CN102574846A - 激酶抑制剂、其前药形式及它们在治疗中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及适合作为激酶抑制剂的式I的吡啶并[3,4-d]嘧啶化合物、前药形式的激酶抑制剂、它们在组合物和药物中的用途,所述组合物和药物适合用于治疗与激酶活性有关的疾病,例如癌症。
Description
发明领域
本发明涉及激酶抑制剂、前药形式的激酶抑制剂、含有它们的组合物和药物,以及制备方法和这些抑制剂、组合物和药物的用途。
发明背景
激酶代表一大类酶家族,其催化蛋白、脂类和代谢产物的磷酸化,在多种细胞过程的调节中起重要作用。异常的激酶活性与包括癌症在内的多种障碍有关。这导致了激酶抑制剂作为治疗剂的开发。
本发明总体涉及具有激酶抑制剂活性的化合物,包括其前药形式,以及所述化合物在治疗中的应用。
发明概述
第一方面,本发明提供式I的激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂合物:
其中:
(1)R1是H,并且
(a)R2是(3-氯苄基)氧基-且R3是氯;
(b)R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑;
(c)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氯;
(d)R2和R3都是氯;
(e)R2是氯且R3是溴;
(f)R2和R3都是溴;
(g)R2是氟且R3是乙炔基;
(h)R2是氯且R3是乙炔基;
(i)R2是溴且R3是乙炔基;
(j)除了R2在3-位且R3在4-位时,R2是溴且R3是氟;
(k)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氟;或者
(l)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是溴;或者
(2)R1、R2和R3中的至少一个选自苄氧基、3-氯苄基氧基和2-吡啶基甲氧基,并且当R1、R2和R3中的至少一个不是苄氧基、3-氯苄氧基或2-吡啶基甲氧基时,其它的各自独立地选自H、卤素和C2-C4炔基,条件是当R1、R2和R3中的一个是苄氧基或2-吡啶基甲氧基时,R1、R2和R3中的其它两个不是H;或者
(3)R1、R2和R3中的两个与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑,并且另一个选自H、卤素和C2-C4炔基。
在一些实施方案中,本发明提供式IA的激酶抑制剂及其药学上可接受的盐和溶剂合物:
(1)其中R1是H,并且
(a)R2是(3-氯苄基)氧基-且R3是氯;
(b)R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑;
(c)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氯;
(d)R2和R3都是氯;
(e)R2是氯且R3是溴;
(f)R2是溴且R3是氯;
(g)R2和R3都是溴;
(h)R2是氟且R3是乙炔基;
(i)R2是氯且R3是乙炔基;
(j)R2是溴且R3是乙炔基;
(k)R2是溴且R3是氟;
(l)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氟;或者
(m)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是溴。
优选地,激酶抑制剂选自:
(2E)-N-(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(1),
(2E)-4-(二甲氨基)-N-(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-丁烯酰胺(2),
(2E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(3),
(2E)-N-[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(4),
(2E)-N-[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(5),
(2E)-N-[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(6),
(2E)-N-[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(7),
(2E)-4-(二甲氨基)-N-[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-丁烯酰胺(8),
(2E)-N-[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(9),
(2E)-N-[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(10),
(2E)-N-[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(11),
(2E)-4-(二甲氨基)-N-{4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-2-丁烯酰胺(89)和
(2E)-N-{4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(90);
及其药学上可接受的盐和水合物。
上面所列的化合物的结构式如下:
在另一方面,本发明提供如上所定义的式I激酶抑制剂或其盐或溶剂合物在制备药物中的用途。
在另一个优选实施方案中,药物是前药,并将式I化合物或其盐或溶剂合物连接至还原性触发剂(trigger)。
在另一方面,本发明提供还原性前药,其含有如上所定义的式I激酶抑制剂或其盐或溶剂合物,以及直接或间接地连接至激酶抑制剂的氮的还原性触发剂。
在一些实施方案中,还原性触发剂是式II:
其中*是连接至所述激酶抑制剂的氮的点,并且式II中R5选自C1-C6烷基且R4选自H、甲基、乙基、三氟甲基、-CN、-CONH2和丙炔-1-基。
在某些实施方案中,还原性触发剂选自式IIa至式IIg:
在某些实施方案中,R5选自甲基、乙基和丙基,优选甲基。
在某些优选实施方案中,还原性触发剂是式IIa,其中R5选自甲基、乙基和丙基。
最优选地,还原性触发剂是式IIa,其中R5选自甲基。
在一个实施方案中,前药是式III化合物:
其中X是任何负电荷的平衡离子,R1、R2和R3如式I中所定义的,R4选自H、甲基、乙基、三氟甲基、-CN、-CONH2和丙炔-1-基,并且R5是C1-C6烷基。
在一些实施方案中,前药是式IIIA化合物
其中X是任何负电荷的平衡离子,R1、R2和R3如式I中所定义的,并且R4选自H、甲基、乙基、三氟甲基、-CN、-CONH2和丙炔-1-基。
还在另一个实施方案中,前药是式IIIB化合物
其中X是任何负电荷的平衡离子,R1、R2和R3如式IA中所定义的,并且R4选自H、甲基、乙基、三氟甲基、-CN、-CONH2和丙炔-1-基。
在优选实施方案中,X选自卤化物(氟化物、氯化物、溴化物、碘化物)、甲磺酸盐、三氟甲磺酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、甲苯磺酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐和甲酸盐。
更优选地,X是卤化物,其中溴化物是最优选的。
优选地,式III化合物选自:
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(12),
(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(13),
(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(14),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(15),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(16),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(17),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(18),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(19),
(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(20),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(21),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(22),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(23),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(24),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(25),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(26),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(27),
(2E)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(28),
(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(29),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(30),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(31),
(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(32),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(33),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(34),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(35),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(36),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(37),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(38),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(39),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(40),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(41),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(42),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(43),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(44),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(45),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(46),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(47),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(48),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(49),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(50),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(51),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(52),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(53),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(54),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(55),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(56),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(57),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(58),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(59),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(60),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(61),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(62),
(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(63),
(2E)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(64),
(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(65),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(66),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(67),
(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(68),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(69),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(70),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(71),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(72),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(73),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(74),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(75),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(76),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(77),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(78),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(79),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(80),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(81),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(82),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(83),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(84),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(85),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(86),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(87),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(88),
(2E)-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(91),
(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(92),
(2E)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(93),
(2E)-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(94),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(95),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(96),
(2E)-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(97),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(98),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(99),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(100),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(101),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(102),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(103)和
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(104)。
上面所列出的前药化合物的结构如下:
在另一方面,本发明提供用于治疗的前文所定义的式I化合物或其盐或溶剂合物、前文所定义的还原性前药或者前文所定义的式III化合物或其盐或溶剂合物。
在另一方面,本发明提供药物组合物,其包含前文所定义的式I化合物或其盐或溶剂合物、前文所定义的还原性前药或者前文所定义的式III化合物或其盐或溶剂合物,以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或稀释剂。
在另一方面,本发明提供治疗方法,其包括向需要所述治疗的患者施用治疗有效量的前文所定义的式I化合物或其盐或溶剂合物、前文所定义的还原性前药或者前文所定义的式III化合物或其盐或溶剂合物的步骤。
优选地,治疗方法是癌症的治疗。
在另一方面,本发明提供抑制个体体内激酶活性的方法,其包括向所述个体施用抑制量的前文所定义的式I化合物或其盐或溶剂合物、前文所定义的还原性前药或者前文所定义的式III化合物或其盐或溶剂合物的步骤。
优选地,所述抑制激酶活性是用于治疗目的,包括抗癌目的。
另一方面,本发明提供在温血动物例如人中产生抗癌效果的方法,其中所述方法包括向所述动物施用有效量的前文所定义的式I化合物或其盐或溶剂合物、前文所定义的还原性前药或者前文所定义的式III化合物或其盐或溶剂合物。
另一方面,本发明提供在细胞中产生抗癌效果的方法,其中所述方法包括使所述细胞与有效量的前文所定义的式I化合物或其盐或溶剂合物、前文所定义的还原性前药或者前文所定义的式III化合物或其盐或溶剂合物接触。
另一方面,本发明提供用于温血动物例如人中癌症治疗的方法,其中所述方法包括向所述动物施用有效量的前文所定义的式I化合物或其盐或溶剂合物、前文所定义的还原性前药或者前文所定义的式III化合物或其盐或溶剂合物。
虽然本发明大致如前文所定义,但是本发明不限于所述的内容,并且本发明还包括在下文叙述中提供了其实例的实施方案。
附图简述
现在将参照附图更详细地描述本发明,其中:
图1显示用激酶抑制剂1、2、3进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3);
图2显示用激酶抑制剂4、5进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3);
图3显示用激酶抑制剂7、8进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3-4);
图4显示用激酶抑制剂5、6、9进行q3dx4处理后,A431肿瘤的中位生长(n=3);
图5显示用前药12、13、15进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3);
图6显示用前药16、17进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3);
图7显示用前药19、20进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3-4);
图8显示用前药17、18、21进行q3dx4处理后,A431肿瘤的中位生长(n=3);
图9显示用前药15及其同源激酶抑制剂3进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3);
图10显示用前药17及其同源激酶抑制剂5进行q3dx4处理后,H1975肿瘤的中位(A)和平均(B)生长(n=3);
图11显示以q3dx4、q5dx4和q7dx4的给药方案,用前药17处理后,H1975肿瘤的中位生长(n=3);
图12显示用化合物3的一系列浓度处理1小时后,完整A431细胞中erbB1(EGFR)自磷酸化和p44/42MAPK(Erk 1/2)磷酸化的抑制;
图13显示用化合物5的一系列浓度处理1小时后,完整A431细胞中erbB1(EGFR)自磷酸化和p44/42MAPK(Erk 1/2)磷酸化的抑制;
图14显示用化合物6的一系列浓度处理1小时后,完整A431细胞中erbB1(EGFR)自磷酸化和p44/42MAPK(Erk 1/2)磷酸化的抑制;和
图15显示用前药15的一系列浓度处理1小时后,完整A431细胞中erbB1(EGFR)自磷酸化和p44/42MAPK(Erk 1/2)磷酸化的抑制。
图16是用前药15和化合物3的一系列浓度处理1小时后,完整A431细胞中erbB1(EGFR)自磷酸化的相对抑制(β-肌动蛋白校正的)的条带光密度分析的图示曲线。
发明详述
定义
如本文所用,除非另外说明,术语“烷基”和“炔基”都包括直链和支链的基团,以及未取代与取代的基团。任选的取代基可包括但不限于卤素、C1-C6烷氧基、CN、OH、NH2、NO2、NH(C1-C6烷基)、N(C1-C6烷基)2、CONH2、CO(C1-C6烷基)、SO2NH2和SO2(C1-C6烷基)。
“抗癌效应”包括但不限于抗肿瘤效应、响应率、疾病进展的时间和存活率。“抗肿瘤”效应包括但不限于肿瘤生长的抑制、肿瘤生长的延迟、肿瘤的退化、肿瘤的收缩、治疗停止后肿瘤再生长的时间延长和延缓疾病的进展。
“有效量”指当施用至个体用于治疗癌症时,足够对所述癌症的治疗产生效果的量。“有效量”可依据要治疗的癌症、要施用的化合物、治疗的癌症的严重性、个体的年龄和相对健康、施用的途径和方式、治疗是单一疗法还是联合疗法、主治医师的诊断以及其他因素而变化。
“药学上可接受的”指可用于制备通常安全、无毒并且无生物学上或其他方面所不期望的效应的药物组合物,并且包括对于兽医以及人药使用来讲,其是可接受的。
化合物的“药学上可接受的盐”指如文中所定义的是药学上可接受的盐,并且所述盐具有期望的母体化合物的药理学活性。所述盐包括:
与无机酸例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐或者与有机酸例如乙酸、甲磺酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸等形成的酸加成盐;或者
当金属离子例如碱金属离子、碱土离子或铝离子置换母体化合物中存在的酸性质子时形成的盐;或者与有机或无机碱的配位物。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、N-甲基葡萄糖胺、三乙醇胺等。可接受的无机碱包括氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠和氢氧化钠。
“温血动物”指哺乳动物纲的任何成员,包括但不限于人,非人灵长类例如黑猩猩和其他猿类和猴类,农场动物例如牛、马、绵羊、山羊和猪;家畜例如兔、狗和猫;实验动物包括啮齿类例如大鼠、小鼠和豚鼠等。
本发明化合物
如上文所定义,本发明在广义上涉及作为激酶抑制剂的化合物。所述化合物在治疗中具有应用。
在一个实施方案中,本发明化合物是式I的4-苯胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶,不可逆的erbB1、2、4激酶抑制剂。
在另一实施方案中,本发明化合物包含式I的激酶抑制剂和还原性触发剂。当还原时,还原性触发剂断裂。触发剂的断裂优选发生在单电子水平,并且氧的存在可有效抑制其断裂,由此提供低含氧量环境中的选择性活化。所述的氧抑制可通过单电子基团被氧的再氧化来实现或者通过前药还原所需要的还原性中间体的氧化来实现。后者可包括例如辐射产生的还原性基团如水合电子的氧清除或者还原酶催化循环中的还原性中间体的氧化。还原触发剂所需要的还原等价物可通过酶、辐射诱导的基团或化学还原剂来提供。
在优选的形式中,触发剂是还原-活化的芳香硝基杂环或芳香硝基碳环触发剂,并且触发剂直接连接到式I化合物中可季胺化的氮原子,从而形成四价氮原子。然而,特别优选触发剂具有上述的式II结构。
在所述实施方案中,所述化合物作为通过触发剂的还原而释放激酶抑制剂的前药。目前,最优选本发明化合物的前药形式是如上所定义的式III。
本发明化合物的治疗用途
本发明化合物在其中希望抑制激酶活性的任何治疗方法中具有应用。因此,本发明涉及通过施用本发明化合物或者含有一种或多种本发明化合物的组合物来治疗和预防哺乳动物中的疾病例如过度增殖、炎症和血管发生病症以及骨质疏松症的方法。
本发明特别涉及通过施用本发明化合物或者含有一种或多种本发明化合物的组合物来治疗或预防癌症和其他过度增殖病症的方法,无论其是单独作为单一疗法还是与第二种抗增殖剂联合。
还可施用的任选的抗增殖剂包括但不限于Merck索引第14版(2006)中癌症化疗药物疗法所列出的化合物,将其引入文中作为参考,例如天门冬酰胺酶、博来霉素、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、L-天冬酰胺酶、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、柔红霉素、多柔比星(阿霉素)、表柔比星、依托泊苷、5-氟尿嘧啶、六甲蜜胺、羟基脲、异环磷酰胺、伊立替康、亚叶酸钙、洛莫司汀、氮芥、6-巯基嘌啉、美司钠、甲氨喋呤、丝裂霉素C、米托蒽醌、泼尼松龙、泼尼松、丙卡巴肼、雷洛昔芬、链佐星、他莫昔芬、硫鸟嘌呤、托泊替康、长春碱、长春新碱和长春地辛。
另外的抗增殖剂包括其他调控并行途径的分子靶向的物质,例如MEK1/2抑制剂、AKT抑制剂和mTOR抑制剂、单克隆抗体、奥沙利铂、吉西他滨、吉非替尼、泰索帝、阿糖胞苷A、阿糖胞苷C、赫赛汀、BCNU、CCNU、DTIC和放线菌素D。另外的抗增殖剂还包括但不限于Goodmanand Gilman′s The Pharmacological Basis of Therapeutics(第11版),编辑Molinoff等人,McGraw-Hill出版,第1225-1287页(2006)中公认用于治疗肿瘤疾病的那些化合物,将其引入文中作为参考,例如氨鲁米特、L-天冬酰胺酶、硫唑嘌呤、阿扎胞苷、克拉屈滨、白消安、己烯雌酚、2′,2′-二氟脱氧胞苷、多西他赛、赤式羟基壬基腺嘌呤(erythrohydroxynonyladenine)、炔雌醇、5-氟脱氧尿苷、单磷酸5-氟脱氧尿苷、磷酸氟达拉滨、氟甲睾酮、氟他胺、己酸羟孕酮、伊达比星、干扰素、乙酸甲羟孕酮、乙酸甲地孕酮、美法仑、米托坦、紫杉醇、喷司他丁、N-膦酰乙酰-L-天冬氨酸(PALA)、普卡霉素、司莫司汀、替尼泊苷、丙酸睾酮、塞替派、三甲基蜜胺、尿苷和长春瑞滨。
如文中所用的,癌症和过度增殖的病症包括但不限于实体瘤,例如乳腺、呼吸道、脑、生殖器官、消化道、尿道、眼睛、肝脏、皮肤、头颈部、甲状腺、甲状旁腺癌症和它们的远端转移灶。所述病症还包括淋巴瘤、肉瘤和白血病。
乳腺癌的示例包括但不限于侵袭性导管癌、侵袭性小叶癌、原位管癌和原位小叶癌。
呼吸道癌症的示例包括但不限于小细胞和非小细胞肺癌,以及支气管腺瘤和胸膜肺母细胞瘤。
脑肿瘤的示例包括但不限于脑干和下丘脑神经胶质瘤、小脑和大脑星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、室管膜瘤,以及神经外胚层和松果腺肿瘤。
男性生殖器官肿瘤包括但不限于前列腺和睾丸癌症。
女性生殖器官肿瘤包括但不限于子宫内膜、子宫颈、卵巢、阴道和外阴癌症,以及子宫肉瘤。
消化道肿瘤包括但不限于肛门、结肠、结肠直肠、食管、胆囊、胃、胰脏、直肠、小肠和唾液腺癌症。
泌尿道肿瘤包括但不限于膀胱、阴茎、肾、肾孟、输尿管和尿道癌症。
眼部癌症包括但不限于眼内黑色素瘤和视网膜成神经细胞瘤。
肝脏癌症的示例包括但不限于肝细胞癌(有或无纤维板层变体的肝细胞癌)、胆管上皮癌(肝内胆管癌)和混合型肝细胞胆管上皮癌。
皮肤癌包括但不限于鳞状细胞癌、卡波西肉瘤、恶性黑色素瘤、梅克尔细胞皮肤癌和非黑色素瘤皮肤癌。
头颈部癌症包括但不限于喉部/咽下/鼻咽/口咽癌症,以及唇和口腔癌症。淋巴瘤包括但不限于AIDS-相关的淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、表皮T-细胞淋巴瘤、霍奇金病和中枢神经系统淋巴瘤。
肉瘤包括但不限于软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤。白血病包括但不限于急性髓性白血病、急性成淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病和毛细胞白血病。
所述病症已完全在人体内鉴定,但还以类似病原学存在于其他温血动物中,并且可用本发明药物组合物治疗。
可通过施用本发明化合物治疗的人或其他温血动物中的病症包括肿瘤生长;视网膜病,包括糖尿病视网膜病变、缺血性视网膜静脉闭塞、早产儿视网膜病和年龄相关性黄斑变性;牛皮癣或者与表皮下水泡形成相关的大疱病症,包括大疱性类天疱疮、多形性红斑或者疱疹样皮炎;类风湿性关节炎;骨关节炎;脓毒性关节炎;肿瘤转移;牙周病;角膜(cornal)溃疡;蛋白尿;动脉粥样硬化斑块形成的冠脉血栓症;主动脉瘤;营养不良型大疱性表皮松解症;外伤性关节损伤继发的退行性软骨损失;MMP活性介导的骨量减少;颞颌关节病或者神经系统脱髓鞘疾病。
本领域技术人员应该理解,具体的治疗方法会使用选定的给药途径,其取决于各种因素,当施予治疗时,通常会考虑所有因素。本领域技术人员还应该理解最佳治疗过程(即,治疗方式和在指定的天数内施用本发明化合物的每日剂量数)可由本领域技术人员利用常规医疗实验来确定。
治疗剂量约为1mg到3000mg/天。为任何特定患者选择的具体剂量水平将取决于各种因素,包括施用的具体化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、给药时间、给药途径和排出率、药物组合和所治疗的病症的严重性。
本发明化合物的药物组合物
本发明还包括药物组合物,其包含本发明化合物和药学上可接受的载体。
可将化合物以单位剂型口服、局部、肠胃外、经吸入或喷雾或直肠给药施用。术语“经注射给药”包括静脉、肌内、皮下和肠胃外注射,以及利用输液技术注射。一种或多种化合物可与一种或多种无毒的药学上可接受的载体和在需要时的其他活性成分联合。
预期口服使用的组合物可根据本领域公知的生产药物组合物的任何适当方法制备。所述组合物可含有一种或多种物质,其选自稀释剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂,以提供可口的制剂。片剂含有与无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分,所述赋形剂适合于生产片剂。所述赋形剂可是例如惰性稀释剂如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠;成粒剂和崩解剂例如玉米淀粉或海藻酸;和粘合剂例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的或者可将片剂利用公知的技术进行包衣以延迟在胃肠道的崩解和吸收,并由此提供较长时期的持续作用。例如,可利用缓释材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。所述化合物可以固体、速释形式制备。
用于口服的制剂还可作为硬明胶胶囊提供,其中将活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合;或者还可作为软明胶胶囊提供,其中将活性成分与水或油类媒介例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
水混悬剂含有与适合于生产水性混悬剂的赋形剂混合的活性物质。所述赋形剂是助悬剂例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶;分散剂或润湿剂可是天然存在的磷脂例如卵磷脂,或者脂肪酸与烯烃氧化物的缩合产物例如聚氧乙烯硬脂酸酯,或者氧化乙烯与长链脂肪醇的缩合产物例如十七乙烯氧十六醇,或者氧化乙烯与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯山梨醇单油酸酯,或者氧化乙烯与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物例如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。水混悬剂还可含有一种或多种防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂如蔗糖或糖精。
通过加入水,适合于制备水性混悬剂的可分散的粉剂和颗粒剂提供与分散剂或润湿剂、助悬剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。适合的分散剂或润湿剂和助悬剂以上文已提到的作为示例。还可存在其他赋形剂例如甜味剂、矫味剂和着色剂。
化合物还可以是非水性的液体剂型,例如油状混悬剂,可通过将活性成分混悬于植物油例如花生油(arachis oil)、橄榄油、芝麻油或花生油(peanut oil)或者矿物油如液体石蜡中来配制所述油状混悬剂。油状混悬剂可含有增稠剂例如蜂蜡、固体石蜡或十六烷醇。可加入甜味剂如上文提到的那些和矫味剂,以提供可口的口服制剂。可通过加入抗氧化剂例如抗坏血酸防止所述组合物腐坏。
本发明的药物组合物还可以是水包油型乳剂。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油(arachis oil)或者矿物油如液体石蜡或者它们的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的胶例如阿拉伯胶或西黄蓍胶,天然存在的磷脂例如大豆卵磷脂,及衍生自脂肪酸与己糖醇脱水物的酯或偏酯如脱水山梨醇单油酸酯,以及所述偏酯与乙烯氧化物的缩合产物如聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯。乳剂还可含有甜味剂和矫味剂。
可使用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制糖浆剂和酏剂。所述剂型还可含有缓和剂(demulcent)、防腐剂和矫味剂和着色剂。
对于直肠给药的药物,还可将化合物以栓剂的形式施用。可通过将药物与适当的无刺激赋形剂混合来制备所述组合物,组合物在常温是固体但在直肠温度是液体,并可由此在直肠熔融以释放药物。所述物质包括可可脂和聚乙二醇。
本发明的四价氮盐前药的制备
本发明前药化合物包含与还原性触发剂连接的效应物部分,触发剂部分优选是如上文所定义的式II的硝基杂环还原性触发剂,更优选是式IIa的硝基杂环还原性触发剂。
效应物部分是式I的4-苯胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶不可逆的erbB1、2、4激酶抑制剂。
式I的4-苯胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶不可逆的erbB1、2、4激酶抑制剂在6位具有酰胺迈克尔受体,迈克尔受体特征可为双键,其在β碳被末端为叔二甲胺的亚甲基所取代,如下式所示。
式IVa
应当理解,效应物剩余部分未在式IVa中显示,其具有式I中定义的双环芳族环结构。
优选的前药化合物是上文所定义的式III。通常情况下,可通过使脂肪族叔二甲胺效应物部分用硝基杂环还原性触发剂季铵化来制备优选的式III前药化合物。所述方法在下文中更详细地描述。
4-苯胺基吡啶度[3,4-d]嘧啶不可逆erbB1、2、4激酶抑制剂的制备
当酰胺迈克尔受体例如未被取代(Smaill等人,J Med Chem,1999,42,1803-1815)、在N-位、α-位或β-位被除二甲氨基亚甲基之外的一系列基团取代时(Smaill等人,J Med Chem,2001,44,429-440),并且当迈克尔受体含有在β-位取代的三键时(Klutchko等人,J Med Chem,2006,49,1475-1485;美国专利号6,602,863),可根据本领域所述的方法制备涉及前文所示的式I化合物的效应物化合物,其中核心的抑制剂骨架是4-苯胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶,且6-位被酰胺迈克尔受体取代。本发明的式I化合物可采用类似的方法制备。
以下流程图1解释说明利用Rewcastle等人,J Chem Soc,PerkinsTrans 1,1996,2221-2226和Soyka等人,US 2005/0085495A1的方法,从已知中间体6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶酮(200)(Rewcastle等人,J Chem Soc,Perkins Trans 1,1996,2221-2226)制备本发明效应物化合物4-苯胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶。
流程图1
以下流程图2解释说明本发明特定的效应物化合物的制备。亚硫酰氯介导6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶酮(200)转化成4-氯-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶,随后与适当的苯胺反应,得到4-苯胺基-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶(201-209)。然后,氟取代4-甲氧基苄胺得到苄胺(210-218),苄胺与三氟乙酸(TFA)反应得到胺(219-227)。CDI-帮助的酰胺与2-(二乙氧基磷酰基)乙酸的偶联产生膦酸酯化合物(228-236)。然后,所述膦酸酯化合物与2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺原位水解产生的甲醛发生Horner-Wadsworth-Emmons偶联,得到示例性的效应物化合物1-9。
流程图2
前药的制备
本发明的前药化合物一般可如下制备:通过使带有脂肪族叔胺的式I激酶抑制剂与适当的硝基杂环或硝基碳环α-甲基卤化物/甲磺酸酯/甲苯磺酸酯在适当的溶剂中反应适当长的时间(例如在N-甲基-2-吡咯烷酮中约15小时),产生四价氮盐,其含有直接或间接与激酶抑制剂氮原子相连的硝基杂环或硝基碳环的还原性触发剂基团。
适用于本发明前药的优选的还原性触发剂基团是下列式II的那些:
其中R4和R5如前文所定义。
特别优选的还原性触发剂基团是下列式IIa-IIg的那些:
可按照先前所述制备式IIa的α-甲基卤化物(溴化物;Stribbling等人,PCT国际专利公开号WO 2008/039087)(氯化物;Tercel等人,J Med Chem,2001,44,3511-3522)。
以下流程图3描述了从市售原料制备α-甲基溴化物239的两种可选方法。
流程图3
以下流程图4描述了从市售原料制备α-甲基溴化物244的途径。
流程图4
以下流程图5描述了从1,5-二甲基-4-硝基-1H-咪唑(238)(流程图3)制备α-甲基溴化物250的途径。
流程图5
流程图6
以下流程图7描述了分别从α-甲基溴化物246(流程图5)和2-溴-1,5-二甲基-4-硝基-1H-咪唑(245)(流程图5)制备α-甲基溴化物264的两种可选途径。以下流程图7还描述了从α-甲基溴化物264制备α-甲基溴化物266的途径。
流程图7
以下流程图8描述了从乙酸(2-溴-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基酯(247)(流程图5)制备α-甲基溴化物270的途径。
流程图8
以下流程图9描述了通过使具有脂肪族叔胺的式I激酶抑制剂与适当的硝基杂环α-甲基卤化物/甲磺酸酯/甲苯磺酸酯(式VIII)在适当的溶剂中反应适当长的时间(例如在N-甲基-2-吡咯烷酮中约15小时)来制备式III的四价氮盐化合物的途径。
流程图9
以下流程图10举例描述了根据本发明的多种式III的前药化合物的制备。4-苯胺基吡啶并[3,4-d]嘧啶效应物化合物1-9(流程图2)与α-甲基溴化物239(流程图3)在N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中于室温反应大约15小时,然后加入乙腈,以产生季铵盐(12、13、15-21)的精制沉淀,过滤收集并使用乙腈、乙酸乙酯和己烷洗涤。
流程图10
以下流程图11描述了根据本发明的前药化合物的制备。
流程图11
以下流程图12-14举例描述了烷基触发剂溴化物的制备,其中R5是C1-C6烷基。
流程图12
流程图13
流程图14
不需进一步解释,认为利用前面的说明,本领域技术人员会最大程度地利用本发明。因此,认为下面的实施例仅为举例说明,并且不以任何方式限制本发明的其余部分。
实验
1.合成
1.1化学合成
由Dunedin,NZ的Otago大学的微量化学实验室进行燃烧分析。使用电热模型9200测定熔点并读数。在Bruker Avance-400光谱仪上测定1HNMR谱,以Me4Si为参照。在Varian VG-70SE光谱仪上以额定的5000分辨率记录高分辨质谱。在ThermoFinnigan MSQ单四极杆质谱仪上记录质谱。使用APCI源进行质量检测,同时使用阳离子和阴离子采集。除非另外说明,化合物通过硅胶60基质的快速柱色谱(Scharlau,230-400目ASTM)纯化,使用所说明的洗脱剂。
1.1.1激酶抑制剂效应物的合成
1.1.1.1(2E)-N-(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(1)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.0g,6.06mmol)、亚硫酰氯(20mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌40min,以得到均质混合物。将所述混合物在40℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。将3-氯-4-(3-氯苄氧基)苯胺(1.79g,6.67mmol)和无水DMA(10mL)的混合物加入到所述固体物中。用更多的DMA(2x 2mL)洗涤3-氯-4-(3-氯苄氧基)苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌1h 30min。将混合物在乙酸乙酯(400mL)和水(400mL)之间分配。分离乙酸乙酯层,并再用水(2x 200mL)洗涤、干燥(MgSO4)和挥发以得到N-(3-氯-4-(3-氯苄氧基)苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(201)的粗产物。硅胶色谱(二氯甲烷/MeOH=25∶1)得到黄色/橙色固体状的纯201(2.52g,100%),熔点196-198℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.03(s,1H),8.94(s,1H),8.69(s,1H),8.21(s,1H),8.07(d,J=2.5Hz,1H),7.75(dd,J=9.0,2.5Hz,1H),7.57-7.54(m,1H),7.49-7.39(m,3H),7.31(d,J=9.0Hz,1H)。分析计算值C20H13Cl2FN4O:C,57.85;H,3.16;N,13.49。实测值:C,57.60;H,3.45;N,13.32。
在氮气气氛下,将化合物201(2.60g,6.27mmol)和4-甲氧基苄基胺(8.24mL,62.7mmol)在无水DMSO(15mL)中的混合物于71-72℃(水浴温度)搅拌91h。将混合物在乙酸乙酯(500mL)和水(300mL)之间进行分配。分离乙酸乙酯层,并再用水(3x 300mL)洗涤;干燥(MgSO4)和挥发以得到N4-(3-氯-4-(3-氯苄氧基)苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(210)的粗产物。硅胶色谱(乙酸乙酯/石油醚=1∶1)得到黄色/橙色固体状的纯210(2.02g,61%),熔点120-122℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]9.59(s,1H),8.72(s,1H),8.33(s,1H),7.99(d,J=2.4Hz,1H),7.57-7.53(m,1H),7.48-7.38(m,3H),7.36-7.19(m,4H),7.15(br s,1H),6.91-6.85(m,2H),5.25(s,1H),4.48(d,J=6.3Hz,2H),3.71(s,3H)。C28H23Cl2N5O2的分析计算值:C,63.16;H,4.35;N,13.15。实测值:C,62.96;H,4.63;N,13.12。
向化合物210(1.46g,2.74mmol)和无水DCM(27mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(2.1mL,27.4mmol),接着加入苯甲醚(0.60mL,5.48mmol),并将混合物再在室温搅拌91h。将混合物倒入石油醚(300mL)中,并在室温搅拌大约30min。倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(300mL)重复所述过程。将剩下的残留物溶解在丙酮-水=1∶1(约100mL)的混合溶剂中,并与5M NH3(100mL)一起在室温搅拌1h。过滤固体物,并依次用丙酮-水=1∶4(5 x 20mL)、石油醚-乙酸乙酯=3∶1(5 x 20mL)洗涤,并干燥以得到N4-(3-氯-4-(3-氯苄氧基)苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(219)(1.10g,97%),熔点251-254℃(分解);1H NMR δ[(CD3)2SO]9.70(s,1H),8.68(s,1H),8.34(s,1H),8.04(br s,1H),7.73(br d,J=8.0Hz,1H),7.57-7.53(m,1H),7.48-7.39(m,3H),7.26(d,J=9.0Hz,1H),7.12(br s,1H),7.65(br s,2H),5.24(s,2H)。C20H15Cl2N5O的分析计算值:C,58.27;H,3.67;N,16.99。实测值:C,58.33;H,3.57;N,17.2。
在室温和氮气气氛下,向CDI(0.53g,3.25mmol)和无水THF(2mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(0.64g,3.25mmol)的THF(1mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物219(1.03g,2.50mmol)在无水THF(2.5mL)和DMA(2.5mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=20∶1)检测反应,并发现50min后,仅大约60%的反应发生。因此,从CDI[0.53g,3.25mmol;无水THF(2mL)]和2-(二乙氧基磷酰基)乙酸[0.64g,3.25mmol);THF(1mL)]制备另一批试剂,并加入到反应物中。将反应物再在40℃搅拌3h。将反应混合物倒入水中(300mL),并与石油醚(400mL)一起在室温搅拌12h。倒出石油醚层。加入更多的石油醚(200mL),并搅拌15min。将固体物经抽滤收集;用水(5x 20mL)洗涤并干燥以得到2-(4-(3-氯-4-(3-氯苄氧基)苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(228)(1.37g,93%);熔点106-109℃;1H NMRδ(CDCl3)9.41(s,1H),9.02(s,1H),8.70(s,1H),8.54(s,1H),7.91(d,J=2.6Hz,1H),7.66(s,1H),7.54(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),7.48(s,1H),7.40-7.29(m,3H),6.99(d,J=8.9Hz,1H),5.15(s,2H),4.30-4.18(m,4H),3.15(d,J=21.1Hz,2H),1.39(t,J=7.0Hz,6H).δ[(CD3)2SO]:10.82(s,1H),10.25(s,1H),8.99(难分辨的d,J=0.6Hz,1H),8.41(s,1H),8.58(s,1H),7.95(d,J=2.6Hz,1H),7.71(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),7.56(br s,1H),7.50-7.38(m,3H),7.27(d,J=9.0Hz,1H),5.26(s,2H),4.15-4.04(m,4H),3.34(d,部分被水峰覆盖,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C26H26Cl2N5O5P.0.5H2O的分析计算值:C,52.10;H,4.54;N,11.68%。实测值C,52.09;H,4.60;N,11.70%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(1.16g,7.20mmol)和水(1.2mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(1.21mL,14.4mmol)。加入后,将混合物在40℃(水浴)搅拌24h。将其冷却到0℃(水浴)。将其称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(1.03g,18.4mmol)溶解在水中(5.5mL)。将其冷却到0℃(水浴)。将其称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物228(1.70g,2.88mmol)和THF(5.5mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(3mL),以得到均质溶液。加入LiCl(122mg,2.88mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=20∶1)检测反应。25min后,加入更多的KOH(0.34g,6.13mmol),并再在0℃搅拌另外的35min。将反应物倒入到水中(200mL)。加入石油醚(200mL),并在室温搅拌15min。倒出石油醚层。加入更多的石油醚(200mL),并搅拌15min。将固体物经抽滤收集;用水(4 x 20mL)洗涤并经硅胶/KOH减压干燥以得到浅黄色固体状的(2E)-N-(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(1)(1.28g,85%),熔点195-198;HPLC:96.8%纯度;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.88(s,1H),10.19(s,1H),8.99(s,1H),8.97(s,1H),8.58(s,1H),7.99(d,J=2.6Hz,1H),7.73(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),7.56(br s,1H),7.49-7.38(m,3H),7.27(d,J=9.0Hz,1H),6.87(dt,J=15.4,6.0Hz,1H),6.51(br d,J=15.4Hz,1H),5.26(s,2H),3.09(br d,J=6.0Hz,2H),2.19(s,6H)。C26H24Cl2N6O2.0.3H2O的分析计算值:C,59.05;H,4.69;N,15.89。实测值:C,58.96;H,4.62;N,15.73。
1.1.1.2(2E)-4-(二甲氨基)-N-(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-丁烯酰胺(2)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.65g,10.0mmol)、亚硫酰氯(30mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌5h,以得到均质混合物。将所述混合物在45℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入1-(3-氟苄基)-1H-吲哚-5-胺(PCT国际申请,2005058245,2005年6月30日)(2.65g,11.0mmol)的无水DMA(15mL)溶液。用更多的DMA(2 x 2mL)洗涤1-(3-氟苄基)-1H-吲哚-5-胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌65h。将混合物倒入到水(200mL)中。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约9。加入石油醚(200mL),并在室温搅拌2h,慢慢倒出石油醚层。再用石油醚(200mL)重复所述过程。经过滤收集固体物,并用水(5 x 25mL)洗涤。将得到的固体物悬浮于丙酮(80mL)中,并在室温搅拌20min。加入水(160mL),并再搅拌1.5h。将固体物过滤、干燥(MgSO4)并最终经硅胶柱纯化(MeOH/二氯甲烷:0-10%的梯度),以得到浅棕色固体状的6-氟-N-(1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(202)(3.11g,80%),熔点218-221℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.15(s,1H),8.92(s,1H),8.64(s,1H),8.30(d,J=1.3Hz,1H),8.28(br s,1H),8.19(难分辨的d,J=0.7Hz,1H),7.77(d,J=9.0Hz,1H),7.72(dd,J=9.0,1.8Hz,1H),7.42-7.32(m,1H),7.15-7.01(m,3H),5.71(s,2H)。C21H14F2N6的分析计算值:C,64.94;H,3.63;N,21.64。实测值:C,65.21;H,3.71;N,21.63。
在氮气气氛下,将化合物202(3.00g,7.73mmol)和4-甲氧基苄基胺(10.2mL,77.3mmol)在无水DMSO(18mL)中的混合物于68-70℃(水浴温度)搅拌165h。然后,将溶液冷却,并加入石油醚(200mL)。将得到的溶液在室温搅拌15min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用更多的石油醚(200ml)重复所述操作。加入水(200mL),并将混合物在室温搅拌45min。将油状物放置。由此,将产物萃取到乙酸乙酯中;干燥(MgSO4)并除去溶剂,以得到棕色油状物。将其经硅胶柱(EtOAc/石油醚:从30%EtOAc至纯EtOAc的梯度)纯化,以得到黄色/橙色固体状的纯N4-(1-(3-氟苄基)-1H-吲哚-5-基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(211)(2.38g,61%),熔点196-198℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.75(s,1H),8.72(s,1H),8.29(s,1H),8.22(难分辨的d,J=1.3Hz,1H),8.15(d,J=0.7Hz,1H),7.73(br d,J=9.0Hz,1H),7.68(dd,J=9.0,1.8Hz,1H),7.40-7.31(m,3H),7.24-7.17(m,2H),7.13-7.01(m,3H),6.92-6.84(m,2H),5.70(s,2H)4.49(d,J=6.3Hz,2H),3.71(s,3H)。C29H24FN7O.1.5H2O己烷的分析计算值:C,65.40;H,5.11;N,18.41%。实测值:C,65.45;H,5.07;N,18.58%。
向化合物211(2.27g,4.48mmol)和无水DCM(45mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(3.45mL,44.8mmol),接着加入苯甲醚(0.99mL,8.96mmol),并将混合物再在室温搅拌5天。将混合物倒入石油醚(500mL)中,并在室温搅拌大约20min。慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(300mL)重复所述过程。在0℃,向剩下的固体物中加入5M NH3(80ml),并在室温搅拌15min。收集固体物,并依次用水(6x 10mL)、石油醚-乙酸乙酯=3∶1(3 x 20mL)洗涤,并干燥以得到N4-(1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(220)(1.68g,97%),熔点241-244℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]9.72(s,1H),8.67(s,1H),8.30(s,1H),8.27(br s,1H),8.15(s,1H),7.75-7.68(m,2H),7.41-7.33(m,1H),7.18(s,1H),7.14-7.01(m,3H),6.20(s,2H),5.69(s,2H)。C21H16FN7.1.5H2O己烷的分析计算值:C,61.16;H,4.64;N,23.77。实测值:C,61.23;H,4.71;N,23.87。
在室温和氮气气氛下,向CDI(1.41g,8.73mmol)和无水THF(6mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(1.56g,7.94mmol)的THF(4mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物220(1.53g,3.97mmol)在无水THF(4mL)和DMA(5mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=15∶1)检测反应。搅拌过夜(16h)后,发现仅大约70%的反应发生。因此,从CDI[0.42g,2.62mmol;DCM(3mL)]和2-(二乙氧基磷酰基)乙酸[0.47g,2.38mmol);DCM(2mL)]制备另一批试剂,并加入到反应物中。将反应物再在40℃搅拌4h。将反应混合物倒入水中(200mL),并与石油醚(400mL)一起在室温搅拌20min。倒出石油醚层。用更多的石油醚(200mL)再重复一次所述操作。将粘稠固体物经抽滤收集;用水(5 x 30mL)洗涤。将得到的固体物溶解于丙酮(50mL)中,并在室温用水(100mL)和石油醚(200mL)搅拌68h。收集固体物,用丙酮/水=1∶10(5 x 30mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(229)(1.95g,87%);熔点111-114℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]:10.81(s,1H),10.36(s,1H),8.98(s,1H),8.88(s,1H),8.52(s,1H),8.16(d,J=0.7Hz,1H),8.13(d,J=1.3Hz,1H),7.73(d,J=9.0Hz,1H),7.68(dd,J=9.0,1.8Hz,1H),7.42-7.32(m,1H),7.15-7.00(m,3H),5.70(s,2H),4.17-4.03(m,4H),3.32(d,部分被水峰掩盖,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C27H27FN7O4P.1.6H2O的分析计算值:C,54.75;H,5.14;N,16.55%。实测值:C,54.60;H,5.21;N,16.60%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(1.32g,8.20mmol)和水(1.4mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(1.38mL,16.4mmol)。加入后,将混合物在45℃(水浴)搅拌25h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(2.36g,42.0mmol)溶解在水(7mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物229(1.85g,3.28mmol)和THF(7mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(4mL),以得到均质溶液。加入LiCl(139mg,3.28mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=10∶1)检测反应。再搅拌30min后,将反应物倒入到水(200mL)中。加入石油醚(200mL),并在室温搅拌15min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(200mL),并搅拌15min。将固体物经抽滤收集;用水(4x 30mL)洗涤并经硅胶/KOH减压干燥以得到浅黄色固体状的(2E)-4-(二甲氨基)-N-(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-丁烯酰胺(2)(1.55g,95%),熔点240-243;HPLC:96.7%纯度;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.87(s,1H),10.29(s,1H),9.01(s,1H),8.98(s,1H),8.53(s,1H),8.18(d,J=0.7Hz,1H),8.16(d,J=0.4Hz,1H),7.73(br d,J=9.0Hz,1H),7.70(dd,J=9.0,1.7Hz,1H),7.41-7.33(m,1H),7.14-7.02(m,3H),6.87(dt,J=15.4,6.0Hz,1H),6.52(brd,J=15.4Hz,1H),5.70(s,2H),3.09(dd,J=6.0,1.1Hz,2H),2.19(s,6H)。C27H25FN8O.1.2H2O的分析计算值:C,62.59;H,5.33;N,21.63%。实测值:C,62.59;H,5.25;N,21.59%。
1.1.1.3(2E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(3)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.65g,10.0mmol)、亚硫酰氯(30mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌2h 30min,以得到均质混合物。将所述混合物在40℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯胺(2.58g,11.0mmol)的无水DMA(15mL)溶液。用更多的DMA(2 x 5mL)洗涤3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌18h。将混合物倒入到水(300mL)中。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约9。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。再用石油醚(300mL)重复所述过程。经过滤收集固体物,并用水(4x 50mL)洗涤。将得到的固体物用热(大约50℃)丙酮(300mL)搅拌15min。过滤掉难溶的物质,并将滤液减压蒸发以得到黄色/橙色固体状的N-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(203)(3.18g,83%),熔点216-219℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.04(s,1H),8.94(s,1H),8.69(s,1H),8.63-8.57(m,1H),8.22(br s,1H),8.08(d,J=2.6Hz,1H),7.85(td,J=7.7,1.8Hz,1H),7.75(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),7.59(br d,J=7.8Hz,1H),7.40-7.35(m,1H),7.32(d,J=9.0Hz,1H),5.31(s,2H)。C19H13ClFN5O.0.9H2O的分析计算值:C,57.34;H,3.75;N,17.60。实测值:C,57.46;H,3.82;N,17.63。
在氮气气氛下,将化合物203(3.07g,8.04mmol)和4-甲氧基苄基胺(10.6mL,80.4mmol)在无水DMSO(20mL)中的混合物于70℃(水浴温度)搅拌118h。然后,将溶液冷却,并加入石油醚(200mL)。将得到的溶液在室温搅拌15min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用更多的石油醚(200ml)重复所述操作。加入水(200mL),并将混合物在室温搅拌过夜(22h)。将固体物过滤并用水(5x30mL)、随后用石油醚(3x30mL)洗涤固体物。将得到的粘稠黄色/橙色固体物用丙酮(150mL)在室温搅拌20min。缓慢加入水(150mL),并再在室温搅拌45min。经抽滤收集精细固体物,用水/丙酮(1∶1)(4x20mL)、石油醚(3 x 20mL)洗涤,并经硅胶/KOH真空干燥,以得到黄色/橙色固体状的纯N4-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(212)(3.08g,77%),熔点182-184℃;1HNMR δ[(CD3)2SO]9.60(s,1H),8.72(s,1H),8.64-8.56(m,1H),8.33(s,1H),8.01(d,J=2.6Hz,1H),7.88(td,J=7.7,1.8Hz,1H),7.71(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),7.58(d,J=7.7Hz),7.42-7.19(m,5H),7.15(s,1H),6.93-6.84(m,2H),5.25(s,2H),4.48(d,J=6.3Hz,2H),3.71(s,3H)。C27H23ClN6O2.0.6丙酮的分析计算值:C,64.80;H,5.02;N,15.74%。实测值:C,64.47;H,5.00;N,15.95%。
向化合物212(2.88g,5.77mmol)和DCM(60mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(4.38mL,57.7mmol),接着加入苯甲醚(1.27mL,11.5mmol),并将混合物再在室温搅拌。72h后,加入另一批三氟乙酸(4.38mL,57.7mmol),并再搅拌49h。将混合物倒入石油醚(250mL)中,并在室温搅拌大约20min。慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(250mL)重复所述过程。在0℃,将剩下的固体物溶解于丙酮(150mL)中,并加入5MNH3(125ml)。将混合物在室温搅拌30min。收集固体物,并依次用丙酮/水(1∶4)(5x30mL)、石油醚-乙酸乙酯=3∶1(5 x 30mL)洗涤,并干燥以得到N4-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(221)(1.94g,89%),熔点247-250℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.64(s,1H),8.68(s,1H),8.62-8.56(m,1H),8.33(s,1H),8.06(d,J=2.6Hz,1H),7.88(td,J=7.7,1.8Hz,1H),7.73(dd,J=9.0,2.6Hz,1H),7.58(br d,J=7.8Hz,1H),7.40-7.34(m,1H),7.26(d,J=9.0Hz,1H),7.12(s,1H),6.23(s,2H),5.29(s,2H)。C19H15ClN6O.1.5H2O的分析计算值:C,56.23;H,4.47;N,20.71%。实测值:C,56.55;H,4.45;N,20.42%。
在室温和氮气气氛下,向CDI(2.25g,13.9mmol)和无水THF(9mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(2.43g,12.4mmol)的THF(7mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物221(1.88g,4.96mmol)在无水THF(10mL)和DMA(16mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=15∶1)检测反应。搅拌17h后,将反应混合物倒入水中(300mL),并与石油醚(300mL)一起在室温搅拌30min。倒出石油醚层。用更多的石油醚(300mL)再重复一次所述操作。将粘稠固体物经抽滤收集;用水(5 x 30mL)洗涤。经抽滤收集固体物;用水(5x 20mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(3-氯-4-(吡啶-2-基甲氧基)苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(230)(2.56g,93%);熔点113-116℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]:10.82(s,1H),10.25(s,1H),8.99(s,1H),8.84(s,1H),8.63-8.56(m,2H),7.96(d,J=2.6Hz,1H),7.88(td,J=7.7,1.8Hz,1H),7.70(dd,J=8.9,2.6Hz,1H),7.59(br d,J=7.8Hz,1H),7.41-7.34(m,1H),7.28(d,J=9.0Hz,3H),4.16-4.03(m,4H),3.31(d,部分被水峰覆盖,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C25H26ClN6O5P.1.2H2O的分析计算值:C,51.90;H,4.95;N,14.53%。实测值:C,51.85;H,4.94;N,14.52%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(1.76g,11.0mmol)和水(1.8mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(1.84mL,21.9mmol)。加入后,将混合物在50℃(水浴)搅拌22h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(3.14g,56.1mmol)溶解在水(9mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物230(2.44g,4.38mmol)和THF(9mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(6mL),以得到均质溶液。加入LiCl(186mg,4.38mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=10∶1)检测反应。再搅拌30min后,将反应物倒入到水(300mL)中。加入石油醚(400mL),并在室温搅拌15min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(300mL),并搅拌15min。经抽滤收集固体物;用水(4 x 30mL)洗涤并经硅胶/KOH减压干燥以得到化合物3(1.79g,83%),经HPLC发现其纯度仅为87%。因此,将样品用热MeOH(200mL)搅拌30min,并冷却至室温。过滤掉不溶物质,并向滤液中加入一体积的水,以沉淀出需要的产物。收集固体物,用水/MeOH=1∶1洗涤几次,并干燥以得到浅黄色固体状的(2E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(3)(1.54g,72%),熔点196-199;HPLC:94.6%纯度;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.88(s,1H),10.19(s,1H),8.99(s,1H),8.64-8.55(m,2H),8.00(d,J=2.5Hz,1H),7.88(td,J=7.7,1.8Hz,1H),7.73(br dd,J=8.9,2.5Hz,1H),7.59(br d,J=7.8Hz,1H),7.41-7.34(m,1H),7.28(d,J=9.0Hz,1H),6.87(dt,J=15.4,6.1Hz,1H),6.51(br d,J=15.4Hz,1H),5.30(s,2H),3.09(dd,J=6.1,1.2Hz,2H),2.19(s,6H)。C25H24ClN7O2.1.5H2O的分析计算值:C,58.08;H,5.26;N,18.97%。实测值:C,58.17;H,5.36;N,19.00%。
1.1.1.4(2E)-N-[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(4)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.50g,9.09mmol)、亚硫酰氯(20mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌1.5h,以得到均质混合物。将所述混合物在50℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入3,4-二氯苯胺(1.62g,10.0mmol)的无水DMA(15mL)溶液。用更多的DMA(2 x 2mL)洗脱3,4-二氯苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌20h。将混合物倒入到水(200mL)中。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约8。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。再用石油醚重复一次所述过程。经过滤收集固体物,并用水(5 x 25mL)洗涤。经硅胶/KOH真空干燥过夜,以得到黄色/橙色固体状的N-(3,4-二氯苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(204)(2.81g,100%),熔点262-264℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]10.17(s,1H),8.99(s,1H),8.79(s,1H),8.35(d,J=2.5Hz,1H),8.26(难分辨的d,J=0.7Hz,1H),7.92(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),7.69(d,J=8.8Hz,1H)。C13H7Cl2FN4的分析计算值:C,50.51;H,2.28;N,18.12。实测值:C,50.50;H,2.27;N,18.42。
在氮气气氛下,将化合物204(2.95g,9.55mmol)和4-甲氧基苄基胺(12.6mL,95.5mmol)在无水DMSO(20mL)中的混合物于52℃(水浴温度)搅拌10天。然后,将溶液冷却,并加入石油醚(200mL)。将得到的溶液在室温搅拌10min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用更多的石油醚(2x200ml)重复所述操作。加入水(200mL),并将混合物在室温搅拌15min。将固体物过滤并用水(5x30mL)、随后用石油醚(3x30mL)洗脱固体物。将得到的粘稠黄色/橙色固体物用丙酮(100mL)在35-45℃(内部温度)搅拌10min。加入水(100mL),并在室温搅拌20min。经抽滤收集固体物,用水/丙酮(1∶1)(5x20mL)洗涤,并经硅胶/KOH真空干燥,以得到黄色/橙色固体状的纯N4-(3,4-二氯苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(213)(2.59g,64%),熔点209-211℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.76(s,1H),8.77(s,1H),8.42(s,1H),8.30(难分辨的d,J=2.1Hz,1H),7.89(dd,J=8.8,2.1Hz,1H),7.64(d,J=8.8Hz,1H),7.38-7.25(m,3H),7.17(s,1H),6.92-6.83(m,2H),4.49(d,J=6.3Hz,2H),3.71(s,3H)。C21H17Cl2N5O的分析计算值:C,59.17;H,4.02;N,16.43%。实测值:C,58.93;H,4.17;N,16.12%。
向化合物213(2.50g,5.86mmol)和DCM(60mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(4.49mL,58.6mmol),接着加入苯甲醚(1.28mL,11.7mmol),并将混合物再在室温搅拌43h。将混合物倒入石油醚(600mL)中,并在室温搅拌大约20min。慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(300mL)重复所述过程。在0℃,向剩下的固体物中加入5M NH3(80ml),并在室温搅拌15min。收集固体物,并依次用水(6x10mL)、石油醚-乙酸乙酯=3∶1(3 x 30mL)洗涤,并干燥以得到N4-(3,4-二氯苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(222)(1.76g,98%),熔点277-280℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]9.83(s,1H),8.73(s,1H),8.42(s,1H),8.34(d,J=2.5Hz,1H),7.92(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),7.63(d,J=8.8Hz,1H),7.14(s,1H),6.30(s,2H)。C13H9Cl2N5.0.5H2O的分析计算值:C,49.54;H,3.20;N,22.22。实测值:C,49.70;H,3.08;N,22.28。
在室温和氮气气氛下,向CDI(1.98g,12.2mmol)和无水THF(8mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(2.18g,11.1mmol)的THF(6mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物222(1.70g,5.56mmol)在无水THF(6mL)和DMA(7mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=15∶1)检测反应。搅拌过夜(17h)后,将反应混合物倒入水中(300mL),并与石油醚(400mL)一起在室温搅拌20min。慢慢倒出石油醚层。用石油醚(400mL)再重复一次所述操作。经抽滤收集固体物;用水(5x 20mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(3,4-二氯苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(231)(2.56g,95%);熔点121-124℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]:10.86(s,1H),10.42(s,1H),9.04(s,1H),8.87(s,1H),8.67(s,1H),8.24(d,J=2.2Hz,1H),7.89(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),7.65(d,J=8.8Hz,1H),4.16-4.04(m,4H),3.32(d,部分被水峰覆盖,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C19H20Cl2N5O4P.H2O的分析计算值:C,45.43;H,4.42;N,13.94%。实测值:C,45.37;H,4.20;N,13.81%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(2.08g,12.9mmol)和水(2.2mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(2.16mL,25.7mmol)。加入后,将混合物在40℃(水浴)搅拌20h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(1.84g,32.9mmol)溶解在水(10mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物231(2.49g,5.14mmol)和THF(10mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(5.5mL),以得到均质溶液。加入LiCl(218mg,5.14mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=10∶1)检测反应。15min后,发现大约20%化合物231剩余。加入更多的固体状KOH(0.40g,7.14mmol)。再搅拌15min后,将反应物倒入到水(300mL)中。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌15min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(300mL),并搅拌15min。经抽滤收集固体物;用水(4 x 30mL)洗涤并经硅胶/KOH减压干燥以得到米色固体状的(2E)-N-[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(4)(2.03g,95%),熔点161-164℃;HPLC:98.6%纯度;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.92(s,1H),10.36(s,1H),9.09-8.95(m,2H),8.67(br s,1H),8.27(br s,1H),7.92(br d,J=7.8Hz,1H),7.65(d,J=8.8,1H),6.88(dt,J=15.4,6.0Hz,1H),6.52(br d,J=15.4Hz,1H),3.09(dd,J=6.0,1.2Hz,2H),2.19(s,6H)。C19H18Cl2N6O.1.2H2O的分析计算值:C,51.99;H,4.69;N,19.15。实测值:C,51.93;H,4.59;N,19.15。
1.1.1.5(2E)-N-[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(5)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.50g,9.09mmol)、亚硫酰氯(20mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌3h,以得到均质混合物。将所述混合物在40℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入3-溴-4-氯苯胺(2.07g,10.0mmol)的无水DMA(15mL)溶液。用更多的DMA(2x 2mL)洗涤3-溴-4-氯苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌19h。将混合物倒入到水(200mL)中。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约8。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。再用石油醚重复所述过程。经过滤收集固体物,并用水(4x 20mL)洗涤。经硅胶/KOH真空干燥过夜,以得到黄色/橙色固体状的N-(3-溴-4-氯苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(205)(3.20g,99%),熔点271-275℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.15(s,1H),8.99(s,1H),8.79(s,1H),8.45(d,J=2.5Hz,1H),8.26(br s,1H),7.98(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),7.69(d,J=8.8Hz,1H)。C13H7BrClFN4的分析计算值:C,44.16;H,2.00;N,15.85。实测值:C,44.21;H,1.87;N,15.98。
在氮气气氛下,将化合物205(3.09g,8.74mmol)和4-甲氧基苄基胺(11.5mL,87.4mmol)在无水DMSO(20mL)中的混合物于58-60℃(水浴温度)搅拌一周。然后,将溶液冷却,并加入石油醚(300mL)。将得到的溶液在室温搅拌20min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用石油醚(300ml)再重复一次所述操作。加入水(250mL),并将混合物在室温搅拌20h。经过滤收集黄色/橙色固体物并用水(5x20mL)、随后用石油醚(3x30mL)洗涤。将得到的粘稠黄色/橙色固体物在45℃(水浴温度)溶解于丙酮(150mL)中。将得到的溶液过滤以除去不溶的杂质。向滤液中加入水(400mL),并在室温搅拌1h。经抽滤收集固体物,用水(5x25mL)、石油醚(3x 30mL)洗涤,并经硅胶/KOH真空干燥,以得到黄绿色固体状的纯N4-(3-溴-4-氯苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(214)(3.01g,73%),熔点207-210℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.74(s,1H),8.77(s,1H),8.41(s,1H),8.39(d,J=2.4Hz,1H),7.96(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.64(d,J=8.8Hz,1H),7.38-7.25(m,3H),7.17(s,1H),6.92-6.85(m,2H),4.49(d,J=6.3Hz,2H),3.71(s,3H)。C21H17BrClN5O的分析计算值:C,53.58;H,3.64;N,14.88%。实测值:C,53.84;H,3.55;N,14.63%。
向化合物214(2.92g,6.20mmol)和DCM(60mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(4.75mL,62.0mmol),接着加入苯甲醚(1.36mL,12.4mmol),并将混合物再在室温搅拌42h。将混合物倒入石油醚(600mL)中,并在室温搅拌大约20min。慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(300mL)重复所述过程。在0℃,向剩下的固体物中加入5M NH3(80ml),并在室温搅拌15min。收集固体物,并依次用水(6x10mL)、石油醚-乙酸乙酯=3∶1(3 x 30mL)洗涤,并干燥以得到N4-(3-溴-4-氯苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(223)(2.17g,100%),熔点271-274℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]9.82(s,1H),8.72(s,1H),8.44(d,J=2.3Hz,1H),8.42(s,1H),7.97(dd,J=8.8,2.3Hz,1H),7.62(d,J=8.8Hz,1H),7.14(s,1H),6.30(s,2H)。C13H9BrClN5.0.6H2O的分析计算值:C,43.20;H,2.85;N,19.38。实测值:C,43.00;H,2.95;N,19.12。
在室温和氮气气氛下,向CDI(1.20g,7.42mmol)和无水THF(5mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(1.45g,7.42mmol)的THF(4mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物223(2.00g,5.71mmol)在无水THF(6mL)和DMA(7mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=10∶1)检测反应,并且1h后,仅发现大约60%的反应发生。因此,从CDI[0.87g,5.37mmol;无水THF(2.5mL)]和2-(二乙氧基磷酰基)乙酸[0.72g,5.37mmol);THF(3mL)]制备另一批试剂,并加入到反应中。将反应物再在40℃搅拌3h。将反应混合物倒入水中(300mL),并与石油醚(400mL)一起在室温搅拌20min。慢慢倒出石油醚层。用石油醚(400mL)再重复一次所述操作。经抽滤收集固体物;用水(5 x 20mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(3-溴-4-氯苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(232)(2.85g,94%);熔点113-116℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]:10.86(s,1H),10.40(s,1H),9.04(s,1H),8.87(s,1H),8.67(s,1H),8.34(d,J=2.3Hz,1H),7.94(dd,J=8.8,2.3Hz,1H),7.65(d,J=8.8Hz,1H),4.16-4.03(m,4H),3.32(d,部分被水峰覆盖,2H),1.26(t,J=7.1Hz,6H)。C19H20BrClN5O4P.H2O的分析计算值:C,41.74;H,4.06;N,12.81%。实测值:C,42.01;H,3.90;N,12.78%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(2.11g,13.1mmol)和水(2.2mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(2.19mL,26.1mmol)。加入后,将混合物在40℃(水浴)搅拌21h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(1.87g,33.4mmol)溶解在水(10mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物232(2.76g,5.22mmol)和THF(10mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(5.5mL),以得到均质溶液。加入LiCl(221mg,5.22mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=10∶1)检测反应。35min后,将反应物倒入到水(300mL)中。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌15min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(300mL),并搅拌15min。经抽滤收集固体物;用水(4 x 30mL)洗涤并经硅胶/KOH减压干燥以得到浅黄色固体状的(2E)-N-[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(5)(2.37g,98%),熔点168-171;HPLC:96.8%纯度;1H NMRδ[(CD3)2SO]10.92(s,1H),10.34(s,1H),9.10-8.95(m,2H),8.67(br s,1H),8.38(br s,1H),7.97(br d,J=8.3Hz,1H),7.65(d,J=8.8,1H),6.88(dt,J=15.4,6.0Hz,1H),6.52(br d,J=15.4Hz,1H),3.09(dd,J=6.0,1.1Hz,2H),2.19(s,6H)。C19H18BrClN6O.H2O的分析计算值:C,47.57;H,4.20;N,17.52。实测值:C,47.80;H,4.25;N,17.51。
1.1.1.6(2E)-N-[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(6)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.65g,10.0mmol)、亚硫酰氯(20mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌3h,以得到均质混合物。将所述混合物在50℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入4-溴-3-氯苯胺(2.27g,11.0mmol)的无水DMA(15mL)溶液。用更多的DMA(2x2mL)洗涤4-溴-3-氯苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌18h。将混合物倒入到水(250mL)中。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约8。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌1h。慢慢倒出石油醚层。再用石油醚重复所述过程。经过滤收集固体物,并用水(4 x 20mL)洗涤。经硅胶/KOH真空干燥过夜,以得到米色固体状的N-(4-溴-3-氯苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(206)(3.31g,94%),熔点258-261℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.17(s,1H),8.99(s,1H),8.79(s,1H),8.35(br s,1H),8.27(s,1H),7.93-7.74(m,2H)。C13H7BrClFN4的分析计算值:C,44.16;H,2.00;N,15.85。实测值:C,43.96;H,1.96;N,15.60。
在氮气气氛下,将化合物206(3.22g,9.11mmol)和4-甲氧基苄基胺(11.95mL,91.1mmol)在无水DMSO(20mL)中的混合物于70℃(水浴温度)搅拌113h。然后,将溶液冷却,并与石油醚(300mL)一起在室温搅拌20min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用石油醚(300ml)再重复一次所述操作。加入水(300mL),并将混合物在室温搅拌4h。经过滤收集固体物并用水(4x20mL)洗涤。将得到的粘稠黄色/橙色固体物在40℃(水浴温度)溶解于丙酮(80mL)中。加入水(80mL),并在室温搅拌10min。经抽滤收集固体物,用丙酮/水=1∶1(5x20mL)洗涤,并经硅胶/KOH真空干燥,以得到黄绿色固体状的纯N4-(4-溴-3-氯苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(215)(3.63g,85%),熔点175-177℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.77(s,1H),8.77(s,1H),8.42(s,1H),8.30(br s,1H),7.83(br d,J=8.2,1H),7.77(d,J=8.7Hz,1H),7.43-7.26(m,3H),7.17(s,1H),6.88(br d,J=8.3Hz,2H),4.49(d,J=5.6Hz,2H),3.71(s,3H)。C21H17BrClN5O.丙酮的分析计算值:C,54.51;H,4.38;N,13.24%。实测值:C,54.83;H,4.31;N,13.15%。
向化合物215(3.55g,7.56mmol)和DCM(75mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(5.82mL,75.6mmol),接着加入苯甲醚(1.66mL,15.1mmol),并将混合物再在室温搅拌46h。将混合物倒入石油醚(400mL)中,并用MeOH洗去残留物。在室温搅拌大约20min,慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(400mL)重复所述过程。在0℃,向剩下的固体物中加入5M NH3(100ml),并在室温搅拌15min。收集固体物,并用水(5x20mL)洗涤,并干燥以得到N4-(4-溴-3-氯苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(224)(2.41g,91%),熔点272-275℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.83(s,1H),8.73(s,1H),8.42(s,1H),8.34(d,J=2.0Hz,1H),7.84(dd,J=8.8,2.0Hz,1H),7.75(d,J=8.8Hz,1H),7.14(s,1H),6.31(s,2H)。C13H9BrClN5.0.2MeOH的分析计算值:C,45.15;H,2.73;N,19.36。实测值:C,44.84;H,2.52;N,19.29。
在室温和氮气气氛下,向CDI(2.97g,18.3mmol)和无水THF(12mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(3.2g,16.3mmol)的THF(10mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物224(2.29g,6.53mmol)在无水THF(8mL)和DMA(9mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=10∶1)检测反应,并且3h后,发现大约80%的反应发生。因此,从CDI[0.59g,3.66mmol;无水THF(2.5mL)]和2-(二乙氧基磷酰基)乙酸[0.64g,3.26mmol);THF(2mL)]制备另一批试剂,并加入到反应混合物中。将反应物再在40℃搅拌1h。将反应混合物倒入水中(500mL),并与石油醚(500mL)一起在室温搅拌过夜。慢慢倒出石油醚层。与更多的石油醚(300mL)一起搅拌10min。经抽滤收集固体物;用水(5x 30mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(4-溴-3-氯苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(233)(3.26g,95%);熔点121-124℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]:10.89(s,1H),10.43(s,1H),9.04(s,1H),8.88(s,1H),8.68(s,1H),8.24(d,J=2.1Hz,1H),7.82(dd,J=8.8,2.1Hz,1H),7.78(d,J=8.8Hz,1H),4.17-4.00(m,4H),3.32(d,J=21.5,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C19H20BrClN5O4P.0.5H2O的分析计算值:C,42.44;H,3.94;N,13.02%。实测值:C,42.42;H,3.99;N,12.98%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(2.42g,15.0mmol)和水(2.5mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(2.52mL,30.0mmol)。加入后,将混合物在40℃(水浴)搅拌48h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(4.30g,76.8mmol)溶解在水(13mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物233(3.71g,6.00mmol)和THF(13mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(6.5mL),以得到均质溶液。加入LiCl(254mg,6.00mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=20∶1)检测反应。40min后,将反应物倒入到水(300mL)中。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(300mL),并搅拌15min。经抽滤收集固体物;用水(5 x 30mL)洗涤并经硅胶/KOH减压干燥以得到米色固体状的(2E)-N-[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(6)(2.71g,98%),熔点176-179;HPLC:97.8%纯度;1H NMRδ[(CD3)2SO]10.95(s,1H),10.37(s,1H),9.04(s,1H),9.00(s,1H),8.68(s,1H),8.27(br s,1H),7.84(br d,J=8.3Hz,1H),7.78(d,J=8.8,1H),6.87(dt,J=15.5,6.0Hz,1H),6.52(br d,J=15.5Hz,1H),3.09(br d,J=5.4Hz,2H),2.18(s,6H)。C19H18BrClN6O.H2O的分析计算值:C,47.57;H,4.20;N,17.52。实测值:C,47.95;H,4.16;N,17.31。
1.1.1.7(2E)-N-[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(7)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.65g,10.0mmol)、亚硫酰氯(20mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌5h,以得到均质混合物。将所述混合物在50℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入3,4-二溴苯胺(2.76g,11.0mmol)的无水DMA(15mL)溶液。用更多的DMA(2x2mL)洗涤3,4-二溴苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌19h。将混合物倒入到水(300mL)中。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约8。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。再用石油醚重复所述过程。经过滤收集固体物,并依次用水(5 x 25mL)和石油醚/乙酸乙酯(10∶1)(4 x 25mL)洗涤。经硅胶/KOH真空干燥过夜,以得到米色固体状的N-(3,4-二溴苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(207)(3.50g,88%),熔点262-264℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]10.14(br s,1H),8.98(s,1H),8.78(s,1H),8.45(br s,1H),8.26(s,1H),7.91(br d,J=7.8,2.5Hz,1H),7.80(d,J=8.7Hz,1H)。C13H7Br2FN4的分析计算值:C,39.23;H,1.77;N,14.08。实测值:C,39.23;H,1.79;N,13.86。
在氮气气氛下,将化合物207(3.40g,6.54mmol)和4-甲氧基苄基胺(11.2mL,85.4mmol)在无水DMSO(22mL)中的混合物于70℃(水浴温度)搅拌138h。然后,将混合物冷却,并倒入水中(400mL)。加入石油醚(400mL),并在室温搅拌30min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用更多石油醚(400ml)重复所述操作。将其过滤,并用水(3 x 30mL)洗涤固体物。将得到的粘稠黄色/橙色固体物在室温与丙酮(100mL)一起搅拌大约30min,以得到精制的橙色沉淀物。加入水(200mL),并再在室温搅拌2h。经抽滤收集固体物,用水/丙酮=2∶1(5x30mL)洗涤,并经硅胶/KOH真空干燥,以得到黄绿色固体状的纯N4-(3,4-二溴苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(216)(4.16g,95%),熔点166-169℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]9.72(s,1H),8.77(s,1H),8.42(s,1H),8.40(br s,1H),7.89(br d,J=7.7Hz,1H),7.76(d,J=8.7,Hz,1H),7.40-7.25(m,3H),7.17(s,1H),6.88(br d,J=8.3Hz,2H),4.49(d,J=5.9Hz,2H),3.71(s,3H)。C21H17Br2N5O.0.25己烷的分析计算值:C,50.35;H,3.85;N,13.05%。实测值:C,50.56;H,3.54;N,12.87%。
向化合物216(4.08g,7.92mmol)和DCM(80mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(6.07mL,79.2mmol),接着加入苯甲醚(1.73mL,15.8mmol),并将混合物再在室温搅拌46h。将混合物倒入石油醚(500mL)中,并在室温搅拌大约15min。慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(400mL)重复所述过程。在0℃,将剩余的固体物溶解于最少量的MeOH(120mL)中,并在0℃加入5M NH3(150ml),并在室温搅拌15min。收集固体物,并依次用水(5x20mL)、石油醚-乙酸乙酯=5∶1(5 x 20mL)洗涤,并干燥以得到N4-(3,4-二溴苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(225)(2.47g,79%),熔点265-268℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]9.80(s,1H),8.72(s,1H),8.44(d,J=2.2Hz,1H),8.42(s,1H),7.90(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),7.74(d,J=8.8Hz,1H),7.14(s,1H),6.30(s,2H)。C13H9Br2N5.0.1己烷的分析计算值:C,40.47;H,2.60;N,17.35。实测值:C,40.16;H,2.45;N,17.20。
在室温和氮气气氛下,向CDI(2.74g,16.9mmol)和无水THF(13mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(2.96g,15.1mmol)的THF(10mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物225(2.38g,6.02mmol)在无水THF(7mL)和DMA(8mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=15∶1)检测反应。搅拌4h后,将反应混合物倒入水中(250mL),并与石油醚(350mL)一起在室温搅拌20min。慢慢倒出石油醚层。用石油醚(200mL)再重复一次所述过程。经抽滤收集固体物;用水(5 x 30mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(3,4-二溴苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(234)(3.28g,95%);熔点120-124℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]:10.89(s,1H),10.41(s,1H),9.04(s,1H),8.88(s,1H),8.67(s,1H),8.34(d,J=2.5Hz,1H),7.87(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),7.77(d,J=8.8Hz,1H),4.17-4.03(m,4H),3.32(d,J=21.6Hz,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C19H20Br2N5O4P的分析计算值:C,39.81;H,3.52;N,12.22%。实测值:C,39.48;H,3.78;N,11.79%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(2.25g,14.0mmol)和水(2.4mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(2.35mL,28.0mmol)。加入后,将混合物在45℃(水浴)搅拌23h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(4.02g,71.7mmol)溶解在水(12mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物234(3.21g,5.60mmol)和THF(12mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(6mL),以得到均质溶液。加入LiCl(237mg,5.60mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=25∶1)检测反应。1h后,将反应物倒入到水(200mL)中。加入石油醚(200mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(200mL),并搅拌15min。经抽滤收集固体物;用水(5 x 20mL)洗涤并经硅胶/KOH减压干燥以得到米色固体状的(2E)-N-[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(7)(2.76g,98%),熔点176-179℃;HPLC:97.2%纯度;1H NMRδ[(CD3)2SO]10.95(s,1H),10.35(s,1H),9.03(s,1H),9.00(s,1H),8.67(br s,1H),8.37(br s,1H),7.89(br d,J=7.8Hz,1H),7.77(d,J=8.8,1H),6.87(dt,J=15.4,6.0Hz,1H),6.52(br d,J=15.4Hz,1H),3.08(br d,J=5.3Hz,2H),2.19(s,6H)。C19H18Br2N6O.0.5H2O:C,44.30;H,3.72;N,16.31。实测值:C,44.24;H,3.81;N,15.98。
1.1.1.8(2E)-4-(二甲氨基)-N-[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-丁烯酰胺(8)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.65g,10.0mmol)、亚硫酰氯(20mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌1h,以得到均质混合物。将所述混合物在45℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入3-乙炔基-4-氟苯胺(J.Org.Chem.,1981,46,2280-2286)(1.49g,11.0mmol)的无水DMA(15mL)溶液。用更多的DMA(2x2mL)洗去3-乙炔基-4-氟苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌45h。将混合物倒入到水(300mL)中。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约9。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。再用石油醚(300mL)重复所述过程。经过滤收集固体物,并用水(5x25mL)和乙酸乙酯/石油醚(1∶10)(4 x 50mL)洗涤,并干燥以得到浅棕色固体状的N-(3-乙炔基-4-氟苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(208)(2.39g,85%),熔点223-226℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]10.10(s,1H),8.96(s,1H),8.73(s,1H),8.24(br s,1H),8.12(dd,J=6.4,2.8Hz,1H),7.96-7.88(m,1H),7.39(t,J=9.1Hz,1H),4.54(s,1H)。C15H8F2N4.1.8H2O的分析计算值:C,57.25;H,3.72;N,17.80。实测值:C,57.27;H,3.49;N,17.90。
在氮气气氛下,将化合物208(2.31g,8.19mmol)和4-甲氧基苄基胺(10.7mL,81.9mmol)在无水DMSO(20mL)中的混合物于70℃(水浴温度)搅拌118h。然后,将混合物冷却,并加入石油醚(300mL)。将得到的溶液在室温搅拌15min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用更多石油醚(300ml)重复所述操作。加入水(300mL),并将混合物在室温搅拌20min。将其过滤,并用水(5 x 30mL)洗涤粘稠的固体物。将得到的粘稠固体物与热MeOH(70mL)一起搅拌大约30min。冷却到室温后,收集固体物;用冷MeOH(3x 10mL)洗涤,并经硅胶/KOH真空干燥,以得到黄色/橙色固体状的纯N4-(3-乙炔基-4-氟苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(217)(0.92g,28%),熔点197-199℃。将滤液蒸发至干,以得到橙色/琥珀色胶状物,将其应用至硅胶柱[乙酸乙酯/石油醚(2∶1)],以得到更多的化合物217(0.96g,29%)。1H NMRδ[(CD3)2SO]9.66(s,1H),8.74(s,1H),8.36(s,1H),8.08-8.02(m,1H),7.93-7.85(m,1H),7.39-7.13(m,5H),6.88(br d,J=8.7Hz,2H),4.54-4.44(m,3H),3.71(s,3H)。C23H18FN5O.0.15MeOH的分析计算值:C,68.79;H,4.64;N,17.33%。实测值:C,69.09;H,4.62;N,16.97%。
向化合物217(2.12g,5.32mmol)和DCM(55mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(3.70mL,48.3mmol),接着加入苯甲醚(1.17mL,10.6mmol),并将混合物再在室温搅拌78h。将混合物倒入石油醚(300mL)中,并在室温搅拌大约20min。慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(300mL)重复所述过程。在0℃,将剩余的固体物溶解于丙酮(25mL)中,并加入5M NH3(100ml),并在室温搅拌40min。收集固体物,并依次用丙酮/水(1∶5)(5x20mL)、石油醚-乙酸乙酯=3∶1(5 x 20mL)洗涤,并干燥以得到N4-(3-乙炔基-4-氟苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(226)(1.31g,89%),熔点218-222℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.72(s,1H),8.70(s,1H),8.36(s,1H),8.10(dd,J=6.4,2.7Hz,1H),7.96-7.87(m,1H),7.33(t,J=9.1Hz,1H),7.13(s,1H),6.26(s,2H),4.50(s,1H)。C15H10FN5.0.8H2O.0.25乙酸乙酯的分析计算值:C,60.87;H,4.34;N,22.18%。实测值:C,60.67;H,4.15;N,22.11%。
在室温和氮气气氛下,向CDI(2.01g,12.4mmol)和无水THF(9mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(2.18g,11.1mmol)的THF(7mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物226(1.24g,4.44mmol)在无水THF(5mL)和DMA(6mL)混合溶剂中的溶液,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=30∶1)检测反应。搅拌22h后,将反应混合物倒入水中(200mL),并用甲醇洗去残留物。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌1h。慢慢倒出石油醚层。用石油醚(150mL)再重复一次所述过程。经抽滤收集固体物;用水(5x 30mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(3-乙炔基-4-氟苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(235)(1.85g,91%);熔点103-106℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]:10.84(s,1H),10.33(s,1H),9.01(s,1H),8.86(s,1H),8.61(s,1H),8.01(dd,J=6.4,2.7Hz,1H),7.92-7.83(m,1H),7.35(t,J=9.1Hz,1H),4.51(s,1H),4.17-4.03(m,4H),3.32(d,部分研磨于水峰中,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C21H21FN5O4P.MeOH的分析计算值:C,53.99;H,5.15;N,14.31%。实测值:C,54.21;H,4.94;N,14.43%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(1.56g,9.70mmol)和水(1.6mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(1.62mL,19.3mmol)。加入后,将混合物在45℃(水浴)搅拌25h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(2.76g,49.3mmol)溶解在水(8mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物235(1.76g,3.85mmol)和THF(8mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(4mL),以得到均质溶液。加入LiCl(163mg,3.85mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=10∶1)检测反应。搅拌30min后,将反应物倒入水(300mL)中。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌10min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(300mL),并搅拌10min。经抽滤收集固体物;用水(4 x 20mL)洗涤;经硅胶/KOH减压干燥以得到化合物8(1.38g,92%),经HPLC发现纯度仅为89.7%。因此,将样品与MeOH(大约40mL)一起搅拌30min。过滤掉不溶物质,并向滤液中加入一体积的水,以沉淀需要的产物。收集固体物,用水/MeOH=3∶1(3x 15mL)洗涤,并干燥,以得到黄色/棕色固体状(2E)-4-(二甲氨基)-N-[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-丁烯酰胺(8)(1.28g,85%),熔点152-155℃;1H NMRδ[(CD3)2SO]10.93(s,1H),10.29(s,1H),9.02(s,1H),8.99(s,1H),8.61(s,1H),8.04(dd,J=6.4,2.7Hz,1H),7.94-7.85(m,1H),7.35(t,J=9.1Hz,1H),6.87(dt,J=15.4,6.0Hz,1H),6.52(br d,J=15.4Hz,1H),4.53(s,1H),3.09(br d,J=6.0Hz,2H),2.19(s,6H)。C21H19FN6O.0.8H2O.0.7MeOH的分析计算值:C,61.00;H,5.52;N,19.67%。实测值:C,61.26;H,5.25;N,19.47%。
1.1.1.9(2E)-N-[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(9)的制备(流程图2)
将6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4(3H)-酮(200)(1.65g,10.0mmol)、亚硫酰氯(20mL)和催化量的DMF(2滴)的非均质混合物在回流条件下搅拌24h,以得到均质混合物。将所述混合物在45℃(水浴温度)减压蒸发,以得到浅棕色固体物。向该固体物中加入3-乙炔基-4-氯苯胺(J.Org.Chem.,1981,46,2280-2286)(1.67g,11.0mmol)和无水DMA(15mL)的溶液。用更多的DMA(2x2mL)洗涤3-乙炔基-4-氯苯胺的残留物。将反应混合物在室温搅拌24h。将混合物倒入到水(300mL)中,并用MeOH冲洗残留物。在室温,利用Na2CO3水溶液将pH调至大约9。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌30min。慢慢倒出石油醚层。再用石油醚(300mL)重复所述过程。经过滤收集固体物,并用水(5x 25mL)和乙酸乙酯/石油醚(1∶10)(4 x 25mL)洗涤,并干燥以得到浅棕色固体状的N-(3-乙炔基-4-氯苯基)-6-氟吡啶并[3,4-d]嘧啶-4-胺(209)(3.0g,100%),熔点218-222℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.13(s,1H),8.98(s,1H),8.77(s,1H),8.32-8.22(m,2H),7.95(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),7.61(d,J=8.8Hz,1H),4.60(s,1H)。C15H8Cl FN4.0.5H2O.0.5MeOH的分析计算值:C,57.51;H,3.43;N,17.31。实测值:C,57.33;H,3.13;N,17.10。
在氮气气氛下,将化合物209(3.07g,10.3mmol)和4-甲氧基苄基胺(13.5mL,103mmol)在无水DMSO(27mL)中的混合物于70℃(水浴温度)搅拌141h。然后,将混合物冷却,并加入石油醚(300mL)。将得到的溶液在室温搅拌30min。使各层分离,并慢慢倒出石油醚层。用更多石油醚(300ml)重复所述操作。加入水(300mL),并将混合物在室温搅拌30min。将其过滤,并用水(4 x 20mL)洗涤粘稠的固体物。将得到的粘稠固体物溶解于最少量的丙酮(50mL)中,并加入水(200mL)。将混合物在室温搅拌过夜(22h)。又产生粘稠固体物。因此,用乙酸乙酯萃取产物,将产物用水洗涤几次后,干燥(MgSO4)并蒸发。将粗产物装载于硅胶柱(二氯甲烷/MeOH=50∶1),以得到黄绿色固体状的N4-(4-氯-3-乙炔基苯基)-N6-(4-甲氧基苄基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(218)(2.30g,54%),熔点201-203℃;1HNMR δ[(CD3)2SO]9.72(s,1H),8.76(s,1H),8.40(s,1H),8.19(d,J=2.5Hz,1H),7.96(dd,J=8.9,2.5Hz,1H),7.56(d,J=8.9Hz,1H),7.39-7.28(m,3H),7.17(s,1H),6.93-6.82(m,2H),4.59(s,1H),4.49(d,J=6.3Hz,2H),3.71(s,3H)。C23H18ClN5O.0.18己烷的分析计算值:C,67.04;H,4.80;N,16.23%。实测值:C,66.76;H,4.79;N,15.96%。
向化合物218(2.27g,5.46mmol)和DCM(55mL)的搅拌的非均质混合物中加入三氟乙酸(4.2mL,54.6mmol),接着加入苯甲醚(1.2mL,10.9mmol),并将混合物再在室温搅拌50h。将混合物倒入石油醚(400mL)中,并在室温搅拌大约30min。慢慢倒出石油醚层并丢弃。用更多的石油醚(400mL)重复所述过程。在0℃,将剩余的固体物溶解于丙酮(30mL)中,并加入5M NH3(150ml),并在室温搅拌20min。收集固体物,并依次用丙酮/水(1∶5)(5x20mL)、石油醚-乙酸乙酯=10∶1(5x 20mL)洗涤,并干燥以得到N4-(4-氯-3-乙炔基苯基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-4,6-二胺(227)(1.54g,95%),熔点210-213℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]9.77(s,1H),8.71(s,1H),8.40(s,1H),8.24(d,J=2.6Hz,1H),7.97(dd,J=8.8,2.6Hz,1H),7.55(d,J=8.8Hz,1H),7.14(s,1H),6.29(s,2H),4.56(s,1H)。C15H10ClN5.1.3H2O.0.5丙酮的分析计算值:C,56.92;H,4.52;N,20.11%。实测值:C,56.81;H,4.22;N,19.82%。
在室温和氮气气氛下,向CDI(2.14g,13.2mmol)和无水THF(10mL)的搅拌混合物中加入2-(二乙氧基磷酰基)乙酸(2.31g,11.8mmol)的THF(8mL)溶液。加入后,将反应混合物再在40℃(水浴)搅拌15min(此时气体释放停止)。加入化合物227(1.39g,4.70mmol)在无水THF(6mL)和DMA(7mL)混合溶剂中的混合物,并再在40℃搅拌。通过TLC(二氯甲烷-MeOH=15∶1)检测反应。搅拌3h后,将反应混合物倒入水中(300mL),并用甲醇洗去残留物。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌min。慢慢倒出石油醚层。用石油醚(200mL)再重复一次所述过程。经抽滤收集固体物;用水(5 x 30mL)洗涤,并干燥以得到2-(4-(4-氯-3-乙炔基苯基氨基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基氨基)-2-氧代乙基膦酸二乙基酯(236)(2.03g,91%);熔点124-127℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]:10.86(s,1H),10.37(s,1H),9.03(s,1H),8.87(s,1H),8.65(s,1H),8.14(br s,1H),7.93(br d,J=8.8Hz,1H),7.35(d,J=8.8Hz,1H),4.58(s,1H),4.20-4.00(m,4H),3.30(d,部分被水峰覆盖,2H),1.26(t,J=7.0Hz,6H)。C21H21ClN5O4P.H2O.0.2THF的分析计算值:C,51.72;H,4.90;N,13.83%。实测值:C,52.06;H,4.82;N,13.70%。
在室温和氮气气氛下,向2,2-二乙氧基-N,N-二甲基乙胺(1.67g,10.4mmol)和水(1.8mL)的搅拌混合物中加入37%HCl水溶液(1.75mL,20.8mmol)。加入后,将混合物在45℃(水浴)搅拌27h。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作A溶液。在室温、氮气气氛下,将KOH(2.98g,53.2mmol)溶解在水(9mL)中。将其冷却到0℃(水浴)。将该溶液称作B溶液。在室温和氮气气氛下,向化合物236(1.97g,4.16mmol)和THF(9mL)搅拌的非均质混合物中加入最少量的DMA(4.5mL),以得到均质溶液。加入LiCl(176mg,4.16mmol),并在0℃(水浴)搅拌15min。加入冷却的溶液B并在0℃搅拌2min。然后,加入冷却的溶液A,并将最终的反应混合物在0℃、氮气气氛下继续搅拌。通过TLC(DCM-MeOH=10∶1)检测反应。搅拌35min后,将反应物倒入水(300mL)中。加入石油醚(300mL),并在室温搅拌15min。慢慢倒出石油醚层。加入更多的石油醚(300mL),并搅拌10min。经抽滤收集固体物;用水(5x 20mL)、石油醚/乙酸乙酯=10∶1(3 x 30mL)洗涤;经硅胶/KOH减压干燥以得到化合物9(1.61g,95%),经HPLC发现纯度仅为85.2%。因此,将样品经硅胶柱(乙酸乙酯/MeOH=10∶1)纯化。将含有所需产物的组分合并,并蒸发,以得到黄色/橙色固体物。将固体物溶解于热乙酸乙酯(30mL)中,并用石油醚(90mL)沉淀。收集固体物;用石油醚/乙酸乙酯=3∶1(3x 20mL)洗涤,并干燥,以得到黄色/橙色固体状(2E)-N-[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(9)(1.1g,65%),熔点173-176℃;1H NMR δ[(CD3)2SO]10.92(s,1H),10.31(s,1H),9.03(s,1H),9.00(s,1H),8.66(s,1H),8.18(d,J=2.2Hz,1H),7.96(dd,J=8.9,2.2Hz,1H),7.57(d,J=8.9Hz,1H),6.88(dt,J=15.4,6.0Hz,1H),6.52(br d,J=15.4Hz,1H),4.58(s,1H),3.09(br d,J=5.8Hz,2H),2.19(s,6H)。C21H19ClN6O.0.8MeOH.0.1乙酸乙酯的分析计算值:C,60.42;H,5.25;N,19.04%。实测值:C,60.15;H,4.90;N,18.76%。
1.1.2α-甲基溴化物触发剂的合成
1.1.2.15-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑(239)的制备(流程图3)
方法1
在0℃,向化合物237(20.0g,157.36mmol)(根据Chauviére等人,J.Med.Chem.2003,46,427-440的方法制备的)和K2CO3(32.62g,236.04mmol)在DMF(200mL)的混悬液中滴加碘甲烷(14.70mL,236.04mmol)。将得到的混合物升至室温,然后将得到的混合物在室温搅拌2小时,随后将过量的碘甲烷蒸发。经过滤除去沉淀,并将DMF滤液在45-50℃减压浓缩。用MeCN/DCM(1∶9)充分萃取得到的残留物,并将合并的提取物经硅胶短柱过滤。除去溶剂后,将粗产物从MeCN和甲苯中结晶,以得到米色晶状固体化合物238(15.74g,71%),熔点161-163℃。1H NMR(CDCl3)δ7.33(s,1H),3.65(s,3H),2.63(s,3H)。与先前所报道的一致(Hosmane等人,J.Org.Chem.,1985,50(26),5892-5)。
将化合物238(4.00g,28.34mmol)和NBS(5.30g,29.78mmol)在MeCN(200mL)中的溶液用1000W的卤化钨灯辐照回流2小时。真空除去约一半的溶剂后加入水(100mL)。继续减压浓缩获得白色沉淀,其通过过滤收集,用水洗涤,并真空干燥以得到白色固体状的5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑(239)(4.69g,75%)。1H NMR(CDCl3)δ7.44(s,1H),4.50(s,2H),3.83(s,3H)。与之前报道一致(Stribbling等人,PCT国际专利公开号WO 2008/039087)。分析发现:C,27.81;H,3.27;N,19.05.C5H6BrN3O2.0.04己烷,要求:C,28.16;H,2.96;N,18.80。HRMS(FAB+)实测值:219.97220,221.97018(M+1),计算值C5H7 79/81BrN3O2:219.97216,221.97012。
方法2
将化合物237(120g,0.94mol)、K2CO3(259.8g,1.88mol)和乙腈(2L)填充到5-L 3-颈瓶中,并在200rpm搅拌下将混合物冷却至0℃。用注射泵历经2小时缓慢加入硫酸二甲酯(DMS)(97.8mL,1.03mol)。2小时后,将反应物升至室温并过夜。将固体物经硅藻土(120g)过滤,并用乙腈(200mL)冲洗5-L瓶。将固体物用乙腈(2 x 500mL)冲洗,直至除去所有产物。将溶液用75%盐水(1L)稀释,并经旋转蒸发除去乙腈。用二氯甲烷(4 x 1L)萃取得到的浆状物。将合并的有机层过滤后,加入甲苯(1L),并经旋转蒸发除去二氯甲烷。将得到的浆状物过滤,并用甲苯(2 x 1L)冲洗滤饼。回收米色固体状的湿固体物(121g)。将湿固体物从水(1L)中重结晶,并用庚烷(1L)冲洗固体物。将固体物在40℃真空烤箱中干燥过夜。回收白色固体状的化合物238(86.6g,67%)。1H NMR与上述的一致。
将20-L反应器装配N2、冷凝器、温度探针和气流搅拌(air stirring)。将反应器填充化合物238(100g,0.71mol)、1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲(DBDMH)(203.0g,0.71mol)、2,2′-偶氮二异丁腈(AIBN)(45.97g,0.28mol)和二氯甲烷(6L)。将反应物加热回流,在150rpm搅拌均质溶液。100小时后,将反应在20℃保持36小时后,用10%NaHCO3(1.5L)淬灭反应,并用10%Na2S2O5(1L)调至pH 7,并且对KI-淀粉试纸是阴性的(注意:加入Na2S2O5过程中,观察到一些气体排出和少量放热[6℃])。分离有机层并过滤后,加入水(1L),并通过旋转蒸发除去二氯甲烷。过滤产生的浆状物,以得到浅黄色固体物,将其在50℃再悬浮于甲苯(500mL)中2.5小时后,冷却至室温。然后,过滤得到固体物,将其在40℃真空烤箱中干燥过夜后,在100℃在甲苯(500mL)中搅拌浆体1小时。冷却到室温后,混悬液过滤得到固体,其在40℃真空烤箱中干燥过夜,得到浅黄色固体状5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑(239)(63.3g,38%)。1H NMR与上文描述的一致。
1.1.2.2制备5-(溴甲基)-1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑(244)(流程图4)
0℃下向化合物240(50.0g,393.39mmol)和K2CO3(81.55g,590.08mmol)在DMF中的混悬液(300mL)中滴加碘甲烷(36.74mL,590.08mmol)。所得混合物温热至室温,搅拌2小时后在室温下蒸发除去过量的碘甲烷。过滤除去沉淀,45-50℃减压浓缩DMF滤液。利用MeCN/DCM(1∶9)彻底萃取获得的残余物,通过短的硅胶柱过滤。去除溶剂后粗产物从MeCN(含有少量的MeOH)和甲苯中重结晶获得白色晶状固体的化合物241(52.22g,94.0%)。1H NMR(CDCl3)δ7.66(s,1H),3.67(s,3H),2.43(s,3H)。LR-MS(APCI+ve):m/e 142.5(M+1)。与之前报道的一致(Rav-Acha和Cohen,J.Org.Chem.1981,46(23),4717-4720)。
在-35到-25℃(干冰/MeCN浴)下将化合物241(33.0g,233.83mmol)和二氯乙酸叔丁酯(64.90g,350.74mmol)(在DCM中从二氯乙酰氯、叔丁醇和三乙胺制备)的DMF溶液(400mL)滴加到叔丁醇钾(91.83g,818.40mmol)的DMF混悬液中(400mL)。将所得混合物在-25℃下再搅拌20分钟,随后倒入0.5N HCl中(约1000mL)。用标准的乙酸乙酯/水溶液处理,硅胶柱色谱经乙酸乙酯/己烷(3∶2)洗脱,获得黑色固体状的粗制化合物242(23.83g,35%),其不需进一步纯化而使用。LR-MS(APCI+ve)m/e290.5/292.5(3∶1,M+1)。
如前制备的化合物242(23.83g,82.25mmol)用回流的乙酸(120mL)处理45分钟,随后在减压条件下蒸干。用标准的NaHCO3/DCM处理残余物,随后在硅胶柱色谱上用乙酸乙酯洗脱,获得白色固体状的化合物243(10.00g,64%)。1H NMR(CDCl3)δ5.03(s,2H),3.67(s,3H),2.46(s,3H)。LR-MS(APCI+ve):m/e 190.4/192.4(3∶1,M+1)。
将化合物243(10.00g,52.74mmol)和LiBr(4.80g,55.20mmol)在乙酸乙酯中的混悬液(500mL)加热回流4小时,随后进行标准的乙酸乙酯/水处理。获得的固体再次用上述LiBr/乙酸乙酯处理。通过加入己烷,从DCM/i-Pr2O沉淀粗产物获得灰白色固体状的5-(溴甲基)-1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑(244)(11.46g,93%)。1H NMR(CDCl3)δ4.88(s,2H),3.64(s,3H),2.46(s,3H)。C5H6BrN3O2.4%己烷的分析计算值:C,28.16;H,2.96;N,18.80%。实测值:C,27.81;H,3.27;N,19.05%。LR-MS(APCI+ve):m/e234.4/236.4(1∶1,M+1)。
1.1.2.3 5-(溴甲基)-2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑(250)的制备(流程图5)
向化合物238(12.65g,90.00mmol)在氯仿中的混悬液(100mL)中缓慢加入溴(5.53mL,108.00mmol)。所得混合物搅拌2小时后加入水(130mL)。蒸馏除去氯仿,并过滤收集所得沉淀,用水洗涤,并真空干燥,以得到白色固体状的化合物245(15.50g,79%),熔点180-181℃,与之前报道的数值一致(Pyman和Timmis,J.Chem.Soc.,Trans.,1923,123,494-503)。1H NMR(CDCl3)δ3.63(s,3H),2.69(s,3H)。C5H6BrN3O2分析计算值:C,27.29;H,2.75;N,19.10%。实测值:C,27.56;H,2.83;N,19.10%.LR-MS(APCI+ve):m/e 220.3/222.3(1∶1,M+1)。
将化合物245(2.20g,10.0mmol)和N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)(1.96g,11.0mmol)的乙腈(100mL)溶液用1000W的卤化钨灯辐照回流2小时。经旋转蒸发仪除去约一半的溶剂后加入相同体积的水。再蒸发获得白色沉淀,其通过过滤收集,用水洗涤,并真空干燥,以得到白色固体状的化合物246(2.84g,95%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)d 4.88(s,2H),3.74(s,3H)。C5H5Br2N3O2分析计算值:C,20.36;H,1.74;N,13.98。实测值:C,20.09;H,1.69;N,14.06.LR-MS(+):m/e 234.4/236.4(1∶1,M+1).298.3/300.3/302.3(1∶2∶1,M+1)。
向化合物246(2.80g,9.36mmol)的DMF(30mL)溶液中加入醋酸钠水溶液(1.92g,23.4mmol)。然后,将混合物室温搅拌2小时,用标准的乙酸乙酯-水后处理,以得到白色固体状化合物247(2.54g,98%),熔点110-112℃。1H NMR(CDCl3,400MHz)d 5.50(s,2H),3.74(s,3H),2.11(s,3H).C7H8BrN3O4的分析实测值:C,30.48;H,2.82;N,15.13。计算值:C,30.24;H,2.90;N,15.11.LR-MS(+):m/e 278.4/280.4(1∶1,M+1)。
将化合物247(1.90g,6.83mmol)、四乙基锡(5.42mL,27.34mmol)和四(三苯基膦)钯(790mg,0.68mmol)在NMP(20mL)中的混合物于110-120℃加热5小时后,进行标准的乙酸乙酯-水后处理。将得到的粗产物经快速柱色谱纯化,用MeCN/DCM(1∶5)洗脱后,通过加入己烷从DCM中沉淀,得到白色固体状的化合物248(1.04g,67%),熔点71-73℃.1H NMR(CDCl3,400MHz)δ5.48(s,2H),3.64(s,3H),2.76(q,J=7.43Hz,2H),2.10(s,3H),1.37(t,J=7.43Hz,3H)。分析实测值:C,48.11;H,5.90;N,18.23%.C9H13N3O4.0.04己烷计算值:C,48.11;H,5.92;N,18.22%.LR-MS(+):m/e228.5(M+1)。
向化合物248(1.25g,5.50mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入干燥K2CO3(1.52g,11.0mmol)。搅拌20分钟后,减压除去溶剂,并将残留物溶解于DCM中,经硅胶层过滤,并用乙酸乙酯洗涤。将滤液浓缩,以得到白色晶体,将得到的晶体经过滤收集,并用乙酸乙酯/己烷(1∶1)混合物洗涤,以得到白色晶态固体化合物249(949mg,93%),熔点153-155℃.1HNMR(CDCl3,400MHz)δ4.96(d,J=6.80Hz,2H),3.67(s,3H),2.79(t,J=6.80Hz,1H),2.74(q,J=7.50Hz,2H),1.36(t,J=7.50Hz,3H)。分析实测值:C,45.71;H,6.07;N,22.87%.C7H11N3O3计算值:C,45.40;H,5.99;N,22.68%.LR-MS(+):m/e 186.5(M+1)。
0℃下向化合物249(685mg,3.70mmol)的DCM(30mL)溶液中加入三乙胺(0.773mL,5.55mmol),随后滴加MsCl(0.344mL,4.44mmol)。搅拌45分钟后,将混合物用饱和氯化铵水溶液洗涤两次,并用盐水洗涤一次后,用无水硫酸钠干燥,并经硅藻土过滤。真空浓缩滤液得到白色固体物(971mg),经1H NMR发现其是甲磺酸酯和α-甲基氯化物(3∶1)的混合物,并直接用于下一步。将所述固体物(968mg)的THF(50mL)溶液用LiBr(6.39g,86.85mmol)回流处理0.5小时。然后,减压除去溶剂,并将得到的残留物在水和乙酸乙酯之间进行分配。将有机相用水洗涤两次,并用盐水洗涤一次后,用无水硫酸钠干燥,并经硅藻土过滤。真空除去溶剂,以得到白色固体5-(溴甲基)-2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑(250)(851mg,93%),熔点91-93℃.1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.88(s,2H),3.65(s,3H),2.76(q,J=7.60Hz,2H),1.37(t,J=7.60Hz,3H)。分析实测值:C,34.41;H,4.07;N,16.96%.C7H10BrN3O2.0.04EtOAc计算值:C,34.18;H,4.13;N,16.70%.LR-MS(+):m/e 248.4/250.4(1∶1,M+1)。
1.1.2.4 5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-2-甲腈(264)的制备(流程图7)
方法1
向化合物246(1.40g,4.68mmol)的含有几滴水的DMA(14mL)溶液中,加入K2CO3(647mg,4.68mmol)。将得到的溶液搅拌过夜后,进行标准乙酸乙酯处理,随后,经硅胶柱色谱,用MeCN/DCM(5∶95-15∶85)洗脱,得到米色固体化合物262(330mg,30%)。1H NMR(6d-DMSO,400MHz)δ5.56(t,J=5.8Hz,1H),4.86(d,J=5.8Hz,2H),3.70(s,3H).LR-MS(+):m/e 236.5/238.5(1∶1,M+1)。
在氮气气氛、120℃下,将化合物262(300mg,1.27mmol)、Zn(CN)2(90mg,0.76mmol)、锌粉末(10mg,0.15mmol)、Pd2(dba)3(23mg,0.025mmol)和dppf(28mg,0.051mmol)在DMA(3mL)中的混合物搅拌3.5小时。标准NH4Cl水溶液/乙酸乙酯后处理,然后硅胶柱色谱,用乙酸乙酯/己烷(1∶1~2∶1)洗脱,得到米色固体化合物263(180mg),1H NMR发现其含少量未反应的起始物262,并直接用于下一步骤。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ5.09(d,J=6.7Hz,2H),4.00(s,3H),2.49(t,J=6.7Hz,1H)。
0℃下,向化合物263(173mg,大约0.93mmol)的THF(10mL)溶液中加入MsCl(0.088mL,1.14mmol),随后滴加DIPEA(0.182mL,1.04mmol)。搅拌1小时后,将反应混合物进行标准NH4Cl水溶液/乙酸乙酯后处理,以得到可直接使用的黄色油状物(237mg;1H NMR发现其是甲磺酸酯和α-甲基氯化物的混合物)。向所述油状物(235mg,大约0.90mmol)的THF(10mL)溶液中加入LiBr(1.57g,18.06mmol)。加热回流0.5小时后,真空除去溶剂,并将残留物进行标准NH4Cl水溶液/乙酸乙酯后处理。将粗产物进一步经硅胶柱色谱,用乙酸乙酯/己烷(1∶4~1∶2)洗脱,得到粉红色油状化合物5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-2-甲腈(264)(65mg,历经3步后21%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.86(s,2H),3.95(s,3H).LR-MS(+):m/e 277.6/279.6(1∶1,M+1+MeOH)。
方法2
在氮气气氛、120℃下,将化合物245(1.10g,5.00mmol)、Zn(CN)2(352mg,3.00mmol)、锌粉末(39mg,0.60mmol)、Pd2(dba)3(92mg,0.10mmol)和dppf(111mg,0.20mmol)在DMA(10mL)中的混合物搅拌3小时。然后,将反应物用水稀释,并进行标准乙酸乙酯后处理,然后硅胶柱色谱,用乙酸乙酯/己烷(3∶4,然后1∶1)洗脱,以得到米色固体化合物265(657mg,79%),熔点99-101℃.1H NMR(CDCl3)δ3.84(s,3H),2.72(s,3H)。分析实测值:C,43.64;H,3.58;N,33.86.C6H6N4O2计算值:C,43.38;H,3.64;N,33.72。
将化合物265(166mg,1.00mmol)、1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲(DBDMH)(286mg,1.00mmol)、2,2′-偶氮二异丁腈(AIBN)(66mg,0.40mmol)在二氯甲烷(10mL)中的混合物加热回流5天后,减压浓缩。将得到的残留物经硅胶柱色谱纯化,用乙酸乙酯/己烷(1∶2,然后1∶1)洗脱,以得到无色油状物5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-2-甲腈(264)(137mg,56%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.86(s,2H),3.95(s,3H)。分析实测值:C,30.17;H,1.99;N,22.25.C6H5BrN4O2.0.07EtOAc计算值:C,30.03;H,2.23;N,22.30.HRMS(E SI+,79/81Br)实测值:m/z 266.9490/268.9475(M+Na),计算值C6H5 79/81BrN4NaO2 +:266.9488/268.9468。
1.1.2.5 5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-2-甲酰胺(266)的制备(流程图7)
将5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-2-甲腈(264)(70mg,0.29mmol)在90%H2SO4(1mL)中的溶液在65-70℃加热1小时后,用水稀释,并进行标准乙酸乙酯处理,以得到白色固体状5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-2-甲酰胺(266)(67mg,84%),熔点220-222℃。1H NMR[(CD3)2SO]δ8.18(s,1H),7.87(s,1H),5.05(s,2H),4.02(s,3H).HR-MS(APCI+,79/81Br)实测值:m/z 262.9770/264.9752(M+1),计算值C6H8 79/81BrN4O3 +:262.9774/264.9754。
1.1.2.6 5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑(270)的制备(流程图8)
将化合物247(500mg,1.80mmol)、三丁基(1-丙炔基)锡(1.64mL,5.39mmol)和四(三苯基膦)钯(416mg,0.36mmol)在NMP(15mL)中的混合物于80℃加热过夜(14小时)后,进行标准的乙酸乙酯-水处理。将得到的粗产物进一步经快速柱色谱纯化,用MeCN/DCM(1∶20~1∶5的梯度)洗脱,以得到白色固体状化合物267(147mg,34%),1H NMR(CDCl3,400MHz)δ5.47(s,2H),3.77(s,3H),2.14(s,3H),2.10(s,3H).LR-MS(+):m/e 238.5(M+1);随后还得到白色固体状化合物268(105mg,0%),1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.96(d,J=7.0Hz,2H),3.79(s,3H),2.60(t,J=7.0Hz,1H),2.14(s,3H).LR-MS(+):m/e 196.5(M+1)。通过在MeOH中用K2CO3处理化合物267而定量得到化合物268。
在0℃下向化合物268(110mg,0.56mmol)在DCM中的溶液(10mL)中加入三乙胺(0.118mL,0.84mmol),随后滴加MsCl(0.052mL,0.68mmol)。在0℃和室温下各保持30分钟后,将混合物用饱和的氯化铵水溶液和盐水洗涤2次,无水硫酸钠干燥,并经硅藻土过滤。减压浓缩获得灰白色固体状的化合物269(145mg,~94%),其通过1H NMR发现为甲磺酸酯和氯化物的混合物(3.6∶1),不经进一步纯化即使用。甲磺酸酯的1H NMR(CDCl3,400MHz):δ5.62(s,2H),3.81(s,3H),3.13(s,3H),2.15(s,3H);氯化物:δ5.02(s,2H),3.79(s,3H),2.14(s,3H)。LR-MS(+):274.5(M+1甲磺酸酯);214.4/216.4(3∶1,M+1氯化物)。
将混合物269(145mg,~0.53mmol)用LiBr(922mg,10.61mmol)在回流的THF(10mL)中处理30分钟,真空除去THF,所得残余物在水和乙酸乙酯之间进行分配。有机相用水和盐水洗涤,无水硫酸钠干燥,并经硅藻土过滤后,真空浓缩。将所得的粗产物用快速柱色谱纯化,使用乙酸乙酯/己烷(1∶1)洗脱获得白色固体状的5-(溴甲基)-1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑(200)(95mg,69%)。1H NMR(CDCl3,400MHz)δ4.86(s,2H),3.76(s,3H),2.14(s,3H)。LR-MS(+):m/e 258.5/260.5(1∶1,M+1)。
1.1.3季铵盐前药的合成
方法A:在N-甲基-2-吡咯烷酮中(NMP)中制备季铵盐前药,随后经乙腈沉淀
在室温向带有二甲基胺的式I激酶抑制剂的NMP溶液中加入α-甲基溴化物触发剂(1.0-1.2当量)。将得到的混合物搅拌过夜(~15小时)。然后,在持续搅拌下向反应混合物中滴加乙腈,直到沉淀物开始形成。然后,将得到的混合物再搅拌2小时后,经过滤或者经离心收集沉淀物,用乙腈、乙酸乙酯和己烷洗涤。然后,真空干燥得到白色或灰白色固体状的季铵盐前药。如果需要,再通过从NMP和MeCN中重结晶来进一步纯化产物。
1.1.3.1(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(12)的制备(流程图10)
根据方法A,将NMP(1.2mL)中的化合物1(500mg,0.96mmol)与α-甲基溴化物239(231mg,1.05mmol)反应得到(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(12)(517mg,73%),熔点182-186℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.28(s,1H),10.25(s,1H),9.04(s,1H),8.98(s,1H),8.61(s,1H),8.14(s,1H),7.98(d,J=2.5Hz,1H),7.74-7.72(dd,J=8.9,2.5Hz,1H),7.56(s,1H),7.47-7.40(m,3H),7.28(d,J=9.1Hz,1H),7.06-6.98(m,1H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.26(s,2H),5.05(br,2H),4.44(d,J=7.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.13(s,6H)。分析实测值:C,48.93;H,3.92;N,16.27.C31H30BrCl2N9O4.H2O.0.1EtOAc计算值:C,48.96;H,4.29;N,16.37。
1.1.3.2(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(13)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1.8mL)中的化合物2(500mg,1.01mmol)与α-甲基溴化物239(244mg,1.11mmol)反应得到(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(13)(538mg,74%),熔点183-187℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.27(s,1H),10.35(s,1H),9.02(s,2H),8.56(s,1H),8.17-8.14(m,3H),7.75-7.69(m,2H),7.40-7.35(m,1H),7.12-6.99(m,4H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.71(s,2H),5.05(br,2H),4.44(d,J=7.0Hz,2H),3.87(s,3H),3.13(s,6H)。分析实测值:C,51.71;H,4.53;N,20.33.C32H31BrFN11O3.1.5H2O.0.1EtOAc计算值:C,51.72;H,4.66;N,20.48。
1.1.3.3(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(14)的制备(流程图11)。
根据方法A,将NMP(0.5mL)中的化合物2(100mg,0.20mmol)与α-甲基溴化物244(52mg,0.22mmol)反应得到(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(14)(93mg,63%),熔点188-192℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.27(s,1H),10.38(s,1H),9.03(s,2H),8.56(s,1H),8.17(s,2H),7.76-7.68(m,2H),7.40-7.35(m,1H),7.12-6.99(m,4H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.71(s,2H),5.05(br,2H),4.43(d,J=6.8Hz,2H),3.75(s,3H),3.11(s,6H),2.44(s,3H)。分析实测值:C,50.81;H,4.76;N,19.42.C33H33BrFN11O3.2.9H2O计算值:C,50.63;H,5.00;N,19.64。
1.1.3.4(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(15)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1mL)中的化合物3(500mg,1.02mmol)与α-甲基溴化物239(225mg,1.02mmol)反应得到(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(15)(610mg,84%),熔点189-191℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.28(s,1H),10.25(s,1H),9.04(s,2H),8.98(s,1H),8.61-8.60(m,2H),8.14(s,1H),7.99(d,J=2.5Hz,1H),7.91-7.87(dt,J=1.6,7.7Hz,1H),7.74-7.71(dd,J=2.5,8.94Hz,1H),7.59(d,J=7.8Hz,1H),7.39-7.36(dd,J=5.3,7.0Hz,1H),7.29(d,J=9.0Hz,1H),7.06-6.98(m,1H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.31(s,2H),5.05(br,2H),4.44(d,J=7.1Hz,2H),3.88(s,3H),3.11(s,6H)。分析实测值:C,48.65;H,4.34;N,18.58.C30H30BrClN10O4.1.8H2O计算值:C,48.54;H,4.56:,N,18.87。
1.1.3.5(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(16)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1.2mL)中的化合物4(500mg,1.20mmol)与α-甲基溴化物239(290mg,1.32mmol)反应得到(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(16)(648mg,85%),熔点191-195℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.32(s,1H),10.41(s,1H),9.09(s,1H),9.02(s,1H),8.71(s,1H),8.27(d,J=2.4Hz,1H),8.14(s,1H),7.93-7.90(dd,J=8.8,2.4Hz,1H),7.67(d,J=8.8Hz,1H),7.07-6.99(m,1H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.06(br,2H),4.45(d,J=7.2Hz,2H),3.88(s,3H),3.13(s,6H).分析实测值:C,43.86;H,3.82;N,18.79.C24H24BrCl2N9O3.H2O.0.1EtOAc计算值:C,44.13;H,4.07;N,18.98。
1.1.3.6(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(17)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1.2mL)中的化合物5(500mg,1.20mmol)与α-甲基溴化物239(262mg,1.19mmol)反应得到(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(17)(650mg,88%),熔点200-204℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.32(s,1H),10.40(s,1H),9.08(s,1H),9.02(s,1H),8.70(s,1H),8.37(d,J=2.5Hz,1H),8.14(s,1H),7.98-7.95(dd,J=8.8,2.5Hz,1H),7.66(d,J=8.8Hz,1H),7.06-6.99(m,1H),6.80(d,J=15.3Hz,1H),5.05(br,2H),4.44(d,J=7.2Hz,2H),3.88(s,3H),3.13(s,6H)。分析实测值:C,41.16;H,3.67;N,17.55.C24H24Br2ClN9O3.H2O.0.1EtOAc计算值:C,41.36;H,3.81;N,17.79。
1.1.3.7(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(18)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1.5mL)中的化合物6(500mg,1.20mmol)与α-甲基溴化物239(367mg,1.67mmol)反应得到(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(18)(875mg,85%),熔点209-213℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.35(s,1H),10.43(s,1H),9.09(s,1H),9.03(s,1H),8.71(s,1H),8.27(d,J=2.1Hz,1H),8.15(s,1H),7.86-7.78(m,2H),7.07-6.99(m,1H),6.80(d,J=15.3Hz,1H),5.05(br,2H),4.44(d,J=6.8Hz,2H),3.87(s,3H),3.12(s,6H)。分析实测值:C,40.97;H,3.68;N,18.03.C24H24Br2ClN9O3.1.2H2O计算值:C,40.98;H,3.78;N,17.92。
1.1.3.8(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(19)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1.5mL)中的化合物7(700mg,1.38mmol)与α-甲基溴化物239(335mg,1.52mmol)反应得到(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(19)(840mg,84%),熔点215-219℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.35(s,1H),10.41(s,1H),9.09(s,1H),9.02(s,1H),8.71(s,1H),8.37(d,J=2.1Hz,1H),8.14(s,1H),7.91-7.88(dd,J=8.8,2.2Hz,1H),7.79(d,J=8.8Hz,1H),7.07-7.01(m,1H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.04(br,2H),4.44(d,J=7.1Hz,2H),3.87(s,3H),3.12(s,6H)。分析实测值:C,38.79;H,3.34;N,16.70.C24H24Br3N9O3.H2O计算值:C,38.73;H,3.52;N,16.94。
1.1.3.9(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(20)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1mL)中的化合物8(586mg,1.50mmol)与α-甲基溴化物239(363mg,1.65mmol)反应得到(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(20)(645mg,70%),熔点198℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.31(s,1H),10.36(s,1H),9.06(s,1H),9.00(s,1H),8.65(s,1H),8.14(s,1H),8.03(br,1H),7.88(br,1H),7.36(t,J=9.1Hz,1H),7.06-6.99(m,1H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.06(br,2H),4.53(s,1H),4.45(d,J=7.0Hz,2H),3.88(s,3H),3.13(s,6H)。分析实测值:C,48.61;H,4.37;N,18.78.C26H25BrFN9O3.2H2O.0.2EtOAc计算值:C,48.47;H,4.64;N,18.98。
1.1.3.10(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(21)的制备(流程图10)。
根据方法A,将NMP(1.2mL)中的化合物9(500mg,1.23mmol)与α-甲基溴化物239(297mg,1.35mmol)反应得到(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(21)(630mg,82%),熔点199-202℃(分解)。1H NMR[(CD3)2SO]δ11.34(s,1H),10.39(s,1H),9.08(s,1H),9.02(s,1H),8.69(s,1H),8.17(d,J=2.5Hz,1H),8.14(s,1H),7.96-7.93(dd,J=8.9,2.5Hz,1H),7.59(d,J=8.9Hz,1H),7.06-6.99(m,1H),6.80(d,J=15.2Hz,1H),5.05(br,2H),4.60(s,1H),4.44(d,J=7.0Hz,2H),3.87(s,3H),3.12(s,6H)。分析实测值:C,48.16;H,4.22;N,19.19.C26H25BrClN9O3.1.2H2O.0.1EtOAc计算值:C,48.24;H,4.32;N,19.18。
2.化合物的效果
2.1细胞生长抑制活性
2.1.1.Pan-erbB激酶抑制剂
测定了式I激酶抑制剂(化合物1-9)抑制所选择的三种人癌细胞系增殖的能力,以提供与之前文献的比较:A431(表皮样癌),其过表达erbB1(EGFR);H1975(非小细胞肺癌),其过表达erbB1的双突变体erbB1L858R/T790M,已知其抵抗公认的erbB1可逆抑制剂厄洛替尼,以及SKOV3(卵巢癌),其过表达erbB2(HER2)。将这些细胞在含氧条件下暴露在试验化合物中24小时,或在缺氧条件下暴露4小时,随后在含氧条件下暴露20小时。随后洗去药物,并继续孵育4天后用磺基罗丹明B染色进行细胞生长试验。计算相对于未处理的对照孔,抑制50%细胞生长需要的化合物浓度,称为IC50值。
将结果列于表1中。
表1.A431、H1975和SKOV3细胞中细胞增殖的抑制
表1的脚注
a测定了10个浓度的化合物剂量-响应曲线。细胞在测试化合物中暴露24小时,随后用无药物介质洗涤(x3)。IC50(umol/L)值是相对于未处理对照的抑制50%细胞生长需要的浓度。数值是2-8次独立测定的平均值(所有情况下%CV<20)。b试验完全在含氧条件下进行。c24小时的前4小时药物暴露在缺氧条件下进行。d低氧条件下细胞毒性比值=相对于仅在含氧条件下的细胞,接受4小时缺氧的细胞的试验内IC50变化倍数。
相对于H1975(IC50=1.3-0.15umol/L)和SKOV3(IC50=1.8-0.2umol/L)细胞,不可逆erbB1、2、4抑制剂1、2、3、4、5、6、7、8和9更有效地抑制了需氧的A431细胞的增殖(IC50=0.28-0.005umol/L),对于与三种细胞系交叉的所有化合物,当细胞接受4小时缺氧培养时,未显示任何显著的效力变化,具有0.5~3.3的试验内HCR。
2.1.2pan-erbB抑制剂的前药
测定了所选择的式III前药化合物(化合物12-21)抑制所选择的三种人癌细胞系增殖的能力,以提供与之前文献的比较:A431(表皮样癌),其过表达erbB1(EGFR);H1975(非小细胞肺癌),其过表达erbB1的双突变体erbB1L858R/T790M,已知其抵抗公认的erbB1可逆抑制剂厄洛替尼,以及SKOV3(卵巢癌),其过表达erbB2(HER2)。将这些细胞在含氧条件下暴露在试验化合物中24小时,或在缺氧条件下暴露4小时,随后在含氧条件下暴露20小时。随后洗去药物,并继续孵育4天后用磺基罗丹明B染色,用于细胞生长。计算相对于未处理的对照孔的抑制50%细胞生长需要的浓度,称为IC50值。
将结果列于表2中。
表2.A431、H1975和SKOV3细胞中细胞增殖的抑制
表2的脚注
a测定了10个浓度的化合物剂量-响应曲线。细胞在测试化合物中暴露24小时,随后用无药物介质洗涤(x3)。IC50(umol/L)值是相对于未处理对照的抑制50%细胞生长需要的浓度。数值是2-8次独立测定的平均值(所有情况下%CV<20)。b试验完全在含氧条件下进行。c24小时的前4小时药物暴露在缺氧条件下进行。d低氧条件下细胞毒性比值=相对于仅在含氧条件下的细胞,接受4小时缺氧的细胞的试验内IC50变化倍数。
药物暴露在4小时缺氧条件下后,在抑制所有三种细胞系生长方面,表2的所有前药(12、13、14、15、16、17、18、19、20和21)是更显著有效的。低氧条件下细胞毒性比值(HCR)在A431细胞中是8-96,在H1975细胞中是14-89,并且在SKOV3细胞中是15-528,与4-硝基咪唑还原性触发剂在低氧条件下选择性还原一致,随后触发剂断裂以释放erbB1、2、4的不可逆抑制剂。
2.2.细胞酶抑制活性
通过磷酸化-erbB1和磷酸化-Erk1/2状态的蛋白质免疫印迹测定,检测了化合物3、5和6在EGF-刺激的A431细胞中抑制erbB1(EGFR)和p44/42MAPK(Erk1/2)自身磷酸化的能力。
将A431细胞接种在6孔板中(含有αMEM+5%FCS)。随后用无血清培养基洗涤板子一次,并在无血清培养基(αMEM)中生长18小时后,暴露于一系列抑制剂或前药浓度中1小时,随后用100ng/mL表皮生长因子(EGF受体配体)刺激15分钟。细胞用冰冷的PBS洗涤,并在冰上于改良的RIPA缓冲液中裂解(30min)。将溶胞产物涡旋并经离心澄清后,使用BCA试验测定样品的蛋白浓度。对于蛋白质印迹分析,在NuPAGE 4-12%凝胶中每孔加入5μg总蛋白,并在150V展开(1h)后,将蛋白转移到0.45μm硝酸纤维素膜上,随后用在TBS-Tween 0.1%中的2%BSA封闭1小时。在TBS-Tween 0.1%中的2%BSA中稀释所有抗体。为了检测磷酸化EGFR(Tyr 1068),将单克隆抗体(1∶500;Cell Signalling#2234)在4℃培育过夜,并用山羊抗兔IgG-HRP偶联的二抗(1∶5000;Santa Cruz#SC2054;3h RT)检测结合。为了检测下游的磷酸化p44/42MAPK(Erk 1/2)(Thr202/Tyr 204),以1∶500稀释使用单克隆抗体(Cell Signalling#4370)。然后,以1∶5000的比率用山羊抗兔IgG-HRP偶联的二抗处理印迹。为了标准化凝胶填充物中任何不准确,用抗-β-肌动蛋白抗体(Abacus ALS#MAB-1501R,1∶2000稀释)探测各个印迹。第二天,以1∶5000比率用山羊抗小鼠IgG-HRP偶联的次级抗体(Santa Cruz Biotechnology,Inc.sc-2055)处理印迹1小时。利用Amersham ECL Plus Western Blotting DetectionReagent(GE Healthcare RPN2132)使蛋白质印迹可视化。利用Image J软件测定光密度。在SigmaPlot 11.0上对标准化成β-肌动蛋白的值作图。
已表明化合物3、5和6是细胞erbB1的有效抑制剂(分别为图12A、13A和14A),分别具有0.0483、0.0395和0.0250μM的IC50值。此外,A431细胞中EGFR磷酸化的抑制伴随有下游p44/42MAPK(Erk 1/2)磷酸化(Thr202/Tyr 204)的同时降低,表明调控了EGFR活性控制的信号传导网络(分别为图12B、13B和14B)。相反,在抑制完整A431细胞中erbB1自磷酸化方面,季铵盐衍生物前药15比其相应抑制剂化合物3(图12A)的效果低110-倍(IC50为5.29μM;图15A和图16)。对于p44/42MAPK(Erk1/2)磷酸化(Thr202/Tyr 204),观察到了类似的效能降低(图12B和图15B相比,化合物3和前药15的IC50分别为0.179μM和8.9μM),表明更低效能地调控EGFR活性控制的下游信号传导网络。对于磷酸化-EGFR剂量依赖的抑制(用β-肌动蛋白校正的),当对各自条带光密度值作图时,很明显,相对于化合物3,前药15的活性降低110-倍。前药对细胞erbB1抑制效能的降低主要归因于正电荷季铵盐的存在所导致的前药的细胞外排。
2.3辐射分解还原
与正常组织中正常含氧量条件下不同,在实体瘤的低氧区域亲电性前药可通过单电子过程选择性还原(Brown和Wilson,Nature Rev.Cancer,2004,4,437-447)。前药应当包含具有单电子还原电位E(1)的触发剂部分,E(1)相对于NHE为-0.6V至-0.2V,优选介于-0.5V至-0.3V。许多化合物的E(1)值可以从文献中获得(例如Wardman,P.J.Phys.Chem.Ref.Data,1989,18,1637-1755。)或通过多种方法测定。例如脉冲辐射分解方法测定前药经单电子还原后形成的自由基阴离子和诸如紫精和醌化合物的参考标准间的平衡常数,从该数据可计算化合物的E(1)值(Meisel和Czapski.J.Phys.Chem.,1975,79,1503-1509)。前药13、15-19的E(1)值通过脉冲辐射分解方法测量,并测定为-0.428V到-0.417V(表3)。它们都被认为具有适当的E(1)值,能在生物环境中酶促形成其自由基阴离子。
前药在溶液中辐射分解后,具有适当E(1)值的前药可以通过多种方法测定其释放效应物部分的能力。例如,辐射分解前后的质谱(MS)和/或高效液相色谱(HPLC)鉴定了起始化合物和辐射分解形成的产物。某些单电子还原剂能在含有不同溶质的溶液辐射分解后产生。例如在经γ-辐射后含有甲酸盐离子的溶液中形成的CO2 .-基团,具有-1.90V的低E(1)值(Schwarz等人,Inorg.Chem.,1985,24,433-439。),易于将电子转移到具有较高E(1)值的化合物上。在所使用的辐射条件下,每Gy(J kg-1)吸收的辐射剂量产生0.66μM浓度的单电子还原当量(CO2 .-基团)(Mulazzani等人,J.Phys.Chem.,90,5347-5352,1980。)。通过比较前药浓度的下降和溶液辐射分解后产生的还原当量的浓度,可以确定需要单或多电子还原以使得各个前药完全分解。通常,在0.95还原当量转移到前药时,即找到前药单电子去除的证据,以最小化同一前药分子的多电子还原。在单电子去除前药的情况下,通常表明其自由基阴离子的断裂。该结论可通过组合HPLC-MS鉴定释放的细胞毒性效应物和来自过渡态苄基类基团的产物(例如H原子抽离形成的甲基硝基芳族化合物(MNA))得到进一步支持。该过程已显示在某些相关的芳基甲基四价氮芥中发生(Anderson等人,J.Phys.Chem.,1997,101,9704-9709;Wilson等人,Radiat.Res.,1998,149,237-245.)。前药17获得的数据与其在单电子还原水平的消耗(在0.95还原当量水平下前药减少>50%)一致,释放的效应物(化合物5)通过HPLC-MS检测,表3。
希望选择所述还原性前药,使其在触发剂部分单电子还原后,具有可控的断裂速率常数。虽然在肿瘤细胞含氧量低的区域快速断裂释放高浓度的细胞毒性效应物是需要的,但对于含氧量正常的正常组织细胞则并非如此。单电子还原的基于硝基芳烃的前药被氧气重新氧化(其有效抑制效应物释放)的速率常数kO2如下式所表达(Wardman等人,Biochem.Soc.Symp.,1995,61,171-194;Anderson等人,Org.Biomol.Chem.2005,3,2167-2174。):
log kO2/M-1s-1=(4.6±0.1)-(5.0±0.2)xE(1)C/C.-
其中E(1)C/C.-是前药的单电子还原电位。这意味着对于E(1)的整个优选范围-0.5V~-0.3V,正常细胞中重新氧化的准第1级速率常数(生理条件下,其可以在氧气浓度中低至10μM)从130s-1降至13s-1。因此,前药E(1)的整个优选范围中,保证含氧量正常的组织中充分重新氧化并由此影响前药的选择性低氧断裂的断裂速率范围,对于需要的E(1)上限的前药最优选是大约2-30s-1,并且对于需要的E(1)下限的前药最优选是大约20-300s-1。单电子还原的前药的断裂速率常数kfrag可使用脉冲辐射分解测定,以观察自由基阴离子断裂后产生的苄基类基团的吸收光谱的时间解析形成(Anderson等人,J.Phys.Chem.A,1997,101,9704-9709。)。前药13、15-17的kfrag值通过脉冲辐射分解测定,显示于表3中。所有前药具有低氧条件下单电子还原后所需要的断裂速率常数范围,这与其在体外的基于A431、H1975和SKOV3细胞的抗增殖试验中显示具有可接受的低氧条件下细胞毒性比值相一致(表3)。
表3.所选择的前药通过CO2 .-基团的辐射分解还原
前药 | E(1)/Va | kfrag.b/s-1 | %前药损耗c | MNA检测d |
13 | -0.417 | 60±10 | ||
15 | -0.423 | 60±10 | ||
16 | -0.418 | 60±10 | ||
17 | -0.425 | 70±10 | 70 | 有 |
18 | -0.428 | |||
19 | -0.425 |
表3的脚注
a相对于甲基紫精测定,E(1)MV2+/MV+.=-447±7mV。b在360-390nm区域吸收的形成苄基类基团的脉冲辐射分解数据。c在0.95还原当量下通过HPLC-MS进行的测定;>50%表明单电子还原后的断裂。d通过HPLC-MS进行的甲基硝基芳烃(MNA)的检测。
2.3.1辐射分解还原试验
引入还原当量后,使用60Coγ射线辐照器测定样品前药在溶液中释放效应物的相对活性。前药以小于等于50μM的浓度溶于Millipore水中(含有加入的50mM甲酸钠缓冲液,pH7,加入5mM磷酸钠)。密闭玻璃容器中的溶液用N2O气体连续饱和30分钟后以7.5Gy/分钟的剂量进行放射分解,该剂量预先用Fricke放射量测定法测定(Fricke和Hart,“ChemicalDosimetry”,Radiation Dosimetry卷2,Attrix,F.H.;Roesch,W.C.;Tochilin,E.(编辑),Academic Press,New York,1966,pp 167-239.)。在上述使用的辐射条件下,每Gy产生0.66μM浓度的单电子还原当量(CO2 .-自由基)(Mulazzani等人,J.Phys.Chem.,90,5347-5352,1980),并且前药(P)通过电子转移而还原。
γ-辐射+H2O→e- aq+H.+.OH+H3O+
e- aq+N2O→·OH+OH-+N2
.OH/H.+HCOO-→H2O/H2+CO2 .-
CO2 .-+P→P.-+CO2
一式两份的受辐射的样品中前药17的损耗及其效应物5的形成通过HPLC-质谱(MS)监测。测定了0.95还原当量水平下前药浓度的百分比下降和效应物形成。此外,记录了来自前药17的甲基-硝基芳族的检测。0.95还原当量水平下前药浓度下降超过50%,表明了单电子化学计量。
使用脉冲辐解来实时监测单电子还原和化合物的稳定性。使用装配了快速光谱检测系统的线性加速器递送高能电子短脉冲(200ns 4MeV中2-3Gy)(Anderson等人,J.Phys.Chem.A,101,9704-9709,1997)。将前药溶解于含有甲酸盐离子的N2O-饱和溶液中,如前所述,在经过脉冲辐解后在数微秒内迅速形成所述化合物的自由基阴离子。通过在对应于触发剂部分的苄基类基团形成的波长处分析动态临界物确定断裂速率(Bays等人,J.Am.Chem.Soc.,105,320-324,1983;Anderson等人,J.Phys.Chem.A,101,9704-9709,1997)。
2.4本发明化合物的体内效果
方法
将Charles River Laboratories(Wilmington,MA)提供的来自饲养小鼠的无特异性病原体的雌性NIH-III裸鼠以4-6只的组饲养在温度受控的房间(22±2℃),具有12-小时的光照/黑暗周期,并对其随意喂水和标准啮齿类饲料(Harlan Teklad膳食2018i)。所有动物通过耳部标记号唯一性识别。
以5x106细胞的H1975或A431细胞的PBS溶液(100μL),将新收集的细胞混悬液皮下接种在右胁侧。平均肿瘤直径是将最长直径(长度)乘以垂直测量值(宽度)平均而得到的。利用公式(L x w2)xπ/6(其中肿瘤的L=长度,并且w=宽度,单位mm),计算肿瘤体积(mm3)。
生长延迟实验操作
按照测径器测量的,当肿瘤达到大约250mm3的体积时,开始治疗。将所有药物以10-20ml/kg的剂量体积经腹腔注射给药。按照MTD用q3dx4、q5dx4或q7dx4方案,给药小鼠,在研究的30天持续期内利用测径器每3-5天测量肿瘤的生长。如果小鼠出现毒性体征或者如果体重减轻超过起始体重的20%,就将其剔除。所有动物试验遵守奥克兰大学动物伦理委员会批准的方案。
当肿瘤体积达到治疗尺寸时,将荷瘤小鼠随机分成治疗组。如果异种移植物显示如下迹象,就将动物淘汰:(i)异种移植物附着到下面的肌肉(由于局部侵袭的风险),(ii)溃疡迹象,或者(iii)无痛肿瘤生长。在分配的当天开始给药。
治疗期间和治疗后,有规律地测量肿瘤尺寸和体重。如果(i)肿瘤的平均直径超过15mm(存活终点),(ii)体重减轻超过治疗前值的20%,(iii)具有延长或过度病态的迹象,或者(iv)出现肿瘤溃疡,就将动物剔除。治疗开始后,在第21天(A431肿瘤)或者第30天(H1975肿瘤),终止试验。
效果分析
记录相对于第1天治疗,个体肿瘤体积增加4倍的时间(RTV4)。计算各组的RTV4中位值,并将对照组和治疗组之间的RTV4差异记录为以天表示的肿瘤生长延迟。将RTV4值标准化为相对于第0天肿瘤治疗体积的偏差。构建Kaplan-Meier曲线,并计算中位存活(TTE50)。利用对数时序P统计检验,分析对照组和治疗组之间达到RTV4所需的总生存时间中任何差异的统计学显著性。
毒性
对于各治疗组,记录体重减轻的最低值(与时间无关的最大值)。记录涉及死亡的任何治疗体征。将可接受的毒性定义为受试期间不超过15%的平均组体重减轻、不超过20%的个体体重减轻和任何24小时内不超过10%的个体体重减轻。记录所有计划之外的死亡。
结果
图1-11中提供了肿瘤中位生长曲线。下面表4-6中提供了毒性和效能方面的治疗效果的概述表。
简言之,将9种激酶抑制剂和9种前药施用至具有人H1975或A431肿瘤异种移植物的小鼠。对于H1975肿瘤治疗开始的平均(±SD)肿瘤体积是245mm3±60mm3,并且对于A431肿瘤治疗开始的平均(±SD)肿瘤体积是268mm3±124mm3。
在耐受剂量水平,所有激酶抑制剂延缓肿瘤生长。在H1975(图1-3)和A431(图4)中,当用q3dx4日程(P<0.05,时序检验)给药时,对于化合物2-9,所述肿瘤生长延缓是特别显著的。所有组中仅有很小的体重减轻,但用化合物5和7在H1975异种移植小鼠中治疗后,有1只死亡(表4)。
表4.激酶抑制剂的治疗毒性和效能参数概述
表4的脚注
a用乳酸盐缓冲溶液(pH4)通过腹腔内注射施用(<0.02ml/g);b所有被认为可能是药物相关的动物死亡;c对于各个个体,相对于第0天的体重,平均体重减轻的最低值(与时间无关的最大值)(%);d在达到4倍起始治疗体积(RTV4;相对于第0天的体积)需要的时间内,相对于对照组计算为%增长的肿瘤生长延迟;e相对于假定为RTV4生存终点的缓冲液治疗的对照,化合物治疗的Kaplan-Meier时序检验生存分析。
类似地,在H1975(图5-7)或A431(图8)异种移植模型中,以q3dx4日程治疗后,前药(化合物12、13、15-21)都显著延迟肿瘤生长。此外,在所有治疗组的小鼠中,仅有较少的体重减轻,尽管用化合物19治疗后有1只死亡(表5)。
表5.前药的治疗毒性和效能参数概述
表5的脚注
a用乳酸盐缓冲溶液(pH4)通过腹腔内注射施用(<0.02ml/g);b所有被认为可能是药物相关的动物死亡;c对于各个个体,相对于第0天的体重,平均体重减轻的最低值(与时间无关的最大值)(%);d在达到4倍起始治疗体积(RTV4;相对于第0天的体积)需要的时间内,相对于对照组计算为%增长的肿瘤生长延迟;e相对于假定为RTV4生存终点的缓冲液治疗的对照,化合物治疗的Kaplan-Meier时序检验生存分析。
对于与激酶抑制剂相比的前药,与它们的同源激酶抑制剂3和5相比,在H1975肿瘤中施用前药15和17分别显示生长延迟的更长时间(图9-10)。
以其q3dx4的MTD,用多种给药日程:q3dx4、q5dx4和q7dx4测试前药17。在所有3个给药日程中,与对照相比,化合物17显著延迟H1975肿瘤中肿瘤的生长(图11)。在肿瘤生长方面,3个给药日程之间没有显著的统计学差异。q3dx4日程给药后,体重减轻是最大的,并且q7dx4日程给药后,体重减轻是最小的(表6)。然而,在q7dx4日程治疗组观察到1只死亡。不清楚该死亡是否是药物相关的。还以其q3dx4的MTD,用q3dx4和q5dx4日程将化合物17给药至A431异种移植小鼠,两种给药日程在A431肿瘤生长中引起相似的延迟,并在动物体重方面引起相似的减轻(表6)。
表6.q3dx4、q5dx4和q7dx4日程的17的治疗毒性和效能参数概述
表6的脚注
a用乳酸盐缓冲溶液(pH4)通过腹腔内注射施用(<0.02ml/g);b所有被认为可能是药物相关的动物死亡;c对于各个个体,相对于第0天的体重,平均体重减轻的最低值(与时间无关的最大值)(%);d在达到4倍起始治疗体积(RTV4;相对于第0天的体积)需要的时间内,相对于对照组计算为%增长的肿瘤生长延迟;e相对于假定为RTV4生存终点的缓冲液治疗的对照,化合物治疗的Kaplan-Meier时序检验生存分析。
总之,体外和体内活性数据表明本发明化合物作为激酶抑制剂的功效。因此,所述化合物适合用于激酶-抑制治疗中。尤其是用还原性前药和癌症治疗的情况,因为肿瘤通常具有低含氧区。在低氧条件下,将前药还原,以释放母体的激酶抑制剂和产生肿瘤靶向的效果。
认为前药15、17和18是特别有前景的治疗侯选物。
尽管上文广泛地概述了本发明,但是本领域技术人员应该理解具体的描述仅是举例性的,并且在不背离下文权利要求书所定义的本发明的情况下,可进行变通。
将上文引用的所有出版物以其整体引入文中作为参考。
Claims (40)
1.式I的激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂合物:
其中:
(1)R1是H,并且
(a)R2是(3-氯苄基)氧基-且R3是氯;
(b)R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑;
(c)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氯;
(d)R2和R3都是氯;
(e)R2是氯且R3是溴;
(f)R2和R3都是溴;
(g)R2是氟且R3是乙炔基;
(h)R2是氯且R3是乙炔基;
(i)R2是溴且R3是乙炔基;
(j)除了R2在3-位且R3在4-位时,R2是溴且R3是氟;
(k)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氟;或者
(l)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是溴;或者
(2)R1、R2和R3中的至少一个选自苄氧基、3-氯苄基氧基和2-吡啶基甲氧基,并且当R1、R2和R3中的至少一个不是苄氧基、3-氯苄氧基或2-吡啶基甲氧基时,其它的各自独立地选自H、卤素和C2-C4炔基,条件是当R1、R2和R3中的一个是苄氧基或2-吡啶基甲氧基时,R1、R2和R3中的其它两个不是H;或者
(3)R1、R2和R3中的两个与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑,并且另一个选自H、卤素和C2-C4炔基。
2.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其中
R1是H,并且
(a)R2是(3-氯苄基)氧基-且R3是氯;
(b)R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑;
(c)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氯;
(d)R2和R3都是氯;
(e)R2是氯且R3是溴;
(f)R2和R3都是溴;
(g)R2是氟且R3是乙炔基;
(h)R2是氯且R3是乙炔基;
(i)R2是溴且R3是乙炔基;
(j)除了R2在3-位且R3在4-位时,R2是溴且R3是氟;
(k)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氟;或者
(l)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是溴。
3.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其中R1、R2和R3中的至少一个选自苄氧基、3-氯苄基氧基和2-吡啶基甲氧基,并且当R1、R2和R3中的至少一个不是苄氧基、3-氯苄氧基或2-吡啶基甲氧基时,其它的各自独立地选自H、卤素和C2-C4炔基,条件是当R1、R2和R3中的一个是苄氧基或2-吡啶基甲氧基时,R1、R2和R3中的其它两个不是H。
4.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,R1、R2和R3中的两个与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑,并且另一个选自H、卤素和C2-C4炔基。
5.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其为式IA或其药学上可接受的盐或溶剂合物:
其中R1是H,并且
(a)R2是(3-氯苄基)氧基-且R3是氯;
(b)R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成1-(3-氟苄基)-1H-吡唑;
(c)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氯;
(d)R2和R3都是氯;
(e)R2是氯且R3是溴;
(f)R2是溴且R3是氯;
(g)R2和R3都是溴;
(h)R2是氟且R3是乙炔基;
(i)R2是氯且R3是乙炔基;
(j)R2是溴且R3是乙炔基;
(k)R2是溴且R3是氟;
(l)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是氟;或者
(m)R2是2-吡啶基甲氧基且R3是溴。
6.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(1)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
7.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-4-(二甲氨基)-N-(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)-2-丁烯酰胺(2)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
8.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-{4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(3)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
9.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(4)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
10.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(5)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
11.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(6)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
12.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(7)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
13.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-4-(二甲氨基)-N-[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-2-丁烯酰胺(8)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
14.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(9)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
15.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(10)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
16.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(11)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
17.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-4-(二甲氨基)-N-{4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-2-丁烯酰胺(89)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
18.根据权利要求1所述的激酶抑制剂,其是(2E)-N-{4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}-4-(二甲氨基)-2-丁烯酰胺(90)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
19.根据权利要求1所定义的激酶抑制剂在制备药物中的用途。
20.根据权利要求19所述的用途,其中所述药物是前药,并且激酶抑制剂连接至还原性触发剂。
21.还原性前药,其含有权利要求1所定义的激酶抑制剂和直接或间接地连接至激酶抑制剂的氮的还原性触发剂。
24.根据权利要求23所述的还原性前药,其中还原性触发剂是式IIa。
25.根据权利要求23所述的还原性前药,其中还原性触发剂是式IIa,并且R5是甲基。
27.根据权利要求21所述的还原性前药,其中前药是式IIIA化合物:
其中X是任何负电荷的平衡离子,R1、R2和R3如权利要求1中的式I所定义,R4选自H、甲基、乙基、三氟甲基、-CN、-CONH2和丙炔-1-基。
29.根据权利要求28所述的还原性前药,选自:
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(12),
(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(13),
(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(14),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(15),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(16),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(17),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(18),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(19),
(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(20),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(21),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(22),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(23),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(24),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(25),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(26),
(2E)-4-[(4-{3-氯-4-[(3-氯苄基)氧基]苯胺基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(27),
(2E)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(28),
(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(29),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(30),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(31),
(2E)-4-[(4-{[1-(3-氟苄基)-1H-吲唑-5-基]氨基}吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基)氨基]-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(32),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(33),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(34),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(35),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(36),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(37),
(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(38),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(39),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(40),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(41),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(42),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(43),
(2E)-4-{[4-(3,4-二氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(44),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(45),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(46),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(47),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(48),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(49),
(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(50),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(51),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(52),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(53),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(54),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(55),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(56),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(57),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(58),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(59),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(60),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(61),
(2E)-4-{[4-(3,4-二溴苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(62),
(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(63),
(2E)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(64),
(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(65),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(66),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(67),
(2E)-4-{[4-(3-乙炔基-4-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(68),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(69),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(70),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(71),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(72),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(73),
(2E)-4-{[4-(4-氯-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(74),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(75),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(76),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(77),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(78),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(79),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(80),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-乙炔基苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(81),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(82),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(83),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(84),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(85),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(86),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(87),
(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氟苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(88),
(2E)-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(91),
(2E)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(92),
(2E)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(93),
(2E)-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(94),
(2E)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(95),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(96),
(2E)-4-({4-[3-氟-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(97),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(98),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(1,2-二甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(99),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-乙基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(100),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(三氟甲基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(101),
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N-[(2-氰基-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(102),
(2E)-N-{[2-(氨基羰基)-1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(103)和
(2E)-4-({4-[3-溴-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-{[1-甲基-4-硝基-2-(1-丙炔基)-1H-咪唑-5-基]甲基}-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(104);
及其药学上可接受的盐和溶剂合物。
30.根据权利要求28所述的还原性前药,其是(2E)-4-({4-[3-氯-4-(2-吡啶基甲氧基)苯胺基]吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基}氨基)-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(15)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
31.根据权利要求28所述的还原性前药,其是(2E)-4-{[4-(3-溴-4-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(17)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
32.根据权利要求28所述的还原性前药,其是(2E)-4-{[4-(4-溴-3-氯苯胺基)吡啶并[3,4-d]嘧啶-6-基]氨基}-N,N-二甲基-N-[(1-甲基-4-硝基-1H-咪唑-5-基)甲基]-4-氧代-2-丁烯-1-溴化铵(17)或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
33.根据权利要求1-18中任何一项所述的式I的激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂合物,其用于治疗。
34.根据权利要求21-32中任何一项所述的还原性前药,其用于治疗。
35.药物组合物,其含有根据权利要求1-18中任何一项所定义的式I激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂合物,以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或稀释剂。
36.药物组合物,其含有根据权利要求21-32中任何一项所定义的还原性前药,以及一种或多种药学上可接受的赋形剂或稀释剂。
37.治疗癌症的方法,其包括将治疗有效量的权利要求1-18中任何一项所定义的式I激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂合物给药至需要所述治疗的患者的步骤。
38.治疗癌症的方法,其包括将治疗有效量的权利要求21-32中任何一项所定义的还原性前药给药至需要所述治疗的患者的步骤。
39.抑制个体中激酶活性的方法,其包括将抑制量的权利要求1-18中任何一项所定义的式I激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或溶剂合物给药至需要所述治疗的个体的步骤。
40.抑制个体中激酶活性的方法,其包括将抑制量的权利要求21-32中任何一项所定义的还原性前药给药至需要所述治疗的个体的步骤。
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Cited By (2)
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WO2020219906A1 (en) * | 2019-04-25 | 2020-10-29 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Heterocyclic inhibitors of tyrosine kinase |
WO2021127456A1 (en) | 2019-12-19 | 2021-06-24 | Rain Therapeutics Inc. | Methods of inhibiting epidermal growth factor receptor proteins |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1997038983A1 (en) * | 1996-04-12 | 1997-10-23 | Warner-Lambert Company | Irreversible inhibitors of tyrosine kinases |
WO1999006378A1 (en) * | 1997-07-29 | 1999-02-11 | Warner-Lambert Company | Irreversible inhibitors of tyrosine kinases |
WO2004091625A1 (en) * | 2003-04-16 | 2004-10-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | (6-(phenoxy)-pyrido`3,4-d! pyrimidin-2-yl)-amine derivatives as p38 kinase inhibitors for the treatment of inflammatoryy conditions such as rheumatois artritis |
WO2007054551A1 (en) * | 2005-11-11 | 2007-05-18 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination treatment of cancer comprising egfr/her2 inhibitors |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69627355T2 (de) | 1995-08-18 | 2004-02-12 | Auckland Uniservices Ltd. | Durch strahlung aktivierte cytotoxin therapie |
ES2257756T3 (es) * | 1996-03-12 | 2006-08-01 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Nuevos profarmacos para la terapia de tumores y enfermedades inflamatorias. |
TW436485B (en) * | 1997-08-01 | 2001-05-28 | American Cyanamid Co | Substituted quinazoline derivatives |
CN101003514A (zh) | 2006-01-20 | 2007-07-25 | 上海艾力斯医药科技有限公司 | 喹唑啉衍生物、其制备方法及用途 |
WO2008151253A1 (en) * | 2007-06-04 | 2008-12-11 | Threshold Pharmaceuticals, Inc. | Hypoxia activated prodrugs of antineoplastic agents |
EP3031807A1 (en) * | 2009-03-11 | 2016-06-15 | Auckland UniServices Limited | Prodrug forms of kinase inhibitors and their use in therapy |
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Patent Citations (4)
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---|---|---|---|---|
WO1997038983A1 (en) * | 1996-04-12 | 1997-10-23 | Warner-Lambert Company | Irreversible inhibitors of tyrosine kinases |
WO1999006378A1 (en) * | 1997-07-29 | 1999-02-11 | Warner-Lambert Company | Irreversible inhibitors of tyrosine kinases |
WO2004091625A1 (en) * | 2003-04-16 | 2004-10-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | (6-(phenoxy)-pyrido`3,4-d! pyrimidin-2-yl)-amine derivatives as p38 kinase inhibitors for the treatment of inflammatoryy conditions such as rheumatois artritis |
WO2007054551A1 (en) * | 2005-11-11 | 2007-05-18 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Combination treatment of cancer comprising egfr/her2 inhibitors |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107427515A (zh) * | 2014-12-03 | 2017-12-01 | 奥克兰联合服务有限公司 | 用于治疗癌症的激酶抑制剂前药 |
CN107427515B (zh) * | 2014-12-03 | 2021-11-16 | 奥克兰联合服务有限公司 | 用于治疗癌症的激酶抑制剂前药 |
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