CN102659787B

CN102659787B - 氟代多羟基吡咯里西啶及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN102659787B
Application number: CN201210118830.5A
Authority: CN
Inventors: 俞初一; 李意羡; 贾月梅
Original assignee: Institute of Chemistry CAS
Current assignee: Institute of Chemistry CAS
Priority date: 2011-03-29
Filing date: 2011-03-29
Publication date: 2015-04-01
Anticipated expiration: 2031-03-29
Also published as: CN102659787A

Abstract

本发明提供了一种氟代亚氨基糖化合物及其制备方法与应用。本发明所提供的氟代亚氨基糖化合物的结构如式(I)和式(II)所示，其中n＝1或2；X为羟基或氟；R₁、R₂和R₃选自氢、羟基、羟甲基、苄基、苄氧基和苄氧甲基；R₄和R₆选自氢、氟、甲基、一至三氟代的甲基、羟甲基、乙基、羟乙基、(1S)-羟基羟乙基、(1R)-羟基羟乙基、一至全氟代的羟乙基、丙基、丁基或被羟基或甲氧基一至全取代的苯基；R₅为氢、C_1-18直链或支链饱和烷烃；R₇和R₈为氢、氟、羟基、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基。本发明提供的上述氟代亚氨基糖化合物的制备方法简单高效。本发明所提供的氟代亚氨基糖化合物可作为抑制糖苷酶或抗肿瘤的潜在药物。

Description

氟代多羟基吡咯里西啶及其制备方法与应用

本申请是申请日为2011年3月29日、申请号为201110076266.0、发明名称为“氟代亚氨基糖化合物及其制备方法与应用”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种氟代亚氨基糖化合物及其制备方法与应用。

背景技术

亚氨基糖(iminosugars)，又称多羟基生物碱、氮杂糖、亚胺糖等，从结构上可以看作糖环上的氧被氮取代的一类糖模拟物。至今为止，已有超过140种亚氨基糖生物碱得到分离，并有许多被证明是高效、专一的糖苷酶或糖基转移酶抑制剂[参见(a)A.E.Stütz，Iminosugars as Glycosidase Inhibitors：Nojirimycin and Beyond；Wiley-VCH：Weinheim，1999；(b)P.Compain and O.R.Martin，eds.，Iminosugars：From Synthesis to TherapeuticApplications，lst edn.，Wiley，2007；(c)N.Asano，R.J.Nash，R.J.Molyneux and G.W.J.Fleet，Tetrahedron：Asymmetry，2000，11，1645-1680；(d)A.A.Watson，G.W.J.Fleet，N.Asano，R.J.Molyneux and R.J.Nash，Phytochemistry，2001，56，265-295；(e)G.Horne，F.X.Wilson，J.Tinsley，D.H.Williams and R.Storer，Drug Discov Today，2010，doi：10.1016/j.drudis.2010.08.017.]或具有重要的药理活性[(a)L.Somsak，et.al.，Currentpharmaceutical design，2003，9，1177-1189；(b)A.E.Stutz，et.al.，Current Topics in MedicinalChemistry，2003，3，513-523；(c)O.Martin，et.al.，Annales pharmaceutiques2007，65，5-13.]，因此在新药创制中备受关注。

多羟基吡咯烷类生物碱是一类重要的亚氨基糖天然产物，由于其高效的糖苷酶抑制活性和广泛存在而受到关注(式1)。例如，1976年从毛鱼藤(Derris elliptica)叶片中分离得到的DMDP(2，5-Dihydroxymethyl-3，4-dihydroxypyrrolidine)[A.Welter，J.Jadot，G.Dardenne，M.Marlier and J.Casimir，Phytochemistry，1976，15，747-749]对α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、人类溶酶体的β-甘露糖苷酶，β-半乳糖苷酶以及β-木糖苷酶都具有很强的抑制性。因此被视作亚氨基糖领域的模型化合物，吸引了化学家和生物化学家们的广泛关注和深入研究[(a)G.W.J.Fleet and P.W.Smith，Tetrahedron Lett.，1985，26，1469-1472；(b)M.Takebayashi，S.Hiranuma，Y.Kanie，T.Kajimoto，O.Kanie and C.H.Wong，J.Org.Chem.，1999，64，5280-5291；(c)M.S.Chorghade，C.T.Csaba and P.S.Liu，Tetrahedron：Asymmetry，1994，5，2251-2254；(d)G.W.J.Fleet，S.J.Nicholas，P.W.Smith，S.V.Evans，L.E.Fellowsand R.J.Nash，Tetrahedron Lett.，1985，26，3127-3130.]。DAB可视为DMDP的脱羟甲基衍生物，是从Angylocalyx boutiqueanus(Leguminosae)的果实中分离得到的植物的二级代谢物，对α-葡萄糖苷酶具有很强的抑制活性[Nash，R.J.；Bell，E.A.；Williams，J.M.，Phytochemistry，1985，24，1620-1622]。

式1一些多羟基吡咯烷类生物碱

氟是一类特殊的元素，由于其与氧的原子半径的接近而常被视为羟基的“电子等排体”。另外，由于氟与氢的Waals半径的接近药物化学上也经常通过氟取代先导化合物中的氢，用于“欺骗”酶而达到药物改性和构效关系研究的目的，且氟原子或含氟基团的引入通常能够为化合物带来其他元素所无法实现的独特性质[参见(a)R.E.Banks，B.E.Smart and J.C.Tatlow，eds.，Organofluorine Chemistry，Principles and Commercial Applications，1994；(b)I.Ojima，ed.，Fluorine in MedicinalChemistry and Chemical Biology，lst edn.，Wiley-Blackwell，2009.]。

近二十年来，已有数十个氟代亚氨基糖类化合物得到合成，一些化合物在引入氟原子或含氟基团后在糖苷酶抑制活性方面表现出极大的改善[(a)Y.Nishimura，Curr.Top.Med.Chem.，3，575-591；(b)Y.Nishimura，T.Kudo，S.Kondo and T.Takeuchi，J.Antibiotics，45，963-970]。因此，本发明以一些具有重要生物活性的亚氨基糖为母体，设计、合成并评价了一类氟代的亚氨基糖化合物，发现这类化合物具有抗肿瘤和抑制糖苷酶的活性。

氟代亚氨基糖在文献中已有报道，合成氟代亚氨基糖通常有两种方法，即在已有的亚氨基糖环上引入氟原子或含氟基团[(a)R.H.Furneaux，G.J.Gains‘ford，J.M.Mason andP.C.Tyler，Tetrahedron，1994，50，2131-2160；(b)R.H.Furneaux，J.M.Mason and P.C.Tyler，Tetrahedron Lett.，1994，35，3143-3146；(c)R.H.Furneaux，G.J.Gainsford，J.M.Mason and P.C.Tyler，Tetrahedron，1995，51，12611-12630；(d)I.K.Khanna，F.J.Koszyk，M.A.Stealey，R.M.Weier and J.Julien，Journal of Carbohydrate Chemistry，1995，14，843-878；(e)T.Ayad，Y.Génisson，S.Broussy，M.Baltas and L.Gorrichon，Eur.J.Org.Chem.，2003，2903-2910.]或者是通过含氟片段(如含氟氨基酸或氟代糖)制备氟代亚氨基糖[(a)T.Kajimoto，K.K.C.Liu，R.L.Pederson，Z.Y.Zhong，Y.Ichikawa，J.Porco，J.A.and C.H.Wong，J.Am.Chem.Soc.，1991，113，6187-6196；(b)C.K.Lee，S.K.Y.and J.Zhu，Tetrahedron，1992，48，8541-8544；(c)C.K.Lee，H.X.Jiang，L.L.Koh and Y.Xu，Carbohyd.Res.，1993，239，309-315；(d)R.W.Wang and F.L.Qing，Org.Lett.，2005，7，2189-2192；(e)R.W.Wang，X.L.Qiu，M.Bols，F.Ortega-Caballero and F.L.Qing，J.Med.Chem.，2006，49，2989-2997；(f)X.Y.Yue，X.L.Qiuand F.L.Qing，J.Fluorine Chem.，2008，129，866-874.]。但这些制备方法多存在选择性差、步骤冗长且效率低下等缺点。因此亟需发展一种选择性的、高效的制备氟代亚氨基糖的方法。

多羟基环状硝酮是制备亚氨基糖的有效中间体之一[(a)J.Revuelta，S.Cicchi，A.Goti，A.Brandi，Synthesis，2007，4，485-504；(b)A.Brandi，F.Cardona，S.Cicchi，F.M.Cordero，A.Goti，Chem.-Eur.J.，2009，15，7808-782；(c)C.-Y.Yu and M.-H.Huang，Org.Lett.，2006，8，3021-3024；W.B.Wang，M.H.Huang，Y.X.Li，P.X.Rui，X.G.Hu，W.Zhang，J.K.Su，Z.L.Zhang，J.S.Zhu，W.H.Xu，X.Q.Xie，Y.M.Jia and C.Y.Yu，Synlett，2010，3，488-492.]。

发明内容

本发明的目的是提供一种氟代亚氨基糖化合物及其制备方法与应用。

本发明提供的氟代亚氨基糖化合物如式(I)和式(II)所示：

其中，n＝1或2；X为羟基或氟；R₁为羟基或苄基；R₂为氢、羟甲基或苄氧甲基；R₃为羟基或苄氧基；R₄为氢、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基；R₅为氢、C_1-18直链或支链饱和烷烃；R₆为氢、氟、甲基、一至三氟取代甲基、羟甲基、乙基、羟乙基、(1S)-羟基羟乙基、(1R)-羟基羟乙基、一至全氟取代羟乙基、丙基、丁基或被羟基或甲氧基一至全取代的苯基；R₇和R₈为氢、氟、羟基、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基。

上述式(I)和式(II)所示化合物的2、3、4、5位碳的立体构型均为2R，3R，4R，5R；2R，3R，4R，5S；2R，3S，4S，5R；2R，3S，4S，5S；2R，3S，4R，5R；2R，3S，4R，5S；2S，3R，4S，5R；2S，3R，4S，5S；2S，3R，4R，5R；2S，3R，4R，5S；2S，3S，4S，5R；2S，3S，4S，5S；2S，3S，4R，5R和2S，3S，4R，5S中任一种。

上述氟代亚氨基糖化合物具体可为式(I-a)所示化合物：

(I-a)

其中，R₁为羟基或苄基；R₂为氢、羟甲基或苄氧甲基；R₃为羟基或苄氧基；R₄为氢、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基；R₅为氢、C_1-18直链或支链饱和烷烃；R₆为氢、氟、甲基、一至三氟取代甲基、羟甲基、乙基、羟乙基、(1S)-羟基羟乙基、(1R)-羟基羟乙基、一至全氟取代羟乙基、丙基、丁基或被羟基或甲氧基一至全取代的苯基。

上述氟代亚氨基糖化合物具体可为式(I-b)所示化合物：

其中，R₁为羟基或苄基；R₃为羟基或苄氧基；R₅为氢、C_1-18直链或支链饱和烷烃；R₆为氢、氟、甲基、一至三氟取代甲基、羟甲基、乙基、羟乙基、(1S)-羟基羟乙基、(1R)-羟基羟乙基、一至全氟取代羟乙基、丙基、丁基或被羟基或甲氧基一至全取代的苯基。

上述氟代亚氨基糖化合物具体可为式(II-a)所示化合物：

其中，n＝1或2；R₁为羟基或苄基；R₂为氢、羟甲基或苄氧甲基；R₃为羟基或苄氧基；R₇和R₈为氢、氟、羟基、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基。

上述氟代亚氨基糖化合物具体可为式(II-b)所示化合物：

其中，n＝1或2；R₁为羟基或苄基；R₃为羟基或苄氧基；R₇和R₈为氢、氟、羟基、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基。

上述亚氨基糖化合物具体为下述式(I-1)至式(I-34)和式(II-1)至式(II-9)中所示化合物中任一种：

本发明还提供了上述氟代亚氨基糖化合物或其盐或其水合物在制备抑制糖苷酶活性药物和/或抑制肿瘤细胞生长药物中的应用。

上述的应用中，所述糖苷酶可为α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、α-甘露糖苷酶、β-甘露糖苷酶、α-L-岩藻糖苷酶、海藻糖酶、淀粉葡萄糖苷酶或α-L-鼠李糖苷酶；所述肿瘤细胞可为黑色素瘤细胞。

本发明还提供了上述式(I-a)或式(I-b)所示氟代亚氨基糖化合物的制备方法，包括如下步骤：

式(I-a)、(I-b)、(III-1)、(III-2)和(III-3)中，R₁为羟基或苄基；R₂为氢、羟甲基或苄氧甲基；R₃为羟基或苄氧基；

(1)将式(III-1)、式(III-2)或式(III-3)所示化合物与亲核试剂进行加成反应，生成加成中间体；所述亲核试剂为各种C_1-18直链或支链饱和烷烃或不饱和烷烃金属有机试剂，包括但不限于甲基碘化镁、乙基溴化镁、乙烯基溴化镁、乙烯基氯化镁、丙基溴化镁、烯丙基溴化镁、被羟基或甲氧基一至全取代的苯基溴化镁；溴代脂肪酸酯的锌试剂，包括但不限于溴乙酸乙酯的锌试剂、一或二氟代的溴乙酸乙酯的锌试剂；各种C_1-18直链或支链饱和烷烃或不饱和烷烃的有机硅试剂；所述加成反应是在四氢呋喃或乙醚中进行的；所述加成反应的温度为-40℃-40℃，具体为0℃-5℃；

(2-1)当步骤(1)中所述亲核试剂为C_1-18直链或支链饱和烷烃金属有机试剂或C_1-18直链或支链饱和烷烃的有机硅试剂时，所述加成中间体在脱保护试剂存在下进行脱保护反应，生成式(I-a)或式(I-b)所示氟代亚氨基糖化合物；所述脱保护试剂为CbzCl或Boc₂O；所述脱保护反应是在下述至少一种溶剂中进行：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙醚、乙酸乙酯、水、二氧六环、甲醇、乙醇、乙腈、甲酰胺和N，N-二甲基甲酰胺；所述脱保护反应的温度是0℃-80℃，具体为0℃-5℃；

(2-2)当步骤(1)中所述亲核试剂为C_1-18直链或支链不饱和烷烃金属有机试剂或C_1-18直链或支链不饱和烷烃的有机硅试剂时，所述加成中间体加入还原体系H-1中，发生还原反应，得到胺类中间体；将所述胺类中间体在保护条件下进行氨基的保护，得到氨基被保护的中间体；将所述氨基被保护的中间体在氧化条件下进行氧化反应1天-2周，得到双羟基化产物；最后将所述双羟基化产物在脱保护条件下进行脱保护反应，生成式(I-a)或式(I-b)所示氟代亚氨基糖化合物；其中，所述还原体系H-1为活化的锌粉或市售铁粉/乙酸铜/乙酸体系，锌粉或铁粉与乙酸铜的物质的量的比为100∶1，所述锌粉或铁粉与所述加成中间体的物质的量的比为(5.00-20.00)∶(1.00)，优选是10.00∶1.00，所述还原反应的温度为15-80℃，具体为30℃；所述保护条件是指所述胺类中间体在碱存在的条件下与CbzCl或Boc₂O进行保护基反应，所述碱可以为有机碱或无机碱，所述有机碱可为二乙胺、三乙胺、二异丙基胺、二异丙基乙基胺、吡啶、2，4，6-三甲基吡啶；所述无机碱可为碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、氢氧化钠或氢氧化钾；所述保护基反应是在下述至少一种溶剂中进行：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙醚、乙酸乙酯、水、二氧六环、甲醇、乙醇、乙腈、甲酰胺和N，N-二甲基甲酰胺；所述保护基反应的温度是0℃-80℃，优选是20-35℃，具体为25℃；所述氧化条件是指所述氨基被保护的中间体在四氧化锇和氧化剂条件下反应，其中所述氧化剂可以是各种过氧化物和氮氧化物，具体可为具体可为双氧水或N-甲基吗啉氧化物，所述氧化反应的溶剂可以是下述至少一种溶剂：四氢呋喃、乙酸乙酯、水、二氧六环、乙腈和N，N-二甲基甲酰胺；所述脱保护条件是钯炭/氢气/盐酸或先在钯炭/氢气/醛/醋酸条件下反应，再加入盐酸；所述脱保护反应的溶剂为以下至少一种溶剂：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、水、甲醇、乙醇和盐酸；所述脱保护反应的温度是-20℃-100℃，优选是0℃-35℃，具体为25℃；所述钯碳与所述双羟基化产物的质量比为(5-20)∶100，优选是20∶100；所述钯碳中的钯的质量占钯碳总质量的5％-10％，具体可为10％；

(2-3)当步骤(1)中所述亲核试剂为溴代脂肪酸酯的锌试剂时，所述加成中间体加入还原体系H-2中发生还原反应，得到羟胺类中间体；将所述羟胺类中间体在脱保护条件下进行脱保护反应，生成式(I-a)或式(I-b)所示氟代亚氨基糖化合物；其中，所述还原体系H-2为市售四氢铝锂，所述四氢铝锂与所述加成中间体的物质的量的比为(5.00-20.00)∶(1.00)，优选是10.00∶1.00，反应温度为-10-30℃，具体为0℃或25℃；所述脱保护条件是钯炭/氢气/盐酸或先在钯炭/氢气/醛/醋酸条件下反应，再加入盐酸；所用溶剂为以下至少一种溶剂：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、水、甲醇、乙醇和盐酸；所述脱保护反应的温度是-20℃-100℃，优选是0℃至35℃，具体为0℃-5℃；所述钯碳与所述双羟基化产物的质量比为(5-20)∶100，优选是20∶100；所述钯碳中的钯的质量占钯碳总质量的5％-10％，具体可为10％。

本发明还提供了上述式(II-a)或式(II-b)所示氟代亚氨基糖化合物的制备方法，包括如下步骤：

式(III-1)和(III-3)中，R₁为羟基或苄基；R₂为氢、羟甲基或苄氧甲基；R₃为羟基或苄氧基；

(1)若式(II-a)和式(II-b)中的R₇和R₈均为氢，将式(III-1)或式(III-3)所示化合物与亲核试剂进行加成反应，生成加成中间体；然后将所述加成中间体在加氢环化脱保护条件下反应，生成式(II-a)或式(II-b)所示氟代亚氨基糖化合物；所述亲核试剂为各种C_1-18缩醛或缩酮的格氏试剂，具体为具体为3-溴-1，1-二甲氧基丙烷或溴乙醛缩乙二醇，所述加成反应的溶剂为四氢呋喃或乙醚，所述加成反应的温度为-40℃-40℃，具体为0℃或5℃；所述加氢环化脱保护条件为钯炭/氢气，所述脱保护反应是在下述至少一种溶剂中进行的：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、水、甲醇、乙醇、盐酸和冰醋酸；所述脱保护反应的温度是-20℃-100℃，优选是0℃-35℃，具体为25℃；所述钯碳与所述加成中间体的质量比为(5-20)∶100，优选是20∶100；所述钯碳中的钯的质量占钯碳总质量的5％-10％，具体可为10％；

(1-1)若式(II-a)和式(II-b)中的R₇和R₈为氢、氟、羟基、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基，将式(III-1)或式(III-3)所示化合物与乙烯基格氏试剂进行加成反应，生成加成中间体J-1；将所述加成中间体J-1加入还原体系中，发生还原反应，得到胺类中间体；将所述胺类中间体在保护条件下进行氨基的保护，得到氨基被保护的中间体；将所述氨基被保护的中间体在臭氧化条件下反应3-10分钟，得到醛中间体Q-1；将所述醛中间体与亲核试剂反应，得到加成中间体J-2；将所述加成中间体J-2在臭氧化条件下反应3-10分钟，得到醛中间体Q-2；将所述醛中间体Q-2在加氢环化条件下进行关环反应，生成关环中间体；然后，将所述关环中间体与含氟亲核试剂进行取代反应，得到氟代中间体F-1或将所述关环中间体在氧化条件下进行氧化反应得到成酮中间体，所述酮中间体与含氟亲核试剂进行反应得到氟代中间体F-2；其中，所述乙烯基格氏试剂可为乙烯基氯化镁或乙烯基溴化镁；所述加成反应是在四氢呋喃或乙醚中进行的；所述加成反应的温度为-40℃-40℃，具体为0℃或5℃；所述还原体系为活化的锌粉或市售铁粉/乙酸铜/乙酸体系，(锌粉或铁粉与乙酸铜的比例为100∶1)，所述锌粉或铁粉与中间体的物质的量的比为(5.00-20.00)∶(1.00)，优选是10.00∶1.00，所述还原反应的温度为15-80℃，具体为30℃；所述保护条件是指将所述胺类中间体在碱存在的条件下与CbzCl或Boc₂O进行保护基反应，所述碱可以是有机碱或无机碱，所述有机碱可为二乙胺、三乙胺、二异丙基胺、二异丙基乙基胺、吡啶或2，4，6-三甲基吡啶；所述无机碱可为碳酸钠，碳酸氢钠，碳酸钾，碳酸氢钾，氢氧化钠或氢氧化钾；所述保护基反应是在下述至少一种溶剂中进行：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙醚、乙酸乙酯、水、二氧六环、甲醇、乙醇、乙腈、甲酰胺和N，N-二甲基甲酰胺；所述保护基反应的温度是0℃-80℃，优选是20-35℃，具体为25℃；所述臭氧化条件是指将所述氨基被保护的中间体在臭氧条件下反应，溶剂可以是下述至少一种溶剂：二氯甲烷、甲醇、乙醇和水，温度可为-60℃--50℃，具体为-60℃或-50℃；所述含氟亲核试剂是指二乙胺基三氟化硫(DAST)、2，2-二氟-1，3-二甲基咪唑烷(DFI)或三氟甲基三甲基硅烷，所述取代反应的溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷或氯仿；所述氧化条件是指Swern氧化条件、PCC、PDC或DMP，所述氧化反应的溶剂为二氯甲烷或氯仿，所述氧化反应的温度为-40℃-40℃，具体为-40℃或25℃；

(1-2)将所述氟代中间体F-1和F-2在脱保护条件下进行脱保护反应得到(II-a)或式(II-b)所示氟代亚氨基糖化合物；所述脱保护条件为钯炭/氢气，所述脱保护反应是在下述至少一种溶剂中进行的：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、水、甲醇、乙醇、盐酸和冰醋酸；所述脱保护反应的温度是-20℃-100℃，优选是0℃-35℃，具体为25℃；所述钯碳与氟代中间体F-1或F-2的质量比为(5-20)∶100，优选是20∶100；所述钯碳中的钯的质量占钯碳总质量的5％-10％，具体可为10％。

具体地讲，上述式(III-1)、式(III-2)和式(III-3)所示的化合物的结构包括但不限于以下任一结构：

其中氟代硝酮(III-1)和(III-2)是从双丙酮3-脱氧-3-氟代葡萄糖制备的。所用双丙酮3-脱氧-3-氟代葡萄糖是按照文献提供的方法合成的[(a)O.Loiseleur，D.Ritson，M.Nina，P.Crowley，T.Wagner and S.Hanessian，J.Org.Chem.，2007，72，6353-6363；(b)Y.Yoshimura，M.Endo，S.Miura and S.Sakata，J.Org.Chem.，1999，64，7912-7920.]，并参照文献方法[参见(a)L.S.Jeong，B.B.Lim and V.E.Marquez，Carbohyd.Res.，1994，262，103-114；(b)T.Yoshiaki，U.Chiga，T.Tsutomu and K.Yoshihiko，Carbohyd.Res.，1993，249，57-76；(c)S.Desvergnes，S.Py and Y.Vallée，J.Org.Chem.，2005，70，1459-1462；(d)E.L.Tsou，Y.T.Yeh，P.H.Liang and W.C.Cheng，Tetrahedron，2009，65，93-100；(e)W.B.Wang，M.H.Huang，Y.X.Li，P.X.Rui，X.G.Hu，W.Zhang，J.K.Su，Z.L.Zhang，J.S.Zhu，W.H.Xu，X.Q.Xie，Y.M.Jia and C.Y.Yu，Synlett，2010，3，488-492；(f)A.S.Paraskar and A.Sudalai，Tetrahedron，2006，62，4907-4916.]并略作修改，将其转化为氟代硝酮III-1和III-2。

式III-3结构的多羟基环状硝酮是参照文献制备的[(a)J.Revuelta，S.Cicchi，A.Goti，A.Brandi，Synthesis，2007，4，485-504；(b)A.Brandi，F.Cardona，S.Cicchi，F.M.Cordero，A.Goti，Chem.-Eur.J.，2009，15，7808-782；(c)E.L.Tsou，Y.T.Yeh，P.H.Liang and W.C.Cheng，Tetrahedron，2009，65，93-100；(d)C.-Y.Yu and M.-H.Huang，Org.Lett.，2006，8，3021-3024；W.B.Wang，M.H.Huang，Y.X.Li，P.X.Rui，X.G.Hu，W.Zhang，J.K.Su，Z.L.Zhang，J.S.Zhu，W.H.Xu，X.Q.Xie，Y.M.Jia and C.Y.Yu，Synlett，2010，3，488-492.]。

本发明设计并合成的氟代亚氨基糖类化合物为具有重要生物活性的、未见文献报道的新化合物。本发明以普通糖类或氟代糖为原料，经过几步反应制备具有高度反应活性的多羟基环状硝酮或氟代硝酮，并以此类硝酮为关键中间体合成氟代亚氨基糖，并能够实现该类化合物的大量制备。制备方法简单、条件要求不高，且中间体的纯化方便，易于实现大量合成，可用于合成大量的氟代亚氨基糖类化合物，对于筛选具有生物活性和药用的价值的化合物具有重要意义。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

本发明所述的多羟基环状氟代硝酮式(III-1)是参照文献方法制备的[(a)L.S.Jeong，B.B.Lim and V.E.Marquez，Carbohyd.Res.，1994，262，103-114；(b)T.Yoshiaki，U.Chiga，T.Tsutomu and K.Yoshihiko，Carbohyd.Res.，1993，249，57-76；(c)S.Desvergnes，S.Py and Y.Vallée，J.Org.Chem.，2005，70，1459-1462；(d)E.L.Tsou，Y.T.Yeh，P.H.Liang and W.C.Cheng，Tetrahedron，2009，65，93-100；(e)W.B.Wang，M.H.Huang，Y.X.Li，P.X.Rui，X.G.Hu，W.Zhang，J.K.Su，Z.L.Zhang，J.S.Zhu，W.H.Xu，X.Q.Xie，Y.M.Jia and C.Y.Yu，Synlett，2010，3，488-492；(f)A.S.Paraskar and A.Sudalai，Tetrahedron，2006，62，4907-4916.]。以多羟基环状氟代硝酮式(III-1a)为例，说明此类硝酮的制备方法。

上述制备方法中的起始原料双丙酮3-脱氧-3-氟代葡萄糖是按照文献提供的方法合成的[参见(a)O.Loiseleur，D.Ritson，M.Nina，P.Crowley，T.Wagner and S.Hanessian，J.Org.Chem.，2007，72，6353-6363；(b)Y.Yoshimura，M.Endo，S.Miura and S.Sakata，J.Org.Chem.，1999，64，7912-7920.]，具体制备方法为：在3L三口烧瓶中加入1.5L二氯甲烷(氢化钙干燥)和DMSO(136ml，1.9mol)，冷却至-78℃后滴加草酰氯(85ml，1.0mol)，滴毕搅拌1小时。将1，2：5，6-O-双丙酮-α-D-葡萄糖(市售)(200.0g，0.8mol)溶于500ml二氯甲烷并滴加至上述溶液中，得到白色乳浊液。搅拌2小时后滴加三乙胺(321ml，2.3mol)，继续搅拌2小时，停止制冷，自然升温至室温。所得悬浮液以1N HCl调节PH值至4左右，并依次以水和碳酸氢钠水溶液洗涤。二氯甲烷相经硫酸镁干燥后浓缩，即为1，2：5，6-O-双丙酮-3-脱氧-3-氧代-α-D-葡萄糖，直接用于下一步反应。

将粗产物(按0.8mol计)溶于1L无水乙醇中，分批加入NaBH₄(30.9g，0.8mol)，室温反应1小时，加入氯化铵水溶液淬灭反应，蒸除溶剂和水，加入乙酸乙酯反复洗涤粗产物直至固体中不含有产物。将乙酸乙酯洗涤液干燥，蒸干后得到1，2：5，6-O-双丙酮-α-D-阿洛糖，直接用于下一步反应。

将上一步粗产物(按0.8mol计)溶于1L干燥的二氯甲烷中，-15℃下滴加磺酰氯(98mL，1.2mol)，加毕反应1小时，然后一次性加入咪唑(299.0g，4.4mol)，自然升温至室温过夜。加水洗涤两次，蒸除溶剂，得到1，2：5，6-O-双丙酮-α-D-阿洛糖的咪唑磺酸酯，粗产物直接用于下一步反应。

将上一步粗产物(按0.8mol计)溶于1.5L DMF中，加入二水合氟化钾(376.0g，4.0mol)，升温至100℃反应48小时，加入5L水，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，浓缩后经柱层析分离，得黄色油状产品双丙酮3-脱氧-3-氟代葡萄糖102.7g，四步收率49％。

中间体IV-1的制备是参照文献进行的[(a)L.S.Jeong，B.B.Lim and V.E.Marquez，Carbohyd.Res.，1994，262，103-114；(b)T.Yoshiaki，U.Chiga，T.Tsutomu and K.Yoshihiko，Carbohyd.Res.，1993，249，57-76.]，具体制备方法为：将双丙酮3-脱氧-3-氟代葡萄糖(10.3g，39.3mmol)溶于50mL四氢呋喃中，加入5mL 1N盐酸，室温搅拌过夜。加入1N氢氧化钠溶液中和体系中的酸至PH值为8左右，蒸除溶剂和水，残余物用乙酸乙酯和乙醇洗涤，弃去不溶物，将有机相蒸干，得到脱除5，6-丙叉的单丙叉中间体，直接用于下一步反应。

将上一步所得单丙叉中间体(按39.3mmol计)溶于50mL甲醇和10mL水中，分批加入高碘酸钠(8.4g，39.4mmol)，1小时后滤除体系中的固体，并以乙酸乙酯洗涤几次，合并有机相，蒸干得中间体醛。

将上述中间体醛(按39.3mmol计)溶于100mL无水乙醇中，分批加入NaBH₄(1.5g，40.5mmol)，反应0.5小时后加入氯化铵水溶液淬灭，蒸除溶剂和水，加入乙酸乙酯反复洗涤粗产物直至固体中不含有产物。将乙酸乙酯洗涤液干燥，蒸干后经柱层析分离得到淡黄色油状中间体IV-1，6.6g，收率：87％。δ_H(300MHz；CDCl₃)5.91(1H，d，J＝3.7Hz，H1)，4.92(1H，dd，J_H，F＝50.2Hz，J_H，H＝1.7Hz，H3)，4.62(1H，dd，J＝11.1Hz，3.7Hz，H2)，4.25(1H，ddd，J＝30.1Hz，6.0Hz，4.1Hz，H4)，3.77(2H，d，J＝6.1Hz，H5)，3.40(1H，s，br，OH)，1.42，1.25(3H each，s，CMe₂)[与文献相符：L.S.Jeong，B.B.Lim and V.E.Marquez，Carbohyd.Res.，1994，262，103-114.]。

将NaH(6.2g，60％，0.16mol)悬浮在100mL THF中，常温下慢慢滴加中间体IV-1(19.8g，0.1mol)的THF(50mL)溶液，搅拌10分钟后滴加苄溴(12.4mL，0.10mol)，加毕反应15分钟。将反应液倾入饱和氯化铵水溶液中，加入乙酸乙酯萃取，干燥有机相，浓缩后将粗品直接溶于200mL乙醇中，加入10mL浓盐酸，40℃反应过夜。反应液用饱和碳酸氢钠水溶液中和，加入乙酸乙酯萃取，干燥有机相，经柱层析分离，得黄色油状产品V-1 17.6克，收率：63％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.34-7.27(5H，m，PhCH₂O)，5.18-4.74(2H，m，H1 andH3)，4.64-4.51(2H，m，PhCH₂O)，4.42-4.21(2H，m，H2 and H4)，3.77-3.47(4H，m，H5 andCH₂CH₃)，3.13-3.07(1H，m，OH)，1.26-1.15(3H，m，CH₂CH₃)；δC(75MHz；CDCl₃)137.9，137.8，128.6，128.4，128.1，127.9，127.8，127.7(Ph)，108.1，100.5(C1)，97.2(d，J_C，F＝183.0Hz，C3)，95.4(d，J_C，F＝186.8Hz，C3)，80.1(d，J＝19.5Hz，C2)，78.9(d，J＝26.3Hz，C2)，77.2(d，J＝19.5Hz，C4)，76.4(d，J＝28.5Hz，C4)，73.8，73.6，73.5(PhCH₂O)，68.6，68.5(C5)，64.6，63.7(CH₂CH₃)，15.1(CH₂CH₃).

对13.1g产品V-1重复上述上苄基步骤，得到淡黄色油状产品VI-1 14.8克，收率：85％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.33-7.25(10H，m，PhCH₂O)，5.13-4.88(2H，m，H1 and H3)，4.67-4.52(4H，m，PhCH₂O)，4.48-4.38(1H，m，H4)，4.16-4.05(1H，m，H2)，3.82-3.44(4H，m，H5and CH₂Ch₃)，1.25-115(3H，m，CH₂CH₃)；δ_C(75MHz；CDCl₃)138.1，137.4，137.2，128.6，128.5，128.3，128.1，127.8(Ph)，106.4，101.1，99.8(C1)，96.4(d，J_C，F＝185.3Hz，C3)，93.7(d，J_C，F＝186.8Hz，C3)，86.3(d，J＝26.3Hz，C2)，83.5(d，J＝24.0Hz，C2)，80.0(d，J＝20.3Hz，C4)，75.9(d，J＝20.3Hz，C4)，73.6，73.5，72.7，72.4(PhCH₂O)，68.4，68.0(C5)，63.9，63.8(CH₂CH₃)，15.2(CH₂CH₃).

将产品VI-1(14.5g，40.3mmol)溶于100mL 1，4-二氧六环中，然后加入50mL 1N HCl，90℃反应过夜。减压蒸除溶剂，用饱和碳酸氢钠水溶液中和剩余的酸，加入乙酸乙酯萃取，干燥有机相，经柱层析分离，得到淡黄色中间体VII-1 10.3g，收率：79％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.29-7.23(10H，m，PhCH₂O)，5.46(0.5H，d，J＝3.9Hz，H1β)，5.30(0.5H，s，H1α)，5.12-4.91(1H，m，H3)，4.58-4.33(5H，m，H4and PhCH₂O)，4.09-3.99(1H，m，H2)，3.75-3.62(2H，m，H5)；δ_C(75MHz；CDCl₃)138.0，137.7，137.2，136.7，128.8，128.6，128.5，128.4，128.1，128.0，127.9，127.8(Ph)，101.5(d，J＝10.8Hz，C1)，96.1(d，J＝12.0Hz，C1)，94.7(d，J_C，F＝185.0Hz，C3)，94.3(d，J_C，F＝186.3Hz，C3)，87.0(d，J＝24.2Hz，C2)，81.6(d，J＝26.8Hz，C2)，79.6(d，J＝19.9Hz，C4)，77.6(d，J＝32.0Hz，C4)，73.7，73.6，73.3，72.2(PhCH₂O)，68.1(d，J＝10.1Hz，C5)，67.3(d，J＝11.3Hz，C5).

将中间体VII-1(0.3g，0.9mmol)溶于10mL甲苯中，加入NH₂OTBS(市售)(0.3g，2.0mmol)和催化剂量的PPTs，立即转入100℃油浴中反应0.5小时。冷却后水洗两次，干燥有机相，经柱层析分离，得到淡黄色中间体VIII-10.4g，收率：98％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.63(0.77H，d，J＝7.8Hz，H1，E)，7.36-7.30(10H，m，PhCH₂O)，7.06(0.23H，d，J＝6.1Hz，H1，Z)，4.68-4.37(4H，m，PhCH₂O)，4.67(1H，dt，J_H，F＝46.8Hz，J_H，H＝3.9Hz，H3)，4.28(1H，dq，J＝22.8Hz，7.8Hz，H2)，4.13-4.03(1H，m，H4)，3.58-3.44(2H，m，H5)，3.15(0.22H，d，J＝3.3Hz，OH，Z)，2.88(0.78H，d，J＝3.6Hz，OH，E)，0.99(6.79H，s，t-Bu，E)，0.94(2.21H，s，t-Bu，Z)，0.24(4.72H，s，CH₃，E)，0.21(1.28H，s，CH₃，Z)；δ_C(75MHz；CDCl₃)153.2(d，J＝5.6Hz，C1，Z)，151.5(d，J＝6.6Hz，C1，E)，137.8，137.7，136.9，128.6，128.5，128.4，128.3，128.2，128.1，127.9，127.8(Ph)，92.7(d，J_C，F＝180.7Hz，C3，E)，91.8(d，J_C，F＝180.8Hz，C3，Z)，75.7(d，J＝19.7Hz，C2，E)，73.6，72.4(PhCH₂O)，71.9(d，J＝21.0Hz，C2，Z)，71.0(PhCH₂O)，69.9(d，J＝19.8Hz，C4)，69.8(d，J＝6.0Hz，C5)，69.5(d，J＝6.1Hz，C5)，26.1(d，J＝8.4Hz，t-Bu，E)，18.2(d，J＝9.8Hz，t-Bu，Z)，-5.2(d，J＝6.5Hz，CH₃).

将中间体VIII-1(0.41g，0.9mmol)溶于5mL二氯甲烷中，冰水浴下加入三乙胺(0.24mL，1.7mmol)和甲基磺酰氯(0.07mL，0.9mmol)，加毕室温反应1小时。加入1N HCl洗涤两次，然后水洗有机相至中性，干燥有机相，经柱层析分离，得到黄色中间体IX-10.46g，收率：96％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.66(0.79H，d，J＝7.5Hz，H1，E)，7.42-7.28(10H，m，PhCH₂O)，7.11(0.21H，d，J＝5.4Hz，H1，Z)，5.12-5.04(1H，m，H4)，4.88(0.79H，dd，J_H，F＝47.1Hz，J_H，H＝2.4Hz，H3)，4.86(0.21H，dd，J_H，F＝47.4Hz，J_H，H＝2.4Hz，H3)，4.63-4.13(5H，m，PhCH₂O and H2)，3.72-3.67(1H，m，H5)，3.40(1H，dd，J＝11.4Hz，3.6Hz，H5)，3.32(0.51H，s，OMs，Z)，3.05(2.49H，s，OMs，E)，1.05(7.58H，s，t-Bu，E)，0.99(2.42H，s，t-Bu，Z)，0.30(4.37H，s，CH₃，E)，0.26(1.63H，s，CH₃，Z)；δC(75MHz；CDCl₃)152.7(d，J＝5.3Hz，C1，Z)，151.0(d，J＝6.0Hz，C1，E)，137.1，136.4，136.2，128.9，128.6，128.5，128.4，128.3，128.1，128.0(Ph)，93.3(d，J_C，F＝182.3Hz，C3，E)，92.0(d，J_C，F＝179.3Hz，C3，Z)，80.5(d，J＝21.0Hz，C4，Z)，80.1(d，J＝20.3Hz，C4，E)，73.6，73.5(PhCH₂O)，73.3(d，J＝17.3Hz，C2，E)，71.9，70.7(PhCH₂O)，69.5(d，J＝18.0Hz，C2，Z)，68.4(d，J＝7.5Hz，C5)，38.9(OMs，Z)，38.4(OMs，E)，26.1，25.8(t-Bu)，-5.2，-5.3(CH₃).

将中间体IX-1(23.7g，44.0mmol)溶于100mL四氢呋喃中，冰水浴下加入四丁基氟化铵(12.3g，47.1mmol)，反应15分钟。将反应液倾入200mL水中，加入乙酸乙酯萃取，减压蒸除溶剂。将粗产品直接溶于100mL乙醇和25mL水中，加入盐酸羟胺(5.9g，85.5mmol)和碳酸氢钠(7.9g，94.1mmol)，升温至60℃反应48小时。减压蒸除有机溶剂，加入水和乙酸乙酯萃取，干燥有机相，经柱层析分离，得到淡黄色产品式(III-1a)9.9g，收率：68％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.25-7.16(10H，m，PhCH₂O)，6.89(1H，s，H2)，5.22(1H，d，J_H，F＝52.5Hz，H4)，4.66(1H，d，J＝21.6Hz，H3)，4.61-4.42(4H，m，PhCH₂O)，4.10-4.01(2H，m，H5and H6)，3.77-3.73(1H，m，H6)，2.87(1H，s，H₂O)；δ_C(75MHz；CDCl₃)137.4，136.7(Ph)，133.2(C2)，128.7，128.5，128.3，128.0，127.9，127.6，127.5，127.0(Ph)，93.1(d，J_C，F＝185.3Hz，C4)，81.7(d，J＝28.5Hz，C3)，77.3(d，J＝26.3Hz，C5)，73.5，72.0(PhCH₂O)，65.0(d，J＝5.3Hz，C6).

多羟基环状氟代硝酮式(III-1b)的制备方法与式(III-1a)相似，不同之处在于不对C5-C6键进行氧化断裂。III-1b经核磁表征为：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.21-7.14(15H，m，PhCH₂O)，6.76(1H，s，H2)，5.20(1H，d，J＝51.9Hz，H4)，4.69-4.36(7H，m，PhCH₂O and H3)，4.27(0.5H，s，H5)，4.20-4.15(1.5H，m，H5and H6)，3.74-3.63(2H，m，H7)；δ_C(75MHz；CDCl₃)138.0，137.6，136.6，128.7，128.4，128.3，128.0，127.9，127.7(Ph)，132.7(C2)，93.2(d，J＝184.1Hz，C4)，81.3(d，J＝29.2Hz，C3)，78.0(d，J＝26.3Hz，C5)，74.5(d，J＝5.0Hz，C6)，73.4，72.7，71.9(PhCH₂O)，69.5(C7)。

本发明所述的式(III-2)结构的多羟基环状氟代硝酮是参照文献制备的[A.S.Paraskarand A.Sudalai，Tetrahedron，2006，62，4907-4916.]。以多羟基环状氟代硝酮III-2a为例，说明此类硝酮的制备方法。

将半缩醛VII-1(2.0g，6.0mmol)溶于20mL二氯甲烷中，加入盐酸羟胺(0.5g，7.2mmol)和吡啶(2.4mL，29.8mmol)，室温反应3小时，TLC监测到原料点已消失。向上述体系中补加吡啶(5.0mL，62.0mmol)，冷至-10℃后滴加甲基磺酰氯(2.8ml，36.2mmol)，滴毕自然升温至室温反应过夜。反应液用1N盐酸洗涤两次，再水洗至中性，MgSO₄干燥后蒸干，经柱层析分离，得到黄色油状液体X-12.2g，收率：90％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.37-7.20(10H，m，PhCH₂O)，5.04-4.94(1.5H，m，H4and H3)，4.83-4.79(1.5H，m，H3 andH2)，4.45-4.27(4H，m，PhCH₂O)，3.72-3.48(2H，m，H5)，3.02(3H，s，OMs)；δ_C(75MHz；CDCl₃)136.8，134.5，129.2，129.0，128.7，128.3，128.1(Ph)，114.5(d，J＝4.5Hz，CN)，89.1(d，J＝188.3Hz，C3)，77.6(d，J＝19.5Hz，C4)，73.7，72.9(PhCH₂O)，67.9(d，J＝6.8Hz，C5)，66.0(d，J＝21.0Hz，C2)，38.5(d，J＝2.3Hz，OMs).

将上一步所得甲磺酸酯X-1(2.0g，4.9mmol)溶于60mL甲醇中，加入六水合氯化钴(2.3g，9.7mmol)搅拌10分钟。然后分批加入硼氢化钠(1.7g，45.9mmol)，加毕反应过夜。蒸除溶剂，加水后二氯甲烷萃取三次，干燥有机相，经柱层析分离，得到淡黄色产品XI-10.96g，收率：62％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.36-7.25(10H，m，PhCH₂O)，4.94(1H，dt，J＝52.5Hz，1.7Hz，H4)，4.61-4.49(4H，m，PhCH₂O)，4.17-4.09(1H，m，H3)，3.65-3.58(2H，m，H6)，3.46-3.34(1H，m，H5)，3.21-3.04(2H，m，H2)；δ_C(75MHz；CDCl₃)137.9，137.6，128.5，128.4，127.8，127.7(Ph)，98.1(d，J＝180.8Hz，C4)，83.6(d，J＝25.5Hz，C3)，73.3，71.3(PhCH₂O)，69.1(d，J＝6.0Hz，C6)，63.7(d，J＝24.0Hz，C5)，50.8(d，J＝3.8Hz，C2).

将上一步所得中间体XI-1(1.6g，5.1mmol)溶于20mL乙腈和5ml四氢呋喃中，加入EDTA水溶液(20ml，0.01M)和碳酸氢钠固体(2.1g，25.4mmol)。冷至0℃后分批加入(6.3g，10.2mmol)，反应15分钟，加入200mL水，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，经柱层析分离，以定量收率得到III-1a和III-2a，均为黄色糖浆，共1.8g，III-1a/III-2a＝1.74∶1。III-2a经核磁表征：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.31-7.22(10H，m，PhCH₂O)，5.63(1H，d，J＝52.5Hz，H3)，4.60-4.44(5H，m，PhCH₂O and H1)，4.30-4.18(3H，m，H1，H4and H5)，3.86-3.81(1H，m，H5)；δ_C(75MHz；CDCl₃)140.8(d，J＝17.3Hz，C2)，137.3，136.4，128.7，128.5，128.4，128.1，128.0，127.9，127.8(Ph)，95.5(d，J＝181.5Hz，C3)，75.6(d，J＝27.0Hz，C4)，73.7，72.0(PhCH₂O)，67.3(C1)，62.0(C5).

本发明所述的式(III-3)结构的多羟基环状硝酮是参照文献制备的[(a)E.L.Tsou，Y.T.Yeh，P.H Liang and W.C.Cheng，Tetrahedron，2009，65，93-100；(b)W.B.Wang，M.H.Huang，Y.X.Li，P.X.Rui，X.G.Hu，W.Zhang，J.K.Su，Z.L.Zhang，J.S.Zhu，W.H.Xu，X.Q.Xie，Y.M.Jia and C.Y.Yu，Synlett，2010，3，488-492]。以多羟基环状氟代硝酮III-3a为例，说明此类硝酮的制备方法。

冰浴条件下，向500mL干燥甲醇中逐滴加入10mL乙酰氯，反应1小时后加入D-木糖(30g，0.2mol)，保持零度反应直到原料消失，以碳酸氢钠中和至中性，过滤去除无机盐，蒸干溶剂得第一中间体D-呋喃木糖甲苷直接投下步反应。

将上一步第一中间体(按照0.2mol计算)溶解到200mL干燥的N，N-二甲基甲酰胺中，滴加到悬浮有氢化钠(60％，29.0g，0.7mol)的四氢呋喃(200mL)和N，N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加毕反应0.5小时，然后加入四丁基碘化铵(2.0g，5.4mmol)，开始滴加溴苄(78.3mL，0.7mol)，滴毕反应0.5小时，慢慢加入饱和氯化铵水溶液淬灭反应，乙酸乙酯/水萃取，水洗有机相去除N，N-二甲基甲酰胺，蒸干溶剂得第二中间体2，3，5-O-三苄基-D-呋喃木糖甲苷，直接投下步反应。

将上一步所得第二中间体溶解到500mL含量为80％的乙酸水溶液中，加入3N盐酸溶液(100mL)，于80-90℃反应直到原料几乎完全消失，蒸干溶剂，以乙酸乙酯/饱和碳酸钠溶液萃取，蒸干有机相，得到第三中间体(半缩醛粗品)(2，3，5-O-三苄基-D-呋喃木糖)直接投到下一步反应中。

将吡啶(30mL，0.4mol)加入上述第三中间体(按照0.2mol计算)的二氯甲烷(100mL)溶液中，然后加入O-甲基羟胺盐酸盐(20.9g，0.25mol)，室温搅拌12小时后，加入1N盐酸溶液洗涤体系中的吡啶，有机相水洗至中性后干燥，经浓缩得第四中间体(2S，3S，4R)-2，3，5-三苄氧基-4-羟基-1-戊醛甲基肟醚，直接投到下一步反应中。

将上述第四中间体溶于二氯甲烷(100mL)，加入吡啶(30mL，0.4mol)和甲烷磺酰氯(15.6mL，0.2mol)，室温搅拌8小时后，加入1N盐酸洗涤体系中的吡啶，有机相水洗至中性后干燥，经浓缩得第五中间体(2S，3S，4R)-2，3，5-三苄氧基-4-甲基磺酰氧-1-戊醛甲基肟醚，直接用于下一步反应。

往上述第五中间体的四氢呋喃(300mL)溶液中加入对甲基苯磺酸(38.0g，0.2mol)和37％甲醛水溶液(50mL)，室温搅拌直到原料完全消失，然后向体系中加入乙酸乙酯和水，萃取，合并有机相，经干燥浓缩得第六中间体(2R，3R，4R)-4-甲磺酰氧基-2，3，5-三苄氧基-1-戊醛。

先将碳酸氢钠(37.8g，0.45mol)加入盐酸羟胺(311g，0.45mol)的水(50mL)溶液中，加料过程中能观察到大量气泡产生。往其中加入上述第六中间体的乙醇(200mL)溶液，室温搅拌过夜，然后与60℃反应48小时。蒸除溶剂，向残余物中加入乙酸乙酯和水，经过萃取分层，合并有机相，干燥，浓缩，得黄色油状粗品。经柱层析分离得到22.0g式(III-3a)，为白色固体。以木糖为原料计算，七步反应总收率为26％。Mp：90-91℃。式(III-3a)经核磁表征：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.38-7.26(m，15H)，6.91(d，J＝1.9Hz，1H)，4.69-4.67(m，1H)，4.64-4.46(m，6H)，4.39(dd，J＝3.2，2.2Hz，1H)，4.10-4.04(m，2H)，3.78(d，J＝7.3Hz，1H)；δ_C(75MHz；CDCl₃)137.6，137.2，137.1，133.0(N＝CH)，128.6，128.4，128.2，128.1，127.9，127.8，127.7，82.7，80.3，73.5，71.9，71.7，66.0.

实施例1、氟代亚氨基糖式(I-1)、式(I-2)和式(I-3)的制备

以氟代亚氨基糖式(I-1)、式(I-2)和式(I-3)的制备为例，说明从氟代硝酮式(III-1a)合成此类氟代亚氨基糖的步骤。

将氟代硝酮式(III-1a)(4.0g，12.2mmol)溶于30mL四氢呋喃中，氮气保护，冷至0℃后滴加20mL乙烯基氯化镁的四氢呋喃溶液(16M，32.0mmol)，反应5分钟后加入饱和氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后直接用于下一步。

在100mL烧瓶中加入醋酸铜(0.3g，1.5mmol)、还原铁粉(7.9g，0.14mol)和25mL冰醋酸，搅拌1小时至铜离子的蓝色消失。将上一步所得羟胺中间体(按12.2mmol计)的醋酸溶液(25mL)加入上述体系中，常温反应过夜。减压蒸除大部分醋酸，以碳酸氢钠水溶液中和剩余的醋酸，然后加入水和乙酸乙酯洗涤瓶中粘稠物，至滤饼中不含产品为止。滤液以乙酸乙酯萃取，减压蒸干，所得胺粗产物直接用于下一步反应。

将上一步所得胺中间体粗产物(按12.2mmol计)溶于100mL四氢呋喃和10mL水中，加入碳酸氢钠(3.5g，41.7mmol)和CbzCl(2.4mL，16.9mmol)，室温反应1小时。然后加入50mL水，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后经柱层析分离，得到淡黄色糖浆XII-14.5g，三步总收率：78％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.21-7.15(15H，m，PhCH₂O and PhCH₂OC＝O)，5.64(1H，t，J＝7.8Hz，H7)，5.18-4.92(5H，m，H4，H8and PhCH₂OC＝O)，4.55-4.25(6H，m，PhCH₂O，H5 and H6)，3.96-3.63(2H，m，H3and H6)，3.44(1H，dd，J＝18.3Hz，9.0Hz，H2)；δ_C(75MHz；CDCl₃)153.7，152.9(C＝O)，137.1，136.8，135.9，135.3(Ph)，134.5，134.0(C7)，127.5，127.4，127.3，127.2，127.1，127.0，126.7，126.6(Ph)，116.2，115.7(C8)，94.4(d，J_C，F＝180.0Hz，C4)，93.3(d，J_C，F＝180.8Hz，C4)，84.7(d，J＝26.3Hz，C3)，84.0(d，J＝26.3Hz，C3)，72.1，70.8(PhCH₂O)，66.5(d，J＝10.5Hz，C6)，66.0(PhCH₂OC＝O)，65.7(d，J＝9.8Hz，C6)，65.4(d，J＝6.8Hz，C2)，62.5(d，J＝22.5Hz，C5)，62.0(d，J＝21.8Hz，C5).

将上一步所得中间体XII-1(4.4g，9.4mmol)溶于100mL丙酮中，加入NMO(16.2mL，93.9mmol)和0.5wt％的OsO₄(11.0mL，0.1mmol)水溶液。室温反应4天，加入20mL饱和亚硫酸氢钠水溶液搅拌1小时，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，经柱层析分离，以89％收率得到XIII-1-1和XIII-1-2，均为淡黄色糖浆，共4.2g，XIII-1-1/XIII-1-2＝1.54∶1。XIII-1-1：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.21-7.09(15H，m，PhCH₂O and PhCH₂OC＝O)，5.14-4.94(3H，m，H3 and PhCH₂OC＝O)，4.51-4.03(7H，m，PhCH₂O，H4，H5and H6)，3.89(1H，s，H2)，3.66(1H，t，J＝4.4Hz，H7)，3.56(1H，d，J＝11.1Hz，H1)，3.43(2H，t，J＝9.6Hz，H1and H7)，2.96(1H，s，OH)；δ_C(75MHz；CDCl₃)157.0(C＝O)，137.9，137.2，135.8，128.7，128.6，128.5，128.3，128.0，127.9，127.8，127.7(Ph)，95.1(d，J_C，F＝179.3Hz，C3)，81.5(d，J＝28.5Hz，C4)，73.5(C6)，73.2，71.7(PhCH₂O)，68.1(PhCH₂OC＝O)，67.3(C5)，67.1(C1)，64.2(C7)，63.7(d，J＝21.8Hz，C2).XIII-1-2：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.19-7.04(15H，m，PhCH₂O and PhCH₂OC＝O)，5.09(1H，d，J_H，F＝49.2Hz，H3)，4.97(2H，s，PhCH₂OC＝O)，4.49-4.19(5H，m，PhCH₂O and H4)，4.08(1H，ddd，J＝23.4Hz，9.9Hz，3.6Hz，H2)，3.93(1H，d，J＝5.7Hz，H6)，3.84(1H，s，OH)，3.65(1H，dt，J＝8.4Hz，3.9Hz，H1)，3.51-3.35(4H，m，H1，H5and H7)；δ_C(75MHz；CDCl₃)156.3(C＝O)，137.9，137.4，135.8，128.8，128.7，128.6，128.5，128.3，128.1，128.0，127.9，127.8，127.7，127.5(Ph)，95.7(d，J_C，F＝180.0Hz，C3)，82.8(d，J＝26.3Hz，C4)，73.2，71.7(PhCH₂O)，71.0(d，J＝5.3Hz，C5)，68.0(PhCH₂OC＝O)，67.2(d，J＝9.8Hz，C1)，65.3(C6)，64.0(d，J＝22.5Hz，C2)，62.6(C7).

将中间体XIII-1-1(0.12g，0.24mmol)溶于20mL甲醇中，加入30mg钯碳(10％)和5mL6N盐酸，于氢气气氛下反应60小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品I-2，为淡黄色糖浆，41.0mg，收率：89％.δ_H(300MHz；D₂O)4.69(1H，dt，J_H，F＝49.8Hz，J_H，H＝4.8Hz，H3)，4.12(1H，ddd，J＝21.9Hz，7.5Hz，5.1Hz，H4)，3.69-3.63(1H，m，H6)，3.60-3.41(4H，m，H1and H7)，3.24(1H，ddd，J＝19.2Hz，11.1Hz，5.4Hz，H2)，2.89(1H，dd，J＝7.2Hz，5.7Hz，H5)；δ_C(75MHz；D₂O)99.6(d，J_C，F＝180.8Hz，C3)，76.5(d，J＝24.0Hz，C4)，71.0(C6)，63.3(C7)，62.2(d，J＝6.8Hz，C5)，61.1(d，J＝4.5Hz，C1)，60.7(d，J＝22.5Hz，C2).

以类似方式对中间体XIII-1-2(0.12g，0.24mmol)进行操作，得到产品式(I-3)，为淡黄色糖浆，42.2mg，收率：85％.δ_H(300MHz；D₂O)4.72(1H，dt，J_H，F＝53.1Hz，J_H，H＝4.1Hz，H3)，4.25(1H，ddd，J＝21.6Hz，6.3Hz，4.2Hz，H4)，3.65-3.44(5H，m，H1，H6 and H7)，3.26(1H，ddd，J＝19.5Hz，10.2Hz，5.7Hz，H2)，2.93(1H，t，J＝6.2Hz，H5)；δ_C(75MHz；D₂O)100.0(d，J_C，F＝180.0Hz，C3)，76.5(d，J＝24.8Hz，C4)，72.1(C6)，63.3(C7)，62.7(d，J＝6.0Hz，C5)，61.5(d，J＝23.3Hz，C2)，60.6(d，J＝6.0Hz，C1).

将中间体XIII-1-1和XIII-1-2(1.4g，2.8mmol)混合物溶于10mL甲醇和2mL水中，分批加入高碘酸钠(0.6g，2.8mmol)，1小时后滤除体系中的固体，并以乙酸乙酯洗涤几次，合并有机相，蒸干得中间体醛XIV-1，淡黄色糖浆，1.3g，收率：99％。δ_H(300MHz；CDCl₃)9.35(1H，d，J＝27.9Hz，HC＝O)，7.26-7.15(15H，m，PhCH₂O and PhCH₂OC＝O)，5.20-4.98(3H，m，H3 and PhCH₂OC＝O)，4.59-4.23(6H，m，PhCH₂O，H1 and H4)，4.07(1H，d，J＝11.1Hz，H5)，3.98-3.84(1H，m，H1)，3.70-3.45(1H，m，H2)；δ_C(75MHz；CDCl₃)198.9(d，J＝8.3Hz，HC＝O)，155.0，154.1(PhCH₂OC＝O)，137.9，137.7，136.3，135.8，135.6，128.5，128.4，128.3，128.2，127.9，127.8，127.7(Ph)，94.6(d，J＝179.3Hz，C3)，93.4(d，J＝178.5Hz，C3)，83.3(d，J＝30.8Hz，C4)，82.3(d，J＝30.8Hz，C4)，73.3，72.2(PhCH₂O)，70.8(C5)，67.9，67.8(PhCH₂OC＝O)，67.1(d，J＝9.8Hz，C1)，66.4(d，J＝9.8Hz，C1)，63.8(d，J＝21.8Hz，C2)，63.3(d，J＝21.8Hz，C2).

将上述中间体醛XIV-1(0.4g，0.8mmol)溶于10mL无水乙醇中，分批加入NaBH₄(31.6mg，0.9mol)，反应0.5小时后加入氯化铵水溶液淬灭，蒸除溶剂和水，加入乙酸乙酯反复洗涤粗产物直至固体中不含有产物。将乙酸乙酯洗涤液干燥，蒸干后经柱层析分离得到淡黄色油状中间体XV-1，0.3g，收率：86％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.42-7.38(15H，m，PhCH₂O and PhCH₂OC＝O)，5.46-5.14(3H，m，H3 and PhCH₂OC＝O)，4.76-4.52(4H，m，PhCH₂O)，4.48-4.05(5H，m，H1，H4 and H6)，3.85-3.65(2H，m，H2and H5)；δ_C(75MHz；CDCl₃)155.5，154.5(PhCH₂OC＝O)，138.3，138.0，137.5，137.3，136.3，136.1，128.8，128.6，128.4，128.3，128.1，128.0，127.8，127.7(Ph)，95.3(d，J_C，F＝179.3Hz，C3)，94.8(d，J_C，F＝177.8Hz，C3)，82.9(d，J＝26.3Hz，C4)，82.7(d，J＝27.0Hz，C4)，73.3，71.9(PhCH₂O)，67.7(PhCH₂OC＝O)，67.5(d，J＝5.3Hz，C1)，66.4，65.1(C5)，63.6(d，J＝22.5Hz，C2)，62.3，60.8(C6).

将中间体XV-1(0.3g，0.6mmol)溶于25mL甲醇中，加入40mg钯碳(10％)和10mL 6N盐酸，于氢气气氛下反应4天，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品式(I-1)，为淡黄色糖浆，96.7mg，收率：94％.δ_H(300MHz；D₂O)4.72(1H，dt，J_H，F＝54.0Hz，J_H，H＝4.5Hz，H3)，4.07(1H，ddd，J＝21.0Hz，6.6Hz，4.5Hz，H4)，3.64-3.51(4H，m，H1and H6)，3.26(1H，ddd，J＝20.7Hz，11.1Hz，6.0Hz，H2)，3.01(1H，dd，J＝11.7Hz，5.7Hz，H5)；δ_C(75MHz；D₂O)100.0(d，J_C，F＝180.8Hz，C3)，76.5(d，J＝23.2Hz，C4)，62.4(d，J＝6.0Hz，C5)，61.4，61.2(C1 and C6)，60.8(C2).

实施例2、氟代亚氨基糖式(I-4)和式(I-5)的制备

以氟代亚氨基糖式(I-4)和式(I-5)的制备为例，说明从含氟中间体XI-1合成3-脱氧-3-氟代LAB及其N-烷基化产物的步骤。

将中间体XI-1(0.2g，0.6mmol)溶于10mL甲醇中，加入40mg钯碳(10％)和10mL 6N盐酸，于氢气气氛下反应72小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品式(I-4)，为暗黄色糖浆，76.6mg，收率：89％。δ_H(300MHz；D₂O)4.67(1H，d，J＝52.2Hz，H4)，4.27(1H，ddd，J＝15.9Hz，2.7Hz，2.4Hz，H3)，3.57(2H，d，J＝6.3Hz，H6)，3.27-3.13(1H，m，H5)，3.04(1H，ddd，J＝12.3Hz，5.1Hz，0.9Hz，H2)，2.80(1H，dd，J＝12.6Hz，3.0Hz，H2)；δ_C(75MHz；D₂O)99.5(d，J＝177.8Hz，C4)，75.0(d，J＝26.3Hz，C3)，63.9(d，J＝24.0Hz，C5)，60.9(d，J＝6.8Hz，C6)，50.6(d，J＝3.0Hz，C2).

将中间体XI-1(0.12g，0.4mmol)溶于10mL甲醇中，加入30mg钯碳(10％)和3滴醋酸，置换氢气后加入37％甲醛水溶液(0.1ml，1.2mmol)，室温反应过夜。向上述体系中加入10mL 6N盐酸，于氢气气氛下反应72小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品式(I-5)，为黄色糖浆，48.5mg，收率：85％。δ_H(300MHz；D₂O)4.67(1H，dd，J＝51.6Hz，3.6Hz，H4)，4.21(1H，dd，J＝16.5Hz，5.1Hz，H3)，3.66(1H，ddd，J＝11.7Hz，4.8Hz，1.2Hz，H6)，3.53(1H，dd，J＝11.7Hz，7.2Hz，H6)，2.87(1H，d，J＝11.4Hz，H2)，2.69-2.51(2H，m，H2and H5)，2.27(3H，s，CH₃)；δ_C(75MHz；D₂O)100.2(d，J＝177.8Hz，C4)，73.2(d，J＝26.3Hz，C3)，71.4(d，J＝22.5Hz，C5)，60.8(d，J＝1.5Hz，C6)，60.1(d，J＝6.8Hz，C2)40.5(CH₃).

实施例3、氟代亚氨基糖式(I-11)的制备

以氟代亚氨基糖式(I-11)的制备为例，说明从氟代硝酮式(III-1a)合成此类含芳基的氟代亚氨基糖的步骤。

3-苄氧基-4-甲氧基溴苯的制备[(a)Araki，H.；Inoue，M.；Katoh，T.Org.Lett.，2003，5，3903-3906；Diaz，A.；Siro，J.G.；García-Navío，J.L.；Vaquero，J.J.；Alvarez-Builla，J.Synthesis1997，559-562.]：将市售愈创木酚(15.2g，0.12mol)和乙酸酐(20mL，0.21mol)加入100mL三口烧瓶中，剧烈搅拌下加入8滴浓硫酸，升温至100℃反应8小时。加入100mL水，搅拌0.5小时后乙酸乙酯萃取，干燥有机相，减压蒸除溶剂后直接将其溶于100mL乙腈中。分批加入NBS(21.9g，0.13mol)，升温至60℃反应24小时，加入200mL水，乙酸乙酯萃取，合并有机相后蒸干。直接溶于50mL甲醇和50mL水中，加入碳酸钾(25.3g，0.18mol)，于40℃下反应8小时。加入200mL水，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后将其溶于100mL四氢呋喃中。滴入悬浮有氢化钠(60％，6.4g，0.16mol)的四氢呋喃体系中，待不再有气体放出后开始滴加溴苄(15.5mL，0.13mol)，加毕反应3小时。加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干得固体粗品，经重结晶得27.9g类白色固体，即3-苄氧基-4-甲氧基溴苯，四步总收率78％。

在50mL三口烧瓶中加入镁屑(0.06g，2.5mmol)和一粒碘后氮气置换，加入1mL新蒸的四氢呋喃和两滴二溴乙烷，40℃搅拌10分钟。然后注入3-苄氧基-4-甲氧基溴苯/10mL四氢呋喃，40℃保持30分钟。用注射器取出，注入装有氟代硝酮式(III-1a)(0.2g，0.6mmol)/5mL四氢呋喃的烧瓶中，反应5分钟。加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后经柱层析纯化，得0.27g XVI-1，为黄色固体，收率：86％。Mp：97-99℃；δ_H(300MHz；CDCl₃)7.44-7.12(15H，m，PhCH₂O)，6.93-6.82(3H，m，PhOCH₂Ph)，5.29(1H，d，J＝18.0Hz，NOH)，5.13(1H，dt，J＝53.1Hz，2.6Hz，H4)，5.07(2H，s，PhOCH2Ph)，4.61-4.36(4H，m，PhCH₂O)，4.17(1H，d，J＝8.1Hz，H2)，4.11-4.01(1H，m，H3)，3.87(3H，s，OMe)，3.81(2H，d，J＝5.1Hz，H6)，3.69(1H，dd，J＝25.2Hz，5.1Hz，H5)；δ_C(75MHz；CDCl₃)149.5，148.1，138.1，137.5，137.2，130.4，128.6，128.5，128.4，127.9，127.8，127.7，121.8，113.9，111.4(Ph)，97.7(d，J＝176.3Hz，C4)，85.8(d，J＝24.8Hz，C3)，73.7(d，J＝6.0Hz，C2)，73.3，72.2，70.9(PhCH₂O)，69.6(d，J＝22.5Hz，C5)，66.3(C6)，56.1(OMe).

将中间体XVI-1(0.27g，0.5mmol)溶于10mL甲醇中，加入30mg钯碳(10％)和10mL6N盐酸，于氢气气氛下反应72小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品式(I-11)，为黄色固体，0.11g，收率：87％。δ_H(300MHz；D₂O)6.86-6.78(3H，m，H7，H8and H9)，4.76(1H，dt，J＝59.4Hz，9.9Hz，H4)，4.32-4.17(1H，m，H3)，3.78(1H，d，J＝8.7Hz，H2)，3.71(3H，s，OMe)，3.58(2H，d，J＝7.5Hz，H6)，3.42-3.32(1H，m，H5)；δ_C(75MHz；D₂O)147.2，144.9，131.5，119.6，114.1，112.4(Ph)，99.5(d，J＝181.5Hz，C4)，80.7(d，J＝22.5Hz，C3)，63.7(d，J＝7.5Hz，C2)，61.4(d，J＝4.5Hz，C6)，60.5(d，J＝23.3Hz，C5)，55.8(OMe).

实施例4、氟代亚氨基糖式(I-16)的制备

以氟代亚氨基糖式(I-16)的制备为例，说明从氟代硝酮III-1b合成此类氟代亚氨基糖的步骤。

将氟代硝酮III-1b(0.1g，0.2mmol)溶于5mL四氢呋喃中，冷至-10℃，氮气气氛下，用注射器加入3M甲基碘化镁乙醚溶液(0.3ml，0.9mmol)。反应5分钟，加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后经柱层析分离，得到淡黄色糖浆XVII-10.09g，收率：87％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.23-7.16(15H，m，PhCH₂O)，6.36(1H，s，NOH)，4.90(1H，dt，J＝54.6Hz，3.6Hz，H4)，4.68-4.42(6H，m，PhCH₂O)，3.93(1H，dd，J＝24.0Hz，3.3Hz，H3)，3.73-3.69(1H，m，H6)，3.65-3.50(3H，m，H7 and H5)，3.27(1H，t，J＝6.9Hz，H2)；1.16(3H，d，J＝6.6Hz，Me)；δ_C(75MHz；CDCl₃)138.2，138.1，137.9，128.5，128.4，128.0，127.8，127.7(Ph)，99.6(d，J＝183.0Hz，C4)，86.8(d，J＝22.5Hz，C3)，77.6(d，J＝4.5Hz，C6)，73.5(d，J＝24.0Hz，C5)，73.5，73.3，72.9，70.9(PhCH₂O and C7)，65.1(d，J＝6.8Hz，C2)，13.2(Me).

将中间体XVII-1(80mg，0.2mmol)溶于10mL甲醇中，加入10mg钯碳(10％)和5mL6N盐酸，于氢气气氛下反应48小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品I-16，为黄色糖浆，26mg，收率：85％.δ_H(300MHz；D₂O)4.74(1H，dt，J＝54.9Hz，5.4Hz，H4)，3.82(1H，ddd，J＝20.7Hz，8.1Hz，5.7Hz，H3)，3.71-3.66(1H，m，H6)，3.60(1H，dd，J＝11.7Hz，3.6Hz，H7)，3.48(1H，dd，J＝12.0Hz，6.9Hz，H7)，3.16(1H，dt，J＝22.5Hz，1.5Hz，H5)，2.95(1H，dt，J＝6.9Hz，6.8Hz，H2)，1.12(3H，d，J＝9.3Hz，Me)；δ_C(75MHz；D₂O)99.6(d，J＝180.8Hz，C4)，80.6(d，J＝21.0Hz，C3)，71.3(d，J＝4.5Hz，C6)，62.7(C7)，60.1(d，J＝23.3Hz，C5)，55.8(d，J＝8.3Hz，C2)，16.9(Me).

实施例5、氟代亚氨基糖式(I-32)的制备

以氟代亚氨基糖式(I-32)的制备为例，说明从氟代硝酮III-1a合成此类氟代亚氨基糖的步骤。

锌粉的活化：将普通市售锌粉悬浮在1摩尔的盐酸水溶液中，搅拌5分钟，直接抽滤去除酸液，反复水洗固体、抽滤至中性，再以无水乙醇反复清洗、抽干带出残留的水分，再抽干残留乙醇，研细即得活化锌粉，主要操作目的是去除锌粉中部分已被氧化的氧化锌。

将活化的锌粉(90mg，1.4mmol)悬浮在5mL四氢呋喃中，氮气气氛下加入两滴二溴乙烷，沸腾10分钟。冷至室温后加入两滴三甲基氯硅烷，再搅拌15分钟。然后依次加入溴乙酸乙酯(0.07mL，0.6mmol)和氟代硝酮III-1a(0.1g，0.3mmol)的四氢呋喃溶液(5mL)，反应1小时。加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后直接溶于10mL四氢呋喃中。冰水浴下分批加入氢化铝锂(0.1g，3.4mmol)，反应0.5小时后依次加入无水乙醇和水淬灭反应。直接蒸干，经柱层析纯化，得中间体XVIII-1，为淡黄色糖浆，70mg，收率：61％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.28-7.14(10H，m，PhCH₂O)，4.98(1H，dt，J＝51.3Hz，2.7Hz，H3)，4.65-4.39(4H，m，PhCH₂O)，3.99(1H，ddd，J＝22.2Hz，7.8Hz，3.0Hz，H4)，3.66-3.55(5H，m，H1，H2and H7)，3.26-3.19(1H，m，H5)，1.92-1.72(2H，m，H6)；δ_C(75MHz；CDCl₃)137.8，137.3，128.7，128.5，128.1，127.9，127.8，127.7(Ph)，98.7(d，J＝184.5Hz，C3)，85.9(d，J＝23.3Hz，C4)，73.3，72.4(PhCH₂O)，70.8(d，J＝23.3Hz，C2)，69.3(d，J＝6.0Hz，C5)，67.2(C1)，60.9(C7)，32.0(C6).

将中间体XVIII-1(50mg，0.1mmol)溶于10mL甲醇中，加入10mg钯碳(10％)和5mL6N盐酸，于氢气气氛下反应60小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品I-32，为黄色糖浆，20.9mg，收率：88％.δ_H(300MHz；D₂O)4.71(1H，dt，J＝54.0Hz，4.5Hz，H3)，3.95(1H，ddd，J＝21.6Hz，7.2Hz，4.5Hz，H4)，3.66-3.50(4H，m，H1and H7)，3.31-3.21(1H，m，H2)，2.97(1H，dd，J＝13.5Hz，8.1Hz，H5)，1.87-1.56(2H，m，H6)；δ_C(75MHz；D₂O)99.8(d，J＝180.8Hz，C3)，80.1(d，J＝22.5Hz，C4)，61.1(d，J＝5.3Hz，C1)，60.8(d，J＝23.3Hz，C2)，59.0(C7)，58.2(d，J＝6.8Hz，C5)，34.9(C6).

实施例6、氟代亚氨基糖式(II-2)和式(II-3)的制备

以氟代亚氨基糖式(II-2)和式(II-3)的制备为例，说明从氟代硝酮式(III-1a)合成此类双环氟代亚氨基糖的步骤。

在25mL三口烧瓶中加入镁屑(0.1g，4.2mmol)后氮气置换，加入1mL新蒸的乙醚和少量烯丙基溴，观察到放热后加入剩余的烯丙基溴(共0.2ml，2.6mmol)/5mL乙醚，反应15分钟后注入实施例4中制备的中间体醛XIV-1(0.3g，0.6mmol)/5mL THF中，反应5分钟。加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后经柱层析纯化，得110mg XIX-1-1和80mg XIX-1-2，均为淡黄色糖浆，总收率：58％。经核磁表征，XIX-1-1：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.26-7.18(15H，m，PhCH₂O and PhCH₂C＝O)，5.94-5.52(1H，m，H8)，5.18-4.97(5H.m，H3，H9and PhCH₂C＝O)，4.62-4.14(5H，m，H4 and PhCH₂O)，3.80-4.10(3H，m，H2，H5and H6)，3.73(1H，d，J＝20.7Hz，H1)，3.43(1H，t，J＝9.3Hz，H1)，2.20-2.01(2H，m，H7)；δ_C(75MHz；CDCl₃)156.7(PhCH₂C＝O)，137.8，137.0，135.9(Ph)，134.3(C8)，128.6，128.5，128.4，128.3，128.2，128.0，127.8，127.7，127.6，127.0(Ph)，117.8(C9)，94.8(d，J＝180.0Hz，C3)，81.8(d，J＝30.0Hz，C4)，73.2，71.7(PhCH₂O)，71.4(C6)，69.1(PhCH₂C＝O)，67.8(C5)，67.2(C1)，63.7(d，J＝21.8Hz，C2)，38.7(C7).XIX-1-2：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.24-7.17(15H，m，PhCH₂O and PhCH₂C＝O)，5.76(1H，s，br，H8)，5.15-4.97(5H，m，H3，H9and PhCH₂C＝O)，4.61-4.16(6H，m，H2，H4and PhCH₂O)，4.06(1H，d，J＝10.5Hz，H6)，3.95(1H，s，H5)，3.56-3.45(2H，m，H1)，3.29(1H，s，OH)，2.11-1.95(2H，m，H7)；δ_C(75MHz；CDCl₃)154.3(PhCH₂C＝O)，136.8，135.9，134.9(Ph)，134.0(C8)，127.6，127.4，127.3，127.2，127.1，126.8，126.6(Ph)，116.3(C9)，93.9(d，J＝183.0Hz，C3)，81.8(C4)，72.2，70.8(PhCH₂O)，69.3，68.9(C2and C5)，66.5(PhCH₂C＝O)，66.2(C1)，63.1(d，J＝22.5Hz，C6)，36.2(C7).

将中间体XIX-1-1(0.2g，0.3mmol)溶于20mL甲醇中，冷至-60℃后通入氧气10分钟，然后通入臭氧2分钟20秒，通入氮气逐出剩余的臭氧，加入二甲硫醚淬灭反应。搅拌2小时后蒸除溶剂，然后加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后直接溶于10mL甲醇中，加入20mg钯碳(10％)和5滴冰醋酸，于氢气气氛下反应24小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，经柱层析纯化，得80mg XX-1-1，为黄色固体，收率：66％。Mp：110-113℃；δ_H(300MHz；CDCl₃)7.26-7.15(10H，m，PhCH₂O)，4.98(1H，dt，J＝55.2Hz，7.4Hz，H2)，4.65-4.46(4H，m，PhCH₂O)，4.35(1H，dt，J＝18.3Hz，6.6Hz，H1)，4.04(1H，d，J＝2.1Hz，H7)，3.54(1H，dd，J＝9.9Hz，3.9Hz，H8)，3.43(1H，dd，J＝9.6Hz，6.3Hz，H8)，3.30(1H，dd，J＝6.3Hz，4.2Hz，H7a)，3.12-3.00(2H，m，H3and H5)，2.66(1H，dd，J＝17.1Hz，9.0Hz，H5)，2.42(1H，s，br，OH)，1.87-1.79(2H，m，H6)；δ_C(75MHz；CDCl₃)138.3，138.2，128.5，128.4，127.9，127.8，127.6(Ph)，99.3(d，J＝185.3Hz，C2)，78.9(d，J＝19.5Hz，C1)，73.4(PhCH₂O)，72.1(C8)，71.1(PhCH₂O)，71.0(d，J＝7.5Hz，C7a)，70.7(C7)，68.3(d，J＝21.8Hz，C3)，52.3(C5)，36.6(C6).

对中间体XIX-1-2(0.2g，0.3mmol)进行相同反应，得90mg XX-1-2，为黄色糖浆，收率：74％。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.32-7.22(10H，m，PhCH₂O)，4.94(1H，dt，J＝53.7Hz，5.4Hz，H2)，4.67-4.47(4H，m，PhCH₂O)，4.10(1H，dd，J＝8.7Hz，4.5Hz，H7)，3.84(1H，dt，J＝13.8Hz，5.4Hz，H1)，3.57-3.48(2H，m，H8)，3.36(1H，s，OH)，3.30-3.16(2H，m，H5and H7a)，3.11-2.99(1H，m，H3)，2.84-2.77(1H，m，H5)，1.98-1.67(2H，m，H6)；δ_C(75MHz；CDCl₃)δ(ppm)，138.2，137.7，128.5，128.4，127.9，127.8，127.7，127.6(Ph)，98.2(d，J＝183.8Hz，C2)，84.5(d，J＝20.3Hz，C1)，76.1(C7)，75.1(d，J＝6.8Hz，C7a)，73.4，72.1(PhCH₂O)，71.2(d，J＝3.0Hz，C8)，67.9(d，J＝21.8Hz，C3)，52.0(C5)，33.6(C6).

将中间体XX-1-1(60mg，0.16mmol)溶于10mL甲醇中，加入20mg钯碳(10％)和10mL 6N盐酸，于氢气气氛下反应48小时，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品II-3，为黄色糖浆，29.2mg，收率：95％。II-3经核磁表征：δ_H(300MHz；D₂O)4.75(1H，dt，J＝54.9Hz，7.8Hz，H2)，4.47(1H，dt，J＝19.2Hz，6.9Hz，H1)，4.32(1H，d，J＝2.1Hz，H7)，3.70-3.58(2H，m，H8)，3.15(1H，dd，J＝6.9Hz，4.2Hz，H7a)，3.11-3.04(1H，m，H5)，3.00-2.97(1H，m，H3)，2.70(1H，dt，J＝16.8Hz，5.3Hz，H5)，2.00-1.79(2H，m，H6)；δ_C(75MHz；D₂O)99.5(d，J＝185.3Hz，C2)，71.4(d，J＝20.8Hz，C1)，70.5(d，J＝8.1Hz，C7a)，69.6(C7)，68.5(d，J＝21.3Hz，C3)，61.8(C8)，51.8(C5)，34.9(C6).

对中间体XX-1-2(80mg，0.22mmol)进行相同反应，以定量收率得到44.4mg II-2，为黄色糖浆。II-2经核磁表征：δ_H(300MHz；D₂O)4.66(1H，dt，J＝54.0Hz，6.6Hz，H2)，4.28(1H，s，H7)，4.07(1H，dt，J＝16.8Hz，6.6Hz，H1)，3.62(2H，d，J＝5.7Hz，H8)，3.09-2.91(3H，m，H3，H5and H7a)，2.87-2.79(1H，m，H5)，2.11-1.99(1H，m，H6)，1.73-1.68(1H，m，H6)；δ_C(75MHz；D₂O)97.7(d，J＝182.3Hz，C2)，76.1(d，J＝21.0Hz，C1)，75.0(C7)，74.3(d，J＝6.8Hz，C7a)，67.4(d，J＝21.0Hz，C3)，61.9(C8)，52.3(C5)，31.9(C6).

实施例7、氟代亚氨基糖式(I-19)、式(I-20)和式(I-21)和式(I-22)的制备

以氟代亚氨基糖式(I-19)、式(I-20)和式(I-21)和式(I-22)的制备为例，说明从氟代硝酮式(III-2a)合成此类氟代亚氨基糖的步骤。

将氟代硝酮式(III-2a)(0.1g，0.3mmol)溶于5mL四氢呋喃中，冷至-10℃，氮气气氛下，用注射器加入3M甲基碘化镁乙醚溶液(0.3ml，0.9mmol)。反应5分钟，加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后经柱层析分离，得到淡黄色糖浆IV-20.09g，收率：86％，dr：90∶10。δ_H(300MHz；CDCl₃)7.28-7.14(10H，m，PhCH₂O)，4.66(1H，d，J＝51.9Hz，H3)，4.54-4.39(4H，m，PhCH₂O)，4.10(1H，dt，J＝23.7Hz，7.1Hz，H4)，3.62-3.54(2H，m，H5and H1)，3.45(1H，dd，J＝9.0Hz，3.0Hz，H1)，2.97(1H，dd，J＝10.8Hz，6.3Hz，H5)；1.17(2.7H，s，Me)，1.01(0.3H，d，J＝3.6Hz，Me)；δ_C(75MHz；CDCl₃)138.3，137.5，128.5，128.4，128.0，127.8，127.7，127.6(Ph)，100.2(d，J＝190.5Hz，C3)，80.0(d，J＝27.8Hz，C4)，73.6，73.5，72.0(PhCH₂O)，71.6(d，J＝9.8Hz，C1)，70.9(d，J＝8.3Hz，C1)，69.3(d，J＝18.0Hz，C2)，59.6(d，J＝4.5Hz，C5)，14.8(Me).

将中间体IV-2(80mg，0.2mmol)溶于8mL甲醇中，加入10mg钯碳(10％)和8mL 6N盐酸，于氢气气氛下反应4天，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品I-19，为淡黄色糖浆，30mg，收率：87％.δ_H(300MHz；D₂O)4.88(1H，d，J＝43.8Hz，H3)，4.63-4.56(1H，m，H4)，3.86(1H，dd，J＝12.3Hz，2.1Hz，H1)，3.73(1H，d，J＝12.3Hz，H1)，3.67(1H，dd，J＝12.6Hz，5.4Hz，H5)，3.37(1H，dd，J＝12.9Hz，2.4Hz，H5)，1.50(1H，s，Me)；δ_C(75MHz；D₂O)99.5(d，J＝183.8Hz，C3)，73.1(d，J＝22.5Hz，C4)，69.7(d，J＝20.3Hz，C2)，61.2(d，J＝14.3Hz，C1)，50.1(C5)，18.2(d，J＝4.5Hz，Me).

式(I-20)的制备参照I-1的步骤完成，以氟代硝酮式(III-2a)为起始原料，7步总收率30％。式(I-20)经核磁表征：δ_H(300MHz；D₂O)4.75(1H，dd，J＝52.2Hz，3.3Hz，H3)，4.47-4.35(1H，m，H4)，3.76-3.52(4H，m，H1 and H6)，3.23(1H，ddd，J＝12.0Hz，6.3Hz，1.5Hz，H5)，2.78(1H，dd，J＝12.0Hz，5.7Hz，H5)；δ_C(75MHz；D₂O)100.5(d，J＝184.1Hz，C3)，75.6(d，J＝26.3Hz，C4)，67.1(d，J＝18.1Hz，C2)，61.6，60.2(C1and C6)，48.8(d，J＝5.4Hz，C5).

将氟代硝酮III-2a(0.2g，0.6mmol)溶于10mL四氢呋喃中，加入三氟甲基三甲基硅烷(0.14ml，0.95mmol)，冷至10℃后分批加入四丁基氟化铵(1.0g，3.8mmol)，0.5小时后加入20mL水，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后经柱层析分离，得到90mg V-2-1和46mg V-2-2，均为黄色糖浆，总收率：56％，dr：66/34。V-2-1：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.27-7.17(10H，m，PhCH₂O)，5.54(1H，s，NOH)，5.06(1H，dd，J＝52.8Hz，4.2Hz，H3)，4.52-4.27(5H，m，H4 and PhCH₂O)，4.16(1H，dd，J＝9.9Hz，3.9Hz，H1)，3.73-3.67(2H，m，H1and H5)，3.73-3.67(2H，m，H1and H5)；δ_C(75MHz；CDCl₃)137.6，137.3，128.6，128.5，128.1，128.0，127.9，127.8，127.6，127.2，127.1(Ph)，96.5(d，J＝197.3Hz，C3)，78.7(d，J＝21.8Hz，C4)，74.1(PhCH2O)，73.5(dd，J＝24.9Hz，20.5Hz，C2)，71.8(PhCH₂O)，63.1(d，J＝6.0Hz，C1)，61.1(d，J＝6.8Hz，C5).V-2-2：δ_H(300MHz；CDCl₃)7.29-7.21(10H，m，PhCH₂O)，5.33(1H，dd，J＝52.5Hz，5.4Hz，H3)，5.12(1H，s，NOH)，4.64-4.46(4H，m，PhCH₂O)，4.18-4.03(2H，m，H1 andH4)，3.81(1H，d，J＝9.9Hz，H1)，3.53(1H，t，J＝7.5Hz，H5)，3.14(1H，t，J＝9.9Hz，H5)；δ_C(75MHz；CDCl₃)137.3，137.2，128.5，128.0，127.9，127.8，127.6(Ph)，95.9(d，J＝197.3Hz，C3)，76.9(d，J＝21.8Hz，C4)，73.8，72.6(PhCH₂O)，71.0(C2)，65.4(C1)，57.7(d，J＝8.3Hz，C5).

将中间体V-2-1(80mg，0.2mmol)溶于10mL甲醇中，加入10mg钯碳(10％)和5mL6N盐酸，于氢气气氛下反应4天，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品I-21，为淡黄色糖浆，30mg，收率：74％.δ_H(300MHz；D₂O)5.15(1H，dd，J＝53.4Hz，6.3Hz，H3)，4.56-4.41(1H，m，H4)，3.87(1H，dd，J＝12.3Hz，1.5Hz，H1)，3.74(1H，dd，J＝12.3Hz，3.3Hz，H1)，3.31(1H，t，J＝9.6Hz，H5)，2.69(1H，t，J＝10.5Hz，H5)；δ_C(75MHz；D₂O)126.1(d，J＝281.3Hz，CF₃)，98.8(d，J＝190.5Hz，C3)，74.6(d，J＝22.5Hz，C4)，67.4(dd，J＝25.5Hz，20.3Hz，C2)，58.2(d，J＝11.3Hz，C1)，47.5(d，J＝9.8Hz，C5).

以类似方式对中间体V-2-2(30mg，0.08mmol)进行操作，得到产品I-22，亦为淡黄色糖浆，10mg，收率：66％.δ_H(300MHz；D₂O)4.99(1H，dd，J＝51.0Hz，3.9Hz，H3)，4.55-4.45(1H，m，H4)，3.89-3.77(1H，m，H1)，3.17(1H，ddd，J＝11.7Hz，5.7Hz，1.8Hz，H5)，2.94(1H，dd，J＝11.4Hz，5.4Hz，H5).

实施例8、氟代亚氨基糖式(I-31)的制备

以氟代亚氨基糖式(I-31)的制备为例，说明从普通硝酮式(III-3a)合成此类氟代亚氨基糖的步骤。

将活化的锌粉(0.3g，4.3mmol)悬浮在10mL四氢呋喃中，氮气气氛下加入两滴二溴乙烷，沸腾10分钟。冷至室温后加入两滴三甲基氯硅烷，再搅拌15分钟。然后依次加入二氟代溴乙酸乙酯(0.2mL，1.9mmol)和氟代硝酮III-1a(0.4g，1.0mmol)的四氢呋喃溶液(5mL)，反应1小时。加入氯化铵水溶液淬灭，乙酸乙酯萃取，干燥有机相，蒸干后直接溶于10mL四氢呋喃中。冰水浴下分批加入氢化铝锂(0.4g，10.5mmol)，反应0.5小时后依次加入无水乙醇和水淬灭反应。直接蒸干，经柱层析纯化，得中间体IV-3a，为黄色糖浆，0.28g，收率：59％。直接用于加氢反应。

将中间体IV-3a(170mg，0.34mmol)溶于10mL甲醇中，加入10mg钯碳(10％)和5mL6N盐酸，于氢气气氛下反应3天，过滤回收钯碳，将滤液蒸干，加入浓氨水中和剩余的酸，再次减压蒸干，强酸性离子交换树脂分离纯化，得产品I-31，为黄色糖浆，60mg，收率：83％.δ_H(300MHz；D₂O)4.21(1H，t，J＝7.5Hz，H4)，3.94-3.74(3H，m，H3 and H7)，3.71-3.64(2H，m，H1)，3.54-3.42(1H，m，H5)，3.02-2.96(1H，m，H2).

实施例9、氟代亚氨基糖化合物的糖苷酶抑制效果评价

1)试验材料及来源

供试化合物：本发明所提供的部分氟代亚氨基糖化合物。

试验材料：所有4-硝基酚吡喃糖苷基质、二糖和糖苷酶(包括α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶以及海藻糖酶)均购自Sigma-Aldrich。

2)试验方法

动力学研究在37℃的50mM柠檬酸钠/磷酸缓冲液中进行。根据基质的不同，配制的酶浓度为0.1-0.5mg/mL。活性测试以4-硝基酚吡喃糖苷为基质，在每种酶的最佳活性PH下进行测试。将基质、适当稀释的酶溶液和抑制剂(氟代亚氨基糖)在37℃下培养30分钟，然后在紫外可见分光光度计中启动反应，测定其对400nm波长光的吸收。最后使用GraFit程序进行数据分析[Leatherbarrow，R.J.Grafit 4.0；Erithacus Software：Staines，UK，1998.]。

3)评价结果

本发明提供的部分氟代亚氨基糖化合物对糖苷酶的抑制活性结果如表1所示。

评价结果表明，本发明所提供的部分氟代亚氨基糖类化合物对α-葡萄糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶或海藻糖酶具有中等或较弱的抑制活性。其中式(I-4)、(I-24)和(I-25)所示的化合物是选择性的α-葡萄糖苷酶抑制剂，IC50分别为22μM、60μM和59μM，其他化合物为较弱的糖苷酶抑制剂。

表1部分氟代亚氨基糖化合物对糖苷酶的抑制活性

^a酶的来源；^bNI：无抑制作用(在1000μM浓度下抑制率少于50％)；^c()：在1000μM浓度下的抑制率。

表1部分氟代亚氨基糖对糖苷酶的抑制活性(续)

部分氟代亚氨基糖对糖苷酶的抑制活性IC₅₀(μM)

^a酶的来源；^bNI：无抑制作用(在1000μM浓度下抑制率少于50％)。^c()：在1000μM浓度下的抑制率。

实施例10、本发明氟代亚氨基糖化合物的抗癌效果

1)试验材料及来源

供试化合物：本发明所提供的部分氟代亚氨基糖化合物。

试验材料：小鼠黑色素瘤细胞株B16F10(上海润成生物科技有限公司)，其余材料均为商业购得。

2)试验方法

制备和培养B16F10细胞：以含10％小牛血清的RPMI1640(购自GIBCO公司)为培养液，在37℃、5％C0₂孵育箱中培养。取生长状态良好的细胞，弃掉旧的培养液，磷酸缓冲溶液(pH 7.4)清洗后，用1.0mL胰酶消化，以新鲜培养液重悬，细胞计数后，以新鲜培养液调整细胞浓度至1×10⁵/mL，混匀，以每孔0.10mL种至96孔板，37℃，5％C0₂孵育箱中孵育24小时，细胞贴壁。

样品组：加入以磷酸缓冲溶液溶解的药物(药物浓度5μM/mL，每孔加入10μL药物溶液，药物终浓度0.5μM/mL)；

对照组：加入等体积的磷酸缓冲溶液(pH 7.4)。

每组药物设6个复孔，摇匀。

抗癌活性的检测：将上述给药后的B16F10细胞在37℃、5％CO₂孵育箱中孵育24小时后，MTT法检测细胞活性。

具体方法为：每孔加入5mg/mL浓度的MTT(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐)10μL，避光孵育4小时，小心吸去上清，留取沉淀颗粒，每孔用150μL的DMSO(二甲基亚砜)溶解，570nm波长酶标仪检测，复孔取平均值，按照下述公式计算抑制率。

公式：抑制率＝(对照组吸光度值-样品组吸光度值)/对照组吸光度值。

三、试验结果

体外肿瘤细胞抑制试验结果如下表2所示：

表2部分氟代亚氨基糖化合物对黑色素瘤生长的抑制作用

体外细胞试验表明，在药物终浓度为0.5μM/ml时，本发明所合成氟代亚氨基糖化合物对B16F10(小鼠黑色素瘤细胞)有一定的抑制活性。孵化24小时时，化合物I-8和I-12对B16F10的抑制率分别达到85.1％和67.0％；化合物I-6和I-9对B16F10的抑制率也在三分之一以上；I-1、I-5、I-7、I-10和I-14对B16F10的抑制率也在20-30％之间，分别为27.2％、25.9％、29.6％、24.1％和25.1％；化合物I-11对B16F10的抑制率仅为12.0％；而I-13、I-15、I-16和II-1对B16F10的抑制率则很低，为10％以下。

以上结果表明，本发明所述氟代亚氨基糖化合物能明显抑制黑色素瘤细胞的生长，具有一定的抗癌效果和研究价值。

Claims

1.一种(II–a)所示氟代亚氨基糖化合物的制备方法，该方法包括如下步骤：

(1-1)将式(III-1)所示化合物与乙烯基格氏试剂进行加成反应，生成加成中间体J-1将所述加成中间体J-1加入还原体系中，发生还原反应，得到胺类中间体将所述胺类中间体在保护条件下进行氨基的保护，得到氨基被保护的中间体将所述氨基被保护的中间体在臭氧化条件下反应3-10分钟，得到醛中间体Q-1将所述醛中间体与亲核试剂反应，得到加成中间体J-2其中，R'₇和R'₈各自独立地为氢或羟基；将所述加成中间体J-2在臭氧化条件下反应3-10分钟，得到醛中间体Q-2将所述醛中间体Q-2在加氢环化条件下进行关环反应，生成关环中间体将该关环中间体直接在脱保护条件下选择性地进行脱保护反应得到(II-a)所示氟代亚氨基糖化合物，或者，将所述关环中间体与含氟亲核试剂进行取代反应，得到氟代中间体F-1；或者，将所述关环中间体在氧化条件下进行氧化反应得到成酮中间体所述酮中间体与含甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基的亲核试剂进行反应得到氟代中间体F-2；

(1-2)将所述氟代中间体F-1和F-2在脱保护条件下选择性地进行脱保护反应得到(II-a)所示氟代亚氨基糖化合物；

其中，所述乙烯基格氏试剂可为乙烯基氯化镁或乙烯基溴化镁；所述加成反应的温度为-40℃-40℃；所述还原体系为活化的锌粉或市售铁粉/乙酸铜/乙酸体系，所述还原反应的温度为15-80℃；所述保护条件是指将所述胺类中间体在碱存在的条件下与CbzCl或Boc₂O进行保护基反应；所述保护基反应的温度是0℃-80℃；所述臭氧化条件是指将所述氨基被保护的中间体在臭氧条件下反应，溶剂可以是下述至少一种溶剂：二氯甲烷、甲醇、乙醇和水，温度为-60℃--50℃；所述含氟亲核试剂是指二乙胺基三氟化硫、2,2-二氟-1,3-二甲基咪唑烷或三氟甲基三甲基硅烷；所述氧化条件是指Swern氧化条件、PCC、PDC或DMP，所述氧化反应的温度为-40℃-40℃；

所述脱保护条件为钯炭/氢气，所述脱保护反应是在下述至少一种溶剂中进行的：二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、水、甲醇、乙醇、盐酸和冰醋酸；所述脱保护反应的温度是-20℃-100℃；所述钯碳与氟代中间体的质量比为5-20：100；所述钯碳中的钯的质量占钯碳总质量的5％-10％；

(II–a)中，n＝1或2；R₁为氢或苄基；R₂为氢、羟甲基或苄氧甲基；R₃为氢或苄基；R₇和R₈为氢、氟、羟基、甲基、乙基、丙基、羟甲基或三氟甲基；

式(Ⅲ-1)中，R₁为氢或苄基；R₂为氢、羟甲基或苄氧甲基；R₃为氢或苄基。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：式(II-a)所示化合物的2、3、4、5位碳的立体构型均为2R，3R，4R，5R；2R，3R，4R，5S；2R，3S，4S，5R；2R，3S，4S，5S；2R，3S，4R，5R；2R，3S，4R，5S；2S，3R，4S，5R；2S，3R，4S，5S；2S，3R，4R，5R；2S，3R，4R，5S；2S，3S，4S，5R；2S，3S，4S，5S；2S，3S，4R，5R和2S，3S，4R，5S中任一种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述亚氨基糖化合物为下述式(II-1)至式(II-3)中所示化合物中任一种：