CN102559501A - 巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂，由脱脂乳粉，甘油，蔗糖，谷氨酸钠组成，其质量百分组成为脱脂乳粉13%~16%，甘油1%~4%，蔗糖12%~15%，谷氨酸钠0.5%~3.5%，余量为无菌水。使用本发明的保护剂，可以使巴氏芽胞杆菌的存活率高达82.3%，相比未添加保护剂直接冷冻干燥的8%的存活率提高了10倍。

Description

巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂

技术领域

本发明涉及一种巴氏芽胞杆菌（Bacillus pasteurii）冷冻干燥保护剂中高效保护剂的配方。

背景技术

真空冷冻干燥，也叫作冷冻干燥，简称冻干，是将富含水的物料，先冷却至其共晶点或玻璃化转变温度以下，使物料中的大部分水冻结成冰，其余的水分和物料成分形成非晶态(玻璃态)。然后，在真空条件下，对已冻结的物料进行低温下的加热，使物料中的冰升华，实现升华干燥(一次干燥)。接着，在真空条件下对物料进行升温，以除去吸附水，实现解吸干燥(--次干燥)。冻干后的物料含水率低，经密封后，可以在室温或4℃下长期保存。

许多微生物，包括细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及病毒等大类的微生物，成功地实现了冷冻干燥。一般微生物细胞的成活率在80％以上；Hesseltin等报道保存在真空冷冻干燥安瓿管中的真菌成活期长达40多年。尽管如此，直至目前还有许多微生物不能实现冷冻干燥，即使对已经能实现冻干的多种微生物，它们的冻干程序和所用保护剂也是不完全相同的。

对于巴氏芽胞杆菌，单一的使用任何一种冷冻干燥保护剂都很无法达到较好的保护效果，多种保护剂混合使用，能够达到取长补短，才能达到较好的使用效果，然而针对巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂的研究工作开展较少。

发明内容

为了提高巴氏芽胞杆菌保藏存活率，本发明提供一种巴氏芽胞杆菌保藏冷冻干燥保护剂。

一种巴氏芽胞杆菌保藏冷冻干燥保护剂，由脱脂乳粉，甘油，蔗糖，谷氨酸钠组成，其质量百分组成为脱脂乳粉13%~16%，甘油1%~4%，蔗糖12%~15%，谷氨酸钠0.5%~3.5%，余量为无菌水。

有益效果：

使用本发明的保护剂，可以使巴氏芽胞杆菌的存活率高达82.3%，相比未添加保护剂直接冷冻干燥的8%的存活率提高了10倍。

具体实施方式

实施例1

1，菌种的培养和收集

配制100ml培养基，每升培养液含有蛋白胨5g、牛肉膏3g，用NaOH溶液调节培养基pH为7，放入高压灭菌锅进行灭菌。灭菌后，以2%的接种量接入巴氏芽胞杆菌（Bacillus pasteurii），置于摇床中170rpm、恒温37℃培养，24h后取出，6000r/min,离心10分钟后弃上清液，获取菌体。

2，预冻和冷冻干燥

先将菌体与保护剂按1:1混合，使菌体与保护剂充分混合平衡60min,再放置于-40℃预冻2h。然后用真空冷冻干燥机冷冻24h。真空封口后保藏。

3，存活率的测定

   菌体离心前后及冻干前后活菌数的测定采用稀释平板计数法。茵液中活数测

定先将待测样品作一系列稀释，再取一定量的稀释菌液接种到培养皿中，其均匀分布于平皿中的培养基内，经培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落，统计菌落数目，即可换算出样品中的活菌数。而菌粉中活菌数测定前先用无菌水稀释原

菌液体积再按上述方法进行测定。（存活率=冻干后活菌数/冻干前活菌数）

4，优化结果的验证

在保护剂的配方内，对不同配比的保护剂的效果的验证结果如下：

冷冻干燥保护剂的效果验证

保护剂试验号	脱脂乳粉	蔗糖	甘油	谷氨酸钠	存活率
						1	15%	15%	2%	1%	82.3%
2	14%	14%	4%	2%	78.0%
						3	16%	13%	3%	3%	78.5%
4	15%	14%	4%	2%	79.56%
						5	16%	15%	3%	3%	81.2%
6	15%	13%	4%	2%	79.0%

表中各个保护剂以无菌水补足100%。

其中以试验号1，组成为：脱脂乳粉15%，甘油2%，蔗糖15%，谷氨酸钠1%，余量为无菌水的巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂的存活率最高，达82.3%。

Claims (1)

1.一种巴氏芽胞杆菌冷冻干燥保护剂，其特征在于：按质量百分组成为：脱脂乳粉13%~16%，甘油1%~4%，蔗糖12%~15%，谷氨酸钠0.5%~3.5%，余量为无菌水。