CN102614222A - 一种富含三萜类皂苷元的海参提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
一种富含三萜类皂苷元的海参提取物及其制备方法和用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种富含三萜类皂苷元的海参提取物及其制备方法和用途。所述的海参提取物中含三萜类皂苷元的质量百分比达50％以上。所述提取物的制备包括乙醇提取、大孔树脂柱洗脱、酸水解和有机溶剂萃取等步骤。药理试验证明本发明提供的富含三萜类皂苷元的海参提取物，在体内具有较强的降尿酸作用，可以显著降低血尿酸值和抑制黄嘌呤氧化酶的活性，且由于水解掉了皂苷的糖配基，不再具有表面活性特性，因此也显著降低了细胞毒性；可望开发成预防和/或治疗高尿酸血症的药物制剂，具有药用前景；另外，本发明的制备方法简单，无需特殊设备和苛刻工艺条件，制备成本低，符合工业化批量生产要求，具有实用价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种海参提取物及其制备方法和用途，具体说，是涉及一种含三萜类皂苷元的质量百分比达50％以上的海参提取物及其制备方法和用途，属于中药技术领域。
背景技术
海参为棘皮动物门(Echinodermata)海参纲(Holothuroidea)动物，全世界共有1100余种，其中40多种可以食用。因“其性温补，足胜人参”而得名。海参味美可口，营养丰富，有较高的药用价值。明代以后，收入《本草纲目》，列为补益类药。
海参皂苷是海参的主要次生代谢产物，也是其化学防御的物质基础。从上世纪四五十年代日本科学家Nigrelli和Yamanouchi分离出两个三萜皂苷开始，迄今已有100余种三萜皂苷被分离鉴定，他们有抗真菌、抗病毒、抗放射、免疫调节、降脂、降尿酸等多种药理活性。但韩玉谦等人研究报道【“海参皂甙的研究进展”，天然产物研究与开发，2005，17(5)：669-672】：海参皂苷在体内外有细胞毒性，其原因是海参皂苷具有表面活性剂的特征，会对细胞产生溶血性。
发明内容
针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是提供一种富含三萜类皂苷元的海参提取物及其制备方法和用途，实现海参提取物在保健品和药品中的广泛应用。
本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其特征在于：所述提取物中含三萜类皂苷元的质量百分比达50％以上。
一种所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)用乙醇水溶液对海参原料进行提取；
b)减压浓缩干提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱，收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份；
d)减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，用酸水解所得浸膏；
e)用有机溶剂萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的有机溶剂，然后干燥，得到的固体粉末即为所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物。
所述的海参原料可以为刺海参、海地瓜或北极刺参。
作为一种优选方案，用于提取的乙醇水溶液的体积百分比浓度为20％～70％；每次提取时，1克海参原料所用乙醇水溶液的体积为5～50毫升。
作为进一步优选方案，所述提取为浸渍提取或回流提取，共提取1～3次。
作为一种优选方案，用于洗脱的70％的乙醇水溶液的体积为柱体积的3～10倍。
作为一种优选方案，步骤d)中用于水解的酸是质量百分比浓度为1％～5％的硫酸或盐酸水溶液。
作为进一步优选方案，进行酸水解的条件是加热水解或加热加压水解。
作为一种优选方案，步骤e)中用于萃取水解液的有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲烷。
一种所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的用途，是以其作为活性成分用于制备预防和/或治疗高尿酸血症的药物制剂。
所述的药物制剂形式是任何可药用的口服剂型或注射剂，包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、注射液、粉针剂等。
使用本发明的制备方法可获得含三萜类皂苷元的质量百分比达50％以上的海参提取物，药理试验证明所述提取物在体内具有较强的降尿酸作用，可以显著降低血尿酸值和抑制黄嘌呤氧化酶的活性，且由于水解掉了皂苷的糖配基，不再具有表面活性特性，因此也显著降低了细胞毒性；可望开发成预防和/或治疗高尿酸血症的药物制剂，具有药用前景；另外，本发明的制备方法简单，无需特殊设备和苛刻工艺条件，制备成本低，符合工业化批量生产要求，具有实用价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细、完整地说明，但并不因此限制本发明；本领域的技术人员根据下述内容所作的一些非本质的改进或替换均属于本发明的保护范围。
下述实施例是参照文献：“海峡预防医学杂志，2008，14(3)，46～47：分光光度法测定灵芝孢子粉中总三萜含量”中所述方法进行三萜类皂苷元含量的测定。
实施例1
a)用体积浓度为70％的乙醇水溶液对切片刺海参进行浸渍提取：浸渍温度为65℃，每次浸渍时1克刺海参用70％的乙醇水溶液50毫升；每次浸渍时间为12小时，共浸渍提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为1％的硫酸水溶液，加热煮沸水解24小时；
e)用乙酸乙酯萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为57％。
实施例2
a)用体积浓度为50％的乙醇水溶液对切片刺海参进行回流提取：每次提取时，1克刺海参用50％的乙醇水溶液25毫升；每次回流时间为5小时，共回流提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为3％的硫酸水溶液，加热煮沸水解10小时；
e)用乙酸乙酯萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为61％。
实施例3
a)用体积浓度为60％的乙醇水溶液对切片刺海参进行浸渍提取：浸渍温度为15℃，每次浸渍时1克刺海参用60％的乙醇水溶液50毫升；每次浸渍时间为24小时，共浸渍提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为5％的硫酸水溶液，加热煮沸水解4小时；
e)用二氯甲烷萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为62％。
实施例4
a)用体积浓度为60％的乙醇水溶液对切片海地瓜进行回流提取：每次提取时，1克海地瓜用60％的乙醇水溶液50毫升；每次回流时间为2小时，共回流提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为5％的盐酸水溶液，于高压锅内，120℃、0.1MPa下水解1小时；
e)用乙酸乙酯萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为59％。
实施例5
a)用体积浓度为70％的乙醇水溶液对切片海地瓜进行回流提取：每次提取时，1克海地瓜用70％的乙醇水溶液50毫升；每次回流时间为1小时，共回流提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为5％的盐酸水溶液，加热煮沸水解3小时；
e)用乙酸乙酯萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为55％。
实施例6
a)用体积浓度为50％的乙醇水溶液对切片海地瓜进行回流提取：每次提取时，1克海地瓜用50％的乙醇水溶液50毫升；每次回流时间为2小时，共回流提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为5％的盐酸水溶液，加热煮沸水解3小时；
e)用乙酸乙酯萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的乙酸乙酯，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为53％。
实施例7
a)用体积浓度为70％的乙醇水溶液对切片北极刺参进行回流提取：每次提取时，1克北极刺参用70％的乙醇水溶液50毫升；每次回流时间为1小时，共回流提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为3％的硫酸水溶液，于高压锅内，120℃、0.1MPa下水解1小时；
e)用二氯甲烷萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为55％。
实施例8
a)用体积浓度为60％的乙醇水溶液对切片北极刺参进行回流提取：每次提取时，1克北极刺参用60％的乙醇水溶液50毫升；每次回流时间为2小时，共回流提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为5％的盐酸水溶液，加热煮沸水解3小时；
e)用二氯甲烷萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为54％。
实施例9
a)用体积浓度为50％的乙醇水溶液对切片北极刺参进行回流提取：每次提取时，1克北极刺参用50％的乙醇水溶液50毫升；每次回流时间为4小时，共回流提取3次；
b)减压蒸馏除去提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用柱体积3～10倍量的体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱；
d)收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份，减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，加入质量百分比浓度为5％的盐酸水溶液，加热煮沸水解3小时；
e)用二氯甲烷萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的二氯甲烷，真空或冷冻干燥，得到的固体粉末即为本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物，其中含三萜类皂苷元的质量百分比为54％。
实施例10
应用黄嘌呤氧化酶活性测定方法，测定各样品在体外对黄嘌呤氧化酶活性的影响。
通过酶动力学试验测试得知：含三萜类皂苷元的质量百分比为95％的海参提取物样品(是经过对实施例3制备的海参提取物进一步应用硅胶柱层析纯化而得)的半数抑制剂量(IC50)为5μg/mL；含三萜类皂苷元的质量百分比为53％的海参提取物样品(由实施例6获得)的半数抑制剂量(IC50)为25μg/mL；说明本发明所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物具有抑制黄嘌呤氧化酶活性的显著作用。
实施例11
制备两种小鼠高尿酸血症模型：一种是利用尿酸生成的前体物质次黄嘌呤为模型药物，制备小鼠高尿酸血症模型；另一种是利用尿酸酶(此酶只在鼠类存在，而人体中没有)抑制剂氧嗪酸钾作为模型药物，制备小鼠高尿酸血症模型(此模型为国际公认的高尿酸血症模型)；观察各用药组在体内的降尿酸作用，具体结果见表1和表2所示。
表1各用药组对次黄嘌呤造成的小鼠高尿酸血症模型的影响
注：**P＜0.01vs模型+生理盐水组
表2各用药组对氧嗪酸钾造成的小鼠高尿酸血症模型的影响
注：*P＜0.05，**P＜0.01vs模型+生理盐水组
综上所述可见：本发明所提供的富含三萜类皂苷元的海参提取物在体内具有较强的降尿酸作用，可以显著降低血尿酸值和抑制黄嘌呤氧化酶的活性，且由于水解掉了皂苷的糖配基，不再具有表面活性特性，因此也显著降低了细胞毒性；可望开发成预防和/或治疗高尿酸血症的药物制剂，具有药用前景。
Claims (10)
1.一种富含三萜类皂苷元的海参提取物，其特征在于：所述提取物中含三萜类皂苷元的质量百分比达50％以上。
2.一种权利要求1所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a)用乙醇水溶液对海参原料进行提取；
b)减压浓缩干提取液中的乙醇，然后加适量水稀释浓缩液，得粗提液；
c)上大孔树脂柱，先用水洗脱到无色，再用体积浓度为70％的乙醇水溶液洗脱，收集用体积浓度为70％的乙醇水溶液进行洗脱的流份；
d)减压浓缩干所收集流份中的乙醇至浸膏，用酸水解所得浸膏；
e)用有机溶剂萃取水解液，减压浓缩干萃取液中的有机溶剂，然后干燥，得到的固体粉末即为所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物。
3.根据权利要求2所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于：所述的海参原料为刺海参、海地瓜或北极刺参。
4.根据权利要求2所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于：用于提取的乙醇水溶液的体积百分比浓度为20％～70％；每次提取时，1克海参原料所用乙醇水溶液的体积为5～50毫升。
5.根据权利要求4所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于：所述提取为浸渍提取或回流提取，共提取1～3次。
6.根据权利要求2所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于：用于洗脱的70％的乙醇水溶液的体积为柱体积的3～10倍。
7.根据权利要求2所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于：步骤d)中用于水解的酸是质量百分比浓度为1％～5％的硫酸或盐酸水溶液。
8.根据权利要求7所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于：进行酸水解的条件是加热水解或加热加压水解。
9.根据权利要求2所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的制备方法，其特征在于：步骤e)中用于萃取水解液的有机溶剂为乙酸乙酯或二氯甲烷。
10.一种权利要求1所述的富含三萜类皂苷元的海参提取物的用途，其特征在于：以其作为活性成分用于制备预防和/或治疗高尿酸血症的药物制剂。
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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