CN102626520A

CN102626520A - 一种水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法

Info

Publication number: CN102626520A
Application number: CN2012101199329A
Authority: CN
Inventors: 黄娟; 单虎; 秦晓冰; 张传美; 杨瑞梅; 张洪亮
Original assignee: Qingdao Agricultural University
Current assignee: Qingdao ABO Biotechnology Co., Ltd.
Priority date: 2012-04-23
Filing date: 2012-04-23
Publication date: 2012-08-08
Anticipated expiration: 2032-04-23
Also published as: CN102626520B

Abstract

本发明公开了一种水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂，以注射用水为溶剂配制溶液，各组分质量百分比浓度为：明胶3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脱水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸钠2%；均为干物质组份，对可高压灭菌的明胶、聚乙烯吡咯烷酮（K90），按各自比例溶于注射用水，121℃灭菌15分钟；（2）将不耐高温的物质组份山梨醇、谷氨酸钠、脱水果糖、甘氨酸、海藻糖、蔗糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔径0.22μm的滤膜过滤除菌；然后将（1）、（2）混合，即为耐热冻干保护剂。本发明是一种低成本、长效制品及制备方法。

Description

一种水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法

技术领域

本发明涉及一种水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂及制备方法，属于动物用病毒活疫苗制造领域。

背景技术

在疫苗制品的领域中，冻干保护剂及其制备工艺是活疫苗生产中的一项关键技术，对疫苗的保存、运输和使用有很大影响。目前，在我国兽用疫苗中，活的冻干疫苗占相当大的比例，国内常用的保护剂主要为牛奶、蔗糖、明胶等，组方简单，保护功能差。如果在2℃-8℃条件下，保存期只有4-6个月，多需要在-15℃以下保存。加上国内传统的兽用生物制品保护剂的研制相对滞后，使成品疫苗的长期保存和运输受限。所以，耐热冻干保护剂的研究是非常急需的，在20世纪80年代，发达国家就已开始进行耐热冻干保护剂的研究。我国在耐热冻干保护剂方面的研究起步较晚，但现在在这方面的研究取得了一定的成果，傅德霞等（1997) 将明胶蔗糖保护剂用于鸡新城疫弱毒冻干苗和鸡传染性支气管炎弱毒冻干苗，其免疫效果与牛奶蔗糖保护剂基本相同。王仁耕等（1989）对鸡新城疫I系冻干苗的耐热保护剂的研究表明，2-8 ℃ 保存24 个月能够达到《规程》标准，主要为牛奶、蔗糖、谷氨酸钠、甘露醇等。沈铭强等（1990）对狂犬病冻干苗耐热保护剂进行了研究，以蔗糖、牛奶、EDTA、甘露醇等材料为主，经2-8 ℃保存有效期为一年。李道义等（1996）进行了猪瘟冻干苗保护剂的研究，主要成分为CHO、谷氨酸钠、牛血清、脱脂牛奶等，4-8℃ 保存15-24个月，25℃100天，37℃7天，经检验，物理性状、真空度、水分、安全效力等测定达部颁标准。王栋等（2002）已经研制出一种耐热冻干保护剂，用此保护剂冻干的疫苗在2℃-8℃条件下，保存24个月以后，病毒滴度无明显下降。

由于冻干保护剂可影响生物制品的质量、效价和稳定性，改变生物制品的生产工艺，提高产品预测能力并增大产品批次间的稳定性，并且耐热冻干保护剂有免疫活性但无药理活性，可在冻干和保存时维持疫苗的稳定性，初次干燥时在适宜的温度下疫苗不倒塌，企业低成本即可获取。

发明内容

本发明的目的是提供一种新型水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂及其制备方法，降低保护条件，延长使用期并降低使用成本。

一种水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂，以注射用水为溶剂配制溶液，各组分质量百分比浓度为：明胶3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脱水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸钠2%；均为干物质组份。

上述水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法，（1）对可高压灭菌的明胶、聚乙烯吡咯烷酮（K90），按各自比例溶于注射用水，121℃灭菌15分钟；（2）将不耐高温的物质组份山梨醇、谷氨酸钠、脱水果糖、甘氨酸、海藻糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔径0.22μm的滤膜过滤除菌；然后将（1）、（2）混合，即为耐热冻干保护剂，冻干保护剂中各组分质量百分比浓度为：明胶3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脱水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸钠2%。使用时按1:1体积比加入病毒抗原液中，分装后进行冷冻干燥。

本发明的活疫苗耐热冻干保护剂，降低保存条件，延长保存期，降低使用成本及其提高疫苗的免疫效力，使活疫苗的储存、运输和使用都更方便、经济。本发明的制剂在2-8℃条件下可保存24个月以上，能达到《中华人民共和国兽医生物制品质量标准》中规定的各项指标。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

一种新型水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂，配比为：明胶3g、聚乙烯吡咯烷酮5 g、脱水果糖1 g、海藻糖3 g、甘氨酸3 g、山梨醇3 g、谷氨酸钠2 g，注射用水80g，可得到100g水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂。

水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法，（1）对可高压灭菌的明胶、聚乙烯吡咯烷酮（K90），按各自比例溶于注射用水，121℃灭菌15分钟；（2）将不耐高温的物质组份山梨醇、谷氨酸钠、脱水果糖、甘氨酸、海藻糖；均按各自比例溶于注射用水中用孔径0.22μm的滤膜过滤除菌；分别完成除菌后将（1）、（2）两种成分混合，即为耐热冻干保护剂，使用时按1:1体积比例加入病毒抗原液中，分装后进行冷冻干燥。

技术参数及检测方法

1.产品的物理性状、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全检验、剩余水分测定和真空度测定按《中华人民共和国兽医生物制品规程》的方法及标准进行。

2.冻于周期不超过48h。

3.病毒含量测定及标准

选择发育良好的9～10日龄SPF鸡胚制备鸡胚成纤维细胞悬液，用细胞生长液制备鸡胚成纤维细胞悬液（浓度5×10⁶个左右），接种96孔板上33℃培养。按瓶签注明头份，用生理盐水将每头份疫苗按实含抗原量稀释适当的倍数，用灭菌生理盐水做10倍系列稀释，选取适宜稀释度5个，接种长成鸡胚成纤维细胞单层的96孔板上，每个稀释度接种6孔，每孔100μl，吸附1小时后加维持液100μl，在33℃培养7～8日，计算TCID₅₀，每1ml病毒含量10⁴TCID₅₀以上为合格。

4、试制3批由本耐热冻干保护剂冻干的产品，并设常规5%蔗糖脱脂乳保护剂对照组，置于37℃、2-8℃条件下保存，不同时间取样，测定病毒含量及其物理性状等。结果见表；

表1本发明的水貂犬瘟热活疫苗冻干后物理性状等参数测定

Figure 2012101199329100002DEST_PATH_IMAGE001

表2本发明的水貂犬瘟热活疫苗37℃下放置10天效力测定（TCID₅₀）

表3本发明的水貂犬瘟热活疫苗2~4℃下放置不同时间效力测定（TCID₅₀）

表4本发明的水貂犬瘟热活疫苗安全性试验

从以上实验结果看出，在不同环境温度下，本发明的耐热冻干保护剂对水貂犬瘟热活疫苗的保护效果优于常规5%蔗糖脱脂乳保护剂，冻干后疫苗达 10⁵ TCID₅₀合格，产品在 37 ℃ 保存 10d ，产品的效力达 10⁴ TCID₅₀合格。产品在 2-8 ℃ 保存 24 个月，产品的效力均在10⁴ TCID₅₀以上。本发明耐热保护剂对水貂犬瘟热活疫苗具有良好的保护效果。

对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。

Claims

1.一种水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂，其特征在于，以注射用水为溶剂配制溶液，各组分质量百分比浓度为：明胶3%、聚乙烯吡咯烷酮5%、脱水果糖1%、海藻糖3%、甘氨酸3%、山梨醇3%、谷氨酸钠2%；均为干物质组份。

2.根据权利要求1所述的水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂的制备方法，包括如下步骤：

（1）对可高压灭菌的明胶、聚乙烯吡咯烷酮（K90），按各自比例溶于注射用水，121℃灭菌15分钟；

（2）将不耐高温的物质组份山梨醇、谷氨酸钠、脱水果糖、甘氨酸、海藻糖，均按各自比例溶于注射用水中过滤除菌；

（3）将步骤（1）和（2）的溶液混合。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤（2）中的过滤除菌采用微孔滤膜的方式。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述的微孔滤膜为孔径0.22μm的滤膜。

5.权利要求1所述的水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂在保护水貂犬瘟热活疫苗中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：权利要求1所述的水貂犬瘟热活疫苗耐热冻干保护剂，使用时按1:1体积比例加入病毒抗原液中，分装后进行冷冻干燥。

7.根据权利要求5或6所述的应用，其特征在于：疫苗在2-8℃条件下可保存24个月以上。