CN102608226B - 一种快速测定曲或酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯的方法 - Google Patents

一种快速测定曲或酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速测定固态发酵物（曲或者酒醅或发酵醪）中氨基甲酸乙酯EC的方法，采用超声萃取，顶空-固相微萃取技术富集固态发酵物中的氨基甲酸乙酯，无需繁琐的预处理过程及有机溶剂，再用气相色谱-质谱联用技术进行定量检测，对照标准曲线计算固态发酵物中的EC含量。本发明建立的方法能够快速检测并定量固态发酵物中的氨基甲酸乙酯，检测限低至1.16μg/L，线性相关系数大于0.99，回收率为77%-119%，相对标准偏差0.91%-13.63%。本方法采用以往白酒酒曲和酒醅的常用处理方法——超声萃取，结合先进的定量检测技术HS-SPME，用于固态发酵物中氨基甲酸乙酯的定量检测分析。

Description

一种快速测定曲或酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯的方法
技术领域
一种针对固态发酵物：曲或酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯的快速检测方法。具体步骤涉及应用超声萃取及顶空固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术检测固态发酵物中氨基甲酸乙酯的方法，属于分析检测技术领域。
背景技术
存在于固态发酵物中的氨基甲酸乙酯（Ethyl carbamate，简称EC）含量甚微，大多在几十μg/L到几百μg/L。在有关白酒酒曲和酒醅的处理方法中，预处理方法都是采用超声萃取，本发明将传统的预处理方法与最先进的顶空固相微萃取与气相色谱-质谱检测用于固态发酵物的定量分析。
发明内容
本发明的目的是提供一种简单快速测定固态发酵物中EC的方法。
本发明的技术方案：一种快速测定固态发酵物曲、酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯EC的方法，对固态发酵物进行超声萃取，离心取上清液置于顶空瓶中，加入内标溶液PC，再加入氯化钠饱和，旋紧瓶盖，插入萃取头搅拌吸附，萃取富集EC，再用气相色谱-质谱联用技术进行定量分析；步骤为：
（1）超声萃取：取10 g固态发酵物，加入20 mL实验专用水，浸泡30 min，超声萃取30 min，离心取上清；
（2）顶空固相微萃取：吸取上述超声萃取后上清液8 mL置于20 mL的顶空瓶中，加入5 μL乙醇配制的内标溶液PC，加入3 g氯化钠，旋紧瓶盖，插入萃取头，在50-70℃下250 rpm恒温搅拌萃取30-60 min；
（3）气相色谱-质谱联用检测：萃取完毕后将萃取头取出，插入气相色谱进样口250℃热解吸5 min，毛细管柱为DB-WAX或HP-5，载气为He，流速2 mL/min；不分流进样；程序升温：50℃恒温2 min，以5℃/min的速度升温至170℃，再以10℃/min的速度升温至230℃，保持5 min；MS条件为EI电离源，电子能量70 eV，离子源温度230 °C，扫描范围35.00~350.00 amu，SIM模式特征离子62；通过将样品和标准品的保留时间对比来确认目标物EC以及内标物PC峰；
DB-WAX毛细管柱为：60或30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm；
HP-5毛细管柱为：60或30m×0.25 mm i.d.×0.25 μm；
（4）标准曲线的建立：制作标准曲线所用的一系列EC浓度的溶液，先用EC标准品和色谱纯无水乙醇配制而成的高浓度EC溶液作为储藏液，其他浓度梯度EC溶液均用储藏液逐步稀释所得；将上述稀释后的EC溶液加入到实验专用水中，加入内标溶液PC，顶空固相微萃取富集，最后进行GC-MS定量检测，以EC与PC峰面积之比为横坐标，EC与PC的浓度比为纵坐标，绘制标准曲线；各项参数见表1。
（5）酒曲、酒醅或发酵醪样品测定：对样品采用浸泡、超声萃取预处理，离心后取上清液，然后用顶空固相微萃取技术富集上清液中的EC，再用气相色谱-质谱联用进行定性定量分析，根据样品中EC/PC的面积比，对照标准曲线计算样品中EC的含量。
所述萃取头为PDMS、 PA、PDMS/DVB、或DVB/CAR/PDMS。
表1 EC定量方法的线性及检测限
R 2 n 线性范围（μg/L） 线性方程 LOD（μg/L）
0.992 8 6.25~600 y = 5.4604x－0.1255 1.16
酒曲、酒醅样品测定：对样品采用浸泡、超声萃取预处理，离心后取上清液，然后用顶空固相微萃取技术富集上清液中的EC，再用气相色谱-质谱联用进行定性定量分析，图1为示例色谱图。根据样品中EC与PC的面积比，对照标准曲线计算样品中EC的含量。
主要试剂与材料：
氨基甲酸乙酯（EC）、氨基甲酸丙酯（PC）：购于上海安谱科学仪器有限公司；
氯化钠：购于中国医药集团上海化学试剂公司；
实验专用水：超纯水（Milli-Q 系统, Millipore，Badford，MA，USA）煮沸5~10分钟冷却；
酒曲、酒醅样品：由国内相应酒厂提供；
主要仪器：
旋转蒸发仪、固相微萃取头PDMS、 PA、PDMS /DVB、DVB/CAR/PDMS：购于上海安谱科学仪器有限公司；
气相色谱质谱联用仪：GC 6890N-MSD 5975，美国Agilent公司；
毛细管柱DB-WAX（60或30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm）：上海安谱科学仪器有限公司；
毛细管柱HP-5(60或30m×0.25 mm i.d.×0.25 μm)：美国Agilent公司。
回收率测定：通过对6种不同香型的白酒酒醅中添加EC标准品进行回收率测定，重现性实验中每个样品平行3次。结果见表2。
表2 方法精密度( n = 3)和回收率
样品 酒醅1 酒醅2 酒醅3 酒醅4 酒醅53 酒醅6
RSD（%） 8.55 3.90 13.63 10.04 6.49 0.91
回收率（%） 91 127 132 110 115 133
酒曲、酒醅样品测定：选取6种白酒酒曲、酒醅，超声萃取后进行固相微萃取以及气相色谱-质谱联用定量分析。表3中列出了6种酒曲和酒醅中EC的含量。
本发明的有益效果：本发明采用顶空固相微萃取与气相色谱-质谱联用技术，建立了快速简便检测固态发酵物中EC的方法，简单的浸泡、超声萃取预处理后，采用固相微萃取与自动进样技术快速高效，自动化程度高，且无需有机溶剂，低碳环保。建立的方法能够快速检测并准确定量固态发酵物中的EC。以PC为内标，检测限1.16 μg/L，线性相关性系数大于0.99，回收率为77%~119%，相对标准偏差0.91%-13.62%。该方法可用于固态发酵物中EC的定量检测。
附图说明
图1标准品及样品中EC及内标PC的分离色谱图。
具体实施方式
实施例1 固态发酵物中EC的快速测定
取10 g固态发酵物，加入20 mL煮沸处理的超纯水，放置30 min，每隔10 min摇晃一次，然后超声萃取30 min，离心取上清液。吸取8 mL上清液置于20 mL的顶空瓶中，加入5 μL内标溶液PC，再加入3 g氯化钠，旋紧瓶盖，插入PA萃取头进行顶空-固相微萃取及气相色谱-质谱联用检测EC含量。测得其EC含量见表3。
表3 几种酒曲、酒醅中EC的含量
样品 含量（μg/L） 样品 含量（μg/L）
酒醅1 52.43 酒曲1 39.51
酒醅2 58.19 酒曲2 33.21
酒醅3 65.93 酒曲3 8.11
酒醅4 65.35 酒曲4 <q.l.
酒醅5 65.11 酒曲5 25.55
酒醅6 33.92 酒曲6 11.32
本发明适用固态发酵物如白酒酒曲和酒醅中EC的定量检测。

Claims (2)

1.一种快速测定固态发酵物曲、酒醅或发酵醪中氨基甲酸乙酯EC的方法，其特征在于对固态发酵物进行超声萃取，离心取上清液置于顶空瓶中，加入内标溶液氨基甲酸丙酯PC，再加入氯化钠饱和，旋紧瓶盖，插入萃取头搅拌吸附，萃取富集EC，再用气相色谱-质谱联用技术进行定量分析；步骤为：
（1）超声萃取：取10 g固态发酵物，加入20 mL实验专用水，浸泡30 min，超声萃取30 min，离心取上清；所述实验专用水为超纯水煮沸5-10min冷却；
（2）顶空固相微萃取：吸取上述超声萃取后上清液8 mL置于20 mL的顶空瓶中，加入5 μL乙醇配制的内标溶液PC，加入3 g氯化钠，旋紧瓶盖，插入萃取头，在50-70℃下250 rpm恒温搅拌萃取30-60 min；
（3）气相色谱-质谱联用检测：萃取完毕后将萃取头取出，插入气相色谱进样口250℃热解吸5 min，毛细管柱为DB-WAX或HP-5，载气为He，流速2 mL/min；不分流进样；程序升温：50℃恒温2 min，以5℃/min的速度升温至170℃，再以10℃/min的速度升温至230℃，保持5 min；MS条件为EI电离源，电子能量70 eV，离子源温度230 °C，扫描范围35.00~350.00 amu，SIM模式特征离子62；通过将样品和标准品的保留时间对比来确认目标物EC以及内标物PC峰；
DB-WAX毛细管柱为：60或30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm；
HP-5毛细管柱为：60或30m×0.25 mm i.d.×0.25 μm；
（4）标准曲线的建立：制作标准曲线所用的一系列EC浓度的溶液，先用EC标准品和色谱纯无水乙醇配制而成的高浓度EC溶液作为储藏液，其他浓度梯度EC溶液均用储藏液逐步稀释所得；将上述稀释后的EC溶液加入到实验专用水中，加入内标溶液PC，顶空固相微萃取富集，最后进行GC-MS定量检测，以EC与PC峰面积之比为横坐标，EC与PC的浓度比为纵坐标，绘制标准曲线；
（5）酒曲、酒醅或发酵醪样品测定：对样品采用浸泡、超声萃取预处理，离心后取上清液，然后用顶空固相微萃取技术富集上清液中的EC，再用气相色谱-质谱联用进行定性定量分析，根据样品中EC/PC的面积比，对照标准曲线计算样品中EC的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述萃取头为PDMS、PA、PDMS/DVB、或DVB/CAR/PDMS。
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