JP2013512200A - Il−2に由来する免疫調節ポリペプチド並びに癌及び慢性感染症の治療におけるその使用 - Google Patents
Il−2に由来する免疫調節ポリペプチド並びに癌及び慢性感染症の治療におけるその使用 Download PDFInfo
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Abstract
Description
・IL−2変異体は、(いくつかの変異を除いて)実質的に自己タンパク質である。この事実は、予想外の毒性の危険性(小型阻害剤に基づく戦略において一般的である)又は注射した薬物に対して免疫応答が上昇する危険性(IL−2がジフテリア毒素のような外来性且つ有毒性の分子と結合しているオンタックなどの戦略において起こりうるような)を減少させる。
・IL−2のこれらの変異バリアントは、少なくとも天然型IL−2の親和性の程度(高親和性受容体に対して10pM)であるIL−2の受容体に対する結合親和性を維持しうる。この親和性は、モノクローナル抗体又は他の薬物を用いて受容体又はリガンドを阻害する戦略では達成が困難である。
・これらの変異体は小さい(15kD)ため高い移動性を有し、容易に腫瘍微環境を透過できる可能性がある。抗体などのより大きな分子複合体になることが知られている何かである。
本発明は、100〜500アミノ酸のポリペプチド、好ましくはそのサイズが140アミノ酸でありその見かけの分子量が少なくとも15kDであるポリペプチドに関する。これらのポリペプチドは、天然型IL2との高レベルの配列同一性(90%以上の同一性)を維持し、この配列のある領域中にポリペプチドは、天然型IL−2に対して2〜6個の変異を含む。
in vitro又はin vivo実験を実施することにより、次の特性を同時に有するように本発明のポリペプチドを選抜する
1)IL−2のこれらの変異バリアントは、異なる形のIL−2受容体に対するシグナル伝達能力を緩める又は実質的に減少させる。CTLL2又はKitt225のようなIL−2依存的細胞系を用いる、或いはマウス及び/又はヒト由来のTリンパ球又はNK細胞を用いるin−vitro増殖アッセイで、この特性を直接評価することができる。このアッセイにおいて、これらの変異体は、天然型IL−2の刺激活性より少なくとも100倍低い刺激活性を有するべきである。
2)IL−2のこれらの変異バリアント(変異タンパク質)は、IL−2受容体の1つ又は複数の分子成分に結合する能力を維持する。この結合能力は、受容体のα鎖及びβ鎖など市販の受容体の鎖に対するELISA法で直接的に、又は受容体に陽性の細胞集団で間接的に評価することができる。このアッセイにおいて、IL−2変異タンパク質の認識率は、天然型IL−2の認識率と同等であるべきである。
3)IL−2の変異バリアントは、リンパ球に対する天然型IL−2活性の阻害活性を有し、その活性は制御性T細胞集団(少なくともT CD4+CD25+FoxP3+細胞において)に対して優先的である。本発明に含まれるIL−2の変異タンパク質は、或る濃度範囲内でヘルパーT細胞、細胞障害性T細胞又はNK細胞などエフェクター機能を備える他のリンパ球の活性及び/又は増殖に影響を及ぼすことなく、或いはこれに対して最小限の影響のみで優先的に又は選択的に制御性T細胞の活性又は増殖を阻害することができる。いくつかのin vitro試験でこれらの変異タンパク質の優先的又は選択的阻害活性を証明することができ、この試験により増量させた変異タンパク質の存在下、エフェクター及び制御性集団の混合物の刺激に対する応答が分析される。適切な濃度範囲において、変異タンパク質は、この実験で使用したエフェクター集団、例えばヘルパーT細胞、細胞障害性T細胞又はNK細胞などの活性又は増殖を阻害するよりも少なくとも3倍以上制御性T細胞の増殖又は活性を阻害することが可能であるべきである。
本発明は、活性成分として本発明に開示されているIL−2変異タンパク質及びその類似体を含む医薬組成物、並びに制御性T細胞に対するIL−2の活性を選択的に調節するための潜在的な治療への応用も含む。具体的に本発明は、制御性T細胞が特に関連する癌又は慢性感染症などの疾患において、自然に又はワクチンによって誘導される免疫応答を促進するためにこれらの変異タンパク質を使用することを保護する。
・IL−2変異体は、(いくつかの変異を除いて)実質的に自己タンパク質である。この事実は、予想外の毒性の危険性(小型阻害剤に基づく戦略において一般的である)又は注射した薬物に対して免疫応答が上昇する危険性(IL−2がジフテリア毒素のような外来性且つ有毒性の分子と結合しているオンタックなどの戦略において起こりうるような)を減少させる。
・IL−2のこれらの変異バリアントは、少なくとも天然型IL−2の親和性の程度(高親和性受容体に対して10pM)であるIL−2の受容体に対する結合親和性を維持しうる。この親和性は、モノクローナル抗体又は他の薬物を用いて受容体又はリガンドを阻害する戦略では達成が困難である。
・これらの変異体は小さい(15kD)ため高い移動性を有し、容易に腫瘍微環境を透過できる可能性がある。抗体などのより大きな分子複合体になることが知られている何かである。
Wang,X.、Rickert,M.及びGarcia,K.C.による報告書である「α、β、及びγ受容体とインターロイキン−2の四成分複合体構造(Structure of the quaternary complex of interleukin−2 with its alpha、beta、and gamma receptors.)」Science、2005、310(5751):1159〜63ページ中に報告されている受容体と結合したヒトIL−2の四成分複合体の構造を基準として使用し、パブリックドメインのタンパク質−リガンド相互作用用のエネルギー算出アルゴリズムを使用して、変異体を生物情報科学技術より計算機的に設計した。最初に、受容体のα鎖及びβ鎖の結合能力に影響を及ぼさないように変異タンパク質の様々な変異体を予測した。これらの変異タンパク質を、アミノ末端に6個のヒスチジンから成る識別配列を含むpET28aベクター中の遺伝的構築体から大腸菌で発現させた。逆相を使用してこれらの変異タンパク質を精製し(図1)、高純度(>95%)で得た。得られた変異タンパク質を、in vitro実験における特性に従って選抜した。表1の構築した変異タンパク質のうち、Tregの活性を優先的に阻害する特性を有する一組の特定の変異について記述する。
選抜した変異タンパク質は、IL2受容体の様々な構成要素、特に受容体のα鎖及びβ鎖へ結合する能力を保持する。図2は、表1に明記されている変異体のいくつかが、ヒトIL−2受容体のα鎖(図2)及びβ鎖(図2b)へ結合する能力を実質的に完全に維持することを、ELISA法を使用して示す。図3は、これらの変異体が細胞表面上で受容体に結合し(図3a)、天然型IL−2を添加することによってこの結合体が徐々に置き換えられ得ること(図3b)の追加的な確認を示す。
選抜した変異タンパク質は、IL−2受容体によるシグナル伝達能力を著しく減少させる。図3は、CTLL2細胞系の増殖を刺激する能力(図4a)又は総脾臓リンパ球由来NK細胞の分化を刺激する能力(図4b)を測定することによって、この事実を例示する。これらの変異タンパク質は高濃度で、Tリンパ球(図5a)及びNK細胞(図5b)の両方に対する天然型IL−2の活性を阻害する。
選抜した変異タンパク質は、制御性T細胞(CD4+CD25+FoxP3+)のin vitroでの増殖を優先的に阻害する。図6は、表1の変異体のうちの1つに関するこの特性を例示し、具体的には抗CD3抗体を用いて刺激したエフェクター細胞及び制御性T細胞の混合物が存在するリンパ球細胞培養液中に中間用量の変異タンパク質を添加すると、CD4+FoxP3−エフェクター集団の増殖に著しい影響を及ぼすことなくCD4+FoxP3+の増殖は実質的に阻害されるということを示す。
選抜した変異タンパク質を、培養液中の制御性T細胞によって優先的に分離して、エフェクターT細胞の活性に影響を及ぼすその能力を減少させる。精製し抗CD3抗体を用いて刺激したCD4+CD25−FoxP3−ヘルパーT細胞集団によって内生的に産生させたIL−2に媒介されるシグナル伝達(刺激)を、これらの変異タンパク質は阻害する。しかし、これらの培養液にCD4+CD25+FoxP3+制御性T細胞の量を増加させて添加すると、変異体によって媒介される、Tエフェクター集団に対する阻害が逆に減少する(図7)。この効果は、T制御性集団に対するIL−2の活性を優先的に阻害することが報告されている変異タンパク質の能力で説明される。制御性T細胞は少量しか存在しなくても、変異体の活性をこの細胞に向かわせ、それによりエフェクター集団における変異タンパク質の抑制活性を減弱させる。
選抜した変異タンパク質は、移植性腫瘍マウスモデルで抗腫瘍活性を示す。図8は、表1の変異タンパク質の1つについて記述された特性を示す。右側腹の皮下に移植した黒色腫MB16F10細胞系を用いる原発腫瘍モデルで、変異タンパク質を評価した。図8は、変異タンパク質で処理したマウスの腫瘍体積の減少を、PBSで処理した対照群と比較して示す。さらに、抗CD25モノクローナル抗体(MAb)で処理した対照群が含まれたので、この実験系がTreg細胞の枯渇を感知できることを示す。
Claims (28)
- 天然型IL−2の配列に関していくつかの点変異を含み、in vitroで制御性T細胞に対するIL−2の活性を優先的に阻害する特性を有する、IL−2に由来する免疫調節ポリペプチド。
- 天然型IL−2の配列内にいくつかの変異を含み、それにより天然型制御性T細胞(CD4+CD25+FoxP3+)に対するIL−2の活性を選択的及び優先的に阻害できる、請求項1に記載のポリペプチド。
- in vivoで制御性T細胞を優先的に阻害する能力を特徴とする、請求項1に記載のポリペプチド。
- 変異Q22V、Q126A、及びS130G I129Dを含む、請求項1に記載のポリペプチド。
- 変異L18N、Q126Y及びS130Rを含むことを特徴とする、請求項1に記載のポリペプチド。
- 変異Q13Y、Q126Y、I129D及びS130Rを含むことを特徴とする、請求項1に記載のポリペプチド。
- 変異L18N、Q22V、T123A、及びS130R I129Dを含むことを特徴とする、請求項1に記載のポリペプチド。
- 担体タンパク質と結合した請求項1〜7のいずれか一項に記載の免疫調節ポリペプチドを含む、融合タンパク質。
- 担体タンパク質が、アルブミンであることを特徴とする、請求項8に記載の融合タンパク質。
- 担体タンパク質が、ヒト免疫グロブリンのFc領域であることを特徴とする、請求項9に記載の融合タンパク質。
- 慢性疾患の治療に有用な医薬の製造のための、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 癌治療に有用な医薬の製造のための、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 慢性感染症の治療に有用な医薬の製造のための、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- 活性成分として請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む、癌及び慢性感染症の治療に有用な医薬組成物。
- 活性成分として請求項4に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする、請求項14に記載の医薬組成物。
- 活性成分として請求項5に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする、請求項14に記載の医薬組成物。
- 活性成分として請求項6に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする、請求項14に記載の医薬組成物。
- 活性成分として請求項7に記載のポリペプチドを含むことを特徴とする、請求項14に記載の医薬組成物。
- 活性成分として請求項8〜10のいずれか一項に記載の融合タンパク質を含むことを特徴とする、癌及び慢性感染症の治療に有用な医薬組成物。
- 慢性疾患の治療のための、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチドの使用。
- 癌治療のための、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチドの使用。
- 慢性感染症の治療のための、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチドの使用。
- 慢性疾患の治療のための、請求項8〜10のいずれか一項に記載の融合タンパク質の使用。
- 癌治療のための、請求項8〜10のいずれか一項に記載の融合タンパク質の使用。
- 慢性疾患の治療のための、請求項8〜10のいずれか一項に記載の融合タンパク質の使用。
- 免疫系を調節する医薬の製造のための、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチド。
- IL−2受容体の様々な構成要素に対する結合親和性を増加させる新しい変異を導入する場合の、請求項1〜7のいずれか一項に記載のポリペプチド及びその適用。
- IL−2受容体の異なる構成要素に対する結合親和性を増加させる新しい変異を導入する場合の、請求項4、5、6、7に記載のポリペプチド及びその適用。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017518361A (ja) * | 2014-04-24 | 2017-07-06 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | インターロイキン−2のスーパーアンタゴニスト、パーシャルアゴニスト及びアンタゴニスト |
JP2021519336A (ja) * | 2018-03-28 | 2021-08-10 | アセンディス ファーマ オンコロジー ディヴィジョン エー/エス | Il−2コンジュゲート |
Families Citing this family (25)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2655409A4 (en) | 2010-12-22 | 2015-07-01 | Univ Leland Stanford Junior | SUPERAGONISTS AND ANTAGONISTS OF INTERLEUKIN-2 |
CA2925421C (en) | 2013-09-24 | 2023-08-29 | Medicenna Therapeutics, Inc. | Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof |
AU2015233554B2 (en) | 2014-03-17 | 2020-01-16 | Bundesrepublik Deutschland Letztvertreten Durch Das Robert Koch-Institut Vertreten Durch Seinen Prasidenten | A medicament for use in a method of inducing or extending a cellular cytotoxic immune response |
US20170157215A1 (en) | 2015-12-04 | 2017-06-08 | Jomoco, Corp. | Compositions and methods to mitigate or prevent an immune response to an immunogenic therapeutic molecule in non-human primates |
KR20190057113A (ko) | 2016-09-28 | 2019-05-27 | 조마 (유에스) 엘엘씨 | 인터루킨-2에 결합하는 항체 및 그 용도 |
CU24483B1 (es) * | 2016-11-15 | 2020-04-02 | Ct Inmunologia Molecular | Método para incrementar los niveles de secreción de la interleucina-2 |
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US10946068B2 (en) | 2017-12-06 | 2021-03-16 | Pandion Operations, Inc. | IL-2 muteins and uses thereof |
US10174092B1 (en) | 2017-12-06 | 2019-01-08 | Pandion Therapeutics, Inc. | IL-2 muteins |
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US20210253671A1 (en) * | 2018-06-07 | 2021-08-19 | Prottech Inc. | Pharmaceutical Composition Containing Fusion Protein and Use Thereof |
US20220403001A1 (en) | 2018-06-12 | 2022-12-22 | Obsidian Therapeutics, Inc. | Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy |
EP3972992A4 (en) | 2019-05-20 | 2023-07-19 | Pandion Operations, Inc. | ANTI-MADCAM IMMUNE TOLERANCE |
KR102653906B1 (ko) | 2020-01-14 | 2024-04-03 | 신테카인, 인크. | 편향된 il2 뮤테인 방법 및 조성물 |
US11981715B2 (en) | 2020-02-21 | 2024-05-14 | Pandion Operations, Inc. | Tissue targeted immunotolerance with a CD39 effector |
CA3191260A1 (en) * | 2020-09-04 | 2022-03-10 | Yingying HU | Il-2 mutant and application thereof |
TW202233673A (zh) | 2020-10-23 | 2022-09-01 | 美商雅雪生物治療公司 | 含調節免疫細胞功能之cd8抗原結合分子之融合物 |
US20240325495A1 (en) | 2020-10-29 | 2024-10-03 | Bristol-Myers Squibb Company | Fusion proteins for the treatment of disease |
WO2022229464A1 (en) | 2021-04-30 | 2022-11-03 | Tigen Pharma Sa | Single vessel expansion of lymphocytes |
WO2023133595A2 (en) | 2022-01-10 | 2023-07-13 | Sana Biotechnology, Inc. | Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses |
WO2023193015A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Sana Biotechnology, Inc. | Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies |
WO2024097864A1 (en) | 2022-11-02 | 2024-05-10 | Tigen Pharma Sa | Expansion of lymphocytes |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008003473A2 (en) * | 2006-07-06 | 2008-01-10 | Merck Patent Gmbh | Compositions and methods for enhancing the efficacy of il-2 mediated immune responses |
WO2009061853A2 (en) * | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Mutant interleukin-2 (il-2) polypeptides |
WO2009135615A2 (de) * | 2008-05-08 | 2009-11-12 | Aicuris Gmbh & Co. Kg | Mittel zur behandlung und/oder prophylaxe einer autoimmunerkrankung und zur bildung von regulatorischen t-zellen |
Family Cites Families (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4853332A (en) | 1982-10-19 | 1989-08-01 | Cetus Corporation | Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of biologically active proteins |
US4959314A (en) | 1984-11-09 | 1990-09-25 | Cetus Corporation | Cysteine-depleted muteins of biologically active proteins |
US5116943A (en) | 1985-01-18 | 1992-05-26 | Cetus Corporation | Oxidation-resistant muteins of Il-2 and other protein |
JP3024311B2 (ja) | 1991-10-03 | 2000-03-21 | 味の素株式会社 | Il−2受容体重鎖に結合するポリペプチド |
US5229109A (en) | 1992-04-14 | 1993-07-20 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Low toxicity interleukin-2 analogues for use in immunotherapy |
US5635597A (en) | 1994-05-27 | 1997-06-03 | Affymax Technologies, N.V. | Peptides that bind IL-2 receptors |
US6955807B1 (en) | 1998-05-15 | 2005-10-18 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | IL-2 selective agonists and antagonists |
US6168785B1 (en) | 1998-07-16 | 2001-01-02 | Institut Pasteur | Biological applications of new peptides of IL-2 and derivatives and use as therapeutic agents |
AU5300299A (en) | 1998-08-21 | 2000-03-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Anti-inflammatory peptides derived from il-2 and analogues thereof |
EP1454138B1 (en) | 2001-12-04 | 2012-01-18 | Merck Patent GmbH | Immunocytokines with modulated selectivity |
US7569215B2 (en) | 2003-07-18 | 2009-08-04 | Massachusetts Institute Of Technology | Mutant interleukin-2 (IL-2) polypeptides |
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Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008003473A2 (en) * | 2006-07-06 | 2008-01-10 | Merck Patent Gmbh | Compositions and methods for enhancing the efficacy of il-2 mediated immune responses |
WO2009061853A2 (en) * | 2007-11-05 | 2009-05-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Mutant interleukin-2 (il-2) polypeptides |
WO2009135615A2 (de) * | 2008-05-08 | 2009-11-12 | Aicuris Gmbh & Co. Kg | Mittel zur behandlung und/oder prophylaxe einer autoimmunerkrankung und zur bildung von regulatorischen t-zellen |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
JPN6014013753; J. Immunother. Vol.32, No.9, 20091113, pp.887-894 * |
JPN6014013754; Biochemistry Vol.44, No.31, 2005, pp.10696-10701 * |
JPN6014013755; EMBO J. Vol.11, No.11, 1992, pp.3905-3910 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2017518361A (ja) * | 2014-04-24 | 2017-07-06 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | インターロイキン−2のスーパーアンタゴニスト、パーシャルアゴニスト及びアンタゴニスト |
JP2020023506A (ja) * | 2014-04-24 | 2020-02-13 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | インターロイキン−2のスーパーアンタゴニスト、パーシャルアゴニスト及びアンタゴニスト |
JP2022046693A (ja) * | 2014-04-24 | 2022-03-23 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | インターロイキン-2のスーパーアンタゴニスト、パーシャルアゴニスト及びアンタゴニスト |
JP7307919B2 (ja) | 2014-04-24 | 2023-07-13 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | インターロイキン-2のスーパーアンタゴニスト、パーシャルアゴニスト及びアンタゴニスト |
JP7503794B2 (ja) | 2014-04-24 | 2024-06-21 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | インターロイキン-2のスーパーアンタゴニスト、パーシャルアゴニスト及びアンタゴニスト |
JP2021519336A (ja) * | 2018-03-28 | 2021-08-10 | アセンディス ファーマ オンコロジー ディヴィジョン エー/エス | Il−2コンジュゲート |
JP7490563B2 (ja) | 2018-03-28 | 2024-05-27 | アセンディス ファーマ オンコロジー ディヴィジョン エー/エス | Il-2コンジュゲート |
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