CN102614428B

CN102614428B - 一种用于治疗肝纤维化的中草药散剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102614428B
Application number: CN 201210136715
Authority: CN
Inventors: 王旭东; 于莉英
Original assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Current assignee: Nanjing University of Chinese Medicine
Priority date: 2012-05-04
Filing date: 2012-05-04
Publication date: 2013-08-07
Anticipated expiration: 2032-05-04
Also published as: CN102614428A

Abstract

本发明涉及临床用于治疗肝纤维化的中草药散剂及其制备方法，属于医药技术领域。所述的治疗肝纤维化的中草药散剂，是由下列质量份的物质组成：莱菔子10－15份、炒麦芽30－35份、全蝎8－13份、怀牛膝10－15份、三七粉10－15份、琥珀末2－7份、乌梅10－15份。本发明选材科学，配方合理，制备的工艺方法简单。制备的治疗肝纤维化的中药复方制剂，服用简便、疗效明显、经济安全，是治疗肝纤维化的理想内服药。

Description

一种用于治疗肝纤维化的中草药散剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及临床用于治疗肝纤维化的中草药散剂及其制备方法，属于医药技术领域。

背景技术

肝纤维化是临床中常见的慢性进行性肝病，是由一种或多种致病因素长期反复作用而形成的弥漫性肝损害。它既是一种病理状态，又是一组临床和病理学的综合征。各种致病原可以引起肝脏损害和炎症反应，使肝组织免疫系统被激活，进而进行组织修复。当这种组织修复过程过度和失控时，肝组织内的细胞外基质将过度增生及异常沉积，使肝脏的结构和肝功能发生了异常改变，最终导致肝纤维化发生。肝纤维化是从慢性肝病发展到肝硬化的必经阶段，是发展至肝硬化甚至是原发性肝癌的中间环节。肝纤维化及其终极阶段的肝硬化都是世界性的重大公共卫生难题。现已研究证实，肝硬化可能是不可逆的，但HF是可逆的。如果能够在演变成肝硬化之前，采用一些手段阻断或者逆转HF的发生和发展，这必将对各种慢性肝病的治疗产生重大的影响，进而提高慢性肝病患者的生存质量，并能延长他们的生存期限。

西医在药物治疗方面存在着不尽如人意的地方，有些药物虽然是具有一定的抗纤维化的作用，但是其作用的靶器官往往不仅仅限于肝脏，所以长期的服用副作用大，安全性不能确定，整体抗肝纤维化的治疗效果就难以获得公认，不适宜单独地用于抗纤维化的治疗。即使是一些药物通过抗病毒作用间接的起到抗肝纤维化的作用，但是病毒也不能够完全的被清除，依然存在炎症、坏死及纤维化，继续激活肝星状细胞，导致肝纤维化进一步的发展。对于肝纤维化的治疗迄今仍无理想的药物。

近年来的中医临床研究逐渐发现“肝积、脾积”与肝纤维化密切相关，寒痰积聚，气滞血瘀，阳气不足是其发生的病理关键，因此治疗采用温散气滞、攻下寒痰、温通血脉的温散治法。

一种用于治疗肝纤维化的中草药散剂，处方源于金元时期李东垣所创制的脾积丸以及《世医得效方》中记载的酒积丸、《太平惠民和剂局方》中的酒癥丸等大量治疗肝积、脾积的方剂药物。本方的药物组成包括消积药和活血药两个部分，其中莱菔子、炒麦芽是中医历代常用的消导积滞的药物；三七、牛膝、琥珀是活血化瘀的药物，其中琥珀还有很好的通淋消积的作用，可以通过小便排出代谢废物；三七可以通络行血，使全方中的药物能够畅行血脉，起到了调和的作用；全蝎能够搜风剔络，引领药物搜剔络脉，这是符合“久病入络”的病机的，而且肝硬化等慢性肝病较易出现手足搐搦、震颤等“风”症的表现，而全蝎可以入肝络，除肝风。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于治疗肝纤维化的中草药散剂及其制备方法。

本发明所说的用于治疗肝纤维化的中草药散剂，是由下列质量份的物质组成：莱菔子10－15份、炒麦芽30－35份、全蝎8－13份、怀牛膝10－15份、三七粉10－15份、琥珀末2－7份、乌梅10－15份。

一种用于治疗肝纤维化的中草药散剂的制备方法是：将上述配方量的各组分分别研成粉末混和均匀。装胶囊，每粒胶囊含生药0.5g。

本发明选材科学，配方合理，制备的工艺方法简单。制备的治疗肝纤维化的中药复方制剂，服用简便、疗效明显、经济安全，是治疗肝纤维化的理想内服药。

附图说明

图1是正常对照组病理组织变化。

图2是模型组组病理组织变化。

图3是秋水仙碱组病理组织变化。

图4是低剂量组病理组织变化。

图5是中剂量组病理组织变化。

图6是高剂量组病理组织变化。

具体实施方式

机理研究

1肝纤维化动物模型的建立

适应性饲养一周。称重，腹腔注射40%的四氯化碳石蜡油造模剂，首次0.5ml/100g体重，之后每次为0.3ml/100g体重，每周2次，正常对照组注射等量0.9％氯化钠注射液。进行4周造模之后改为每周1次。再进行8周，共进行12周，造模并以10%的酒精作为以上造模组的唯一饮料。正常对照组给以生理盐水。

2动物分组

根据随机数字表将造模成功的大鼠60只随机分为模型组、秋水仙碱片组、肝积散低剂量组、肝积散中剂量组、肝积散高剂量组。共5组，每组12只。另设正常对照组，大鼠12只。

3动物喂养与给药

本发明中草药散剂的制备：

配方1（低端值）：莱菔子0.050g、炒麦芽0.15g、全蝎0.040g、怀牛膝0.050g、三七粉0.050g、琥珀末0.010g、乌梅0.050g，分别研磨为粉末，混和均匀。

配方2（高端值）：莱菔子0.075g、炒麦芽0.175g、全蝎0.065g、怀牛膝0.075g、三七粉0.075g、琥珀末0.035g、乌梅0.075g，分别研磨为粉末，混和均匀。

实验过程中，动物自由进食、饮水，喂标准颗粒饲料，由专人照管，室温18~22℃，相对湿度40~60％，自然光线。造模进行4周之后随机抽取10只处死，证实肝纤维化模型已经建立成功之后开始进行灌胃给药治疗。具体方法如下：模型组和正常对照组给予蒸馏水1.5ml/100g体重，秋水仙碱片组按每只0.01mg/100g，肝积散低剂量治疗组给予本发明中草药散剂0.05g/200g，肝积散中剂量治疗组给予本发明中草药散剂0.1g/200g，肝积散高剂量治疗组给予本发明中草药散剂0.2g/200g。按1mL/100g分别灌胃给药，每天一次，共治疗8周，每周称重一次，调整用药剂量。

4标本收集

治疗8周后，眼球后取血后处死大鼠。统一留取大鼠肝右叶标本置于10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋切片HE染色。

5检测指标

5.1光镜下行肝组织切片，HE染色观察肝纤维化的形成；

5.2赖氏法测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平。

5.3测定大鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量

5.4ELISA法测定大鼠血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCIII)的含量

5.5ELISA法检测大鼠血清中转化生长因子β1（TGF-β1）的表达

6统计学处理

数据分析采用SPSS13.0软件进行处理，计量资料采用均数±标准差（x±s），两个样本的均数比较采用t检验，多个样本的均数比较则采用单因素方差分析，P＜0.05即为有统计学意义。

7结果

7.1病理组织变化

①正常对照组：如图1，本组8例肝脏肝细胞索排列较整齐,未见水样变性及脂肪变性，未见纤维结缔组织增生及假小叶形成，枯否氏细胞未见增生,毛细血管及汇管区内胆管未见胆汁淤积，汇管区未见纤维组织增生及炎性细胞浸润。

②模型组：如图2，本组4/8例肝脏均可见肝细胞水样变性和脂肪变性（+++），纤维结缔组织增生（++），形成假小叶，炎细胞浸润（++），余4/8例肝脏可见肝细胞水样变性和脂肪变性（++），纤维结缔组织增生（+），炎细胞浸润（+）。

③秋水仙碱组：如图3，本组3/8例肝脏均可见肝细胞水样变性和脂肪变性（++），纤维结缔组织增生（+），炎细胞浸润（+），余5/8例肝脏可见肝细胞脂肪变性（+），炎细胞浸润（+）。

④肝积散高剂量组：如图4，本组2/8例肝脏均可见肝细胞水样变性和脂肪变性（++），纤维结缔组织增生（+），炎细胞浸润（+），4/8例肝脏可见肝细胞脂肪变性（+），炎细胞浸润（+），余2/8例肝脏可见汇管区炎细胞浸润（+）。

⑤肝积散中剂量组：如图5，本组3/8例肝脏均可见肝细胞水样变性和脂肪变性（++），纤维结缔组织增生（++），炎细胞浸润（+），余5/8例肝脏可见肝细胞脂肪变性（+），炎细胞浸润（+）。

⑥肝积散低剂量组：如图6，本组4/8例肝脏均可见肝细胞水样变性和脂肪变性（++），纤维结缔组织增生（+），炎细胞浸润（+），余4/8例肝脏可见肝细胞脂肪变性（+），炎细胞浸润（+）。

7.2肝积散（低端值）对肝纤维化大鼠血清ALT、AST的影响（见表1-1）；肝积散（高端值）对肝纤维化大鼠血清ALT、AST的影响（见表1-2）

表1-1肝积散（低端值）对肝纤维化大鼠血清ALT、AST的影响

与正常对照组比较，△P＜0.05△△＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05**P＜0.01。

表1-2肝积散（高端值）对肝纤维化大鼠血清ALT、AST的影响

7.3肝积散（低端值）对肝纤维化大鼠血清SOD、MDA的影响（见表2-1）；肝积散（高端值）对肝纤维化大鼠血清SOD、MDA的影响（见表2-2）

表2-1肝积散（低端值）对肝纤维化大鼠血清SOD、MDA的影响

表2-2肝积散（高端值）对肝纤维化大鼠血清SOD、MDA的影响

7.4肝积散（低端值）对肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCIII的影响（见表3-1）；肝积散（高端值）对肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCIII的影响（见表3-2）

表3-1肝积散（低端值）对肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCIII的影响

表3-2肝积散（高端值）对肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCIII的影响

7.5肝积散（低端值）对血清中转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响（见表4-1）；肝积散（高端值）对血清中转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响（见表4-2）

表4-1肝积散（低端值）对血清中转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响

表4-2肝积散（高端值）对血清中转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响

8结论

8.1根据病理组织切片所示，本研究所有造模大鼠肝脏均可见不同程度的肝细胞水样变性和脂肪变性、纤维结缔组织增生、炎细胞浸润，表明本研究造模成功。各治疗组肝组织形态学检查较模型组均有改善，由高到低依次为：高剂量组、秋水仙碱组、中剂量组、低剂量组。

8.2肝积散对肝纤维化大鼠血清ALT、AST的影响

肝细胞的损伤与肝脏的炎症是肝纤维化的启动因素，肝细胞受到损伤以后可以通过局部各种递质的释放而引起炎症反应，而炎症反应又可以通过自分泌和旁分泌的途径刺激肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSC)，导致ECM的重建和纤维瘢痕的形成。因此，寻找能够有效的防止肝细胞的变性和坏死，恢复变性细胞的结构，恢复肝细胞的功能以及抑制炎症反应的药物，将是阻断肝纤维化发生和发展的重要环节。本实验中各治疗组均可使升高的ALT、AST趋于正常，其中降低ALT疗效由高到低依次为：中剂量组、高剂量组、低剂量组、秋水仙碱组；降低AST疗效由高到低依次为：中剂量组、高剂量组、秋水仙碱组、低剂量组。提示肝积散能够防止肝细胞的变性、坏死，恢复变性细胞的结构，恢复肝细胞的功能及抑制炎症反应，从而防止肝纤维化进一步发展。

8.3肝积散对肝纤维化大鼠血清SOD、MDA的影响

肝脏是机体物质代谢的中枢,在正常的代谢过程中,肝脏内存在着自由基反应,而且肝脏还是脂质过氧化物被降解的主要场所。因此,当肝脏发生病变、肝细胞受到损伤时,就必然导致自由基代谢的紊乱。自由基除了能够直接作用于各种信号分子,促使HSCs的增殖与活化,促使其合成和分泌大量的细胞外基质，诱导肝纤维化发生之外,还能够攻击肝细胞的各种膜结构,引起脂质过氧化的链式反应,导致肝细胞的损伤和坏死,最终导致肝纤维化形成。因此,脂质过氧化已被认为是肝脏的炎性损伤发展至肝纤维化的桥梁,而抗氧化剂的治疗可以预防(减轻)肝纤维化的程度。本实验中各治疗组均可升高SOD的活性、降低MDA含量，其中升高SOD活性疗效由高到低依次为：中剂量组、高剂量组、秋水仙碱组、低剂量组；降低MDA含量疗效由高到低依次为：中剂量组、秋水仙碱组、高剂量组、低剂量组。提示肝积散能显著增强大鼠模型血清SOD的活性、降低MDA的含量,表明抗脂质过氧化是肝积散防治肝纤维化的机制之一。

8.4抗肝纤维化的中草药散剂对肝纤维化大鼠血清HA、LN、PCIII的影响

肝纤维化是慢性肝脏病变发展至肝硬化的中间阶段,肝组织中的胶原、非胶原糖蛋白及蛋白聚糖都明显的增加,检测血清中的肝纤维化标志物可以在一定程度上反映肝纤维化的进展情况。血清中HA、LN及PCIII的水平是随着肝组织的炎症和坏死及肝纤维化程度的加重而升高的。本实验中各治疗组降低HA含量疗效由高到低依次为：高剂量组、中剂量组、秋水仙碱组、低剂量组；降低LN含量疗效由高到低依次为：中剂量组、低剂量组、秋水仙碱组、高剂量组；降低PCⅢ含量疗效由高到低依次为：中剂量组、高剂量组、秋水仙碱组、低剂量组。提示肝积散具有调节细胞外基质（ECM）代谢的作用，即抑制ECM合成，或促进其降解，

8.5抗肝纤维化的中草药散剂对血清中转化生长因子β1（TGF-β1）表达的影响

近年来的研究发现,肝星状细胞(HSC)是肝纤维化形成的关键环节。HSC被激活后大量的增殖,而且分泌纤维的能力增强,生成大量的细胞外基质(ECM),自分泌出CTGF、TGF-β1等细胞因子用以维持其自身的活化状态。TGFβ1又能够特异性的诱导HSC产生CTGF,而CTGF作为HSC下游效应介质可以增强TGFβ1对成纤维细胞及HSC的作用,刺激HSC和成纤维细胞的增殖，促进ECM的合成和分泌。因此，减少CTGF和TGF-β1的分泌是减少ECM合成与分泌的一种方法。本实验中各治疗组降低TGF-β1含量疗效由高到低依次为：高剂量组、中剂量组、低剂量组、秋水仙碱组。提示本抗肝纤维化的中草药散剂能够抑制血清中TGF-β1的表达。

Claims

1.一种治疗肝纤维化的中草药散剂，其特征在于是由下列质量份的物质组成：莱菔子10－15份、炒麦芽30－35份、全蝎8－13份、怀牛膝10－15份、三七粉10－15份、琥珀末2－7份、乌梅10－15份。

2.一种制备权利要求1所述治疗肝纤维化的中草药散剂的方法是：将配方量的各组分分别研粉末，混和均匀。