CN102603766A

CN102603766A - 一种他莫昔芬孪药制备方法及用途

Info

Publication number: CN102603766A
Application number: CN2012100522479A
Authority: CN
Inventors: 王科明; 许贯虹; 周晶; 何烨
Original assignee: 2nd Affiliated Hospital of Nanjing Medical University
Current assignee: 2nd Affiliated Hospital of Nanjing Medical University
Priority date: 2012-03-02
Filing date: 2012-03-02
Publication date: 2012-07-25
Anticipated expiration: 2032-03-02
Also published as: CN102603766B

Abstract

本发明提供一种他莫昔芬孪药的制备方法及其应用，将他莫昔芬与新藤黄酸以酯键结合形成他莫昔芬-新藤黄酸孪药。该孪药具有高度的乳腺组织特异性，该化合物相对于他莫昔芬具有更高的疗效，有望成为一种高效低毒的抗肿瘤新药。

Description

一种他莫昔芬孪药制备方法及用途

技术领域

本发明涉及一种新型他莫昔芬孪药及其制备方法，本发明同时涉及该类他莫昔芬孪药作为抗肿瘤疾病药物的应用。

背景技术

乳腺癌是妇女最常见、死亡率最高的恶性肿瘤，也是临床上最常见的雌激素依赖性肿瘤。根据雌激素受体(estrogen receptor，ER)表型差异，乳腺癌被分为两种：ER阳性乳腺癌和ER阴性乳腺癌，大约有2/3乳腺癌患者呈现ER阳性，肿瘤细胞的生长依赖于雌激素。随着肿瘤放化疗及分子靶向治疗、内分泌治疗的进展，乳腺癌的治疗已取得一定的疗效，但ER阳性乳腺癌内分泌治疗中存在着原发耐药和继发耐药，整体治疗效果不能令人满意，依然严重威胁着女性的生命，这就迫切需要寻找新的靶向性好、高效、低毒的新型抗肿瘤药物。

他莫昔芬(Tamoxifen，TAM，结构式II)又名三苯氧胺，是应用于临床的第一代内分泌治疗药物。他莫昔芬是一种人工合成的非固醇类雌激素受体拮抗剂，能与雌激素受体竞争性结合从而拮抗雌激素作用，抑制雌激素依赖性肿瘤细胞的增殖。近20多年来，他莫昔芬一直用于ER阳性乳腺癌的内分泌治疗，它能使ER阳性乳腺癌患者的5年复发率和死亡率分别相对减少47％和26％。提示他莫昔芬具有作为新藤黄酸靶向修饰药效团的可能性。

藤黄是藤黄属(Garcinia hanburyi Hook)所分泌的干燥树脂，它具有多种生物活性，包括解毒、抗炎、止血、抗癌以及驱虫性。藤黄主要的有效抗癌成分是新藤黄酸(GambogenicAcid，GNA，结构式III)、藤黄酸(Gambogic acid，GA)。有证据表明，新藤黄酸的抗肿瘤活性约为藤黄酸的2倍，抗肿瘤作用尤为明显。相关研究发现，在抗肿瘤作用方面，新藤黄酸在体外能有效的抑制和延缓白血病细胞株L1210细胞周期进程；对艾氏腹水癌细胞有抑制作用，并呈现明显的剂量依赖性；同时能够抑制结肠癌、肝癌、胃癌、非小细胞肺癌、卵巢癌细胞的增殖；动物实验结果也表明新藤黄酸可以抑制非小细胞肺癌细胞体内的生长。

在抗肿瘤机制方面，有研究发现新藤黄酸可能通过诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期于G0/G1期来抑制肿瘤细胞的增殖。研究发现新藤黄酸可以诱导ER阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡，对ER阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用。以上研究提示新藤黄酸是一种广谱抗肿瘤化合物，可能通过诱导细胞凋亡从而达到抑制肿瘤生长的作用，有望成为新型的抗肿瘤药物。

结构式为

发明内容

本发明的目的是设计并合成具有高度乳腺组织亲和力的具有良好抗肿瘤活性的他莫昔芬孪药，为治抗肿瘤药物特别是抗乳腺癌药物寻找先导化合物。本发明的另一个目的在于提供合成该类化合物方法。

本发明所述他莫昔芬孪药的具体结构可由下列结构式I来表示：

其中，R₁＝(CH₂)_nN(CH₃)₂，n＝1～3；R₂＝(CH₂)_nX，其中X为氢，卤素，羟基，n＝1～3；R₃为氢，羟基，甲氧基；R₄和R₅为下列任意一种取代基：氢，直链或支链C₁～C₁₀烷基；C₁～C₁₀烷基取代酰基或芳基取代酰基，芳杂基。

有益效果：

新藤黄酸在细胞及动物水平具有显著的广谱抗肿瘤作用已得到证实，但是其靶向性不高、毒性较大，他莫昔芬是非固醇类雌激素受体拮抗剂，能与雌激素受体竞争性结合从而拮抗雌激素作用。本发明而根据拼合原理，将新藤黄酸与他莫昔芬连接，合成新的孪药分子，通过靶向修饰新藤黄酸，提高其对ER阳性乳腺癌的特异性，从而减少剂量达到降低其毒性的目的，有望成为一种高效低毒的抗肿瘤新药。

本发明中制备目标化合物所需的中间体合成方法参见文献J.Org.Chem.1996年第61卷第3890-3893页。

具体实施方式

下面的实施例可使专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

合成路线(以R₁＝(CH₂)₂N(CH₃)₂；R₂＝CH₂CH₃；R₃、R₄和R₅均为氢为例)：

实施例1

4-羟基-4’-(三甲基乙酰氧基)二苯甲酮及4，4’-二(三甲基乙酰氧基)二苯甲酮的合成

将4，4’-二羟基二苯甲酮(7.5g，35mmol)溶于干燥THF(100mL)，加入NaH(2.5g，38mmol)，室温搅拌1h，冷却至0℃，加入PvCl(5mL)，移去冰水浴，搅拌3h。将反应化合物倒入蒸馏水(100mL)并以乙酸乙酯萃取(3×100mL)。合并有机相，无水Na₂SO₄干燥过夜并浓缩。柱层析分离(己烷-二氯甲烷9∶1)，两化合物均为白色粉末。其中4-羟基-4’-(三甲基乙酰氧基)二苯甲酮，1H NMR(δ，CDCl3)：1.32(s，9H)，6.830(d，2H)，7.19(d，2H)，7.72(d，2H)，7.79(d，2H)；4，4’-二(三甲基乙酰氧基)二苯甲酮，1H NMR(δ，CDCl3)：1.20(s，18H)，7.22(d，4H)，7.82(d，4H)。

实施例2

(E)-4-(1-(4-羟苯基)-2-苯基-1-烯基)苯基特戊酸酯的合成

将Zn粉(1.0g，15mmol)分散在20mL干燥THF中，氩气保护下滴加TiCl4(0.8mL，7mmol)，回流3h，加入20mL含有4-羟基-4’-(三甲基乙酰氧基)二苯甲酮(1.0g，3.5mmol)和苯丙酮(1.0mL，11mmol)的干燥THF溶液。回流5h，冷却至室温，加入10％K₂CO₃(40mL)，以乙酸乙酯萃取(3×100mL)。合并有机相，以10％K₂CO₃(2×50mL)以及饱和NaCl溶液(50mL)洗涤，浓缩，甲醇重结晶，得白色粉末。E/Z比例大于100∶1。1H NMR(δ，CD3OD)：0.95(t，3H)，1.26(s，9H)，2.26(q，2H)，6.40(d，2H)，6.66(d，2H)，7.22-7.45(m，9H)

实施例3

(E)-4-[1-(4-(2-(N，N-二甲氨基)乙氧基)苯基)-2-苯丙基-1-烯]苯基特戊酸酯的合成取实施例2中产物(0.60g，1.5mmol)，新蒸馏2-二甲氨基氯乙烷(0.32g，3.0mmol)以及K₂CO₃(0.27g，1.9mmol)倒入丙酮∶水(19∶1，20mL)的混合溶液中，避光回流6h。冷却至室温，干燥，蒸去溶剂，柱层析分离(二氯甲烷-甲醇19∶1)，异丙醇重结晶，得白色粉末。1H NMR(δ，CDCl3)：0.95(t，3H)，1.28(s，9H)，2.29(s，6H)，2.46(q，2H)，2.68(t，2H)，3.93(t，2H)，6.56(d，2H)，6.80(d，2H)，7.14-7.32(m，9H)；

实施例4

(Z)-4-羟基他莫昔芬的合成

在-78℃条件下，取MeLi的乙醚溶液(4.2mL，1.4M，5.8mmol)，加入到实施例3中产物(0.92g，1.9mmol)的干燥THF(40mL)溶液中at-78℃，搅拌3h，加入饱和氯化铵(2mL)，升温至室温，以乙酸乙酯萃取(4×50mL)。合并有机相，无水硫酸镁干燥过夜，浓缩。乙醇重结晶，得白色粉末。E/Z比例大于100∶1。1H NMR(δ，CD3OD)：0.95(t，3H)，2.28(s，6H)，2.47(q，2H)，2.68(t，2H)，3.94(t，2H)，6.55(d，2H)，6.76(d，2H)，7.10-7.28(m，9H)；

实施例5

目标化合物的合成

取新藤黄酸(0.65g，1mmol)溶于二氯甲烷(20mL)，加入(Z)-4-羟基他莫昔芬(0.78g，2mmol)，对二甲氨基吡啶(DMAP，0.24g，2mmol)，室温搅拌至全溶，加入二环己基碳二亚胺(DCC，0.52g，2.5mmol)，室温下搅拌4h。过滤，滤液浓缩，硅胶柱层析提纯(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)得黄色油状物。MS-ESI(+)：1017.4[M+H]⁺。

实施例6

抗肿瘤活性试验

目标化合物尾静脉注射给药显著性的抑制了乳腺癌ER阳性MCF-7细胞裸鼠(雌性)移植瘤的生长，并呈现一定的剂量依赖性，见附图1。

BALB/c裸小鼠，鼠龄4～6周，雌性，体重18～20克，饲养于SPF级环境中。取对数生长期ER阳性乳腺癌MCF-7细胞，2×10⁶种植于裸鼠腋下皮下。接种约2周后，肿瘤长处，待瘤体长到约50～50mm³时随机分为五组，即对照组，4mg/kg GNA-TAM01组，8mg/kgGNA-TAM01组，12mg/kg GNA-TAM01组，16mg/kg GNA-TAM01组，每组7只；根据以上不同剂量尾静脉注射给药，隔日注射，共6次；对照组给予生理盐水。第一次给药前和给药后第4天、第8天、第12天、第16天分别用游标卡尺测量移植瘤的最长径和最短径，并称体重。实验结束后处死裸鼠，取移植瘤测量肿瘤最长径和最短径，称瘤重。

目标化合物在细胞水平对ER阳性乳腺癌细胞(MCF-7、T-47D)增殖有明显的抑制作用明显强于NGA，并呈现一定的时间-剂量依赖性；而对ER阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用与NGA没有明显的差异性，见附图2。

MCF-7、MDA-MB-231细胞用胰酶消化并稀释成活细胞悬液，接种于96孔板中，每孔100μL，细胞数约为3*10³每组设6个复孔，贴壁过夜后加入新藤黄酸药液，使其终浓度分别为0.5μg/ml、1.0μg/ml、1.5μg/ml、2.0μg/ml、2.5μg/ml、3.0μg/ml，control组加入100μL完全培养基，置于37℃、5％CO2的培养箱中培养24h、48h、72h，每孔加入20μL的MTT，继续孵育4h后，小心吸弃全部上清液，每孔加入150μLDMSO，振荡10min后，用酶标仪(490nm)记录各孔的吸光度(OD)，实验重复3次。

以上实验结果初步证明了目标化合物在细胞水平和动物水平对乳腺癌的增殖具有明显的抑制作用，为其成为临床抗肿瘤药物提供了理论依据。

Claims

1.一种具有高度乳腺组织亲和性的高效抗肿瘤孪药，其特征在于由他莫昔芬和具有诱导肿瘤细胞凋亡功能的天然产物分子拼合而成，该化合物通式如(I)所示：

其中，R₁＝(CH₂)_nN(CH₃)₂，n＝1～3；

R₂＝(CH₂)_nX，其中X为氢，卤素，羟基，n＝1～3；

R₃为氢，羟基，甲氧基；

R₄和R₅为下列任意一种取代基：氢，直链或支链C₁～C₁₀烷基；C₁～C₁₀烷基取代酰基或芳基取代酰基，芳杂基。

2.权利要求1中所述的他莫昔芬孪药，其特征在于和他莫昔芬拼合的具有诱导肿瘤细胞凋亡功能的天然产物分子为新藤黄酸。

3.权利要求1中所述的他莫昔芬孪药，其特征在于具有高度的乳腺组织特异性。

4.权利要求1中所述的他莫昔芬孪药与酸或者碱所形成的盐，其特征在于包括该衍生物的无机酸盐，有机酸盐，无机碱盐，有机碱盐。

5.权利要求4中所述的他莫昔芬孪药，其特征在于包括盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、苯甲酸盐、枸橼酸盐、甲磺酸盐、对甲基苯磺酸盐、酒石酸盐、乳酸盐以及酸性氨基酸盐、钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、碱性氨基酸盐、碱性含氮杂环盐。

6.根据权利要求1中所述的他莫昔芬孪药，应用于临床肿瘤治疗。