CN102488714B - 一种五倍子倍蚜油组合物、制备方法及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种五倍子倍蚜油组合物、制备方法及其用途，是将熟鲜五倍子在沸水中快速烫30秒灭活，干燥后粗碎，过60目筛，得倍蚜粉状物，采取压榨法、溶剂浸提法或CO₂超临界萃取提取倍蚜毛油，将倍蚜毛油在60—75℃，用食盐水或食用碱水洗涤，静置弃水层，在经活性炭进行脱色，过滤，在90℃下抽真空1～2小时后降温到60℃，加如抗氧化剂，搅拌，精滤，常温静置数小时装瓶即成。本发明的五倍子倍蚜油组合物具有很好的降血糖作用，可用于制备治疗糖尿病的药物。

Description

一种五倍子倍蚜油组合物、制备方法及其用途

技术领域

本发明涉及以五倍子为原料提取的降血糖油脂组合物、制备方法及其用途。 

背景技术

五倍子是《中华人民共和国药典》收载的常用中药材，别名文蛤、百仓虫，性味酸、涩，寒，归肺、大肠、肾经。功能敛肺降火，涩肠止泻，敛汗止血，收湿敛疮。主治肺虚久咳，肺热痰嗽，久泻久痢，盗汗，消渴，便血痔血，外伤出血，痈肿疮毒，皮肤湿烂临床诸症。

五倍子是半翅目（原同翅目）瘿绵蚜科五节根蚜亚科蚜虫寄生在漆树科盐肤木属植物复叶上形成的虫瘿，形成这种虫瘿的蚜虫，称之为致瘿蚜，又名倍蚜或倍蚜虫。五倍子药材炮制及加工中，将瘿内蚜虫去除废弃，仅利用虫瘿外壳，提取单宁酸、没食子酸或五倍子油等功效成分。虫瘿中的蚜虫及代谢物占干重的8～10％，含脂肪31～37％，蛋白质46～52％，生产上未予利用。

糖尿病是人们饮食结构中脂肪与蛋白质摄入过多，与智能时代久坐不动生活方式造成的现代多发病。随着人民生活水平的改善，近年我国糖尿病发病率快速增长，据2010年中国糖尿病协会调查，糖尿病发病率高达9.7%，接近1亿人群，已成为世界“糖尿病第一大国”。2006年联合国通过决议，将每年11月12日定名为“联合国糖尿病日”，促使各国加强对糖尿病的控制，减少糖尿病的危害。

传统中医常用五倍子治疗“消渴症”（糖尿病）。《中国药学杂志》 “五倍子降血糖有效组份的药理筛选”等现代药理药效研究证实五倍子降血糖的主要部位是五倍子油。2000年国家药品监督管理局批准五倍子油原料药及中药五类新药五倍子油软胶囊进入临床研究（批件号2000ZL09），用于轻、中度2型糖尿病患者治疗用药。其质量控制标准为五倍子经提取制得的脂肪油，含量达90％；其中含月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸之和不得少于45.0％。由五倍子倍蚜虫致瘿的遗传稳定性和生源关系，推测其与降血糖作用具有相关性。2010～2011年发明人进行“五倍子药材相关油脂提取物及功效研究”，采用多种制备方法得到高纯度倍蚜油，动物模型试验证明其具有较强的降血糖作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种五倍子倍蚜油组合物，该组合物具有降血糖作用，本发明还提供一种该五倍子倍蚜油组合物的制备方法。

本发明的实施方案为：一种五倍子倍蚜油组合物，由包括以下步骤的方法制成：

（1）将采摘的成熟鲜五倍子在沸水中快速烫30秒灭活，捞起晒干或烘干，粗碎，过60目筛，得倍蚜粉状物；

（2）采取压榨法、溶剂浸提法或CO₂超临界萃取提取倍蚜毛油；

（3）将倍蚜毛油升温至60—75℃，边搅拌便加入浓度为5～10％的食盐水或食用碱水洗涤，静置数小时分层，弃去水层；

（4）将水洗后的倍蚜毛油加热到70℃，边搅拌边加入倍蚜毛油重量3～5％的颗粒活性炭进行脱色，30～60分钟后趁热过滤；

（5）脱色后的倍蚜毛油加热到90℃，抽真空1～2小时后降温到60℃，加入倍蚜毛油重量0.05～0.1%的抗氧化剂没食子酸丙酯，搅拌，精滤，常温静置数小时装瓶，即为倍蚜成品油。

步骤（2）中，所述压榨法提取倍蚜毛油的方法是将倍蚜粉状物投入螺旋榨油机中加压，压滤液粗滤，精滤，得倍蚜毛油。

所述溶剂浸提法提取倍蚜毛油的方法是：将倍蚜粉状物投入浸提罐中，加入溶剂，倍蚜粉状物与溶剂的重量体积比为1g：5～15ml，热回流法连续浸提2～4次，每次2～8小时，过滤，滤液升温蒸发脱溶回收溶剂，得倍蚜毛油，所述溶剂为石油醚、6#溶剂或正己烷。

所述CO₂超临界萃取提取倍蚜毛油的方法是：将倍蚜粉状物投入超临界萃取釜中，萃取条件为：压力20～25Mpa，工作温度为40～50℃，时间为3～5h，萃取结束后，从分离釜放出过滤，得倍蚜毛油。

采用气相色谱－质谱联用法检测倍蚜油油脂组分和含量。

气相条件：气相色谱柱：Rtx-5ms(30 m，,0.25 μm，0.25 mm)； 载气：He；进样口温度：250℃；柱温：程序升温，初始温度120℃,以10℃/min到190℃，保留15min，5℃/min到240℃ ，保留16min。进样量：1 μL。分流比：20︰1。

质谱条件：离子源温度：230℃ ；接口温度：250℃ ；电离方式：EI，电子能量：70eV；溶剂延迟时间为3.0 min；质量扫描范围：40~600amu；采集方式：SCAN扫描。谱库为NIST08.LIB。

检测表明，本发明的五倍子倍蚜油组合物中倍蚜油含量脂肪酸大于90％，脂肪酸种类以月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、亚油酸、反油酸、硬脂酸6类脂肪酸为主，其中月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸之和大于78.0％。

动物实验表明，本发明的五倍子倍蚜油组合物具有很好的降血糖作用，可用于制备治疗糖尿病的药物。

具体实施方式

实施例1 ：取五倍子破碎过筛倍蚜粉状物100kg，投入6YL－120型榨油机中泠压三级压榨，设定60℃自动控温，油脂400目滤网过滤，加入4％食用碱水2.5L水洗，静置6小时分层，弃去水层。将水洗后的油加热到70℃，边搅拌边加入颗粒活性炭5％，45分钟后趁热过板框式压滤。脱色后油脂加热到90℃，抽真空1小时，降温到60℃，加入抗氧化剂没食子酸丙酯0.05％，搅拌，过精滤机精滤，常温静置6小时后装瓶，得倍蚜油28.65kg,原料得油率28.65％。

实施例2 ：取五倍子破碎过筛倍蚜粉状物120kg，投入1000L浸提罐内，加入6#溶剂600 L，加热至60℃回流6h，过滤；滤渣加入6#溶剂500 L二次热回流浸提3h，过滤；合并滤液，滤液升温90℃蒸发脱溶，回收溶剂，毛油加入5％食盐水4.0L水洗，静置4小时分层，弃去水层。将水洗后的油加热到70℃，边搅拌边加入颗粒活性炭3％，30分钟后趁热过板框式压滤。脱色后油脂加热到90℃，抽真空1.5小时，降温到60℃，加入抗氧化剂没食子酸丙酯0.1％，搅拌，精滤机精滤，常温静置6小时后装瓶，得倍蚜油37.94kg,原料得油率31.62%％。

实施例3 ：取五倍子破碎过筛倍蚜粉状物2000g，投入HL-2升/50MPa-ⅢB超临界萃取装置中，萃取条件压力20Mpa，工作温度50℃，时间为5h，萃取结束后从分离釜放出毛油，加入5％食盐水70ml水洗，静置3小时分层，弃去水层。将水洗后的油加热到70℃，边搅拌边加入颗粒活性炭3％，30分钟后趁热过板框式压滤。脱色后油脂加热到90℃抽真空0.5小时，降温到60℃时加入抗氧化剂没食子酸丙酯0.05％，搅拌，微滤，常温静置2小时后装瓶，得倍蚜油609g,原料得油率30.45％。

上述各实施例所制得的倍蚜油得率为28.65～31. 62％。采用气相色谱－质谱联用法检测油脂组分和含量，其油脂含量91.2～93.4%,脂肪酸种类以月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、亚油酸、反油酸、硬脂酸6类脂肪酸为主，占脂肪酸总量95.4～96.2%，其中月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸之和大于80.0％。

倍蚜油降血糖活性动物试验及功效评价

所制倍蚜油委托湖南中医药大学第一附属医院中心实验室进行Ⅱ型糖尿病动物降糖作用试验，结果倍蚜油组比模型组降血糖作用达极显著值，并优于阳性药对照组拜糖苹。

（1）、实验动物

SD大鼠，SPF级，180~200 g，115只，雄性。购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（湘）2009-0004，合格证号：HNASLKJ20102730。

（2）实验药品

拜糖苹（拜耳，批号BJ02758），倍蚜油，肚倍油，角倍油， STZ（索莱宝）。

（3）、实验试剂及仪器

乐生血糖仪，乐生血糖试纸，半自动生化仪（雷杜，RT-1904C），甘油三酯试剂盒（中生北控，批号114811），总胆固醇试剂盒（中生北控，批号111181），高密度脂蛋白胆固醇试剂盒（中生北控，批号110401），低密度脂蛋白胆固醇试剂盒（中生北控，批号110411），糖化血清蛋白试剂盒（南京建成，批号20111103），肝/肌糖元试剂盒（南京建成，20111025）。

（4）、模型制作

高脂乳剂组成：10 %胆固醇、0.2 %丙硫氧嘧啶、20 %猪油、2 %胆酸钠、20 %吐温-80、20 %丙二醇、加蒸馏水至100 mL配制而成。制备方法：取猪油100 g置于500 ml烧杯中，加热融化，加入50 g胆固醇溶化，再加入10 g胆酸钠和1 g丙硫氧嘧啶，然后加入100ml吐温-80、100 ml丙二醇及适量蒸馏水至400ml，充分混匀，即得。除空白组以外，其余大鼠均以高脂乳1mL/100 g连续灌胃14天，每天一次，造高脂模型。第14天高脂灌胃后，大鼠禁食不禁水24小时，尾静脉注射STZ造糖尿病模，造模剂量为38 mg/kg，注射体积为2 mL/kg。STZ溶解于新鲜配制的的枸橼酸缓冲液中（pH=4.5）使其成为19 mg/mL 的溶液，现配现用。造模后72小时测定大鼠空腹（禁食7小时）血糖，高于16.00 mmol/L者视为造模成功的糖尿病大鼠模型。而后按血糖分层随机分组。

（5）、实验分组

实验分为空白组、模型组、阳性组（对照，拜糖苹13.5 mg/kg）、角倍油组（200 mg/kg）、倍蚜油组（200 mg/kg）。

（6）、灌胃给药

灌胃体积10 mL/kg，阳性对照组给予拜糖苹13.5 mg/kg，受试组给予受试组方，空白组及模型组给予等体积蒸馏水，连续灌胃28天。

（7）、测定指标

给药第28天清晨所有大鼠先禁食不禁水6小时，给药，而后继续禁食不禁水，于给药后第1、2、4、6小时剪尾以血糖仪测定大鼠血糖值并记录。各组指标采用T检验与空白组及模型组作比较。

（8）、实验结果

大鼠II型糖尿病实验中，模型组、阳性组、角倍油组、倍蚜油组的四个时点的血糖值与空白组比，有显著性差异（P≤0.01），造模有效。灌药后第28天8、10 、12 h血糖值，阳性组与模型组比有显著性差异（P≤0.05）；倍蚜油组与模型组比7、8、10h血糖值有极显著性差异（P≤0.01），12 h有显著性差异（P≤0.05）；角倍油组与模型组比10h血糖值有显著性差异（P≤0.05）；显示倍蚜油具有一定的降低大鼠II型糖尿病模型血糖值的作用，功效优于阳性药拜糖苹和角倍油。详见下表：

Claims (4)

1. 一种五倍子倍蚜油组合物，其特征在于，由包括以下步骤的方法制成：

（1）将采摘的成熟鲜五倍子在沸水中快速烫30秒灭活，捞起晒干或烘干，粗碎，过60目筛，得倍蚜粉状物；

（2）采取压榨法、溶剂浸提法或CO₂超临界萃取提取倍蚜毛油，所述压榨法提取倍蚜毛油的方法是将倍蚜粉状物投入螺旋榨油机中加压，压滤液粗滤，精滤，得倍蚜毛油；所述溶剂浸提法提取倍蚜毛油的方法是：将倍蚜粉状物投入浸提罐中，加入溶剂，倍蚜粉状物与溶剂的重量体积比为1g：5～15ml，热回流法连续浸提2～4次，每次2～8小时，过滤，滤液升温蒸发脱溶回收溶剂，得倍蚜毛油，所述溶剂为石油醚、6#溶剂或正己烷；所述CO₂超临界萃取提取倍蚜毛油的方法是：将倍蚜粉状物投入超临界萃取釜中，萃取条件为：压力20～25Mpa，工作温度为40～50℃，时间为3～5h，萃取结束后，从分离釜放出过滤，得倍蚜毛油；

（3）将倍蚜毛油升温至60—75℃，边搅拌便加入浓度为5～10％的食盐水或食用碱水洗涤，静置数小时分层，弃去水层；

（4）将水洗后的倍蚜毛油加热到70℃，边搅拌边加入倍蚜毛油重量3～5％的颗粒活性炭进行脱色，30～60分钟后趁热过滤；

（5）脱色后的倍蚜毛油加热到90℃，抽真空1～2小时后降温到60℃，加入倍蚜毛油重量0.05～0.1%的抗氧化剂没食子酸丙酯，搅拌，精滤，常温静置数小时装瓶，即为倍蚜成品油。

2.根据权利要求1所述的五倍子倍蚜油组合物，其特征在于，脂肪酸含量大于90％，其中月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸含量之和大于78.0％。

3.一种五倍子倍蚜油组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将采摘的成熟鲜五倍子在沸水中快速烫30秒灭活，捞起晒干或烘干，粗碎，过60目筛，得倍蚜粉状物；

（2）采取压榨法、溶剂浸提法或CO₂超临界萃取提取倍蚜毛油，所述压榨法提取倍蚜毛油的方法是将倍蚜粉状物投入螺旋榨油机中加压，压滤液粗滤，精滤，得倍蚜毛油；所述溶剂浸提法提取倍蚜毛油的方法是：将倍蚜粉状物投入浸提罐中，加入溶剂，倍蚜粉状物与溶剂的重量体积比为1g：5～15ml，热回流法连续浸提2～4次，每次2～8小时，过滤，滤液升温蒸发脱溶回收溶剂，得倍蚜毛油，所述溶剂为石油醚、6#溶剂或正己烷；所述CO₂超临界萃取提取倍蚜毛油的方法是：将倍蚜粉状物投入超临界萃取釜中，萃取条件为：压力20～25Mpa，工作温度为40～50℃，时间为3～5h，萃取结束后，从分离釜放出过滤，得倍蚜毛油；

（3）将倍蚜毛油升温至60—75℃，边搅拌便加入浓度为5～10％的食盐水或食用碱水洗涤，静置数小时分层，弃去水层；

（4）将水洗后的倍蚜毛油加热到70℃，边搅拌边加入倍蚜毛油重量3～5％的颗粒活性炭进行脱色，30～60分钟后趁热过滤；

（5）脱色后的倍蚜毛油加热到90℃，抽真空1～2小时后降温到60℃，加入倍蚜毛油重量0.05～0.1%的抗氧化剂没食子酸丙酯，搅拌，精滤，常温静置数小时装瓶，即为倍蚜成品油。

4.根据权利要求1所述的五倍子倍蚜油组合物在制备治疗糖尿病药物方面的用途。