CN102660621A - 一种改进的酶法制备阿莫西林的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及制药领域，提供了一种改进的酶法制备阿莫西林的方法以及该方法获得的产品，其包括：1)在10℃～20℃下，用pH值7.0～8.0的水或/和氨水溶液溶解6-APA，加入对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐和青霉素G酰基转移酶；2)将步骤1)所得溶液调pH值至6.0～6.5、在21℃～30℃下进行反应，直至6-APA的残留量低于5mg/ml；得含有阿莫西林产物的溶液；3)将含阿莫西林产物的溶液分离出青霉素G酰基转移酶，用盐酸调至溶液澄清；然后加入氨水溶液，调节pH值为5.5～6.5，0～5℃下结晶，即得。本发明大幅地提升了阿莫西林产品的质量，进一步提升了阿莫西林产品的用药安全。
Description
技术领域
本发明涉及一种阿莫西林的制备方法，具体涉及一种改进的酶法制备阿莫西林的方法。
背景技术
阿莫西林，化学名为(2S，5R，6R)-3，3-二甲基-6-[(R)-(-)-2-氨基-2-(4-羟基氮基)乙酰氨基]-7-氧代-4-硫杂-1-氮杂双环[3，2，0]庚烷-2-甲酸三水合物，它是一种常用的青霉素类广谱β-内酰胺类抗生素。
阿莫西林杀菌作用、穿透细胞壁的能力很强，是目前应用较为广泛的口服青霉素之一。阿莫西林的制备有化学合成法和酶法制备法，申请号为CN00100579.0、CN02100123.5、CN200410043624.8和CN201110162540.6的发明专利申请公开了阿莫西林的化学合成方法。化学合成法相对来说，合成路线长(例如，对羟基苯甘氨酸邓钾盐与特戊酰氯混合后经混酐、缩合、水解、结晶、过滤洗涤、干燥等工序)，且生产过程用到大量的溶媒，例如：特戊酰氯、吡啶、三乙胺、二氯甲烷等毒性较大的物质，不仅对操作人员毒害大，对环境也造成较大污染；而且化学法合成的阿莫西林具有晶型细小、流动性差、松密度小、分装困难的缺陷。
相对于化学合成法，酶法制备阿莫西林的工艺相对流程较短(如对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐与6-APA混合后，加酶催化即得到阿莫西林)，工艺简单，杂质的带入及产生较少，且制备过程中无溶媒及有毒害的试剂的特点；而且酶法所得产品的晶型较大、完整且规则，流动性好，操作时粉尘少、松密度大、分装收率高，有利于制剂的生产。
其中、Goncalves L R B，Giordan R L C，Giordano R C.Mathematicalmodeling of batch and semibatch reactors for the enzymic synthesis ofamoxicillin[J].Proc Biochem，2005，40(1)：247-256)；酶法制备阿莫西林的工艺优化研究(中国抗生素杂志2011年1月第36卷第1期第44-47页)；酶法阿莫西林质量研究(河北化工，2008年4月第31卷第4期30-31页)分别介绍了酶法制备阿莫西林的方法，并将所获得的阿莫西林产品与化学法获得的产品进行了质量对比研究。
从上述公开的内容可以看出，化学合成法获得的阿莫西林产品中，阿莫西林含量的最高为99.37％、总杂含量最低为0.77％、单杂含量最低为0.17％；而上述酶法获得的阿莫西林产品中，阿莫西林含量的最高为99.40％、总杂含量最低为0.61％、单杂含量最低为0.21％；无论从产品的含量、总杂、单杂含量上，目前酶法制备工艺制得的阿莫西林的产品质量与化学合成制得的产品质量相当。
然而对于药品而言，产品的质量直接关系到患者的用药安全，国家一直倡导提高药品的质量，确保用药安全，而提高药品的质量也一直是本领域技术人员不断追求的目标。因此，有必要进一步改进酶法制备阿莫西林的工艺，以大幅地提高阿莫西林的产品质量。
发明内容
针对以上技术缺陷，本发明提供了一种改进的酶法制备阿莫西林的方法。所述方法包括以下步骤：
1)在10℃～20℃下，用pH值7.0～8.0的水或/和氨水溶液溶解6-APA，加入对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐和青霉素G酰基转移酶；
2)将步骤1)所得溶液用氨水调pH值至6.0～6.5、在21℃～30℃下进行反应直至6-APA的残留量低于5mg/ml；得含有阿莫西林产物的溶液；
3)将含阿莫西林产物的溶液分离出青霉素G酰基转移酶，用盐酸调pH值到0.5～2.0以至溶液澄清；然后加入用氨水溶液调节pH值至5.5～6.5，并于0～5℃下结晶，即得。
本发明的所述步骤1)中，作为实施方式之一，所述pH值7.0～8.0水或氨水溶液，pH值范围包括但不限于7.0～7.9、7.0～7.8、7.0～7.7、7.0～7.6、7.0～7.5、7.0～7.4、7.0～7.3、7.0～7.2；
7.1～8.0、7.1～7.9、7.1～7.8、7.1～7.7、7.1～7.6、7.1～7.5、7.1～7.4、7.1～7.3、7.1～7.2；
7.2～8.0、7.2～7.9、7.2～7.8、7.2～7.7、7.2～7.6、7.2～7.5、7.2～7.4、7.2～7.3；
7.3～8.0、7.3～7.9、7.3～7.8、7.3～7.7、7.3～7.6、7.3～7.5、7.3～7.4；
7.4～8.0、7.4～7.9、7.4～7.8、7.4～7.7、7.4～7.6、7.4～7.5；
7.5～8.0、7.5～7.9、7.5～7.8、7.5～7.7、7.5～7.6；
7.6～8.0、7.6～7.9、7.6～7.8、7.6～7.7；
7.7～8.0、7.7～7.9、7.7～7.8；
7.8～8.0、7.8～7.9；或
7.9～8.0；同样pH值可以为7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9或8.0的水或氨水溶液。
作为本发明的实施方式之一，所述氨水溶液进一步优选为pH值7.5±0.1氨水溶液；所述pH值7.5±0.1氨水溶液可以采用本领域常规的方法进行制备；既可以采用配制好的pH值7.5±0.1的氨水溶液直接溶解6-APA，也可以先用水溶解6-APA，然后加入一定浓度的氨水调节pH值至7.5±0.1；其中所述氨水的浓度可以是本领域常规的浓度，本发明优选为3mol/L浓度的氨水溶液；
本发明步骤1)中，更进一步优选为：先用适量的水溶解6-APA，然后用3mol/L浓度的氨水调节pH值至7.5±0.1；再加入对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐和青霉素G酰基转移酶；
作为本发明的实施方式之一，本发明所述步骤1)中10℃～20℃温度范围包括但不限于：11℃～20℃、12℃～20℃、13℃～20℃、14℃～20℃、15℃～20℃、16℃～20℃、17℃～20℃、18℃～20℃、19℃～20℃；
10℃～19℃、11℃～19℃、12℃～19℃、13℃～19℃、14℃～19℃、15℃～19℃、16℃～19℃、17℃～19℃、18℃～19℃；
10℃～18℃、11℃～18℃、12℃～18℃、13℃～18℃、14℃～18℃、15℃～18℃、16℃～18℃、17℃～18℃；
10℃～17℃、11℃～17℃、12℃～17℃、13℃～17℃、14℃～17℃、15℃～17℃、16℃～17℃；
10℃～16℃、11℃～16℃、12℃～16℃、13℃～16℃、14℃～16℃、15℃～16℃；
10℃～15℃、11℃～15℃、12℃～15℃、13℃～15℃、14℃～15℃；
10℃～14℃、、11℃～14℃、12℃～14℃、13℃～14℃；
10℃～13℃、11℃～13℃、12℃～13℃；
10℃～12℃、或11℃～12℃；
也可以是在10℃、11℃、12℃、13℃、14℃、15℃、16℃、17℃、18℃、19℃或20℃；本发明进一步优选为14℃～16℃，最佳为15℃；
作为本发明优选的实施方式之一，所述步骤1)中，在14℃～16℃、优选15℃，用水溶解6-APA，并用3.0mol/L的氨水调pH值至7.5±0.1，然后加入对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐和青霉素G酰基转移酶。
作为本发明实施方式之一，所述步骤1)中，6-APA与对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐的重比为1∶1.3～1.6，优选1.3～1.4；
作为本发明实施方式之一，所述步骤1)中，青霉素G酰基转移酶的用量为2.0-2.5UK/L；
作为实施方式之一，本发明的所述6-APA、D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐、青霉素G酰基转移酶和/或水均为本领域常规的原料，符合本领域常规的质量标准要求，优选符合如下标准的、任意来源(市上购买或制备)的原料或更高标准的原料：)
本发明人通过研究发现，6-APA在15℃和pH值7.5±0.1条件下，能较好地稳定存在，6-APA稳定性较好、降解率小、从而有效地保护了6-APA。
同时，本发明采用D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐而不是对羟基苯甘氨酸甲酯；而相对于D-对羟基苯甘氨酸甲酯，本发明D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐更易溶于水，亲水性特别好，阿莫西林合成是在水相中进行的，选择亲水性的物质更利于反应的进行；同时本发明中的6-APA与对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐的重比为优选1.3～1.4，相比于现有技术文献节约了原材料，同时减少了杂质带入。
作为实施方式之一，本发明所述步骤2)中，反应温度为21-30℃的范围包括但不限于：
22℃-30℃、23℃-30℃、24℃-30℃、25℃-30℃、26℃-30℃、27℃-30℃、28℃-30℃、29℃-30℃；
21℃-29℃、22℃-29℃、23℃-29℃、24℃-29℃、25℃-29℃、26℃-29℃、27℃-29℃、28℃-29℃；
21℃-28℃、22℃-28℃、23℃-28℃、24℃-28℃、25℃-28℃、26℃-28℃、27℃-28℃；
21℃-27℃、22℃-27℃、23℃-27℃、24℃-27℃、25℃-27℃、26℃-27℃；
21℃-26℃、22℃-26℃、23℃-26℃、24℃-26℃、25℃-26℃；
21℃-25℃、22℃-25℃、23℃-25℃、24℃-25℃；
21℃-24℃、22℃-24℃、23℃-24℃；
21℃-23℃、22℃-23℃；或
21℃-22℃；所述反应温度还可以是21℃、22℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃；
作为本发明优选实施方式之一，所述步骤2)中的反应在22℃～23℃下进行反应；
作为本发明优选实施方式之一，所述骤2)中的pH值控制在6.25±0.1；
本发明所述步骤2)中，在反应过程中，应每隔一段时间用HPLC检测6-APA的转化率，该时间间隔可以由本领域技术人员根据实际情况来决定，如可以每隔1小时、2小时或3小时；或先隔1小时、再隔2或3小时、或先隔2或3小时、再隔1小时监测，6-APA残留量在低于5mg/ml、结束反应；同样也可以低于4mg/ml、3mg/ml、2mg/ml、1mg/ml或0.5mg/ml时，结束反应。
其中HPLC的条件为本领域常规的检测条件，本领域技术人员可以结合现有技术来确定。
在本发明步骤2)的反应条件下更能很好地激活酶的活性，反应时间大大缩短，范围为1.5小时～5小时，缩短了反应时间，减少了杂质的生成。
作为本发明实施方式之一，所述步骤3)中，其中析出晶体后，先后用水和/或80％～95％浓度的甲醇、乙醇或异丙醇、或90-98％浓度的丙酮的有机溶剂洗涤，干燥，即得；本发明进一步优选水或有机溶剂与阿莫西林的重量比为2～3∶1。
作为本发明优选实施方式之一，所述步骤3)中，干燥条件为：-0.06Mpa～-0.09Mpa、50℃～60℃下干燥；作为本发明优选实施方式之一，步骤3)中氨水溶液的浓度为6mol/L。
作为本发明优选实施方式之一，所述步骤3)优选为：过滤步骤2)所得溶液，以除去青霉素G酰基转移酶，然后加入与阿莫西林的重量比为2/20～3/20的水，用6mol/L盐酸调节pH值0.5～2.0，以至溶液澄清透明，过滤用0.22微米滤芯过滤；
然后用6mol/L的氨水调节pH值为5.5～6.5之间，降温0～5℃，养晶；
过滤，晶体先后分别用水和/或80％～95％的甲醇、乙醇或异丙醇，或90％98％浓度的丙酮有机溶剂洗涤，其中，水或有机溶剂与阿莫西林重量比为2～3∶1；
然后在50℃～60℃，真空度-0.06Mpa～-0.09Mpa下干燥直至水份低于14.5％以下，即得。
本发明人研究发现，阿莫西林的结晶pH为5.5～6.5之间，酶法制备阿莫西林的合成重要的杂质之一是D-对羟基苯甘氨酸，而它的等电点就在5.0左右与阿莫西林的等电点相同，为了避开了D--对羟基苯甘氨酸的等电点，本发明选择高于等电点的pH值，阿莫西林的溶解性不受影响，而D--对羟基苯甘氨酸的溶解性大大增加，减少了结晶过程中D--对羟基苯甘氨酸对于阿莫西林质量的影响。
发明人通过大量的实验还发现，甲醇的浓度及用量对于结晶较为重要，如无水甲醇会带走阿莫西林三水化合物中的游离水分子，使阿莫西林脱水变成硬块；而采用80％～95％的甲醇、乙醇、异丙醇或90％～98％丙酮溶液进行洗涤，可以达到很好的效果。
作为本发明优选的实施方式之一，本发明阿莫西林的酶法制备方法优选包括以下步骤：
1)6-APA的投料比及溶解：
在14℃～16℃条件下将6-APA加入水中，用3mol/L氨水调节pH值7.5±0.1，然后加入D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐和青霉素G酰基转移酶，其中，6-APA与D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐的重量比1∶1.3～1.4，青霉素G酰基转移酶的量为2.0KU/L～2.5KU/L；
2)反应过程：
用3mol/L的氨水调节步骤1)所得溶液的pH值在6.0～6.5之间，在22℃-23℃下进行反应，用HPLC检测6-APA的转化率，当6-APA的含量低于5mg/ml时，结束反应，得到含阿莫西林产物的溶液；
3)分离、精制：
过滤步骤2)所得溶液，以除去青霉素G酰基转移酶，然后加入与阿莫西林的重量比为2/20～3/20的水，用6mol/L盐酸调节pH值0.5～2.0，至溶液澄清透明，用0.22微米滤芯过滤；
并用6mol/L的氨水调节pH值为5.5～6.5之间，降温0～5℃，养晶；
过滤，晶体先后分别用水和/或80％～95％浓度的甲醇、乙醇或异丙醇有机溶剂洗涤或90％～98％浓度的丙酮有机溶剂，其中，水或有机溶剂与阿莫西林重量比为2～3∶1；
然后在50℃～60℃，真空度-0.06Mpa～-0.09Mpa下干燥，直至水份低于14.5％以下，即得。
本发明还进一步提供了一种阿莫西林产品，所述产品中阿莫西林含量大于或等于100.7％；总杂的含量小于或等于为0.15％；单杂的含量小于或等于0.10％。
相对于现有技术，本发明方法显著地提高了阿莫西林产品的质量，总杂、单杂的含量显著地降低。
本发明通过采用药典(2010年第二版)所记载的稳定性加速试验方法进行检测，本发明中各实施例中所得产品的阿莫西林含量最低为100.7％；总杂的含量最高为0.15％；单杂的含量最高为0.10％。
本发明所得阿莫西林产品的质量之所以显著地高于现有技术中所报道的阿莫西林产品的质量，原因在于本发明从以下几方面进行了改进和提高：
首先，从溶解时的pH值及温度方面，本发明人采取10℃～20℃条件，pH值7.0～8.0范围内溶解。6-APA在低温条件且在pH值7.0～8.0下，质量稳定性较好，降解率低。
其次，所使用的原材料上：发明人使用的侧链为D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐而不是对羟基苯甘氨酸甲酯；相比于现有技术文献中节约了原材料，减少了杂质的带入。
再次，从反应温度上，发明人将本发明的温度控制在21℃-30℃范围内，优选22℃-23℃。该条件下反能更能很好的激活酶的活性，大大缩短了反应时间，减少了杂质的生成。
最后，从结晶方法上，相对于文献中指出的结晶pH值5.1；发明人对阿莫西林结晶采用的pH值为5.5～6.5。酶法阿莫西林的合成重要的杂质是D-对羟基苯甘氨酸，它的等电点就在5.0左右与阿莫西林的等电点相同，综合实验数据，发明人避开了D-对羟基苯甘氨酸的等电点，选择高于等电点的pH值，阿莫西林的溶解性不受影响，而D--对羟基苯甘氨酸的溶解性大大增加，减少了结晶过程中D-对羟基苯甘氨酸对于阿莫西林质量的影响。
对于溶剂的选择上，现有技术中仅指出用甲醇洗涤，但并没有指明用什么浓度的甲醇洗涤，而发明人实际做了大量的实验证明，不是任意浓度的甲醇都可用于洗涤，如无水甲醇会很快带走阿莫西林三水化合物中的游离水分子，使阿莫西林脱水变成硬块；而采用80％～95％的甲醇、乙醇、异丙醇或90％-98％丙酮溶剂，可以达到更好的效果、如水份好干燥，溶媒残留更低。
本发明方法大幅地提升了阿莫西林产品的质量，进一步提高了阿莫西林产品的用药安全。
具体实施方式
本发明通过以下实施例和实验例进一步阐述本发明，但本发明并不受限于此。
实施例1
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐15.6g；青霉素G酰基转移酶2.2KU/L；3mol/l氨水8ml；丙酮60ml(90％的浓度)；6mol/l盐酸11ml；6mol/l氨水：9.5ml；纯化水500ml。
制备过程：
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，搅拌下加入12g 6-APA，然后滴加3mol/l氨水调pH＝7.5时，保持温度15℃，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量5ml；向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐；然后在加入青霉素G酰基转移酶，开始反应；保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.25，3mol/l氨水用量3ml；反应1小时后，每隔一段时间取样通过HPLC测量6-APA转化率(mg/ml)：第1小时23.17；第2小时18.11；第3小时6.45；第4小时4.83；第5小时4.13。停止反应将合成液与合成酶分离，得到阿莫西林粗品。在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌；滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量11ml；用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中；搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.02，6mol/l氨水用量9.5ml；结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h。分离结晶液，滤饼用30ml/次丙酮两次洗涤；将湿粉放于烘箱内，50℃烘干；得阿莫西林：19.2g，收率82.5％：
实施例2
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐16.8g；青霉素G酰基转移酶2.2KU/L；3mol/l氨水9ml；丙酮60ml(98％的浓度)；6mol/l盐酸12ml；6mol/l氨水10ml；纯化水：500ml
制备过程：
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌。滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量5ml。向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐。加入合成酶，开始反应。保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.25，3mol/l氨水用量4ml。反应1小时后，每隔一段时间取样6-APA测转化率(mg/ml)：第1小时：22.89；第2小时：17.55；第3小时：8.68；第4小时：6.71；第5小时：4.33；停止反应将青霉素G酰基转移酶分离，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌；滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量12ml；用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中；搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.02，6mol/l氨水用量10ml；结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h；分离结晶液，滤饼用30ml/次丙酮两次洗涤；将湿粉放于烘箱内，50℃烘干。得阿莫西林：19.3g，收率82.9％。
实施例3
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐19.2g；青霉素G酰基转移酶2.2KU/L；3mol/l氨水10.5ml；甲醇60ml(85％的浓度)；6mol/L盐酸12.5ml；6mol/L氨水11ml；纯化水500ml。
制备过程：
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌；滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量6ml；向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐；加入合成酶，开始反应；保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.25，3mol/l氨水用量4.5ml；每隔一段时间取样测6-APA转化率(mg/ml)：第1小时23.01；第2小时17.61；第3小时8.54；第4小时6.83；第5小时4.35；停止反应；分离出青霉素G酰基转移酶，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌；滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量12.5ml；用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中；搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.02，6mol/l氨水用量11ml；结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h；分离结晶液，滤饼用30ml/次甲醇两次洗涤；将湿粉放于烘箱内，50℃烘干；得阿莫西林19.3g，收率82.9％。
实施例4
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐16.8g；青霉素G酰基转移酶2.0KU/L；3mol/l氨水9.5ml；乙醇60ml(95％的浓度)；6mol/l盐酸11.5ml；6mol/l氨水12ml；纯化水500ml；
制备过程：
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌；滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量5.5m；向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐；加入合成酶，开始反应；保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.25，3mol/l氨水用量4ml；每隔一段时间取样测6-APA转化率(mg/ml)：第3小时：10.24第5小时4.36；停止反应；除去青霉素G酰基转移酶，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌；滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量11.5m；用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中；搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.03，6mol/l氨水用量12ml；结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h；分离结晶液，滤饼用30ml/次乙醇两次洗涤；将湿粉放于烘箱内，50℃烘干；得阿莫西林19.4g，收率83.3％。
实施例5
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐16.8g；青霉素G酰基转移酶2.2KU/L；3mol/l氨水9ml；异丙醇40ml(80％的浓度)；6mol/l盐酸12ml；6mol/l氨水12ml；纯化水500ml。
制备过程：
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌；滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量6ml；向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐；加入合成酶，开始反应；保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.25，3mol/l氨水用量3ml；每隔一段时间取样测6-APA转化率(mg/ml)：第3小时7.32；第5小时3.63；停止反应除去青霉素G酰基转移酶，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌；滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量12ml；用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中；搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.03，6mol/l氨水用量12ml；结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h；分离结晶液，滤饼用30ml/次异丙醇两次洗涤；将湿粉放于烘箱内，50℃烘干；得阿莫西林；19.3g，收率82.9％。
实施例6
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐16.8g；青霉素G酰基转移酶2.5KU/L；3mol/l氨水10ml；丙酮60ml(95％的浓度)；6mol/l盐酸12ml；6mol/l氨水11ml；纯化水500ml。
制备过程
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌；滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量6.5ml；向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐；加入合成酶，开始反应；保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.25，3mol/l氨水用量3.5ml；每隔一段时间取样测6-APA转化率(mg/ml)：第3小时7.03；第5小时3.51；停止反应，除去青霉素G酰基转移酶，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌；滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量12ml；用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中；搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.00，6mol/l氨水用量11ml；结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h；分离结晶液，滤饼用30ml/次丙酮两次洗涤；将湿粉放于烘箱内，50℃烘干；得阿莫西林19.4g，收率83.3％。
实施例7
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐16.8g；青霉素G酰基转移酶2.2KU/L；3mol/l氨水10.5ml；甲醇(90％的浓度)60ml；6mol/l盐酸12.5ml；6mol/l氨水12ml；纯化水500ml；
制备过程
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌。滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量6ml。向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐。加入合成酶，开始反应。保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.0，3mol/l氨水用量4.5ml。每隔一段时间取样6-APA测转化率(mg/ml)：第5小时15.44第6小时6.30第8小时4.27停止反应。除去青霉素G酰基转移酶，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌。滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量12.5ml。用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中。搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.00，6mol/l氨水用量12ml。结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h。分离结晶液，滤饼用30ml/次甲醇两次洗涤。将湿粉放于烘箱内，50℃烘干。得阿莫西林19.3g，收率82.9％。
实施例8
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐16.8g；青霉素G酰基转移酶2.2KU/L；3mol/l氨水10ml；乙醇(80％的浓度)60ml；6mol/l盐酸11ml；6mol/l氨水12ml；纯化水500ml。
制备过程：
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌。滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量6ml。向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐。加入合成酶，开始反应。保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.25，3mol/l氨水用量4ml。每隔一段时间取样测6-APA转化率(mg/ml)：第3小时10.15；第5小时4.13停止反应。除去青霉素G酰基转移酶，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌。滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量11ml。用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中。搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.02，6mol/l氨水用量12ml。结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h。分离结晶液，滤饼用30ml/次乙醇两次洗涤。将湿粉放于烘箱内，50℃烘干。得阿莫西林19.4g，收率83.3％。
实施例9
物料准备：
6-APA 12g；D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐16.8g；青霉素G酰基转移酶2.2KU/L；3mol/l氨水10ml；异丙醇(95％的浓度)60ml；6mol/l盐酸11ml；6mol/l氨水12ml；纯化水500ml。
制备过程
在1000ml烧杯中加入240ml纯化水，再加入12g6-APA，同时进行搅拌。滴加3mol/l氨水，T＝15℃，pH＝7.5时，6-APA全部溶解，3mol/l氨水用量6ml。向烧杯中加入D对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐。加入合成酶，开始反应。保持反应体系恒温22℃，加入氨水控制pH＝6.50，3mol/l氨水用量4ml。每隔一段时间取样测6-APA转化率(mg/ml)：第3小时6.43；第5小时2.52；停止反应。除去青霉素G酰基转移酶，得到阿莫西林粗品。
在500ml烧杯中，加入192ml纯化水，投入阿莫西林粗品，同时进行搅拌。滴加6mol/l盐酸，pH＝1.0时，阿莫西林全部溶解，6mol/l盐酸用量11ml。用0.22微米滤膜过滤阿莫西林溶解液，将其转入500ml烧杯中。搅拌，缓慢加入6mol/l氨水至pH＝6.02，6mol/l氨水用量12ml。结晶液降温，搅拌2.5h后T＝2.7℃，停止搅拌，保温养晶2.0h。分离结晶液，滤饼用30ml/次异丙醇两次洗涤。将湿粉放于烘箱内，50℃烘干。得阿莫西林19.3g，收率82.9％。
实验例1 加速稳定性试验
实验仪器：高效液相色谱仪、气相色谱仪、聚合物测定仪、卡氏水分测定仪、旋光仪等。
高效液相的条件：波长：225nm，紫外检测器，流速：1.0ml/minl，流动相：磷酸盐缓中液∶乙腈＝95∶5，
高效液相色谱仪：岛津LC-20A，气相色谱仪：岛津GC-2010，卡氏水分测定仪：瑞士万通870型，旋光仪：数字自动旋光仪WZZ-2S
实验方法：在各时间点取样，按药典2010版记载的关于加速稳定性的方法检测。分取采用实施例6，实施例7，实施例8，实施例9的方法制备的样品60g，密封袋两层密封，放置于温度为40℃、湿度75％±5％的加速试验箱。
实验结果：
实施例6 所得阿莫西林加速试验结果
(40℃±2℃、RH75％±5％)
实施例7 所得阿莫西林加速试验结果
实施例8 所得阿莫西林加速试验结果
实施例9 所得阿莫西林加速试验结果
实验结论：加速实验6个月后，本发明所得阿莫西林产品的含量、单杂、总杂以及聚合物等均未发生显著改变，说明本发明酶法阿莫西林产品的质量稳定。
Claims (10)
1.一种酶法制备阿莫西林的方法，所述方法包括：
1)在10℃～20℃下，用pH值7.0～8.0的水或/和氨水溶液溶解6-APA，加入对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐和青霉素G酰基转移酶；
2)将步骤1)所得溶液用氨水调pH值至6.0～6.5、在21℃～30℃下进行反应，直至6-APA的残留量低于5mg/ml；得含有阿莫西林产物的溶液；
3)将含阿莫西林产物的溶液分离出青霉素G酰基转移酶，用盐酸调pH值到0.5～2.0，以至溶液澄清；然后加入氨水溶液，调节pH值至5.5～6.5，并于0℃～5℃下结晶，即得。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，6-APA与对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐的重量比为1∶1.3～1.6，优选1.3～1.4；和/或青霉素G酰基转移酶的用量为2.0-2.5UK/L。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，在14℃～16℃、优选15℃，用水溶解6-APA，并用氨水调pH值至7.5±0.1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中，在21℃～24℃，优选22℃～23℃下进行反应。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中还包括，析出晶体后，先后分别用水和/或80％～95％的甲醇、乙醇或异丙醇、或90-98％的丙酮的有机溶剂洗涤，干燥，即得。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，水或有机溶剂与阿莫西林的重量比为2～3∶1。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，干燥条件为：-0.06Mpa～-0.09Mpa、50℃～60℃下干燥。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤1)或步骤2)中氨水溶液的浓度为3mol/L；和/或步骤3)中氨水溶液的浓度为6mol/L。
9.根据权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
1)6-APA的投料比及溶解：
在14℃～16℃条件下将6-APA加入水中，用3mol/L氨水调节pH值7.5±0.1，然后加入D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐和青霉素G酰基转移酶，其中，6-APA与D-对羟基苯甘氨酸甲酯盐酸盐的重量比1∶1.3～1.4，青霉素G酰基转移酶的量为2.0KU/L～2.5KU/L；
2)反应过程：
用3mol/L的氨水调节步骤1)所得溶液的pH值在6.0～6.5之间，在22℃-23℃下进行反应，用HPLC检测6-APA的转化率，当6-APA的含量低于5mg/ml时，结束反应，得到含阿莫西林产物的溶液；
3)分离、精制：
过滤步骤2)所得溶液，以除去青霉素G酰基转移酶，然后加入与阿莫西林的重量比为2/20～3/20的水，用6mol/L盐酸调节pH值0.5～2.0，至溶液澄清透明，用0.22微米滤芯过滤；
然后用6mol/L的氨水调节pH值为5.5～6.5之间，降温0～5℃，养晶；
过滤，晶体先后分别用水和/或80％～95％浓度的甲醇、乙醇或异丙醇，或90～98％浓度的丙酮有机溶剂洗涤，其中，水或有机溶剂与阿莫西林重量比为2～3∶1。
然后在50℃～60℃，真空度-0.06Mpa～-0.09Mpa下干燥，直至水份低于14.5％以下，即得。
10.一种权利要求1-9任一所述的方法获得的阿莫西林产品，其特征在于，所述产品的阿莫西林含量大于或等于100.7％；总杂的含量小于或等于为0.15％；单杂的含量小于或等于0.10％。
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Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103113250A (zh) * | 2013-03-08 | 2013-05-22 | 华北制药集团先泰药业有限公司 | 一种d-对羟基苯甘氨酸甲酯的制备方法 |
| CN103937866A (zh) * | 2014-05-12 | 2014-07-23 | 联邦制药(内蒙古)有限公司 | 一种改进的氨苄西林的制备方法 |
| CN104059086A (zh) * | 2014-06-19 | 2014-09-24 | 河南牧翔动物药业有限公司 | 一种阿莫西林晶体及其制备方法 |
| CN104762359A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-07-08 | 内蒙古常盛制药有限公司 | 一种酶法合成阿莫西林母液中阿莫西林的回收工艺 |
| CN104830940A (zh) * | 2015-03-23 | 2015-08-12 | 山东鲁抗立科药业有限公司 | 一种酶法合成阿莫西林的工艺 |
| CN105567777A (zh) * | 2016-03-07 | 2016-05-11 | 内蒙古常盛制药有限公司 | 一种循环利用阿莫西林母液的方法 |
| CN109371095A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-02-22 | 广州市力鑫药业有限公司 | 一种酶法合成阿莫西林的方法 |
| CN109867687A (zh) * | 2017-12-05 | 2019-06-11 | 上海朝瑞化工有限公司 | 一种高水溶性阿莫西林及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009016642A1 (en) * | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Fermenta Biotech Limited | Process for the preparation of immobilized recombinant penicillin acylase catalyst from achromobacter sp. ccm 4824 expressed in e. coli bl 21 ccm 7394 and its use for the synthesis of beta-lactam antibiotics |
-
2012
- 2012-05-04 CN CN201210135310.5A patent/CN102660621B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2009016642A1 (en) * | 2007-07-27 | 2009-02-05 | Fermenta Biotech Limited | Process for the preparation of immobilized recombinant penicillin acylase catalyst from achromobacter sp. ccm 4824 expressed in e. coli bl 21 ccm 7394 and its use for the synthesis of beta-lactam antibiotics |
| CN101802212A (zh) * | 2007-07-27 | 2010-08-11 | 酵素生物技术有限公司 | 从大肠杆菌BL21CCM7394中无色菌CCM4824制备固定重组青霉素酰化酶催化剂的方法及其在合成β-内酰胺抗生素中的应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 拜秀玲: "青霉素酰化酶性质及应用研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 基础科学辑》 * |
| 朱科等: "酶法制备阿莫西林的工艺优化研究", 《中国抗生素杂志》 * |
| 殷振平等: "酶法制备半合成青霉素的研究", 《中国医药工业杂志》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103113250A (zh) * | 2013-03-08 | 2013-05-22 | 华北制药集团先泰药业有限公司 | 一种d-对羟基苯甘氨酸甲酯的制备方法 |
| CN103937866A (zh) * | 2014-05-12 | 2014-07-23 | 联邦制药(内蒙古)有限公司 | 一种改进的氨苄西林的制备方法 |
| CN103937866B (zh) * | 2014-05-12 | 2016-07-06 | 联邦制药(内蒙古)有限公司 | 一种改进的氨苄西林的制备方法 |
| CN104059086A (zh) * | 2014-06-19 | 2014-09-24 | 河南牧翔动物药业有限公司 | 一种阿莫西林晶体及其制备方法 |
| CN104830940A (zh) * | 2015-03-23 | 2015-08-12 | 山东鲁抗立科药业有限公司 | 一种酶法合成阿莫西林的工艺 |
| CN104762359A (zh) * | 2015-04-15 | 2015-07-08 | 内蒙古常盛制药有限公司 | 一种酶法合成阿莫西林母液中阿莫西林的回收工艺 |
| CN105567777A (zh) * | 2016-03-07 | 2016-05-11 | 内蒙古常盛制药有限公司 | 一种循环利用阿莫西林母液的方法 |
| CN109867687A (zh) * | 2017-12-05 | 2019-06-11 | 上海朝瑞化工有限公司 | 一种高水溶性阿莫西林及其制备方法 |
| CN109867687B (zh) * | 2017-12-05 | 2021-08-17 | 上海朝瑞化工有限公司 | 一种高水溶性阿莫西林及其制备方法 |
| CN109371095A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-02-22 | 广州市力鑫药业有限公司 | 一种酶法合成阿莫西林的方法 |
| CN109371095B (zh) * | 2018-12-06 | 2021-08-20 | 广州市力鑫药业有限公司 | 一种酶法合成阿莫西林的方法 |
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