CN102499927B - 用于防治肿瘤的药物组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于防治肿瘤的药物组合物，有效解决肿瘤的防治问题，本发明解决的技术方案是，该药物组合物由2-甲氧基雌二醇（组分a）和姜黄素衍生物（组分b）混合制成：组分a和组分b的摩尔混合比例为1:2，而且组分a的含量范围为1-15份，组分b的含量范围为2-30份，所述的组分b为姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素中的一种或两种以上等摩尔比的混合物；按常规制备方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸剂、微丸剂、口服液、冻干制剂、水针剂、输液剂、栓剂、软膏剂、巴布剂、透皮剂的一种，本发明成本低，具有多靶点、多途径的抗肿瘤作用，安全可靠，有效提高患者用药依从性，最大限度地发挥在防止肿瘤中的应用。

Description

用于防治肿瘤的药物组合物

技术领域

本发明涉及医学领域，特别是一种用于防治肿瘤的药物组合物。

背景技术

在近50年，癌症仍是严重威胁人类健康和生命的恶性疾病。其原因在于：1）多数癌症由多达500种不同的基因失调引起，现有的大多数防癌和/或抗癌药物，仅仅是抑制一个基因产物或一个细胞信号转导通路，是不能达到预防或治疗癌症的目的；而且反复应用后不再敏感或出现耐药性。2）目前大多数的抗癌药物毒性大，而且价格昂贵；患者多次化疗后免疫功能低下而不得不中止治疗，或者负担不起治疗费而放弃治疗，使其疗效有限。

2-甲氧基雌二醇是雌激素的天然代谢产物，但对雌激素受体的亲和力较低，所以并无雌激素内在活性。体外和体内，2-甲氧基雌二醇显示了广泛的抗实体瘤活性，包括：肺癌、血管肉瘤、神经母细胞瘤、脑胶质瘤细胞、胰腺癌、肝癌、结肠直肠癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌，另外还对白血病、骨髓瘤等有作用。其抗肿瘤活性主要通过抑制肿瘤和内皮细胞增殖、把肿瘤细胞阻滞于G2/M期，诱导细胞凋亡、增强肿瘤细胞对辐射的敏感性、微管抑制，提高细胞内ROS、抗血管生成等多个细胞信号转导通路而实现。正是2-甲氧基雌二醇可抗血管新生，即通过抑制传输营养物质给肿瘤血管发育，使其可用于多种恶性肿瘤治疗，具有广谱抗癌性。此外，较低浓度的2-甲氧基雌二醇对肿瘤细胞还具有促分化作用。故与常规的化疗和放疗或其他基因疗法相比，具有很多优点，如高效低毒，不易产生耐药性，不受肿瘤细胞周期的影响，容易寻找到靶向血管；特别是在治疗过程中对血管的有限损伤就可造成大量肿瘤细胞的生长抑制，不会对骨髓和造血器官产生毒性（即靶向快速生长的细胞，并有相对较高的特异性，且不会杀死未分裂的细胞，因此不良反应小，近年来日益受到重视，并显示了良好的应用前景。但是，用于治疗乳腺癌和前列腺癌的临床Ⅰ期和Ⅱ期实验表明，该药口服生物利用度低，在病人血浆达不到发挥抗肿瘤作用所需要的高浓度，治疗效果不理想。因此，需考虑组合用药，以充分发挥药效。

姜黄（植物姜黄的干燥根茎）用作调味品、食用色素和传统中药已有上千年历史。从姜黄中提取得到的主要含姜黄素、去甲氧基姜黄素，双去甲氧基姜黄素的姜黄黄色素，染色能力强（大于其他天然色素和合成柠檬黄等），安全无毒，无副作用，是国内外允许使用的重要天然食用色素之一，按照GB2760-2007的规定，用量可按“正常生产需要”而定。在我国姜黄黄色素用于萝卜干、咖喱粉的着色也已有很久的历史。上述充分说明以姜黄素衍生物为主的姜黄黄色素，安全，价格低廉。

姜黄素衍生物，除了从姜科植物姜黄的根茎及块根中分离得到外，还可从姜科植物莪术、郁金等根茎及块根中提取分离得到。姜黄素在体外具有良好的广谱抗肿瘤活性，包括：肺癌，肝癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤、胃肠癌、乳腺癌、头颈癌、黑素瘤、神经癌、肉瘤、胰腺癌等；还有极好的肿瘤预防作用。而且姜黄素可和多个细胞信号转导通路相互作用，包括：细胞周期、凋亡、细胞增殖、生存、侵袭、血管发生、转移和炎症等。临床研究报道姜黄素口服达12g/天时，对人没有任何毒性，因此姜黄素已作为一种低毒、有效、费用低（大多数人可承受）的抗肿瘤药物而备受关注。但其口服同样生物利用度差，血药浓度低，使其在临床上，无法发挥众多有益的抗癌作用。此外，近来，越来越多的研究显示，去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素具有与姜黄素相似或更强的药理活性，如抗肿瘤转移、抗炎等均比姜黄素更好。因此，如何充分发挥姜黄素衍生物药效（减小其用药剂量、以达所需血药浓度），亦是急待解决的问题。

药物组合使用以减毒增效的方法已日渐得到人们认可和重视。虽已有2-甲氧基雌二醇与多西紫杉醇（多西他赛，docetaxel）组合、姜黄素与顺铂组合，以降低毒副作用、发挥协同抗肿瘤作用的报道。但现有药物组合中依然存在诸多不足，比如毒副作用依然较大，价格昂贵、抗肿瘤靶点少等。

现有抗癌药物靶点单一而易出现耐药、不能有效抑制癌变的多个基因或蛋白，以及毒副作用大等问题，而使其疗效有限；再加之其价格昂贵，给病人及其家庭造成了巨大的经济负担。药物的合理组合，可达到协同或相加作用，从而增强疗效，而组合不当则会拮抗，疗效抵消、下降，甚至引起毒副作用。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种用于防治肿瘤的药物组合物，可有效解决肿瘤的防治问题。

本发明解决的技术方案是，该药物组合物由以摩尔比计的：2-甲氧基雌二醇1-15份和姜黄素衍生物2-30份混合制成，所述的姜黄素衍生物为姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素中的一种或两种以上等摩尔比的混合物；按现有常规制备方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸剂、微丸剂、口服液、冻干制剂、水针剂、输液剂、栓剂、软膏剂、巴布剂、透皮剂的一种；该药物组合物的给药量是治疗的有效量，所述的该药物组合物的片剂或胶囊剂，或滴丸剂，或微丸剂，或口服液的每片，或每粒，或每丸中该药物组合物的有效给药量范围为2-甲氧基雌二醇1-15份和姜黄素衍生物2-30份，且2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物的摩尔混合比例为1:2；所述的该药物组合物的冻干制剂，或水针剂，或输液剂的每支中该药物组合物的有效给药量范围为2-甲氧基雌二醇1-15份和姜黄素衍生物2-30份，且2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物的摩尔混合比例为1:2；所述的该药物组合物的栓剂，或软膏剂，或巴布剂，或透皮剂，或贴剂的每枚、每支或每贴中该药物组合物的有效给药量范围为2-甲氧基雌二醇1-15份和姜黄素衍生物2-30份，且2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物的摩尔混合比例为1:2；所述的冻干制剂有纳米混悬剂冻干粉；所述的透皮剂为透皮搽剂。

本发明成本低，具有多靶点、多途径的抗肿瘤作用，安全可靠，有效提高患者用药依从性，最大限度地发挥在防治肿瘤中的作用。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。

实施例1：

本发明药物组合物由2-甲氧基雌二醇1-15份和姜黄素2-30份混合制成，所述的该药物组合物按常规方法制成的片剂或胶囊剂，或滴丸剂，或微丸剂，或口服液的每片，或每粒，或每丸中该药物组合物的有效给药量为0.0002886摩尔-0.004329摩尔的2-甲氧基雌二醇，0.0005772摩尔-0.008658摩尔的姜黄素，而且2-甲氧基雌二醇和姜黄素的摩尔混合比例为1:2；所述的该药物组合物按常规方法制成的冻干制剂，或水针剂，或输液剂的每支中该药物组合物的有效给药量为0.0000096摩尔-0.000144摩尔的2-甲氧基雌二醇，0.0000192摩尔-0.000288摩尔姜黄素，而且2-甲氧基雌二醇和姜黄素的摩尔混合比例为1:2；所述的该药物组合物按常规方法制成的栓剂，或软膏剂，或巴布剂，或透皮剂，或贴剂的每枚、每支或每贴中该药物组合物的有效给药量为0.0001154摩尔-0.001731摩尔的2-甲氧基雌二醇，0.0002308摩尔-0.003462摩尔姜黄素，而且2-甲氧基雌二醇和姜黄素的摩尔混合比例为1:2。

实施例2：

本发明药物组合物由2-甲氧基雌二醇0.0031摩尔和去甲氧基姜黄素0.0062摩尔混合制成，所述的该药物组合物按常规方法制成的片剂的每片中该药物组合物的有效给药量为2-甲氧基雌二醇0.0031摩尔和去甲氧基姜黄素0.0062摩尔。

实施例3：纳米混悬剂冻干粉制备本发明药物组合物由2-甲氧基雌二醇0.00033摩尔和双去甲氧基姜黄素0.00066摩尔混合制成，所述的该药物组合物和卵磷脂1300mg，加入15ml二氯甲烷中，35-40℃完全溶解，作为油相；450mg泊罗沙姆188，加入35ml PH值为7.4的磷酸盐缓冲液中，超声溶解，作为水相；水相置于磁力搅拌器工作盘上，边搅拌边将油相滴入，混匀后，内切式匀浆机10000转/分匀化6分钟，倒入圆底烧瓶中，保持水浴温度40℃，于旋转薄膜蒸发器上真空蒸发4.5h，除去二氯甲烷并形成初混悬液，初混悬液放入超声仪中，在700W条件下，超声粉碎25次，每次条件均为超声4s，停8s，形成纳米混悬剂，加入1500mg葡萄糖溶解后，灭菌，分装入瓶，每瓶中该药物组合物的有效给药量为0.02g，-20℃冻12h后，再冷冻干燥48h，得纳米混悬剂冻干粉；所述的磷酸盐缓冲液为北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司的市售产品。

实施例4：

本发明药物组合物由2-甲氧基雌二醇0.000154摩尔和姜黄素0.000308摩尔混合制成，所述的该药物组合物按常规方法制成的透皮搽剂的每贴中该药物组合物的有效给药量为0.16g。

实施例5：

本发明药物组合物由2-甲氧基雌二醇0.01021摩尔和去甲氧基姜黄素0.02042摩尔混合制成，所述的该药物组合物按常规方法制成的口服液的每支中该药物组合物的有效给药量为10g。

本发明可通过上述具体技术方案实现，但不限制与本发明用等效替换的手段得出的另外的技术方案。

本发明可以通过，但不限于注射（包括静脉内、腹膜内、肌内、皮下、真皮内），口服，局部（包括经皮、舌下和颊）、直肠、阴道、鼻部使用，及眼用途径给药。此外，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物或可以预先混合或分别但是同时以相同或不同的形式给药，包括，但不限于口服、静脉滴注、肌肉注射、皮下注射、皮内注射、腹膜注射。

本发明通过以下实验确定了2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物可以组合，这两种具有多途径（抑制肿瘤细胞增殖、抑制肿瘤转移、诱导肿瘤细胞分化），广泛（多种肿瘤细胞）防治肿瘤作用，毒副作用小的药物，经过合理组合后，具有很好的协同及相加抗肿瘤作用，达到了1+1≥2即增加疗效的效果；而且，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物本身毒性小，二者合理组合，又具有安全性的特点。此外姜黄素衍生物最大优势在于价廉，二者组合费用低，更多的病人可以承受。因此，从临床应用角度出发，这两种低毒、多靶点、广谱抗癌药物组合，在保证安全的前提下，从多个途径共同作用于肿瘤，得到安全、高效、多靶点、价低的高品质抗癌药物，克服现有抗肿瘤药物缺点，将对肿瘤的预防和/或治疗具有积极意义，本发明在防治肿瘤中的应用，具体如下：

一.量效关系研究

2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物杀伤肿瘤细胞，二者是否存在一定的量效关系，通过试验，得到了进一步的认识。

1.数据表示和统计学处理

实验结果以平均值±标准误（Mean±S.D.）表示，采用spss13.0软件作统计学分析，两组数据间差异比较采用Student’s t检验。P<0.05为具有统计学差异。

2.对肺癌SPC-A1细胞增殖的影响

实验方案一

方案1：2-甲氧基雌二醇0.7摩尔份

方案2：2-甲氧基雌二醇3.5摩尔份

方案3：2-甲氧基雌二醇7摩尔份

方案4：2-甲氧基雌二醇14摩尔份

方案5：2-甲氧基雌二醇28摩尔份

方案6：2-甲氧基雌二醇56摩尔份

实验方法：人肺癌SPC-A1细胞在RPMI-1640(Gibco,NY,USA)培养液培养，培养液含10％胎牛血清(Gibco)，100U/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素。培养条件为37℃，饱和湿度，5%CO₂（常规技术）。取对数生长期细胞接种于96孔板，分为正常组（空白组）、溶剂对照组、不同方案组。24h后按方案1-方案6中的有效给药量分别向不同方案组中加入，溶剂对照组加入小于总体积1‰的二甲基亚砜。48h后，以改进的磺基罗丹明B法(sulforhodamine B，SRB法)测定细胞活力，即轻轻加入50%三氯醋酸50ul，静置5min后放入4℃固定1h；倒掉固定液，去离子水洗5遍，风干；然后加0.4%的SRB50ul，避光染色30min；倒掉染色液，用1%乙酸洗5遍，风干；加入10mmol/LTris碱150ul溶解，震荡5min充分溶解SRB。按照说明书（Sigma TOX-6），于酶联免疫检测仪上选择最大吸收波长565nm处测定光吸收值（OD值）。每组5个复孔。实验重复3次，取平均值。按照公式计算细胞存活率：细胞存活率％＝实验组光吸收值／对照组光吸收值×100%。细胞存活率结果见表1：

表12-甲氧基雌二醇对人肺癌SPC-A1细胞生存的影响

注：数据为3次试验的平均值，每次试验设5个复孔。与溶剂对照组比较**P<0.01.

实验方案二

方案1：姜黄素衍生物0.7摩尔份

方案2：姜黄素衍生物1.8摩尔份

方案3：姜黄素衍生物3.5摩尔份

方案4：姜黄素衍生物7摩尔份

方案5：姜黄素衍生物14摩尔份

方案6：姜黄素衍生物28摩尔份

实验方法：按照实验一的试验方法进行试验，实验结果见表2

表2姜黄素衍生物对人肺癌SPC-A1细胞生存的影响

注：数据为3次试验的平均值，每次试验设5个复孔。与溶剂对照组比较**P<0.01.

实验结果：实验方案一结果显示，2-甲氧基雌二醇由0.7摩尔份增至3.5摩尔份时，与溶剂对照组比较，肿瘤细胞生存率虽有下降趋势，但无统计学意义；当2-甲氧基雌二醇增至7摩尔份时，与溶剂对照组比较，肿瘤细胞生存率明显降低，具有非常显著统计学差异。同样，实验方案二实验结果显示，姜黄素衍生物在0.7-7摩尔份时，并不抑制肿瘤细胞的生长（无统计学差异）；当姜黄素衍生物在14及以上摩尔份时，与溶剂对照组比较，肿瘤细胞生存率明显降低，具有非常显著统计学差异。因此，上述实验表明①7摩尔份的2-甲氧基雌二醇和14摩尔份的姜黄素衍生物开始有药理活性；②相对于姜黄素衍生物而言，2-甲氧基雌二醇的起效浓度较低（7摩尔份），而且其抑制肿瘤细胞生长作用，随其浓度增加快速增长（由0.7增至7摩尔份时，细胞存活下降26.7%，而姜黄素衍生物仅下降不足5%）。这提示我们在进行组合筛选时①二者应在起效剂量的上下，即7和14摩尔份上下，分别设立不同剂量组，以使2种药物合理组合，得到恰当的实验结果；②组合起始时，2-甲氧基雌二醇的摩尔份应少一些，随其摩尔份增加，给予少量姜黄素衍生物就有抑制肿瘤细胞生长作用。

二.药效筛选研究

1.数据表示和统计学处理：

实验结果以平均值±标准误（Mean±S.D.）表示，采用spss13.0软件作统计学分析，多组之间的组间数据比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA），两组数据间差异比较采用Student’s t检验，按照Chou and Talalay的中位效应方程法计算作用指数（Combinationindex，CI），CI<1、CI=1、CI>1相应表示药物协同、相加、或拮抗的相互作用。P<0.05为显著统计学差异，P<0.01为非常显著统计学差异。

2.对肺癌SPC-A1细胞增殖的影响

实验方案：根据量效关系研究结果，制订不同实验方案，具体实验方案见表3。

实验方法：分为溶剂对照组、不同方案组。按照一.量效关系研究中实验方法（SRB法测定细胞活力）进行试验。按照公式计算对肿瘤细胞的抑制率：细胞抑制率＝[1-（实验组光吸收值／溶剂对照组光吸收值）]×100%。

表32-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合物的实验方案

实验结果：组合对肿瘤细胞生长的抑制作用实验结果见表4。由结果可知，所有组合方案（方案13～19），与溶剂对照组比较，差异均有统计学意义。而且，在药物用量较低的组合方案中（方案13～18），其药效与相应用量的单一药物用药方案（方案1、2、3、4、5，及方案7、8、9，10、11）相比，具有显著性差异；特别是，单独使用没有药效的方案（方案1、2、3，及方案7、8、9），组合（方案13、14、15，16）使用后就有药效了；说明组合优于单独用药。总之，上述实验结果表明，将2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合，使无效的剂量（6摩尔份以下的2-甲氧基雌二醇和12摩尔份以下的姜黄素衍生物）变得有效，使有效的剂量（6及以上摩尔份的2-甲氧基雌二醇和12及以上摩尔份的姜黄素衍生物）变得更有效，比2-甲氧基雌二醇或姜黄素衍生物单独使用时更能显著抑制肿瘤细胞增殖。

表42-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合物对人肺癌SPC-A1细胞的抑制作用

注：-未观察到抑制作用，**与溶剂对照组比较P<0.01；^●与2-甲氧基雌二醇组比较P<0.05；^▲与姜黄素衍生物组比较P<0.05。

3.协同作用分析

为进一步确定组合是否有协同作用，需计算作用指数CI。在计算作用指数之前，需要明确组合时2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物是竞争性药物，还是非竞争性药物，从而使用不同的公式计算CI。由实验数据计算的Chou and Talalay中位效应方程参数可知（见表5），2-甲氧基雌二醇、姜黄素衍生物及其组合的m_i相差较多，因此二者为非竞争性药物。因此按照非竞争性药物的CI计算CI，计算结果见表6。

表5基于Chou和Talalay中位效应方程的参数

由结果可见，2-甲氧基雌二醇和姜黄素在无效剂量范围内组合时，有协同作用（CI<1），即方案13、14、15，16为协同作用。在有效剂量范围内，较低剂量组合时，由协同作用转变为相加作用（CI≈1），即方案17，18为相加作用；随着剂量的继续增加，不再具有组合优势，而表现为拮抗（CI>1）作用，即方案19为拮抗作用。

表62-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合的作用指数

将上述实验方案在人肝癌SMCC-7721、人前列腺癌PC-3、人食管癌EC-9706细胞上进行实验，同样得到上述实验结果：无效及有效剂量范围内较低剂量的2-甲氧基雌二醇和姜黄素组合时，具有协同和相加作用；有效剂量范围内较高剂量的2-甲氧基雌二醇和姜黄素组合时，不再有优势，和单独使用相差不大。

4.流式细胞仪检测细胞周期阻滞

实验方案

方案1：2-甲氧基雌二醇2摩尔份，姜黄素衍生物4摩尔份；

方案2：2-甲氧基雌二醇3摩尔份，姜黄素衍生物6摩尔份；

方案3：2-甲氧基雌二醇2摩尔份

方案4：2-甲氧基雌二醇3摩尔份

方案5：姜黄素衍生物4摩尔份

方案6：姜黄素衍生物6摩尔份

实验方法：设溶剂对照组，按不同方案给药，作用肺癌SPC-A1细胞48h后，收集悬液及胰酶消化的单层贴壁细胞并混合；PBS洗涤一次，收集调整细胞浓度为1×10⁶/ml；加入1mL冷PBS，轻轻震荡使细胞悬浮；制备的单细胞悬液以体积分数为70%冰乙醇固定，至少2h以上，4℃保存；染色前用PBS洗去固定液；加100μL RNase A37℃水浴30min；再加入400μLPI染色混匀，4℃避光30min后，上流式细胞仪检测，激发波长488nm，发射波长630nm（红色荧光）。细胞周期各个时相的构成比采用ModFit LT for Mac V3.0软件分析。

实验结果：实验结果见表7。由结果可见，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合，G2/M（DNA合成后期）期细胞明显增多，S（DNA合成期）期细胞明显减少。无论是以2+4摩尔份、还是以3+6摩尔份组合，与溶剂对照组相比，G2/M期阻滞均具有明显差异，而单独用药时的周期阻滞效果不明显，体现组合优势。结果提示，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合给药，与单独用药时相比，有显著性差异，可把肿瘤细胞阻滞于G2/M期，抑制其生长。

表7合用对SPC-A1细胞周期的影响（Mean±s，n=3)

注：与溶剂对照比较，**P<0.01；与2-甲氧基雌二醇组比较，^●P<0.05、^●●P<0.01；与姜黄素衍生物组比较，^▲▲P<0.01。

5.荧光分光光度计检测细胞内活性氧（ROS）

实验方案

方案1：2-甲氧基雌二醇2摩尔份，姜黄素衍生物4摩尔份；

方案2：2-甲氧基雌二醇3摩尔份，姜黄素衍生物6摩尔份；

方案3：2-甲氧基雌二醇2摩尔份

方案4：：2-甲氧基雌二醇3摩尔份

方案5：姜黄素衍生物4摩尔份

方案6：姜黄素衍生物6摩尔份

实验方法：按实验分组加药，肺癌SPC-A1细胞加入药物处理4h后，以PBS洗1遍，加入DCF/DA探针（终浓度5μM）孵育30min；消化、收集细胞，PBS清洗二遍，以去除荧光背景干扰；重悬于3ml冰PBS中，在激发波长：488nm，发射波长：525nm，条件下，以荧光分光光度计测定DCF荧光，以代表细胞内ROS水平。

实验结果：实验结果见表8。结果表明在单独用药并不增加细胞内ROS，甚至是降低细胞内ROS情况下，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合可增加细胞内ROS水平，尤其是较低剂量组合，增加细胞内ROS程度更高，体现组合使用优势。增加细胞内ROS是许多化疗药物的作用机制之一，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合能增加ROS，提示这亦是其发挥药效的机制之一。

表8组合对细胞内ROS的影响

6.薄层层析检测组合后物质的变化

实验方法：准确称取定量的2-甲氧基雌二醇，以丙酮溶解并定溶于容量瓶中；准确称取定量姜黄素衍生物，以丙酮溶解并定溶于容量瓶中；二者1:1混合后，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物为15摩尔份:30摩尔份，37℃孵育48h后以薄层层析(TLC)检测。条件为，吸附剂：5‰的CMCNa硅胶板；展开剂：二氯甲烷:丙酮（CH₂Cl₂:Me₂CO）30:1，展开二次；显色剂：5%磷钼酸乙醇溶液，加热至显色清晰。

实验结果：采用TLC方法检测表明，2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物以15摩尔份和30摩尔份的比例组合，TLC上没有新斑点出现。提示组合后并没有生成新的化学物质，二者在结构上没有变化，说明其协同作用不是通过新化学物质实现的。

结论：

通过药理学试验，我们确定组合物为：2-甲氧基雌二醇1-15摩尔份，姜黄素衍生物2-30摩尔份，优选2-甲氧基雌二醇1-6摩尔份，姜黄素衍生物2-12摩尔份，对多种肿瘤细胞均有显著阻滞其增殖作用，而且此作用是通过协同或相加方式发挥，其机制包括：把肿瘤细胞阻滞于G2/M期，增加细胞内ROS等。由此表明了该组合物具有增强疗效及更易起效（降低给药剂量，使其在体内易于达到起效浓度）的特点，及多途径作用的机制。而且2-甲氧基雌二醇和姜黄素衍生物组合后，在结构上没有发生变化，又可充分发挥各自本身毒性小的优势，具有安全性特色；此外姜黄素衍生物最大优势在于价廉，且二者组合又可降低2-甲氧基雌二醇用量，使总体治疗费用较低，提高患者用药依从性，可最大限度地发挥其在防治肿瘤中的作用。综上所述表明2-甲氧基雌二醇与姜黄素衍生物组合的药物组合物具有低毒、高效、多靶点、多途径的抗肿瘤作用。

Claims (4)

1.一种用于防治肿瘤的药物组合物，其特征在于，该药物组合物由2-甲氧基雌二醇（组分a）和姜黄素衍生物（组分b）混合制成，组分a和组分b的摩尔混合比例为1:2，而且组分a的含量范围为1-15份，组分b的含量范围为2-30份，所述的组分b为姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素中的一种或两种以上等摩尔比的混合物；按常规制备方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸剂、微丸剂、口服液、冻干制剂、水针剂、输液剂、栓剂、软膏剂、巴布剂、透皮剂的一种。所述的该药物组合物的片剂或胶囊剂，或滴丸剂，或微丸剂，或口服液的每片，或每粒，或每丸中该药物组合物的有效给药量范围为1-15份组分a，2-30份组分b，而且组分a和组分b的摩尔混合比例为1:2；所述的该药物组合物的冻干制剂，或水针剂，或输液剂的每支中该药物组合物的有效给药量范围为1-15份组分a，2-30份组分b，而且组分a和组分b的摩尔混合比例为1:2；所述的该药物组合物的栓剂，或软膏剂，或巴布剂，或透皮剂，或贴剂的每枚、每支或每贴中该药物组合物的有效给药量范围为1-15份组分a，2-30份组分b，而且组分a和组分b的摩尔混合比例为1:2。

2.根据权利要求1所述的用于防治肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述的组分b是去甲氧基姜黄素，该药物组合物由0.0031摩尔组分a和0.0062摩尔组分b混合制成，所述的该药物组合物按常规方法制成的片剂的每片中该药物组合物的有效给药量为0.0031摩尔组分a和0.0062摩尔组分b。

3.根据权利要求1所述的用于防治肿瘤的药物组合物，其特征在于，所述的组分b是姜黄素，该药物组合物由0.000154摩尔组分a和0.000308摩尔组分b混合制成，所述的该药物组合物按常规方法制成的透皮搽剂的每贴中该药物组合物的有效给药量为0.000154摩尔组分a和0.000308摩尔组分b。

4.一种用于防治肿瘤的药物组合物的纳米混悬剂冻干粉，其特征在于，该药物组合物由0.00033摩尔2-甲氧基雌二醇和0.00066摩尔双去甲氧基姜黄素混合制成，所述的该药物组合物和卵磷脂1300mg，加入15ml二氯甲烷中，35-40℃完全溶解，作为油相；450mg泊罗沙姆188，加入35ml PH值为7.4的磷酸盐缓冲液中，超声溶解，作为水相；水相置于磁力搅拌器工作盘上，边搅拌边将油相滴入，混匀后，内切式匀浆机10000转/分匀化6分钟，倒入圆底烧瓶中，保持水浴温度40℃，于旋转薄膜蒸发器上真空蒸发4.5h，除去二氯甲烷并形成初混悬液，初混悬液放入超声仪中，在700W条件下，超声粉碎25次，每次超声4s，停8s，形成纳米混悬剂，加入1500mg葡萄糖溶解后，灭菌，分装入瓶，每瓶中该药物组合物的有效给药量为0.02g，-20℃冻12h后，再冷冻干燥48h。