE标记的磁珠纯化效应子T细胞CD4+CD25-FoxP3-，并置于培养物中，一些存在突变蛋白，一些不存在突变蛋白(M1突变蛋白，在图中有两种不同浓度：10μg/mL和5μg/mL)，并以抗-CD3抗体(克隆2C11，10μg/mL)和抗-CD28(克隆37.51，10μg/mL)刺激。向这些培养物中加入不同数量的纯化的调节型T细胞(CD4+CD25+FoxP3+)。图6a显示：使用磁珠分离实现了高水平的纯度(92%Treg，对于效应子T细胞而言是97%)。图6b显示了：对于培养物中的不同数量的调节型细胞，通过CFSE稀释测定的效应子细胞的增殖水平。可以看出，在不存在Treg的情况下，突变蛋白的存在显著影响了效应子细胞的增殖(抑制效应)，但是随着Treg的加入，效应子T细胞的增殖恢复，因为Treg优先捕获突变蛋白，释放对于效应子细胞的抑制效应。
图8.使用具有黑色素瘤MB16F10肿瘤细胞系的原代肿瘤模型评价IL-2突变蛋白的直接抗肿瘤效应。使用12只C57BL6小鼠，3个组，每组4只。在第-5天至第0天通过皮下进行所有处理。组1接受200μLPBS，组2接受100μg抗CD25MAb，组3接受200μgIL-2突变蛋白。在第0天，所有小鼠在右侧腰窝接受250000个细胞。每2天测定肿瘤体积，直至第30天。使用ANOVA测试和多重比较Bonferroni测试法分析数据。IL-2突变蛋白和抗CD25MAb引起肿瘤生长的显著延迟(p<0.001)。
Claims (10)
1.衍生自IL-2的免疫调节多肽，其相对于天然IL-2的序列引入了点突变，并且具有在体外优先抑制调节型T细胞上的IL-2的活性的性质，其中所述多肽：
（i）相对于天然IL-2的序列引入了突变Q22V,Q126A，S130G和I129D；
（ii）相对于天然IL-2的序列引入了突变L18N,Q126Y和S130R；或
（iii）相对于天然IL-2的序列引入了突变Q13Y,Q126Y,I129D和S130R。
2.权利要求1的多肽，其选择性地且优先地抑制CD4+CD25+FoxP3+天然调节型T细胞上的IL-2的活性。
3.权利要求1的多肽，其特征在于其在体内优先抑制调节型T细胞的能力。
4.融合蛋白，其由偶联于载体蛋白的权利要求1-3任一项的免疫调节多肽组成。
5.权利要求4的融合蛋白，其特征在于载体蛋白是白蛋白。
6.权利要求4的融合蛋白，其特征在于载体蛋白是人免疫球蛋白的Fc区。
7.权利要求1-3任一项的多肽用于制备用于治疗IL-2所能治疗的慢性感染性疾病或癌症的药物的用途。
8.用于治疗癌症和慢性感染性疾病的药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求1-3任一项的多肽。
9.权利要求4-6任一项的融合蛋白用于制备用于治疗IL-2所能治疗的慢性感染性疾病或癌症的药物的用途。
10.用于治疗癌症和慢性感染性疾病的药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求4-6任一项的融合蛋白。
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