CN102512457B

CN102512457B - 一种利用牛胆汁制备复合胆红素钙的方法

Info

Publication number: CN102512457B
Application number: CN2011104309858A
Authority: CN
Inventors: 李幼鹤; 蔡红娇; 罗张龙
Original assignee: WUHAN JIANMIN DAPENG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: WUHAN JIANMIN DAPENG PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2011-12-21
Filing date: 2011-12-21
Publication date: 2013-06-19
Anticipated expiration: 2031-12-21
Also published as: CN102512457A

Abstract

本发明涉及一种利用牛胆汁制备复合胆红素钙的方法。调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3~7%（g/ml）；将大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或组合菌液接种到培养基中进行扩大培养，直到细菌进入生长平稳期，杀死菌体，并进行超声振荡，使菌体破裂，取牛胆汁与菌种处理液进行混合，30~50℃下搅拌保温；用稀酸调节牛胆汁与菌种混合液的pH值到3~5，30~50℃下搅拌保温，再加入澄清饱和氧化钙溶液，充分搅拌，滤取棕红色沉淀物；再向沉淀中加入胆红素、胆酸、去氧胆酸、硫酸锌、硫酸镁后，搅拌混匀；冷冻后真空干燥。通过本发明方法，进一步简化生产过程，提高产品收率。

Description

一种利用牛胆汁制备复合胆红素钙的方法

技术领域

本发明属于制药技术领域，涉及一种中药原料药的中间体的制造方法，尤其涉及一种利用牛胆汁制备复合胆红素钙的方法。

背景技术

牛黄即牛胆结石，天然牛胆结石的形成是多种因素共同作用的结果。肝脏通过合成葡萄糖醛酸酯的方式，将胆红素、类固醇等非水溶性物质转变为水溶性物质，然后从胆汁中排出，因而胆汁中的胆红素多为结合性胆红素。胆汁中的大肠杆菌在生长繁殖过程中能产生β－葡萄糖醛酸苷酶，可使结合胆红素水解为游离胆红素以及葡萄糖醛酸，而胆汁中葡萄糖醛酸增多的时侯，又能促使细菌产生更多的β－葡萄糖醛酸苷酶到胆汁中，β－葡萄糖醛酸苷酶活性的增加又可以增加结合胆红素的水解，如此循环，使结合胆红素不断的水解为游离胆红素，游离胆红素与胆汁中钙离子结合形成胆红素钙盐，在粘多糖的作用下形成胆红素钙粘多糖高分子多聚物复合体（复合胆红素钙），即牛黄小颗粒。细菌的活动还能使胆汁的PH值降低，使蛋白质沉降，易于与胆红素钙盐形成复合胆红素钙。

武汉大鹏药业有限公司于2001年申报了专利（申请号01133550.5）。该方法是在牛胆汁加入一定量的大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或其组合菌液，对牛胆汁进行细菌发酵处理。再利用发酵牛胆汁和澄清饱和氧化钙溶液制取有效成份的沉淀物，然后根据药用要求加入适量的胆红素、胆酸、去氧胆酸和无机盐后，制作复合胆红素钙。再利用复合胆红素钙和发酵牛胆汁在体外培育牛胆结石。

在现有人工合成牛黄技术中，普遍采用的是接种大肠杆菌到胆汁中，通过微生物的发酵改变胆汁的理化性质，再加入饱和石灰水而得到复合胆红素钙，这一过程不仅工艺复杂，而且效率极低，实际上微生物发酵的过程就是产生β－葡萄糖醛酸苷酶和调节胆汁PH值的过程，而这二点我们都可以通过一种新的方法来替代，从而略去发酵的复杂操作，本发明就是在保证复合胆红素钙的成份稳定不变的前提下，进一步简化生产过程，提高产品收率。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单、效率更高的复合胆红素钙的制备方法。

技术方案包括如下步骤：

1、调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3~7%（g/ml），使其达到药用要求。

2、β－葡萄糖醛酸苷酶菌液的制备

将大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或组合菌液接种到培养基中进行扩大培养，直到细菌进入生长平稳期，将处于生长平稳期的大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或组合菌液进行紫外灭菌处理，杀死菌体，并进行超声振荡，使菌体破裂，取牛胆汁与菌种处理液按(1~3)：1的比例进行混合，30~50℃下搅拌保温0.5~1.5小时。

3、调节pH值，制备复合胆红素钙

用稀酸调节牛胆汁与菌种混合液的pH值到3~5，30~50℃下搅拌保温0.5~1.5小时，再加入澄清饱和氧化钙溶液，充分搅拌，滤取棕红色沉淀物；在棕红色沉淀物中，加入水进行搅拌、洗涤，静置后滤去上清液，以除去水溶性杂质；再向沉淀中加入总重量35~55%的胆红素、5~15%的胆酸、2.5~7.5%的去氧胆酸、0.3~0.6%的硫酸锌、0.3~0.6%的硫酸镁后，搅拌混匀；冷冻后真空干燥。

通过使用本发明方法，省去发酵的复杂操作，在保证复合胆红素钙的成份稳定不变的前提下，进一步简化生产过程，提高产品收率。

附图说明

图1 利用牛胆汁制备复合胆红素钙的工艺流程图。

具体实施方式

实施例1

（1）调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3%（g/ml）。

（2）将处于生长平稳期的大肠杆菌菌液进行紫外灭菌处理，杀死菌体，并进行超声振荡，使菌体破裂，取牛胆汁10000ml与菌种处理液按1比1进行混合，30℃下搅拌保温1.5小时，调节混合液pH值至5，30℃下搅拌保温1.5小时，再加入11000ml澄清饱和氧化钙溶液，充分搅拌，滤取棕红色沉淀物

（3）每569g（干重）沉淀中加入350g胆红素、50g胆酸、25g去氧胆酸、3g硫酸锌、3g硫酸镁后，搅拌混匀备用。

（4）将配好的复合胆红素钙放入低温冷冻箱中，－5℃冷冻24小时，之后转入真空干燥箱中，抽真空到0.085Mpa，40℃干燥48小时，即得复合胆红素钙。

实施例2

（1）调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至5%（g/ml）。

（2）将处于生长平稳期的肠球菌菌液进行紫外灭菌处理，杀死菌体，并进行超声振荡，使菌体破裂，取牛胆汁10000ml与菌种处理液按2比1进行混合，40℃下搅拌保温1小时，调节混合液PH值至4，40℃下搅拌保温1小时，再加入30000ml澄清饱和氧化钙溶液，充分搅拌，滤取棕红色沉淀物

（3）每390g（干重）沉淀中加入450g胆红素、100g胆酸、50g去氧胆酸、5g硫酸锌、5g硫酸镁后，搅拌混匀备用。

（4）将配好的复合胆红素钙放入低温冷冻箱中，－8℃冷冻20小时，之后转入真空干燥箱中，抽真空到0.085Mpa，50℃干燥36小时，即得复合胆红素钙。

实施例3

（1）调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至7%（g/ml）。

（2）将处于生长平稳期的变形杆菌菌液进行紫外灭菌处理，杀死菌体，并进行超声振荡，使菌体破裂，取牛胆汁10000ml与菌种处理液按3比1进行混合，50℃下搅拌保温0.5小时，调节混合液PH值至3，50℃下搅拌保温0.5小时，再加入40000ml澄清饱和氧化钙溶液，充分搅拌，滤取棕红色沉淀物

（3）每213g（干重）沉淀中加入550g胆红素、150g胆酸、75g去氧胆酸、6g硫酸锌、6g硫酸镁后，搅拌混匀备用。

（4）将配好的复合胆红素钙放入低温冷冻箱中，－10℃冷冻16小时，之后转入真空干燥箱中，抽真空到0.085Mpa，60℃干燥24小时，即得复合胆红素钙。

Claims

1.一种利用牛胆汁制备复合胆红素钙的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）调节天然牛胆汁中的牛磺酸含量至3~7%（g/ml）；

2）β－葡萄糖醛酸苷酶菌液的制备

将大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或组合菌液接种到培养基中进行扩大培养，直到细菌进入生长平稳期，将处于生长平稳期的大肠杆菌、肠球菌、变形杆菌的单一菌液或组合菌液进行紫外灭菌处理，杀死菌体，并进行超声振荡，使菌体破裂，取牛胆汁与菌种处理液按(1~3)：1的比例进行混合，30~50℃下搅拌保温0.5~1.5小时；

3）调节pH值，制备复合胆红素钙

用稀酸调节牛胆汁与菌种混合液的pH值到3~5，30~50℃下搅拌保温0.5~1.5小时，再加入澄清饱和氧化钙溶液，充分搅拌，滤取棕红色沉淀物；在棕红色沉淀物中，加入水进行搅拌、洗涤，静置后滤去上清液，以除去水溶性杂质；再向沉淀中加入总质量35~55%的胆红素、5~15%的胆酸、2.5~7.5%的去氧胆酸、0.25~0.75%的硫酸锌、0.25~0.75%的硫酸镁后，搅拌混匀；冷冻后真空干燥。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，将配好的复合胆红素钙放入低温冷冻箱中，－5℃至－10℃冷冻16-24小时，之后转入真空干燥箱中，抽真空到0.085Mpa，干燥24-48小时。