CN102526707A - 共刺激因子及融合蛋白的新用途 - Google Patents
共刺激因子及融合蛋白的新用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102526707A CN102526707A CN2012100111486A CN201210011148A CN102526707A CN 102526707 A CN102526707 A CN 102526707A CN 2012100111486 A CN2012100111486 A CN 2012100111486A CN 201210011148 A CN201210011148 A CN 201210011148A CN 102526707 A CN102526707 A CN 102526707A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tumor
- cervical cancer
- medicine
- fusion rotein
- purposes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了B7.1及B7.1融合蛋白在制备治疗宫颈癌、肉瘤或黑色素瘤的药物中的用途。免疫共刺激因子融合蛋白B7.1-Fc，特别是B7.1/IgG1Fc，能够有效抑制宫颈癌或肉瘤的生长，特别是针对宫颈癌具有显著的治疗活性，其治疗作用与阳性药物相当，为临床用药提供了一种新的选择。
Description
技术领域
本发明涉及共刺激因子B7.1及B7.1融合蛋白的新用途。
背景技术
宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，它是由人类乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus，简称HPV)引起的，HPV病毒可直接通过皮肤接触传播，有十几年的潜伏期，故初期没有任何症状。在全球范围内，全球每年大约有50万女性罹患宫颈恶性肿瘤，死于宫颈恶性肿瘤的超过25万人。在发展中国家，宫颈癌则属于常见多发的妇科肿瘤，排行榜首。当宫颈癌的症状出现三个月后就诊者已有2/3为癌症晚期，因此宫颈瘤成为了威胁女生生命的头号杀手。
尽管宫颈瘤是迄今为止唯一找出治病原因的癌症，但是对于其治疗目前仍与一般肿瘤治疗方案一致，均采用化疗放疗，常规放化疗基本不具备针对肿瘤的特异性，放化疗在破坏癌细胞的同时对正常细胞也产生杀伤作用，从而对人体产生很大的毒副作用，同时还会导致宿主免疫系统的破坏，放化疗后易引起多种并发症而且肿瘤易复发，常规放化疗的特点造成肿瘤治疗的疗效和预后都不是很理想，目前肿瘤免疫治疗成为一种较为安全有效的方式。
肿瘤免疫治疗是直接或间接利用自身的免疫系统，抑制肿瘤细胞生长、转移、清除肿瘤细胞的方法，肿瘤免疫治疗机理与其它治疗手段相比，具有作用特异性高、范围广泛、毒副作用小等特点。B7.1-Fc是免疫刺激因子融合蛋白(Aihong Liu，Peisheng Hu；Clin Cancer Res 2005；11(23)December 1，2005，8492-8502)，它是由CD80胞外部分融合在人Ig抗体恒定区的Fc片段N-端构成的融合蛋白，目前已经报道的B7.1-Fc中，Fc来自于免疫球蛋白IgG，特别是IgG1。B7.1-Fc融合蛋白在宿主的APC细胞将肿瘤抗原信息递呈给体内肿瘤免疫杀伤细胞的同时，共刺激因子B7.1与CD28结合激活T细胞，从而对肿瘤细胞产生系列免疫攻击，达到杀灭肿瘤细胞的作用。同时B7.1-Fc融合蛋白不仅能与CD28结合，激活T细胞，也可与CTLA-4结合，终止T细胞的激活途径，从而避免出现T-细胞的过度激活。B7.1-Fc融合蛋白的这种双重作用，大大增强了以B7.1-Fc融合蛋白开发的抗肿瘤药物的安全可控性。据有关研究报道免疫共刺激因子融合蛋白B7.1-Fc作为一种肿瘤免疫治疗药物，其在结肠癌、乳腺癌、纤维肉瘤癌具有一定的治疗效果(CN200580042109.0)。
目前，还未见将共刺激因子B7.1及B7.1融合蛋白用于治疗宫颈癌的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供共刺激因子B7.1及B7.1融合蛋白的新用途。
本发明提供了共刺激因子B7.1及B7.1融合蛋白在制备治疗宫颈癌、肉瘤或黑色素瘤的药物中的用途。
其中，所述的B7.1融合蛋白是B7.1-Fc。
进一步地，B7.1-Fc是融合到IgG Fc上的B7.1。
进一步优选地，所述IgG为IgG1。
进一步地，所述的药物是治疗宫颈癌、肉瘤的药物。
进一步地，所述的药物是治疗宫颈癌的药物。
其中，所述的药物是以共刺激因子B7.1或B7.1融合蛋白为有效成分，加上药学上常用的辅料制备而成的制剂。
进一步地，所述的B7.1融合蛋白是B7.1-Fc。
更进一步地，所述B7.1-Fc由B7.1与IgG Fc连接而成。
进一步优选地，所述IgG为IgG1。
其中，所述的制剂为注射剂。
根据药理实验换算可知，所述的制剂中，每日用单位制剂中B7.1-Fc的含量为192-384ug。
免疫共刺激因子融合蛋白B7.1-Fc，特别是B7.1/IgG1Fc，能够有效抑制宫颈癌或肉瘤的生长，特别是针对宫颈癌具有显著的治疗活性，其治疗作用与阳性药物相当，为临床用药提供了一种新的选择。
附图说明
图1SDS-PAGE确认表达的B7.1-Fc的分子量谱图，其中，1为非还原的B7.1-Fc图谱、2为还原的B7.1-Fc图谱、3为标准分子量标记物；
图2HPLC纯度测定图谱
图3B7.1-Fc给药后U14荷瘤鼠体重变化
图4B7.1-Fc对小鼠宫颈癌(U14)肿瘤抑制作用
图5B7.1-Fc给药后S180荷瘤鼠体重变化
图6B7.1-Fc对小鼠肉瘤(S180)肿瘤抑制作用
图7B7.1-Fc给药后B16-F10荷瘤鼠体重变化
图8B7.1-Fc对小鼠黑色素瘤(B16-F10)肿瘤抑制作用
具体实施方式
实施例1本发明中B7.1-Fc的制备
利用基因重组技术制备B7.1-Fc融合蛋白，按照生物领域技术人员熟知方法，通过PCR技术获得构建B7.1-Fc表达载体，转入小鼠骨髓瘤NSO细胞筛选获得长期稳定表达融合蛋白B7.1-Fc的工程细胞，然后通过流加培养获得高表达的B7.1-Fc培养上清，然后再通过蛋白A亲和层析和离子交换层析依次纯化获得高纯度融合蛋白，4℃保存。
本发明中B7.1-Fc的制备方法可以参照CN200580042109.0中的制备方法，所述B7.1-Fc是指B7.1/IgG1Fc，即B7.1和IgG1Fc的融合蛋白，其序列表参见Aihong Liu，Peisheng Hu；Clin Cancer Res 2005；11(23)December 1，2005，8492-8502。
将制备得到的B7.1-Fc测定分子量，测定图谱见图1；并通过HPLC测定其纯度，测定图谱参见图2。
实施例2免疫共刺激因子融合蛋白B7.1-Fc药效学实验
1、受试样品及剂量设计
名称：免疫共刺激因子融合蛋白B7.1/IgG1Fc(简称B7.1-Fc)按实施例1制备
提供者：军事医学科学院微生物流行病学研究所
性状：无色、澄清液体
保存条件：4℃保存
给药途径：尾静脉注射
溶剂：生理盐水
2、阳性对照：
注射用环磷酰胺；紫杉醇
3、肿瘤细胞株：
小鼠宫颈癌U14、小鼠肉瘤S180、小鼠黑色素瘤B16-F10，均可通过购买市售商品得到
4、动物：
BALB/c小鼠，SPF/VAF级由北京华阜康生物科技股份有限公司提供，合格证号SCXK(京)2009-0004
5、饲养设施条件：
中国医学科学院药物研究所动物实验中心屏障设施，许可证号：SYXK(京)2009-0004
6、实验方法：
(1)肿瘤细胞培养及接种：
小鼠宫颈癌U14、小鼠肉瘤S180、小鼠黑色素瘤B16-F10细胞体外培养至相当数量。消化、洗涤、离心，计数细胞，配制细胞密度为5x106/ml细胞悬液。小鼠局部消毒后侧背部接种，注射体积0.1ml/只。
(2)给药剂量及给药方式：
每日观察肿瘤生长变化，于接种后4天确认肿瘤生长时，将荷瘤鼠按瘤体积大小随机分组。设阴性对照组，肿瘤自然生长；阳性对照组为注射用环磷酰胺、紫杉醇给药组，按人用剂量折算，小鼠以100mg/kg-1剂量，视肿瘤生长情况间断腹腔注射给药；融合蛋白B7.1-Fc按照80、40、20ug/kg-1三个剂量尾静脉给药，每天1次，连续5天。每组小鼠15只，并与当日全部给药。
(3)观察指标
实验过程中，每2-3日监测实验动物肿瘤长、宽径及体重。观察至接种后第30天左右颈椎处死小鼠，结束实验。实验结束时，剥离肿瘤，称瘤重，拍肿瘤对比照片，分别参见图4、6、8。本发明中采用相对肿瘤增殖率T/C(％)作为试验评价指标，用以评价药物的抗肿瘤活性，计算方法参见《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》。同时，还为各种荷瘤小鼠称重，以便确认B7.1-Fc对机体的不良反应，参见图3、5、7。
实验结果：
(1)B7.1-FC对小鼠肿瘤宫颈癌U14肿瘤生长抑制作用
表1B7.1-Fc对U14肿瘤生长抑制作用
*：P＜0.05与阴性对照组比较
**：P＜0.01与阴性对照组比较
表2 B7.1-Fc对U14肿瘤生长抑制作用
*：P＜0.01与阴性对照组比较
(2)B7.1-Fc对小鼠肉瘤S180肿瘤生长抑制作用
表3B7.1-Fc对S180肿瘤生长抑制作用
*：P＜0.01，与阴性对照组比较
表4B7.1-Fc对S180肿瘤生长抑制作用
*：P＜0.05，与阴性对照组比较 **：P＜0.01，与阴性对照组比较
(3)B7.1-Fc对小鼠黑色素瘤B16-F10肿瘤生长抑制作用
表5B7.1-Fc对B16-F10肿瘤生长抑制作用
*：P＜0.01，与阴性对照组比较
表6B7.1-Fc对B16-F10肿瘤生长抑制作用
*：P＜0.01，与阴性对照组比较
7、实验结论
《细胞毒类抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则》，2006年，该原则中指出，T/C(％)＞40％为无效；，T/C(％)≤40％，并经统计学处理P＜0.05为有效。
在本发明中，B7.1-Fc在40-80ug/kg-1剂量范围内对实验所用小鼠U14宫颈癌肿瘤模型具有明显抑制作用，均达到60％以上，换算成人用剂量，约为3.2-6.4ug/kg-1。高剂量组其肿瘤抑制率达到78％，B7.1-Fc对肿瘤的抑制作用增强，肿瘤生长速度缓慢，甚至停止生长，逐渐缩小及至消失，呈明显的量效关系；这充分说明B7.1-Fc在宫颈癌治疗中具有显著的安全性和有效性；然而在B7.1-Fc然后免疫共刺激因子融合蛋白B7.1-Fc在20-80ug/kg-1剂量范围内对于实验所用小鼠B16-F10黑色素瘤和小鼠S180肉瘤基本无肿瘤抑制作用。
另一方面，从小鼠体重观察来看，发现使用B7.1-Fc后小鼠体重相对于阳性对照药品增长迅速，这说明B7.1-Fc在肿瘤治疗方面相对于传统的化疗药物而言，其安全性显著提高。
综上所述，免疫共刺激因子融合蛋白B7.1-Fc，特别是B7.1/IgG1Fc，能够有效抑制宫颈癌或肉瘤的生长，特别是针对宫颈癌具有显著的治疗活性，其治疗作用与阳性药物相当，为临床用药提供了一种新的选择。
Claims (10)
1.共刺激因子B7.1及B7.1融合蛋白在制备治疗宫颈癌、肉瘤或黑色素瘤的药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的B7.1融合蛋白是B7.1-Fc。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述B7.1-Fc由B7.1与IgG Fc连接而成。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述IgG为IgG1。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗宫颈癌、肉瘤的药物。
6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗宫颈癌的药物。
7.根据权利要求1-6任意一项所述的用途，其特征在于：所述的药物是以共刺激因子B7.1或B7.1融合蛋白为有效成分，加上药学上常用的辅料制备而成的制剂。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：所述的B7.1融合蛋白是B7.1-Fc。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于：所述B7.1-Fc由B7.1与IgG Fc连接而成。
10.根据权利要求7-9任意一项所述的用途，其特征在于：所述的制剂为注射剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210011148.6A CN102526707B (zh) | 2012-01-13 | 2012-01-13 | 共刺激因子及融合蛋白的新用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210011148.6A CN102526707B (zh) | 2012-01-13 | 2012-01-13 | 共刺激因子及融合蛋白的新用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102526707A true CN102526707A (zh) | 2012-07-04 |
| CN102526707B CN102526707B (zh) | 2015-04-22 |
Family
ID=46335522
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210011148.6A Active CN102526707B (zh) | 2012-01-13 | 2012-01-13 | 共刺激因子及融合蛋白的新用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102526707B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1217750A (zh) * | 1996-05-04 | 1999-05-26 | 曾尼卡有限公司 | 抗cea的单克隆抗体,包括所述抗体的偶联物及其在adept系统中的治疗应用 |
| CN101072578A (zh) * | 2004-10-29 | 2007-11-14 | 南加州大学 | 用共刺激分子的联合癌症免疫疗法 |
-
2012
- 2012-01-13 CN CN201210011148.6A patent/CN102526707B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1217750A (zh) * | 1996-05-04 | 1999-05-26 | 曾尼卡有限公司 | 抗cea的单克隆抗体,包括所述抗体的偶联物及其在adept系统中的治疗应用 |
| CN101072578A (zh) * | 2004-10-29 | 2007-11-14 | 南加州大学 | 用共刺激分子的联合癌症免疫疗法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 郭建芬等: "共刺激分子在宫颈癌组织中的表达", 《中华医学杂志》, vol. 80, no. 5, 31 May 2000 (2000-05-31), pages 342 - 345 * |
| 陶光实等: "共刺激分子B7基因诱导小鼠抗子宫颈癌主动免疫的研究", 《中华妇产科杂志》, vol. 36, no. 2, 28 February 2001 (2001-02-28), pages 111 - 114 * |
| 陶光实等: "转染B7基因的U14疫苗对小鼠宫颈癌的防治作用研究", 《现代妇产科进展》, vol. 12, no. 4, 31 July 2003 (2003-07-31), pages 241 - 244 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102526707B (zh) | 2015-04-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Uchida et al. | Effective treatment of an orthotopic xenograft model of human glioblastoma using an EGFR-retargeted oncolytic herpes simplex virus | |
| Sayour et al. | Manipulation of innate and adaptive immunity through cancer vaccines | |
| CN102101888B (zh) | 一种新型抗eb病毒所致肿瘤多肽及其应用与制备方法 | |
| AU2018378395B2 (en) | Nucleotide sequence encoding car, ROBO1 CAR-NK cell expressing car and preparation therefor and use thereof | |
| JP2019528753A5 (zh) | ||
| CN107557336A (zh) | 一种抗muc16安全型嵌合抗原受体修饰的免疫细胞及其应用 | |
| CN106554416B (zh) | 一种抗pd-l1人源化单克隆抗体联合干扰素基因刺激蛋白（sting）激动剂在抗肿瘤中的应用 | |
| CN108165536A (zh) | 一种重组溶瘤痘苗病毒及其制备方法与应用 | |
| Minton | Intestinal barrier protection | |
| Bird | Magnesium: essential for T cells | |
| CN107164412A (zh) | 一种安全型抗cea嵌合抗原受体修饰t细胞的制备方法及其应用 | |
| WO2021062332A1 (en) | Combination of inhibitors of il4 signaling and immune checkpoints for treating cancer | |
| CN107541499A (zh) | 一种靶向免疫检测点tnfr2的cik的制备及其应用 | |
| CN102526707B (zh) | 共刺激因子及融合蛋白的新用途 | |
| CN113117088B (zh) | 钙激活氯离子通道的抑制剂在肿瘤免疫疗法中的应用 | |
| CN102526708A (zh) | 共刺激因子在癌症治疗方面的新用途 | |
| CN113750239B (zh) | 一种用于治疗宫颈癌的药物组合物及其药物制剂和应用 | |
| CN109735571A (zh) | 双自杀基因慢病毒表达载体及其应用 | |
| CN103882057A (zh) | 携带p21ras单链抗体基因肿瘤特异性腺病毒载体的构建及其应用 | |
| CN104357466B (zh) | 一种单纯疱疹病毒胸苷激酶突变体及其制备方法和用途 | |
| CN107630005A (zh) | 表达plac1特异性tcr的t细胞及其应用 | |
| CN107335056A (zh) | Nkila作为靶点在筛选或制备治疗肿瘤的药物中的用途 | |
| CN106336456A (zh) | 一种cd33免疫原多肽及其用途 | |
| CN114014938B (zh) | 一种嵌合抗原受体(car)及其应用 | |
| CN101396554A (zh) | 重组人干扰素γ在制备抗病毒药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20181010 Address after: 725000 Shaanxi Ankang hi tech Industrial Development Zone Science and technology road Patentee after: Ankang Bei Yi Da Biological Medicine Co., Ltd. Address before: 610041 16 Chuang Road, high tech Avenue, Chengdu, Sichuan Co-patentee before: Xizang Tianxing Biomedical Co., Ltd. Patentee before: Chengdu Bofa Biotechnology Co., Ltd. Co-patentee before: Tianjin Bofa Biotechnology Co., Ltd. |
|
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 710000 science and technology road, high tech Industrial Development Zone, Ankang City, Shaanxi Province Patentee after: Shaanxi jinsiming Biotechnology Co., Ltd Address before: 725000 Shaanxi Ankang hi tech Industrial Development Zone Science and technology road Patentee before: Ankang Bei Yi Da Biological Medicine Co., Ltd. |