CN102578590B - α1-酸性糖蛋白的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了α1-酸性糖蛋白在制备抗疲劳的保健食品中的新应用，从而拓展了其应用范围，也为抗疲劳领域提供了新途径。
Description
技术领域
本发明涉及α1-酸性糖蛋白的应用。
背景技术
α1-酸性糖蛋白，分子量41-43KD，含糖约45％，等电点为2.8-3.8，包括等分子的己糖，己糖胺和唾液酸。其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示(数据来源于NCBI.蛋白编号gi|16757980)。
据现有文献报道(Thierry Fournier，Najet Medjoubi-N，Dominique Porquet.Alpha-1-acid glycoprotein.BBA.2000；1482.157)，肝脏是a1-酸性糖蛋白最主要的合成器官，在炎症，肿瘤或者损伤的情况下，该蛋白会被肝脏大量合成释放入血。该蛋白在体内主要发挥免疫调节以及运载脂溶性小分子的作用。
但目前，尚未有文献报道α1-酸性糖蛋白在抗疲劳领域的应用。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供α1-酸性糖蛋白的新应用，从而拓展其应用范围。
本发明涉及α1-酸性糖蛋白在制备抗疲劳的保健食品中的应用。其中，所述的α1-酸性糖蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。
所述的抗疲劳的保健食品中，α1-酸性糖蛋白的含量为抗疲劳有效量以上，具体可根据情况选择。一般小鼠剂量为7mg/kg以上，人剂量可按本领域常规方法换算，一般为46mg以上(按人体重为60kg折算)。所述的抗疲劳的保健食品可以仅含α1-酸性糖蛋白作为唯一活性成分，也可以还含有除α1-酸性糖蛋白以外的其它活性成分。所述的其它活性成分为对α1-酸性糖蛋白的抗疲劳作用没有不良影响可联合使用的其他活性成分，如其他抗疲劳活性成分。
所述的抗疲劳的保健食品可为食品领域常规的适用于α1-酸性糖蛋白的各种剂型。根据所选择的剂型，可按本领域常规知识，选择合适的辅料，按常规方法制得所需剂型的保健食品。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明公开了α1-酸性糖蛋白在制备抗疲劳的保健食品中的新应用，从而拓展了其应用范围，也为抗疲劳领域提供了新途径。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
实施例α1-酸性糖蛋白的抗疲劳作用
1、材料
动物：KM小鼠，28只，雄性，体重18-22g，第二军医大学实验动物中心提供。
α1-酸性糖蛋白纯品(orosomucoid 1，ORM 1)：由上海开阳生物公司提供。该纯品获得的基本工艺流程如下：
(1)分子克隆：
a、抽提KM小鼠肝组织的RNA，RT-PCR钓出目的基因ORM；
b、构建真核质粒载体(Pichia)：构建ppICZa-ORM(xhol+Notl插入)质粒；
c、表达筛选。
(2)中试发酵
(3)蛋白纯化
发酵上清液层析；条件为20mMHAc-NaAc，pH4.5/SP-Sepharose FF层析。将洗脱液进行蛋白电泳，在相应分子量的位置上出现条带。将该条带切取，并进行质谱分析，以确保所合成的蛋白是α1-酸性糖蛋白。
所获得ORM 1溶液中，ORM 1浓度为0.78mg/ml，分子量41-43KD，含糖约45％，等电点为2.8-3.8，包括等分子的己糖，己糖胺和唾液酸。
生理盐水(NS)：称取4.5g氯化钠粉末溶于500ml双蒸水中充分溶解，再用高压灭菌锅在120度进行灭菌处理。
2、实验方法
小鼠自由进食饮水，自然光照，普通饲料适应性喂养3天，随后进行适应性游泳以让其适应之后的游泳测试，方法为每只小鼠自由游泳15分钟，再放回笼中饲养恢复一天进行后续实验。
随机分为对照组(n＝7只)和给药组(n＝21只，7只/每个剂量组)，分别对各组给药：按表1所示的剂量对给药组(ORM 1低剂量组、ORM 1中剂量组和ORM 1高剂量组)进行尾静脉注射，对照组给予同样剂量的生理盐水0.2ml。连续三天，在第四天进行游泳实验，在所有小鼠均负重8％的情况下测得其游泳时间。
小鼠游泳实验方法参考文献(Rong Sheng，Xianxiang Xu，Qin Tang，etal.Polysaccharide of Radix Pseudostellariae Improves Chronic FatigueSyndrome Induced by Poly I：C in Mice Evid.Based Complement.Altern.Med.，2009；10.1093.)报道的方法：将小鼠置入一个48×36×29厘米的不锈钢圆筒内，水深20cm，水温约22度，将相当于其自身体重8％的别针用细绳穿起固定在其尾根部，遂开始记录游泳时间，以小鼠下沉水面超过8秒不能自由浮起为疲劳标准，停止实验。
3、实验结果
各实验组实验结果如表1所示：
表1α1-酸性糖蛋白给药组和对照组游泳实验测试结果
*q＜0.01
由表1可见，经统计学检验SNK-q检验，与对照组相比，α1-酸性糖蛋白在高剂量时(0.2ml相当于7mg/kg)，能够显著延长小鼠游泳时间，具有抗疲劳作用。
Claims (2)
1.α1-酸性糖蛋白作为抗疲劳的活性成分在制备抗疲劳的保健食品中的应用，所述的抗疲劳的保健食品中，α1-酸性糖蛋白的含量为抗疲劳有效量以上。
2.α1-酸性糖蛋白作为抗疲劳的活性成分在制备抗疲劳的静脉注射剂中的应用，其中，α1-酸性糖蛋白的含量为抗疲劳有效量以上。
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