CN102507567B - 细菌定量比色卡及其制备、使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种细菌定量比色卡及其制备、使用方法。涉及微生物定量器具技术领域。该细菌定量比色卡包括：标准比色卡1，比色杯2。该细菌定量比色卡可以对细菌数定量测定，精确度可达到平板测定水平，整个检测过程简单方便不需仪器设备，10-30min出结果。
Description
技术领域
本发明涉及到细菌定量测定的方法，具体的讲就是细菌定量比色卡及其制备、使用方法，其属于微生物检测技术领域。
背景技术
测定微生物数量的方法较多，根据细菌数量检测的不同目的，常采用不同的方法。细菌数量检测主要用于两大方面：一是用于医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中。这些实验往往是分离细菌后或细菌复苏后，要进行增菌过程，当细菌达到一定浓度后，将其定量，然后进行实验，对其定菌量的方法主要有：显微镜直接计数法：是将小量待检测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容量的计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法；平板法：是根据微生物在固体培养基上所形成的菌落，是由一个单细胞繁殖而成的，它测出样品的活菌数；光电比浊法：通过测定菌悬液的光密度与标准曲线比较对其定量；麦氏比浊法：用不同浓度的BaCl2与稀H2SO4配制成10个梯度的BaSO4，将菌悬液在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，即可目测出该菌液的大致浓度。二是用于食品、饮用水中细菌的检测，这是对微量菌进行检测，目前用得较多的有：平板计数法：同前；滤膜法：一定数量的样液通过滤膜时，细菌被截留在滤膜表面，将滤膜置于培养基上培养后，计数生长的菌数，这种方法跟普通平板菌落计数法相近；纸片法：原理是一种预先预备好的培养基系统，含有标准的培养基，冷水可溶性的凝胶剂和氯化三苯四氮唑指示剂，菌落在测试片上呈红色或粉红色，这样可增强菌落计数效果，其操作过程为加1ml样液到纸片上，后压上压板，静置1min后培养，培养条件与普通平板法一样；电阻抗法：该方法原理是根据微生物生长代谢将培养基中蛋白质和碳水化合物转变为氨基酸及乳酸等，引起培养基电阻抗微弱变化，可由阻抗检测仪器记录；流式细胞术，自动免疫技术，生物荧光法，等新的快速检测方法出现，生物荧光法是最有望实现即时检测细菌总数的快速方法。
发明内容
本发明是针对用于医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中增菌后使细菌达到一定浓度，迫切需要一种直观，快速，简便的测定方法，细菌定量比色卡则为此而设计发明的，以达到直观，快速，简便测定细菌数量的目的。
本发明以现有的技术的实际特点，由于现用于医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中细菌显微镜直接计数法，对一些运动菌检测不准，还需仪器等；平板法，较为准确但比较繁琐，需配培养基，时间较长；麦氏比浊法，较为简单快速，但每次标准品需要现配现用，相对麻烦；光电比浊法，较为准确但需一定的仪器设备。因而，目前在医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中细菌定量中，迫切需要一种较为准确，直观，快速，简便的测定方法，并能用于任何一种细菌的数量的测定。因此，本发明针对现有测定方法存在的问题，利用现有技术比色的原理，即在菌中加脱氢酶的底物(显色液)，通过比色测菌脱氢酶活性，根据酶活力与菌体生物量呈正比关系，计算细菌的数量，还利用该原理测定的菌数与菌的种类无关，提供了一种细菌定量比色卡及其制备、使用方法，达到了直观，快速，简便细菌定量的目的，不需要任何仪器设备，并可用于任何一种细菌的数量的测定。
本发明是由以下技术方案实现的，研制一种细菌定量比色卡，其包括：标准比色卡1，比色杯2，终止液。
所述标准比色卡1，上面设有在定量显色液作用下不同浓度的菌显现的不同颜色，用于比色。标准比色卡1制备方法为：将增殖后的菌，按比例稀释，取100-200μL菌，加入比色杯2中，摇动比色杯2约1min后，室温下静止10-30min，加终止液20-100μL，空白对照：以100-200μL蒸馏水代替菌，其他同前。用数码相机拍照，制成标准色卡。
所述比色杯2内预固定量显色液，显色液为0.01-0.4％噻唑蓝(MTT)或0.01-0.4％氯化三苯基四氮唑(TTC)。比色杯2内加显色液20-100μL，干燥灭菌后封口。
所述终止液为：5-10％甲醛。
所述的细菌定量比色卡使用方法为将被测菌取100-200μL加入比色杯2中，摇动比色杯2约1min后，室温下静止10-30min，加终止液20-100μL，然后与标准比色卡1对比，找出与其相同颜色或相似颜色，即标准比色卡1上对应的菌浓度则为该被测菌的浓度。
本发明主要优点：
(1)操作简单：本发明的细菌定量比色卡比色简单，不需每次比色时现配标准液，与标准比色卡1比色即可。
(2)快速：静放10-30min可出结果。
(3)直接读数：与标准比色卡1比色，直接读出细菌的量即个/ml
(4)不需任何仪器设备，只用该比色卡1和比色杯2即可。
(5)精确度可达到平板测定水平。
附图说明
本发明的实施例结合附图进一步描述如下：
图1：标准比色卡1
图2：比色杯2
具体实施方式
参见图1，2本发明细菌定量比色卡，其包括：标准比色卡1，比色杯2，终止液。
实施例1.比色杯2的制备：空比色杯2内加入20-100μL的0.01-0.4％噻唑蓝(MTT)或0.01-0.4％氯化三苯基四氮唑(TTC)，干燥灭菌后封口。
实施例2.标准比色卡1的制备：取不同浓度的菌(范围1-50亿/ml)100-200μL，加入比色杯2中，摇动比色杯2约1min后，室温下静止10-30min，加5-10％甲醛终止液20-100μL，菌量：显色液量：终止液量比值为4∶1∶1。用数码相机拍照，制成标准比色卡1。
实施例3.细菌定量比色卡的应用：取3个未知浓度菌液，取100-200μL分别加入3个比色杯2中，摇动比色杯2约1min后，室温下静止10-30min，加终止液20-100μL，然后与标准比色卡1对比，找出与其相同颜色或相似颜色，即标准比色卡1上对应的菌浓度则为该被测菌的浓度。取该3个未知浓度菌液，用平板计数法测定菌的浓度。结果见表1
表1细菌定量比色卡测定结果
注：一般菌浓度大于15亿/ml用的TTC的色卡，菌浓度小于15亿/ml用MTT的色卡，这样可增加比色的分辨率。
实施例3.细菌定量比色卡测定不同细菌的浓度：取8种不同的细菌，分别用细菌定量比色卡进行测定。结果见表2
表2细菌定量比色卡测定不同细菌浓度的结果
Claims (3)
1.细菌定量比色卡的制备和使用方法，其特征为：细菌定量比色卡包括：标准比色卡(1)，比色杯(2)，终止液；
所述标准比色卡(1)，上面设有在定量显色液作用下不同浓度的菌显现的不同颜色，用于比色；
所述标准比色卡(1)制备方法为：将增殖后的菌，按比例稀释，取100-200μL菌，加入比色杯(2)中，摇动比色杯(2)约1min后，室温下静止10-30min，加终止液20-100μL，空白对照：以100-200μL蒸馏水代替菌，加入比色杯(2)中，摇动比色杯(2)约1min后，室温下静止10-30min，加终止液20-100μL，用数码相机拍照，制成标准色卡；
所述比色杯(2)内预设固定量显色液；
所述显色液为：0.01-0.4％噻唑蓝(MTT)或0.01-0.4％氯化三苯基四氮唑(TTC)；
所述使用方法为将被测菌取100-200μL加入比色杯(2)中，摇动比色杯(2)约1min后，室温下静止10-30min，加终止液20-100μL，然后与标准比色卡(1)对比，找出与其相同颜色或相似颜色，即标准比色卡(1)上对应的菌浓度则为该被测菌的浓度。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：比色杯(2)内加显色液20-100μL，干燥灭菌后封口。
3.如权利要求1所述的方法，其特征为：所述终止液为：5-10％甲醛。
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