CN102503899A - 苯基丙氨酸衍生物的结晶、其制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

公开了具有特定的结构式的苯基丙氨酸衍生物的结晶、特别是操作性优异的结晶，保存稳定性、耐湿性或溶解性优异的结晶，可以耐工业规模下的制备的结晶，它们的制备方法及其应用、特别是作为药物组合物的有效成分的应用。

Description

苯基丙氨酸衍生物的结晶、其制备方法及其应用
本申请是国际申请日为2006年6月21日、国际申请号为PCT/JP2006/312432、进入国家阶段的国家申请号为200680030528.7、发明名称为“苯基丙氨酸衍生物的结晶、其制备方法及其应用”的PCT申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及具有特定的结构式的苯基丙氨酸衍生物的结晶、其制备方法及其应用、特别是作为药物组合物的有效成分的应用。
背景技术
已知苯基丙氨酸衍生物具有α4整联蛋白抑制作用，作为炎症性肠疾病等的治疗药物是有用的化合物(专利文献1和2)。
对此，本发明人在这些专利文献未具体记载的特定的新型苯基丙氨酸衍生物中发现：血清存在下的α4整联蛋白抑制活性特别高、总清除率低；口服给药时的血浆浓度时间下面积或生物利用度高；此外，口服给药时在生物体内的α4整联蛋白抑制活性高，基于该发现，进行PCT申请(PCT/JP/2004/0197047)。
该PCT申请的实施例151中公开的后述式(I)所示的化合物(下文也称为化合物(I))或其可药用盐，为PCT申请的实施例99中公开的后述式(II)所示化合物的前体物，活性化合物式(II)所示的化合物为存在具有极其优异的α4整联蛋白抑制活性、总清除率低(血浆中滞留性优异)等特征的化合物，为实用价值高的化合物。但是该PCT申请的实施例151中公开的后述式(I)所示的化合物是如下得到的：90℃下将对应的羧酸、对应的醇、4M氯化氢的二
Figure BSA00000588095600011
烷溶液的混合物搅拌数小时，蒸馏除去溶剂，得到的粗制物用高效液相色谱(水-乙腈，分别含有0.1％的TFA)纯化，进行冷冻干燥，回收式(I)所示的化合物(实施例101～121的方法C或基于实施例53的步骤3的方法)，该式(I)所示的化合物在为三氟乙酸盐时结晶性差。
一般地，原药的保存、制剂的加工或保存时，无定形或非结晶性固体等结晶性差的原药，对于温度、湿度、空气等环境条件，物理上以及化学上的稳定性较差或吸湿性显著。由此，在开发必需高纯度的药物时易产生问题，此外在工业规模下制备时也易伴随着困难。
此外，一般地，无定形或非结晶性固体等结晶性差的原药，由于具有吸湿分解性，制剂加工时可以利用的溶剂限于无水物，结果可能引起制剂成本的提高。
专利文献1：国际公开第02/16329号小册子
专利文献2：国际公开第03/070709号小册子
专利文献3：国际公开第04/74264号小册子
发明内容
本发明的目的在于，提供处于操作性优异的结晶形态的化合物(I)或其盐。
此外，本发明的目的在于，提供保存稳定性、耐湿性或溶解性优异的结晶作为化合物(I)或其盐。
此外，本发明的目的在于，提供可以耐工业规模下的制备的结晶作为化合物(I)。
本发明人为了解决上述问题而进行精心研究，结果在化合物(I)或其可药用盐的结晶类型的探索中发现，若在特定的溶剂中加热后，冷却至特定的温度，则产生各种形态的结晶，若使用该结晶则可以解决上述问题，从而基于该发现完成本发明。
即，本发明如下所述。
(1)式(I)所示的化合物或其盐的结晶。
(2)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的A型结晶、B型结晶、D型结晶、E型结晶或F型结晶。
Figure BSA00000588095600032
(3)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的盐酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Cl1型结晶、Cl2型结晶、Cl3型结晶、Cl4型结晶或Cl5型结晶。
Figure BSA00000588095600033
(4)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的盐酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的NW1型结晶、NW2型结晶、NW4型结晶、NW5型结晶、N1型结晶、N2型结晶、N3型结晶、N4型结晶、N5型结晶、Cl6型结晶、Cl7型结晶或Cl8型结晶。
Figure BSA00000588095600041
(5)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的硫酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Su1型结晶、Su2型结晶或Su3型结晶。
Figure BSA00000588095600042
(6)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的溴酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Br1型结晶、Br2型结晶、Br3型结晶、Br4型结晶或Br5型结晶。
(7)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的磷酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Pho1型结晶、Pho2型结晶、Pho3型结晶或Pho4型结晶。
Figure BSA00000588095600051
(8)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的马来酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Mal 1型结晶、Mal2型结晶或Mal3型结晶。
(9)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的乙酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Aca1型结晶、Aca2型结晶或Aca3型结晶。
Figure BSA00000588095600053
(10)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的D-酒石酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Tar1型结晶或Tar2型结晶。
Figure BSA00000588095600061
(11)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的L-酒石酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的L-Tar1型结晶或L-Tar2型结晶。
(12)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的甲磺酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Ms1型结晶、Ms2型结晶、Ms3型结晶、Ms4型结晶或Ms5型结晶。
Figure BSA00000588095600063
(13)(1)记载的结晶，其中，式(I)所示化合物的柠檬酸盐的结晶，是在粉末X射线衍射图谱中在下述衍射角(2θ)下显示出峰的Ca1型结晶、Ca2型结晶、Ca3型结晶或Ca4型结晶。
Figure BSA00000588095600064
(14)(1)记载的结晶，其中，在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角(2θ)8.2、11.2、14.3、15.6下显示出峰。
(15)(1)记载的结晶，具有图20的13C-NMR谱。
(16)(1)记载的结晶，具有图21的红外光谱。
(17)(14)～(16)中任意一项记载的结晶，其中，结晶为式(I)所示化合物的盐酸盐的结晶。
(18)(1)记载的结晶，其中，在粉末X射线衍射图谱中，在衍射角(2θ)6.4、9.3、12.9、15.3下显示出峰。
(19)(1)记载的结晶，具有图28的13C-NMR谱。
(20)(1)记载的结晶，具有图29的红外光谱。
(21)(18)～(20)中任意一项记载的结晶，其中，结晶为式(I)所示化合物的盐酸盐的结晶。
(22)(2)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示的化合物在选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氯甲烷、二乙基醚和吡啶中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(23)(3)或(4)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的盐酸盐在选自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二乙基醚、硝基甲烷、1，2-二甲氧基乙烷、乙酸异丙酯、乙酸乙酯、乙腈、二乙基醚、四氢呋喃、4-三氟甲基甲苯和吡啶中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(24)(5)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的硫酸盐在选自甲醇、乙醇、1，2-乙二醇、丙酮、硝基甲烷、乙酸乙酯、1，2-二甲氧基乙烷、二乙基醚、二氯甲烷、环己酮、正庚烷、四氢呋喃和吡啶中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(25)(6)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的溴酸盐在选自水、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、二异丙基醚、乙腈、乙酸乙酯、1，2-二甲氧基乙烷、环己酮和四氢呋喃中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(26)(7)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的磷酸盐在选自水、甲醇、丙醇、丙酮、二异丙基醚、二乙基醚、乙腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、1，2-二甲氧基乙烷、1，1，2，2-四氯乙烷、硝基乙烷、二氯甲烷、2，2，2-三氟乙醇、N，N-二甲基乙酰胺、环己酮、正庚烷、四氢呋喃和吡啶中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(27)(8)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的马来酸盐在选自乙醇、丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、1，2-二甲氧基乙烷和硝基甲烷中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(28)(9)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的乙酸盐在选自丙醇、丁醇、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、乙酸异丙酯和硝基甲烷中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(29)(10)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的D-酒石酸盐在选自甲醇、丙酮、1，2-二甲氧基乙烷、硝基甲烷和环己酮中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(30)(11)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的L-酒石酸盐在选自丙酮、1，2-二甲氧基乙烷中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(31)(12)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的甲磺酸盐在选自甲醇、丙酮、1，2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃和叔丁基甲基醚中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(32)(13)记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的柠檬酸盐在选自丙酮、1，2-二甲氧基乙烷、丁醇和丙醇中的溶剂中加热后，冷却至0～30℃。
(33)(14)～(17)中任意一项记载的结晶的制备方法，其特征在于，向含有式(I)所示的化合物和丙酮的混合物中加入氯化氢。
(34)(14)～(17)中任意一项记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的盐酸盐在含有丙酮和水的溶剂中加热后，加入丙酮溶剂并进行冷却。
(35)(14)～(17)中任意一项记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的盐酸盐与选自丙酮、水、四氢呋喃、乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、乙酸异丙酯中的2种以上溶剂混合，得到悬浮溶液。
(36)(18)～(21)中任意一项记载的结晶的制备方法，其特征在于，将式(I)所示化合物的盐酸盐在含有乙腈和水的溶剂中加热后，加入丙酮溶剂并进行冷却。
(37)药物组合物，含有(1)～(21)中任意一项记载的结晶。
(38)α4整联蛋白抑制剂，含有(1)～(21)中任意一项记载的结晶。
(39)α4整联蛋白依赖性的结合过程参与病理的炎症性疾病的治疗剂或预防剂，以(1)～(21)中任意一项记载的结晶为有效成分。
(40)类风湿性关节炎、炎症性肠疾病、全身性红斑狼疮、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、哮喘、牛皮癣、过敏、糖尿病、心脏血管性疾病、动脉硬化症、再狭窄、肿瘤增殖、肿瘤转移、移植排斥中的任意一种疾病的治疗剂或预防剂，以(1)～(21)任意一项记载的结晶为有效成分。
(41)式(I)所示的化合物的盐酸盐、氢溴酸盐或马来酸盐。
附图说明
[图1]对本发明的式(I)所示的化合物(游离物)的A型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图2]对本发明的式(I)所示的化合物(游离物)的A型结晶的DSC曲线进行说明。(A型结晶的制备)
[图3]对本发明的式(I)所示的化合物(游离物)的B型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图4]对本发明的式(I)所示的化合物(游离物)的D型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图5]对本发明的式(I)所示的化合物(游离物)的E型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图6]对本发明的式(I)所示的化合物(游离物)的F型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图7]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl1型结晶～Cl4型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图8]对本发明的式(I)所示化合物的硫酸盐的Su1型结晶～Su3型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图9]对本发明的式(I)所示化合物的氢溴酸盐的Br1型结晶～Br5型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图10]对本发明的式(I)所示化合物的氢溴酸盐的Br4型结晶的DSC曲线进行说明。
[图11]对本发明的式(I)所示化合物的磷酸盐的Pho1型结晶～Pho4型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图12]对本发明的式(I)所示化合物的马来酸盐的Mal1型结晶～Mal3型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图13]对本发明的式(I)所示化合物的乙酸盐的Aca1型结晶～Aca3型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图14]对本发明的式(I)所示化合物的酒石酸盐的Tar1型结晶和Tar2型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图15]对本发明的式(I)所示化合物的马来酸盐的Mal2型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明(横轴表示衍射角2θ[度]、纵轴表示强度[CPS])。
[图16]对与本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl5型结晶相关的粉末X射线衍射图谱进行说明(横轴表示衍射角2θ[度]、纵轴表示强度[CPS])。
[图17]对与本发明的式(I)所示化合物的氢溴酸盐的Br5型结晶相关的粉末X射线衍射图谱进行说明(横轴表示衍射角2θ[度]、纵轴表示强度[CPS])。
[图18]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl5型结晶的DSC曲线进行说明。横轴表示Temp(℃)。
[图19]对本发明的式(I)所示化合物的氢溴酸盐的Br5型结晶的DSC曲线进行说明。
[图20]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸酸盐的Cl5型结晶的固体NMR谱数据进行说明。
[图21]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸酸盐的Cl5型结晶的红外光谱数据进行说明。
[图22]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的NW1型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图23]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N1型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图24]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N1型结晶的DSC曲线进行说明。
[图25]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的NW2型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图26]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N2型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图27]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N2型结晶的DSC曲线进行说明。
[图28]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸酸盐的N2型结晶的固体NMR谱数据进行说明。
[图29]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸酸盐的N2型结晶的红外光谱数据进行说明。
[图30]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N3型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图31]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N3型结晶的DSC曲线进行说明。
[图32]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的NW4型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图33]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N4型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图34]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N4型结晶的DSC曲线进行说明。
[图35]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的NW5型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图36]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N5型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图37]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的N5型结晶的DSC曲线进行说明。
[图38]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl6型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图39]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl7型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图40]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl8型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图41]对本发明的式(I)所示化合物的柠檬酸盐的Ca1型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图42]对本发明的式(I)所示化合物的柠檬酸盐的Ca2型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图43]对本发明的式(I)所示化合物的柠檬酸盐的Ca3型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图44]对本发明的式(I)所示化合物的柠檬酸盐的Ca4型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图45]对本发明的式(I)所示化合物的甲磺酸盐的Ms1型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图46]对本发明的式(I)所示化合物的甲磺酸盐的Ms2型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图47]对本发明的式(I)所示化合物的甲磺酸盐的Ms3型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图48]对本发明的式(I)所示化合物的甲磺酸盐的Ms4型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图49]对本发明的式(I)所示化合物的甲磺酸盐的Ms5型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图50]对本发明的式(I)所示化合物的L-酒石酸盐的L-Tar1型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图51]对本发明的式(I)所示化合物的L-酒石酸盐的L-Tar2型结晶的粉末X射线衍射图谱进行说明。
[图52]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl6型结晶的DSC曲线进行说明。
[图53]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl7型结晶的DSC曲线进行说明。
[图54]对本发明的式(I)所示化合物的盐酸盐的Cl8型结晶的DSC曲线进行说明。
[图55]对本发明的式(I)所示化合物的甲磺酸盐的Ms 1型结晶的DSC曲线进行说明。
具体实施方式
本发明中，成为对象的上式(I)所示的化合物，为下式(II)的活性主体的前体药物。
Figure BSA00000588095600131
上述(1)的结晶中，作为式(I)所示化合物的盐，优选为盐酸盐、溴酸盐和马来酸盐，特别优选为盐酸盐。
上式(I)所示化合物的结晶，可以为游离物或其水合物、溶剂化物的结晶。如上述(2)所述，它们是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的A型结晶、B型结晶、D型结晶、E型结晶或F型结晶。
其中，A型结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物优选在二甲基甲酰胺或吡啶、特别优选在吡啶中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后急剧(例如，20～40℃/小时的冷却速度、优选为30℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到A型结晶。如此得到的结晶通常为水合物的形态。
B型结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物优选在1-丁醇、叔丁醇、2-丁醇、1-丙醇、2-丙醇、乙醇、二乙基醚或二甲基亚砜，特别优选在1-丁醇、叔丁醇或乙醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后急剧(例如，20～40℃/小时的冷却速度、优选为30℃/小时)或缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到B型结晶。
D型结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物优选在甲醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后急剧(例如，20～40℃/小时的冷却速度、优选为30℃/小时)或缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到D型结晶。
E型结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物优选在乙醇、二氯甲烷或二乙基醚，特别优选在乙醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到E型结晶。如此得到的结晶通常为无水物的形态。
F型结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物优选在叔戊醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到F型结晶。
上述式(I)所示化合物的盐酸盐的结晶，如上述(4)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Cl1型结晶、Cl2型结晶、Cl3型结晶、Cl4型结晶或Cl5型结晶。此外，如上述(5)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的NW1型结晶、NW2型结晶、NW4型结晶、NW5型结晶、N1型结晶、N2型结晶、N3型结晶、N4型结晶、N5型结晶、Cl6型结晶、Cl7型结晶或Cl8型结晶。Cl5型结晶，如上述(14)～(17)所述，由(14)所述的粉末X射线衍射图谱中的特定衍射角(2θ)的峰、图20的13C-NMR谱和/或图21的红外光谱确定。此外，N2型结晶，如上述(18)～(21)所述，由(18)所述的粉末X射线衍射图谱中的特定衍射角(2θ)的峰、图28的13C-NMR谱和/或图29的红外光谱确定。
其中，Cl1型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的盐酸盐，优选在4-三氟甲基甲苯、吡啶或丙酮，特别优选在吡啶中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Cl1型结晶。
Cl2型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的盐酸盐，优选在硝基甲烷或二乙基醚，特别优选在硝基甲烷中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Cl2型结晶。
Cl3型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的盐酸盐，优选在2-丁醇或1，2-二甲氧基乙烷，特别优选在2-丁醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Cl3型结晶。
Cl4型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的盐酸盐，优选在乙酸异丙酯或甲醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Cl4型结晶。此外，使用2-丙醇、乙腈、乙醇或乙酸乙酯，优选使用2-丙醇作为溶剂时，除了使陈化时间约为72小时之外，可以用与上述相同的方法得到Cl4型结晶。
Cl5型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的盐酸盐，优选在四氢呋喃(THF)中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后以0.5～10℃/小时的冷却速度，优选缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，特别优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Cl5型结晶。
Cl5型结晶为特别优选的结晶。
Cl5型结晶可以通过以向式(I)所示的化合物和丙酮的混合物中加入氯化氢为特征的制备方法得到。其中，加入氯化氢时，例如，可以使用氯化氢气体、盐酸、含有氯化氢的碳原子数为1～6的醇等。
更具体地说，例如，用丙酮稀释盐酸制备成0.05～1.00mmol/ml的氯化氢浓度，将其加入到式(I)所示的化合物(游离物)的丙酮溶液中，将该混合物搅拌的同时优选加热至50～80℃、特别优选至60℃，然后比较缓慢地(0.5～10℃/小时的冷却速度)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时～72小时，滤出所析出的结晶，在60～85℃下减压干燥，由此可以得到Cl5型结晶。
此外，Cl5型结晶可以通过以将式(I)所示化合物的盐酸盐在含有丙酮和水的混合溶剂中加热后加入丙酮溶剂，并进行冷却为特征的制备方法来得到。
更具体地说，例如，将丙酮和水的混合溶剂与式(I)所示化合物的盐酸盐的混合物，优选加热至50～80℃、特别优选至65℃，将该化合物溶解，将热的溶液过滤，向滤液中滴加丙酮，根据需要在途中加入晶种，将所得到的浆液冷却至2～20℃、优选至10℃，将所析出的结晶过滤，在60～85℃、优选80℃下减压干燥，由此可以得到Cl5型结晶。
此外，Cl5型结晶可以通过以将式(I)所示化合物的盐酸盐与选自丙酮、水、THF、乙腈、甲醇、乙醇、丙醇、乙酸异丙酯中的2种以上溶剂混合，得到悬浮溶液为特征的制备方法来得到。
更具体地说，例如，使不是Cl5型结晶的式(I)所示化合物的盐酸盐悬浮在丙酮中，在10～55℃、优选25℃下搅拌，过滤结晶，在60～85℃、优选80℃下减压干燥，由此可以得到Cl5型结晶。
NW1型结晶、NW2型结晶、NW5型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的盐酸盐与乙腈/水混合液混合后冷却，或加热后冷却，滴加乙腈或丙酮，从浆液中分离结晶，由此可以得到NW1型结晶、NW2型结晶、NW5型结晶。其中，通过对乙腈/水混合液与式(I)所示化合物的盐酸盐的量比，此后的冷却或加热温度、滴加溶剂的种类进行调整，可以分别得到NW1型结晶、NW2型结晶、NW5型结晶。
N1型结晶可以通过将NW1型结晶减压干燥来得到。N2型结晶可以通过将NW2型结晶减压干燥来得到。另一方面，根据NW2型结晶的溶剂附着状况，通过减压干燥，可以得到N3型结晶。N5型结晶可以通过将NW5型结晶减压干燥来得到。
此外，N2型结晶可以通过以将式(I)所示化合物的盐酸盐在含有乙腈和水的溶剂中加热后加入丙酮溶剂，并进行冷却为特征的制备方法来得到。
例如，将化合物(I)的盐酸盐与优选55～95vol％、特别优选75vol％的乙腈/水混合液混合，优选加热至55～85℃、特别优选至70℃，使其溶解。将该溶液优选冷却至25～35℃、特别优选至30℃后，滴加丙酮，搅拌整夜。将结晶从浆液中分离，将所得到的湿结晶优选加热至70～90℃、特别优选至80℃的同时进行减压干燥，由此可以得到N2型结晶。
NW4型结晶例如可以通过将式(I)所示化合物的盐酸盐与乙腈混合后进行冷却，或加热后冷却，将结晶从浆液中分离来得到。其中，通过对乙腈与式(I)所示化合物的盐酸盐的量比、此后的冷却或加热温度进行调整，可以得到NW4型结晶。
N4型结晶可以通过将NW4型结晶减压干燥来得到。
Cl6型结晶、Cl7型结晶、Cl8型结晶可以如下得到：分别使用二乙基醚、1，2-二甲氧基乙烷(DME)、2-丙醇作为溶剂，用各溶剂稀释盐酸制备成0.05～1.00mmol/ml的浓度，将其加入式(I)所示的化合物(游离物)中，将该混合物搅拌的同时优选加热至50～80℃、特别优选至60℃，然后比较缓慢地(0.5～10℃/小时的冷却速度)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时～72小时，滤得所析出的结晶，室温下减压干燥24小时以上。
上述式(I)所示化合物的硫酸盐的结晶，如上述(5)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Su1型结晶、Su2型结晶或Su3型结晶。
其中，Su1型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的硫酸盐优选在1，2-乙二醇、环己酮、吡啶或正庚烷，特别优选在吡啶中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Su1型结晶。
Su2型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的硫酸盐优选在硝基甲烷或乙酸乙酯，特别优选在硝基甲烷中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Su2型结晶。
Su3型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的硫酸盐优选在1，2-二甲氧基乙烷、乙醇、四氢呋喃、丙酮或二氯甲烷中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Su3型结晶。使用乙酸乙酯、甲醇或二乙基醚作为溶剂时，除了使陈化时间约为72小时之外，可以通过用与上述相同的方法回收Su3型结晶来得到。
上述式(I)所示化合物的氢溴酸盐的结晶，如上述(6)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Br1型结晶、Br2型结晶、Br3型结晶、Br4型结晶或Br5型结晶。
其中，Br1型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的氢溴酸盐优选在环己酮中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Br1型结晶。
Br2型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的氢溴酸盐优选在水中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Br2型结晶。但是，优选除了使用水或乙醇作为溶剂，使陈化时间约为72小时之外用与上述相同的方法得到Br2型结晶。
Br3型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的氢溴酸盐优选在丙酮、乙腈或2-丙醇，特别优选在乙腈中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Br3型结晶。
Br4型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的氢溴酸盐优选在2-丁醇、2-丙醇或四氢呋喃，特别优选在四氢呋喃中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Br4型结晶。但是，优选除了使用上述溶剂、乙腈或二异丙基醚作为溶剂，使陈化时间约为72小时之外用与上述相同的方法得到Br4型结晶。此时，特别优选使用2-丁醇或四氢呋喃。
Br5型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的氢溴酸盐优选在乙酸乙酯、丙酮或1，2-二甲氧基乙烷，特别优选在乙酸乙酯或1，2-二甲氧基乙烷中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Br5型结晶。但是，优选除了使用乙酸乙酯或1，2-二甲氧基乙烷作为溶剂，使陈化时间约为72小时之外用与上述相同的方法得到Br5型结晶。
上述式(I)所示化合物的磷酸盐的结晶，如上述(7)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Pho1型结晶、Pho2型结晶、Pho3型结晶或Pho4型结晶。
其中，Pho1型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的磷酸盐优选在环己酮、吡啶、丙酮或二氯甲烷，特别优选在环己酮、吡啶或丙酮中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Pho1型结晶。但是，优选除了使用N，N-二甲基乙酰胺或丙酮作为溶剂，使陈化时间约为72小时之外用与上述相同的方法得到Pho1型。
Pho2型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的磷酸盐优选在1，1，2，2-四氯乙烷、1，2-二甲氧基乙烷、硝基甲烷、水、正庚烷、乙酸异丙酯、乙腈、乙酸乙酯、二异丙基醚、四氢呋喃或二乙基醚，特别优选在水中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Pho2型结晶。
Pho3型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的磷酸盐优选在甲醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Pho3型结晶。
Pho4型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的磷酸盐优选在2，2，2-三氟乙醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Pho4型结晶。
上述式(I)所示化合物的马来酸盐的结晶，如上述(8)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Mal1型结晶、Mal2型结晶或Mal3型结晶。
其中，Mal1型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的马来酸盐优选在硝基甲烷、2-丁醇、乙酸异丙酯、2-丙醇或乙醇，特别优选在2-丁醇、2-丙醇或乙醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Mal1型结晶。
Mal2型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的马来酸盐优选在1，2-二甲氧基乙烷、乙腈或乙酸乙酯中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Mal2型结晶。
Mal3型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的马来酸盐优选在丙酮中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Mal3型结晶。
上述式(I)所示化合物的乙酸盐的结晶，如上述(9)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Aca1型结晶、Aca2型结晶或Aca3型结晶。
其中，Aca1型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的乙酸盐优选在硝基甲烷、乙腈或丙酮，特别优选在丙酮中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Aca1型结晶。但是，优选除了使用乙酸异丙酯、乙腈或丙酮作为溶剂，使陈化时间约为72小时之外用与上述相同的方法得到Aca1型结晶。
Aca2型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的乙酸盐优选在2-丁醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Aca2型结晶。
Aca3型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的乙酸盐优选在乙酸乙酯中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Aca3型结晶。但是，优选除了使用2-丙醇作为溶剂，使陈化时间约为72小时之外用与上述相同的方法得到Aca1型结晶。
上述式(I)所示化合物的D-酒石酸盐的结晶，如上述(10)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Tar1型结晶或Tar2型结晶。
其中，Tar1型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的D-酒石酸盐优选在环己酮、硝基甲烷、1，2-二甲氧基乙烷或丙酮，特别优选在环己酮中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Tar1型结晶。但是，优选除了使用环己酮作为溶剂，使陈化时间约为72小时之外用与上述相同的方法得到Tar1型结晶。
Tar2型结晶可以如下得到：将式(I)所示化合物的D-酒石酸盐优选在甲醇中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～3℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化约1小时或72小时，然后回收所产生的结晶，由此可以得到Tar2型结晶。
上述式(I)所示化合物的L-酒石酸盐的结晶，如上述(11)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的L-Tar1型结晶或L-Tar2型结晶。
这些结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物与L-酒石酸一起优选溶解在1，2-二甲氧基乙烷(L-Tar1型结晶用)或丙酮(L-Tar2型结晶用)中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后缓慢地(0.5～10℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化，然后滤得所产生的结晶，减压干燥进行回收，由此可以得到这些结晶。
上述式(I)所示化合物的甲磺酸盐的结晶，如上述(12)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Ms1型结晶、Ms2型结晶、Ms3型结晶、Ms4型结晶或Ms5型结晶。
这些结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物与甲磺酸一起优选溶解在甲醇(Ms1型结晶用)、THF(四氢呋喃)(Ms2型结晶用)、叔丁基甲基醚(Ms3型结晶用)、DME(1，2-二甲氧基乙烷)(Ms4型结晶用)或丙酮(Ms5型结晶用)中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后比较缓慢地(0.5～10℃/小时的冷却速度，优选为1℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化，然后滤得所产生的结晶，减压干燥进行回收，由此可以得到这些结晶。
上述式(I)所示化合物的柠檬酸盐的结晶，如上述(13)所述，是在粉末X射线衍射图谱中在特定的衍射角(2θ)下显示出峰的Ca1型结晶、Ca2型结晶、Ca3型结晶或Ca4型结晶。
这些结晶可以如下得到：将式(I)所示的化合物与柠檬酸一起优选溶解在IPA(2-丙醇)(Ca1型结晶用)、1-丁醇(Ca2型结晶用)、DME(Ca3型结晶用)或丙酮(Ca4型结晶用)中，优选在50～80℃、特别优选在60℃下加热，然后比较缓慢地(0.5～10℃/小时的冷却速度，优选为5℃/小时)冷却至2～20℃、优选至5℃，在该温度下陈化，然后滤得所产生的结晶，减压干燥，由此可以得到这些结晶。
本发明中，单纯的“丙醇”指的是1-丙醇或2-丙醇，优选指的是2-丙醇。此外，单纯的“丁醇”指的是1-丁醇、2-丁醇、2-甲基-1-丙醇或叔丁醇，优选指的是1-丁醇。
而且，粉末X射线衍射图谱的衍射角(2θ)的峰值可以根据测定条件等的微妙的不同等而稍微改变。本说明书记载的衍射角当然可以容许该误差。
此外，在13-NMR谱、红外光谱或DSC数据中，对于结晶的同一性的认定来说，整体的图谱是重要的，该光谱等可以根据测定条件等不同而稍微改变。
上述制备方法中，陈化时间1小时可以改变为30分钟～5小时，此外，约72小时可以改变为48小时以上、优选48～120小时。
上述结晶中，优选为Cl5型结晶、Br3型结晶、Br4型结晶、Br5型结晶和Mal2型结晶。特别优选为Cl5型结晶和Br5型结晶。而且，N2型结晶也是特别优选的结晶。
本发明的结晶的制备中所使用的式(I)所示化合物的盐，可以为加入溶剂前形成盐的形态或在加入溶剂的状态下，向其中加入对应的酸，在体系中形成盐。
此外，制备上述盐时，可以添加盐酸等使得相对于式(I)所示的化合物(游离物)，氯化氢、溴化氢或乙酸等酸为1∶1摩尔比以上，优选为1∶1.05～1∶1.2摩尔比左右、特别优选为1∶1.1摩尔比。
此外，式(I)所示化合物的盐，特别是盐酸盐、氢溴酸盐和马来酸盐在成为上述优选的结晶的原料方面，本身是有用的。
此外，结晶析出溶剂的量可以任意，但是式(I)所示的化合物(游离物)或其盐为1质量份时，优选为2～1000质量份，特别优选为5～40质量份。
本发明的制备方法中，用作原料的化合物(1)，不仅可以使用无定形或非结晶性固体，而且可以使用无定形或非结晶性固体暂时制备结晶，然后使用得到的结晶通过本发明的另外的制备方法制备另外的结晶。
本发明的结晶，为在易使用上、原药或制剂的“保存稳定性”或“耐湿性”方面优异的结晶，在为“可以耐工业规模下的制备”的结晶的方面是有用的，并且溶解性也优异。
上述式(II)所示化合物的前体药物上述式(I)所示的化合物，特别是在口服给药后表现出优异的效果持续性。此外，膜透过性良好，口服给药时的血浆浓度时间下面积、生物利用度也优异。此外，安全性也优异。
因此，本发明的结晶可以用作优异的α4整联蛋白抑制剂，进一步地，可以有效地用作α4整联蛋白依赖性的结合过程参与病理的炎症性疾病、类风湿性关节炎、炎症性肠疾病(包括克罗恩氏病、溃疡性大肠炎)、全身性红斑狼疮、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、哮喘、牛皮癣、过敏、糖尿病、心脏血管性疾病、动脉硬化症、再狭窄、肿瘤增殖、肿瘤转移、移植排斥中任意一种疾病的治疗剂或预防剂的有效成分。
此外，可以有效地用作子痫前期、缺血性脑疾病(包括脑梗塞)、全身性硬化症、强直性脊椎炎、牛皮癣性关节炎、肉样瘤病、巨细胞性动脉炎、葡萄膜炎、肺纤维症、慢性阻塞性肺疾病、骨关节炎、阿尔茨海默病、脊髓损伤、外伤性脑损伤、原发性硬化性胆管炎、C型肝炎导致的肝硬化、慢性活动性肝炎、骶髂关节炎、强直性脊椎炎、巩膜外层炎、虹膜炎、葡萄膜炎、结节性红斑、坏疽性脓皮病、自身免疫性肝炎中任意一种疾病的治疗剂或预防剂的有效成分。
进一步地，除了上述疾病之外，还可以有效地用作α4整联蛋白有可能参与病理的疾病的治疗剂或预防剂的有效成分。
以上述目的使用的给药量，根据目的治疗效果、给药方法、治疗期间、年龄、体重等决定，通过口服或非口服(例如，静脉内、动脉内、皮下、肌肉内、栓剂、灌肠、软膏、贴剂、舌下、滴眼、吸入等)途径，作为通常成人每天的给药量，口服给药时用量为1μg～5g，优选为1mg～1g，非口服给药时用量为0.01μg～1g。
本发明的结晶，可以适用于各种剂型，可以直接或与各种药用载体一起制备药物组合物。
作为含有本发明的结晶的药物组合物，优选为含有可以实质上发挥治疗效果的比率以上的本发明的结晶的药物组合物。可以实质上发挥治疗效果的比率由药物组合物的给药量、目的治疗效果等决定。
作为药用载体，可以举出作为制剂原材料惯用的各种有机或无机载体物质，可以举出例如，固体制剂中的赋形剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、水溶性高分子、碱性无机盐，液态制剂中的溶剂、增溶剂、助悬剂、等张剂、缓冲剂、无痛剂等。此外，根据需要可以使用通常的防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、酸味剂、发泡剂、香料等添加物。
作为该药物组合物的剂型，例如可以制成片剂、散剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、液剂、糖衣剂、デボ一剂、糖浆剂、悬浮剂、乳剂、糖锭、舌下剂、贴剂、口腔内崩解剂(片)、吸入剂、灌肠剂、软膏剂、贴布剂、胶粘剂、滴眼剂，可以使用普通的制剂助剂根据常规方法制备。
上述药物组合物，可以通过制剂技术领域中惯用的方法，例如日本药典记载的方法等制备。下文对制剂的具体的制备方法进行具体说明。
例如，将本发明的结晶制备成口服用制剂时，加入赋形剂、以及根据需要的粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味矫臭剂等后，通过常规方法，例如，制成片剂、散剂、丸剂、颗粒剂、胶囊剂、栓剂、液剂、糖衣剂、デボ一剂、糖浆剂、悬浮剂、乳剂、糖锭、舌下剂、贴剂、口腔内崩解剂(片)、吸入剂等。作为赋形剂，例如使用乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、结晶纤维素等，作为粘合剂，例如使用聚乙烯醇、聚乙烯基醚、乙基纤维素、甲基纤维素、阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、虫胶、羟基丙基纤维素、羟基丙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮等，作为崩解剂，例如使用淀粉、琼脂、明胶粉末、结晶纤维素、碳酸钙、碳酸氢钠、柠檬酸钙、糊精、果胶等，作为润滑剂，例如使用硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇、氧化硅、氢化植物油等，作为着色剂，例如使用药用着色剂，作为矫味矫臭剂，例如使用可可粉、薄荷脑、芳香酸、薄荷油、冰片、肉桂末等。当然在这些片剂或颗粒剂上可以根据需要另外适当涂布糖衣、明胶衣。
制备注射剂时，根据需要添加pH调节剂、缓冲剂、稳定剂、防腐剂等，通过常规方法制成皮下、肌肉内、静脉内注射剂。
对本发明进行更具体的说明。下文对于本发明的结晶的制备例子举出实施例进行说明，但是本发明不被它们所限定。
参考例1式(I)所示的化合物(游离物)的合成
步骤1：4-硝基-N-(2，6-二氯苯甲酰基)-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成
向4-硝基-N-(2，6-二氯苯甲酰基)-L-苯基丙氨酸(专利文献3：国际公开第2004/074264)(2.95g、7.70mmol)中加入异丙醇(130ml)、四氢呋喃(50ml)、硫酸(0.44ml)，50℃下搅拌5天。减压下蒸馏除去溶剂，将得到的固体用水洗涤后，干燥得到标题化合物(3.28g)。
MS(ESI)m/z 425(MH+)
步骤2：4-氨基-N-(2，6-二氯苯甲酰基)-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成(即(S)-2-(2，6-二氯苯甲酰基氨基)-3-(4-氨基苯基)丙酸异丙酯的合成)
向由步骤1得到的化合物(98mg)中加入异丙醇(6ml)、四氢呋喃(3ml)、3％Pt-S/C(20mg)，在氢气氛围、室温下搅拌整夜。过滤反应液，用异丙醇洗涤，减压浓缩滤液得到标题化合物(92mg)。
MS(ESI)m/z 395(MH+)
步骤3：4-[(2-氨基-5-碘苯甲酰基)氨基]-N-(2，6-二氯苯甲酰基)-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成
将由步骤2得到的化合物(26.9g)、1-羟基苯并三唑1水合物(11.5g)、5-碘氨茴酸(17.8g)溶解在二甲基甲酰胺(200ml)中，冷却至0℃后，加入1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(13.7g)，室温下搅拌16小时。将加有乙酸乙酯的有机层依次用0.1N氢氧化钠水溶液、水、0.1N盐酸、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥。减压下蒸馏除去溶剂后，悬浮在二氯甲烷、己烷中，进行滤取、干燥，由此得到的标题化合物(37.06g)。
MS(ESI MH+)：640
步骤4：N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(6-碘-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢喹唑啉-3(2H)-基)-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成
将N，N-羰基二咪唑(28.16g)溶解在二甲基甲酰胺150ml中，加热至80℃。向其中滴加由步骤3得到的化合物(37.06g)的二甲基甲酰胺溶液(150ml)，搅拌整夜。冷却至室温后。加入乙酸乙酯、水进行萃取操作，将该有机层依次用水、饱和食盐水洗涤后，用无水硫酸钠干燥，减压下蒸馏除去溶剂，将得到的固体悬浮在二氯甲烷、己烷中，进行滤取、干燥，由此得到标题化合物(33.06g)。
MS(ESI MH+)：666
步骤5：N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(6-碘-1-甲基-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢喹唑啉-3(2H)-基)-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成
将由步骤4得到的化合物(33.06g)、碳酸钾(14.5g)加入二甲基甲酰胺(20ml)中后，加入碘甲烷(10ml)。室温下搅拌4小时后，用硅藻土过滤不溶物，向滤液中加入乙酸乙酯、水进行萃取操作。将得到的有机层依次用1N盐酸、饱和碳酸氢钠水、饱和食盐水洗涤，蒸馏除去溶剂得到固体，将该固体悬浮在二氯甲烷、己烷中，进行滤取、干燥得到标题化合物(31.85g)。
MS(ESI MH+)：680
步骤6：N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-(6-羧基-1-甲基-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢喹唑啉-3(2H)-基)-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成
将由步骤5得到的化合物(31.85g)溶解在二甲基甲酰胺(140ml)中，加入三乙基胺(13.1ml)、水(8.5ml)，鼓入一氧化碳后，加入乙酸钯(52mg)，在一氧化碳氛围、70℃下搅拌11小时。用硅藻土过滤不溶物后，减压下蒸馏除去二甲基甲酰胺，加入乙酸乙酯、1N盐酸进行萃取操作。将得到的有机层依次用1N盐酸、饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，减压下蒸馏除去溶剂，将得到的固体悬浮在二氯甲烷、己烷中，进行滤取、干燥得到标题化合物(27.23g)。
MS(ESI MH+)：598
步骤7：N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-[6-(羟基甲基)-1-甲基-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢喹唑啉-3(2H)-基]-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成
将由步骤6得到的化合物(27.23g)溶解在四氢呋喃(200ml)中，加入三乙基胺(9.51ml)，冷却至0℃。然后滴加氯甲酸乙酯(4.56ml)，搅拌30分钟。过滤不溶物后，将滤液冷却至0℃，加入硼氢化钠(0.25g)、冰(5块)。搅拌1小时后，加入硼氢化钠(0.25g)，进一步搅拌20分钟后，加入1N盐酸，随后加入乙酸乙酯、水进行萃取操作。将该有机层依次用0.3N盐酸、水、饱和碳酸氢钠水、饱和食盐水洗涤后，蒸馏除去溶剂，将得到的固体悬浮在二氯甲烷、己烷中，进行滤取、干燥，由此得到标题化合物(25.69g)。
MS(ESI MH+)：584
步骤8：4-[6-(氯甲基)-1-甲基-2，4-二氧代-1，2，3，4-四氢喹唑啉-3(2H)-基]-N-(2，6-二氯苯甲酰基)-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成
将二氯甲烷(140ml)、二甲基甲酰胺(140ml)混合溶剂冷却至0℃后，加入三氯氧磷(4.1ml)，搅拌30分钟。0℃下加入由步骤7得到的化合物(25.69g)，室温下搅拌1小时。进一步加入三氯氧磷(0.4ml)，搅拌1小时后，加入乙酸乙酯(400ml)、饱和碳酸氢钠水(100ml)，激烈搅拌。进一步加入乙酸乙酯(500ml)、水(200ml)进行分层后，将有机层用饱和碳酸氢钠水、1N氢氧化钠水溶液、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，减压下蒸馏除去溶剂，将得到的固体悬浮在二氯甲烷、己烷中，进行滤取、干燥，由此得到标题化合物(20.32g)。
MS(ESI MH+)：602
步骤9：N-(2，6-二氯苯甲酰基)-4-[6-(甲基氨基)甲基-1-甲基-2，4-二氧代-1，4-二氢喹唑啉-3(2H)-基]-L-苯基丙氨酸异丙酯的合成[式(I)所示的化合物(游离物)]
向2M甲基胺-四氢呋喃溶液(200ml)、乙腈(100ml)的混合液中滴加由步骤8得到的化合物(20.32g)的乙腈溶液(450ml)，室温下搅拌10小时后，减压下蒸馏除去溶剂。将得到的粗制物的一部分用硅胶柱色谱(氯仿-甲醇，5∶1)纯化，将其残渣溶解在氯仿中并进行过滤，减压下浓缩后，加入水-乙腈，减压下蒸馏除去乙腈后进行冷冻干燥，由此得到标题化合物(2.04g)。
MS(ESI MH+)：597
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.17(3H，d，J＝6.3Hz)，1.21(3H，d，J＝6.3Hz)，2.23(3H，s)，3.00(1H，dd，J＝14.1，9.9Hz)，3.17(1H，dd，J＝14.1，5.4Hz)，3.51(3H，s)，3.69(2H，s)，4.70-4.80(1H，m)，4.90-4.99(1H，m)，7.18(2H，d，J＝8.3Hz)，7.35-7.45(6H，m)，7.74(1H，dd，J＝8.6，2.1Hz)，7.98(1H，d，J＝2.1Hz)，9.22(1H，d，J＝8.0Hz).
参考例2式(II)所示的化合物(TFA盐)的合成
向由参考例1得到的化合物(I)(500mg、0.838mmol)中加入4N氯化氢-二
Figure BSA00000588095600281
烷溶液(15ml)和水(3ml)，90℃下搅拌3小时。蒸馏除去溶剂后，使用高效液相色谱(水-乙腈，分别含有0.1％TFA)进行纯化，得到目的物(330mg)。
MS(ESI MH+)数据：555
1H-NMR(DMSO-d6)：δ2.58(3H，t，J＝5.1Hz)，2.98(1H，dd，J＝14.1，10.5Hz)，3.24(1H，dd，J＝14.1，4.5Hz)，3.55(3H，s)，4.22-4.28(1H，m)，4.61-4.80(1H，m)，7.20(2H，d，J＝8.4Hz)，7.39-7.46(5H，m)，7.60(1H，d，J＝9.0Hz)，7.88(1H，d，J＝6.9Hz)，8.24(1H，d，J＝1.5Hz)，8.80(2H，brs)，9.15(1H，d，J＝8.7Hz)，12.90(1H，brs)
试验例1(血清存在下的VCAM-1/α4β1整联蛋白结合抑制活性评价试验)
对抑制已知表达α4β1整联蛋白的人T细胞系细胞株Jurkat(ATCCTIB-152)与VCAM-1的结合的试验物质的能力进行测定。
向96孔的微滴定板(Nunc Maxisorp)中以50μL/孔加入用缓冲液A(0.1M NaHCO3、pH9.6)稀释的重组人VCAM-1/Fc(R&D systems)溶液(500ng/ml)，4℃下培养一晚。用PBS洗涤1次后，以150μL/孔加入用PBS将Block Ace(雪印乳业)稀释成2倍得到的缓冲液(缓冲液B)，室温下培养2小时。除去缓冲液B后，用PBS洗涤1次。
将Jurkat细胞在Dulbecco改良Eagle培养基(SIGMA、下文称为DMEM)中洗涤1次，以1×106个细胞/mL再悬浮在结合缓冲液(含有20mM HEPES、0.1％BSA、2mM MnCl2和50％人血清(Sigma)的DMEM)中。
向96孔圆底板(IWAKI)中另外加入60μL用结合缓冲液稀释的各种浓度的试验物质，并立即加入60μL的Jurkat细胞(1×106个细胞/mL)，在板振荡机(IKA-Labortechnik、IKA-SCHUTTLER MTS-4)上以1000rpm振荡10秒。将加有这些试验物质的细胞悬浮液120μL中的每100μL立即转移到涂布了VCAM-1/Fc的板上，在室温、暗处培养60分钟。在板振荡机上以1000rpm振荡30秒，立即除去溶液后，用PBS洗涤1次，由此除去未结合的细胞。向板中以70μL/孔加入缓冲液C(含有0.82％的Triton X-100的PBS)，在板振荡机上以1000rpm振荡5分钟，由此将结合的Jurkat细胞溶解。在板离心机(SIGM A 4-15C)上室温下以2500rpm离心5分钟后，将其上清液50μL转移到新的96孔的微滴定板(NuncMaxisorp)。分别加入50μL的底物缓冲液(Promega、CytoTox 96Non-Radioactive Cytotoxicity Assay)，在板振荡机上以1000rpm振荡10秒，在室温、暗处下反应30分钟。分别加入50μL的终止溶液(Promega、CytoTox 96Non-Radioactive Cytotoxicity Assay)，在板振荡机上以1000rpm振荡10秒后，使用读板器(Molecular Devices、Vmax)测定490nm的吸光度。
其中，得到的吸光度是检测在各孔的上清液中溶出的乳酸脱氢酶(LDH)活性，即与和VCAM-1结合残留在板上的Jurkat细胞的数目成比例。进行平行试验，求出以不含试验物质的孔的吸光度为100％、不含Jurkat细胞的孔的吸光度为0％时各种浓度下的各物质的结合率，计算导致50％结合抑制的浓度IC50。
结果，式(II)所示化合物的IC50为11.2nM，比WO02/16329(专利文献1)中的实施例1的化合物的IC50值148.8nM更优异。
试验例2(大鼠静脉内给药时的体内动态评价试验)
称量活性主体式(II)所示的化合物后，用二甲基亚砜制成10mg/mL，加入聚乙二醇400和蒸馏水，制成1mg/mL的给药液。向Wistar大鼠以1mL/kg的容量单次静脉内给予1mg/mL的给药液，1、5、10、30、60和180分钟后，在麻醉下从颈静脉经时采血得到血浆，对该血浆中的药物浓度用LC/MS进行测定。通过得到的结果，根据药代动力学分析的梯形计算法算出血浆药物浓度-时间推移曲线下面积的外推值(AUCinf(iv))，通过给药用量(Dose，[mg/kg])和AUC[μg×hr/mL]，作为药物从血浆消失的指标值，根据Cltot＝Dose÷AUCinf(iv)算出总清除率(Cltot，[L/hr/kg])。
结果，式(II)所示化合物的Cltot为0.23[L/hr/kg]，比WO02/16329(专利文献1)中的实施例1的化合物的Cltot值1.89更优异。
试验例3(提高大鼠外周血液中淋巴细胞数目的活性)
向生物体内给予抑制α4整联蛋白与VCAM-1的结合的物质后，若有效地发挥其抑制活性则抑制淋巴细胞与血管或组织的粘合，由此意味着外周血液中的淋巴细胞数目上升，所以使用大鼠对式(I)所示化合物的提高淋巴细胞数目的活性进行评价。
给药液如下制备：将式(I)所示的化合物溶解在二甲基亚砜中，加入按1∶1混合有聚乙二醇400∶丙二醇的溶液并颠倒混合，制备给药液。DMSO的最终浓度为2.5％。
向雄性Wistar大鼠(6-8周龄)以4mL/kg口服给予试验物质(30mg/kg)的给药液。给药后，在适当规定的时刻在麻醉下从腹部主静脉采血，在涂布了EDTA-2K的采血容器中混合后，用多项目自动血细胞分析装置(SF-3000，Sysmex公司)测定外周血液中的淋巴细胞数目。以n＝5进行试验，以溶剂给药组(对照组)中的外周血液中淋巴细胞数目的平均值为100％，以相对于对照的比率(％)算出试验物质给药组的外周血液淋巴细胞数目。
对于WO02/16329(专利文献1)中的实施例1的化合物，12小时后的评价为不合格(120％)，而式(I)所示的化合物合格(150％以上)。测定方法1粉末X射线衍射图谱
实施例1～15中记载的粉末X射线衍射图谱的测定条件如下所述。
装置：Bruker GADDS X射线衍射仪
靶(Target)：CuKα单色器
电压：40kV
电流：40mV
累计时间：90秒或180秒
2θ范围：1.5～41.5°
实施例1(A型结晶的制备)
步骤1
将由参考例制备的式(I)所示的化合物(游离物)溶解在四氢呋喃(THF)中后，减压蒸馏除去溶剂，得到化合物(I)的无定形物。
步骤2
将由步骤1得到的化合物(I)3mg加入到二甲基甲酰胺40μL中并加热至60℃，然后急剧(30℃/小时的冷却速度)冷却至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后收集所产生的结晶。得到的结晶为水合物的形态。其粉末X射线衍射图谱如图1所示。
实施例2(B型结晶的制备)
将由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)3mg加入到叔丁醇40μL中并加热至60℃，然后急剧(30℃/小时的冷却速度)冷却至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后收集所产生的结晶。
此外，除了将溶剂改为1-丁醇或乙醇之外同样地操作收集结晶。
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图3所示。
图中，002B2表示由叔丁醇得到的结晶，002E1表示由1-丁醇得到的结晶，002E2表示由乙醇得到的结晶。
实施例3(D型结晶的制备)
以75mg/甲醇1ml的浓度将由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)加入甲醇中，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃，然后急剧(30℃/小时的冷却速度)冷却至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后收集所产生的结晶。对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果与A型结晶的粉末X射线衍射图谱一起如图4所示。图中，D型结晶以D型结晶表示，A型结晶以A型结晶表示。
实施例4(E型结晶的制备)
以75mg/乙醇1ml的浓度将由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)加入乙醇中，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后收集所产生的结晶。对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果与B型结晶的粉末X射线衍射图谱一起如图5所示。图中，E型结晶以E001_E8表示，B型结晶以B002_E2表示。
实施例5(F型结晶的制备)
以75mg/叔戊醇1ml的浓度将由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)加入叔戊醇中，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约24小时，然后收集所产生的结晶。对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果与A型结晶的粉末X射线衍射图谱一起如图6所示。图中，F型结晶以F001H7表示，A型结晶以A表示。
实施例6(Cl2型结晶～Cl4型结晶的制备)
向由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)中，以相当于游离物75mg的量/硝基甲烷1ml的浓度加入以使该化合物与氯化氢的摩尔比为1∶1.1的量含有氯化氢的硝基甲烷，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃进行溶解，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约72小时，然后收集所产生的Cl2型结晶。
除了改变为下述条件之外，与上述方法同样地操作，得到Cl3型结晶和Cl4型结晶。
Cl3型结晶：使用2-丁醇作为溶剂
Cl4型结晶：使用2-丙醇作为溶剂
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图7所示。
实施例7(Su1型结晶～Su3型结晶的制备)
向由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)中，以该化合物与硫酸的摩尔比为1∶1.1加入硫酸水溶液，然后蒸发水得到硫酸盐。将如此得到的硫酸盐以相当于游离物75mg的量/吡啶1ml的浓度加入吡啶中，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃进行溶解，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约72小时，然后收集所析出的Su1型结晶。
除了改变为下述条件之外，与上述方法同样地操作，得到Su2型结晶和Su3型结晶。
Su2型结晶：使用硝基甲烷作为溶剂、陈化时间约为1小时
Su3型结晶：使用乙醇作为溶剂、陈化时间约为1小时
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图8所示。
实施例8(Br1型结晶～Br5型结晶的制备)
向由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)中，以相当于游离物75mg的量/环己酮1ml的浓度加入以使该化合物与溴化氢的摩尔比为1∶1.1的量含有溴化氢的环己酮，将其加入96孔板1个孔中，加热至60℃进行溶解，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约72小时，然后收集所析出的Br1型结晶。
除了改变为下述条件之外，与上述方法同样地操作，得到Br2型结晶～Br5型结晶。
Br2型结晶：使用乙醇作为溶剂
Br3型结晶：使用乙腈作为溶剂、陈化时间约为1小时
Br4型结晶：使用四氢呋喃(THF)作为溶剂
Br5型结晶：使用1，2-二甲氧基乙烷作为溶剂
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图9所示。
实施例9(Pho1型结晶～Pho 4型结晶的制备)
向由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)中，以该化合物与磷酸的摩尔比为1∶1.1加入磷酸水溶液，然后蒸发水得到磷酸盐。将如此得到的磷酸盐以相当于游离物75mg的量/环己酮1ml的浓度加入环己酮中，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃进行溶解，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后收集所析出的Pho1型结晶。
除了改变为下述条件之外，与上述方法同样地操作，得到Pho2型结晶～Pho4型结晶。
Pho2型结晶：使用水作为溶剂
Pho3型结晶：使用甲醇作为溶剂
Pho4型结晶：使用2，2，2-三氟乙醇作为溶剂
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图11所示。
实施例10(Mal1型结晶～Mal3型结晶的制备)
向由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)中，以该化合物与马来酸的摩尔比为1∶1.1加入马来酸水溶液，然后蒸发水得到马来酸盐。将如此得到的马来酸盐以相当于游离物75mg的量/乙醇1ml的浓度加入乙醇中，将其加入96孔板1个孔中，加热至60℃进行溶解，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后收集所析出的Mal1型结晶。
除了改变为下述条件之外，与上述方法同样地操作，得到Mal2型结晶和Mal3型结晶。
Mal2型结晶：使用乙酸乙酯作为溶剂
Mal3型结晶：使用丙酮作为溶剂
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图12所示。
实施例11(Aca1型结晶～Aca3型结晶的制备)
向由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)中，以相当于游离物75mg的量/丙酮1ml的浓度加入以使该化合物与乙酸的摩尔比为1∶1.1的量含有乙酸的丙酮，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃进行溶解，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后收集所析出的Aca1型结晶。
除了改变为下述条件之外，与上述方法同样地操作，得到Aca2型结晶和Aca3型结晶。
Aca2型结晶：使用2-丁醇作为溶剂
Aca3型结晶：使用乙酸乙酯作为溶剂
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图13所示。
实施例12(Tar1型结晶和Tar2型结晶的制备)
向由实施例1步骤1制备的式(I)所示的化合物(游离物)中，以该化合物与D-酒石酸的摩尔比为1∶1.1加入D-酒石酸水溶液，然后蒸发水得到D-酒石酸盐。将如此得到的D-酒石酸盐以相当于游离物75mg的量/环己酮1ml的浓度加入环己酮中，将其加入96孔板的1个孔中，加热至60℃进行溶解，然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约1小时，然后收集所析出的Tar1型结晶。
除了改变为下述条件之外，与上述方法同样地操作，得到Tar2型结晶。
Tar2型结晶：使用甲醇作为溶剂
对如此得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定。结果如图14所示。
实施例13(Cl1型结晶的制备)
向由参考例制备的式(I)所示的化合物(游离物)76mg(0.127mmol)中，加入为了含有浓度0.14mmol/ml的氯化氢而加有37％盐酸的丙酮溶液(1.0ml，0.140mmol)(该化合物与氯化氢的摩尔比＝1∶1.1)。加入磁性搅拌棒进行搅拌的同时，以1℃/分钟的速度进行加热，60℃下保持30分钟。然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约72小时，然后收集所析出的Cl1型结晶。
对得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定，结果显示出与图7所示的Cl1型结晶相同的粉末X射线衍射图谱。
实施例14(Br4型结晶的制备[按比率增加(scale-up)])
向由参考例制备的式(I)所示的化合物(游离物)82.7mg(0.139mmol)中，加入为了含有浓度0.14mmol/ml的HBr而加有48％氢溴酸的THF溶液(1.1ml，0.154mmol)(该化合物与HBr的摩尔比＝1∶1.1)。加入磁性搅拌棒进行搅拌的同时，以1℃/分钟的速度进行加热，60℃下保持30分钟溶解氢溴酸盐。然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约72小时，然后收集所析出的Br4型结晶。
对得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定，结果显示出与由实施例8得到的Br4型结晶相同的粉末X射线衍射图谱。
实施例15(Mal2型结晶的制备[按比率增加])
向由参考例制备的式(I)所示的化合物(游离物)75.3mg(0.126mmol)中，加入在乙酸乙酯1.004ml中溶解16.3mg的马来酸(纯度99％)而得到的溶液(0.140mmol)(该化合物与马来酸的摩尔比＝1∶1.1)。加入磁性搅拌棒进行搅拌的同时，以1℃/分钟的速度进行加热，60℃下保持30分钟溶解马来酸盐。然后缓慢(1℃/小时)冷却至5℃，在该温度下陈化约72小时，然后收集所析出的Mal2型结晶。
对得到的结晶的粉末X射线衍射图谱进行测定，结果显示出与由实施例10得到的Mal2型结晶相同的粉末X射线衍射图谱。
测定方法2粉末X射线衍射测定
实施例16～18和实施例24中记载的粉末X射线衍射图谱测定条件如下所述。
装置：粉末X射线衍射装置X’Pert-Pro-MPD(PANalytical公司)
检测器：阵列式半导体检测器X’Celerator
靶(Target)：Cu全自动单色器
电压：40kV
电流：40mV
狭缝(slit)：发散1/2°
：散射1/2°
：受光0.15mm
扫描速度：2°/min
2θ范围：3～30°
实施例16(Mal2型结晶的合成按比率增加)
将马来酸溶解在乙酸乙酯中制备成0.14mmol/ml的浓度，将其10ml加入由参考例制备的化合物(I)(750mg，1.25mmol)中，将该混合物搅拌的同时从20℃升温至60℃(升温速度＝1℃/min)。在60℃下保持30分钟后，用55小时从60℃冷却至5℃(冷却速度＝1℃/h)。该状态下在5℃保持14小时后过滤，减压干燥(室温、24小时)得到白色结晶。
粉末X射线衍射图谱：图15
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.18(3H，d，J＝6.3Hz)，1.23(3H，d，J＝6.3Hz)，2.58(3H，s)，3.02(1H，dd，J＝14.1，9.9Hz)，3.19(1H，dd，J＝14.1，5.4Hz)，3.55(3H，s)，4.24(2H，s)，4.72-4.82(1H，m)，4.90-5.00(1H，m)，6.02(2H，s)，7.21(2H，d，J＝8.4Hz)，7.39-7.48(5H，m)，7.59(1H，d，J＝8.7Hz)，7.87(1H，dd，J＝9.0，2.4Hz)，8.24(1H，d，J＝2.4Hz)，8.68-8.80(brs，1H)，9.24(1H，d，J＝8.1Hz).
实施例17(Cl5型结晶的制备)
(使用四氢呋喃溶剂的方法：制备方法1)
将盐酸用四氢呋喃稀释，制备成0.14mmol/ml的浓度，将其10ml加入由参考例制备的化合物(I)(游离物、750mg，1.25mmol)中，将该混合物搅拌的同时从20℃升温至60℃(升温速度＝1℃/min)。在60℃下保持30分钟后，用55小时从60℃冷却至5℃(冷却速度＝1℃/h)。该状态下在5℃保持14小时后过滤，减压干燥(室温、90小时)得到白色结晶(715mg)。
粉末X射线衍射图谱的结果分别如图16所示。
此外，主要的峰的衍射角和强度如下所示。
Cl5型
Figure BSA00000588095600371
上述中，特别是特征的峰为8.2、11.2、12.4、14.3、15.6，进而为8.2、11.2、14.3、15.6。
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.18(3H，d，J＝6.3Hz)，1.23(3H，d，J＝6.3Hz)，2.54(3H，s)，3.02(1H，dd，J＝14.1，9.9Hz)，3.19(1H，dd，J＝14.1，5.4Hz)，3.55(3H，s)，4.22(2H，s)，4.70-4.82(1H，m)，4.90-5.00(1H，m)，7.21(2H，d，J＝8.4Hz)，7.35-7.48(5H，m)，7.59(1H，d，J＝8.7Hz)，7.95(1H，dd，J＝9.0，2.4Hz)，8.23(1H，d，J＝2.4Hz)，9.05-9.18(brs，2H)，9.24(1H，d，J＝8.1Hz).
(使用丙酮溶剂的方法：制备方法2)
将盐酸(5.92ml，71.0mmol)用丙酮(76.6ml)稀释，制备成0.86mmol/ml的浓度，将其加入由参考例制备的化合物(I)(游离物、38.3g，64.1mmol)的丙酮溶液(433ml)中，将该混合物搅拌的同时从20℃升温至60℃(升温速度＝1℃/min)。在60℃下保持30分钟后，用5.5小时从60℃冷却至5℃(冷却速度＝10℃/h)。该状态下在5℃保持6小时后过滤，减压干燥(60℃、数天)得到白色结晶(36.23g)。其在粉末X射线衍射图谱的测定中显示为Cl5型。
(含水丙酮析晶+不良溶剂添加法：制备方法3)
将丙酮23ml和水15ml混合，向其中加入化合物(I)的盐酸盐(例如，通过将化合物(I)(游离物))和含有氯化氢的二
Figure BSA00000588095600381
烷溶液混合后蒸馏除去溶剂来得到)5.04g，65℃下加热溶解。过滤热的溶液，向滤液中用40分钟滴加丙酮220ml，途中加入晶种30mg。将得到的浆液冷却至10℃，直接搅拌整夜后，过滤结晶并且用冷丙酮30ml洗涤。将得到的湿结晶在70℃下减压干燥，得到4.47g的白色结晶性固体(收率88.7％)。其在粉末X射线衍射图谱的测定中显示为Cl5型。
(丙酮浆液悬浮法：制备方法4)
将化合物(I)的盐酸盐30.47g加入乙腈112.5ml和水37.5ml中，80℃下加热溶解。冷却至30℃滴加丙酮600ml。将析出的结晶浆液在10℃下搅拌整夜，用离心分离机分离结晶，得到湿结晶61.11g。该湿结晶的X射线衍射图谱显示为NW2型。将该湿结晶10.75g(干燥重量5.0g)悬浮在丙酮100ml中，25℃下搅拌整夜。过滤结晶并在80℃下减压干燥18小时，得到4.63g的白色结晶性固体。该结晶的粉末X射线衍射图谱显示为Cl5型。
通过上述方法制备的Cl5型结晶的固体NMR(装置名＝BRUKER公司制、AVANCE 400WB、测定方法＝13C-CPTOSS方法、MAS＝6KHz)的光谱数据如图20所示，红外光谱(装置名＝岛津制作所制FTIR-8300、测定方法＝氯化钾方法)数据如图21所示。
实施例18(Br5型结晶的合成按比率增加)
将氢溴酸用1，2-二甲氧基乙烷稀释制备成0.14mmol/ml的浓度，将其10ml加入由参考例制备的化合物(I)(750mg，1.25mmol)中，将该混合物搅拌的同时从20℃升温至60℃(升温速度＝1℃/min)。在60℃下保持30分钟后，用55小时从60℃冷却至5℃(冷却速度＝1℃/h)。在该状态下在5℃保持14小时后过滤，减压干燥(室温、114小时)得到白色结晶(803mg)。
粉末X射线衍射图谱：图17
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.18(3H，d，J＝6.3Hz)，1.23(3H，d，J＝6.3Hz)，2.57(3H，s)，3.02(1H，dd，J＝14.1，9.9Hz)，3.20(1H，dd，J＝14.1，5.4Hz)，3.55(3H，s)，4.24(2H，s)，4.70-4.82(1H，m)，4.92-5.00(1H，m)，7.21(2H，d，J＝8.4Hz)，7.38-7.48(5H，m)，7.59(1H，d，J＝8.7Hz)，7.89(1H，dd，J＝9.0，2.4Hz)，8.23(1H，d，J＝2.4Hz)，8.70-8.80(brs，2H)，9.24(1H，d，J＝8.1Hz).
测定方法3粉末X射线衍射测定
实施例19～23中记载的粉末X射线衍射图谱测定条件如下所述。
装置：粉末X射线衍射装置X’Pert-Pro-MPD(PANalytical公司)
检测器：阵列式半导体检测器X’Celerator
靶：Cu全自动单色器
电压：40kV
电流：55mV
狭缝：发散1/2°
：散射1/2°
：受光0.15mm
2θ范围：5～40°
实施例19(NW1型和N1型结晶的制备)
将化合物(I)的盐酸盐20g悬浮在75vol％乙腈/水混合液(混合前的乙腈(vol)∶水(vol)＝75∶25)100ml中，加热至70℃使其溶解。将该溶液冷却至30℃后，滴加乙腈500ml，10℃下搅拌整夜。将结晶从浆液中分离，得到NW1型湿结晶32.79g。将其在80℃下减压干燥18小时，以白色结晶性固体形式得到化合物(I)的盐酸盐(N1型)16.93g。
粉末X射线衍射图谱：图22和图23
实施例20(NW2型和N2型结晶的制备)
将化合物(I)的盐酸盐10g悬浮在75vol％乙腈/水混合液50ml中，加热至70℃使其溶解。将该溶液冷却至30℃后，滴加乙腈200ml，在10℃下搅拌整夜。将结晶从浆液中分离，得到NW2型湿结晶19.20g。在80℃下减压干燥18小时，以白色结晶性固体形式得到化合物(I)的盐酸盐(N2型)8.77g。
粉末X射线衍射图谱：图25和图26
固体NMR(装置名＝BRUKER公司制、AVANCE 400WB、测定方法＝13C-CPTOSS方法、MAS＝6KHz)的光谱数据如图28所示，红外光谱(装置名＝岛津制作所制FTIR-8300、测定方法＝氯化钾方法)数据如图29所示。
实施例21(N3型结晶的制备)
方法1由盐酸盐制备的方法
将化合物(I)的盐酸盐2g悬浮在92.5vol％乙腈/水混合液50ml中，10℃下搅拌24小时。将结晶从浆液中分离，得到NW2型湿结晶。在80℃下减压干燥18小时，以白色结晶性固体形式得到化合物(I)的盐酸盐(N3型)0.52g。
方法2由游离物制备的方法
将化合物(I)429g加入到乙腈8ml中进行搅拌，60℃下加热溶解。向其中加入水0.8ml，然后加入6N盐酸水溶液0.12ml。冷却至室温，将所析出的固体分离并且用乙腈2ml洗涤。将结晶在60℃下减压干燥，以白色结晶性固体形式得到化合物(I)的盐酸盐(N3型)212mg。
粉末X射线衍射图谱：图30
实施例22(NW4型和N4型结晶的制备)
将化合物(I)的盐酸盐2g悬浮在乙腈60ml中，10℃下搅拌24小时。将结晶从浆液中分离，得到NW4型湿结晶。在80℃下减压干燥18小时，以白色结晶性固体形式得到化合物(I)的盐酸盐(N4型)0.73g。
粉末X射线衍射图谱：图32和图33
实施例23(NW5型和N5型结晶的制备)
将化合物(I)的盐酸盐7g悬浮在60vol％乙腈/水50ml中，50℃下搅拌24小时。将结晶从浆液中分离，得到NW5型湿结晶。在80℃下减压干燥18小时，以白色结晶性固体形式得到化合物(I)的盐酸盐(N5型)2.11g。
粉末X射线衍射图谱：图35和图36
实施例24(Cl6、Cl7、Cl8、Ca1、Ca2、Ca3、Ca4、Ms1、Ms2、Ms3、Ms4、Ms5、L-Tar1、L-Tar2型结晶的制备)
使用表1记载的酸和溶剂，制备0.14mmol/ml的酸溶液。将该溶液6.7ml加入由参考例制备的化合物(I)(500mg，0.837mmol)中，进行搅拌的同时从20℃升温至60℃(升温速度＝1℃/min)。在60℃下维持30分钟后，用11小时从60℃冷却至5℃(冷却速度＝5℃/h)。在5℃下维持11小时后，过滤、减压干燥(室温、48小时以上)，得到结晶。
表1
  实施例   晶型   酸   溶剂
  Cl6   conc.HCl   二乙基醚
  Cl7   conc.HCl   DME
  Cl8   conc.HCl   IPA
  Ca1   柠檬酸   IPA
  Ca2   柠檬酸   1-BuOH
  Ca3   柠檬酸   DME
  Ca4   柠檬酸   丙酮
  Ms1   MsOH   MeOH
  Ms2   MsOH   THF
  Ms3   MsOH   tBuOMe
  Ms4   MsOH   DME
  Ms5   MsOH   丙酮
  L-Tar1   L-酒石酸   DME
  L-Tar2   L-酒石酸   丙酮
Ether：二乙基醚
粉末X射线衍射图谱：图38～图51
以下表示1H-NMR测定的结果。
(Ca4型结晶)
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.19(3H，d，J＝6.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.0Hz)，2.45-2.58(m)，3.01(1H，dd，J＝14.1，9.9Hz)，3.19(1H，dd，J＝14.4，5.7Hz)，3.55(3H，s)，4.20(2H，s)，4.73-4.80(1H，m)，4.91-4.99(1H，m)，7.21(2H，d，J＝9.0Hz)，7.37-7.47(5H，m)，7.58(1H，d，J＝8.7Hz)，7.87(1H，d，J＝8.4Hz)，8.22(1H，s)，9.24(1H，d，J＝8.4Hz).
(Ms1型结晶)
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.19(3H，d，J＝6.3Hz)，1.23(3H，d，J＝6.3Hz)，2.31(3H，s)，2.58(3H，s)，3.01(1H，dd，J＝14.1，9.9Hz)，3.19(1H，dd，J＝14.1，5.4Hz)，3.55(3H，s)，4.24(2H，brs)，4.77(1H，m)，4.95(1H，m)，7.21(2H，m)，7.38-7.47(5H，m)，7.59(1H，d，J＝8.7Hz)，7.88(1H，dd，J＝8.7，2.1Hz)，8.24(1H，d，J＝2.1Hz)，8.75(brs，2H)，9.24(1H，d，J＝7.8Hz).
(L-Tar1型结晶)
1H-NMR(DMSO-d6)：δ1.19(3H，d，J＝6.0Hz)，1.23(3H，d，J＝6.0Hz)，3.01(1H，dd，J＝13.8，9.6Hz)，3.19(1H，dd，J＝13.8，5.4Hz)，3.54(3H，s)，3.91(2H，s)，4.13(2H，s)，4.73-4.80(1H，m)，4.91-4.99(1H，m)，7.20(2H，d，J＝8.4Hz)，7.37-7.47(5H，m)，7.56(1H，d，J＝8.7Hz)，7.87(1H，d，J＝8.4Hz)，8.19(1H，s)，9.24(1H，d，J＝8.1Hz).
试验例
用下述试验例对本发明的效果进行说明。通过试验例4确认热力学上稳定的结晶类型，通过试验例5确认化学上稳定的结晶类型。此外，通过试验例6确认不依赖相对湿度而稳定的结晶类型，通过试验例7确认吸湿性低的结晶类型。
试验例4差示扫描量热测定(Differential scanning calorimetry：DSC)
(1)测定方法、条件
称取上述得到的各结晶(A型、Br4型、Cl5型、Br5型)的样品1～5mg，密封在铝盘内，在下述条件下进行差示扫描量热测定。
参照：空的铝盘
采样时间：0.2sec
范围：25～350℃
加热时间：10或20℃/min
结果如图2(A型)、图10(Br4型)、图18(Cl5型)、图19(Br5型)所示。
Cl5型在255℃(250～260℃)附近的高温具有DSC上的熔点，Br5型在226℃(221～231℃)附近的高温具有DSC上的熔点。
试验例5保存稳定性试验
对于Cl5型结晶、Br5型结晶、A型结晶，在下述条件下保存后，比较样品中的杂质的量，发现由于升温所导致的杂质的增加。
时间：4周
温度/湿度：40℃/75％相对湿度、开放
60℃/开放
室温/气密(对照)
试验例6控制相对湿度时的粉末X射线衍射测定
对于Cl5型结晶、Mal2型结晶，在下述条件下测定粉末X射线衍射，比较干-湿之间的衍射图谱，结果所有结晶都无不同。
干燥条件(干)：将样品在50℃下减压干燥的同时进行测定
湿气条件(湿)：在85％的相对湿度下进行测定
粉末衍射装置：(株)RIGAKU RINT2100S(以及相同装置用的温湿度附件(attachment))湿度控制器：神荣(株)SRH-1R
试验例7水蒸气吸附等温线的制作
称取Cl5型结晶、Mal2型结晶各50mg，50℃下真空干燥一晚后，在25℃的恒温下，用全自动水蒸气吸附测定装置(BELSORP-18：日本BEL公司)测定结晶的水分吸附量(Mitsuiki et al.，J.Agric.Food Chem.，Vol.46，No.9，Page 3528-34，1998年)。
Cl5型结晶、Mal2型结晶即使在相对湿度为100％时水分吸附量也少、为4％以下。
试验例8差示扫描量热测定(Differential scanning calorimetry：DSC)
(1)测定方法、条件
称取上述得到的各结晶(N1～N5型、Cl6～Cl8型、Ms1型)的样品1～5mg，密封在铝盘内，在下述条件下进行差示扫描量热测定
参照：空的铝盘
采样时间：0.2sec
范围：40～300℃
加热时间：10或20℃/min
结果如图24(N1型)、图27(N2型)、图31(N3型)、图34(N4型)、图37(N5型)、图52(Cl6型)、图53(Cl7型)、图54(Cl8型)图55(Ms1型)。

Claims (10)

1.式(I)所示的化合物或其盐酸盐的结晶，其是在粉末X射线衍射图谱中在6.4、8.5、9.3、12.9、14.8和15.3的衍射角2θ下显示出峰的N2型结晶，
Figure FSA00000588095500011
2.权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其盐酸盐的结晶，其是在粉末X射线衍射图谱中在如图26所示的衍射角2θ下显示出峰的N2型结晶。
3.权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其盐酸盐的结晶，其具有图27所示的DSC曲线。
4.权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其盐酸盐的结晶，其具有图28所示的13C-NMR谱。
5.权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其盐酸盐的结晶，其具有图29所示的红外光谱。
6.制备权利要求1所述的式(I)所示的化合物或其盐酸盐的结晶的方法，其特征在于，通过将式(I)所示化合物的盐酸盐在含有乙腈和水的溶剂中加热后加入丙酮溶剂，并进行冷却来制备。
7.一种药物组合物，其含有权利要求1～5中任意一项所述的结晶。
8.一种α4整联蛋白抑制剂，其含有权利要求1～5中任意一项所述的结晶。
9.α4整联蛋白依赖性的结合过程参与病理的炎症性疾病的治疗剂或预防剂，其以权利要求1～5中任意一项所述的结晶为有效成分。
10.类风湿性关节炎、炎症性肠疾病、全身性红斑狼疮、多发性硬化、斯耶格伦氏综合症、哮喘、牛皮癣、过敏、糖尿病、心脏血管性疾病、动脉硬化症、再狭窄、肿瘤增殖、肿瘤转移、移植排斥中任意一种疾病的治疗剂或预防剂，其以权利要求1～5中任意一项所述的结晶为有效成分。
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