CN110305930A - 一种饮用水菌落总数快速检测方法 - Google Patents

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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
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Abstract

本发明涉及一种饮用水菌落总数快速检测方法，包括以下步骤：S1：将实验仪器放在高温压力灭菌锅中灭菌；S2：将菌落总数培养基铺满灭菌后的载玻片凹陷区域上，并在无菌条件下晾干；S3：取三支盛有水样的试管，用移液枪分别向三支试管中添加生理盐水，将水样稀释成三个浓度梯度的水样；S4：将稀释后的水样振荡均匀，吸取稀释后的水样滴加到载玻片凹陷区正中间，盖上盖玻片；S5：将载玻片放入生化培养箱中，打开LED灯源，培养，放到金相显微镜下观察；S6：调节金相显微镜放大倍数，利用计算机采集信息并处理计算出每个待测样品的菌落总数。本发明提出的一种饮用水菌落总数快速检测方法，极大的缩短菌落总数检测周期，并且检测成本比较低，操作简单。

Description

一种饮用水菌落总数快速检测方法
技术领域
本发明涉及净水领域，特别是涉及一种饮用水菌落总数快速检测方法。
背景技术
随着工业化程度的提高，自然环境的水质也受到越来越严重的污染，饮用水作为生活的必需，人们越来越重视饮用水的健康问题，因此净水设备应运而生。
但是目前市场上的净水设备质量参差不齐，通过净水设备过滤的饮用水中菌落总数是否符合国家规定的标准不得而知，影响到人们在日常生活中饮水的安全健康问题。因此，需要一种能够对饮用水中的菌落总数做出快速检测系统。
目前市面上的水质中菌落总数快速检测装置主要为测试片和培养皿以及ATP荧光检测仪等形式，如国外3M公司研发的PetrifilmTM测试片，目前被正式列为中国出入境检验检疫行业标准，该方法正逐渐被越来越多的食品生产加工企业及各类检测机构所认可，检测效果良好，但价格昂贵，并且检测时间均较长。传统培养皿方式检测菌落总数需要48小时，PetrifilmTM测试片至少也需24小时。ATP荧光检测仪虽然可快速检测细菌数量，但是仪器比较昂贵，实验结果不够稳定。在研发和生产净水器过程中，迫切需要一种更为快速高效的低成本菌落总数检测方法。
发明内容
为了克服现有技术的上述不足，本发明提出了一种饮用水菌落总数快速检测方法，解决现有检测装置存在的检测步骤繁琐，仪器成本高，且实验结果不稳定的问题。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种饮用水菌落总数快速检测方法，具体包括以下步骤：
S1：将移液枪、试管、生理盐水、载玻片及盖玻片在高温压力灭菌锅中121℃下灭菌20min；
S2：将菌落总数培养基铺满灭菌后的载玻片凹陷区域上，并在无菌条件下晾干，得到含有菌落总数培养基的载玻片；
S3：取三支盛有水样的试管，用移液枪分别向三支试管中添加生理盐水，将水样稀释成1:1、1:10、1:100三个浓度梯度的水样；
S4：用混匀仪将稀释后的水样充分振荡均匀，在超净工作台上分别吸取稀释后的1ml水样滴加到含有菌落总数培养基的载玻片凹陷区正中间，并缓慢盖上盖玻片，避免气泡产生；
S5：将载玻片放入生化培养箱中，并打开箱体内的LED灯源开关，培养2小时后取出，用酒精擦盖玻片及载玻片周围，然后放到金相显微镜下观察；
S6：调节金相显微镜目镜放大倍数为10×，物镜放大倍数为10×或40×，计算机控制金相显微镜照相机采集的图像信息并处理，计算出每个待测样品的菌落总数。
进一步的，S1中所述的生理盐水为0.9％的氯化钠水溶液，试管为25ml的玻璃试管，移液枪量程为0.5-2ml的一次性移液枪。
进一步的，S2中所述的菌落总数培养基的制备方法具体包括：
在100mL无菌水中加入以下组分及含量：蛋白胨0.8～1.2g、牛肉膏0.2～0.4g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.4～0.6g、丙酮酸钠0.2～0.4g、琼脂1～2g，搅拌溶解后，在121℃灭菌20min，冷却至室温，得到微生物生长基础培养基；再向微生物生长基础培养基中加入已灭菌的1％TTC指示剂1mL，混合摇匀，得到菌落总数培养基。
进一步的，所述的载玻片整体尺寸为76mm×26mm×1mm，载玻片上的圆形区域直径为22mm，厚度为0.5mm；盖玻片尺寸为24mm×24mm×1mm。
进一步的，S5中所述生化培养箱恒温，温度为37±1℃。
进一步的，S5中所述LED灯源为红光COB光源，光源波段为630-640nm。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
本发明提出的一种饮用水菌落总数快速检测方法，极大的缩短菌落总数检测周期，并且检测成本比较低，操作简单。
附图说明
图1为本发明实施例稀释所用组件的结构图；
图2为本发明实施例培养所用组件的结构图。
图中：
1、移液枪；2、试管；3、试管架；4、生理盐水；5、混匀仪；6、LED灯源；7、生化培养箱；8、载玻片；9、盖玻片。
具体实施方式
展示一下实例来具体说明本发明的某些实施例，且不应解释为限制本发明的范围。对本发明公开的内容可以同时从材料、方法和反应条件进行改进，所有这些改进，均应落入本发明的的精神和范围之内。
一种饮用水菌落总数快速检测方法，具体包括以下步骤：
S1：如图1-2，将移液枪1、试管2、生理盐水4、载玻片8及盖玻片9在高温压力灭菌锅中121℃下灭菌20min；
S2：将菌落总数培养基铺满灭菌后的载玻片8凹陷区域上，并在无菌条件下晾干，得到含有菌落总数培养基的载玻片8；
S3：取三支盛有水样的试管2并放置到试管架3上，用移液枪1分别向三支试管2中添加生理盐水4，将水样稀释成(稀释前水样体积：稀释后水样体积)1:1、1:10、1:100三个浓度梯度的水样，稀释后的三支试管中的液体总体积相同；
S4：用混匀仪5将稀释后的水样充分振荡均匀，混匀仪转速为50-70rpm，在超净工作台上分别吸取稀释后的1ml水样滴加到含有菌落总数培养基的载玻片8凹陷区正中间，并缓慢盖上盖玻片9，避免气泡产生；
S5：将载玻片8放入生化培养箱7中，并打开箱体内的LED灯源6开关，培养2小时后取出，用酒精擦盖玻片9及载玻片8周围，然后放到金相显微镜下观察；
S6：调节金相显微镜目镜放大倍数为10×，物镜放大倍数为10×或40×，计算机控制金相显微镜照相机采集的图像信息并处理，计算出每个待测样品的菌落总数。
在本实施例中，S1中所述的生理盐水4为0.9％的氯化钠水溶液，试管2为25ml的玻璃试管2，移液枪1量程为0.5-2ml的一次性移液枪1。
在本实施例中，S2中所述的菌落总数培养基的制备方法具体包括：
在100mL无菌水中加入以下组分及含量：蛋白胨0.8～1.2g、牛肉膏0.2～0.4g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.4～0.6g、丙酮酸钠0.2～0.4g、琼脂1～2g，搅拌溶解后，在121℃灭菌20min，冷却至室温，得到微生物生长基础培养基；再向微生物生长基础培养基中加入已灭菌的1％TTC指示剂1mL，混合摇匀，得到菌落总数培养基。
在本实施例中，所述的载玻片8整体尺寸为76mm×26mm×1mm，载玻片8上的圆形区域直径为22mm，厚度为0.5mm；盖玻片9尺寸为24mm×24mm×1mm。
在本实施例中，S5中所述生化培养箱7恒温，温度为37±1℃。
在本实施例中，S5中所述LED灯源6为红光COB光源，红光LED具有促进细菌繁殖的功能，光源波段为630-640nm。
超净工作台的净化效率≥99.9％。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (6)

1.一种饮用水菌落总数快速检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1：将移液枪(1)、试管(2)、生理盐水(4)、载玻片(8)及盖玻片(9)在高温压力灭菌锅中121℃下灭菌20min；
S2：将菌落总数培养基铺满灭菌后的载玻片(8)凹陷区域上，并在无菌条件下晾干，得到含有菌落总数培养基的载玻片(8)；
S3：取三支盛有水样的试管(2)，用移液枪(1)分别向三支试管(2)中添加生理盐水(4)，将水样稀释成1:1、1:10、1:100三个浓度梯度的水样；
S4：用混匀仪(5)将稀释后的水样充分振荡均匀，在超净工作台上分别吸取稀释后的1ml水样滴加到含有菌落总数培养基的载玻片(8)凹陷区正中间，并缓慢盖上盖玻片(9)，避免气泡产生；
S5：将载玻片(8)放入生化培养箱(7)中，并打开箱体内的LED灯源(6)开关，培养2小时后取出，用酒精擦盖玻片(9)及载玻片(8)周围，然后放到金相显微镜下观察；
S6：调节金相显微镜目镜放大倍数为10×，物镜放大倍数为10×或40×，计算机控制金相显微镜照相机采集的图像信息并处理，计算出每个待测样品的菌落总数。
2.根据权利要求1所述的一种饮用水菌落总数快速检测方法，其特征在于，S1中所述的生理盐水(4)为0.9％的氯化钠水溶液，试管(2)为25ml的玻璃试管(2)，移液枪(1)量程为0.5-2ml的一次性移液枪(1)。
3.根据权利要求1所述的一种饮用水菌落总数快速检测方法，其特征在于，S2中所述的菌落总数培养基的制备方法具体包括：
在100mL无菌水中加入以下组分及含量：蛋白胨0.8～1.2g、牛肉膏0.2～0.4g、磷酸二氢钾0.1～0.5g、氯化钠0.4～0.6g、丙酮酸钠0.2～0.4g、琼脂1～2g，搅拌溶解后，在121℃灭菌20min，冷却至室温，得到微生物生长基础培养基；再向微生物生长基础培养基中加入已灭菌的1％TTC指示剂1mL，混合摇匀，得到菌落总数培养基。
4.根据权利要求1所述的一种饮用水菌落总数快速检测方法，其特征在于，所述的载玻片(8)整体尺寸为76mm×26mm×1mm，载玻片(8)上的圆形区域直径为22mm，厚度为0.5mm；盖玻片(9)尺寸为24mm×24mm×1mm。
5.根据权利要求1所述的一种饮用水菌落总数快速检测方法，其特征在于，S5中所述生化培养箱(7)恒温，温度为37±1℃。
6.根据权利要求1所述的一种饮用水菌落总数快速检测方法，其特征在于，S5中所述LED灯源(6)为红光COB光源，光源波段为630-640nm。
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