JP5925680B2

JP5925680B2 - キナーゼインヒビター、そのプロドラッグ型および治療におけるそれらの使用

Info

Publication number: JP5925680B2
Application number: JP2012527843A
Authority: JP
Inventors: ジェフリーブルーススマイル; アダムフォルンパターソン; グオ−リャンルー; ホーフアットリー; アミルアショールザデー; ロバートフォーブスアンダーソン; ウィリアムロバートウィルソン; ウィリアムアレキサンダーデニー; ファイ−リンスー; アンドレイマロース; ステファンマイケルフレイザージャミーソン; アレクサンドラマリーマウディ; ケンダルマリーカーリン
Original assignee: オークランドユニサーヴィスィズリミテッド
Priority date: 2009-09-02
Filing date: 2010-09-02
Publication date: 2016-05-25
Anticipated expiration: 2030-09-02
Also published as: MX2012002327A; AU2010290199B2; CN102574846A; EP2473509A1; CN102574846B; BR112012004720A2; AU2010290199A1; RU2012112396A; RU2568639C2; CA2771016A1; US20120202832A1; JP2016094432A; BR112012004720B1; MX336332B; IL218182A0; WO2011028135A1; ZA201200994B; CN104496982A; NZ598144A; US20160031877A1

Description

本発明は、キナーゼインヒビター、キナーゼインヒビターのプロドラッグ型、それらを含む組成物および医薬、ならびにこのようなインヒビター、組成物および医薬の調製および使用のためのプロセスに関する。

キナーゼ類は、タンパク質、脂質および代謝物のリン酸化を触媒し、かつ広範な種々の細胞過程の調節において中心的な役割を果たす酵素の大きな一群である。異常なキナーゼ活性は、癌を含めて広範な種々の障害に関連している。これによって、治療剤としてのキナーゼインヒビターの開発が導かれる。

本発明は一般に、キナーゼインヒビターとしての活性を有する化合物であって、それらのプロドラッグ型を含む化合物、およびこのような化合物の治療における適用を提供することを課題とする。

第一の態様では、本発明は、式Ｉ：

［式中、以下のいずれか：
（１）Ｒ_１はＨであり、かつ
（ａ）Ｒ_２は、（３−クロロベンジル）オキシ−であり、かつＲ_３はクロロであるか；
（ｂ）Ｒ_２およびＲ_３は、それらが結合される炭素原子と一緒になって、１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−ピラゾールを形成するか；
（ｃ）Ｒ_２は、２−ピリジニルメトキシであり、かつＲ_３はクロロであるか；
（ｄ）Ｒ_２およびＲ_３は両方ともクロロであるか；
（ｅ）Ｒ_２はクロロであり、かつＲ_３はブロモであるか；
（ｆ）Ｒ_２およびＲ_３は両方ともブロモであるか；
（ｇ）Ｒ_２はフルオロであり、かつＲ_３はエチニルであるか；
（ｈ）Ｒ_２はクロロであり、かつＲ_３はエチニルであるか；
（ｉ）Ｒ_２はブロモであり、かつＲ_３はエチニルであるか；
（ｊ）Ｒ_２が４位のＲ_３と組み合わせて３位にある場合以外は、Ｒ_２はブロモであり、かつＲ_３はフルオロであるか；
（ｋ）Ｒ_２は２−ピリジニルメトキシであり、かつＲ_３はフルオロであるか；または
（ｌ）Ｒ_２は２−ピリジニルメトキシであり、かつＲ_３はブロモであるか；あるいは
（２）Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３のうちの少なくとも１つは、ベンジルオキシ、３−クロロベンジルオキシおよび２−ピリジニルメトキシから選択され、かつＲ_１、Ｒ_２およびＲ_３のうちの少なくとも１つが、ベンジルオキシでも、３−クロロベンジルオキシでも、もしくは２−ピリジニルメトキシでもない場合、他の各々は独立して、Ｈ、ハロゲンおよびＣ_２−Ｃ_４アルキニルから選択され、ただし、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３のうちの１つがベンジルオキシもしくは２−ピリジニルメトキシである場合、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３のうちの他の２つはＨではないか；あるいは
（３）Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３のうちの２つは、それらが結合される炭素原子と一緒になって、１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−ピラゾールを形成し；かつその他は、Ｈ、ハロゲンおよびＣ_２−Ｃ_４アルキニルから選択される］
で表されるキナーゼインヒビターあるいはその薬学的に許容される塩または溶媒和物を提供する。

特定の実施形態では、本発明は、式ＩＡ：

［式中、Ｒ_１はＨであり、かつ以下のいずれか：
（ａ）Ｒ_２が（３−クロロベンジル）オキシ−であり、かつＲ_３がクロロであるか；
（ｂ）Ｒ_２およびＲ_３が、それらが結合される炭素原子と一緒になって、１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−ピラゾールを形成するか；
（ｃ）Ｒ_２が、２−ピリジニルメトキシであり、かつＲ_３はクロロであるか；
（ｄ）Ｒ_２およびＲ_３が両方ともクロロであるか；
（ｅ）Ｒ_２がクロロであり、かつＲ_３がブロモであるか；
（ｆ）Ｒ_２がブロモであり、かつＲ_３がクロロであるか、
（ｇ）Ｒ_２およびＲ_３が両方ともブロモであるか；
（ｈ）Ｒ_２がフルオロであり、かつＲ_３がエチニルであるか；
（ｉ）Ｒ_２がクロロであり、かつＲ_３がエチニルであるか；
（ｊ）Ｒ_２がブロモであり、かつＲ_３がエチニルであるか；
（ｋ）Ｒ_２がブロモであり、かつＲ_３がフルオロであるか；
（ｌ）Ｒ_２が２−ピリジニルメトキシであり、かつＲ_３がフルオロであるか；または
（ｍ）Ｒ_２が２−ピリジニルメトキシであり、かつＲ_３がブロモである］のキナーゼインヒビター、
ならびに、その薬学的に許容される塩および溶媒和物を提供する。

好ましくは、このキナーゼインヒビターは、以下：
（２Ｅ）−Ｎ−（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（１）、
（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−２−ブテンアミド（２）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（３）、
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（４）、
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（５）、
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（６）、
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（７）、
（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−２−ブテンアミド（８）、
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（９）、
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（１０）、
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（１１）、
（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝−２−ブテンアミド（８９）および
（２Ｅ）−Ｎ−｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（９０）；
ならびにその薬学的に許容される塩および水和物から選択される。

上記列挙の化合物の構造は以下である：

別の態様では、本発明は、上記のような式Ｉのキナーゼインヒビター、またはその塩もしくは溶媒和物の、医薬の調製における用途を提供する。

１つの好ましい実施形態では、この医薬は、プロドラッグであり、かつ式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物は、還元性トリガーに連結されている。

なおさらなる態様では、本発明は、上記のような式Ｉのキナーゼインヒビター、またはその塩もしくは溶媒和物と、このキナーゼインヒビターの窒素に対して直接または間接的に連結された還元性トリガーとを備える、還元性プロドラッグを提供する。

特定の実施形態では、この還元性トリガーは式ＩＩ：

［式中、＊が、上記キナーゼインヒビターの窒素に対する結合ポイントであり、かつ式ＩＩでは、Ｒ_５が、Ｃ_１−Ｃ_６アルキルから選択され、かつＲ_４がＨ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、−ＣＮ、−ＣＯＮＨ_２およびプロピン−１−イルから選択される］のものである。

特定の実施形態では、この還元性トリガーは、式ＩＩａ〜ＩＩｇ：

からなる群より選択される。

特定の実施形態では、Ｒ_５は、メチル、エチルおよびプロピル、好ましくはメチルから選択される。

特定の好ましい実施形態では、この還元性トリガーは、式ＩＩａのものであり、ここでＲ_５は、メチル、エチルおよびプロピルから選択される。

最も好ましくは、この還元性トリガーは、式ＩＩａのものであり、ここでＲ_５は、メチルから選択される。

１つの実施形態では、上記プロドラッグは、式ＩＩＩ：

［式中、Ｘは、任意の負に荷電された対イオンであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は式Ｉについて定義されており、Ｒ_４は、Ｈ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、−ＣＮ、−ＣＯＮＨ_２およびプロピン−１−イルから選択され、かつＲ_５はＣ_１−Ｃ_６アルキルである］の化合物である。

特定の実施形態では、上記プロドラッグは、式ＩＩＩＡ：

［式中、Ｘは、任意の負に荷電された対イオンであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は式Ｉについて定義されており、かつＲ_４は、Ｈ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、−ＣＮ、−ＣＯＮＨ_２およびプロピン−１−イルから選択される］の化合物である。

さらに別の実施形態では、上記プロドラッグは、式ＩＩＩＢ：

［式中、Ｘは、任意の負に荷電された対イオンであり、Ｒ_１、Ｒ_２およびＲ_３は式ＩＡについて定義されており、かつＲ_４は、Ｈ、メチル、エチル、トリフルオロメチル、−ＣＮ、−ＣＯＮＨ_２およびプロピン−１−イルから選択される］の化合物である。

好ましい実施形態では、Ｘは、ハロゲン化物（フッ化物、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、トシレート、乳酸塩、クエン酸塩およびギ酸塩から選択される。

さらに好ましくは、Ｘはハロゲン化物であり、臭化物が最も好ましい。

好ましくは式ＩＩＩの化合物は以下：
（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１２）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１３）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１４）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１５）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１６）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１７）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１８）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１９）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２０）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２１）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２２）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２３）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２４）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２５）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２６）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２７）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２８）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２９）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３０）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３１）、
（２Ｅ）−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３２）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３３）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３４）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３５）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３６）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３７）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３８）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（３９）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４０）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４１）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４２）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４３）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４４）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４５）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４６）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４７）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４８）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（４９）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５０）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５１）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５２）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５３）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５４）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５５）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５６）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５７）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５８）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（５９）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６０）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６１）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６２）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６３）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６４）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６５）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６６）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６７）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６８）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（６９）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７０）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７１）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７２）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７３）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７４）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７５）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７６）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７７）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７８）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（７９）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８０）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８１）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８２）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８３）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８４）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８５）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８６）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−｛［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８７）、
（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（８８）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９１）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−（｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９２）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−（｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９３）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９４）、
（２Ｅ）−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−（｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９５）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−（｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９６）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−フルオロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９７）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９８）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（９９）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ−［（２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１００）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１０１）、
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ−［（２−シアノ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１０２）、
（２Ｅ）−Ｎ−｛［２−（アミノカルボニル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−（｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１０３）および
（２Ｅ）−４−（｛４−［３−ブロモ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−｛［１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチル｝−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１０４）から選択される。

上記列挙のプロドラッグ化合物の構造は以下である：

なお、さらなる態様では、本発明は、治療における用途のための、上記のような式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物、上記のような還元性プロドラッグ、あるいは上記のような式ＩＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を提供する。

なお、別の態様では、本発明は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤もしくは希釈剤と組み合わせて、上記のような式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物、上記のような還元性プロドラッグ、あるいは上記のような式ＩＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物を含む薬学的組成物を提供する。

なお、さらなる態様では、本発明は、そのような治療の必要な患者に対して、上記のような式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物、上記のような還元性プロドラッグ、あるいは上記のような式ＩＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物の治療上有効な量を投与する工程を包含する、治療の方法を提供する。

好ましくは、治療の方法は、癌の治療である。

なお、さらなる態様では、本発明は、被験体に対して、上記のような式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物、上記のような還元性プロドラッグ、あるいは上記のような式ＩＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物の阻害量を投与する工程を包含する、被験体内のキナーゼ活性を阻害する方法を提供する。

好ましくは、キナーゼ活性のこのような阻害は、抗癌目的を含む治療目的のためにある。

別の態様では、本発明は、ヒトのような温血動物において抗癌効果を生じるための方法を提供し、ここでこの方法は、上記のような式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物、上記のような還元性プロドラッグ、あるいは上記のような式ＩＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物の有効量をこの動物に対して投与する工程を包含する。

さらなる態様では、本発明は、細胞において抗癌効果を生じるための方法を提供し、ここでこの方法は、上記のような式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物、上記のような還元性プロドラッグ、あるいは上記のような式ＩＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物の有効量とこの細胞とを接触させる工程を包含する。

さらなる態様では、本発明は、ヒトのような温血動物における癌の処置のための方法を提供し、この方法は、上記のような式Ｉの化合物またはその塩もしくは溶媒和物、上記のような還元性プロドラッグ、あるいは上記のような式ＩＩＩの化合物またはその塩もしくは溶媒和物の有効量をこの動物に対して投与する工程を包含する。

本発明は、上記のように広範であるが、本発明は、それに限定されるものではなく、また以下の詳細な説明が実施例を提供している実施形態を包含する。

本発明はここで、添付の図面を参照してさらに詳細に記載される。

図１はキナーゼインヒビター１、２、３によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図２はキナーゼインヒビター４、５によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図３はキナーゼインヒビター７、８によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３−４）。図４はキナーゼインヒビター５、６、９によるｑ３ｄ×４処置後のＡ４３１腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図５はプロドラッグ１２、１３、１５によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図６はプロドラッグ１６、１７によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図７はプロドラッグ１９、２０によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３−４）。図８はプロドラッグ１７、１８、２１によるｑ３ｄ×４処置後のＡ４３１腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図９はプロドラッグ１５およびその同族のキナーゼインヒビター３によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図１０はプロドラッグ１７およびその同族のキナーゼインヒビター５によるｑ３ｄ×４処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値（Ａ）および平均値（Ｂ）を示す（ｎ＝３）。図１１はプロドラッグ１７によるｑ３ｄ×４、ｑ５ｄ×４およびｑ７ｄ×４投与スケジュールでの処置後のＨ１９７５腫瘍増殖の中央値を示す（ｎ＝３）。図１２はある範囲の濃度の化合物３での１時間の処置後のインタクトなＡ４３１細胞におけるｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）自己リン酸化およびｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）リン酸化の阻害を示す。図１３はある範囲の濃度の化合物５での１時間の処置後のインタクトなＡ４３１細胞におけるｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）自己リン酸化およびｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）リン酸化の阻害を示す。図１４はある範囲の濃度の化合物６での１時間の処置後のインタクトなＡ４３１細胞におけるｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）自己リン酸化およびｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）リン酸化の阻害を示す。図１５はある範囲の濃度のプロドラッグ１５での１時間の処置後のインタクトなＡ４３１細胞におけるｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）自己リン酸化およびｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）リン酸化の阻害を示す。図１６はある範囲の濃度のプロドラッグ１５および化合物３での１時間の処置後のインタクトなＡ４３１細胞におけるｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）自己リン酸化の相対的な（βアクチン補正した）阻害のバンドデンシトメトリー分析のグラフプロットである。

発明の詳細な説明
定義
本明細書において用いる場合、「アルキル」および「アルキニル」という用語は、別段特定しない限り、直鎖および分岐鎖の基、ならびに未置換基および置換基を包含する。任意の置換基としては、限定するものではないが、ハロゲン、Ｃ_１−Ｃ_６アルコキシ、ＣＮ、ＯＨ、ＮＨ_２、ＮＯ_２、ＮＨ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、Ｎ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）_２、ＣＯＮＨ_２、ＣＯ（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）、ＳＯ_２ＮＨ_２およびＳＯ_２（Ｃ_１−Ｃ_６アルキル）を挙げることができる。

「抗癌効果」としては限定するものではないが、抗腫瘍効果、奏功率、疾患増悪時間、および生存率が挙げられる。「抗腫瘍」効果としては、限定するものではないが、腫瘍増殖の阻害、腫瘍増殖遅延、腫瘍の退行、腫瘍の退縮、処置の中止に対して腫瘍が再増殖する時間の延長、および疾患増悪の減速が挙げられる。

「有効量」とは、癌を処置するために被験体に投与された場合、その癌にこのような処置を発揮するのに十分な化合物の量を意味する。「有効量」とは、処置されるべき癌、投与される化合物、処置される癌の重篤度、被験体の年齢および相対的健康度、投与の経路および形態、その処置が単独療法かまたは併用療法か、担当臨床医の判断、およびその他の要因に依存して変化する。

「薬学的に許容される」とは、それが薬学的組成物を調製するのに有用であって、その組成物が一般に安全で、非毒性でかつ、生物学的に望ましくないこともなく、その他でも望ましくないこともないことを意味し、かつ獣医学の用途およびヒトの薬学的な用途について受容可能であることを包含する。

ある化合物の「薬学的に許容される塩」とは、本明細書に定義されるような薬学的に許容される塩であって、親の化合物の所望の薬理学的活性を保有する塩を意味する。

このような塩としては以下が挙げられる：
無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などと形成されるか；または、有機酸、例えば、酢酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸などと形成される、酸付加塩；あるいは
親化合物に存在する酸性プロトンが、金属イオン、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオンもしくはアルミニウムイオンで置換されるか；または有機塩基もしくは無機塩基と結合する場合に形成される塩。許容される有機塩基としては、エタノールアミン、ジエタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、トリエタノールアミンなどが挙げられる。許容される無機の塩基としては、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウムおよび水酸化ナトリウムが挙げられる。

「温血動物」とは、限定するものではないが、ヒト、非ヒト霊長類、例えば、チンパンジーおよび他の類人猿およびサル種、家畜、例えば、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、およびブタ；ペット、例えば、ウサギ、イヌおよびネコ；実験用動物、例としては、げっ歯類、例えば、ラット、マウスおよびモルモットなどを含む哺乳動物の分類の任意のメンバーを意味する。

本発明の化合物
上記で定義されるとおり、広義では、本発明は、キナーゼインヒビターとして有用な化合物に関する。このような化合物は治療に適用を有する。

一実施形態では、本発明の化合物は、式Ｉの４−アニリノピリド［３，４−ｄ］ピリミジン不可逆性のｅｒｂＢ１、２、４キナーゼインヒビターである。

別の実施形態では、この化合物は、式Ｉのキナーゼインヒビターおよび還元性トリガーを含む。この還元性トリガーは、還元された場合、断片化する。好ましくはこのトリガーのフラグメンテーションは、一電子還元レベルで生じ、かつ酸素の存在によって効果的に抑制され、それによって低酸素環境における選択的活性化が得られる。酸素によるこの抑制は、酸素による一電子ラジカルの再酸化を通じて、またはプロドラッグ還元に必要な還元性中間体の酸化によって生じ得る。後者は、例えば、水和電子などの放射線誘発性還元性ラジカルの酸素によるスカベンジング、またはリダクターゼ酵素の触媒回路における還元性中間体の酸化を包含する。トリガーを還元するために必要な還元等価物は、酵素、放射線誘発性ラジカルまたは化学的還元剤によって提供され得る。

好ましい形態では、トリガーは、還元的に活性化された芳香族ニトロ複素環または芳香族ニトロ炭素環トリガーであって、四級窒素が形成されるように式Ｉの化合物の四級化可能窒素に対して直接連結される。しかし、トリガーは、上記の式ＩＩの構造を有することが特に好ましい。

このような実施形態では、この化合物は、プロドラッグとして作用し、トリガーの還元は、キナーゼインヒビターを遊離する。本発明の化合物のプロドラッグ型は、上記のような式ＩＩＩのものであることが現在、最も好ましい。

本発明の化合物の治療適用
本発明の化合物は、キナーゼの活性の阻害が所望される任意の治療アプローチで適用を有する。従って、本発明は、疾患、例えば、哺乳動物における過剰増殖性、炎症性および血管形成の障害、ならびに骨粗鬆症を、本発明の化合物または本発明の１つ以上の化合物を含む薬学的組成物を投与することによって処置および予防するための方法に関する。

本発明は特に、癌および他の過剰増殖性の障害を、単独療法として単独であろうと、または第二の抗増殖剤と組み合わせようと、本発明の化合物または本発明の１つ以上の化合物を含む薬学的組成物を投与することによって、処置または予防する方法に関する。

投与され得る任意の抗増殖性剤としては限定するものではないが、本明細書に援用される、ＭｅｒｃｋＩｎｄｅｘ（２００６）の第１４版の癌化学療法薬物レジメンに列挙される化合物、例えば、アスパラギナーゼ、ブレオマイシン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、コラスパーゼ、シクロホスファミド、シタラビン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、エピルビシン、エトポシド、５−フロロウラシル、ヘキサメチルメラミン、ヒドロキシウレア、イフォスファミド、イリノテカン、ロイコボリン、ロムスチン、メクロレサミン、６−メルカプトプリン、メスナ、メトトレキセート、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン、プレドニソロン、プレドニソン、プロカルバジン、ラノキシフェン、ストレプトゾシン、タモキシフェン、チオグアニン、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチンおよびビンデシンが挙げられる。

追加の抗増殖性剤としては、平行な経路を調節する他の分子標的剤、例えば、ＭＥＫ１／２インヒビター類、ＡＫＴインヒビター類およびｍＴＯＲインヒビター類、モノクローナル抗体類、オキサプラチン、ゲムシタビン、ゲフィニチブ、タキソテール、ａｒａＡ、ａｒａＣ、ハーセプチン、ＢＣＮＵ、ＣＣＮＵ、ＤＴＩＣ、およびアクチノマイシンＤが挙げられる。なおさらなる抗増殖性剤としては限定するものではないが、本明細書に援用される、ＧｏｏｄｍａｎａｎｄＧｉｌｍａｎ’ｓＴｈｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉａｌＢａｓｉｓｏｆＴｈｅｒａｐｅuｔｉcｓ（第１１版），編集Ｍｏｌｉｎｏｆｆら，出版ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，１２２５〜１２８７頁（２００６）の新生物疾患の処置に用いられることが公知の化合物、例えば、アミノグルテチミド、Ｌ−アスパラギナーゼ、アザチオプリン、５−アザシチジン、クラドリビン、ブスルファン、ジエチルスチルベストロール、２’，２’−ジフロロデオキシシチジン、ドセタキセル、エリスロヒドロキシノニルアデニン、エチニルエストラジオール、５−フロロデオキシウリジン、５−フルオロデオキシウリジンモノリン酸、リン酸フルダラビン、フルオキシメステロン、フルタミド、ヒドロキシプロゲステロンカプロエート、イダルビシン、インターフェロン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲステロールアセテート、メルファラン、ミトタン、パクリタクセル、ペントスタチン、Ｎ−ホスフォノアセチル−Ｌ−アスパルテート（ＰＡＬＡ）、プリカマイシン、セムスチン、テニポシド、テストステロンプロピオネート、チオテパ、トリメチルメラミン、ウリジン、およびビノレルビンが挙げられる。

本明細書において用いられる癌および過剰増殖性障害としては限定するものではないが、固形腫瘍、例えば、乳房、呼吸管、脳、生殖器、消化管、泌尿管、眼、肝臓、皮膚、頭頸部、甲状腺、上皮小体の癌およびそれらの遠隔転移が挙げられる。これらの障害としては、リンパ腫、肉腫および白血病も挙げられる。

乳癌の例としては、限定するものではないが、浸襲性腺管癌、浸襲性小葉癌、非浸潤性乳管癌および非浸潤性小葉癌が挙げられる。

呼吸器官の癌の例としては、限定するものではないが、小細胞および非小細胞の肺癌、ならびに気管支腺腫および胸膜肺芽腫が挙げられる。

脳腫瘍の例としては、限定するものではないが、脳幹および視床下部の膠腫（グリオーマ）、小脳および大脳の星細胞腫、髄芽腫、上衣細胞腫、ならびに神経外胚葉性腫瘍および松果体腫瘍が挙げられる。

男性生殖器の腫瘍としては、限定するものではないが、前立腺および精巣の癌が挙げられる。

女性生殖器の腫瘍としては、限定するものではないが、子宮内膜、頸管、卵巣、膣、および外陰部の癌、ならびに子宮肉腫が挙げられる。

消化器官の腫瘍としては、限定するものではないが、肛門、結腸、結腸直腸、食道、胆のう、胃、膵臓、直腸、小腸、および唾液腺の癌が挙げられる。

泌尿器の腫瘍としては、限定するものではないが、膀胱、陰茎、腎臓、腎孟、尿管および尿道の癌が挙げられる。

眼の癌としては、限定するものではないが、眼内メラノーマおよび網膜芽腫が挙げられる。

肝臓癌の例としては、限定するものではないが、肝細胞の癌（線維層板型変種ありなしの肝細胞癌）、胆管癌（肝内胆管癌）、および混合肝細胞胆管癌が挙げられる。

皮膚癌としては、限定するものではないが、扁平上皮細胞癌、カポジ肉腫、悪性黒色種、メルケル皮膚癌、および非黒色腫皮膚癌が挙げられる。

頭頸部癌としては、限定するものではないが、咽頭部／下咽頭／鼻咽頭／口腔咽頭の癌、ならびに唇および口腔の癌が挙げられる。リンパ腫としては、限定するものではないが、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ホジキン病、および中枢神経系のリンパ腫が挙げられる。

肉腫としては、限定するものではないが、軟部組織の肉腫、骨肉腫、悪性線維性組織球腫、リンパ肉腫、および横紋筋肉腫が挙げられる。白血病としては、限定するものではないが、急性骨髄白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、慢性骨髄性白血病、およびヘアリー細胞白血病が挙げられる。

これらの障害は、ヒトにおいて十分特徴付けられているが、また、他の温血動物において同様な病因をもって存在し、本発明の薬学的組成物によって処置することができる。

本発明の化合物を投与することによって処置され得るヒトまたは他の温血動物の状態としては、腫瘍増殖、網膜症、例としては糖尿病性網膜症、虚血性網膜−静脈閉塞、未熟児網膜症および加齢性黄斑変性症；乾癬、または表皮下水疱形成に関連する水疱性障害、例としては、水疱性類天疱瘡、多形性紅斑、または疱疹状皮膚炎、関節リウマチ、変形性関節症、敗血症性関節炎、腫瘍転移、歯周病、角膜潰瘍、タンパク尿、アテローム斑由来の冠状動脈血栓、大動脈瘤、栄養障害型表皮水疱症、外傷性関節損傷後の変性軟骨損失、ＭＭＰ活性によって媒介される骨減少症、顎関節疾患または神経系の脱髄性疾患が挙げられる。

治療の特定の方法は、選択された投与経路を使用し、この投与経路は、種々の要因（その全てが慣用的に治療剤を投与する場合に考えられる）に依存するということが当業者によって理解される。処置の最適のコース、すなわち、処置の方式および既定の日数間に与えられる本発明の化合物の１日投薬回数は、従来の処置試験を用いて当業者によって究明できることが当業者によってさらに理解される。

治療の投薬量は、１日あたり１ｍｇ〜３０００ｍｇの範囲である可能性が高い。任意の特定の患者について選択される特定の投与量レベルは、種々の要因、例としては、使用される特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康度、性別、食餌、投与時間、投与経路、および排出速度、薬物の併用、および治療背景にある病態の重篤度に依存する。

本発明の化合物の薬学的組成物
本発明はまた、本発明の化合物および薬学的に許容される担体を含む薬学的組成物を包含する。

この化合物は、経口的に、局所的に、非経口的に、吸入もしくは噴霧によって、または直腸的に、投与単位製剤で投与され得る。「注射による投与」という用語は、静脈内、筋肉内、皮下および非経口の注射、ならびに注入技術の使用を包含する。１つ以上の化合物が、１つ以上の非毒性の薬学的に許容される担体および必要に応じて他の活性成分と会合して存在してもよい。

経口投与を意図した組成物は、薬学的組成物の製造に関して当該分野で公知の任意の適切な方法に従って調製され得る。このような組成物は、口当たりのよい調製物を提供するために、希釈剤、甘味料、芳香剤、着色料および防腐剤からなる群より選択される１つ以上の剤を含んでもよい。錠剤は、錠剤の製造に適切である、非毒性の薬学的に許容される賦形剤と混合して活性成分を含む。これらの賦形剤は、例えば、不活性の希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム；顆粒化剤および崩壊剤、例えば、コーンスターチまたはアルギン酸；ならびに結合剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸または滑石であってもよい。錠剤は、コーティングされなくてもよいし、またはそれらを、公知の技術によってコーティングして、胃腸管における崩壊および吸収を遅延させ、それによってより長期間にわたって持続的な作用を得てもよい。例えば、時間遅延材料、例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルを使用してもよい。これらの化合物はまた、固体中で、急速放出型で調製されてもよい。

経口使用のための製剤はまた、硬ゼラチンカプセル（ここでは、活性成分が不活性な固体希釈剤、例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、またはカオリンと混合される）として存在してもよく、または軟ゼラチンカプセル（ここでは、活性成分が水またはオイル媒体、例えば、ピーナツ油、流動パラフィンまたはオリーブ油と混合される）として存在してもよい。

水性懸濁液は、活性な材料を、水性懸濁液の製造に適切な賦形剤と混合して含む。このような賦形剤は、懸濁剤、例えば、カルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカント・ガムおよびアカシア・ガムであり；分散剤または湿潤剤は、天然に存在するホスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えばヘプタデカエチレン・オキシセタノール、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトール由来の部分エステルとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート、またはエチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトール由来の部分エステルとの縮合生成物、例えばポリエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。水性懸濁液はまた、１つ以上の保存剤、例えばエチルまたはｎ−プロピルｐ−ヒドロキシベンゾエート、１つ以上の着色剤、１つ以上の香味剤、および１つ以上の甘味剤、例えばスクロースまたはサッカリンを含んでもよい。

水の添加による水性懸濁液の調製に適切な分散性の粉末および顆粒は、分散剤または湿潤剤、懸濁剤および１つ以上の保存剤と混合した活性成分を提供する。適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤は、既に上記されたものによって例示される。さらなる賦形剤、例えば、甘味剤、香味剤および着色剤も存在してもよい。

この化合物はまた、非水性の液体製剤の形態、例えば、油状懸濁液であってもよく、この懸濁液は、植物油、例えばラッカセイ油、オリーブオイル、ゴマ油もしくはピーナツ油中で、または鉱油、例えば流動パラフィン中で活性成分を懸濁することによって処方されてもよい。油性の懸濁物は、増粘剤、例えば、蜜ろう、固形パラフィンまたはセチルアルコールを含んでもよい。上記のような甘味剤、および芳香剤を添加して、口当たりのよい経口調製物を得てもよい。これらの組成物は、アスコルビン酸などの抗酸化剤の添加によって保存されてもよい。

本発明の薬学的組成物はまた、水中油型エマルジョンの形態であってもよい。この油相は、植物油、例えば、オリーブ油もしくはラッカセイ油、または鉱油、例えば、流動パラフィンまたはこれらの混合物であってもよい。適切な乳化剤は、天然に存在するガム、例えば、アカシアゴムまたはトラガカントゴム、天然に存在するホスファチド（リン脂質）、例えば、大豆、レシチン、ならびに脂肪酸およびヘキシトール無水物由来のエステルまたは部分エステル、例えば、モノオレイン酸ソルビタン、およびこの部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであってもよい。このエマルジョンはまた、甘味剤および香味剤を含んでもよい。

シロップおよびエリキシルは、甘味剤、例えば、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトールまたはスクロースとともに処方されてもよい。このような製剤はまた、粘滑剤、保存剤および香味剤および着色剤を含んでもよい。

この化合物はまた、薬物の直腸投与のための坐剤の形態で投与されてもよい。これらの組成物は、通常温度で固体であるが、直腸温度では液体であり、従って直腸において融解してその薬物を遊離する適切な非刺激性の賦形剤とこの薬物とを混合することによって調製されてもよい。このような物質としてはココアバターおよびポリエチレングリコールが挙げられる。

本発明の四級窒素塩プロドラッグの調製
本発明のプロドラッグ化合物は、好ましくは、上記のような式ＩＩの、さらに好ましくは式ＩＩａのニトロ複素環還元性トリガーである還元性トリガーに連結されたエフェクター部分を備える。

このエフェクター部分は、式Ｉの４−アニリノピリド［３，４−ｄ］ピリミジン不可逆性ｅｒｂＢ１，２，４キナーゼインヒビターである。

式Ｉの４−アニリノピリド［３，４−ｄ］ピリミジン不可逆性ｅｒｂＢ１，２，４キナーゼインヒビターは、６−位にアミドＭｉｃｈａｅｌアクセプターを保有し、ここでこのＭｉｃｈａｅｌアクセプターは、下に示されるように、三級ジメチルアミン基で終わるメチレン基によってβ炭素で置換される二重結合を特徴とする。

式ＩＶａ
式ＩＶａに示されないエフェクター部分の残りは、式Ｉに規定されるような二環式芳香族環構造を有することが理解される。

好ましいプロドラッグ化合物は、上記のような式ＩＩＩの化合物である。一般論として、式ＩＩＩの好ましいプロドラッグ化合物は、ニトロ複素環式還元性トリガー部分を有する脂肪族第三級ジメチルアミンエフェクター部分を四級化することによって調製され得る。このような方法は、下にさらに詳細に記載される。

４−アニリノピリド［３，４−ｄ］ピリミジン不可逆性ｅｒｂＢ１，２，４キナーゼインヒビターの調製
中央のインヒビターの足場が４−アニリノピリド［３，４−ｄ］ピリミジンであり、かつ６−位がアミドＭｉｃｈａｅｌアクセプターで置換される、上記のような式Ｉの化合物に関連するエフェクター化合物は、アミドＭｉｃｈａｅｌアクセプターが例えば、未置換である（Ｓｍａｉｌｌら、ＪＭｅｄＣｈｅｍ，１９９９，４２，１８０３〜１８１５）、Ｎ位、α位またはβ位において、ある範囲の基で、上記のようにジメチルアミノメチレンを除いて、置換される（Ｓｍａｉｌｌら、ＪＭｅｄＣｈｅｍ，２００１，４４，４２９〜４４０）場合、およびＭｉｃｈａｅｌアクセプターが、β位で置換された三重結合を含む（Ｋｌｕｔｃｈｋｏら、ＪＭｅｄＣｈｅｍ，２００６，４９，１４７５−１４８５；米国特許第６，６０２，８６３号）場合、当該分野で記載される方法によって調製され得る。本発明の式Ｉの化合物は、類似の方法を用いて調製され得る。

下のスキーム１は、Ｒｅｗｃａｓｔｌｅら，ＪＣｈｅｍＳｏｃ，ＰｅｒｋｉｎｓＴｒａｎｓ１，１９９６，２２２１−２２２６およびＳｏｙｋａら、米国特許出願公開第２００５／００８５４９５号（Ａ１）の方法を用いる、公知の中間体である６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジノン（２００）（Ｒｅｗｃａｓｔｌｅら、ＪＣｈｅｍＳｏｃ，ＰｅｒｋｉｎｓＴｒａｎｓ１，１９９６，２２２１−２２２６）からの、本発明の４−アニリノピリド［３，４−ｄ］ピリミジンエフェクター化合物の調製を図示する。

スキーム２は、本発明の特異的なエフェクター化合物の調製を図示する。塩化チオニルは、６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジノン（２００）から４−クロロ−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジンへの変換を仲介し、続いて、適切なアニリンとの反応によって、４−アニリノ−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン類が得られた（２０１−２０９）。次いで、４−メトキシベンジルアミンでのフッ素置換によって、ベンジルアミン類（２１０−２１８）が得られ、これをトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）と反応させて、アミン類（２１９−２２７）を得た。２−（ジエトキシホスホリル）酢酸とのＣＤＩ−促進のアミドカップリングによって、ホスホン酸塩類（２２８−２３６）を得た。次いで、これらと２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミンのインサイチュでの加水分解に由来するアルデヒドとのホーナー・ワズワース・エモンス（Ｈｏｒｎｅｒ−Ｗａｄｓｗｏｒｔｈ−Ｅｍｍｏｎｓ）カップリングによって、典型的なエフェクター化合物１−９が得られた。

プロドラッグの調製
本発明のプロドラッグ化合物は、一般的に言えば、式Ｉの脂肪族第三級アミン保有キナーゼインヒビターと適切なニトロ複素環式またはニトロ炭素環式のα−メチルハライド／メシラート／トシラートとの反応によって、適切な溶媒中で、かつ適切な長さの時間（例えば、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン中で約１５時間）反応させて、キナーゼインヒビターの窒素に対して直接または間接的に連結されたニトロ複素環式またはニトロ炭素環式還元性トリガー部分を含む四級窒素塩を生成してもよい。

本発明のプロドラッグにおける使用に適切な好ましい還元性トリガー部分は、下に示す式ＩＩのものである：

式中、Ｒ_４およびＲ_５は上記のとおりである。

特に好ましい還元性トリガー部分は、下に示す式ＩＩａ〜ＩＩｇのものである：

式ＩＩａのα−メチルハライド類は、前に記載のとおり調製され得る（臭化物；Ｓｔｒｉｂｂｌｉｎｇら、ＰＣＴ国際特許公開ＷＯ２００８／０３９０８７）（塩化物；Ｔｅｒｃｅｌら、ＪＭｅｄＣｈｅｍ，２００１，４４，３５１１−３５２２）。

下のスキーム３は、市販の出発材料から、α−メチル臭化物２３９への２つの別の方法を図示する。

下のスキーム４は、市販の出発材料から、α−メチル臭化物２４４への経路を図示する。

下のスキーム５は、１，５−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２３８）からα−メチル臭化物２５０への経路を図示する（スキーム３）。

下のスキーム６は、市販のオキサゾール（２５１）からα−メチル臭化物２６１への経路を図示する。

下のスキーム７は、それぞれ、α−メチル臭化物２４６（スキーム５）および２−ブロモ−１，５−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２４５）（スキーム５）からα−メチル臭化物２６４への２つの別々の経路を図示する。下のスキーム７はまた、α−メチル臭化物２６４からα−メチル臭化物２６６への経路を図示する。

下のスキーム８は、（２−ブロモ−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチルアセテート（２４７）（スキーム５）からα−メチル臭化物２７０への経路を図示する。

下のスキーム９は、適切な溶媒中でかつ適切な長さの時間にわたって（例えば、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン中で、約１５時間）、式Ｉの脂肪族第三級アミン−保有キナーゼインヒビターと、適切なニトロ複素環式α−メチルハライド／メシラート／トシラート（式ＶＩＩＩ）とを反応させることによる式ＩＩＩの四級窒素塩化合物への経路を図示する。

下のスキーム１０は、本発明による式ＩＩＩの多数のプロドラッグ化合物の調製を図示する。４−アニリノピリド［３，４−ｄ］ピリミジンエフェクター化合物１−９（スキーム２）を、Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）中のα−メチル臭化物２３９（スキーム３）と室温で約１５時間反応させ、その後にアセトニトリルを添加して、四級アンモニウム塩類（１２、１３、１５−２１）を、微細な沈殿物として得て、これは濾過によって収集し、アセトニトリル、エチルアセテートおよびヘキサンで洗浄した。

下のスキーム１１は、本発明によるプロドラッグ化合物の調製を図示する。

下のスキーム１２〜１４は、Ｒ_５がＣ_１〜Ｃ_６アルキルである、アルキルトリガー臭化物類の調製を図示する。

当業者は、前述の説明を用いて、さらに苦労することなく、本発明を最大限まで利用し得ると考えられる。従って、以下の実施例は、単なる例示であって、決して本開示の残りを限定するものではないと解釈されるべきである。

実験
１．合成
１．１化学的合成
燃焼分析は、ＭｉｃｒｏｃｈｅｍｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＯｔａｇｏ，Ｄｕｎｅｄｉｎ，ＮＺ．によって行った。融点は、いずれかのＥｌｅｃｔｒｏｔｈｅｒｍａｌＭｏｄｅｌ９２００を用いて決定し、読み取ったとおりである。^１ＨＮＭＲスペクトルは、いずれかのＢｒｕｋｅｒＡｖａｎｃｅ−４００分光計で測定して、Ｍｅ_４Ｓｉに対して参照する。高解像度質量スペクトルは、ＶａｒｉａｎＶＧ−７０ＳＥ分光計で、名目上５０００解像度で記録した。質量分析法は、ＴｈｅｒｍｏＦｉｎｎｉｇａｎＭＳＱ単一四重極質量分析計で行った。質量検出は、ＡＰＣＩ源で、同時の陽性および陰性のイオン獲得を用いて行った。他に示さない限り、化合物は、フラッシュカラムクロマトグラフィーによって、シリカゲル６０支持体（Ｓｃｈａｒｌａｕ，２３０−４００メッシュＡＳＴＭ）によって、示した溶離剤を用いて精製した。

１．１．１キナーゼインヒビターエフェクターの合成
１．１．１．１（２Ｅ）−Ｎ−（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（１）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．０ｇ、６．０６ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で４０分間攪拌して、均質な混合物を得た。これを、減圧下、４０℃（浴の温度）でエバポレートして、淡褐色の固体を得た。この固体に、３−クロロ−４−（３−クロロベンジルオキシ）アニリン（１．７９ｇ、６．６７ｍｍｏｌ）と乾燥ＤＭＡ（１０ｍＬ）との混合物を添加した。３−クロロ−４−（３−クロロベンジルオキシ）アニリンの残渣を、さらにＤＭＡ（２×２ｍＬ）で洗浄した。その反応混合物を室温で１時間３０分攪拌した。これを酢酸エチル（４００ｍＬ）と水（４００ｍＬ）との間で分配した。酢酸エチルの層を分離して、さらに水（２×２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥して（ＭｇＳＯ_４）、エバポレートして、Ｎ−（３−クロロ−４−（３−クロロベンジルオキシ）フェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０１）の粗生成物を得た。シリカゲルでのクロマトグラフィー（ジクロロメタン／ＭｅＯＨ＝２５：１）によって、純粋な２０１（２．５２ｇ、１００％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点１９６−１９８℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.03 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.21 (s, 1H), 8.07 (d, J=2.5Hz, 1H), 7.75 (dd, J=9.0, 2.5Hz, 1H), 7.57-7.54 (m, 1H), 7.49-7.39 (m, 3H), 7.31 (d, J=9.0Hz, 1H). Anal. Calcd for C₂₀H₁₃Cl₂FN₄O: C, 57.85; H, 3.16; N, 13.49. Found C, 57.60; H, 3.45; N, 13.32.
化合物２０１（２．６０ｇ、６．２７ｍｍｏｌ）および４−メトキシベンジルアミン（８．２４ｍＬ、６２．７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＳＯ（１５ｍＬ）中での混合物を、窒素雰囲気下で７１〜７２℃（浴の温度）で９１時間攪拌した。これを、酢酸エチル（５００ｍＬ）と水（３００ｍＬ）との間で分配した。酢酸エチルの層を分離して、さらに水で洗浄し（３×３００ｍＬ）；乾燥して（ＭｇＳＯ_４）、エバポレートして、Ｎ^４−（３−クロロ−４−（３−クロロベンジルオキシ）フェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１０）の粗生成物を得た。シリカゲルでのクロマトグラフィー（酢酸エチル／石油エーテル＝１：１）によって、純粋な２１０（２．０２ｇ、６１％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点１２０−１２２℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.59 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.99 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.57-7.53 (m, 1H), 7.48-7.38 (m, 3H), 7.36-7.19 (m, 4H), 7.15 (br s, 1H), 6.91-6.85 (m, 2H), 5.25 (s, 1H), 4.48 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₈H₂₃Cl₂N₅O₂: C, 63.16; H, 4.35; N, 13.15. Found C, 62.96; H, 4.63; N, 13.12.
化合物２１０（１．４６ｇ、２．７４ｍｍｏｌ）と乾燥ＤＣＭ（２７ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（２．１ｍＬ、２７．４ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（０．６０ｍＬ、５．４８ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物を、さらに室温で９１時間攪拌した。これを石油エーテル（３００ｍＬ）中に注ぎ、室温で約３０分間攪拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程をさらに石油エーテル（３００ｍＬ）を用いて繰り返した。後に残った残渣をアセトン−水＝１：１（約１００ｍＬ）の混合された溶媒中に溶解して、５ＭのＮＨ_３（１００ｍＬ）と室温で１時間攪拌した。その固体を濾過して、アセトン−水＝１：４（５×２０ｍＬ）、石油エーテル−酢酸エチル＝３：１（５×２０ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥してＮ^４−（３−クロロ−４−（３−クロロベンジルオキシ）フェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１９）（１．１０ｇ、９７％）、融点２５１−２５４℃（分解）を得た；¹H NMR δ[(CD₃)₂SO] 9.70 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.73 (br d, J=8.0 Hz, 1H), 7.57-7.53 (m, 1H), 7.48-7.39(m, 3H), 7.26 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.12 (br s, 1H), 7.65 (br s, 2H), 5.24 (s, 2H). Anal. Calcd for C₂₀H₁₅Cl₂ N₅O: C, 58.27; H, 3.67; N, 16.99. Found C, 58.33; H, 3.57; N, 17.2.
ＣＤＩ（０．５３ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（２ｍＬ）との、室温でかつ窒素雰囲気下の撹拌混合物に、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（０．６４ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物をさらに４０℃（浴）で１５分間撹拌した（そこからガスの発生が停止した）。化合物２１９（１．０３ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（２．５ｍＬ）およびＤＭＡ（２．５ｍＬ）の混合溶媒中の溶液を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物は、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝２０：１）によってモニターして、５０分後わずか約６０％の反応しか生じなかったことを確認した。従って、別のバッチの試薬を、ＣＤＩ［０．５３ｇ、３．２５ｍｍｏｌ；乾燥ＴＨＦ（２ｍＬ）］および２−（ジエトキシホスホリル）酢酸［０．６４ｇ、３．２５ｍｍｏｌ）；ＴＨＦ（１ｍＬ）］から調製して、反応物に添加した。これをさらに３時間４０℃で撹拌した。その反応混合物を、水（３００ｍＬ）の中に注いで、石油エーテル（４００ｍＬ）と室温で１２時間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×２０ｍＬ）で洗浄して、乾燥してジエチル２−（４−（３−クロロ−４−（３−クロロベンジルオキシ）フェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２２８）（１．３７ｇ、９３％）を得た；融点１０６−１０９℃；¹H NMR δ (CDCl₃) 9.41 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.54 (s, 1 H), 7.91 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.54 (dd, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.40-7.29 (m, 3H), 6.99 (d, J=8.9 Hz, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.30-4.18 (m, 4H), 3.15 (d, J=21.1 Hz, 2H), 1.39 (t, J=7.0 Hz, 6H). δ [(CD₃)₂SO]: 10.82 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 8.99 (poorly re
solved d, J=0.6 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.58 (s, 1 H), 7.95 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.71 (dd, J=9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.56 (br s, 1H), 7.50-7.38 (m, 3H), 7.27 (d, J=9.0 Hz, 1H), 5.26 (s, 2H), 4.15-4.04 (m, 4H), 3.34 (d, partially obscured by water peak, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₂₆H₂₆Cl₂N₅O₅P.0.5H₂O: C, 52.10; H, 4.54; N, 11.68%. Found C, 52.09; H, 4.60; N, 11.70%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（１．１６ｇ、７．２０ｍｍｏｌ）および水（１．２ｍＬ）の室温でかつ窒素雰囲気下の撹拌混合物に、３７％のＨＣｌ水溶液（１．２１ｍＬ、１４．４ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を４０℃（浴）で２４時間撹拌した。これを０℃（浴）まで冷却した。これを溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（１．０３ｇ、１８．４ｍｍｏｌ）を、水（５．５ｍＬ）に、窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。室温でかつ窒素雰囲気下の、化合物２２８（１．７０ｇ、２．８８ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（５．５ｍＬ）の撹拌された不均質な混合物に、最少量のＤＭＡ（３ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（１２２ｍｇ、２．８８ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。この冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。ついで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を、窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝２０：１）によってモニターした。２５分後、さらにＫＯＨ（ｓ）（０．３４ｇ、６．１３ｍｍｏｌ）を添加して、さらに０℃でもう３５分間撹拌した。これを、水（２００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、室温で１５分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集した；水（４×２０ｍＬ）で洗浄して；シリカゲル／ＫＯＨ上で、減圧下で乾燥して、（２Ｅ）−Ｎ−（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（１）（１．２８ｇ、８５％）を、淡黄色固体、融点１９５−１９８℃として得た；ＨＰＬＣ：９６．８％純粋；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.88 (s, 1H), 10.19 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.97 (s, 1 H), 8.58 (s, 1 H), 7.99 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.73 (dd, J=9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.56 (br s, 1H), 7.49-7.38 (m, 3H), 7.27 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.87 (dt, J=15.4, 6.0 Hz, 1H), 6.51 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 5.26 (s, 2H), 3.09 (br d, J=6.0 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₂₆H₂₄Cl₂N₆O₂.0.3H₂O: C, 59.05; H, 4.69; N, 15.89. Found C, 58.96; H, 4.62; N, 15.73.
１．１．１．２（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−２−ブテンアミド（２）（スキーム２）の調製
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．６５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（３０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で５時間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、減圧下、４５℃（浴の温度）でエバポレートして、淡褐色の固体を得た。この固体に、１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミン（ＰＣＴ国際出願公開第２００５０５８２４５号，２００５年６月３０日）（２．６５ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＡ（１５ｍＬ）中の溶液を添加した。１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−アミンの残渣を、さらにＤＭＡ（２×２ｍＬ）で洗い流した。その反応混合物を室温で６５時間撹拌した。これを、水（２００ｍＬ）の中に注いだ。ｐＨを、室温でＮａ_２ＣＯ_３の水溶液を用いて約９まで調節した。石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、室温で２時間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（２００ｍＬ）を用いてさらに１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、水（５×２５ｍＬ）で洗浄した。これを、アセトン（８０ｍＬ）中に懸濁して、室温で２０分間撹拌した。水（１６０ｍＬ）を添加して、さらに１．５時間撹拌した。その固体を濾過して、乾燥し、最終的にシリカカラム（ＭｅＯＨ／ジクロロメタン：勾配は０−１０％）によって精製して、６−フルオロ−Ｎ−（１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０２）（３．１１ｇ、８０％）を、薄茶色の固体、融点２１８−２２１℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.15 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.30 (d, J=1.3Hz, 1H), 8.28 (br s, 1H), 8.19 (poorly resolved d, J=0.7 Hz, 1H), 7.77 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.72 (dd, J=9.0, 1.8Hz, 1H), 7.42-7.32 (m, 1H), 7.15-7.01 (m, 3H), 5.71 (s, 2H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₄F₂N₆: C, 64.94; H, 3.63
; N, 21.64. Found C, 65.21; H, 3.71; N, 21.63.
化合物２０２（３．００ｇ、７．７３ｍｍｏｌ）および４−メトキシベンジルアミン（１０．２ｍＬ、７７．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＳＯ（１８ｍＬ）中の混合物を、窒素雰囲気下、６８−７０℃（浴の温度）で１６５時間撹拌した。次いで、この溶液を冷却して、石油エーテル（２００ｍＬ）を添加した。これを、室温で１５分間撹拌した。この層を、分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、さらに石油エーテル（２００ｍｌ）で繰り返した。水（２００ｍＬ）を添加して、その混合物を室温で４５分間撹拌した。その油状物を、沈殿させた。このように、この生成物を、酢酸エチル中に抽出して；乾燥して（ＭｇＳＯ_４）、溶媒を除去して褐色の油状物を得た。これを、シリカカラム（ＥｔＯＡｃ／石油エーテル：勾配は３０％〜純粋なＥｔＯＡｃ）によって精製して、純粋なＮ^４−（１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１１）（２．３８ｇ、６１％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点１９６−１９８℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.75 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.22 (poorly resolved d, J=1.3 Hz, 1H), 8.15 (d, J=0.7 Hz, 1H), 7.73 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J=9.0, 1.8 Hz, 1H), 7.40-7.31 (m, 3H), 7.24-7.17 (m, 2H), 7.13-7.01 (m, 3H), 6.92-6.84 (m, 2H), 5.70 (s, 2H) 4.49 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₉H₂₄FN₇O.1.5H2O: C, 65.40; H, 5.11; N, 18.41%. Found C, 65.45; H, 5.07; N, 18.58%.
化合物２１１（２．２７ｇ、４．４８ｍｍｏｌ）およびＤＣＭ（４５ｍｌ）の撹拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（３．４５ｍｌ、４４．８ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（０．９９ｍｌ、８．９６ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で５日間撹拌した。これを、石油エーテル（５００ｍｌ）中に注いで、室温で約２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程をさらに石油エーテル（３００ｍｌ）を用いて繰り返した。後に残された固体に、５ＭのＮＨ_３（８０ｍｌ）を０℃で添加して、室温で１５分間撹拌した。その固体を収集して、連続して水（６×１０ｍｌ）、石油エーテル−酢酸エチル＝３：１（３×２０ｍｌ）で洗浄し、乾燥してＮ^４−（１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２０）（１．６８ｇ、９７％）、融点２４１−２４４℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.72 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 8.27 (br s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.75-7.68 (m, 2H), 7.41-7.33 (m, 1H), 7.18 (s, 1H), 7.14-7.01 (m, 3H), 6.20 (s, 2H), 5.69 (s, 2H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₆FN₇.1.5H₂O: C, 61.16; H, 4.64; N, 23.77. Found C, 61.23; H, 4.71; N, 23.87.
ＣＤＩ（１．４１ｇ、８．７３ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）との撹拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（１．５６ｇ、７．９４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物をさらに４０℃（浴）で１５分間撹拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２０（１．５３ｇ、３．９７ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（４ｍＬ）とＤＭＡ（５ｍＬ）の混合溶媒中の溶液を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝１５：１）によってモニターした。一晩（１６時間）撹拌した後、約７０％の反応しか生じなかったことが確認された。従って、別のバッチの試薬を、ＣＤＩ［０．４２ｇ、２．６２ｍｍｏｌ；ＤＣＭ（３ｍＬ）］および２−（ジエトキシホスホリル）酢酸［０．４７ｇ、２．３８ｍｍｏｌ）；ＤＣＭ（２ｍＬ）］から調製し、反応物に添加した。これを、さらに４時間４０℃で撹拌した。その反応混合物を、水（２００ｍＬ）中に注いで、石油エーテル（４００ｍＬ）とともに室温で２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（２００ｍＬ）を用いて１回繰り返した。粘着性の固体を、吸引濾過によって収集し；水（５×３０ｍＬ）で洗浄した。これを、アセトン（５０ｍＬ）に溶解し、水（１００ｍＬ）および石油エーテル（２００ｍＬ）とともに室温で６８時間撹拌した。その固体を収集し、アセトン／水＝１：１０（５×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、ジエチル２−（４−（１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２２９）（１．９５ｇ、８７％）を得た；融点１１１−１１４℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.81 (s, 1H), 10.36 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.52 (s, 1 H), 8.16 (d, J=0.7 Hz, 1H), 8.13 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.73 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.68 (dd, J=9.0, 1.8 Hz, 1H), 7.42-7.32 (m, 1H), 7.15-7.00 (m, 3H), 5.70 (s, 2 H), 4.17-4.03 (m, 4H), 3.32 (d, partially obscured by water peak, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₂₇H₂₇FN₇O₄P.1.6H₂O: C, 54.75; H, 5.14; N, 16.55%. Found C, 54.60; H, 5.21; N, 16.60%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（１．３２ｇ、８．２０ｍｍｏｌ）および水（１．４ｍＬ）の撹拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％のＨＣｌ水溶液（１．３８ｍＬ、１６．４ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を４５℃（浴）で２５時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（２．３６ｇ、４２．０ｍｍｏｌ）を水（７ｍＬ）中に窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２２９（１．８５ｇ、３．２８ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（７ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（４ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（１３９ｍｇ、３．２８ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を継続して、窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターした。さらに３０分間撹拌した後、これを水（２００ｍＬ）中に注いだ。石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、室温で１５分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。より多くの石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（４×３０ｍＬ）で洗浄し；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）−２−ブテンアミド（２）（１．５５ｇ、９５％）を、淡黄色固体、融点２４０−２４３℃として得た；ＨＰＬＣ：９６．７％純粋；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.87 (s, 1H), 10.29 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.53 (s, 1 H), 8.18 (d, J=0.7 Hz, 1H), 8.16 (d, J=0.4 Hz, 1H), 7.73 (br d, J=9.0 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=9.0, 1.7 Hz, 1H), 7.41-7.33 (m, 1H), 7.14-7.02 (m, 3H), 6.87 (dt, J=15.4, 6.0 Hz, 1H), 6.52 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 5.70 (s, 2 H), 3.09 (dd, J=6.0, 1.1 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₂₇H₂₅FN₈O.1.2H₂O: C, 62.59; H, 5.33; N, 21.63%. Found C, 62.59; H, 5.25; N, 21.59%.
１．１．１．３（２Ｅ）−Ｎ−｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（３）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．６５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（３０ｍｌ）および触媒量のＤＭＦ（３滴）の不均質な混合物を、還流下で２時間３０分間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、４０℃（浴の温度）、減圧下でエバポレートして淡褐色の固体を得た。この固体に、３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）アニリン（２．５８ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＡ（１５ｍｌ）中の溶液を添加した。３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）アニリンの残渣を、さらにＤＭＡ（２ｘ５ｍｌ）で洗い流した。その反応混合物を室温で１８時間撹拌した。これを、水（３００ｍｌ）の中に注いだ。ｐＨを、室温でＮａ_２ＣＯ_３水溶液を用いて約９に調節した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（３００ｍＬ）を用いてもう１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、水（４×５０ｍＬ）で洗浄した。これを、熱い（約５０℃）アセトン（３００ｍＬ）とともに１５分間撹拌した。不溶性物質を、濾別して、その濾液を減圧下でエバポレートして、Ｎ−（３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０３）（３．１８ｇ、８３％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点２１６−２１９℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.04 (s, 1H), 8.94 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.63-8.57 (m, 1H), 8.22 (br s, 1H), 8.08 (d, J=2.6Hz, 1H), 7.85 (td, J=7.7, 1.8Hz, 1H), 7.75 (dd, J=9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.59 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 7.40-7.35 (m, 1H), 7.32 (d, J=9.0Hz, 1H), 5.31 (s, 2H). Anal. Calcd for C₁₉H₁₃ClFN₅O.0.9H₂O: C, 57.34; H, 3.75; N, 17.60. Found C, 57.46; H, 3.82; N,17.63.
化合物２０３（３．０７ｇ、８．０４ｍｍｏｌ）と４−メトキシベンジルアミン（１０．６ｍＬ、８０．４ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中の混合物を、７０℃（浴の温度）、窒素雰囲気下で１１８時間撹拌した。次いで、この混合物を冷却して、石油エーテル（２００ｍＬ）を添加した。これを、室温で１５分間撹拌した。この層を分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、さらに石油エーテル（２００ｍｌ）を用いて繰り返した。水（２００ｍＬ）を添加して、その混合物を室温で一晩（２２時間）攪拌した。これを、濾過して、固体を水（５×３０ｍＬ）を用い、次いで石油エーテル（３×３０ｍＬ）を用いて洗浄した。粘着性の黄色／オレンジ色の固体をアセトン（１５０ｍＬ）とともに室温で２０分間撹拌した。水（１５０ｍＬ）を緩徐に添加して、さらに室温で４５分間撹拌した。微細な固体を吸引濾過によって収集し、水／アセトン（１：１）（４×２０ｍＬ）、石油エーテル（３×２０ｍＬ）で洗浄し、真空中でシリカゲル／ＫＯＨ上で乾燥して、純粋なＮ^４−（３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１２）（３．０８ｇ、７７％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点１８２−１８４℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.60 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.64-8.56 (m, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.01 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.88 (td, J=7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.71 (dd, J=9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J=7.7 Hz), 7.42-7.19 (m, 5H), 7.15 (s, 1H), 6.93-6.84 (m, 2H), 5.25 (s, 2H), 4.48 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₇H₂₃ClN₆O₂.0.6acetone: C, 64.80; H, 5.02; N, 15.74%. Found C, 64.47; H, 5.00; N, 15.95%.
化合物２１２（２．８８ｇ、５．７７ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（６０ｍｌ）との攪拌された不均質な混合物にトリフルオロ酢酸（４．３８ｍｌ、５７．７ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（１．２７ｍｌ、１１．５ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で攪拌した。７２時間後、別のバッチのトリフルオロ酢酸（４．３８ｍｌ、５７．７ｍｍｏｌ）を添加して、さらに４９時間撹拌した。これを、石油エーテル（２５０ｍｌ）中に注ぎ、室温で約２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程をさらに石油エーテル（２５０ｍｌ）を用いて繰り返した。後に残された固体を、アセトン（１５０ｍＬ）中に溶解して、５ＭのＮＨ_３（１２５ｍｌ）を０℃で添加した。この混合物を、室温で３０分間撹拌した。その固体を収集して、連続してアセトン／水（１：４）（５×３０ｍｌ）、石油エーテル／酢酸エチル＝３：１（５×３０ｍｌ）で洗浄し、乾燥して、Ｎ^４−（３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２１）（１．９４ｇ、８９％）、融点２４７−２５０℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.64 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.62-8.56 (m, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.06 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.88 (td, J=7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.73 (dd, J=9.0, 2.6 Hz, 1H), 7.58 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 7.40-7.34 (m, 1H), 7.26 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.12 (s, 1H), 6.23 (s, 2H), 5.29 (s, 2H). Anal. Calcd for C₁₉H₁₅ClN₆O.1.5H₂O: C, 56.23; H, 4.47; N, 20.71%. Found C, 56.55; H, 4.45; N, 20.42%.
ＣＤＩ（２．２５ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（９ｍＬ）との攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（２．４３ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物を、４０℃（浴）で１５分間さらに攪拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２１（１．８８ｇ、４．９６ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）とＤＭＡ（１６ｍＬ）との混合溶媒中の混合物を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝１５：１）によってモニターした。１７時間攪拌した後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注ぎ、石油エーテル（３００ｍＬ）とともに室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（３００ｍＬ）を用いてもう１回繰り返した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×２０ｍＬ）で洗浄して、乾燥してジエチル２−（４−（３−クロロ−４−（ピリジン−２−イルメトキシ）フェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２３０）（２．５６ｇ、９３％）を得た；融点１１３−１１６℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.82 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.63-8.56 (m, 2H), 7.96 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.88 (td, J=7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=8.9, 2.6 Hz, 1H), 7.59 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 7.41-7.34 (m, 1H), 7.28 (d, J=9.0 Hz, 3H), 4.16-4.03 (m, 4H), 3.31 (d, partially obscured by water peak, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₂₅H₂₆ClN₆O₅P.1.2H₂O: C, 51.90; H, 4.95; N, 14.53%. Found C, 51.85; H, 4.94; N, 14.52%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（１．７６ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）と水（１．８ｍＬ）との攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％のＨＣｌ水溶液（１．８４ｍＬ、２１．９ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を、５０℃（浴）で２２時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（３．１４ｇ、５６．１ｍｍｏｌ）を、水（９ｍＬ）に、窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２３０（２．４４ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（９ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（６ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（１８６ｍｇ、４．３８ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を継続して窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターした。３０分間撹拌した後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（４００ｍＬ）を添加して、室温で１５分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（４×３０ｍＬ）で洗浄し；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、化合物３（１．７９ｇ、８３％）を得て、これは、ＨＰＬＣによってわずか８７％の純度であることが確認された。従って、このサンプルを、３０分間、温かいＭｅＯＨ（２００ｍＬ）とともに攪拌して、室温まで冷却した。不溶性の物質を濾別して、この濾液に一容積の水を添加して、必要な生成物を沈殿させた。その固体を収集し、水／ＭｅＯＨ＝１：１で数回洗浄し、乾燥して、（２Ｅ）−Ｎ−｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（３）（１．５４ｇ、７２％）を淡黄色固体、融点１９６−１９９℃として得た；ＨＰＬＣ：９４．６％純粋；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.88 (s, 1H), 10.19 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.64-8.55 (m, 2H), 8.00 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.88 (td, J=7.7, 1.8 Hz, 1H), 7.73 (br dd, J=8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.59 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 7.41-7.34 (m, 1H), 7.28 (d, J=9.0 Hz, 1H), 6.87 (dt, J=15.4, 6.1 Hz, 1H), 6.51 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 5.30 (s, 2 H), 3.09 (dd, J=6.1, 1.2 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₂₅H₂₄ClN₇O₂.1.5H₂O: C, 58.08; H, 5.26; N, 18.97%. Found C, 58.17; H, 5.36; N, 19.00%.
１．１．１．４（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（４）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．５０ｇ、９．０９ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２０ｍｌ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で１．５時間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、減圧下、５０℃（浴の温度）でエバポレートして、淡褐色の固体を得た。この固体に、３，４−ジクロロアニリン（１．６２ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＡ（１５ｍＬ）中の溶液を添加した。３，４−ジクロロアニリンの残渣をさらにＤＭＡ（２×２ｍｌ）で洗い流した。その反応混合物を、室温で２０時間撹拌した。これを、水（２００ｍＬ）の中に注いだ。このｐＨを、Ｎａ_２ＣＯ_３の水溶液を用いて室温で約８に調節した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテルを用いてもう１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、水（５×２５ｍＬ）で洗浄した。これを、真空中で、シリカゲル／ＫＯＨ上で一晩乾燥して、Ｎ−（３，４−ジクロロフェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０４）（２．８１ｇ、１００％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点２６２−２６４℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.17 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.35 (d, J=2.5Hz, 1H), 8.26 (poorly resolved d, J=0.7 Hz, 1H), 7.92 (dd, J=8.8, 2.5Hz, 1H), 7.69 (d, J=8.8 Hz, 1H). Anal. Calcd for C₁₃H₇Cl₂FN₄: C, 50.51; H, 2.28; N, 18.12. Found C, 50.50; H, 2.27; N, 18.42.
化合物２０４（２．９５ｇ、９．５５ｍｍｏｌ）と４−メトキシベンジルアミン（１２．６ｍＬ、９５．５ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中の混合物を、窒素雰囲気下、５２℃（浴の温度）で１０日間撹拌した。次いで、この溶液を冷却して、石油エーテル（２００ｍＬ）を添加した。これを、室温で１０分間撹拌した。この層を、分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、さらに石油エーテル（２×２００ｍｌ）を用いて繰り返した。水（２００ｍＬ）を添加して、その混合物を室温で１５分間撹拌した。これを、濾過して、固体を水（５×３０ｍＬ）で、次いで石油エーテル（３×３０ｍＬ）で洗浄した。粘着性の黄色／オレンジ色の固体を、アセトン（１００ｍＬ）とともに３５−４５℃（内部温度）で１０分間撹拌した。水（１００ｍＬ）を添加して、室温で２０分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し、水／アセトン（１：１）（５×２０ｍＬ）で洗い流し、真空中で、シリカゲル／ＫＯＨ上で乾燥して、純粋なＮ^４−（３，４−ジクロロフェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１３）（２．５９ｇ、６４％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点２０９−２１１℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.76 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.30 (poorly resolved d, J=2.1 Hz, 1H), 7.89 (dd, J=8.8, 2.1 Hz, 1H), 7.64 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.38-7.25 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 6.92-6.83 (m, 2H), 4.49 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₇Cl₂N₅O: C, 59.17; H, 4.02; N, 16.43%. Found C, 58.93; H, 4.17; N, 16.12%.
化合物２１３（２．５０ｇ、５．８６ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（６０ｍｌ）との攪拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（４．４９ｍｌ、５８．６ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（１．２８ｍＬ、１１．７ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で４３時間撹拌した。これを、石油エーテル（６００ｍＬ）中に注いで、室温で約２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程を、さらに石油エーテル（３００ｍＬ）を用いて繰り返した。後に残された固体に、５ＭのＮＨ_３（８０ｍＬ）を０℃で添加し、室温で１５分間撹拌した。その固体を収集して、連続して水（６×１０ｍＬ）、石油エーテル−酢酸エチル＝３：１（３×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、Ｎ^４−（３，４−ジクロロフェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２２）（１．７６ｇ、９８％）、融点２７７−２８０℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.83 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.34 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.92 (dd, J=8.8, 2.5Hz, 1H), 7.63 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.30 (s, 2H). Anal. Calcd for C₁₃H₉Cl₂N₅.0.5H₂O: C, 49.54; H, 3.20; N, 22.22. Found C, 49.70; H, 3.08; N, 22.28.
ＣＤＩ（１．９８ｇ、１２．２ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（８ｍＬ）との攪拌された混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（２．１８ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（６ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物を、さらに４０℃（浴）で１５分間攪拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２２（１．７０ｇ、５．５６ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）とＤＭＡ（７ｍＬ）との混合溶媒中の溶液を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝１５：１）によってモニターした。一晩（１７時間）攪拌した後、反応混合物を水（３００ｍＬ）に注いで、石油エーテル（４００ｍＬ）とともに室温で２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（４００ｍＬ）でもう１回繰り返した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、ジエチル２−（４−（３，４−ジクロロフェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２３１）（２．５６ｇ、９５％）を得た；融点１２１−１２４℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.86 (s, 1H), 10.42 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.67 (s, 1 H), 8.24 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.89 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1H), 7.65 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.16-4.04 (m, 4H), 3.32 (d, partially obscured by water peak, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₂₀Cl₂N₅O₄P.H₂O: C, 45.43; H, 4.42; N, 13.94%. Found C, 45.37; H, 4.20; N, 13.81%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（２．０８ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）と水（２．２ｍＬ）との攪拌された混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％ＨＣｌ水溶液（２．１６ｍＬ、２５．７ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を、４０℃（浴）で２０時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（１．８４ｇ、３２．９ｍｍｏｌ）を、水（１０ｍＬ）に、窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２３１（２．４９ｇ、５．１４ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（１０ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（５．５ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（２１８ｍｇ、５．１４ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。この冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を、継続して窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターした。１５分後、約２０％の化合物２３１が残ったことを確認した。さらにＫＯＨ（０．４０ｇ、７．１４ｍｍｏｌ）を、固体として添加した。さらに１５分間撹拌した後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で１５分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（４ｘ３０ｍＬ）で洗浄し；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（４）（２．０３ｇ、９５％）を、ベージュ色の固体、融点１６１−１６４℃として得た；ＨＰＬＣ：９８．６％純粋；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.92 (s, 1H), 10.36 (s, 1H), 9.09-8.95 (m, 2H), 8.67 (br s, 1 H), 8.27 (br s, 1 H), 7.92 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 7.65 (d, J=8.8, 1H), 6.88 (dt, J=15.4, 6.0 Hz, 1H), 6.52 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 3.09 (dd, J=6.0, 1.2 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₁₈Cl₂N₆O.1.2H₂O: C, 51.99; H, 4.69; N, 19.15. Found C, 51.93; H, 4.59; N, 19.15.
１．１．１．５（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（５）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．５０ｇ、９．０９ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で３時間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、４０℃（浴の温度）、減圧下でエバポレートして、淡褐色の固体を得た。この固体に、３−ブロモ−４−クロロアニリン（２．０７ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＡ（１５ｍＬ）中の溶液を添加した。３−ブロモ−４−クロロアニリンの残渣を、さらにＤＭＡ（２×２ｍＬ）で洗い流した。その反応混合物を室温で１９時間撹拌した。これを、水（２００ｍＬ）の中に注いだ。そのｐＨを、Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を用いて、室温で約８に調節した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテルを用いてもう１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、水（４×２０ｍＬ）で洗浄した。これを、真空中でシリカゲル／ＫＯＨ上で一晩乾燥して、Ｎ−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０５）（３．２０ｇ、９９％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点２７１−２７５℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.15 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.45 (d, J=2.5Hz, 1H), 8.26 (br s, 1H), 7.98 (dd, J=8.8, 2.5Hz, 1H), 7.69 (d, J=8.8 Hz, 1H). Anal. Calcd for C₁₃H₇BrClFN₄: C, 44.16; H, 2.00; N, 15.85. Found C, 44.21; H, 1.87; N, 15.98.
化合物２０５（３．０９ｇ、８．７４ｍｍｏｌ）と４−メトキシベンジルアミン（１１．５ｍＬ、８７．４ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中の混合物を、窒素雰囲気下、５８〜６０℃（浴の温度）で、１週間攪拌した。次いで、この溶液を冷却して、石油エーテル（３００ｍＬ）を添加した。これを、室温で２０分間撹拌した。この層を、分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、石油エーテル（３００ｍＬ）でもう１回繰り返した。水（２５０ｍＬ）を添加して、その混合物を、室温で２０時間撹拌した。黄色／オレンジ色の固体を濾過によって収集して、水（５×２０ｍＬ）で、次いで石油エーテル（３×３０ｍＬ）で洗浄した。粘着性の黄色／オレンジ色の固体を、アセトン（１５０ｍＬ）に４５℃（浴の温度）で溶解した。これを、濾過して不溶性の不純物を除いた。この濾液に、水（４００ｍＬ）を添加し、室温で１時間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し、水（５×２５ｍＬ）、石油エーテル（３×３０ｍＬ）で洗浄し、真空中で、シリカゲル／ＫＯＨ上で乾燥して、純粋なＮ^４−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１４）（３．０１ｇ、７３％）を、緑色がかった黄色の固体、融点２０７−２１０℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.74 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.39 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.96 (dd, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.64 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.38-7.25 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 6.92-6.85 (m, 2H), 4.49 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₇BrClN₅O: C, 53.58; H, 3.64; N, 14.88%. Found C, 53.84; H, 3.55; N, 14.63%.
化合物２１４（２．９２ｇ、６．２０ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（６０ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（４．７５ｍＬ、６２．０ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（１．３６ｍＬ、１２．４ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で４２時間撹拌した。これを、石油エーテル（６００ｍＬ）中に注ぎ、室温で約２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程を、さらに石油エーテル（３００ｍＬ）で繰り返した。後に残された固体に５ＭのＮＨ_３（８０ｍＬ）を０℃で添加して、室温で１５分間撹拌した。その固体を収集して、連続して水（６×１０ｍＬ）、石油エーテル−酢酸エチル＝３：１（３×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、Ｎ^４−（３−ブロモ−４−クロロフェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２３）（２．１７ｇ、１００％）、融点２７１〜２７４℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.82 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.44 (d, J=2.3 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.97 (dd, J=8.8, 2.3Hz, 1H), 7.62 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.30 (s, 2H). Anal. Calcd for C₁₃H₉BrClN₅.0.6H₂O: C, 43.20; H, 2.85; N, 19.38. Found C, 43.00; H, 2.95; N, 19.12.
ＣＤＩ（１．２０ｇ、７．４２ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）との攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（１．４５ｇ、７．４２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物を、さらに４０℃（浴）で１５分間攪拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２３（２．００ｇ、５．７１ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）とＤＭＡ（７ｍＬ）との混合溶媒中の溶液を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターして、１時間後、わずか約６０％の反応しか生じなかったことを確認した。そのため、別のバッチの試薬を、ＣＤＩ［０．８７ｇ、５．３７ｍｍｏｌ；乾燥ＴＨＦ（２．５ｍＬ）］と２−（ジエトキシホスホリル）酢酸［０．７２ｇ、５．３７ｍｍｏｌ）；ＴＨＦ（３ｍＬ）］から調製し、反応物に添加した。これを、さらに３時間、４０℃で撹拌した。その反応混合物を水（３００ｍＬ）の中に注ぎ、石油エーテル（４００ｍＬ）と室温で２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（４００ｍＬ）でもう１回繰り返した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、ジエチル２−（４−（３−ブロモ−４−クロロフェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２３２）（２．８５ｇ、９４％）を得た；融点１１３−１１６℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.86 (s, 1H), 10.40 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.67 (s, 1 H), 8.34 (d, J=2.3 Hz, 1H), 7.94 (dd, J=8.8, 2.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.16-4.03 (m, 4H), 3.32 (d, partially obscured by water peak, 2H), 1.26 (t, J=7.1 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₂₀BrClN₅O₄P.H₂O: C, 41.74; H, 4.06; N, 12.81%. Found C, 42.01; H, 3.90; N,
12.78%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（２．１１ｇ、１３．１ｍｍｏｌ）と水（２．２ｍＬ）との攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％のＨＣｌ水溶液（２．１９ｍＬ、２６．１ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を、４０℃（浴）で２１時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（１．８７ｇ、３３．４ｍｍｏｌ）を水（１０ｍＬ）に、窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２３２（２．７６ｇ、５．２２ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（１０ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（５．５ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（２２１ｍｇ、５．２２ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。この冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を継続して窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターした。３５分間後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で１５分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（４×３０ｍＬ）で洗浄し；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（５）（２．３７ｇ、９８％）を淡黄色固体、融点１６８〜１７１℃として得た；ＨＰＬＣ：９６．８％純粋；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.92 (s, 1H), 10.34 (s, 1H), 9.10-8.95 (m, 2H), 8.67 (br s, 1 H), 8.38 (br s, 1 H), 7.97 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.65 (d, J=8.8, 1H), 6.88 (dt, J=15.4, 6.0 Hz, 1H), 6.52 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 3.09 (dd, J=6.0, 1.1 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₁₈BrClN₆O.H₂O: C, 47.57; H, 4.20; N, 17.52. Found C, 47.80; H, 4.25; N, 17.51.
１．１．１．６（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（６）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．６５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で３時間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、減圧下、５０℃（浴の温度）でエバポレートして淡褐色の固体を得た。この固体に、４−ブロモ−３−クロロアニリン（２．２７ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＡ（１５ｍＬ）中の溶液を添加した。４−ブロモ−３−クロロアニリンの残渣を、さらにＤＭＡ（２×２ｍＬ）で洗い流した。その反応混合物を室温で１８時間撹拌した。これを、水（２５０ｍＬ）に注いだ。ｐＨを、Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を用いて室温で約８に調節した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で１時間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテルを用いてもう１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、水（４×２０ｍＬ）で洗浄した。これを、真空中でシリカゲル／ＫＯＨ上で一晩乾燥して、Ｎ−（４−ブロモ−３−クロロフェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０６）（３．３１ｇ、９４％）をベージュ色の固体、融点２５８−２６１℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.17 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.79 (s, 1H), 8.35 (br s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.93-7.74 (m, 2H). Anal. Calcd for C₁₃H₇BrClFN₄: C, 44.16; H, 2.00; N, 15.85. Found C, 43.96; H, 1.96; N, 15.60.
化合物２０６（３．２２ｇ、９．１１ｍｍｏｌ）と４−メトキシベンジルアミン（１１．９５ｍＬ、９１．１ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＭＳＯ（２４ｍＬ）中の混合物を、窒素雰囲気下、７０℃（浴の温度）で１１３時間撹拌した。次いでその溶液を冷却して、石油エーテル（３００ｍＬ）と、室温で２０分間撹拌した。この層を、分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、石油エーテル（３００ｍＬ）を用いてもう１回繰り返した。水（３００ｍＬ）を添加して、その混合物を、室温で４時間撹拌した。その固体を濾過によって収集して、水（４×２０ｍＬ）で洗浄した。粘着性の黄色／オレンジ色の固体を、アセトン（８０ｍＬ）中に４０℃で（浴の温度）溶解した。水（８０ｍＬ）を添加して、室温で１０分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し、アセトン／水＝１：１（５×２０ｍＬ）で洗浄し、真空中で、シリカゲル／ＫＯＨ上で乾燥して、純粋なＮ^４−（４−ブロモ−３−クロロフェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１５）（３．６３ｇ、８５％）を緑色がかった黄色の固体、融点１７５−１７７℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.77 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.30 (br s, 1H), 7.83 (br d, J=8.2, 1H), 7.77 (d, J=8.7 Hz, 1H), 7.43-7.26 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 6.88 (br d, J=8.3 Hz, 2H), 4.49 (d, J=5.6 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₇BrClN₅O.acetone: C, 54.51; H, 4.38; N, 13.24%. Found C, 54.83; H, 4.31; N, 13.15%.
化合物２１５（３．５５ｇ、７．５６ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（７５ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（５．８２ｍＬ、７５．６ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（１．６６ｍＬ、１５．１ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で４６時間撹拌した。これを、石油エーテル（４００ｍＬ）中に注ぎ、残渣をＭｅＯＨで洗い流した。室温で約２０分間撹拌した後、石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程を、さらに石油エーテル（４００ｍＬ）で繰り返した。後に残された固体に、５ＭのＮＨ_３（１００ｍＬ）を０℃で添加して、室温で１５分間撹拌した。その固体を収集して、水（５×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、Ｎ^４−（４−ブロモ−３−クロロフェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２４）（２．４１ｇ、９１％）、融点２７２−２７５℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.83 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.34 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.84 (dd, J=8.8, 2.0 Hz, 1H), 7.75 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.31 (s, 2H). Anal. Calcd for C₁₃H₉BrClN₅.0.2MeOH: C, 45.15; H, 2.73; N, 19.36. Found C, 44.84; H, 2.52; N, 19.29.
ＣＤＩ（２．９７ｇ、１８．３ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（１２ｍＬ）との攪拌された混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（３．２ｇ、１６．３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物を、さらに４０℃（浴）で１５分間攪拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２４（２．２９ｇ、６．５３ｍｍｏｌ）の乾燥ＴＨＦ（８ｍＬ）とＤＭＡ（９ｍＬ）との混合溶媒中の溶液を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターして、３時間後、約８０％の反応が生じたことを確認した。従って、別のバッチの試薬を、ＣＤＩ［０．５９ｇ、３．６６ｍｍｏｌ；乾燥ＴＨＦ（２．５ｍＬ）］および２−（ジエトキシホスホリル）酢酸［０．６４ｇ、３．２６ｍｍｏｌ）；ＴＨＦ（２ｍＬ）］から調製し、反応混合物に添加した。これを、さらに１時間４０℃で攪拌した。その反応混合物を、水（５００ｍＬ）に注いで、石油エーテル（５００ｍＬ）とともに室温で一晩攪拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、さらに石油エーテル（３００ｍＬ）とともに１０分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、ジエチル２−（４−（４−ブロモ−３−クロロフェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２３３）（３．２６ｇ、９５％）を得た；融点１２１−１２４℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.89 (s, 1H), 10.43 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.68 (s, 1 H), 8.24 (d, J=2.1 Hz, 1H), 7.82 (dd, J=8.8, 2.1 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.17-4.00 (m, 4H), 3.32 (d, J=21.5, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₂₀BrClN₅O₄P.0.5H₂O: C, 42.44; H, 3.94; N, 13.02%. Found C, 42.42; H, 3.99; N, 12.98%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（２．４２ｇ、１５．０ｍｍｏｌ）と水（２．５ｍＬ）との攪拌した混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％のＨＣｌ水溶液（２．５２ｍＬ、３０．０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を、４０℃（浴）で、４８時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（４．３０ｇ、７６．８ｍｍｏｌ）を、水（１３ｍＬ）に、窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２３３（３．１７ｇ、６．００ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（１３ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（６．５ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（２５４ｍｇ、６．００ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。この冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を継続して窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝２０：１）によってモニターした。４０分間後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×３０ｍＬ）で洗浄し；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（６）（２．７１ｇ、９８％）をベージュ色の固体、融点１７６−１７９℃として得た；ＨＰＬＣ：９７．８％純粋；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.95 (s, 1H), 10.37 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.68 (s, 1 H), 8.27 (br s, 1 H), 7.84 (br d, J=8.3 Hz, 1H), 7.78 (d, J=8.8, 1H), 6.87 (dt, J=15.5, 6.0 Hz, 1H), 6.52 (br d, J=15.5 Hz, 1H), 3.09 (br d, J=5.4 Hz, 2H), 2.18 (s, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₁₈BrClN₆O.H₂O: C, 47.57; H, 4.20; N, 17.52. Found C, 47.95; H, 4.16; N, 17.31.
１．１．１．７（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（７）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．６５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で５時間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、減圧下、５０℃（浴の温度）でエバポレートして、淡褐色の固体を得た。この固体に、３，４−ジブロモアニリン（２．７６ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＡ（１５ｍＬ）中の溶液を添加した。３，４−ジブロモアニリンの残渣を、さらにＤＭＡ（２×２ｍＬ）で洗い流した。その反応混合物を、室温で１９時間撹拌した。これを、水（３００ｍＬ）中に注いだ。ｐＨを、Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を用いて室温で約８に調節した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテルを用いてもう１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、連続して、水（５×２５ｍＬ）および石油エーテル／酢酸エチル（１０：１）（４×２５ｍＬ）で洗浄した。これを、真空中でシリカゲル／ＫＯＨ上で一晩乾燥して、Ｎ−（３，４−ジブロモフェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０７）（３．５０ｇ、８８％）をベージュ色の固体、融点２６２−２６４℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.14 (br s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.45 (br s, 1H), 8.26 (s, 1H), 7.91 (br d, J=7.8, 2.5Hz, 1H), 7.80 (d, J=8.7 Hz, 1H). Anal. Calcd for C₁₃H₇Br₂FN₄: C, 39.23; H, 1.77; N, 14.08. Found C, 39.23; H, 1.79; N, 13.86.
化合物２０７（３．４０ｇ、８．５４ｍｍｏｌ）と４−メトキシベンジルアミン（１１．２ｍＬ、８５．４ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＭＳＯ（２２ｍＬ）中の混合物を、窒素雰囲気下、７０℃（浴の温度）で１３８時間撹拌した。次いで、この混合物を冷却して、水（４００ｍＬ）中に注いだ。石油エーテル（４００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。この層を、分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、さらに石油エーテル（４００ｍＬ）で繰り返した。これを、濾過して、固体を水（３×３０ｍＬ）で洗浄した。粘着性の黄色／オレンジ色の固体を、アセトン（１００ｍＬ）を用いて室温で約３０分間撹拌して、微細なオレンジ色の沈殿物を得た。水（２００ｍＬ）を添加して、さらに室温で２時間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し、水／アセトン（２：１）（５×３０ｍＬ）で洗浄して、真空中でシリカゲル／ＫＯＨ上で乾燥して、純粋なＮ^４−（３，４−ジブロモフェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１６）（４．１６ｇ、９５％）を、緑色がかった黄色固体、融点１６６−１６９℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.72 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.40 (br s, 1H), 7.89 (br d, J=7.7 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.7, Hz, 1H), 7.40-7.25 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 6.88 (br d, J=8.3 Hz, 2H), 4.49 (d, J=5.9 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₇Br₂N₅O.0.25hexane: C, 50.35; H, 3.85; N, 13.05%. Found C, 50.56; H, 3.54; N, 12.87%.
化合物２１６（４．０８ｇ、７．９２ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（８０ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（６．０７ｍＬ、７９．２ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（１．７３ｍＬ、１５．８ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で４６時間撹拌した。これを、石油エーテル（５００ｍＬ）中に注いで、室温で約１５分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程を、さらに石油エーテル（４００ｍＬ）で繰り返した。後に残された固体を、最小のＭｅＯＨ（１２０ｍＬ）に溶解して、５ＭのＮＨ_３（１５０ｍＬ）を０℃で添加して、室温で１５分間撹拌した。その固体を収集して、連続して、水（５×２０ｍＬ）、石油エーテル−酢酸エチル＝５：１（５×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、Ｎ^４−（３，４−ジブロモフェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２５）（２．４７ｇ、７９％）、融点２６５−２６８℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.80 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 8.44 (d, J=2.2 Hz, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.90 (dd, J=8.8, 2.2Hz, 1H), 7.74 (d, J=8.8Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.30 (s, 2H). Anal. Calcd for C₁₃H₉Br₂N₅.0.1hexane: C, 40.47; H, 2.60; N, 17.35. Found C, 40.16; H, 2.45; N, 17.20.
ＣＤＩ（２．７４ｇ、１６．９ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（１３ｍＬ）との攪拌された混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（２．９６ｇ、１５．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物を、さらに４０℃（浴）で１５分間攪拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２５（２．３８ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）の、乾燥ＴＨＦ（７ｍＬ）とＤＭＡ（８ｍＬ）との混合溶媒中の溶液を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝１５：１）によってモニターした。４時間攪拌した後、反応混合物を、水（２５０ｍＬ）中に注いで、石油エーテル（３５０ｍＬ）とともに室温で２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（２００ｍＬ）でもう１回繰り返した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、ジエチル２−（４−（３，４−ジブロモフェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２３４）（３．２８ｇ、９５％）を得た；融点１２０−１２４℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.89 (s, 1H), 10.41 (s, 1H), 9.04 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.67 (s, 1 H), 8.34 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.87 (dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.77 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.17-4.03 (m, 4H), 3.32 (d, J=21.6 Hz, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₂₀Br₂N₅O₄P: C, 39.81; H, 3.52; N, 12.22%. Found C, 39.48; H, 3.78; N, 11.79%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（２．２５ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）と水（２．４ｍＬ）との攪拌された混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％のＨＣｌ水溶液（２．３５ｍＬ、２８．０ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を、４５℃（浴）で２３時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（４．０２ｇ、７１．７ｍｍｏｌ）を水（１２ｍＬ）中に、窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２３４（３．２１ｇ、５．６０ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（１２ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（６ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（２３７ｍｇ、５．６０ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。この冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を継続して、窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝２５：１）によってモニターした。１時間後、これを、水（２００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（２００ｍＬ）を添加して、１５分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×２０ｍＬ）で洗浄して；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（７）（２．７６ｇ、９８％）をベージュ色の固体、融点１７６−１７９℃として得た；ＨＰＬＣ：９７．２％純粋；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.95 (s, 1H), 10.35 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.67 (br s, 1 H), 8.37 (br s, 1 H), 7.89 (br d, J=7.8 Hz, 1H), 7.77 (d, J=8.8, 1H), 6.87 (dt, J=15.4, 6.0 Hz, 1H), 6.52 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 3.08 (br d, J=5.3 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₁₉H₁₈Br₂N₆O.0.5H₂O: C, 44.30; H, 3.72; N, 16.31. Found C, 44.24; H, 3.81; N, 15.98.
１．１．１．８（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−２−ブテンアミド（８）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．６５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で１時間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、減圧下、４５℃（浴の温度）でエバポレートして、淡褐色の固体を得た。この固体に、３−エチニル−４−フルオロアニリン（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９８１，４６，２２８０−２２８６）（１．４９ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）および乾燥ＤＭＡ（１５ｍＬ）の溶液を添加した。３−エチニル−４−フルオロアニリンの残渣を、さらにＤＭＡ（２×２ｍＬ）で洗い流した。その反応混合物を、室温で４５時間撹拌した。これを、水（３００ｍＬ）の中に注いだ。ｐＨを、Ｎａ_２ＣＯ_３の水溶液を用いて室温で約９に調節した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（３００ｍＬ）を用いてもう１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、水（５×５０ｍＬ）；酢酸エチル／石油エーテル（１：１０）（４×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、Ｎ−（３−エチニル−４−フルオロフェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０８）（２．３９ｇ、８５％）を、薄茶色の固体、融点２２３−２２６℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.10 (s, 1H), 8.96 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.24 (br s, 1H), ), 8.12 (dd, J=6.4, 2.8 Hz, 1H), 7.96-7.88 (m, 1H), 7.39 (t, J=9.1 Hz, 1H), 4.54 (s,1H). Anal. Calcd for C₁₅H₈F₂N₄.1.8H₂O: C, 57.25; H, 3.72; N, 17.80. Found C, 57.27; H, 3.49; N,17.90.
化合物２０８（２．３１ｇ、８．１９ｍｍｏｌ）と４−メトキシベンジルアミン（１０．７ｍＬ、８１．９ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＭＳＯ（２０ｍＬ）中の混合物を、窒素雰囲気下、７０℃（浴の温度）で１１８時間撹拌した。この混合物を冷却して、石油エーテル（３００ｍＬ）を添加した。これを、室温で１５分間撹拌した。この層を、分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、さらに石油エーテル（３００ｍＬ）で繰り返した。水（３００ｍＬ）を添加して、その混合物を、室温で２０分間撹拌した。これを、濾過して、粘着性の固体を水（５×３０ｍＬ）で洗浄した。粘着性の固体を、温かいＭｅＯＨ（７０ｍＬ）とともに３０分間撹拌した。室温まで冷却した後、固体を収集して；冷却ＭｅＯＨ（３×１０ｍＬ）で洗浄し、真空中でシリカゲル／ＫＯＨ上で乾燥して、純粋なＮ^４−（３−エチニル−４−フルオロフェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１７）（０．９２ｇ、２８％）を、黄色／オレンジ色の固体、融点１９７−１９９℃として得た。濾液をエバポレートして乾燥し、オレンジ色／コハク色の粘性物質を得て、これをシリカカラム［酢酸エチル／石油エーテル（２：１）］に加えて、より多くの化合物２１７（０．９６ｇ、２９％）を得た。¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.66 (s, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.08-8.02 (m, 1H), 7.93-7.85 (m, 1H), 7.39-7.13 (m, 5H), 6.88 (br d, J=8.7 Hz, 2H), 4.54-4.44 (m, 3H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₃H₁₈FN₅O.0.15MeOH: C, 68.79; H, 4.64; N, 17.33%. Found C, 69.09; H, 4.62; N, 16.97%.
化合物２１７（２．１２ｇ、５．３２ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（５５ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（３．７０ｍＬ、４８．３ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（１．１７ｍＬ、１０．６ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で７８時間撹拌した。これを、石油エーテル（３００ｍＬ）中に注いで、室温で約２０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程を、さらに石油エーテル（３００ｍＬ）で繰り返した。後に残された固体を、アセトン（２５ｍＬ）に溶解して、５ＭのＮＨ_３（１００ｍＬ）を０℃で添加して、室温で４０分間撹拌した。その固体を収集して、連続して、アセトン／水（１：５）（５×２０ｍＬ）、石油エーテル／酢酸エチル＝３：１（５×２０ｍＬ）で洗浄して、乾燥し、Ｎ^４−（３−エチニル−４−フルオロフェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２６）（１．３１ｇ、８９％）、融点２１８−２２２℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.72 (s, 1H), 8.70 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.10 (dd, J=6.4, 2.7 Hz, 1H), 7.96-7.87 (m, 1H), 7.33 (t, J=9.1 Hz, 1H), 7.13 (s, 1H), 6.26 (s, 2H), 4.50 (s, 1H). Anal. Calcd for C₁₅H₁₀FN₅.0.8H₂O.0.25ethyl acetate: C, 60.87; H, 4.34; N, 22.18%. Found C, 60.67; H, 4.15; N, 22.11%.
ＣＤＩ（２．０１ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（９ｍＬ）との攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（２．１８ｇ、１１．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（７ｍＬ）中の溶液を添加した。添加後、反応混合物を、さらに４０℃（浴）で１５分間攪拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２６（１．２４ｇ、４．４４ｍｍｏｌ）の、乾燥ＴＨＦ（５ｍＬ）とＤＭＡ（６ｍＬ）との混合溶媒中の混合物を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝３０：１）によってモニターした。２２時間攪拌後、これを、水（２００ｍＬ）に注ぎ、その残渣をＭｅＯＨで洗い流した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で１時間攪拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、さらに石油エーテル（１５０ｍＬ）で繰り返した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×２０ｍＬ）で洗浄して、乾燥して、ジエチル２−（４−（３−エチニル−４−フルオロフェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２３５）（１．８５ｇ、９１％）を得た；融点１０３−１０６℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.84 (s, 1H), 10.33 (s, 1H), 9.01 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.01 (dd, J=6.4, 2.7 Hz, 1H), 7.92-7.83 (m, 1H), 7.35 (t, J=9.1 Hz, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.17-4.03 (m, 4H), 3.32 (d, partially obscured by water peak, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₂₁H₂₁FN₅O₄P.MeOH: C, 53.99; H, 5.15; N, 14.31%. Found C, 54.21; H, 4.94; N, 14.43%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（１．５６ｇ、９．７０ｍｍｏｌ）と水（１．６ｍＬ）との攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％のＨＣｌ水溶液（１．６２ｍＬ、１９．３ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を、４５℃（浴）で２５時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（２．７６ｇ、４９．３ｍｍｏｌ）を、水（８ｍＬ）に窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２３５（１．７６ｇ、３．８５ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（８ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（４ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（１６３ｍｇ、３．８５ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。この冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を継続して窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターした。３０分間撹拌した後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で１０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、１０分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（４×２０ｍＬ）で洗浄して；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、化合物８（１．３８ｇ、９２％）を得て、これをＨＰＬＣによって８９．７％のみ純粋であることを確認した。これにより、サンプルをＭｅＯＨ（約４０ｍＬ）と３０分間撹拌した。不溶性の物質を濾別して、この濾液に一容積の水を添加して、必要な生成物を沈殿させた。その固体を収集し、水／ＭｅＯＨ＝３：１（３×１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、（２Ｅ）−４−（ジメチルアミノ）−Ｎ−［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−２−ブテンアミド（８）（１．２８ｇ、８５％）を、黄色／褐色の固体、融点１５２−１５５℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.93 (s, 1H), 10.29 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.04 (dd, J=6.4, 2.7 Hz, 1H), 7.94-7.85 (m, 1H), 7.35 (t, J=9.1 Hz, 1H), 6.87 (dt, J=15.4, 6.0 Hz, 1H), 6.52 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 4.53 (s, 1 H), 3.09 (br d, J=6.0 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₉FN₆O.0.8H₂O.0.7MeOH: C, 61.00; H, 5.52; N, 19.67%. Found C, 61.26; H, 5.25; N, 19.47%.
１．１．１．９（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（９）の調製（スキーム２）
６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン（２００）（１．６５ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）、塩化チオニル（２０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ（２滴）の不均質な混合物を、還流下で２４時間撹拌して、均質な混合物を得た。これを、減圧下、４５℃（浴の温度）でエバポレートして、淡褐色の固体を得た。この固体に、３−エチニル−４−クロロアニリン（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９８１，４６，２２８０−２２８６）（１．６７ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）および乾燥ＤＭＡ（１５ｍＬ）の溶液を添加した。３−エチニル−４−クロロアニリンの残渣を、さらにＤＭＡ（２×２ｍＬ）で洗い流した。その反応混合物を室温で２４時間撹拌した。これを、水（３００ｍＬ）に注いで、残渣をＭｅＯＨで洗い流した。ｐＨを、Ｎａ_２ＣＯ_３水溶液を用いて室温で約９に調節した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（３００ｍＬ）を用いてもう１回繰り返した。その固体を濾過によって収集して、水（５×２５ｍＬ）；酢酸エチル／石油エーテル（１：１０）（４×２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、Ｎ−（３−エチニル−４−クロロフェニル）−６−フルオロピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２０９）（３．０ｇ、１００％）を、薄茶色の固体、融点２１８−２２２℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.13 (s, 1H), 8.98 (s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.32-8.22 (m, 2H), 7.95 (dd, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.61 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.60 (s,1H). Anal. Calcd for C₁₅H₈ClFN₄.0.5H₂O.0.5MeOH: C, 57.51; H, 3.43; N, 17.31. Found C, 57.33; H, 3.13; N, 17.10.
化合物２０９（３．０７ｇ、１０．３ｍｍｏｌ）と４−メトキシベンジルアミン（１３．５ｍＬ、１０３ｍｍｏｌ）との乾燥ＤＭＳＯ（２７ｍＬ）中の混合物を、窒素雰囲気下、７０℃（浴の温度）で１４１時間撹拌した。この混合物を冷却して、石油エーテル（３００ｍＬ）を添加した。これを、室温で３０分間撹拌した。この層を、分離させて、石油エーテルの層をデカントした。この手順を、さらに石油エーテル（３００ｍＬ）で繰り返した。水（３００ｍＬ）を添加して、その混合物を、室温で３０分間撹拌した。これを、濾過して、粘着性の固体を水（４×２０ｍＬ）で洗浄した。粘着性の固体を、最小のアセトン（５０ｍＬ）に溶解して、水（２００ｍＬ）を添加した。この混合物を、室温で一晩（２２時間）攪拌した。粘着性の固体を再度生成した。これによって、この生成物を、酢酸エチル中に抽出して、この後に、水で数回洗浄し、乾燥して（ＭｇＳＯ_４）、エバポレートした。粗生成物を、シリカカラム（ジクロロメタン／ＭｅＯＨ＝５０：１）に加えて、Ｎ^４−（４−クロロ−３−エチニルフェニル）−Ｎ^６−（４−メトキシベンジル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２１８）（２．３０ｇ、５４％）を緑色がかった黄色固体、融点２０１−２０３℃として得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.72 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.19 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.96 (dd, J=8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J=8.9 Hz, 1H), 7.39-7.28 (m, 3H), 7.17 (s, 1H), 6.93-6.82 (m, 2H), 4.59 (s, 1H), 4.49 (d, J=6.3 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H). Anal. Calcd for C₂₃H₁₈ClN₅O.0.18hexane: C, 67.04; H, 4.80; N, 16.23%. Found C, 66.76; H, 4.79; N, 15.96%.
化合物２１８（２．２７ｇ，５．４６ｍｍｏｌ）とＤＣＭ（５５ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、トリフルオロ酢酸（４．２ｍＬ、５４．６ｍｍｏｌ）、続いてアニソール（１．２ｍＬ、１０．９ｍｍｏｌ）を添加し、その混合物をさらに室温で５０時間撹拌した。これを、石油エーテル（４００ｍＬ）中に注いで、室温で約３０分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントして、廃棄した。この過程をさらに石油エーテル（４００ｍＬ）で繰り返した。後に残された固体をアセトン（３０ｍＬ）中に溶解して、５ＭのＮＨ_３（１５０ｍＬ）を０℃で添加して、室温で２０分間撹拌した。その固体を収集して、連続してアセトン／水（１：５）（５×２０ｍＬ）、石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１（５×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥してＮ^４−（４−クロロ−３−エチニルフェニル）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−４，６−ジアミン（２２７）（１．５４ｇ、９５％）、融点２１０−２１３℃を得た；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO] 9.77 (s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.24 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.97 (dd, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 7.55 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.29 (s, 2H), 4.56 (s, 1H). Anal. Calcd for C₁₅H₁₀ClN₅.1.3H₂O.0.5 acetone: C, 56.92; H, 4.52; N, 20.11%. Found C, 56.81; H, 4.22; N, 19.82%.
ＣＤＩ（２．１４ｇ、１３．２ｍｍｏｌ）と乾燥ＴＨＦ（１０ｍＬ）との攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、２−（ジエトキシホスホリル）酢酸（２．３１ｇ、１１．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（８ｍＬ）の中の溶液を添加した。添加後、反応混合物をさらに４０℃（浴）で１５分間攪拌した（ここからガスの発生が停止した）。化合物２２７（１．３９ｇ、４．７０ｍｍｏｌ）の、乾燥ＴＨＦ（６ｍＬ）とＤＭＡ（７ｍＬ）との混合溶媒中の混合物を添加して、さらに４０℃で撹拌した。この反応物を、ＴＬＣ（ジクロロメタン−ＭｅＯＨ＝１５：１）によってモニターした。３時間攪拌した後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注ぎ、その残渣を、ＭｅＯＨで洗い流した。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。これを、石油エーテル（２００ｍＬ）でもう１回繰り返した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×３０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、ジエチル２−（４−（４−クロロ−３−エチニルフェニルアミノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イルアミノ）−２−オキソエチルホスホネート（２３６）（２．０３ｇ、９１％）を得た；融点１２４−１２７℃；¹H NMR δ [(CD₃)₂SO]: 10.86 (s, 1H), 10.37 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.14 (br s, 1H), 7.93 (br d, J=8.8 Hz, 1H), 7.35 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.58 (s, 1H), 4.20-4.00 (m, 4H), 3.30 (d, partially obscured by water peak, 2H), 1.26 (t, J=7.0 Hz, 6H). Anal. Calcd for C₂₁H₂₁ClN₅O₄P.H₂O.0.2THF: C, 51.72; H, 4.90; N, 13.83%. Found C, 52.06; H, 4.82; N, 13.70%.
２，２−ジエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタンアミン（１．６７ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）および水（１．８ｍＬ）の攪拌混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、３７％のＨＣｌ水溶液（１．７５ｍＬ、２０．８ｍｍｏｌ）を添加した。添加後、その混合物を、４５℃（浴）で２７時間撹拌した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ａと呼ぶ。ＫＯＨ（２．９８ｇ、５３．２ｍｍｏｌ）を、水（９ｍＬ）に窒素雰囲気下、室温で溶解した。これを、０℃（浴）まで冷却した。これを、溶液Ｂと呼ぶ。化合物２３６（１．９７ｇ、４．１６ｍｍｏｌ）とＴＨＦ（９ｍＬ）との攪拌された不均質な混合物に、室温でかつ窒素雰囲気下で、最少量のＤＭＡ（４．５ｍＬ）を添加して、均質な溶液を得た。ＬｉＣｌ（１７６ｍｇ、４．１６ｍｍｏｌ）を添加して、０℃（浴）で１５分間撹拌した。この冷却溶液Ｂを添加して、０℃で２分間撹拌した。次いで、この冷却溶液Ａを添加して、最終の反応混合物を継続して窒素雰囲気下、０℃で撹拌し続けた。この反応物を、ＴＬＣ（ＤＣＭ−ＭｅＯＨ＝１０：１）によってモニターした。３５分間撹拌した後、これを、水（３００ｍＬ）の中に注いだ。石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、室温で１５分間撹拌した。石油エーテルの層をデカントした。さらに石油エーテル（３００ｍＬ）を添加して、１０分間撹拌した。その固体を吸引濾過によって収集し；水（５×２０ｍＬ）；石油エーテル／酢酸エチル＝１０：１（３×３０ｍＬ）で洗浄し；シリカゲル／ＫＯＨ上、減圧下で乾燥して、化合物９（１．６１ｇ、９５％）を得て、これがＨＰＬＣによって８５．２％だけ純粋であることを確認した。従って、このサンプルを、シリカカラム（酢酸エチル／ＭｅＯＨ＝１０：１）によって精製した。必要な生成物を含む画分を合わせて、エバポレートして、黄色／オレンジ色の固体を得た。その固体を、温かい酢酸エチル（３０ｍＬ）に溶解し、石油エーテル（９０ｍＬ）で沈殿させた。固体を収集して；石油エーテル／酢酸エチル＝３：１（３×２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、（２Ｅ）−Ｎ−［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（９）（１．１ｇ、６５％）を黄色／オレンジ色の固体、融点１７３−１７６℃として得た；^１1H NMR δ [(CD₃)₂SO] 10.92 (s, 1H), 10.31 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 9.00 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.18 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.96 (dd, J=8.9, 2.2 Hz, 1H), 7.57 (d, J=8.9 Hz, 1H), 6.88 (dt, J=15.4, 6.0 Hz, 1H), 6.52 (br d, J=15.4 Hz, 1H), 4.58 (s, 1 H), 3.09 (br d, J=5.8 Hz, 2H), 2.19 (s, 6H). Anal. Calcd for C₂₁H₁₉ClN₆O.0.8MeOH.0.1ethyl acetate: C, 60.42; H, 5.25; N, 19.04%. Found C, 60.15; H, 4.90; N, 18.76%.
１．１．２ α−メチルブロミドトリガーの合成
１．１．２．１５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２３９）の調製（スキーム３）
方法１
化合物２３７（２０．０ｇ、１５７．３６ｍｍｏｌ）（Ｃｈａｕｖｉｅｒｅら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００３，４６，４２７−４４０の方法に従って調製）およびＫ_２ＣＯ_３（３２．６２ｇ、２３６．０４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２００ｍＬ）中の懸濁物に、０℃でヨウ化メチル（１４．７０ｍＬ、２３６．０４ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた混合物を、室温まで温めさせ、次いで２時間攪拌した後、過剰のヨウ化メチルを室温でエバポレートした。沈殿物を、濾過によって除去して、ＤＭＦ濾液を、減圧下、４５−５０℃で濃縮した。得られた残渣をＭｅＣＮ／ＤＣＭ（１：９）で徹底的に抽出し、合わせた抽出物を、シリカゲルの短いカラムを通して濾過した。溶媒を除去した後、粗生成物をＭｅＣＮおよびトルエンから再結晶化して、化合物２３８をオフホワイトの（ｏｆｆ−ｗｈｉｔｅ）結晶性固体（１５．７４ｇ、７１％）、融点１６１−１６３℃として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ7.33 (s, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.63 (s, 3H).前に報告されたものと同一（Ｈｏｓｍａｎｅら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９８５，５０（２６），５８９２−５）。

化合物２３８（４．００ｇ、２８．３４ｍｍｏｌ）とＮＢＳ（５．３０ｇ、２９．７８ｍｍｏｌ）とのＭｅＣＮ（２００ｍＬ）中の溶液を、還流下で２時間、１０００Ｗのハロゲン化タングステンランプで照射した。溶媒の約半分を、真空中で除去した後に、水（１００ｍＬ）を添加した。減圧下のさらなる濃縮によって、白色沈殿物を得て、これを濾過によって収集して、水で洗浄して、減圧下で乾燥し、５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２３９）（４．６９ｇ、７５％）を、白色固体、融点１３０−１３２℃として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ7.74 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 3.83 (s, 3H).以前に報告されたのと同一（Ｓｔｒｉｂｂｌｉｎｇら、ＰＣＴ国際特許公開ＷＯ２００８／０３９０８７）。分析、実測値：Ｃ，２７．８１；Ｈ，３．２７；Ｎ，１９．０５．Ｃ_５Ｈ_６ＢｒＮ_３Ｏ_２．０．０４ヘキサンは以下を要する：C, 28.16; H, 2.96; N, 18.80. HRMS (FAB+) found: 219.97220, 221.97018 (M+1), calcd. for C₅H₇ ^79/81BrN₃O₂: 219.97216, 221.97012.
方法２
化合物２３７（１２０ｇ、０．９４ｍｏｌ）、Ｋ_２ＣＯ_３（２５９．８ｇ、１．８８ｍｏｌ）、およびアセトニトリル（２Ｌ）を、５Ｌの３つ首フラスコに充填し、その混合物を２００ｒｐｍで攪拌しながら０℃まで冷却した。硫酸ジメチル（ＤＭＳ）（９７．８ｍＬ、１．０３ｍｏｌ）を、シリンジポンプによって２時間にわたって緩徐に添加した。２時間後、その反応物を、室温まで温めさせて、一晩保持した。固体をセライト（１２０ｇ）で濾過して、５Ｌのフラスコを、アセトニトリル（２００ｍＬ）で洗浄した。固体を、アセトニトリル（２×５００ｍＬ）で、全ての生成物を除去するまで洗浄した。この溶液を、７５％のブライン（１Ｌ）で希釈して、アセトニトリルを、ロータリーエバポレーションによって除去した。得られたスラリーを、ジクロロメタン（４×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を濾過して、その後にトルエン（１Ｌ）を添加して、ジクロロメタンを、ロータリーエバポレーションによって除去した。得られたスラリーを濾過して、ケーキをトルエン（２×１Ｌ）で洗浄した。湿った固体をオフホワイトの固体（１２１ｇ）として回収した。湿った固体を、水（１Ｌ）から再結晶して、その固体をヘプタン（１Ｌ）で洗浄した。その固体を、４０℃真空オーブン中で一晩乾燥した。化合物２３８を、白色固体として回収した（８６．６ｇ、６７％）。^１ＨＮＭＲ（上記のものと同一）。

２０−Ｌのリアクターに、Ｎ_２、凝縮器（ｃｏｎｄｅｎｓｅｒ）、温度プローブおよび空気攪拌を取り付けた。このリアクターに化合物２３８（１００ｇ、０．７１ｍｏｌ）、１，３ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（ＤＢＤＭＨ）（２０３．０ｇ、０．７１ｍｏｌ）、２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（４５．９７ｇ、０．２８ｍｏｌ）、およびジクロロメタン（６Ｌ）を充填した。この反応物を、１５０ｒｐｍで均質な溶液を攪拌しながら加熱還流した。１００時間後、この反応物を２０℃で３６時間保持した後、１０％のＮａＨＣＯ_３（１．５Ｌ）および１０％のＮａ_２Ｓ_２Ｏ_５（１Ｌ）で反応をｐＨ７およびヨウ化カリウムデンプン紙（ＫＩ−ｓｔａｒｃｈｐａｐｅｒ）陰性までクエンチした（注記：ある程度のガスの発生およびわずかな発熱［６℃］がＮａ_２Ｓ_２Ｏ_５の添加の間に観察された）。有機層を分離して、濾過した後に、水（１Ｌ）を添加して、ジクロロメタンを、ロータリーエバポレーションによって除去した。得られたスラリーを濾過して、淡黄色の固体を得て、これをトルエン（５００ｍＬ）中に５０℃で２．５時間再懸濁し、その後に室温まで冷却した。次いで、濾過によって固体を得て、これを４０℃で真空オーブン中で一晩乾燥し、その後にトルエン（５００ｍＬ）中で１００℃で１時間懸濁化した。室温まで冷却した後、懸濁物を濾過して、固体を得て、４０℃の真空オーブン中で一晩乾燥し、５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２３９）（６３．３ｇ、３８％）を淡黄色固体として得た。^１ＨＮＭＲ（上記のものと同一）。

１．１．２．２５−（ブロモメチル）−１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２４４）の調製（スキーム４）
化合物２４０（５０．０ｇ、３９３．３９ｍｍｏｌ）とＫ_２ＣＯ_３（８１．５５ｇ、５９０．０８ｍｍｏｌ）とのＤＭＦ（３００ｍＬ）中の懸濁物に、０℃でヨウ化メチル（３６．７４ｍＬ、５９０．０８ｍｍｏｌ）を滴下した。得られた混合物を、室温まで温めさせ、次いで２時間攪拌し、その後過剰のヨウ化メチルを室温でエバポレートした。沈殿物を濾過によって除去して、ＤＭＦ濾液を減圧下、４５〜５０℃で濃縮した。得られた残渣をＭｅＣＮ／ＤＣＭ（１：９）で徹底的に抽出し、シリカゲルの短いカラムを通して濾過した。溶媒を除去した後、粗生成物を、ＭｅＣＮ（少量のＭｅＯＨを含有）およびトルエンから、再結晶して、化合物２４１（５２．２２ｇ、９４．０％）を白色結晶性固体として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ7.66 (s, 1H), 3.67 (s, 3H), 2.43 (s, 3H). LR-MS (APCI +ve): m/e 142.5 (M+1).以前に報告されたのと同一（Ｒａｖ−ＡｃｈａおよびＣｏｈｅｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８１，４６（２３），４７１７−４７２０）。

化合物２４１（３３．０ｇ、２３３．８３ｍｍｏｌ）とｔ−ブチルジクロロアセテート（６４．９０ｇ、３５０．７４ｍｍｏｌ）（ジクロロアセチルクロリド、ｔ−ブタノールおよびトリエチルアミンが含有されるＤＣＭから調製）とのＤＭＦ（４００ｍＬ）中の溶液を、カリウムｔ−ブトキシド（９１．８３ｇ、８１８．４０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（４００ｍＬ）中の懸濁液に−３５〜−２５℃（ドライアイス／ＭｅＣＮ浴）で滴下した。得られた混合物を、−２５℃でさらに２０分間攪拌し、その後に０．５ＮのＨＣｌ（約１０００ｍＬ）中に注いだ。標準の酢酸エチル／水系後処理、次いで、酢酸エチル／ヘキサン（３：２）で溶出するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、粗化合物２４２を、濃い色の固体として得て（２３．８３ｇ、３５％）、これをさらに精製することなく用いた。LR-MS (APCI +ve) m/e 290.5/292.5 (3:1, M+1).
上記で調製した化合物２４２（２３．８３ｇ、８２．２５ｍｍｏｌ）は、還流する酢酸（１２０ｍＬ）で４５分間処理した後、減圧下で乾燥するまで濃縮した。残渣の標準のＮａＨＣＯ_３／ＤＣＭ後処理、続いて酢酸エチルで溶出するシリカゲルでのカラムクロマトグラフィーによって、次に化合物２４３（１０．００ｇ、６４％）を白色固体として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ5.03 (s, 2H), 3.67 (s, 3H), 2.46 (s, 3H). LR-MS (APCI +ve): m/e 190.4/192.4 (3:1, M+1).
化合物２４３（１０．００ｇ、５２．７４ｍｍｏｌ）とＬｉＢｒ（４．８０ｇ、５５．２０ｍｍｏｌ）との酢酸エチル（５００ｍＬ）中の懸濁液を、４時間加熱還流した後、標準の酢酸エチル／水系後処理に供した。このようにして得た固体を、上記のようなＬｉＢｒ／酢酸エチルでもう１回処理した。次いで、粗生成物を、ＤＣＭ／ｉ−Ｐｒ_２Ｏから、ヘキサンの添加によって沈殿させ、５−（ブロモメチル）−１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２４４）（１１．４６ｇ、９３％）をオフホワイトの固体として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ4.88 (s, 2H), 3.64 (s, 3H), 2.46 (s, 3H). Anal. Calcd for C₅H₆BrN₃O₂.0.04hexane: C, 28.16; H, 2.96; N, 18.80%. Found: C, 27.81; H, 3.27; N, 19.05%. LR-MS (APCI +ve): m/e 234.4/ 236.4 (1:1, M+1).
１．１．２．３５−（ブロモメチル）−２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２５０）の調製（スキーム５）
化合物２３８（１２．６５ｇ、９０．００ｍｍｏｌ）のクロロホルム（１００ｍＬ）中の懸濁液に、臭素（５．５３ｍＬ、１０８．００ｍｍｏｌ）を緩徐に添加した。次いで、得られた混合物を２時間攪拌した後に、水（１３０ｍＬ）を添加した。次いで、クロロホルムを蒸留によって取り除き、得られた沈殿物を濾過によって収集して、水で洗浄して、減圧下で乾燥し、化合物２４５（１５．５０ｇ、７９％）を白色固体、融点１８０−１８１℃（報告された値と同一）（ＰｙｍａｎおよびＴｉｍｍｉｓ，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｔｒａｎｓ．，１９２３，１２３，４９４−５０３）として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ3.63 (s, 3H), 2.69 (s, 3H). Anal. Calcd for C₅H₆BrN₃O₂: C, 27.29; H, 2.75; N, 19.10%. Found: C, 27.56; H, 2.83; N, 19.10%. LR-MS (APCI +ve): m/e 220.3/222.3 (1:1, M+1).
化合物２４５（２．２０ｇ、１０．０ｍｍｏｌ）とＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）（１．９６ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）とのアセトニトリル（１００ｍＬ）中の溶液を、還流下で２時間、１０００Ｗのハロゲン化タングステンランプによって照射した。次いで、およそ半分の溶媒を、ロータリーエバポレーターによって除去した後、同じ容積の水を添加した。さらなるエバポレーションによって、白色の沈殿物を得て、これを、濾過によって収集して、水で洗浄して、減圧下で乾燥し、化合物２４６（２．８４ｇ、９５％）を白色固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) d 4.88 (s, 2H), 3.74 (s, 3H). Analysis found: C, 20.36; H, 1.74; N, 13.98. C₅H₅Br₂N₃O₂ requires: C, 20.09; H, 1.69; N, 14.06. LR-MS (+): m/e 234.4/ 236.4 (1:1, M+1). 298.3/300.3/302.3 (1:2:1, M+1).
化合物２４６（２．８０ｇ、９．３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（３０ｍＬ）中の溶液に、無水酢酸ナトリウム（１．９２ｇ、２３．４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を室温で２時間攪拌し、次いで、標準の水系酢酸エチル後処理によって、化合物２４７（２．５４ｇ，９８％）を白色固体、融点１１０−１１２℃として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) d 5.50 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.11 (s, 3H). Analysis found: C, 30.48; H, 2.82; N, 15.13. C₇H₈BrN₃O₄ requires: C, 30.24; H, 2.90; N, 15.11. LR-MS (+): m/e 278.4/ 280.4 (1:1, M+1).
化合物２４７（１．９０ｇ、６．８３ｍｍｏｌ）、テトラエチルすず（５．４２ｍＬ、２７．３４ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（７９０ｍｇ、０．６８ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（２０ｍＬ）中の混合物を、１１０〜１２０℃まで５時間加熱した後、標準の水系酢酸エチル後処理を行った。得られた粗生成物を、ＭｅＣＮ／ＤＣＭ（１：５）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製した後に、ヘキサンの添加によってＤＣＭから沈殿させて、化合物２４８（１．０４ｇ、６７％）を白色固体、融点７１−７３℃として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ5.48 (s, 2H), 3.64 (s, 3H), 2.76 (q, J = 7.43 Hz, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.37 (t, J = 7.43 Hz, 3H). Analysis found: C, 48.11; H, 5.90; N, 18.23%. C₉H₁₃N₃O₄.0.04hexane requires: C, 48.11; H, 5.92; N, 18.22%. LR-MS (+): m/e 228.5 (M+1).
化合物２４８（１．２５ｇ、５．５０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）中の溶液に、乾燥Ｋ_２ＣＯ_３（１．５２ｇ、１１．０ｍｍｏｌ）を添加した。２０分間の攪拌後、溶媒を減圧下で除去して、残渣を、ＤＣＭ中に溶解し、シリカゲルの層を通して濾過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を濃縮して白色結晶を得て、これを、濾過によって収集し、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）の混合物で洗浄して、化合物２４９（９４９ｍｇ、９３％）を、白色結晶性固体、融点１５３−１５５℃として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ4.96 (d, J = 6.80 Hz, 2H), 3.67 (s, 3H), 2.79 (t, J = 6.80 Hz, 1H), 2.74 (q, J = 7.50 Hz, 2H), 1.36 (t, J = 7.50 Hz, 3H). Analysis found: C, 45.71; H, 6.07; N, 22.87%. C₇H₁₁N₃O₃ requires: C, 45.40; H, 5.99; N, 22.68%. LR-MS (+): m/e 186.5 (M+1).
化合物２４９（６８５ｍｇ、３．７０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（３０ｍＬ）中の溶液に、０℃でトリエチルアミン（０．７７３ｍＬ、５．５５ｍｍｏｌ）、続いてＭｓＣｌ（０．３４４ｍＬ、４．４４ｍｍｏｌ）を滴下した。４５分間の攪拌後、その混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液で２回、ブラインで１回洗浄した後に、無水硫酸ナトリウムで乾燥して、セライトを通して濾過した。真空下での濾液の濃縮によって、白色固体（９７１ｍｇ）を得て、これを、^１ＨＮＭＲによって、メシラートおよびα−塩化メチル（３：１）の混合物であることを確認し、次の工程に直接用いた。この固体（９６８ｍｇ）のＴＨＦ（５０ｍＬ）中の溶液を、還流下で０．５時間、ＬｉＢｒ（６．３９ｇ、８６．８５ｍｍｏｌ）処理した。次いで、溶媒を減圧下で除去して、得られた残渣を水と酢酸エチルとの間で分配した。有機相を、水で２回およびブラインで１回洗浄した後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥して、セライトを通して濾過した。溶媒を真空中で除去して、５−（ブロモメチル）−２−エチル−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール（２５０）（８５１ｍｇ、９３％）を白色固体、融点９１−９３℃として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ4.88 (s, 2H), 3.65 (s, 3H), 2.76 (q, J = 7.60 Hz, 2H), 1.37 (t, J = 7.60 Hz, 3H). Analysis found: C, 34.41; H, 4.07; N, 16.96%. C₇H₁₀BrN₃O₂.0.04EtOAc requires: C, 34.18; H, 4.13; N, 16.70%. LR-MS (+): m/e 248.4/250.4 (1:1, M+1).
１．１．２．４５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボニトリル（２６４）の調製（スキーム７）
方法１
化合物２４６（１．４０ｇ、４．６８ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（１４ｍＬ）（数滴の水を含む）中の溶液に、Ｋ_２ＣＯ_３（６４７ｍｇ、４．６８ｍｍｏｌ）を添加した。得られた溶液を一晩攪拌した後に、標準の酢酸エチル後処理、続いてＭｅＣＮ／ＤＣＭ（５：９５−１５：８５）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、化合物２６２（３３０ｍｇ、３０％）をオフホワイトの固体として得た。¹H NMR (⁶d-DMSO, 400MHz) δ5.56 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.86 (d, J = 5.8 Hz, 2H), 3.70 (s, 3H). LR-MS (+): m/e 236.5/238.5 (1:1, M+1).
化合物２６２（３００ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）、Ｚｎ（ＣＮ）_２（９０ｍｇ、０．７６ｍｍｏｌ）、亜鉛粉末（１０ｍｇ、０．１５ｍｍｏｌ）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（２３ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）およびｄｐｐｆ（２８ｍｇ、０．０５１ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（３ｍＬ）中の混合物を、窒素下、１２０℃で３．５時間撹拌した。標準の水系ＮＨ_４Ｃｌ／酢酸エチル後処理、続いて酢酸エチル／ヘキサン（１：１〜２：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、次に化合物２６３（１８０ｍｇ）をオフホワイトの固体として得て、これが、^１ＨＮＭＲによって、少量の未反応の出発物質２６２を含むことを確認し、直接、次の工程に用いた。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ5.09 (d, J = 6.7 Hz, 2H), 4.00 (s, 3H), 2.49 (t, J = 6.7 Hz, 1H).
化合物２６３（１７３ｍｇ、約０．９３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液に、０℃でＭｓＣｌ（０．０８８ｍＬ、１．１４ｍｍｏｌ）、続いてＤＩＰＥＡ（０．１８２ｍＬ、１．０４ｍｍｏｌ）を滴下した。１時間の攪拌後、反応混合物を、標準の水系ＮＨ_４Ｃｌ／酢酸エチル後処理に供して、黄色の油状物（２３７ｍｇ；^１ＨＮＭＲによる、メシラートとα−塩化メチルとの混合物）を得て、これを直接用いた。この油状物（２３５ｍｇ、約０．９０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液に、ＬｉＢｒ（１．５７ｇ、１８．０６ｍｍｏｌ）を添加した。０．５時間の加熱還流後、溶媒を真空中で取り除き、残渣を標準の水系ＮＨ_４Ｃｌ／酢酸エチル後処理に供した。粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサン（１：４〜１：２）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによってさらに精製して、５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボニトリル（２６４）（６５ｍｇ、３工程にまたがって２１％）を、ピンク色の油状物として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ4.86 (s, 2H), 3.95 (s, 3H). LR-MS (+): m/e 277.6/279.6 (1:1, M+1+MeOH).
方法２
化合物２４５（１．１０ｇ、５．００ｍｍｏｌ）、Ｚｎ（ＣＮ）_２（３５２ｍｇ、３．００ｍｍｏｌ）、亜鉛粉末（３９ｍｇ、０．６０ｍｍｏｌ）、Ｐｄ_２（ｄｂａ）_３（９２ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）およびｄｐｐｆ（１１１ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（１０ｍＬ）中の混合物を、窒素下、１２０℃で３時間撹拌した。次いで、この反応物を、水で希釈して、標準の酢酸エチル後処理、続いて酢酸エチル／ヘキサン（３：４の次に１：１）で溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、化合物２６５（６５７ｍｇ、７９％）をオフホワイトの固体、融点９９−１０１℃として得た。¹H NMR (CDCl₃) δ 3.84 (s, 3H), 2.72 (s, 3H). Analysis found: C, 43.64; H, 3.58; N, 33.86. C₆H₆N₄O₂ requires: C, 43.38; H, 3.64; N, 33.72.
化合物２６５（１６６ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、１，３ジブロモ−５，５−ジメチルヒダントイン（ＤＢＤＭＨ）（２８６ｍｇ、１．００ｍｍｏｌ）、２，２’−アゾビスイソブチロニトリル（ＡＩＢＮ）（６６ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１０ｍＬ）中の混合物を、５日間、加熱還流した後、減圧下で濃縮した。得られた残渣を、酢酸エチル／ヘキサン（１：２の次に１：１）で溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボニトリル（２６４）（１３７ｍｇ、５６％）を無色の油状物として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ 4.86 (s, 2H), 3.95 (s, 3H). Analysis found: C, 30.17; H, 1.99; N, 22.25. C₆H₅BrN₄O₂.0.07EtOAc requires: C, 30.03; H, 2.23; N, 22.30. HRMS (ESI+, ^79/81Br) found: m/z 266.9490/268.9475 (M+Na), calcd. for C₆H₅ ^79/81BrN₄NaO₂ ⁺: 266.9488/268.9468.
１．１．２．５５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボキサミド（２６６）の調製（スキーム７）
５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボニトリル（２６４）（７０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の９０％のＨ_２ＳＯ_４（１ｍＬ）中の溶液を、６５−７０℃で１時間加熱した後、水での希釈および標準の酢酸エチル後処理によって、５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−２−カルボキサミド（２６６）（６７ｍｇ、８４％）を、白色固体、融点２２０−２２２℃として得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.18 (s, 1H), 7.87 (s, 1H), 5.05 (s, 2H), 4.02 (s, 3H). HR-MS (APCI+, ^79/81Br) found: m/z 262.9770/264.9752 (M+1), calcd. for C₆H₈ ^79/81BrN₄O₃ ⁺: 262.9774/264.9754.
１．１．２．６５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール（２７０）の調製（スキーム８）
化合物２４７（５００ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）、トリブチル（１−プロピニル）すず（１．６４ｍＬ、５．３９ｍｍｏｌ）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（４１６ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）のＮＭＰ（１５ｍＬ）中の混合物を、８０℃で一晩加熱し（１４時間）、その後、標準の水系−酢酸エチル後処理を行った。得られた粗生成物をさらにＭｅＣＮ／ＤＣＭ（勾配は１：２０〜１：５）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、化合物２６７（１４７ｍｇ、３４％）を白色固体、¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ5.47 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H). LR-MS (+): m/e 238.5 (M+1); followed by compound 268 (105 mg, 30%) also as white solid, ¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ4.96 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.60 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.14 (s, 3H). LR-MS (+): m/e 196.5 (M+1).化合物２６８は、化合物２６７を、ＭｅＯＨの中のＫ_２ＣＯ_３で処理することによって、定量的に得た。

化合物２６８（１１０ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）中の溶液に、０℃でトリエチルアミン（０．１１８ｍＬ、０．８４ｍｍｏｌ）、続いてＭｓＣｌ（０．０５２ｍＬ、０．６８ｍｍｏｌ）を滴下した。０℃で３０分間、室温で３０分間の後、その混合物を、飽和塩化アンモニウム水溶液およびブラインで２回洗浄し、その後、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、セライトを通して濾過した。減圧下の濃縮によって、化合物（ｓ）２６９（１４５ｍｇ、約９４％）をオフホワイトの固体として得て、これが、^１ＨＮＭＲによって、メシラートおよび塩化物の混合物（３．６：１）であることを確認し、さらに精製することなく用いた。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) for the mesylate: δ5.62 (s, 2H), 3.81 (s, 3H), 3.13 (s, 3H), 2.15 (s, 3H); for the chloride: δ5.02 (s, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.14 (s, 3H). LR-MS (+): 274.5 (M+1 of the mesylate); 214.4/216.4 (3:1, M+1 of the chloride).
混合物２６９（１４５ｍｇ、約０．５３ｍｍｏｌ）を、還流ＴＨＦ（１０ｍＬ）中のＬｉＢｒ（９２２ｍｇ、１０．６１ｍｍｏｌ）で３０分間処理した。次いで、ＴＨＦを、真空中で取り除き、得られた残渣を水と酢酸エチルとの間で分配した。有機相を、水およびブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、セライトを通して濾過した後に、真空中で濃縮した。このようにして得られた粗生成物を、酢酸エチル／ヘキサン（１：１）で溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーによって精製して、５−（ブロモメチル）−１−メチル−４−ニトロ−２−（１−プロピニル）−１Ｈ−イミダゾール（２７０）（９５ｍｇ、６９％）を白色固体として得た。¹H NMR (CDCl₃, 400MHz) δ4.86 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.14 (s, 3H). LR-MS (+): m/e 258.5/260.5 (1:1, M+1).
１．１．３四級アンモニウム塩プロドラッグの合成
方法Ａ：Ｎ−メチル−２−ピロリジノン（ＮＭＰ）中の四級アンモニウム塩プロドラッグの調製、続いてアセトニトリル沈殿
式Ｉのジメチルアミン−保有キナーゼインヒビターのＮＭＰ中の溶液に、室温でα−メチル臭化物トリガー（１．０−１．２当量）を添加した。得られた混合物を、一晩（約１５時間）攪拌した。次いで、アセトニトリルを、この反応混合物に滴下して、沈殿物の形成が開始するまで攪拌を続けた。次いで、得られた混合物をさらに２時間攪拌し、その後、沈殿物を濾過によってまたは遠心分離によって収集して、アセトニトリル、酢酸エチルおよびヘキサンで洗浄した。次いで、真空下での乾燥によって、四級アンモニウム塩プロドラッグを、白色またはオフホワイトの固体として得た。必要に応じて、この生成物を、さらにＮＭＰおよびＭｅＣＮからの再結晶化によって精製した。

１．１．３．１（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１２）の調製（スキーム１０）
ＮＭＰ（１．２ｍＬ）の中の化合物１（５００ｍｇ、０．９６ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（２３１ｍｇ、１．０５ｍｍｏｌ）との、方法Ａによる反応によって、（２Ｅ）−４−［（４−｛３−クロロ−４−［（３−クロロベンジル）オキシ］アニリノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１２）（５１７ｍｇ、７３％）、融点１８２−１８６℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.28 (s, 1H), 10.25 (s, 1 H), 9.04 (s, 1 H), 8.98 (s, 1 H), 8.61 (s, 1 H), 8.14 (s, 1 H), 7.98 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 7.74-7.72 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1 H), 7.56 (s, 1H), 7.47-7.40 (m, 3 H), 7.28 (d, J = 9.1 Hz, 1 H), 7.06-6.98 (m, 1H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.26 (s, 2H), 5.05 (br, 2 H), 4.44 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.13 (s, 6 H). Analysis found: C, 48.93; H, 3.92; N, 16.27. C₃₁H₃₀BrCl₂N₉O₄.H₂O.0.1EtOAc requires: C, 48.96; H, 4.29; N, 16.37.
１．１．３．２（２Ｅ）−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１３）の調製（スキーム１０）
方法Ａによる、ＮＭＰ（１．８ｍＬ）中の化合物２（５００ｍｇ、１．０１ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（２４４ｍｇ、１．１１ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１３）（５３８ｍｇ、７４％）、融点１８３〜１８７℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.27 (s, 1H), 10.35 (s, 1 H), 9.02 (s, 2 H), 8.56 (s, 1 H), 8.17-8.14 (m, 3 H), 7.75-7.69 (m, 2H), 7.40-7.35 (m, 1H), 7.12-6.99 (m, 4H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.71 (s, 2H), 5.05 (br, 2 H), 4.44 (d, J = 7.0 Hz, 2 H), 3.87 (s, 3 H), 3.13 (s, 6 H). Analysis found: C, 51.71; H, 4.53; N, 20.33. C₃₂H₃₁BrFN₁₁O₃.1.5H₂O・0.1EtOAc requires: C, 51.72; H, 4.66; N, 20.48.
１．１．３．３（２Ｅ）−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１４）の調製（スキーム１１）
方法ＡによるＮＭＰ（０．５ｍＬ）中の化合物２（１００ｍｇ、０．２０ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２４４（５２ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−Ｎ−［（１，２−ジメチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−［（４−｛［１−（３−フルオロベンジル）−１Ｈ−インダゾール−５−イル］アミノ｝ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル）アミノ］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１４）（９３ｍｇ、６３％）、融点１８８−１９２℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.27 (s, 1H), 10.38 (s, 1 H), 9.03 (s, 2 H), 8.56 (s, 1 H), 8.17 (s, 2H), 7.76-7.68 (m, 2H), 7.40-7.35 (m, 1H), 7.12-6.99 (m, 4H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.71 (s, 2H), 5.05 (br, 2 H), 4.43 (d, J = 6.8 Hz, 2 H), 3.75 (s, 3 H), 3.11 (s, 6 H), 2.44 (s, 3H). Analysis found: C, 50.81; H, 4.76; N, 19.42. C₃₃H₃₃BrFN₁₁O₃.2.9H₂O requires: C, 50.63; H, 5.00; N, 19.64.
１．１．３．４（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１５）の調製（スキーム１０）
方法ＡによるＮＭＰ（１ｍＬ）中の化合物３（５００ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（２２５ｍｇ、１．０２ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−（｛４−［３−クロロ−４−（２−ピリジニルメトキシ）アニリノ］ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル｝アミノ）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１５）（６１０ｍｇ、８４％）、融点１８９−１９１℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.28 (s, 1H), 10.25 (s, 1 H), 9.04 (s, 2 H), 8.98 (s, 1 H), 8.61-8.60 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.99 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.91-7.87 (dt, J = 1.6, 7.7 Hz, 1H), 7.74-7.71 (dd, J = 2.5, 8.94 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.39-7.36 (dd, J = 5.3, 7.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.06-6.98 (m, 1H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.31 (s, 2H), 5.05 (br, 2 H), 4.44 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.11 (s, 6 H). Analysis found: C, 48.65; H, 4.34; N, 18.58. C₃₀H₃₀BrClN₁₀O₄.1.8H₂O requires: C, 48.54; H, 4.56:, N, 18.87.
１．１．３．５（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１６）の調製（スキーム１０）
方法ＡによるＮＭＰ（１．２ｍＬ）中の化合物４（５００ｍｇ、１．２０ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（２９０ｍｇ、１．３２ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジクロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１６）（６４８ｍｇ、８５％）、融点１９１−１９５℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.32 (s, 1H), 10.41 (s, 1 H), 9.09 (s, 1 H), 9.02 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.27 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 8.14 (s, 1H), 7.93-7.90 (dd, J = 8.8, 2.4 Hz, 1 H), 7.67 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.07-6.99 (m, 1 H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.06 (br, 2 H), 4.45 (d, J = 7.2 Hz, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.13 (s, 6 H). Analysis found: C, 43.86; H, 3.82; N, 18.79. C₂₄H₂₄BrCl₂N₉O₃.H₂O.0.1EtOAc requires: C, 44.13; H, 4.07; N, 18.98.
１．１．３．６（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１７）の調製（スキーム１０）
方法ＡによるＮＭＰ（１．２ｍＬ）中の化合物５（５００ｍｇ、１．０８ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（２６２ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１７）（６５０ｍｇ、８８％）、融点２００〜２０４℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.32 (s, 1H), 10.40 (s, 1 H), 9.08 (s, 1 H), 9.02 (s, 1 H), 8.70 (s, 1 H), 8.37 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 8.14 (s, 1H), 7.98-7.95 (dd, J = 8.8, 2.5 Hz, 1 H), 7.66 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.06-6.99 (m, 1 H), 6.80 (d, J = 15.3 Hz, 1 H), 5.05 (br, 2 H), 4.44 (d, J = 7.2 Hz, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.13 (s, 6 H). Analysis found: C, 41.16; H, 3.67; N, 17.55. C₂₄H₂₄Br₂ClN₉O₃.H₂O.0.1EtOAc requires: C, 41.36; H, 3.81; N, 17.79.
１．１．３．７（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１８）の調製（スキーム１０）
方法ＡによるＮＭＰ（１．５ｍＬ）中の化合物６（７００ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（３６７ｍｇ、１．６７ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−｛［４−（４−ブロモ−３−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１８）（８７５ｍｇ、８５％）、融点２０９〜２１３℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.35 (s, 1H), 10.43 (s, 1 H), 9.09 (s, 1 H), 9.03 (s, 1 H), 8.71(s, 1 H), 8.27 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 8.15 (s, 1H), 7.86-7.78 (m, 2 H), 7.07-6.99 (m, 1 H), 6.80 (d, J = 15.3 Hz, 1 H), 5.05 (br, 2 H), 4.44 (d, J = 6.8 Hz, 2 H), 3.87 (s, 3 H), 3.12 (s, 6 H). Analysis found: C, 40.97; H, 3.68; N, 18.03. C₂₄H₂₄Br₂ClN₉O₃.1.2H₂O requires: C, 40.98; H, 3.78; N, 17.92.
１．１．３．８（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１９）の調製（スキーム１０）
方法ＡによるＮＭＰ（１．５ｍＬ）中の化合物７（７００ｍｇ、１．３８ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（３３５ｍｇ、１．５２ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−｛［４−（３，４−ジブロモアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１９）（８４０ｍｇ、８４％）、融点２１５−２１９℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.35 (s, 1H), 10.41 (s, 1 H), 9.09 (s, 1 H), 9.02 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 8.37 (d, J = 2.1 Hz, 1 H), 8.14 (s, 1H), 7.91-7.88 (dd, J = 8.8, 2.2 Hz, 1 H), 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 1 H), 7.07-7.01 (m, 1 H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.04 (br, 2 H), 4.44 (d, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.87 (s, 3 H), 3.12 (s, 6 H). Analysis found: C, 38.79; H, 3.34; N, 16.70. C₂₄H₂₄Br₃N₉O₃.H₂O requires: C, 38.73; H, 3.52; N, 16.94.
１．１．３．９（２Ｅ）−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２０）の調製（スキーム１０）
方法ＡによるＮＭＰ（１ｍＬ）中の化合物８（５８６ｍｇ、１．５０ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（３６３ｍｇ、１．６５ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−｛［４−（３−エチニル−４−フルオロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２０）（６４５ｍｇ、７０％）、融点１９８℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.31 (s, 1H), 10.36 (s, 1 H), 9.06 (s, 1 H), 9.00 (s, 1 H), 8.65 (s, 1 H), 8.14 (s, 1H), 8.03 (br, 1H), 7.88 (br, 1H), 7.36 (t, J = 9.1 Hz, 1 H), 7.06-6.99 (m, 1 H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.06 (br, 2 H), 4.53 (s, 1H), 4.45 (d, J = 7.0 Hz, 2 H), 3.88 (s, 3 H), 3.13 (s, 6 H). Analysis found: C, 48.61; H, 4.37; N, 18.78. C₂₆H₂₅BrFN₉O₃.2H₂O.0.2EtOAc requires: C, 48.47; H, 4.64; N, 18.98.
１．１．３．１０（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２１）の調製（スキーム１０）
方法ＡによるＮＭＰ（１．２ｍＬ）中の化合物９（５００ｍｇ、１．２３ｍｍｏｌ）とα−メチル臭化物２３９（２９７ｍｇ、１．３５ｍｍｏｌ）との反応によって、（２Ｅ）−４−｛［４−（４−クロロ−３−エチニルアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（２１）（６３０ｍｇ、８２％）、融点１９９〜２０２℃（分解）を得た。¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 11.34 (s, 1H), 10.39 (s, 1 H), 9.08 (s, 1 H), 9.02 (s, 1 H), 8.69 (s, 1 H), 8.17 (d, J = 2.5 Hz, 1 H), 8.14 (s, 1H), 7.96-7.93 (dd, J = 8.9, 2.5 Hz, 1 H ), 7.59 (d, J = 8.9 Hz, 1 H), 7.06-6.99 (m, 1 H), 6.80 (d, J = 15.2 Hz, 1 H), 5.05 (br, 2 H), 4.60 (s, 1H), 4.44 (d, J = 7.0 Hz, 2 H), 3.87 (s, 3 H), 3.12 (s, 6 H). Analysis found: C, 48.16; H, 4.22; N, 19.19. C₂₆H₂₅BrClN₉O₃.1.2H₂O.0.1EtOAc requires: C, 48.24; H, 4.32; N, 19.18.
２．化合物の有効性
２．１細胞増殖の阻害性活性
２．１．１．Ｐａｎ−ｅｒｂＢキナーゼインヒビター類
式Ｉのキナーゼインヒビター（化合物１−９）類を、先行文献との比較を得るために選択された３つのヒト癌腫細胞株の増殖を阻害する能力について試験した：Ａ４３１（類表皮）（これは、ｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）を過剰発現する）；Ｈ１９７５（非小細胞肺癌）（これは、承認された可逆性ｅｒｂＢ１インヒビターであるエルロチニブに対して耐性を付与することが公知であるｅｒｂＢ１の二重変異型であるｅｒｂＢ１Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍを過剰発現する）、およびＳＫＯＶ３（卵巣）（これは、ｅｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を過剰発現する）。この細胞を、有酸素条件下で２４時間または無酸素条件下で４時間、続いて酸素条件下で２０時間のいずれか、試験化合物に曝した。次いで、それらを薬物なしで洗浄して、さらに４日間インキュベートして、その後に、スルホローダミンＢで細胞増殖のために染色した。ＩＣ５０値と呼ばれる、未処理のコントロールウェルに対して５０％まで細胞増殖を阻害するために必要な化合物の濃度を算出した。

結果を表１にまとめる。

表１の脚注
^ａ化合物の用量応答曲線は、１０の濃度で決定した。細胞を、試験化合物に対して２４時間曝露した後、薬物なしの培地で洗浄した（×３回）。ＩＣ５０（ｕｍｏｌ／Ｌ）の値とは、未処理のコントロールに対して５０％まで細胞増殖を阻害するのに必要な濃度である。値は、２〜８の独立した決定の平均（％ＣＶ＜２０（全例で））である。^ｂ実験は完全に有酸素条件下で行った。^ｃ２４時間の薬物曝露の最初の４時間は、無酸素条件下で行った。^ｄ低酸素細胞毒性比（ＨｙｐｏｘｉｃＣｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙＲａｔｉｏ）＝有酸素条件のみを受けた細胞に対して４時間の無酸素を受けた細胞についての実験内のＩＣ５０の変化倍数。

不可逆性のｅｒｂＢ１、２、４インヒビター類である１、２、３、４、５、６、７、８および９は、Ｈ１９７５細胞（ＩＣ５０＝１．３〜０．１５ｕｍｏｌ／Ｌ）およびＳＫＯＶ３細胞（ＩＣ５０＝１．８〜０．２ｕｍｏｌ／Ｌ）よりも有酸素のＡ４３１細胞（ＩＣ５０＝０．２８〜０．００５ｕｍｏｌ／Ｌ）の増殖をさらに強力に阻害し、この細胞が、３つの細胞株にまたがって全ての化合物について、０．５〜３．３の範囲におよぶ実験内ＨＣＲで４時間の無酸素を受けた場合、なんら有意な力価の変化を示さなかった。

２．１．２汎（ｐａｎ）−ｅｒｂＢインヒビター類のプロドラッグ
式ＩＩＩの選択されたプロドラッグ化合物（化合物１２−２１）を、先行文献と比較するために選択した、以下の３つのヒト癌腫細胞株の増殖を阻害する能力について試験した：Ａ４３１（類表皮）（これは、ｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）を過剰発現する）；Ｈ１９７５（非小細胞肺癌）（これは、承認された可逆性ｅｒｂＢ１インヒビターであるエルロチニブに対して耐性を付与することが公知であるｅｒｂＢ１の二重変異型であるｅｒｂＢ１Ｌ８５８Ｒ／Ｔ７９０Ｍを過剰発現する）、およびＳＫＯＶ３（卵巣）（これは、ｅｒｂＢ２（ＨＥＲ２）を過剰発現する）。この細胞を、有酸素条件下で２４時間または無酸素条件下で４時間、続いて酸素条件下で２０時間、試験化合物に曝した。次いで、それらを薬物なしで洗浄して、さらに４日間インキュベートして、その後に、スルホローダミンＢで細胞増殖のために染色した。ＩＣ５０値と呼ばれる、未処理のコントロールウェルに対して５０％まで細胞増殖を阻害するために必要な化合物の濃度を算出した。

結果を表２にまとめる。

表２の脚注
^ａ化合物の用量応答曲線は、１０の濃度で決定した。細胞を、試験化合物に対して２４時間曝露した後、薬物なしの培地で洗浄した（×３回）。ＩＣ５０（ｕｍｏｌ／Ｌ）の値とは、未処理のコントロールに対して５０％まで細胞増殖を阻害するのに必要な濃度である。値は、２〜８の独立した決定の平均（％ＣＶ＜２０（全例で））である。^ｂ実験は完全に有酸素条件下で行った。^ｃ２４時間の薬物曝露の最初の４時間は、無酸素条件下で行った。^ｄ低酸素細胞毒性比＝有酸素条件のみを受けた細胞に対して４時間の無酸素を受けた細胞についての実験内のＩＣ５０の変化倍数。

表２の全てのプロドラッグ（１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０および２１）は、細胞が４時間の無酸素状態を受けた後、３つ全ての細胞の増殖を阻害するのに有意に強力であった。低酸素細胞毒性比（ｈｙｐｏｘｉｃｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙｒａｔｉｏｓ）（ＨＣＲ）は、４−ニトロイミダゾール還元性トリガーの低酸素選択性還元、続いて不可逆性ｅｒｂＢ１、２、４インヒビターを遊離するトリガーフラグメンテーションと一致して、Ａ４３１細胞では８〜９６、Ｈ１９７５細胞では１４〜８９、そしてＳＫＯＶ３細胞では１５〜５２８におよんだ。

２．２．細胞酵素阻害性活性
化合物３、５および６を、それらがＥＧＦ刺激性Ａ４３１細胞で、ｅｒｂＢ１（ＥＧＦＲ）、およびｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）の自己リン酸化を阻害する能力について、リン−ｅｒｂＢ１およびリン−Ｅｒｋ１／２状態のウエスタンイムノブロット測定によって、試験した。

Ａ４３１細胞を、６ウェルのプレート（αＭＥＭ＋５％のＦＣＳを含む）に播種した。翌日、プレートを、無血清の培地で１回洗浄し、無血清培地（αＭＥＭ）中で１８時間増殖させた後に、ある範囲のインヒビターまたはプロドラッグの濃度に１時間曝し、次いで１５分間、１００ｎｇ／ｍｌの上皮細胞増殖因子（ＥＧＦレセプターリガンド）で刺激した。次に、細胞を、冷却ＰＢＳで洗浄して、氷上で改変ＲＩＰＡ緩衝液中に溶解した（３０分）。溶解液をボルテックスして、スピンすることによって清明にした後、サンプルのタンパク質濃度を、ＢＣＡアッセイによって測定した。ウエスタンブロット分析のために、１ウェルあたり５μｇの総タンパク質をＮｕＰＡＧＥ４〜１２％ゲルにロードして、１５０Ｖ（１時間）泳動した後、０．４５μｍのニトロセルロース膜に転写し、続いて２％のＢＳＡが含有されるＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ０．１％で１時間ブロッキングした。全ての抗体を２％のＢＳＡＴＢＳ−Ｔｗｅｅｎ０．１％中に希釈して、リン−ＥＧＦＲ（Ｔｙｒ１０６８）を検出するために、モノクローナル抗体（１：５００；ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｌｉｎｇ＃２２３４）を４℃で一晩インキュベートして、結合を、ヤギ−抗−ウサギ−ＩｇＧ−ＨＲＰ結合体化二次抗体（１：５０００；ＳａｎｔａＣｒｕｚ＃ＳＣ２０５４；３ｈＲＴ）で検出した。下流のリン−ｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）を検出するために、モノクローナル抗体（ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｌｉｎｇ＃４３７０）を１：５００希釈で用いた。次いで、ブロットをヤギ抗−ウサギＩｇＧ−ＨＲＰ結合体化二次抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．ｓｃ−２０５４）を用いて３時間、１：５０００の比で処理した。ゲルのロードにおける不正確性を正規化するために、各々のブロットは、抗−β−アクチン抗体（ＡｂａｃｕｓＡＬＳ＃ＭＡＢ−１５０１Ｒ，１：２０００希釈）でプローブした。翌日、そのブロットを、ヤギ抗−マウスＩｇＧ−ＨＲＰ結合体化二次抗体（ＳａｎｔａＣｒｕｚＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．ｓｃ−２０５５）を用いて１時間、１：５０００の比で処理した。タンパク質のバンドを、ＡｍｅｒｓｈａｍＥＣＬプラス・ウエスタンブロット検出試薬（ＰｌｕｓＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇＤｅｔｅｃｔｉｏｎＲｅａｇｅｎｔ）（ＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅＲＰＮ２１３２）を用いて可視化した。濃度測定は、ＩｍａｇｅＪｓｏｆｔｗａｒｅを用いて決定した。β−アクチンに対して正規化した値を、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ１１．０．上にプロットした。

化合物３、５および６は、それぞれ０．０４８３、０．０３９５および０．０２５０μＭというＩＣ５０で細胞性ｅｒｂＢ１（それぞれ、図１２Ａ、１３Ａおよび１４Ａ）の強力なインヒビターであることが示された。さらに、Ａ４３１細胞におけるＥＧＦＲリン酸化の抑制は、ＥＧＦＲ活性によって左右されるシグナル伝達ネットワークの調節を示す下流のｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）リン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）の協調喪失によって達成された（それぞれ、図１２Ｂ、図１３Ｂおよび図１４Ｂ)。対照的に、四級アンモニウム塩誘導体プロドラッグ１５は、ｅｒｂＢ１自己リン酸化の阻害において、インタクトなＡ４３１細胞で、そのそれぞれのインヒビターである化合物３に比べて有効性が１１０分の１であった（５．２９μＭというＩＣ５０；図１５Ａおよび図１６）（図１２Ａ）。同様の力価の喪失が、ｐ４４／４２ＭＡＰＫ（Ｅｒｋ１／２）リン酸化（Ｔｈｒ２０２／Ｔｙｒ２０４）について観察され（それぞれ化合物３およびプロドラッグ１５について、０．１７９μＭおよび８．９μＭというＩＣ５０（図１２Ｂおよび図１５Ｂを比較）、これによって、ＥＧＦＲ活性によって左右される下流のシグナル伝達ネットワークの有効な調節が不足していることが示される。それぞれのバンド濃度測定の値を、リン−ＥＧＦＲの用量依存性の阻害についてプロットしたところ（β−アクチンについて補正）、プロドラッグ１５が化合物３に対して１１０倍不活性化されることが明らかである。このプロドラッグの細胞のｅｒｂＢ１阻害性力価のこの喪失は、正に荷電された四級アンモニウム塩の存在に起因するこのプロドラッグの細胞排除に主に起因する。

２．３放射線分解還元
電子親和性プロドラッグは、正常な組織における正常酸素条件下で比較して固形腫瘍の低酸素領域における一電子過程によって選択的に還元されて、細胞毒性エフェクターが形成または遊離され得る（ＢｒｏｗｎおよびＷｉｌｓｏｎ，ＮａｔｕｒｅＲｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ，２００４，４，４３７−４４７）。このプロドラッグは、ＮＨＥに対して−０．６Ｖ〜−０．２Ｖ、好ましくは−０．５Ｖ〜−０．３Ｖの一電子還元電位Ｅ（１）を保有するトリガー部分を含むべきである。多くの化合物のＥ（１）値は、文献から得てもよいし（例えば，Ｗａｒｄｍａｎ，Ｐ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｆ．Ｄａｔａ，１９８９，１８，１６３７−１７５５）または多数の方法によって決定してもよい。パルスラジオリシス法（ｐｕｌｓｅｒａｄｉｏｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ）は、例えば、それらの一電子還元の際に形成されたプロドラッグのラジカルアニオンと、ビオロゲンおよびキノン化合物などの参照標準との間の平衡定数を測定し、そのデータから、化合物のＥ（１）値を算出できる。（ＭｅｉｓｅｌおよびＣｚａｐｓｋｉ．Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．，１９７５，７９，１５０３〜１５０９）。プロドラッグ１３、１５〜１９のＥ（１）値は、パルスラジオリシス法によって測定し、−０．４２８Ｖ〜−０．４１７Ｖの範囲であることを確認した（表３）。全てが、それらのラジカルアニオンの酵素的形成を生物学的状態で可能にする適切なＥ（１）値を有すると考えられる。

適切なＥ（１）値を有するプロドラッグを、溶液中のプロドラッグのラジオリシス（放射線分解）後に、多数の方法によって、エフェクター部分を遊離する能力について試験してもよい。例えば、放射線分解の前後の質量分析法（ＭＳ）および／または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって、出発化合物および放射線分解の結果として形成された生成物を特定する。いくつかの一電子還元剤が、異なる溶質を含む溶液の放射線分解の際に生成され得る。例えば、ギ酸イオンを含むγ線照射溶液中で形成されたＣＯ_２ ^・−ラジカルは、−１．９０Ｖという低いＥ（１）を保有し（Ｓｃｈｗａｒｚら、Ｉｎｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９８５，２４，４３３〜４３９）、より高いＥ（１）の化合物への容易な電子伝達を受ける。使用される照射条件下では、一電子還元当量における０．６６μＭという濃度（ＣＯ_２ ^・−ラジカル）が、吸収された放射線量の１Ｇｙ（Ｊｋｇ^−１）あたりに生成される。（Ｍｕｌａｚｚａｎｉら、Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．，１９８０，９０，５３４７〜５３５２）。溶液の放射線分解の際に生成される還元性当量の濃度とプロドラッグ濃度中の損失を比較することによって、各々のプロドラッグの完全な損失のために一電子の還元が必要であるか、または多電子の還元が必要であるかを決定することができる。典型的には、プロドラッグの一電子除去の証拠は、同じプロドラッグ分子の多電子還元を最小化するために、０．９５還元当量がこのプロドラッグに移動された後に求められる。プロドラッグの一電子除去の場合、これはそのラジカルアニオンのフラグメンテーションを示す場合が多い。この結論はさらに、遊離された細胞毒性エフェクターおよび一過性のベンジル型ラジカルから生じる生成物の組み合わせたＨＰＬＣ−ＭＳ特定によって支持される（例えば、Ｈ原子除去によって形成されるメチルニトロ芳香族化合物（ＭＮＡ））。これは、特定の関連するアリールメチル四級窒素マスタード類の場合に生じることが示された（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，１０１，９７０４−９７０９；Ｗｉｌｓｏｎら．Ｒａｄｉａｔ．Ｒｅｓ．，１９９８，１４９，２３７−２４５）。プロドラッグ１７について得られたデータは、その消費とＨＰＬＣ−ＭＳによって検出される遊離のエフェクター（化合物５）で、一電子還元レベルで一致している（０．９５還元性等価レベルでプロドラッグの損失が５０％を超える）（表３）。

還元性プロドラッグは、トリガー部分の一電子還元の際に制御されたフラグメンテーション率定数を有するように選択されることが望ましい。腫瘍細胞の低酸素領域において高濃度の細胞毒性エフェクターを放出するために高速のフラグメンテーションが望ましいが、これは、正常酸素のもとで正常な組織細胞についてとは異なる。エフェクターの遊離を効率的に阻害する、酸素による一電子還元のニトロアレーンベースのプロドラッグの逆酸化の速度定数ｋＯ_２は、以下の表現で示される：−（Ｗａｒｄｍａｎら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｓｙｍｐ．，１９９５，６１，１７１−１９４；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００５，３，２１６７−２１７４）。

ｌｏｇｋＯ_２／Ｍ^−１ｓ^−１＝（４．６±０．１）−（５．０±０．２）×Ｅ（１）Ｃ／Ｃ^・−
ここでＥ（１）Ｃ／Ｃ^・−は、プロドラッグの一電子還元電位である。このことは、Ｅ（１），−０．５Ｖ〜−０．３Ｖの好ましい範囲にわたって、正常細胞の逆酸化の、みかけの一次速度定数（これは、生理学的条件下で、１０μＭ程度の低い酸素濃度であってもよい）が、１３０ｓ^−１から１３ｓ^−１まで低下することを意味する。従って、プロドラッグのＥ（１）における好ましい範囲にまたがって、正常酸素の組織で十分な逆酸化を可能にする、従ってプロドラッグの低酸素選択性フラグメンテーション（例えば、５：１）を付与する、フラグメンテーション速度の範囲は最も好ましくは、所望のＥ（１）の上限においてプロドラッグについて約２〜３０ｓ^−１、そして所望のＥ（１）の下限においてプロドラッグについて約２０〜３００ｓ^−１という領域である。一電子還元プロドラッグのフラグメンテーションの速度定数であるｋｆｒａｇは、ラジカルアニオンのフラグメンテーションの際に生じるベンジル型ラジカルの吸収スペクトルの時間分解形成を観察するためにパルス放射線分解を用いて測定してもよい（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ａ，１９９７，１０１，９７０４〜９７０９）。プロドラッグ１３、１５〜１７のｋｆｒａｇ値は、パルス放射線分解によって測定し、表３に示す。全てのプロドラッグが、Ａ４３１、Ｈ１９７５およびＳＫＯＶ３細胞ベースの抗増殖性アッセイにおいてインビトロで許容される低酸素細胞毒性比（ＨＣＲ）を示すものと一致して、所望の範囲で、低酸素下の一電子還元の際のフラグメンテーション速度を有する（表３）。

表３の脚注
^ａメチルビオロゲンに対して決定した、Ｅ（１）ＭＶ^２＋／ＭＶ^＋．＝−４４７±７ｍＶ。^ｂ３６０〜３９０ｎｍの領域で吸収性のベンジル型ラジカルの形成のためのパルス放射線分解のデータ。

^ｃ０．９５還元当量のＨＰＬＣ−ＭＳで行った測定；＞５０％は、一電子還元の際のフラグメンテーションを示す。^ｄＨＰＬＣ−ＭＳによるメチルニトロ芳香族（ＭＮＡ）の検出。

２．３．１放射線分解還元の実験
還元当量の導入の際に、エフェクターを遊離するための溶液中の例示的プロドラッグの相対活性を、^６０Ｃｏγ−線照射器の使用によって決定した。プロドラッグは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ水（５ｍＭのリン酸ナトリウムによってｐＨ７で緩衝化された５０ｍＭギ酸ナトリウムを添加された）中に、５０μＭ以下の濃度で溶解した。溶液は、気密のガラス製品中に含まれ、Ｆｒｉｃｋｅ線量測定を用いて以前に測定した、７．５Ｇｙ／分の線量での放射線分解の前に、連続的にＮ_２Ｏガスで３０分間飽和された（ＦｒｉｃｋｅおよびＨａｒｔ，「ＣｈｅｍｉｃａｌＤｏｓｉｍｅｔｒｙ」ＲａｄｉａｔｉｏｎＤｏｓｉｍｅｔｒｙ第２巻，Ａｔｔｒｉｘ，Ｆ．Ｈ．；Ｒｏｅｓｃｈ，Ｗ．Ｃ．；Ｔｏｃｈｉｌｉｎ，Ｅ．（編集），ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９６６，１６７〜２３９頁）。上記で使用される放射線条件下で、一電子還元当量において０．６６μＭの濃度（ＣＯ_２ ^・−ラジカル）が、１Ｇｙあたりに生成され（Ｍｕｌａｚｚａｎｉら、Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．，９０，５３４７〜５３５２，１９８０）、プロドラッグ（Ｐ）は、電子伝達によって還元される。

γ−照射＋Ｈ_２Ｏ→ｅ⁻ _ａｑ＋Ｈ^・＋^・ＯＨ＋Ｈ_３Ｏ^＋
ｅ⁻ _ａｑ＋Ｎ_２Ｏ→^・ＯＨ＋ＯＨ⁻＋Ｎ_２
^・ＯＨ／Ｈ^・＋ＨＣＯＯ−→Ｈ_２Ｏ／Ｈ_２＋ＣＯ_２ ^・−
ＣＯ_２ ^・−＋Ｐ→Ｐ^・−＋ＣＯ_２
プロドラッグ１７の損失およびそのエフェクター５の形成は、二重照射サンプルにおけるＨＰＬＣ−質量分析（ＭＳ）によってモニターした。０．９５還元当量レベルでのプロドラッグの濃度の損失パーセンテージおよびエフェクターの形成を決定した。さらに、プロドラッグ１７からのメチル−ニトロ芳香族の検出を記録した。０．９５還元当量レベルでの濃度の５０％を超える損失を示すプロドラッグは、一電子の化学量論を示す。

パルス放射線分解を用いて、一電子還元および化合物の安定性をリアルタイムでモニターした。高速分光光度検出システムを装備した高エネルギー電子（４ＭｅＶの２００ｎｓで２−３Ｇｙ）の短いパルスを送達する線形加速器を用いた（Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ａ，１０１，９７０４〜９７０９，１９９７）。プロドラッグを、上記のギ酸イオンを含有するＮ_２Ｏ飽和溶液に溶解し、これによって、パルス放射線分解後に、２〜３マイクロ秒内に化合物のラジカルアニオンの急速形成が得られた。このフラグメンテーションの速度は、トリガー部分のベンジル型ラジカルの形成に相当する波長で一過性の動態を分析することによって決定した。（Ｂａｙｓら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１０５，３２０〜３２４，１９８３；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、Ｊ．Ｐｈｙｓ．Ｃｈｅｍ．Ａ，１０１，９７０４〜９７０９，１９９７）。

２．４本発明の化合物のインビボ有効性
方法
特異的な無菌の雌性ＮＩＨ−ＩＩＩヌードマウス（ＣｈａｒｌｅｓＲｉｖｅｒＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）が供給する繁殖マウス由来）を、１２時間の明／暗サイクルで温度制御室（２２±２℃）で４〜６匹の群で飼育し、水および標準のげっ歯類食（ＨａｒｌａｎＴｅｋｌａｄｄｉｅｔ２０１８ｉ）は自由に摂らせた。全ての動物は、耳のタグ番号で個別に特定可能であった。

新鮮に収集した細胞懸濁液を、ＰＢＳ中に含有される５×１０^６個のＨ１９７５またはＡ４３１細胞を用いて右脇腹上に皮下摂取した（１００μＬ）。平均の腫瘍径は、最長の径（長さ）と垂直方向の測定値（幅）とを掛けて平均した。腫瘍容積（ｍｍ^３）は、式（Ｌ×ｗ^２）×π／６を用いて算出した（ここで；Ｌ＝長さおよびｗ＝幅（癌腫のｍｍ））。

増殖遅延実験手順
処置は、キャリパーの測定で決定して、腫瘍が約２５０ｍｍ^３の容積に達した時に開始した。全ての薬物は、１０−２０ｍｌ／ｋｇの投与容積で腹腔内注射によって与えた。マウスは、ｑ３ｄ×４、ｑ５ｄ×４またはｑ７ｄ×４のスケジュールにまたがってＭＴＤで投与して、研究の３０日の期間にまたがって３〜５日ごとにキャリパーで腫瘍増殖を測定した。マウスは、毒性の兆候を呈した場合、または体重が出発体重の２０％を超えて損失した場合に処分した。全ての動物実験は、オークランド大学（ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｕｃｋｌａｎｄ）の動物倫理委員会（ＡｎｉｍａｌＥｔｈｉｃｓＣｏｍｍｉｔｔｅｅ）が承認したプロトコールに従った。

腫瘍直径が処理サイズに達した場合、腫瘍保有マウスを、処理群に無作為に割り当てた。動物は、異種移植片が以下の証拠を示す場合、拒絶された：（ｉ）下にある筋肉に対する癒着（局所侵襲のリスクに起因する）、（ｉｉ）潰瘍の兆候、または（ｉｉｉ）無痛性の腫瘍増殖。薬物投与は、割り当ての日に開始する。

処置の間および後、腫瘍の大きさおよび体重を定期的に測定した。動物は、（ｉ）腫瘍の平均直径が１５ｍｍ（生存の終末点）を超えた場合、（ｉｉ）体重の損失が処置前の値の２０％を超えた場合、（ｉｉｉ）病的状態の延長もしくは過剰な罹患率の証拠がある場合、または腫瘍潰瘍形成が生じた場合、に処分した。実験は、処置開始後、２１日（Ａ４３１腫瘍）または３０日（Ｈ１９７５腫瘍）に終えた。

有効性分析
個々の腫瘍について、処置１日に対して４倍まで容積が増大する時間（ＲＴＶ^４）を記録した。中央値ＲＴＶ^４は、各々の群について算出され、コントロール群と処置群との間のＲＴＶ^４の相違は、腫瘍増殖遅延（ＴｕｍｏｕｒＧｒｏｗｔｈＤｅｌａｙ）（ＴＧＤ）として日数で記載する。ＲＴＶ^４値は、０日の腫瘍処置容積のなんらかのバイアスについて正規化する。カプラン・マイヤープロット（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒｐｌｏｔ）を構築して、中央生存を算出した（ＴＴＥ_５０）。処置群とコントロール群との間で、ＲＴＶ^４に達するのにかかる全生存時間におけるなんらかの相違の統計的な相違を、ＬｏｇＲａｎｋＰ統計学的検定によって分析した。

毒性
体重損失の最下点（時間とは独立した最大値）を、各々の処置群について記録した。処置関連の罹患率のなんらかの兆候を記録した。許容できる毒性とは、試験の間に群の平均の体重損失が１５％を超えることがなく、体重損失が２０％を超える個体がおらず、どの２４時間の期間にも１０％を超える個体の体重損失がないと規定した。全ての不測の死を記録した。

結果
処置後の中央腫瘍増殖曲線を、図１〜１１に示す。毒性および有効性に対する処置の効果のまとめの表を下の表４〜６に示す。

全体として、９つのキナーゼインヒビターおよび９つのプロドラッグを、ヒトＨ１９７５またはＡ４３１の腫瘍異種移植片を有するマウスに投与した。平均（±ＳＤ）腫瘍容積は処置開始で、Ｈ１９７５腫瘍について２４５ｍｍ^３±６０ｍｍ^３、およびＡ４３１腫瘍については２６８ｍｍ^３±１２４ｍｍ^３であった。

耐容される用量レベルで、全てのキナーゼインヒビターが、腫瘍増殖を遅延した。この腫瘍増殖遅延は、Ｈ１９７５腫瘍（図１−３）およびＡ４３１腫瘍（図４）の両方において、ｑ３ｄ×４で投与した場合、化合物２〜９について特に有意であった（Ｐ＜０．０５、ログ−ランク検定）。全ての群にまたがって、ごくわずかな体重の損失があったが、Ｈ１９７５異種移植片マウスにおける化合物５および７での処置後１例の死があった（表４）。

表４の脚注
^ａ腹腔内注射による乳酸塩緩衝液（ｐＨ４）中で投与（＜０．０２ｍｌ／ｇ）；^ｂ薬物関連である可能性が高いと考えられる全ての動物死；^ｃ各々の個体についての０日の体重に対する平均体重損失最下点（時間とは独立した最大値）（％）；^ｄ腫瘍増殖遅延であって、コントロールの増殖に対して最初の処置容積の４倍に達するのに要する時間（ＲＴＶ^４；０日の容積に対して）の増大の％として算出したもの；^ｅＲＴＶ^４の生存終末点を想定する、緩衝液処置したコントロールに対して処置した化合物のカプラン・メイヤーログランク（Ｋａｐｌａｎ−ＭｅｉｅｒＬｏｇＲａｎｋ）生存分析。

同様に、プロドラッグ（化合物１２、１３、１５〜２１）は全てが、ｑ３ｄ×４のスケジュールでの処理後にＨ１９７５（図５〜図７）またはＡ４３１（図８）異種移植片モデルにおいて腫瘍増殖を有意に遅延した（Ｐ＜０．０５、ログ−ランク検定）。ここでも、全ての処置群においてマウスでごくわずかな体重の損失があったが、化合物１９での処置後の死は１例であった（表５）。

表５の脚注
^ａ腹腔内注射によって乳酸塩緩衝液（ｐＨ４)で投与（＜０．０２ｍｌ／ｇ）；^ｂ薬物関連の可能性が高いと考えられる全ての動物死；^ｃ各々の個体について０日の体重に対する平均体重損失最下点（時間独立の最大値）（％）；^ｄ腫瘍増殖遅延（ＴｕｍｏｕｒＧｒｏｗｔｈＤｅｌａｙ）であって、コントロールの増殖に対して初期処置容積４倍に達するのに要する時間（ＲＴＶ^４；０日の容積に対して）の増大の％として算出したもの；^ｅＲＴＶ^４の生存終末点を想定する、緩衝液処置のコントロールに対して処置した化合物のカプランメイヤーログランク生存分析。

プロドラッグ１５および１７を、それぞれそれらの同族のキナーゼインヒビター３および５と一緒に投与して、キナーゼインヒビターに比較してプロドラッグについてのＨ１９７５腫瘍における増殖遅延の期間延長が明らかになった（図９〜図１０）。

プロドラッグ１７を、複数の投薬スケジュールで試験した：ｑ３ｄ×４、ｑ５ｄ×４およびｑ７ｄ×４、をそのｑ３ｄ×４ＭＴＤで。全ての３つの投与スケジュールでは、化合物１７は、コントロールに比較して、Ｈ１９７５腫瘍の腫瘍増殖を有意に遅延した（図１１）。３つの投与スケジュールの間の腫瘍増殖には統計的に著しい相違はなかった。体重損失は、ｑ３ｄ×４投薬後に最大で、ｑ７ｄ×４投薬後に最小であった（表６）。しかし、１例の死亡をｑ７ｄ×４処置群で観察した。この死亡が薬物関連であるか否かは明らかではなかった。化合物１７はまた、ｑ３ｄ×４およびｑ５ｄ×４で、そのｑ３ｄ×４ＭＴＤで、Ａ４３１異種移植片マウスに対して投与され、ここでは、両方の投薬スケジュールが、Ａ４３１腫瘍増殖において同様の遅延、および動物体重において同様の損失を生じた（表６）。

表６の脚注
^ａ腹腔内注射によって乳酸塩緩衝液（ｐＨ４)で投与（＜０．０２ｍｌ／ｇ）；^ｂ薬物関連の可能性が高いと考えられる全ての動物死；^ｃ各々の個体について０日の体重に対する平均体重損失最下点（時間独立の最大値）（％）；^ｄ腫瘍増殖遅延（ＴｕｍｏｕｒＧｒｏｗｔｈＤｅｌａｙ）であって、コントロールの増殖に対して初期処置容積４倍に達するのに要する時間（ＲＴＶ^４；０日の容積に対して）の増大％として算出したもの；^ｅＲＴＶ^４の生存終末点を想定する、緩衝液処置のコントロールに対する化合物処置群のカプランメイヤーログランク生存分析。

全体として、インビトロおよびインビボの活性データによって、キナーゼインヒビターとして本発明の化合物の有効性を示す。従ってこの化合物は、キナーゼ阻害性の治療における使用に適切である。これは特に、還元性プロドラッグおよび癌治療の場合である。なぜなら腫瘍が一般に低酸素領域を有するからである。プロドラッグは、低酸素下で還元されて、親のキナーゼインヒビターを遊離し、腫瘍標的効果を生じる。

プロドラッグ１５、１７および１８は、特に見込みのある治療候補とみなされる。

本発明は、上記のように広範に記載してきたが、当業者は、特定の説明が例示でしかないこと、および改変が以下の特許請求に規定されるように本発明から逸脱することなくなされ得ることを理解する。

上述の全ての刊行物はその全体が本明細書において援用される。

Claims

化合物（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミド（５）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
化合物（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミド（１７）、またはその薬学的に許容される塩もしくは溶媒和物。
請求項１に記載の化合物を、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤もしくは希釈剤と組み合わせて含む、薬学的組成物。
請求項２に記載の化合物を、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤もしくは希釈剤と組み合わせて含む、薬学的組成物。
請求項１に記載の化合物を癌治療薬の製造に使用する方法。
請求項２に記載の化合物を癌治療薬の製造に使用する方法。
（２Ｅ）−Ｎ−［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］−４−（ジメチルアミノ）−２−ブテンアミドと、[(1-メチル-4-ニトロ-1H-イミダゾール-5-イル)エチルブロミドとを接触させることからなる化合物（２Ｅ）−４−｛［４−（３−ブロモ−４−クロロアニリノ）ピリド［３，４−ｄ］ピリミジン−６−イル］アミノ｝−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−［（１−メチル−４−ニトロ−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−オキソ−２−ブテン−１−アンモニウムブロミドの製造方法。