CN102618449B - 一种溶磷菌及其制备方法和应用 - Google Patents
一种溶磷菌及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102618449B CN102618449B CN201210095164.8A CN201210095164A CN102618449B CN 102618449 B CN102618449 B CN 102618449B CN 201210095164 A CN201210095164 A CN 201210095164A CN 102618449 B CN102618449 B CN 102618449B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phosphorus
- soil
- solubilizing bacteria
- fermentor tank
- blowing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 50
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 title abstract description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 title abstract description 5
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 title abstract description 5
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 title abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 24
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 22
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000007664 blowing Methods 0.000 claims description 15
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims description 15
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 10
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 10
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 9
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 7
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 6
- 241000892910 Aspergillus foetidus Species 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N [Na].[Cl] Chemical compound [Na].[Cl] DPDMMXDBJGCCQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 claims description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 3
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 claims description 3
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 3
- 238000004886 process control Methods 0.000 claims description 3
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 3
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 53
- 239000002689 soil Substances 0.000 abstract description 27
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 abstract description 17
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 abstract description 16
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 8
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 abstract description 7
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 6
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 239000011591 potassium Substances 0.000 abstract description 5
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 abstract description 5
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 abstract description 4
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 abstract description 4
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 abstract description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 abstract description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 abstract description 3
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 abstract 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 51
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 51
- 235000019504 cigarettes Nutrition 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N Quinoline Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C21 SMWDFEZZVXVKRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 7
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 6
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 5
- DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxomolybdenum Chemical compound O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.O=[Mo](=O)=O.OP(O)(O)=O DHRLEVQXOMLTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- GNTDGMZSJNCJKK-UHFFFAOYSA-N divanadium pentaoxide Chemical compound O=[V](=O)O[V](=O)=O GNTDGMZSJNCJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 4
- 229940005654 nitrite ion Drugs 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 2
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000002710 Ilex cornuta Nutrition 0.000 description 2
- 241001310146 Ilex cornuta Species 0.000 description 2
- NJXVPIZBZLQQPB-UHFFFAOYSA-N N1=CC=CC2=CC=CC=C12.[Mo] Chemical compound N1=CC=CC2=CC=CC=C12.[Mo] NJXVPIZBZLQQPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000010326 Osmanthus heterophyllus Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WYWFMUBFNXLFJK-UHFFFAOYSA-N [Mo].[Sb] Chemical compound [Mo].[Sb] WYWFMUBFNXLFJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 description 2
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091023242 Internal transcribed spacer Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007621 cluster analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 244000037666 field crops Species 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000009605 growth rhythm Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical compound [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910001710 laterite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011504 laterite Substances 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000003595 mist Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 239000004016 soil organic matter Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000003911 water pollution Methods 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Fertilizers (AREA)
Abstract
本发明是一种溶磷菌及其制备方法和应用。该溶磷菌分类命名为臭曲霉Aspergillusfoetidus，其保藏登记号为CGMCC No.5857。本发明的溶磷菌用于生产微生物肥料，并用于烟叶的栽培，通过溶磷、解钾等功能微生物的直接作用，释放土壤中的不易被吸收的养分，改良了土壤品质，促进土壤中有益微生物的繁殖，提高了土壤中有益微生物的数量，调节土壤中的营养平衡，从而提高了烟株对矿质营养的平衡吸收，提高烟叶质量和肥料利用率，并减少了环境污染。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体地说是一种溶磷菌及其制备方法和应用。
背景技术
现代农业的发展伴随着化肥的大量使用，在增产增收的同时却也导致了土壤板结，有机质含量下降，土壤中的微生物失衡，土壤酸化，重金属含量增加，同时肥料流失还会造成水体污染。目前未见一种可用于农用微生物菌剂系列肥料溶磷菌的文献报导和应用，农用微生物菌剂系列肥料不仅可以有效改善土壤品质，同时也可以增强作物的抗性，增加作物对肥料的利用率，减少环境污染，调节土壤中的微生物趋于平衡。
发明内容
本发明的目的是提供一种溶磷菌及其制备方法和应用，可用于新型多功能具有溶磷能力的环保生物肥料的生产。
本发明的溶磷菌分类命名为臭曲霉Aspergillus foetidus，其保藏登记号为CGMCC No.5857。
该菌株鉴定为：
1、形态特征：在PDA培养基上无色，有隔膜，分生孢子梗从壁厚而膨大的菌丝细胞垂直伸出，无隔膜，粗糙，顶端膨大呈球形。
2、序列信息：经序列比对，信息结果与数据库中Aspergillus菌种的复合率较高；聚类分析，发现该菌株与Aspergillus niger的聚类相距较远，明显分为两组， 聚类结果与Aspergillus tubingensis和Aspergillus foetidus等菌种的聚类结果较为相近，可判定该菌株与Aspergillus foetidus等菌种的亲缘关系较近。
本发明的溶磷菌的制备方法如下：
1）发酵种子的培养：选取试验室中培养出的纯净、优良的目标菌进行种子罐接种，接种后进行振荡培养或搅拌培养4-5d，测定菌种浓度达到1010以上；培养基为葡萄糖5-15g、硫酸铵0.2-0.8g、磷酸钙6-12g、氯化钠0.1-0.5g、氯化钾0.1-0.5g、硫酸镁0..1-0.5g、硫酸亚铁0.01-0.05g、硫酸锰0.01-0.05g、蒸馏水1000ml，pH7.0-7.5；
2）发酵罐及培养基灭菌：先对发酵罐进行灭菌，冷却后加入培养基，再进行实消，即对培养基灭菌。培养基与上述种子培养基相同，采用蒸汽灭菌，控制压力0.1-0.15Mpa，温度121-125℃左右，灭菌20min-30min，无菌空气保压，自然冷却至25℃；
3）发酵罐接种：将种子液导入发酵罐中，在接种过程中保持发酵罐内正压0.03-0.05Mpa；
4）发酵过程控制：保持温度25℃，发酵罐内压强0.05Mpa，通过温度计及压力表1-2h检测一次温度、压力，通过调节无菌空气加入量调节其溶氧，通过取样口取样检测菌种纯度、含量及pH值；
5）发酵后放料：发酵后期观察发酵液浓度不再变化，则可以进行放料，放料时保持罐内压力0.03-0.06Mpa，放料时进行搅拌，以使料液均匀，放料后溶磷菌产品放置于阴凉干燥处保存或于0-4℃条件下保存。
本发明的溶磷菌具有较强的溶磷能力，由以下试验证明：
试验室测定菌种溶磷能力
试验目的：通过对三株溶磷真菌溶磷效果的测定，确定其溶磷能力的强弱。
试验原理：采用重量法，依照GB/T8537-1999方法，用水和EDTA溶液提取水溶磷和有效磷，提取液中正磷酸根离子在酸性介质中与喹钼柠酮溶液生成黄色磷钼酸喹啉沉淀，用磷钼酸喹啉重量法测定磷的含量。培养结束时用钼蓝法进行测定对比。
试验步骤及方法
1、样品处理
a、设本功能菌为1号样，另购买两组具有解磷功能的菌种设为2号样及3号样，设置一组不加菌种的空白处理为对照ck，将各处理中的菌种在PDA平板上划线培养，活化3次；
b、将活化好的菌种取一环接种于100ml的PDA液体培养基，27℃，200r/min,摇床培养4天；
c、取3ml菌种培养液，离心取上清液2.5ml(1%的接种量)加入含磷的250mlCa3(PO4)2液体培养基，27℃，200 r/min,摇床培养7天；
d、在第三天、第五天、第七天取样测定。
2、重量法测定水溶磷及有效磷
（1）测定方法
a.坩埚恒重——试验前准备：将坩埚清洗干净，用热水抽滤三到五次，放入180℃ 
2℃的烘箱中烘干，2小时后取出放置在干燥器中冷却，冷却半小时后第一次称重，然后继续烘干半小时，冷却半小时后第二次称重，两次重量之差小于0.0003的可以备用，大于0.0003的继续重复上述的烘干、冷却、称重过程，直至质量差小于0.0003，坩埚质量记为m1。
b.取30ml样品移入小烧杯中，用水清洗取样管3～5次，洗涤液并入样品液中。
c.称量装有样品的烧杯，质量记为m样。
d.将样品通过滤纸滤到250ml容量瓶中，容量瓶中提前加入10ml浓度为50%的HNO3，清洗烧杯3-5次，洗涤液并入样品液中过滤，再加水定容至刻度。（此步骤用于提取水溶磷）
e.将滤纸连同过滤物移入另一250ml容量瓶中，加入加热到60℃以上的浓度为37.5g/L的EDTA热溶液150ml，充分震荡使滤纸破碎，在温度为60℃
2℃摇床上震荡1小时。（此步骤用于提取枸溶磷）
f.在400ml烧杯中加入10ml浓度为50%的HNO3，将容量瓶中测水溶磷的溶液用移液管移取10ml加入此烧杯中，此烧杯中的水溶液用于测定水溶磷。
g. 在400ml烧杯中加入10ml浓度为50%的HNO3，将容量瓶中测水溶磷的溶液和测枸溶磷的溶液用移液管各移取10ml加入此烧杯中，此烧杯中的水溶液用于测定有效磷。
h.向2个烧杯中各加入100ml水，搅拌并盖上一个表面皿进行加热，煮沸后加入40ml喹钼柠酮磷沉淀剂继续加热，待沉淀出现分层后取下冷却至室温。
i.将沉淀加入坩埚抽滤，充分清洗烧杯使沉淀无损失，滤干后放入180℃
2℃烘箱中烘45分钟。
j.烘干后取出，在干燥器中室温冷却30分钟，称重，水溶磷记为质量m2，有效磷记为质量m3。
（2）试验结果计算
水溶磷含量（X1）、有效磷含量（X2）及水溶磷占有效磷含量的百分比率（X3）以五氧化二磷（P2O5）的质量百分数表示，按下列公式计算：
X1= 
X2= 
X3=
m水：测定水溶磷所得磷钼酸喹啉沉淀的质量m2-m1
m有：测定有效磷所得磷钼酸喹啉沉淀的质量m3-m1
m样：用于测定水溶磷和有效磷的样品的质量
0.03207：磷钼酸喹啉质量换算为五氧化二磷质量的系数
（3）试验结果
钼蓝法测定有效磷含量
（1）测定方法
a.将上述已培养七天的培养液摇匀后取4ml4000rpm/min离心20分钟。
b.取上清液2.5ml至25ml的容量瓶中，加水10～15ml，加1滴2，4-二硝基酚指示剂，用4N NaOH调节pH值至溶液赶赴呈微黄色，用2N H2SO4与调节至微黄色，加2.5ml钼锑试抗显色剂，用水定容到标度，摇匀。30min后分光光度计上用0.5cm光径比色皿，700nm波长比色测定显色液的吸收值。
c.将吸收光值在标准曲线上查出对应的有效磷含量。
d.有效磷标准曲线的绘制：吸取5ppmP磷标准溶液0，1，2，3，4，5，6ml分别放入50ml容量瓶中，加水15～25ml，加1滴2，4-二硝基酚指示剂，用4N NaOH调节PH值至溶液赶赴呈微黄色，用2N H2SO4与调节至黄色退去，加5ml钼锑试抗显色剂，用水定容到标度，摇匀。30min后分光光度计上用0.5cm光径比色皿，700nm波长比色测定显色液的吸收值。用0ppm磷标准系列显色液做参比，吸收值调值到零，由稀到浓测标准系列显色液的吸收值。
（2）测量数据绘图如图1所示。
（3）钼蓝法测定有效磷含量数据
| 菌株号 | 吸光值（稀释十倍） | 有效磷含量（ppm） |
| 1号样 | 0.1534 | 54.20 |
| 2号样 | 0.1489 | 52.61 |
| 3号样 | 0.1142 | 40.28 |
| CK | 0.0476 | 16.81 |
试验结果分析：
用重量法进行测定，可以明显看出1号菌的溶磷能力最强，3号菌次之，4号菌的溶磷能力最差。通过用钼蓝法对第七天的样品进行检测，可以看出与重量法测得的数据结果一致，1号菌的溶磷能力最强，3号菌次之，4号菌的溶磷能力最差。由于样品为液体，在用重量法进行检测的过程中可能不够精确，但基本达到了比较菌种之间溶磷能力大小的效果。
本发明的溶磷菌用于生产微生物肥料，并用于烟叶的栽培，通过溶磷、解钾等功能微生物的直接作用，释放土壤中的不易被吸收的养分，改良了土壤品质，促进土壤中有益微生物的繁殖，提高了土壤中有益微生物的数量，调节土壤中的营养平衡，从而提高了烟株对矿质营养的平衡吸收，提高烟叶质量和肥料利用率，并减少了环境污染。
附图说明
图1是本发明的溶磷菌菌落形态图。
图2是本发明的溶磷菌分生孢子梗形态图。
图3是本发明的溶磷菌分生孢子形态图。
图4是本发明的溶磷菌有效磷含量变化图。
图5是本发明的溶磷菌与另两组菌的水溶磷含量比较图。
图6是本发明的溶磷菌与另两组菌的有效磷含量比较图。
图7是本发明的溶磷菌与另两组菌的水溶磷占有效磷的百分比比较图。
本发明的溶磷菌于2012年3月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
具体实施方式
本发明的溶磷菌通过以下方法制备获得：
1）发酵种子的培养：选取试验室中培养出的纯净、优良的目标菌进行种子罐接种，接种后进行振荡培养或搅拌培养4-5d，测定菌种浓度达到1010以上；培养基为葡萄糖5-15g、硫酸铵0.2 g （或0.8g）、磷酸钙6 g（或12g）、氯化钠0.1 g（或0.5g）、氯化钾0.1 g （或0.5g）、硫酸镁0..1 g（或0.5g）、硫酸亚铁0.01 g（或0.05g）、硫酸锰0.01 g （或0.05g）、蒸馏水1000ml，pH7.0（或7.5）；
2）发酵罐及培养基灭菌：先对发酵罐进行灭菌，冷却后加入培养基，再进行实消，即对培养基灭菌。培养基与上述种子培养基相同，采用蒸汽灭菌，控制压力0.1-0.15Mpa，温度121-125℃左右，灭菌20min-30min，无菌空气保压，自然冷却至25℃；
3）发酵罐接种：将种子液导入发酵罐中，在接种过程中保持发酵罐内正压0.03-0.05Mpa；
4）发酵过程控制：保持温度25℃，发酵罐内压强0.05Mpa，通过温度计及压力表1-2h检测一次温度、压力，通过调节无菌空气加入量调节其溶氧，通过取样口取样检测菌种纯度、含量及pH值；
5）发酵后放料：发酵后期观察发酵液浓度不再变化，则可以进行放料，放料时保持罐内压力0.03-0.06Mpa，放料时进行搅拌，以使料液均匀，放料后溶磷菌产品放置于阴凉干燥处保存或于0-4℃条件下保存。
发酵后得到的发酵液可直接作为农用微生物溶磷菌剂肥料。
试验情况：溶磷菌剂对烤烟生产的影响
针对植烟土壤有机质、微生物区系失衡的问题，从施肥手段补充土壤有机养分，对提高土壤综合肥力，促进土壤中有益微生物的繁殖，提高烟株对矿质营养的平衡吸收，提高烟叶质量和肥料利用率。本次使用的肥料，经好氧充分发酵后生产的具有溶磷、解钾等功能的微生物肥料产品。通过调查其对烤烟经济性状、农艺性状等品质的影响，以期改良土壤品质，提高土壤中有益微生物的数量，调节土壤中的营养平衡，并通过溶磷、解钾等功能微生物的直接作用，释放土壤中的不易被吸收的养分，以提高烟株的营养吸收。
1 材料与方法
1.1、试验材料：云南省微生物发酵工程研究中心有限公司生产的试验一号（溶磷菌剂）农用微生物菌剂，具有溶磷的功效，有效活菌数大于0.2亿/g。
1.2、试验时间：2011年5月16日——2011年10月22日。
1.3、试验地点：宁洱县勐先乡先胜村。
1.4、前作：冬闲地，小春未种植。
1.5、供试品种：云烟87。
1.6、试验土壤：红土，生土回填。
1.7、试验设计：
以施用试验一号（溶磷菌剂）农用微生物菌剂的烟草作为示范，采用当地常规施肥的烟草作为对照。
1.8、施肥量与施肥方法：
移栽后7天内施菌剂80ml/株，其他的措施同当地，统一栽培管理措施。
1.9、生育期调查：
调查不同处理的烟苗移栽期、团棵期、旺长期、现蕾期、打顶期及最后一次采烤的时间
1.10、农艺性状调查：
于团棵期、旺长期、现蕾期、采烤前一天选取长势基本一致的5株烟测量株高、叶长、叶宽。烟株从第一片底脚叶由下至上顺序编号，只测叶长大于5 cm的叶片。
1.11、产质量调查：
根据烟株成熟情况，充分成熟采烤，调查不同处理的产量、产值、均价及中上等烟比例，比较分析各处理的效果。
2 结果与讨论
2.1 农用微生物菌剂对烟草生育期的影响
表一 生育期调查表
| 处理 | 移栽期 | 团棵期 | 旺长期 | 现蕾期 | 打顶期 | 最后一次采烤时间 |
| 试验一号 | 4月18日 | 5月10日 | 5月21日 | 6月18日 | 6月18日 | 8月7日 |
| 常规对照 | 4月18日 | 5月14日 | 5月23日 | 6月21日 | 6月20日 | 8月10日 |
据以上数据显示，试验一号（溶磷菌剂）、试验二号（解钾菌剂）的生育期要略短于常规对照。
2.2 农用微生物菌剂对烟草农艺性状的影响
表二 农艺性状调查表
据以上数据显示，试验田烤烟生育期符合优质烟生长规律，大田长势良好，烟株根系发达、健壮、抗逆性强。施用菌剂的烟株在株高、茎围、叶面积等方面优于常规施肥。
2.3 农用微生物菌剂对烟草经济性状的影响
表三 经济性状统计表
| 处理 | 亩产量 | 亩产值 | 均价 | 上等烟 | 中上等烟 |
| 试验一号 | 126.9 | 2921.24 | 23.02 | 65.33 | 94.95 |
| 常规对照 | 120.8 | 2293.99 | 18.99 | 45.12 | 72.79 |
从以上数据可以看出，施用试验一号（溶磷菌剂）农用微生物菌剂的烟草比常规烟草的亩产量提高5.05%，亩产值提高27.34%，均价提高22.17%，上等烟比例提高44.79%。
3 总结
3.1 综合以上数据认为，施用农用微生物菌剂的烟株不论在农艺性状方面，还是在经济性状方面都具有一定的优势。
3.2 因农用微生物菌剂含有大量有益菌，对土壤改良有一定的积极作用，其所具有的溶磷功能，对改善土壤品质，增强作物对肥料的吸收率等有很大的积极影响。
3.3 施用农用微生物菌剂，对土壤的改良及作物的生长都具有非常大的积极作用。
序 列 表
SEQUENCE LISTING
<110> 云南省微生物发酵工程研究中心有限公司
<120> 一种溶磷菌及其制备方法
<130> /
<160> 2
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 548
<212> DNA
<213> 臭曲霉（Aspergillus foetidus ITS1）
<400> 1
gcacctccca tccgtgtcta ttataccctg ttgcttcggc gggcccgccg cttgtcggcc 60
gccggggggg cgcctttgcc ccccgggccc gtgcccgccg gagaccccaa cacgaacact 120
gtctgaaagc gtgcagtctg agttgattga atgcaatcag ttaaaacttt caacaatgga 180
tctcttggtt ccggcatcaa tgaaaaacgc agcgaaatgc gataactaat gtgaattgca 240
gaattcagtg aatcatcgag tctttgaacg cacattgcgc cccctggtat tccggggggc 300
atgcctgtcc gaacgtcatt gctgccctca agcccggctt gtgtgttggg tcgccgtccc 360
cctctccggg gggacgggcc cgaaaggcag cggcggcacc gcgtccgatc ctcgagcgta 420
tggggctttg tcacatgctc tgtacgattg gtcggcgcct gccgacgttt tccaaccatt 480
ttttccaggt tgacctcgaa tcaggtaggg atacccgctg aacttaagaa tatcaataag 540
cggaggaa 548
<210> 2
<211> 552
<212> DNA
<213> 臭曲霉（Aspergillus foetidus ITS4）
<400> 2
gtcgaggtca cctggaaaaa tggttggaaa acgtcggcag gcgccggcca atcctacaga 60
gcatgtgaca aagccccata cgctcgagga tcggacgcgg tgccgccgct gcctttcggg 120
cccgtccccc cggagagggg gacggcgacc caacacacaa gccgggcttg agggcagcaa 180
tgacgctcgg acaggcatgc cccccggaat accagggggc gcaatgtgcg ttcaaagact 240
cgatgattca ctgaattctg caattcacat tagttatcgc atttcgctgc gttcttcatc 300
gatgccggaa ccaagagatc cattgttgaa agttttaact gattgcattc aatcaactca 360
gactgcacgc tttcagacag tgttcgtgtt ggggtctccg gcgggcacgg gcccgggggg 420
caaaggcgcc cccccggcgg ccgacaagcg gcgggcccgc cgaagcaaca gggtataata 480
gacacggatg ggaggttggg cccaaaggac ccgcactcgg taatgatcct tccgcaggtt 540
cacctacgga ag 552
Claims (3)
1.一种溶磷菌，其特征在于溶磷菌分类命名为臭曲霉Aspergillus foetidus，其保藏登记号为CGMCC No.5857。
2.权利要求1所述的溶磷菌的制备方法，其特征在于按以下步骤进行：
1）发酵种子的培养：选取试验室中培养出的纯净、优良的目标菌进行种子罐接种，接种后进行振荡培养或搅拌培养4-5d，测定菌种浓度达到1010以上；培养基为葡萄糖5-15g、硫酸铵0.2-0.8g、磷酸钙6-12g、氯化钠0.1-0.5g、氯化钾0.1-0.5g、硫酸镁0.1-0.5g、硫酸亚铁0.01-0.05g、硫酸锰0.01-0.05g、蒸馏水1000ml，pH7.0-7.5；
2）发酵罐及培养基灭菌：先对发酵罐进行灭菌，冷却后加入培养基，再进行实消，即对培养基灭菌，培养基与上述种子培养基相同，采用蒸汽灭菌，控制压力0.1-0.15Mpa，温度121-125℃，灭菌20min-30min，无菌空气保压，自然冷却至25℃；
3）发酵罐接种：将种子液导入发酵罐中，在接种过程中保持发酵罐内正压0.03-0.05Mpa；
4）发酵过程控制：保持温度25℃，发酵罐内压强0.05Mpa，通过温度计及压力表1-2h检测一次温度、压力，通过调节无菌空气加入量调节其溶氧，通过取样口取样检测菌种纯度、含量及pH值；
5）发酵后放料：发酵后期观察发酵液浓度不再变化，则进行放料，放料时保持罐内压力0.03-0.06Mpa，放料时进行搅拌，以使料液均匀，放料后溶磷菌产品放置于阴凉干燥处保存或于0-4℃条件下保存。
3.权利要求1所述的溶磷菌的应用，其特征在于溶磷菌发酵液直接作为农用微生物菌剂肥料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210095164.8A CN102618449B (zh) | 2012-04-01 | 2012-04-01 | 一种溶磷菌及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210095164.8A CN102618449B (zh) | 2012-04-01 | 2012-04-01 | 一种溶磷菌及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102618449A CN102618449A (zh) | 2012-08-01 |
| CN102618449B true CN102618449B (zh) | 2014-05-28 |
Family
ID=46558663
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210095164.8A Active CN102618449B (zh) | 2012-04-01 | 2012-04-01 | 一种溶磷菌及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102618449B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103146579B (zh) * | 2013-02-21 | 2015-08-26 | 云南云叶化肥股份有限公司 | 一种有机肥发酵菌剂及其应用 |
| CN103361277B (zh) * | 2013-06-17 | 2014-08-20 | 湖南省微生物研究所 | 一株溶磷白地霉p14及其应用方法和制备的菌剂 |
| CN103449863B (zh) * | 2013-08-01 | 2015-07-22 | 湖北诺克特药业股份有限公司 | 一种中药药渣堆肥快速发酵生产有机肥的方法 |
| CN105330420A (zh) * | 2015-11-13 | 2016-02-17 | 云南云之叶生物科技有限公司 | 一种含氨基酸、腐植酸、烟碱的生物功能有机-无机复混肥料及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1834222A (zh) * | 2006-03-31 | 2006-09-20 | 浙江大学 | 臭曲霉菌株及其用途 |
| CN101497864A (zh) * | 2009-02-27 | 2009-08-05 | 云南省烟草科学研究所 | 一种提高烟叶质量的生物菌剂 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0730656A1 (en) * | 1993-12-01 | 1996-09-11 | Novo Nordisk Biotech, Inc. | $i(ASPERGILLUS FOETIDUS) EXPRESSION SYSTEM |
-
2012
- 2012-04-01 CN CN201210095164.8A patent/CN102618449B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1834222A (zh) * | 2006-03-31 | 2006-09-20 | 浙江大学 | 臭曲霉菌株及其用途 |
| CN101497864A (zh) * | 2009-02-27 | 2009-08-05 | 云南省烟草科学研究所 | 一种提高烟叶质量的生物菌剂 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102618449A (zh) | 2012-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102876608B (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN103146610B (zh) | 一株植物根际促生菌及其应用 | |
| CN102399713B (zh) | 枯草芽孢杆菌hl-1及其在土壤解磷方面的应用 | |
| CN104805019B (zh) | 一株能促进千年桐营养元素吸收的内生真菌 | |
| CN109666608A (zh) | 一种花生根际荧光假单胞菌及其应用 | |
| CN111484946A (zh) | 一种产iaa的耐高温芽孢杆菌及其应用 | |
| CN102618449B (zh) | 一种溶磷菌及其制备方法和应用 | |
| CN111484951A (zh) | 一种解磷固氮的芽孢杆菌及其在促生上的应用 | |
| CN104004666B (zh) | 一株能促进杉木生长的内生真菌 | |
| CN103468591B (zh) | 一株耐盐侧耳木霉及其应用 | |
| CN115029278A (zh) | 一株巨大芽孢杆菌及其促作物生长的应用 | |
| CN103243059B (zh) | 一株具有荧蒽降解能力的产吲哚乙酸耐盐节杆菌及其应用 | |
| CN102747006B (zh) | 一种解钾菌及其制备方法和应用 | |
| CN111484949A (zh) | 一种促生解磷固氮的耐热芽孢杆菌及其应用 | |
| CN106929433B (zh) | 解磷青霉菌及其应用 | |
| CN103114043B (zh) | 一种高效解磷青霉及其在促进马尾松生长中的应用 | |
| CN106367359B (zh) | 一种黑曲霉及其在发酵橡实制备柠檬酸中的应用 | |
| CN103114057B (zh) | 一株高效降解纤维素的门多萨假单孢菌 | |
| CN104593301A (zh) | 一株壁芽孢杆菌g1及其制备方法和应用 | |
| CN114933978B (zh) | 一种丛枝菌根真菌培养基质 | |
| CN110907600A (zh) | 植烟土壤微生态环境测定方法 | |
| CN111484948A (zh) | 一种促生根的解磷固氮芽孢杆菌及其应用 | |
| CN113151008B (zh) | 利用内生真菌提高西瓜养分利用效率的方法 | |
| CN106967615A (zh) | 一株赤霉菌及其应用 | |
| CN104789481A (zh) | 在低磷环境下促进千年桐生长和光合作用增强的内生真菌 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A phosphorus solubilizing bacterium and its preparation method and application Effective date of registration: 20231120 Granted publication date: 20140528 Pledgee: Kunming Dongfeng Sub branch of Bank of China Ltd. Pledgor: MICROBIAL FERMENTATION ENGINEERING RESEARCH CENTER Co.,Ltd. OF YUNNAN PROVINCE Registration number: Y2023530000066 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |