CN102526036B - 一种含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液及制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液及制备方法，它在每100毫升注射液中含有活性成分丁苯酞25～50mg、依达拉奉12.5～50mg，以及无水乙醇、羟丙基-β-环糊精、渗透压调节剂、抗氧剂等。本发明大大降低给药剂量，减少肝脏代谢负担，降低肝脏不良反应发生率。据测定，它至少可以降低依达拉奉给药剂量的20%，复方注射液除了有较好的疗效外，肝脏不良反应反生率也显著降低。
Description
技术领域
本发明涉及一种复方药物注射液及其制备方法，特别涉及一种含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液及制备方法，属医药技术领域。
背景技术
丁苯酞为芹菜籽提取物，现已经人工合成，包括丁苯酞消旋体，左旋丁苯酞和右旋丁苯酞。其结构如下：
常温下，丁苯酞呈黄色液体，性质稳定，不容易降解，在水中不溶解。临床研究结果表明，丁苯酞对急性缺血性脑卒中患者的中枢神经功能的损伤有改善作用，可促进患者功能恢复。动物药效学研究提示，本品可阻断缺血性脑卒中所致脑损伤的多个病理环节，具有较强的抗脑缺血作用，明显缩小大鼠局部脑缺血的梗塞面积，减轻脑水肿，改善脑能量代谢和缺血脑区的微循环和血流量，抑制神经细胞凋亡，并具有抗脑血栓形成和抗血小板聚集作用。本品可能通过降低花生四烯酸含量，提高脑血管内皮NO和PGI2的水平，抑制谷氨酸释放，降低细胞内钙浓度，抑制自由基和提高抗氧化酶活性等机制而产生上述药效作用。
依达拉奉是一种脑保护剂（自由基清除剂）。其结构如下：
依达拉奉溶解度低下，25℃时溶解度为2mg/mL，而且其化学稳定性随着在水溶液中的浓度升高而降低。并且，相对于粉末形式，其在水溶液中更容易被氧化而降解。
临床研究提示N-乙酰门冬氨酸（NAA）是特异性的存活神经细胞的标志，脑梗塞发病初期含量急剧减少。脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的减少，使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。临床前研究提示，大鼠在缺血/缺血再灌注后静脉给予依达拉奉，可阻止脑水肿和脑梗塞的进展，并缓解所伴随的神经症状，抑制迟发性神经元死亡。机理研究提示，依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。
胡登科等人的临床研究显示，口服丁苯酞软胶囊加注射依达拉奉（丁苯酞软胶囊0.2g /次, 3次/ d，依达拉奉30 mg静滴, 2次/ d，疗程为2周），能够更有效的治疗急性进展性脑梗死患者的神经功能缺损。
上述给药方式，与丁苯酞软胶囊组、依达拉奉组相比，并未相应调整给药剂量，在疗效收到协同效应的同时，肝脏不良反应也相应增加。
造成肝脏不良反应的增加，原因如下：1、丁苯酞软胶囊口服首过效应明显，绝对生物利用度约6-7%，最大不超过10%，其余90%均被肝脏代谢，两周的疗程，每天600毫克给药剂量，约550毫克的主药都在肝脏处进行首过分解，无形中增加肝脏负担，引起肝脏损伤从而导致ALT或AST升高；2、依达拉奉本身就具有肝脏毒性，药品说明书中提示，患者用药后肝脏不良反应超过5%的发生率。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有技术之缺陷提供一种含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液，所述注射液具有性质稳定、给药剂量小、肝脏不良反应发生率低等优点，此外，本发明还要进一步提供该复方注射液的制备方法。
本发明所述技术问题是由以下技术方案实现的。
一种含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液，每100毫升注射液中含有活性成分丁苯酞25～50mg、依达拉奉12.5～50mg。
上述复方注射液，所述丁苯酞为消旋体、左旋体或右旋体。
上述复方注射液，其中还含有无水乙醇0.1～1ml、羟丙基-β-环糊精300～800mg、渗透压调节剂700-900mg、抗氧剂0-100mg。
上述复方注射液，其pH值为3.0～6.0，优选4.5。
上述复方注射液，加入缓冲盐防止pH值波动，所述缓冲盐为磷酸氢二钠和磷酸二氢钠混合物，且二者的重量比为0.1:10～10:0.1；以适量的磷酸或氢氧化钠微调pH，使其在3.0～6.0范围内。
上述复方注射液，所述渗透压调节剂为氯化钠。
上述复方注射液，所述抗氧剂选自亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸、乙酰半胱氨酸中的一种或其组合物。
一种制备上述含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液的方法，它包括使用羟丙基-β-环糊精包合丁苯酞的步骤a。
上述制备方法，所述步骤a的具体操作为：
①配制丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取2～4L注射用水，加热至40～60℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后按照0.5～10ml/min加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至60～80L，所得溶液备用。
上述制备方法，它还包括如下步骤：
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入pH值调节剂，控制pH在3.0～6.0范围内，再加入稳定剂，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入50～200g的活性炭，于50～80℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
本发明提供了含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液及其制备方法。丁苯酞采用注射的形式给药，生物利用度完全能够达到100%，因而与口服相比，可以从全天给药量的600毫克降至全天给药量的50毫克-100毫克，大大降低给药剂量，减少肝脏代谢负担，降低肝脏不良反应发生率。据测定，本发明至少可以降低依达拉奉给药剂量的20%，复方注射液除了有较好的疗效外，肝脏不良反应反生率也显著降低。
在进行制剂的处方筛选过程中，选择合适的抗氧剂和pH调节剂对于保证复方制剂的稳定性尤其是依达拉奉的稳定性至关重要，经过筛选确定选用亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸、乙酰半胱氨酸有利于保证复方注射液的稳定性；复方注射液在碱性条件下容易降解，采用磷酸盐将pH控制在3.0-6.0范围内有利于保证注射液的稳定性。
由于丁苯酞为油性物质，采用羟丙基-β-环糊精包合，可以增强其溶解性，研究也发现采用适量的乙醇作为溶剂有利于改善丁苯酞的包合收率和提高依达拉奉溶解度。
本发明进行了大量的探索性科学试验，通过以上措施，在保证疗效的同时大大降低了肝脏不良反应发生率。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
实施例1
消旋丁苯酞50g，依达拉奉 50g，羟丙基-β-环糊精 300g，氯化钠 900g，亚硫酸氢钠20g、无水乙醇200ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制消旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取2L注射用水，加热至45℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后按照0.5ml/min加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至80L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例1:1），加入适量磷酸控制pH4.0，再加入亚硫酸氢钠20g、氯化钠900g，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入50g活性炭，于60℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：消旋丁苯酞25mg、依达拉奉25mg/50ml/瓶。
实施例2
右旋丁苯酞25g，依达拉奉 25g，羟丙基-β-环糊精 800g，氯化钠 700g，L-半胱氨酸10g、无水乙醇200ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制右旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取4L注射用水，加热至50℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后5ml/min加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至60L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例5:1），加入适量磷酸控制pH4.5，再加入L-半胱氨酸10g、氯化钠700g，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入100g活性炭，于60℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：右旋丁苯酞25mg、依达拉奉25mg/100ml/瓶。
实施例3
左旋丁苯酞50g，依达拉奉 25g，羟丙基-β-环糊精 800g，氯化钠 855g，乙酰半胱氨酸50g、无水乙醇500ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制左旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取4L注射用水，加热至50℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后10ml/min加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至60L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例10:1），加入适量磷酸控制pH3.0，再加入乙酰半胱氨酸50g、氯化钠855g，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入200g活性炭，于70℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：左旋丁苯酞50mg、依达拉奉25mg/100ml/瓶。
实施例4
左旋丁苯酞25g，依达拉奉12.5g，羟丙基-β-环糊精 300g，氯化钠 850g，亚硫酸氢钠10g、乙酰半胱氨酸20g、无水乙醇400ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制左旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取4L注射用水，加热至60℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后以3ml/min速度加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至60L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例0.1:10），加入适量磷酸或氢氧化钠控制pH4.5，再加入亚硫酸氢钠10g和乙酰半胱氨酸20g，氯化钠850g，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入100g活性炭，于60℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：左旋丁苯酞25mg、依达拉奉12.5mg/100ml/瓶。
实施例5
消旋丁苯酞50g，依达拉奉12.5g，羟丙基-β-环糊精 800g，氯化钠 700g，L-半胱氨酸20g、乙酰半胱氨酸80g、无水乙醇1000ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制消旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取3L注射用水，加热至55℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后以10ml/min速度加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至70L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例1:1），控制pH3.5，再加入L-半胱氨酸20g和乙酰半胱氨酸80g、氯化钠700g，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入75g活性炭，于80℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：消旋丁苯酞50mg、依达拉奉12.5mg/100ml/瓶。
实施例6
右旋丁苯酞37.5g，依达拉奉20g，羟丙基-β-环糊精 800g，氯化钠 800g，亚硫酸氢钠10g、L-半胱氨酸15g、乙酰半胱氨酸10g、无水乙醇100ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制右旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取3.5L注射用水，加热至50℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后以2ml/min速度加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至65L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例1:1），控制pH4.5，再加入亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸和乙酰半胱氨酸和氯化钠，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入120g活性炭，于80℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：右旋丁苯酞37.5mg、依达拉奉20mg/100ml/瓶。
实施例7
左旋丁苯酞37.5g，依达拉奉25g，羟丙基-β-环糊精 800g，氯化钠 750g，亚硫酸氢钠5g、L-半胱氨酸5g、乙酰半胱氨酸10g、无水乙醇100ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制左旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取2.5L注射用水，加热至50℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后以4ml/min速度加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至70L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例0.5:5），控制pH5.0，再加入亚硫酸氢钠、L-半胱氨酸和乙酰半胱氨酸、氯化钠，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入100g活性炭，于80℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：左旋丁苯酞37.5mg、依达拉奉25mg/100ml/瓶。
实施例8
消旋丁苯酞45g，依达拉奉25g，羟丙基-β-环糊精 800g，氯化钠 900g，乙酰半胱氨酸20g、无水乙醇200ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制消旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取4L注射用水，加热至50℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后以8ml/min速度加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至80L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例3:2），控制pH4.0，再加入乙酰半胱氨酸、氯化钠，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入150g活性炭，于80℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：消旋丁苯酞45mg、依达拉奉25mg/100ml/瓶。
实施例9
消旋丁苯酞25g，依达拉奉20g，羟丙基-β-环糊精 600g，氯化钠 900g，乙酰半胱氨酸25g、无水乙醇100ml。
制备方法：
步骤a、包合：
①配制消旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取2L注射用水，加热至50℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后以5ml/min速度加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至80L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠（二者比例1:1），控制pH4.5，再加入乙酰半胱氨酸、氯化钠，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入100g活性炭，于80℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得。
所得复方注射液规格为：消旋丁苯酞25mg、依达拉奉20mg/100ml/瓶。
实施例10
1动物实验材料
1.1药品 受试药物：丁苯酞软胶囊，丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液，丁苯酞+依达拉奉注射液（实施例9复方注射液），依达拉奉注射液，所述丁苯酞均为消旋体。
阴性对照：氯化钠注射液。
1.2 试剂 氯代三苯基四氮唑（红四氮唑或TTC），由威佳公司提供，进口分装，白色粉末，用PBS缓冲液配成1％溶液备用。水合氯醛，五联化工厂（中国上海）；磷酸氢二钠，广州新成化工厂提供；磷酸二氢钠，北京益利精细化学品有限公司。 SOD、MDA、NO检测试剂盒，均由南京建成生物工程公司产品。
1.3仪器 电热恒温干燥箱，长沙医疗器械厂；BI2000医学图象系统，四川省成都泰盟科技有限公司；
1.4其它 专用栓线，直径为0.22-0.25 mm；显微手术器械2套，微型动脉夹等。
1.5动物 SPF级SD大鼠，雄性体重240-280g。动物进入清洁级动物实验室后，每笼放养5只，饲养3天以上启用，由专人饲养管理。动物室灯光12小时照明，通风和空调设备良好，室温控制在25±2℃，相对湿度为40-70%。实验室按常规定期消毒。
1.6剂量设置 丁苯酞软胶囊的大鼠剂量为ig. 0.130g/kg；丁苯酞软胶囊（ig）+依达拉奉注射液（iv）组大鼠口服丁苯酞软胶囊0.130g/kg同时注射依达拉奉注射液0.010g/kg；丁苯酞+依达拉奉复方注射液组为iv，其中丁苯酞为0.010g/kg，依达拉奉为0.008g/kg；依达拉奉注射液组为iv 0.010g/kg。
数据处理 所有实验数据以`x±s表示，数据由SPSS12.0统计软件进行方差分析及组间检验。
2.对大鼠大脑中动脉栓线法局灶性脑缺血（MCAO）再灌注损伤模型的影响
2.1分组及给药 取清洁级雄性SD大鼠，体重240-280g，按随机分组原则分成6组，分别为假手术组、模型组、丁苯酞软胶囊0.13g/kg(ig)、丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液0.130g/kg（ig）和0.010g/kg（iv）组、丁苯酞+依达拉奉复方注射液0.010g/kg（iv）和0.008g/kg（iv）组、依达拉奉注射液（iv）组。按以上预先按剂量设置连续给药3天，末次给药后1h开始造模。造模后，继续给药1周。
2.2造模方法 将大鼠用10%水合氯醛3.5ml/kg 腹腔注射麻醉，颈正中切口，分离、结扎右侧颈总动脉、颈外动脉及其分支动脉。在颈内动脉近端备线、远端放置动脉夹，颈总动脉分叉处切口，插入栓线，其深度为17～20mm，栓线进入颈内动脉，入颅至大脑前动脉，阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹，扎备线，伤口以碘伏消毒，最后缝合皮肤，缺血2h后拔出栓线一部分实行再灌注，手术完毕回笼饲养。假手术组除不插线外，其余步骤同上。其余各组大鼠按上述手术方法造模。
造模成功的标准：动物手术后有明显手术侧（即左侧）Horner症（左侧眼睑下垂，眼球凹陷）及手术侧（即左侧）偏瘫体症（不能完全伸展左前肢，行走时向左侧倾倒或转圈）；TTC染色有一定的白色梗死灶。
2.3观察指标
2.3.1行为学评分 观察大鼠行为学变化，进行神经病学评分。
参考Zea Longa的4分制评分标准：
0分，无神经损伤症状；
1分，不能完全伸展对侧前爪；
2分，向外侧转圈；
3分，向对侧倾倒；
4分，不能自发行走，意识丧失。
2.3.2脑含水量测定 造模给药1周后，取各组大鼠快速断头取鼠大脑，称湿重，染色照相后置120℃烤箱烘干至恒重，按以下公式计算脑组织含水量，脑组织含水量(%)＝（湿重－干重）/湿重×100％。
2.3.3血清生化指标测定
造模后给药一周后，每组大鼠从腹腔静脉抽血，检测血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）的水平或含量。
检测方法：MDA测定采用硫代巴比妥酸法, SOD活力检测采用黄嘌呤氧化法，NO检测采用南京建成检测试剂盒。
2.3.4.脑梗塞范围的测定 造模后给药一周，取各组大鼠快速取全脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冰冻25分钟。然后均匀切成5-7片，接着迅速将脑片置1％红四氮唑（TTC）中，避光，37℃温孵20分钟，其间每隔7～8min翻动一次，染色后以4％多聚甲醛固定。染色结果：正常组织呈红色，梗塞组织呈白色。拍照并用BI2000医学图象分析系统计算脑梗塞面积百分比。
2.4 结果
2.4.1行为学评分结果
经过脑缺血再灌注损伤的大鼠麻醉清醒后即有偏瘫样症状出现。主要表现为不同程度的手术对侧前肢内收，肩内旋，肌张力降低，推右肩向对侧移动，抵抗阻力降低，甚至有些动物还出现不停地向一侧转圈现象。
表 1 对MCAO大鼠神经行为学评分的影响(χ± s，N=15)
| 组别 | 剂量（g/kg） | 神经行为学评分 |
| 假手术组 | - | 0.16±0.20 |
| 模型组 | - | 1.98±0.53# |
| 丁苯酞软胶囊组 | 0.130 | 1.59±0.46* |
| 丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组 | 0.130（ig）+0.010（iv） | 1.38±0.42*# |
| 丁苯酞+依达拉奉注射液组 | 0.010+0.008（iv） | 1.35±0.39*# |
| 依达拉奉注射液组 | 0.010（iv） | 1.57±0.41* |
与假手术组比较，#为P<0.01；与模型组比较：*#为P<0.01，*为P<0.05。
由表 1可见，与模型组相比，丁苯酞软胶囊组和丁苯酞口服+依达拉奉注射液组、丁苯酞+依达拉奉复方注射液组、依达拉奉注射液组均可明显改善MCAO大鼠神经行为学评分（P<0.05或P<0.01），而且丁苯酞口服+依达拉奉注射液组、丁苯酞+依达拉奉注射液组两组改善MCAO大鼠神经行为学能力较丁苯酞软胶囊组和依达拉奉注射组更高。
2.4.2对脑组织含水量的影响
表2 对MCAO大鼠脑含水量的影响 (`x±s，N=15)
| 组别 | 剂量（g/kg） | 脑含水量（%） |
| 假手术组 | - | 75.6±0.51 |
| 模型组 | - | 78.39±1.56# |
| 丁苯酞软胶囊组 | 0.130 | 77.23±1.68 |
| 丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组 | 0.130（ig）+0.010（iv） | 76.78±1.45* |
| 丁苯酞+依达拉奉注射液组 | 0.010+0.008（iv） | 75.93±1.66* |
| 依达拉奉注射液组 | 0.010（iv） | 77.34±1.51 |
与假手术组比较，#为P<0.01；与模型组比较：*#为P<0.01，*为P<0.05。
由表 2可见，丁苯酞软胶囊组0.130 g/kg组和依达拉奉注射液组有改善大鼠脑含水量趋势，但与模型组相比无统计学意义(P>0.05)。丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组、丁苯酞+依达拉奉复方注射液组可改善大鼠脑含水量。
2.4.3对血清中SOD、MDA和NO含量的影响
表3 对MCAO大鼠脑组织中SOD和MDA含量的影响 (`x±s，N=15)
| 组别 | 剂量（g/kg） | SOD含量(u/ml) | MDA含量(μmol/L) | NO含量(μmol/L) |
| 假手术组 | - | 161.5±7.6 | 6.2±2.5 | 20.3±4.0 |
| 模型组 | - | 138.3±8.7# | 14.9±7.0# | 30.1±8.8# |
| 丁苯酞软胶囊组 | 0.130 | 147.2±9.6* | 8.6±4.6* | 23.8±5.4* |
| 丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组 | 0.130（ig）+0.010（iv） | 153.5±11.3*# | 7.8±4.3*# | 23.1±6.2* |
| 丁苯酞+依达拉奉注射液组 | 0.010+0.008（iv） | 156.8±11.1*# | 7.5±4.1*# | 22.1±5.0*# |
| 依达拉奉注射液组 | 0.010（iv） | 146.8±9.6* | 8.9±5.2 | 24.0±4.8* |
与假手术组比较，#为P<0.01；与模型组比较：*#为P<0.01，*为P<0.05。
见表3，丁苯酞软胶囊组、丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组、丁苯酞+依达拉奉复方注射液组、依达拉奉组与模型组比较，SOD活性明显升高（分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01、P<0.05），MDA含量显著下降（分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01、P<0.05）；对血清NO改变较明显（分别为P<0.05、P<0.05、P<0.01、P<0.05）。对比丁苯酞软胶囊组和依达拉奉注射液组，丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组、丁苯酞+依达拉奉复方注射液组对SOD活性、MDA含量和血清NO的改善能力更好。
2.4.4对大鼠脑梗塞范围的影响
表4 对MCAO大鼠脑梗死面积的影响 (`x±s，N=12)
| 组别 | 剂量 (g /kg) | 脑梗死面积（%） |
| 假手术组 | - | 0.5±0.9 |
| 模型组 | - | 23.6±6.9# |
| 丁苯酞软胶囊组 | 0.130 | 18.1±5.6 |
| 丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组 | 0.130（ig）+0.010（iv） | 16.8±5.4* |
| 丁苯酞+依达拉奉注射液组 | 0.010+0.008（iv） | 16.6±4.3* |
| 依达拉奉注射液组 | 0.010（iv） | 18.5±5.8 |
与假手术组比较，#为P<0.01；与模型组比较：*#为P<0.01，*为P<0.05。
由表4看出，脑缺血再灌注后脑组织梗塞程度明显，梗塞面积占总脑面积的23.6±6.9%。丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组、丁苯酞+依达拉奉复方注射液组对比丁苯酞软胶囊组和依达拉奉注射液组给药后，使脑梗塞面积百分比明显下降（P<0.05）；丁苯酞软胶囊组、依达拉奉注射液组也有一定改善趋势，但与模型组相比无统计学意义(P>0.05)；与丁苯酞软胶囊组、依达拉奉注射液组相比，丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组、丁苯酞+依达拉奉注射液组对脑缺血再灌注24h 后脑组织梗塞的改善能力更强。
2.4.5ALT、AST的检测情况
检测上述各组大鼠的ALT、AST。
表5 各组大鼠ALT和AST的比较 (`x±s，N=15)
| 组别 | 剂量 (g /kg) | ALT（u/l） | AST（u/l） |
| 假手术组 | - | 55.88±7.31 | 157.89±15.12 |
| 模型组 | - | 57.24±6.85 | 153.44±14.68 |
| 丁苯酞软胶囊组 | 0.130 | 101.38±12.64*# | 223.52±20.32*# |
| 丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组 | 0.130（ig）+0.010（iv） | 151.64±14.32*# | 289.48±26.10*# |
| 丁苯酞+依达拉奉注射液组 | 0.010+0.008（iv） | 77.35±8.46 | 189.43±17.58 |
| 依达拉奉注射液组 | 0.010（iv） | 123.62±12.96*# | 245.71±22.35*# |
与丁苯酞+依达拉奉注射液组比较：*#为P<0.01，*为P<0.05。
丁苯酞+依达拉奉复方注射液组与丁苯酞软胶囊组、丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液组、依达拉奉注射液组相比，ALT、AST明显低于上述三组，统计有显著性差异。
3.小结 结果显示，对于改善大鼠脑缺血再灌注模型的各项指标以及考虑引起肝脏的不良反应，丁苯酞+依达拉奉复方注射液较丁苯酞软胶囊、丁苯酞软胶囊+依达拉奉注射液、依达拉奉注射液更有优势。
Claims (1)
1.一种含有丁苯酞和依达拉奉的复方注射液的制备方法，其特征在于，所述复方注射液的制备原料为：消旋丁苯酞25g，依达拉奉20g，羟丙基-β-环糊精 600g，氯化钠 900g，乙酰半胱氨酸25g、无水乙醇100ml；
制备按如下步骤进行：
步骤a、包合：
①配制消旋丁苯酞的无水乙醇溶液，备用；
②取2L注射用水，加热至50℃，加入羟丙基-β-环糊精，搅拌，使其溶解完全，然后以5ml/min速度加入步骤①所得溶液，搅拌至呈澄清透明，无油滴存在，然后加入注射用水至80L，所得溶液备用；
步骤b、配制复方溶液：向步骤a所得溶液中加入磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，二者比例1:1，控制pH4.5，再加入乙酰半胱氨酸、氯化钠，搅拌使其完全溶解，最后加入依达拉奉，搅拌使其完全溶解于溶液中，所得溶液备用；
步骤c、除菌过滤：向步骤b所得溶液中加入100g活性炭，于80℃条件下搅拌20min，然后过滤除炭，添加注射用水至100L，再用0.22um滤膜过滤，灌封，121℃、12min 蒸汽灭菌，即得复方注射液；
复方注射液规格为：消旋丁苯酞25mg、依达拉奉20mg/100ml/瓶。
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