CN102519954B - 细菌定量比色计及其制备、使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种细菌定量比色计及其制备、使用方法。涉及微生物定量器具技术领域。该细菌定量比色计包括：标准比色架1，标准比色管或比色板2，比色管3，显色液，终止液。该细菌定量比色计测定细菌浓度的准确度可达到平板计数法水平。该细菌定量比色计制备简单，稳定性、重复性好，使用方便、简单，不需要任何它仪器设备，可以直接读出细菌数，测定速度快，整个测定过程约10-30min。
Description
技术领域
本发明涉及到细菌定量测定的方法，具体的讲就是细菌定量比色计及其制备、使用方法，其属于微生物检测技术领域。
背景技术
测定微生物数量的方法较多，根据细菌数量检测的不同目的，常采用不同的方法。细菌数量检测主要用于两大方面：一是用于医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中。这些实验往往是分离细菌后或细菌复苏后，要进行增菌过程，当细菌达到一定浓度后，将其定量，然后进行实验，对其定菌的方法主要有：显微镜直接计数法：是将小量待检测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容量的计菌器上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法；平板法：是根据微生物在固体培养基上所形成的菌落，是由一个单细胞繁殖而成的，它测出样品的活菌数；光电比浊法：通过测定菌悬液的光密度与标准曲线比较对其定量；麦氏比浊法：用不同浓度的BaCl2与稀H2SO4配制成10个梯度的BaSO4，将菌悬液在透射光下用肉眼与某一比浊管进行比较，即可目测出该菌液的大致浓度。二是用于食品、饮用水中细菌的检测，这是对微量菌进行检测，目前用得较多的有：平板计数法：同前；滤膜法：一定数量的样液通过滤膜时，细菌被截留在滤膜表面，将滤膜置于培养基上培养后，计数生长的菌数，这种方法跟普通平板菌落计数法相近；纸片法：原理是一种预先预备好的培养基系统，含有标准的培养基，冷水可溶性的凝胶剂和氯化三苯四氮唑指示剂，菌落在测试片上呈红色或粉红色，这样可增强菌落计数效果，其操作过程为加1ml样液到纸片上，后压上压板，静置1min后培养，培养条件与普通平板法一样；电阻抗法：该方法原理是根据微生物生长代谢将培养基中蛋白质和碳水化合物转变为氨基酸及乳酸等，引起培养基电阻抗微弱变化，可由阻抗检测仪器记录；流式细胞术，自动免疫技术，生物荧光法，等新的快速检测方法出现，生物荧光法是最有望实现即时检测细菌总数的快速方法。
发明内容
本发明是针对用于医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中增菌后使细菌达到一定浓度，迫切需要一种直观，快速，简便的测定方法，细菌定量比色计则为此而设计发明的，以达到直观，快速，简便测定细菌数量的目的。
本发明以现有的技术的实际特点，由于现用于医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中细菌显微镜直接计数法，对一些运动菌检测不准，还需仪器等；平板法，较为准确但比较繁琐，需配培养基，时间较长；麦氏比浊法，较为简单快速，但每次标准品需要现配现用，相对麻烦；光电比浊法，较为准确但需一定的仪器设备。因而，目前在医学、动植物病原的检测及药敏、微生物等实验中细菌定量中，迫切需要一种较为准确，直观，快速，简便的测定方法，并能用于任何一种细菌的数量的测定。因此，本发明针对现有测定方法存在的问题，利用比色的原理，提供了一种细菌定量比色计及其制备、使用方法，达到了直观，快速，简便细菌定量的目的，并可用于任何一种细菌的数量的测定。
本发明是由以下技术方案实现的，研制一种细菌定量比色，其包括：比色架1，标准比色管或比色板2，比色管3，显色液，终止液。
所述标准比色架1可以固定标准比色管或比色板2和比色管3，用于比色。所述标准比色管或比色板2通常设5-8亿/ml菌浓度的标准比色管或比色板，也可根据需要设不同的标准菌浓度的标准比色管或比色板。
本发明的标准比色管或比色板2的制备方法如下：按一定浓度的菌加一定浓度的显色液混均10-30min，加一定浓度的终止液，其菌量：显色液量：终止液量为4∶1∶1，制备成标准比色管。可根据标准管的颜色及透明度制成标准比色板。
所述比色管3其上有不同的刻度线：加菌线7；显色液线6；终止液线5；按3-5亿/ml为基数递增的菌量线4，该线是由多条标有实际菌量的线组成。
所述显色液为0.01-0.4％噻唑蓝(MTT)或0.01-0.4％氯化三苯基四氮唑(TTC)。
所述终止液为甲醛溶液，其浓度为5-10％。
本发明细菌定量比色计的使用方法如下：将被测菌加入比色管3至加菌线7，加显色液至显色液线6，混均后室温下静止10-30min，加终止液至终止液线5，然后放入比色架1中与标准比色管或比色板2比色，如果比色管3中颜色较标准管2深，逐滴加入稀释液直到与标准管2色一致为止，此时比色管3中的液面所对的菌量线4刻度即为被测菌的浓度，稀释液为该被测细菌培养液。如果比色管3中颜色较标准管2浅，则增菌后再比色。
本发明主要优点：
(1)操作简单：本发明的细菌定量比色计比色简单，不需每次比色时现配标准液，直接与标准管或板比色即可。
(2)快速：整个比色时间10-30min。
(3)直接读数：可从比色管上的刻度直接读出细菌的量即个/ml
(4)不需任何仪器设备，只用该比色计即可。
(5)其精确度的可达到平板计数法水平。
附图说明
本发明的实施例结合附图进一步描述如下：
图1比色管3：加菌线7；显色液线6；终止液线5；菌量线4
图2细菌定量比色计：比色架1；标准比色管或比色板2；比色管3
具体实施方式
参见图1，2本发明细菌定量比色计，其包括：比色架1，标准比色管或比色板2，比色管3，显色液，终止液。比色管3上标有加菌线7；显色液线6；
终止液线5；菌量线4
实施例1.标准管或比色板2的制备：取5-8亿/ml浓度的菌加一定浓度的显色液混均10-30min，加一定浓度的终止液，其菌量：显色液量：终止液量为4∶1∶1，制备成标准比色管。可根据标准管的颜色及透明度制成标准比色板。
实施例2.细菌定量比色计的应用：取对3个未知浓度菌液的标本入比色管至加菌线7；再加显色液至显色液线6，10-30min后，加终止液至终止液线5，与标准比色管2比色，如果颜色比标准管颜色深，加该菌的液体培养基稀释，直至稀释到的颜色用肉眼观察和标品管相同，记录比色管内液体平面所对菌量线4的刻度，即为该标本细菌的浓度。取该标本，用平板计数法测其菌浓度。
结果见表1
表1细菌定量比色计测定结果
注：如果以上实验比色管中颜色比标准管颜色浅，可将增菌时间延长。
实施例3.细菌定量比色计测定不同细菌的浓度：取8种不同的细菌，分别用细菌定量比色计进行测定。结果见表2
表2细菌定量比色计测定不同细菌的浓度结果
Claims (7)
1.细菌定量比色计，其特征为：细菌定量比色计包括：比色架(1)，标准比色管或比色板(2)，比色管(3)，显色液，终止液；
所述标准比色管或比色板2的制备方法为：按一定浓度的菌加一定浓度的显色液混均10-30min，加一定浓度的终止液，其菌量：显色液量：终止液量为4∶1∶1，制备成标准比色管，根据标准管的颜色及透明度制成标准比色板；
所述比色管(3)上有不同的刻度线：加菌线(7)；显色液线(6)；终止液线(5)；按3-5亿/ml为基数递增的菌量线(4)，该线是由多条标有实际菌量的线组成。
2.如权利要求1所述的细菌定量比色计，其特征为：所述比色架(1)能够固定标准比色管或比色板(2)和比色管(3)，用于比色。
3.如权利要求1所述的细菌定量比色计，其特征为：所述标准比色管或比色板(2)设5-8亿/ml菌浓度的标准比色管或比色板。
4.如权利要求1所述的细菌定量比色计，其特征为：所述显色液为0.01-0.4％噻唑蓝(MTT)或0.01-0.4％氯化三苯基四氮唑(TTC)。
5.如权利要求1所述细菌定量比色计，其特征为：所述终止液为甲醛溶液，其浓度为5-10％。
6.一种权利要求1所述的细菌定量比色计的使用方法，其特征为：所述使用方法为将被测菌加入比色管(3)至加菌线(7)，加显色液至显色液线(6)，混均后室温下静止10-30min，加终止液至终止液线(5)，然后放入比色架(1)中与标准比色管或比色板(2)比色，如果比色管(3)中颜色较标准管(2)深，逐滴加入稀释液直到与标准管(2)色一致为止，此时比色管(3)中的液面所对的菌量线(4)刻度即为被测菌的浓度，如果比色管(3)中颜色较标准管(2)浅，则增菌后再比色。
7.如权利要求6所述的细菌定量比色计的使用方法，其特征为：所述稀释液为该被测细菌液体培养液。
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