CN102503907B

CN102503907B - 一种从芦根中提取薏苡素的方法

Info

Publication number: CN102503907B
Application number: CN 201110310732
Authority: CN
Inventors: 刘宏生; 赵健; 邵丽杰; 朱俊丰
Original assignee: LIAONING XIANHE MINERAL WATER CO Ltd
Current assignee: LIAONING XIANHE MINERAL WATER CO Ltd
Priority date: 2011-10-14
Filing date: 2011-10-14
Publication date: 2013-10-30
Anticipated expiration: 2031-10-14
Also published as: CN102503907A

Abstract

本发明涉及一种从芦根中提取薏苡素的方法。采用的技术方案是：a）称取一定量的芦根粉末，放入索氏提取器中，按1:15~35比例加入提取溶剂，提取2h~6h；b）旋转蒸发浓缩（40℃，0.09Mpa），60℃水浴挥干溶剂。经薄层层析，高效液相色谱定性、定量分析，证明了通过本发明确实获得了芦根薏苡素，采用HPLC法，得到标准曲线Y=217009X+12086（R2=0.9994），在0.1~0.5μg范围内呈良好的线性关系，该方法的平均回收率为96.35%，相对标准差（RSD）为0.16%，开创了芦根薏苡素研究先河，使薏苡素的开发利用成为了可能。

Description

一种从芦根中提取薏苡素的方法

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地涉及一种从芦根中提取薏苡素的方法。

背景技术

薏苡素又称薏苡酰胺。属碳环芳香族酸酚性化合物。针状结晶(水)，熔点151.5～152.5℃。无色针状结晶(丙酮-石油醚)，熔点157～158℃。薏苡素对骨骼肌和中枢神经系统有抑制作用，动物实验显示具有镇静、镇痛、消炎、降温解热、抑制多突触反应、肌肉松弛以及抗惊厥及使脑电波振幅增大、频率变慢，抑制蛙的肌肉收缩、糖原的无氧酵解等多种药理作用。据现代中西医临床试验，在合适浓度下，还可以用于改善情绪，增强性欲，辅助治疗药物滥用和成瘾等作用，对治疗神经痛症颇有疗效。通过对人体中枢神经的调节，根本解决各种因素所致的内分泌失调。薏苡素对横纹肌有抑制作用，可减少皱纹，它的特殊排毒作用，可以让皮肤质地变的透明。是天然的养颜去皱佳品，常食可以令皮肤光泽细腻，消除皱纹，紧绷皮肤，减小眼袋，防止面部肌肉下垂。对消除粉刺、斑雀，皮肤粗糙等都有良好疗效。还可以防止晒黑、改善肌肤干燥状况。大剂量时使血糖下降，降低血压。在人类生活压力日益增加的现代生活中，具有广阔的应用前景。

芦根为禾本科多年生草本植物芦苇的地下根茎，是一种较常用的中药材。性寒、味甘、归肺、胃经，具有清热、生津、除烦、止呕、利尿之功效。临床主要用于发烧、尿路感染、肺脓疡、支气管炎等病的治疗。而且，我国适宜种植芦根的地域广阔，春末夏初或秋季均可采挖，产量大，但芦根深加工技术还比较薄弱，大部分都被丢弃，造成资源的浪费。所以研究芦根提取分离方法具有现实的意义。目前还没有人从芦根中提取薏苡素，薏苡素又具有很多功能，因此，对芦根薏苡素的研究很有意义。

发明内容

本发明目的是提供一种提取工艺简单、成本低、可靠性强的芦根薏苡素提取方法。

应用本发明，一方面获得了芦根中的薏苡素，另一方面为薏苡素的研究打下了基础。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：一种从芦根中提取薏苡素的方法，包括如下步骤：a）称取芦根粉，放入索氏提取器中，加入提取溶剂，提取2~6h；b）提取液在40℃，0.09Mpa下，旋转蒸发浓缩，60℃水浴挥干溶剂，得浓缩液。

上述的从芦根中提取薏苡素的方法，还包括步骤：c）浓缩液加入甲醇溶解，0～7℃保存。

为保证芦根中薏苡素能有效地提取出来。上述的从芦根中提取薏苡素的方法：所述芦根粉为过30目筛，取筛下物。

上述的从芦根中提取薏苡素的方法：芦根粉与提取溶剂的配比为：每1g芦根粉加入15～35ml的提取溶剂。优选的，每1g芦根粉加入15～20ml的提取溶剂。更优选的，每1g芦根粉加入20ml的提取溶剂。

上述的从芦根中提取薏苡素的方法：所述提取溶剂为甲醇、氯仿、二氯甲烷、丙酮或无水乙醇的一种或两种以上的混合溶剂。优选的，提取溶剂为二氯甲烷或丙酮。

上述的从芦根中提取薏苡素的方法：更优选的，提取溶剂为丙酮，芦根粉与丙酮的配比为：每1g芦根粉加入20ml的丙酮，提取时间为3h。

本发明的有益效果是：本发明采用索氏提取的方法，成功从芦根中提取了薏苡素，并经薄层层析，高效液相色谱定性、定量分析，进一步验证了通过本发明的方法确实获得了芦根薏苡素。本发明平均回收率为96.35%，相对标准差（RSD）为0.16%，首次从芦根中提取出了薏苡素，使薏苡素的开发利用成为了可能。通过抑菌试验证实了芦根薏苡素的抗菌作用，抑菌效果是蜡样芽胞杆菌﹥金黄色葡萄球菌﹥大肠杆菌﹥枯草芽孢杆菌。

附图说明

图1是实施例2中料液比为1: 20的薄层层析定性分析、分离图。

图2A是甲醇溶液的高效液相色谱图。（阴性对照）。

图2B是薏苡素标准样品的高效液相色谱图。（阳性对照）。

图2C是实施例2中料液比为1: 20的本发明提取的薏苡素样品的高效液相色谱图。

图2D是实施例2中料液比为1: 20的本发明提取的薏苡素样品经薄层层析分离得到的薏苡素样品的的高效液相色谱图。

图3是采用外标法绘制的薏苡素标准曲线。

具体实施方式

以下结合具体实施方式对本发明做进一步详细描述

实施例1 从芦根中提取薏苡素的方法

(一) 制备方法

1）芦根的前处理：将新鲜芦根用自来水冲洗干净，蒸馏水冲洗一次，淋干水后，60℃恒温鼓风干燥箱内烘干6h。然后剪成小段，用粉碎机粉碎，粉碎的芦根粉经30目筛子过滤，取筛下芦根粉末备用。

2）提取溶剂的选择：按表1选择六种提取溶剂，分别进行索氏提取。

3）提取薏苡素的步骤：

a）称取芦根粉末，放入索氏提取器中，按料液比1:15（即1g芦根粉加入15ml的提取溶剂），如表1加入提取溶剂，提取2h；b）提取液旋转蒸发浓缩（40℃，0.09Mpa），60℃水浴挥干溶剂，得到薏苡素样品。

（二）检测

1）薄层层析分离，展开剂为石油醚/乙酸乙酯=5.5:1。通过薄层层析，可以看出，采用本发明制备的样品中分离出与标准薏苡素样品具有相同Rf值（Rf=0.44）的物质。证实本发明制备的样品中含有薏苡素。

2）将提取的薏苡素样品，溶于色谱级甲醇中，过0.45μm微孔滤膜，高效液相色谱检测。同时做薏苡素标准样品的阳性对照和甲醇溶液的阴性对照，结果可以看出，本发明制备的样品与标准薏苡素样品具有相同的峰，出峰时间基本相同（标准品的出峰时间为3.043 min，样品的出峰时间为3.057 min），说明，通过本发明，从芦根中提取出了薏苡素。

（三）含量测定：

采用HPLC法，色谱柱为Diamonsil-C18（150mm×4.6mm,5μm.迪马公司），流动相为乙腈-水(50:50)，检测波长232nm，体积流量1.0mL/min，柱温室温。如图3，采用外标法得到标准曲线Y=217009X+12086（R2=0.9994），在0.1~0.5μg范围内呈良好的线性关系，该方法相对标准差（RSD）为0.16%，结果如表1。

表1 不同提取溶剂对薏苡素含量的影响

甲醇

氯仿

甲醇：氯仿2：1(v/v)

二氯甲烷

丙酮

无水乙醇

料液比（g : ml）

1:15

薏苡素含量mg/g

0.950

0.627

1.081

3.337

4.108

1.819

结论：提取薏苡素，关键在于提取溶剂，从表1可见，采用不同的提取溶剂，其提取结果不同。采用甲醇、氯仿、甲醇和氯仿混合溶剂，无水乙醇为提取溶剂时，含量在0.627~1.819 mg/g之间，可见，含量较低，从芦根中提取薏苡素效果不好。而采用二氯甲烷或丙酮为提取溶剂，含量在3.337~4.108 mg/g之间，提取效果较高，因此本发明优选二氯甲烷或丙酮为提取溶剂，更优选的，以丙酮为提取溶剂。

实施例2 从芦根中提取薏苡素的方法

(一) 制备方法：

1）芦根的前处理：同实施例1。

2）提取溶剂的选择：按表2选择加入不同料液比的丙酮，分别进行索氏提取。

3）提取薏苡素的步骤：

a）称取一定量的芦根粉末，放入索氏提取器中，按表2的料液比加入丙酮溶剂，提取2h；b）旋转蒸发浓缩（40℃，0.09Mpa），60℃水浴挥干溶剂，得浓缩液；c）浓缩液溶于甲醇中，4℃冰箱中保存。

（二）检测

1）薄层层析分离，展开剂为石油醚/乙酸乙酯=5.5:1。结果见图1。从图1可以看出，采用本发明制备的样品中分离出与标准薏苡素样品具有相同Rf值（Rf=0.44）的物质。证实本发明制备的样品中含有薏苡素。

2）将提取的薏苡素样品，溶于色谱级甲醇中，过0.45μm微孔滤膜，高效液相色谱检测。结果见图2A，图2B，图2C和图2D。从图2A～图2D可以看出，本发明制备的样品与标准薏苡素样品具有相同的峰，出峰时间基本相同，标准品的出峰时间为3.043min，样品的出峰时间为3.057 min。说明，通过本发明，从芦根中提取出了薏苡素。

（三）含量测定：

采用HPLC法，色谱柱为Diamonsil-C18（150mm×4.6mm,5μm.迪马公司），流动相为乙腈-水(50:50)，检测波长232nm，体积流量1.0mL/min，柱温室温。如图3，采用外标法得到标准曲线Y=217009X+12086（R2=0.9994），在0.1~0.5μg范围内呈良好的线性关系，该方法的平均回收率为96.35%，相对标准差（RSD）为0.16%，结果见表2。

表2 不同料液比对薏苡素含量的影响

	丙酮	丙酮	丙酮	丙酮	丙酮
						料液比（g : ml）	1:15	1:20	1:25	1:30	1:35
薏苡素含量 (mg/g)	4.108	5.344	3.576	3.023	2.849

从表2可见，采用丙酮为提取溶剂，薏苡素含量随着料液比的增加提高，当料液比达到1:20时，薏苡素含量最高，然后薏苡素含量有所降低，从节约原料考虑，本发明优选料液比为1:15～1:20，更优选为1:20。

实施例３从芦根中提取薏苡素的方法

(一) 制备方法：

1）芦根的前处理：同实施例1。

2）提取溶剂的选择：以丙酮作为提取溶剂。

3）提取薏苡素的步骤：

a）称取一定量的芦根粉末，放入索氏提取器中，按1:20的料液比加入丙酮溶剂，按表3所示的时间分别进行提取；b）旋转蒸发浓缩（40℃，0.09Mpa），60℃水浴挥干溶剂，得浓缩液；c）浓缩液溶于甲醇中，4℃冰箱中保存。

（二）检测

2）将提取的薏苡素样品，溶于色谱级甲醇中，过0.45μm微孔滤膜，高效液相色谱检测。同时做薏苡素标准样品的阳性对照和甲醇溶液的阴性对照，结果可以看出，本发明制备的样品与标准薏苡素样品具有相同的峰，出峰时间基本相同（标准品的出峰时间为3.043min，样品的出峰时间为3.057min），说明，通过本发明，从芦根中提取出了薏苡素。

（三）含量测定：

采用HPLC法，色谱柱为Diamonsil-C18（150mm×4.6mm,5μm.迪马公司），流动相为乙腈-水(50:50)，检测波长232nm，体积流量1.0mL/min，柱温室温。如图3，采用外标法得到标准曲线Y=217009X+12086（R2=0.9994），在0.1~0.5μg范围内呈良好的线性关系，该方法的平均回收率为96.35%，相对标准差（RSD）为0.16%，结果见表3。

表3 不同提取时间对薏苡素含量的影响

	丙酮	丙酮	丙酮	丙酮	丙酮
						提取时间（h）	2	3	4	5	6
薏苡素含量 (mg/g)	5.344	6.226	5.838	5.387	5.383

从表3可见，采用丙酮为提取溶剂，薏苡素含量随着提取时间的增加提高，当提取时间达到3h时，薏苡素含量最高，然后薏苡素含量有所降低，考虑到能源消耗、生产周期延长都会增加生产成本，本发明优选提取时间为3h。

Claims

1.一种从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：包括如下步骤：a）称取芦根粉，放入索氏提取器中，加入提取溶剂，提取2~6h；b）提取液在40℃，0.09MPa下，旋转蒸发浓缩，60℃水浴挥干溶剂，得浓缩液；其中所述提取溶剂为甲醇、氯仿、二氯甲烷、丙酮或无水乙醇的一种或两种以上的混合溶剂。

2.如权利要求1所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：包括步骤：c）浓缩液加入甲醇溶解，0～7℃保存。

3.如权利要求1或2所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：所述芦根粉为过30目筛，取筛下物。

4.如权利要求1或2所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：芦根粉与提取溶剂的配比为：每1g芦根粉加入15～35mL的提取溶剂。

5.如权利要求4所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：芦根粉与提取溶剂的配比为：每1g芦根粉加入15～20mL的提取溶剂。

6.如权利要求5所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：芦根粉与提取溶剂的配比为：每1g芦根粉加入20mL的提取溶剂。

7.如权利要求1或2所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：提取溶剂为二氯甲烷或丙酮。

8.如权利要求7所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：提取溶剂为丙酮。

9.如权利要求8所述的从芦根中提取薏苡素的方法，其特征在于：芦根粉与丙酮的配比为：每1g芦根粉加入20mL的丙酮，提取时间为3h。