CN102603790A - 一种从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方法。该方法按如下步骤进行：a、取冰冻的南极磷虾加入到90～100%乙醇液中，提取液过滤合并；b、将a步骤的提取液浓缩至合并滤液体积的8～12%；c、向b步骤的浓缩提取液中加入同体积的正己烷，混匀；d、将c步骤的上层液蒸发除去正已烷，得粘稠液；e、向d步骤的粘稠液中依次先后加入丙酮、乙醇，混匀后冷沉，然后再次加入丙酮，最后将沉淀常规冷冻干燥，得产品。

Description

一种从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方法

技术领域

本发明属于化学医药产品提取技术范围，特别涉及一种用于食品、医药、保健食品、化学品等的从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方。

背景技术

南极磷虾（Euphausia superba）又名大磷虾或南极大磷虾，是一种生活在南冰洋的南极洲水域的磷虾。南极磷虾资源丰富，据估计最高有数亿吨之巨可捕量，是世界现有渔业产量的1倍以上，具有巨大的开发和利用潜力。世界主要渔业国家为日本和波兰。产品在日本主要用作为料理，而世界上其他地方则作为动物饲料及鱼饵。在世界海洋渔业资源普遍衰退的背景下，南极磷虾资源日益受到世界各国关注。

据报道，南极磷虾中含有丰富的磷脂成分，磷脂中富含被称为“抗脂肪肝因子”的磷脂酰胆碱（phosphatidylcholine,缩写PC，又称卵磷脂），其对脂肪肝、脂肪代谢障碍、动脉硬化症、皮肤病以脑血管、心血管等微血管疾病有效；还能防止高血压、治疗皮肤干癣。磷脂酰胆碱可直接作为注射剂使用，更是脂肪输液的乳化剂。磷脂酰胆碱也可用来作为脂质体，如一些毒性较强的药物如抗癌药物顺铂的包被载体，能使抗癌药物顺利通过以磷脂作为构成成份的细胞膜。我国治疗肝病的珍贵药物“肝得健”即是以磷脂酰胆碱为主要成分。此外，磷脂酰胆碱在高级涂料，高级化妆品、农药、杀虫剂、纺织品、石油制品（如橡胶）、电子工业等方面也具有不同的优良用途。

我国南极磷虾现已进入试捕捞阶段，约1-2年后开始大量捕捞，届时面临的主要问题是南极磷虾的深加工利用，而南极磷虾高纯度磷脂酰胆碱的制备必然是深加工中最主要最关键的技术之一。目前我国尚未有从南极磷虾中提取制备高纯度磷脂酰胆碱的报道和技术。由于磷虾大多是捕捞后立即冰冻贮存运输（也有的在船上冰冻制粉或运输至岸上后烘干或冷冻干燥），所以，以冰冻的南极磷虾为原料制备磷脂酰胆碱，可节省能耗，简化生产工艺，又能保持其中磷脂酰胆碱的高效和有效性。

目前，磷脂酰胆碱的提取方法主要包括溶剂提取法、酶催化精制提取法、

柱色谱精制提取法和超临界精制提取法等。本发明是对混合溶剂提取磷脂酰胆碱的改进：采用乙醇提取、正己烷分层、丙酮乙醇冷沉的方法提取南极磷虾中磷脂酰胆碱。该发明方法操作简单、工艺过程简单，大大降低了磷脂酰胆碱制备过程中采用酶催化提取、色谱分离及超临界萃取等方法操作复杂、成本高等问题。

发明内容

本发明的目的旨在克服现有技术的不足之处，提供一种从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方法。

本发明的目的可通过如下技术措施来来实现：

该方法按如下步骤进行：

a、按照1公斤冰冻的南极磷虾与1～1.3升重量浓度为90～100%乙醇液的配比将冰冻的南极磷虾加入到乙醇液中，搅拌下提取4～6次，每次1~3h，提取液过滤，合并滤液；

b、将a步骤的合并滤液于60~65℃和-0.07～-0.09MPa压力条件下浓缩至合并滤液体积的8～12%，得浓缩提取液；

c、向b步骤的浓缩提取液中加入同体积的正己烷，混匀，静放分层后取上层液；

d、将c步骤的上层液于50～55℃和-0.07～-0.09MPa压力条件下蒸发除去正已烷，得粘稠液；

e、向d步骤的粘稠液中加入粘稠液体积2～5倍的丙酮，混匀后于-22～-30℃下冷沉3～10小时，然后向沉淀中加入相当于粘稠液体积2～5倍量的乙醇，混匀后于-22～-30℃下冷沉3～10小时，最后将沉淀常规冷冻干燥，得产品。

本发明的目的还可通过如下技术措施来来实现：

e步骤所述的丙酮、乙醇冷沉分别为2次；

e步骤所述的乙醇冷沉后还加入相当于粘稠液体积2～5倍量的丙酮并于-22～-30℃下冷沉3～10小时。

本发明的方法制备的产品经薄层层析检测，磷脂酰胆碱纯度为95%～97%。

本发明的方法采用乙醇提取、正己烷分层、丙酮乙醇冷沉的方法提取南极磷虾中磷脂酰胆碱，产品纯度高。该发明方法操作简单、工艺过程简单，大大降低了磷脂酰胆碱制备过程中采用酶催化提取、色谱分离及超临界萃取等方法操作复杂、成本高等问题。  

具体实施方式

实施例1：

称冰冻的南极磷虾500g（含水80%，虾干重20%）加入重量浓度为100%乙醇液500mL，在室温下搅拌3小时，倒出上清液并过滤。沉淀再反复提取4次，合并滤液；将滤液在60℃和-0.09MPa压力条件下浓缩至合并滤液体积的8%，得浓缩提取液；向浓缩提取液中加入同体积的正己烷，，摇匀分四层，放出微黄色的第一层；在50℃和-0.07MPa压力条件下蒸发除去正已烷，得粘稠液；向该粘稠液中加入粘稠液体积5倍的丙酮，摇匀、放在-22℃冷沉10小时以上，倒出上清液得沉淀，用丙酮在同样条件下再冷沉一次，两次沉淀合并；然后向合并的沉淀中加然后向合并的沉淀中加入相当于粘稠液体积2倍量的乙醇，混匀，过程、步骤及工艺参数同丙酮沉淀，最后再加入相当于粘稠液体积5倍量的丙酮并于-22℃下冷沉10小时，沉淀经冷冻干燥，得磷脂酰胆碱纯度为97%。

实施例2：

称冰冻的南极磷虾500g,加入重量浓度为90%乙醇液650mL，在室温下搅拌提取1小时，倒出上清液并过滤，沉淀再反复提取6次，合并滤液；将滤液在65℃和-0.07MPa压力条件下浓缩至合并滤液体积的12%，得浓缩提取液；向浓缩提取液中加入同体积的正己烷，摇匀分四层，放出微黄色的第一层；在55℃和-0.09MPa压力条件下蒸发除去正已烷，得粘稠液；向该粘稠液中加入粘稠液体积2倍的丙酮，摇匀，放在-30℃冷沉3小时，倒出上清液得沉淀，用丙酮在同样条件下再冷沉一次，两次沉淀合并；然后向合并的沉淀中加然后向沉淀中加然后向合并的沉淀中加入相当于粘稠液体积5倍量的乙醇，混匀，过程、步骤及工艺参数同丙酮沉淀，最后再加入相当于粘稠液体积2倍量的丙酮并于-30℃下冷沉3小时，沉淀经冷冻干燥，得磷脂酰胆碱纯度为95.3%。

实施例3:

称冰冻的南极500g，加入重量浓度为95%乙醇液600mL在室温下搅拌1小时，倒出上清液并过滤。沉淀再反复提取5次,合并滤液；将滤液在63℃和-0.08MPa压力条件下浓缩至合并滤液体积的10%，得浓缩提取液；向浓缩提取液中加入同体积的正己烷，摇匀分四层，放出微黄色的第一层；在53℃和－0.08MPa压力条件下蒸发除去正已烷，得粘稠液；向该粘稠液中加入粘稠液体积4倍的丙酮，摇匀，放在-26℃冷沉7小时，倒出上清液得沉淀，用丙酮在同样条件下再冷沉一次，两次沉淀合并；然后向合并的沉淀中加然后向合并的沉淀中加入相当于粘稠液体积4倍量的乙醇，混匀，过程、步骤及工艺参数同丙酮沉淀，最后再加入相当于粘稠液体积3倍量的丙酮并于-27℃下冷沉7小时，沉淀经冷冻干燥，得磷脂酰胆碱纯度为96.2%。

实施例4；

称冰冻的南极500g，加入重量浓度为95%乙醇液550mL在室温下搅拌1.5小时，倒出上清液并过滤。沉淀再反复提取5次,合并滤液；将滤液在62℃和-0.08MPa压力条件下浓缩至合并滤液体积的11%，得浓缩提取液；向浓缩提取液中加入同体积的正己烷，摇匀分四层，放出微黄色的第一层；在52℃和－0.08MPa压力条件下蒸发除去正已烷，得粘稠液；向该粘稠液中加入粘稠液体积3倍的丙酮，摇匀，放在-26℃冷沉8小时，倒出上清液得沉淀，用丙酮在同样条件下再冷沉一次，两次沉淀合并；然后向合并的沉淀中加入相当于粘稠液体积3倍量的乙醇，混匀，过程、步骤及工艺参数同丙酮沉淀，最后再加入相当于粘稠液体积4倍量的丙酮并于-25℃下冷沉6小时，沉淀经冷冻干燥，得磷脂酰胆碱纯度为95.8%。 

Claims (3)

1.一种从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方法，其特征在于该方法按如下步骤进行：

a、按照1公斤冰冻的南极磷虾与1～1.3升重量浓度为90～100%乙醇液的配比将冰冻的南极磷虾加入到乙醇液中，搅拌下提取4～6次，每次1~3h，提取液过滤，合并滤液；

b、将a步骤的合并滤液于60~65℃和-0.07～-0.09MPa压力条件下浓缩至合并滤液体积的8～12%，得浓缩提取液；

c、向b步骤的浓缩提取液中加入同体积的正己烷，混匀，静放分层后取上层液；

d、将c步骤的上层液于50～55℃和-0.07～-0.09MPa压力条件下蒸发除去正已烷，得粘稠液；

e、向d步骤的粘稠液中加入粘稠液体积2～5倍的丙酮，混匀后于-22～-30℃下冷沉3～10小时，然后向沉淀中加入相当于粘稠液体积2～5倍量的乙醇，混匀后于-22～-30℃下冷沉3～10小时，最后将沉淀常规冷冻干燥，得产品。

2.根据权利要求1所述的一种从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方法，其特征在于e步骤所述的丙酮、乙醇冷沉分别为2次。

3.根据权利要求1或2所述的一种从南极磷虾中制备高纯度磷脂酰胆碱的方法，其特征在于e步骤所述的乙醇冷沉后还加入相当于粘稠液体积2～5倍量的丙酮并于-22～-30℃下冷沉3～10小时。