CN102470157A - 广谱erbb配体结合分子及其制备和使用方法 - Google Patents

Abstract

公开了具有对比天然ErbB1、ErbB3或ErbB4中的任一种更多的ErbB配体的可检测的结合活性的嵌合ErbB配体结合分子。优选地，所述结合分子结合广谱并且更优选全谱ErbB配体。所述嵌合ErbB配体结合分子通常具有来源于ErbB1、3或4中的一种的亚单位LI和来源于另一种不同的ErbB受体类型的亚单位LII。连接LI和LII的亚结构域SI可来自受体类型中的任一种或可具有来自两者的部分。还公开了包含所述分子的药物组合物和用于治疗ErbB敏感性疾病的方法。

Description

广谱ERBB配体结合分子及其制备和使用方法

背景

受体酪氨酸激酶参与刺激许多癌症的生长。通常，受体酪氨酸激酶是糖蛋白，其由(1)能够与特异性配体结合的细胞外结构域，(2)跨膜区，(3)可通过例如蛋白质磷酸化作用调节受体活性的近膜结构域，(4)为受体的酶组分的酪氨酸激酶结构域和(5)羧基端尾组成。1型受体酪氨酸激酶的ErbB家族构成一个重要类型的受体，因为它们在许多实体瘤中调节细胞生长、分化和存活的重要性。这一受体家族的成员包括ErbB1(也称为HERJ)、ErbB2(HER2/neu)、ErbB3(HER3)和ErbB4(HER4)。超过12种配体与ErbB家族受体相互作用。例如，EGF、转化生长因子α(TGFα)和双调蛋白都与ErbB1结合。神经调节蛋白的同种型，也称为调蛋白(Heregulin)和Neu分化因子(NDF)，对ErbB3和ErbB4具有特异亲和力。配体例如β动物纤维素、肝素结合EGF和表皮调节素(epiregulin)与ErbB1和ErbB4两者结合。

越来越清楚的是，ErbB活化配体的过表达可导致与失调受体相似的不受控制的细胞增殖。在这些情况中，干扰活化配体与其受体的结合可提供有效的治疗策略或其可使现有的基于受体的或其它的治疗更加突出。干扰配体与ErbB3结合的治疗可以是特别有效的。ErbB3与EGFR家族中的其它受体不同，因为其酪氨酸激酶结构域是功能上无活性的；然而，ErbB2/ErbB3异源二聚体传递ErbB家族的任何同源或异源二聚体组合的最有效的促有丝分裂信号。因此，ErbB3是重要的靶标，但是是不能通过靶向激酶区的小分子来抑制的一种靶标。由于ErbB3需要活化的配体，例如调蛋白或NDF，所以在活化的异源二聚体可形成之前，可干扰ErbB3受体配体的结合的分子可被用来阻断或干扰ErbB二聚体和异源二聚体的形成。这种分子的一个实例会是具有配体结合亲和力并且可因此“捕捉”配体并且有效地降低它们的浓度以便它们不能活化ErbB3受体的分子。除了ErbB3配体之外，还有其它的已知ErbB受体配体具有不同的程度的相似的作用。因此，可捕获并且分离全谱ErbB配体的结合分子在癌症的治疗中可以具有甚至更多的用途。

存在已经尝试这种捕获或“诱捕”策略的几种治疗。例如，Enbrel^TM(依那西普-Amgen)是结合并捕获前炎性配体TNFα的可溶、修饰形式的TNFR受体。此外，VEGFR1和VEGFR2受体的可溶融合蛋白，称为VEGF捕获，现在处于黄斑变性和几种形式的癌症两者的治疗的临床试验中(Regeneron Pharmaceuticals)。ErbB3捕获还在用NDF处理的细胞中体外显示增强二元EGFR/ErbB2抑制剂的作用的效力并且逆转的GW2974(ErbB1和ErbB2的小分子抑制剂)抗性。

所有近来证明ErbB抑制剂靶向EGFR、ErbB2、ErbB3、ErbB4或所有4种受体的组合。然而，没有已知的治疗同时干扰配体与多种ErbB受体的结合。明显地，需要可用来分离受体配体(例如ErbB配体)并且由此阻断配体与多种ErbB受体的结合以及随后的受体活化的新的结合分子。能够结合所有已知的ErbB配体的结合分子将是特别有用的。

已进行许多结合研究以确定对其配体(调蛋白)的结合重要的ErbB3的区。Singer等(2001)，J.Biol.Chem.276，44266-44274。使用嵌合受体的其它研究已经鉴定了ErbB1和ErbB4的细胞外结构域对配体特异性信号转导的相对贡献。Kim，等(2002)，Eur.J.Biochem.269，2323-2329。这些研究揭示神经调节蛋白与ErbB4的结合依赖于结构域I比依赖于结构域III多得多并且ErbB1的结构域III主要对EGF结合来说重要。然而，这些研究在跨越包括跨膜和胞质结构域的受体的全部长度的全长受体上进行。这些大的分子表现出制造和施用问题，可能导致较低的治疗功效。

概述

公开了具有对比天然ErbB1、ErbB3或ErbB4中的任一种更多的ErbB配体的可检测的结合活性的嵌合ErbB配体结合分子。优选地，结合分子结合广谱以及更优选全谱ErbB配体。嵌合ErbB配体结合分子通常具有来源于ErbB3或4中的一种的亚结构域LI和来源于另一种不同的ErbB受体类型(例如ErbB1)的亚结构域LII，亚结构域LI和亚结构域LII是连接的。亚结构域SI可被用来连接LI和LII。亚结构域SI可来自受体类型中的一种或可具有来自两者的部分。

在一个实施方案中，嵌合ErbB配体结合分子可包括与来源于ErbB1的LII的至少一部分连接的来自ErbB4的至少一部分。LII可与来自ErbB1的SII的模块1连接。SI亚结构域可被用来连接LI和LII亚结构域并且可来源于任何一个ErbB1或ErbB4受体序列或可以是两者的混合物。任选地，ErbB嵌合体可与聚集体(aggregant)例如IgG2Fc融合。

在一个实施方案中，嵌合ErbB配体结合分子可包含来自ErbB4的LI的至少一部分；具有来源于ErbB4的一部分和来自ErbB1的一部分的SI区，其中ErbB4部分在ErbB4部分和ErbB1部分这两个序列之间具有同源性的区中转换至ErbB1部分；来源于ErbB1的LII的至少一部分和来源于ErbB1的SII的模块1。

在一个实施方案中，嵌合ErbB配体结合分子可包含与来源于ErbB1的LII的至少一部分和来自ErbB1的SII的模块1连接的来自ErbB3的亚单位LI的至少一部分。连接区可以是来自ErbB1、ErbB3或它们的混合物的SI结构域。

在一个实施方案中，嵌合ErbB配体结合分子可包含来自ErbB3的亚单位LI的至少一部分；具有来源于ErbB3的一部分和来源于ErbB1的一部分的SI区；来源于ErbB1的LII的至少一部分和来源于ErbB1的SII的模块1。

在一个实施方案中，嵌合ErbB配体结合分子可包含来自ErbB4的亚单位LI的至少一部分；具有来源于ErbB4的一部分和来源于ErbB1的一部分的SI区；来自ErbB1的LII的至少一部分和来自ErbB1的SII的模块1。

在一个实施方案中，嵌合ErbB配体结合分子可包含来自ErbB3的亚单位LI的至少一部分；具有来源于ErbB3的一部分和来源于ErbB1的一部分的SI区，其中ErbB3部分在ErbB3部分和ErbB1部分这两个序列之间具有同源性的区中转换至ErbB1部分；来源于ErbB1的LII的至少一部分和来源于ErbB1的SII的模块1。

还涵盖编码所公开的嵌合ErbB配体结合分子的DNA序列连同促进表达的序列和用于维持并表达这些DNA序列的宿主细胞。

还涵盖包含嵌合ErbB配体结合分子和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。

嵌合ErbB配体结合分子可通过将其固定在可转而用于结合ErbB配体的固体支持物上来使用以便所述配体可从生物液体(尤其是来自患有与这些配体的过量表达有关的疾病的患者)除去。之后可将ErbB配体清除的生物液体放回那些患者中。

还涵盖了用于治疗患有与ErbB配体的过量表达有关的疾病的患者的方法，其包括施用包含在药学上可接受的赋形剂中的治疗上有效的量的嵌合ErbB配体结合分子的药物组合物。

附图

图1说明嵌合ErbB4-ErbB1嵌合体的若干可能的亚单位结构。突显序列显示从ErbB4序列开始的嵌合ErbB配体结合分子的特定的实施方案。

图2说明嵌合ErbB3-ErbB1嵌合体的几种可能的亚单位结构。

图3提供ErbB1(底部序列)和ErbB4(顶部序列)的比对。突显的氨基酸序列显示从ErbB序列开始的嵌合的ErbB配体结合分子的一个特定的实施方案。

详细描述

ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4的完整核苷酸序列是已知的并且可在Genbank中找到，ErbB1的登录号是NM 005228，ErbB2的登录号是NM 004448，ErbB3的登录号是M29366或NM 001982，并且ErbB4的登录号是NM 005235。ErbB受体的全长胞外域(细胞外结构域)包含四个亚结构域，有时称为L1、CR1、L2和CR2，其中L和CR分别代表大的和半胱氨酸富集。亚结构域有时也称为结构域I-IV或可选择地随着它们从氨基端延伸称为LI、SI、LII和SII。已经分析了受体的氨基酸序列而且序列似乎是同源的并且已经被比对。ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4的胞外域的比对提供于美国专利公开第2006/0234343号图1A和1B中。

亚结构域由称为亚区的较小的结构域组成。例如，SI或CR1亚结构域包含有时候称为模块的8个二硫键的亚区，其按照它们从氨基向羧基端方向延伸编号为1-8。SII包含编号为1-7的七(7)个模块。已经在被认为直接远离配体结合位点的模块5中鉴定了大的有序环。环中的氨基酸序列是高度保守的。

公开了嵌合ErbB配体结合分子，其中来自至少两种不同的ErbB受体的亚结构域LI、SI、LII和SII的模块1组合在单一结合分子中，为了本公开内容的目的，就ErbB配体结合分子而言，短语“嵌合的”意指由多于一种的ErbB受体胞外域制得并包含多于一种的ErbB受体胞外域的部分的单一的ErbB配体结合分子。短语“ErbB嵌合体”和“嵌合ErbB配体结合分子”在本申请中可交替使用并且意为同义的并且是指单体的蛋白质序列。如可在一些实施方案中所理解的，嵌合体分子可通过二硫键的形成而二聚化。

出人意料的是，已经发现ErbB3或ErbB4的氨基酸序列的部分可通过SI链接结构域与ErbB1的部分组合以产生将配体与所组合的受体中的两者结合的嵌合结合分子。因此，ErbB1和ErbB4结构域的组合可被用于产生对调蛋白(ErbB4特异性配体)和TGFα(ErbB1特异性配体)都具有亲和力的嵌合结合分子。

氨基酸序列从一个受体类型向另一个受体类型的转换可以在提供ErbB配体的广谱并且高亲和力结合的任何适合的位置。在一些实施方案中，转换可发生在连接LI和LII亚结构域的SI亚结构域中。在一些实施方案中，转换将发生在其中所组合的受体之间氨基酸序列是同源的或同一的区中，例如在SI亚结构域的模块5中。

为了本公开内容的目的，术语“同源性”如本领域中这一术语通常被理解的意指具有同一的或保守的氨基酸取代的氨基酸序列的区。例如，就ErbB4/ErbB1嵌合体而言，如图3所示，从ErbB4向ErbB1序列的转换可发生在SI亚结构域的模块5中以使来自ErbB4序列的以VYNP结尾的序列之后是来自ErbB1序列的TTYQ，如图3中的突显序列所示。

如ErbB1配体结合所需要的，序列可延伸远至ErbB1 LII结构域。可包括全部ErbB1 LII结构域并且还可包括随后的来自ErbB1的SII区的部分或全部。图3显示ErbB4和ErbB1的LI、SI、LII和SII结构域的模块1的胞外域氨基酸比对，以ErbB1的氨基酸501结尾。

就图3而言，显示了一个嵌合ErbB实施方案，其中亚结构域LI来源于ErbB4；SI区来源于ErbB4的SI区的一部分并且在模块5中转换至ErbB1的SI区的一部分。这一序列延伸以包括ErbB1 LII亚结构域和ErbB1 SII结构域的模块1。这可指定为如下：LI(ErbB4)-SI(ErbB4/ErbB1)-LII(ErbB1)-SIIm1(ErbB1)。更具体地：LI(ErbB4氨基酸1-245)-SI(从氨基酸249开始的ErbB1)-LII(ErbB1)-SIIm1(根据天然ErbB1的编码以氨基酸501结尾的ErbB1)。

本申请中所有的氨基酸编号预期排除天然的信号肽。

在某些实施方案中，SI结构域可由两个亚结构域中的每一个的部分组成，如上文指明的。而且，为了不同的目的将取代引入氨基酸序列也是可能的。例如，可改变嵌合结合分子的DNA序列以除去半胱氨酸以便可避免通过半胱氨酸-半胱氨酸键形成聚集体。在一个亚结构域中氨基酸的取代可用于调节配体结合亲和力。例如，来自ErbB1的氨基酸可取代至ErbB4 LI亚结构域中以使得结构域的序列与ErbB1的序列更相似以便改变分子对ErbB配体的亲和力。相似地，来自ErbB3或4LII亚结构域的氨基酸取代可包括在ErbB1亚结构域中。这些取代也可在SI和SII亚结构域中制得。尽管可考虑任何数目的这些取代，但是来自ErbB1的谷氨酰胺对ErbB4部分中位置13的丝氨酸的取代，酪氨酸对位置42的丝氨酸的取代，精氨酸对位置123的酪氨酸的取代是代表性的实例。其它的实例可由本领域的一名技术人员通过比较序列而简单地鉴定。也可考虑不是同源性的取代。例如，天冬酰胺可取代在ErbB1中发现的位置13的丝氨酸而不是谷氨酰胺或可使用具有在两种受体中发现的残基的中间特性的残基。

这些嵌合分子中的任一种还可与其它分子或其部分融合，包括：其它的嵌合受体(任何生长因子受体家族的)或与促进产物纯化的序列融合。DNA序列可从商业来源获得并且置于任何适合的表达载体中并且从许多是已知的适合的宿主表达。

在一个实施方案中，ErbB嵌合体可与导致聚集的缀合物形成或延长的蛋白质半衰期的组分融合。例如，ErbB嵌合体可与免疫球蛋白分子的恒定区(例如IgG的Fc区)融合。为了本公开内容的目的，一种适合的Fc区被称为IgG2Fc，尽管其它也是本领域中已知的并且可被使用。

为了本申请的目的，适合的结合亲和力是高得足以在生理基质中结合ErbB配体的亲和力。优选地，解离常数将不高至天然受体的解离常数之上约10倍至约100倍。更优选地，ErbB嵌合体的解离常数将在它们的天然受体相应物的10倍之内并且更优选在相同的数量级之内。最优选地，嵌合分子的结合亲和力与天然对应物的结合亲和力将不可区分。足以结合并且分离ErbB配体以由此阻止或干扰配体结合和活化ErbB受体的任何亲和力是适于使用的并且可用在所公开的方法中。结合分子的结合亲和力，其是抑制剂效力的代表，可使用生物传感器技术或通过经典的结合测定(例如本领域中熟知的ELISA)来测量。

也涵盖编码嵌合ErbB配体结合分子序列的DNA。技术人员可理解的是可用遗传密码来制备适合的DNA序列并且对于特定表达宿主的密码子偏好也可并入这些序列中。对于这些序列的使用还预期的是可用于表达这些DNA序列的另外的DNA序列。这些中许多是已知的。如本领域中熟知的，还可将这些序列引入用于DNA维持和其表达的宿主细胞并且还涵盖包含这些DNA序列的这样的宿主。

还涵盖包含所公开的嵌合ErbB配体结合分子的药物组合物。这些组合物包含治疗上有效的量的嵌合ErbB配体结合分子和药学上可接受的载体。术语“药学上可接受的”意指由联邦或国家政府的管理机构批准的或者美国药典或其它一般公认药典所列的用于动物并且更具体地用于人。术语“载体”是指治疗剂在其中被施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。这些药物载体可以是无菌液体、例如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些，例如花生油、豆油、矿物油、芝麻油等。适合的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等，其中嵌合ErbB配体结合分子是可溶的并且是化学上稳定的。组合物还可包含增湿剂或乳化剂或pH缓冲剂。这些组合物可采取溶液、悬浮液、乳液、片剂、丸剂、胶囊、粉末、持续释放的制剂等的形式。药学上可接受的载体包括用于制剂中的其它成分例如DPPC、DOPE、DSPC和DOPC。可使用天然或合成的表面活性剂。可使用PEG(甚至除了其在衍生蛋白质或类似物的用途之外)。可使用葡聚糖，例如环糊精。可使用纤维素和纤维素衍生物。可使用氨基酸，例如在缓冲制剂中使用。药学上可接受的稀释剂包括具有不同内含物(例如，Tris-HCl、醋酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的缓冲液；添加剂，例如去污剂和增溶剂(例如，聚山梨醇80)，抗氧化剂(例如，抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠)、防腐剂(例如，苯甲醇)和增量物质(例如，乳糖、甘露醇)；将所述材料掺入聚合化合物(例如聚乳酸、聚乙醇酸等)的粉粒制剂中或脂质体中。也可使用透明质酸并且其可具有促进循环中的持续时间的作用。这些组合物可影响本发明蛋白质和衍生物的物理状态、稳定性、体内释放的速度和体内清除的速度。参见例如Remington′sPharmaceutical Sciences，第18版，(1990，Mack Publishing Co.，Easton，PA 18042)第1435-1712页，其通过引用并入本文。组合物可以液体形式制备或可以是干燥粉末例如冻干的形式。也涵盖可植入的持续释放制剂，与经皮制剂一样。还涵盖脂质体、微胶囊或微球、包合物或其它类型的载体。

对于其预期的治疗用途有效的活性嵌合结合分子的量可通过标准的临床技术来确定。此外，体外测定可任选地用于帮助确定理想的剂量范围。通常，每日方案应当在0.1-1000微克的活性剂(API)每千克体重的范围内，优选地0.1-150毫克每千克。有效的剂量可以从得自体外或适合的动物模型测试系统的剂量响应曲线推测。给药量和间隔可各自调整以提供足以维持治疗作用的化合物的血浆水平。在局部施用或选择性摄入的情况中，化合物的有效的局部浓度可与血浆浓度无关。用于治疗的方法中涉及的给药方案可由主治医师来确定，考虑改变药物作用的不同因素，例如患者的年龄、病况、体重、性别和饮食、疾病的严重度、施用的时间和其它临床因素。

所施用的化合物的量将当然取决于所治疗的受治疗者、受治疗者的体重、痛苦的严重程度、施用的方式和开处方的医师的判断。当症状是可检测的或者甚至当它们不可检测时可间歇地重复治疗。治疗可单独或与其它药物组合来提供。

公开了用于治疗需要治疗的患者的方法，其包括获得结合ErbB配体并且干扰配体对癌细胞的ErbB受体系统的作用和影响的嵌合ErbB配体结合分子和向患者施用治疗有效的量的分子。施用可通过肠胃外途径进行，例如静脉内施用、直接注射至实体瘤(例如通过注射器或导管)或通过腹腔注射。

在治疗的一个方法中，嵌合ErbB配体结合分子可通过标准方法固定至固体支持物例如血浆析离或生物芯(biocore)支持物。当将结合分子固定至固体支持物时，将患者的血清、血液或其它生物学相关液体置于与血浆析离柱中的固体支持物接触以从液体移除ErbB配体。然后再将血清、血液或液体引入患者中。

结合分子可用于组合治疗。因此，嵌合ErbB配体结合分子可与一种或多种另外的化合物或治疗组合施用，一种或多种另外的化合物或治疗包括化学治疗剂、手术、导管设备和放射。组合治疗包括施用包含嵌合ErbB配体结合分子和一种或多种另外的药剂的单一药学剂量制剂。嵌合ErbB配体结合分子和一种或多种另外的药剂可以它们自己单独的药学剂量制剂或一起以相同的制剂中施用。例如，嵌合ErbB配体结合分子和细胞毒性剂、化学治疗剂或生长抑制剂可以单一剂量组合物一起施用于患者或者每种药剂可以单独的剂量制剂施用。更具体地，嵌合ErbB配体结合分子被用于包括治疗剂例如Lapatinib

Herceptin

Erbitux

等的组合治疗。当使用单独的剂量制剂时，嵌合ErbB配体结合分子和一种或多种另外的药剂可同时或在不同交错的时间(即，连续地)施用。本领域中的一名技术人员可理解的是组合必须是致使ErbB配体结合分子不干扰而是使组合中的第二种治疗剂更加突出。

下列实施例仅通过说明的方式给出而绝非应当被解释为限制本申请的主题。在下列实施例中，也涵盖编码所公开的氨基酸序列的核苷酸序列。下列实施例中的许多公开与ErbB嵌合体融合的IgG2Fc的序列。应当理解的是IgGFc的使用是任选的。此外，特别涵盖了使用没有大量(约10倍)干扰配体结合活性的另一种相似的氨基酸保守替代氨基酸。可用纯化产物的常规结合研究来确定结合亲和力中的实质差异是否存在。下文描述的结构中的许多可通过参考图1和2中的那些结构的图解而更好的理解。所有序列包括来源于小鼠抗体重链基因的信号肽。所有编码排除信号肽，并且对每个ErbB序列的第一个氨基酸加下划线。

实施例1

本实施例具体公开了包含与ErbB3受体的LI亚结构域连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和在ErbB1 SII亚结构域的模块1中的残基501之后终止的ErbB1受体的SI和LII亚结构域的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.1

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C D P S C P N G S C W G A G E E N C Q K

L T K I I C A Q Q C S G R C R G K S P S D C C H N Q C A A G C T G P R E S D C L V C

R K F R D E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V

K K C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P

C R K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A

F R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例2

本实施例具体公开了包含与ErbB3受体的LI和SI亚结构域连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和在ErbB1 SII亚结构域的模块1中的残基501之后终止的ErbB1受体的LII亚结构域的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.2

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K T I C A P Q C N G H C F G P N P N Q C C H D E C A G G C S G P Q D T D C F A C

R H F N D S G A C V P R C P Q P L V Y N K L T F Q L E P N P H T K Y Q Y G G V C V

A S C P H N F V V D Q T S C V R A C P P D K M E V D K N G L K M C E P C G G L C

P K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F

R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例3

本实施例公开了包含与ErbB3受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-2连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块3-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.3

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K T I C A P Q C N G H C F G P N P N Q C C H N Q C A A G C T G P R E S D C L V C

R K F R D E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V

K K C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P

C R K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A

F R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例4

本实施例公开了包含与ErbB3受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-3连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块4-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.4

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K T I C A P Q C N G H C F G P N P N Q C C H D E C A G G C S G P Q D T D C F V C

R K F R D E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V

K K C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P

C R K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A

F R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例5

本实施例具体公开了包含与具有SI亚结构域的模块5-8的ErbB3受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-4连接的信号肽(M E WS W V F L F F L S V T T G V H S)，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.5

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K T I C A P Q C N G H C F G P N P N Q C C H D E C A G G C S G P Q D T D C F A C

R H F N D S G A C V P T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V

K K C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P

C R K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A

F R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例6

本实施例具体公开了包含与具有SI亚结构域的模块6-8的ErbB3受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-5连接的信号肽(M E WS W V F L F F L S V T T G V H S)，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.6

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K T I C A P Q C N G H C F G P N P N Q C C H D E C A G G C S G P Q D T D C F A C

R H F N D S G A C V P R C P Q P L V Y N K L T F Q L E P N P H T K Y Q Y G G V C V

A K C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P

C R K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A

F R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例7

本实施例描述了包含与具有SI亚结构域的模块7-8的ErbB3受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-6连接的信号肽(M E W SW V F L F F L S V T T G V H S)，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.7

M E W S W V F L F F L S V TT G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K T I C A P Q C N G H C F G P N P N Q C C H D E C A G G C S G P Q D T D C F A C

R H F N D S G A C V P R C P Q P L V Y N K L T F Q L E P N P H T K Y Q Y G G V C V

A S C P H N F V V D Q T S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C

R K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F

R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例8

本实施例描述了包含与ErbB3受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-7和SI亚结构域的模块8连接的信号肽(M E W S W V F LF F L S V T T G V H S)，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.8

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K T I C A P Q C N G H C F G P N P N Q C C H D E C A G G C S G P Q D T D C F A C

R H F N D S G A C V P R C P Q P L V Y N K L T F Q L E P N P H T K Y Q Y G G V C V

A S C P H N F V V D Q T S C V R A C P P D K M E V D K N G L K M C E P C E G P C R

K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R

G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A

F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I

I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q

V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P

K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例9

本实施例公开了包含与ErbB3受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块2-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.9

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S S E V G N S Q A V C P G T L N G L S V T G D

A E N Q Y Q T L Y K L Y E R C E V V M G N L E I V L T G H N A D L S F L Q W I R E

V T G Y V L V A M N E F S T L P L P N L R V V R G T Q V Y D G K F A I F V M L N Y

N T N S S H A L R Q L R L T Q L T E I L S G G V Y I E K N D K L C H M D T I D W R

D I V R D R D A E I V V K D N G R S C P P C H E V C K G R C W G P G S E D C Q T L

T K I I C A Q Q C S G R C R G K S P S D C C H N Q C A A G C T G P R E S D C L V C

R K F R D E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V

K K C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P

C R K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A

F R G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H

A F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V

I I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G

Q V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P

P K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例10

本实施例公开了包含与ErbB4受体的LI亚结构域连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.10

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C D P S C P N G S C W G A G E E N C Q K L T K I I

C A Q Q C S G R C R G K S P S D C C H N Q C A A G C T G P R E S D C L V C R K F R

D E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K C P

R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R K V

C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D

S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N

L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G

N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C

H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K P

K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A

K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G

L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V

K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T

V D K S R W O O G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例11

本实施例公开了包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.11

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T F Q L E H N F N A K Y T Y G A F C V K K C

P H N F V V D S S S C V R A C P S S K M E V E E N G I K M C K P C T D I C P K V C

N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D S

F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N L

E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G N

K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C H

A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K P K

D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A K

T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G L P

A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G

F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T V D

K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例12

本实施例是指包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-2连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块3-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.12

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H N Q C A A G C T G P R E S D C L V C R K F R

D E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K C P

R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R K V

C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D

S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N

L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G

N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C

H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K P

K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A

K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G

L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V

K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T

V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例13

本实施例是指包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-3连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块4-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.13

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F V C R K F R

D E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K C P

R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R K V

C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D

S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N

L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G

N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C

H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K P

K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A

K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G

L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V

K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T

V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例14

本实施例公开了包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-4连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块5-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.14

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K

C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R

K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R

G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A

F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I

I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q

V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P

K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例15

本实施例公开了包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-5连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块6-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.15

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T F Q L E H N F N A K Y T Y G A F C V K K C

P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R K

V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G

D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E

N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S

G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V

C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K

P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N

A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K

G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L

V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K

L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例16

本实施例是指包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-6连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块7-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.16

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T F Q L E H N F N A K Y T Y G A F C V K K C

P H N F V V D S S S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R K V

C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D

S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N

L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G

N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C

H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K P

K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A

K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G

L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V

K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T

V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例17

本实施例是指包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-7连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.17

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T F Q L E H N F N A K Y T Y G A F C V K K C

P H N F V V D S S S C V R A C P S S K M E V E E N G I K M C K P C E G P C R K V C

N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D S

F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N L

E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G N

K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C H

A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K P K

D T L M I S R T P E VT C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A K

T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G L P

A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G

F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T V D

K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例18

本实施例公开了包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和SI亚结构域的模块2-8，与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.18

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T K I I C

A Q Q C S G R C R G K S P S D C C H N Q C A A G C T G P R E S D C L V C R K F R D

E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K C P R

N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R K V C

N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D S

F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N L

E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G N

K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C H

A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P K P K

D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A K

T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G L P

A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G

F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T V D

K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

实施例19

本实施例公开了包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-5连接(通过图3比对中的ErbB4受体的氨基酸残基245)的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和ErbB1受体的SI亚结构域的模块5-8(开始于图3比对中的ErbB1受体的氨基酸残基249)，在SII亚结构域中氨基酸501之后与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。氨基酸245基于ErbB4受体的编号而氨基酸249和501基于ErbB1受体的编号。所述嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.19

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K

C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R

K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R

G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A

F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I

I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q

V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E C P P C P A P P V A G P S V F L F P P

K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例20

本实施例公开了包含与ErbB4受体的LI亚结构域以及SI亚结构域的模块1-5连接(通过图3的比对中的ErbB4受体的氨基酸残基245)的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T G V H S)和ErbB1受体的SI亚结构域的模块5-8(开始于图3比对中的ErbB1受体的氨基酸残基249)，在SII亚结构域中氨基酸501之后与IgG2Fc融合的ErbB1受体的LII亚结构域以及SII亚结构域的模块1的嵌合体。氨基酸245基于ErbB4受体的编号而氨基酸249和501基于ErbB1受体的编号。此外，这一序列包含IgG2Fc的铰链区中的2个半胱氨酸(Cys)对丝氨酸(Ser)的取代。这些取代是C226S和C229S，基于IgG2Fc蛋白质的编号并且对其加下划线。所述嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.20

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K

C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R

K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R

G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A

F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I

I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q

V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E S P P S P A P P V A G P S V F L F P P

K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例21

这一实施例证明可从两种不同的ErbB受体的选择性组合产生具有对两种受体的配体的基本结合亲和力的ErbB嵌合体。检测了四种构建体与HRG1β和TGFα的结合，四种构建体包括为了这一实施例的目的而指定为E1/E4-Fc的来自实施例19的构建体(Seq ID No.19)和为指定的E1/E4-MFc的来自实施例20的构建体(Seq ID No.20)。对照包括与IgG2Fc部分连接的ErbB1的氨基酸1-501，指定的E1和与IgG2Fc部分连接的ErbB4的氨基酸1-497，指定的E4。在一些研究中，使用另一种E1对照。

通过从所期望的氨基酸序列开始并为了哺乳动物系统表达而优化DNA序列来合成捕获DNA分子。将捕获DNA序列克隆至合适的哺乳动物表达载体(pCpGfree-vitroHmcs)，其可使用潮霉素来选择并且包含用于捕获物表达的MAR/SAR序列(绝缘子和边界区)以及启动子和增强子。将包含捕获物序列的载体通过标准转染方法转染至CHO细胞并且对细胞进行载体与潮霉素整合的选择。通过收集细胞培养基并且通过标准方法(蛋白质A柱结合)纯化将捕获物从稳定转染细胞系纯化。将捕获物通过标准方法从蛋白质A洗脱并且使用常规来源的IgG-Fc三明治ELISA测定来定量。

使用蛋白质A使捕获物纯化并且在非还原(NR)和还原(R)条件下在聚丙烯酰胺凝胶上电泳。二硫键连接的二聚体运行在大约220-240kDa，而还原的单体运行在120-130kDa。具有阻止二硫化物形成的突变的半胱氨酸的嵌合捕获物单体在非还原和还原两种条件下运行在约120-130kDa。当在非还原条件下运行时，E1-Fc、E4-Fc、E1/E4-Fc似乎在220-240kDa范围内，而在还原条件下运行时在约120-130的范围内。在非还原和还原两种条件下，E1/E4-Fc构建体似乎都具有约120-130的分子量。

将纯化的捕获物分子涂布在96孔板上并且与TGFα或HRG1β一起孵育。之后用抗TGFα或HRG1β的检测抗体测量结合的配体的亲和力(Kd)和量(Bmax)。

将捕获物涂布在96孔板上并且与不同浓度的TGFα或HRG1β一起孵育。用抗TGFα或HRG1β的检测抗体测量结合的配体的亲和力(Kd)和量(Bmax)。在这些研究中获得的数据提供于以下表1-4中。

如表1和2中所展示的，嵌合单体(E1/E4-Fc)以约400-620nM范围内的亲和力结合TGFα并且ErbB1-IgGFc(E1-Fc)以约27-40nM范围内的亲和力(Kd)结合。

表1

TGFα结合研究

表2

TGFα结合研究

如表3和4中所示，嵌合单体(E1/E4-Fc)以约15-30nM范围内的亲和力结合HRG1β，其基本上与ErbB4-IgGFc(E4-Fc)相同。

表3

HRG1β结合研究

表4

HRG1β结合研究

E1/E4-MFc 50％数据点显示当把纯化的嵌合受体的量的一半加至孔时，结合降低一半并且因此结合与所加的受体的量成比例。

这一实施例证明可产生并纯化具有对其两种受体亚组分的配体的基本的亲和力的ErbB嵌合体。这一实施例还显示可将突变引入嵌合受体结合分子来改变二硫键以阻止通过二硫键的形成而形成二聚体。

实施例22

本实施例公开了包含与ErbB4受体的氨基酸1-245和ErbB1受体的氨基酸249至501连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T GV H S)的嵌合体。融合物还包括如上述序列中的IgG2-Fc。还并入这一序列中的是位置13处谷氨酰胺对丝氨酸的取代和实施例20中防止分子的基于二硫化物的二聚化的两个半胱氨酸向丝氨酸的改变。位置13的谷氨酰胺(下面加下划线的)存在于ErbB1序列中的这一位置并且被并入序列中以增加嵌合体对TGFα的亲和力。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.21

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S Q L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K

C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R

K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R

G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A

F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I

I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q

V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E S P P S P A P P V A G P S V F L F P P

K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例23

本实施例公开了包含与ErbB4受体的氨基酸1-245和ErbB1受体的氨基酸249至501连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T GV H S)的嵌合体。融合物还包括如上述序列中的IgG2-Fc。还并入这一序列中的是位置42处酪氨酸对丝氨酸的取代和实施例20中防止分子的基于二硫化物的二聚化的两个半胱氨酸向丝氨酸的改变。位置42的酪氨酸(下面加下划线的)存在于ErbB1序列中的这一位置并且被并入序列中以增加嵌合体对TGFα的亲和力。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.22

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T Y I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K

C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R

K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R

G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A

F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I

I S G N K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q

V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E S P P S P A P P V A G P S V F L F P P

K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例24

本实施例公开了包含与ErbB4受体的氨基酸1-245和ErbB1受体的氨基酸249至501连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T GV H S)的嵌合体。融合物还包括如上述序列中的IgG2-Fc。还并入这一序列中的是位置123处(加下划线的)精氨酸对酪氨酸的取代和实施例20中防止分子的基于二硫化物的二聚化的两个半胱氨酸向丝氨酸的改变。位置123的精氨酸存在于ErbB1序列中的这一位置并且被并入序列中以增加嵌合体对TGFα的亲和力。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.ID.NO.23

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V R V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T R T V

C A E Q C D G R C Y G P Y V S D C C H R E C A G G C S G P K D T D C F A C M N F

N D S G A C V T Q C P Q T F V Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K

C P R N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R

K V C N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R

G D S F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A

F E N L E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I

I S G N K NL C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q

V C H A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E S P P S P A P P V A G P S V F L F P P

K P K D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H

N A K T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N

K G L P A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C

L V K G F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S

K L T V D K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K

终止

实施例25

本实施例公开了包含与ErbB4受体的氨基酸1-183和ErbB1受体的氨基酸187至501连接的信号肽(M E W S W V F L F F L S V T T GV H S)的嵌合体。所述序列基本上与实施例18中的序列相同，除了其在IgG2-Fc区中包含两个半胱氨酸向丝氨酸的改变以防止二聚化(如实施例20中)。这一融合物包含更多的ErbB1序列以便增加嵌合体对TGFα的亲和力。所述ErbB嵌合体具有下列氨基酸序列：

SEQ.10.NO.24

M E W S W V F L F F L S V T T G V H S Q S V C A G T E N K L S S L S D L E Q Q Y R

A L R K Y Y E N C E V V M G N L E I T S I E H N R D L S F L R S V R E V T G Y V L

V A L N Q F R Y L P L E N L R I I R G T K L Y E D R Y A L A I F L N Y R K D G N F G

L Q E L G L K N L T E I L N G G V Y V D Q N K F L C Y A D T I H W Q D I V R N P W

P S N L T L V S T N G S S G C G R C H K S C T G R C W G P T E N H C Q T L T K I I C

A Q Q C S G R C R G K S P S D C C H N Q C A A G C T G P R E S D C L V C R K F R D

E A T C K D T C P P L M L Y N P T T Y Q M D V N P E G K Y S F G A T C V K K C P R

N Y V V T D H G S C V R A C G A D S Y E M E E D G V R K C K K C E G P C R K V C

N G I G I G E F K D S L S I N A T N I K H F K N C T S I S G D L H I L P V A F R G D S

F T H T P P L D P Q E L D I L K T V K E I T G F L L I Q A W P E N R T D L H A F E N L

E I I R G R T K Q H G Q F S L A V V S L N I T S L G L R S L K E I S D G D V I I S G N

K N L C Y A N T I N W K K L F G T S G Q K T K I I S N R G E N S C K A T G Q V C H

A L C S P E G C W G P E P R D C V S V E S P P S P A P P V A G P S V F L F P P K P K

D T L M I S R T P E V T C V V V D V S H E D P E V Q F N W Y V D G M E V H N A K

T K P R E E Q F N S T F R V V S V L T V V H Q D W L N G K E Y K C K V S N K G L P

A P I E K T I S K T K G Q P R E P Q V Y T L P P S R E E M T K N Q V S L T C L V K G

F Y P S D I A V E W E S N G Q P E N N Y K T T P P M L D S D G S F F L Y S K L T V D

K S R W Q Q G N V F S C S V M H E A L H N H Y T Q K S L S L S P G K终止

Claims (20)

1.一种具有对比天然ErbB1、ErbB3或ErbB4中任一种更多的ErbB配体的可检测的结合活性的嵌合ErbB配体结合分子。

2.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其包含选自由SEQ ID NO：1-24组成的氨基酸序列的组的氨基酸序列。

3.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有与来自ErbB1的亚结构域LII的至少一部分连接的来自ErbB4的亚结构域LI的至少一部分。

4.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有与SI区连接的来自ErbB4的亚单位LI的至少一部分，所述SI区具有来源于ErbB4的一部分和来源于ErbB1的一部分，与来源于ErbB1的LII的至少一部分连接。

5.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有与来自ErbB1的亚结构域LII的至少一部分连接的来自ErbB4的亚结构域LI的至少一部分，其中所述ErbB嵌合体与IgG2Fc融合。

6.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有与SI区连接的来自ErbB4的亚结构域LI，所述SI区具有来源于ErbB4的一部分和来源于ErbB1的一部分，其中所述ErbB4部分在所述ErbB4部分和所述ErbB1部分这两个序列之间具有同源性的区中转换至所述ErbB1部分，所述SI区与来源于所述ErbB1的LII的至少一部分连接。

7.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有与来自ErbB1的LII的至少一部分连接的来自ErbB3的亚结构域LI。

8.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有来自ErbB3的亚结构域LI、其中一部分来源于ErbB3而一部分来源于ErbB1的SI区和来源于ErbB1的LII的至少一部分。

9.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有与来自ErbB1的LII的至少一部分连接的来自ErbB3的亚结构域LI，其中所述ErbB嵌合体与IgG2Fc融合。

10.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其具有来自ErbB3的亚结构域LI；具有来源于ErbB3的一部分和来源于ErbB1的一部分的SI区，其中ErbB3部分在ErbB3部分和ErbB1部分这两个序列之间具有同源性的区中转换至ErbB1部分；和来源于ErbB1的LII的至少一部分。

11.权利要求1所述的嵌合ErbB配体结合分子，其中所述分子是至少部分二聚化的。

12.一种编码嵌合ErbB配体结合分子的DNA序列，所述嵌合ErbB配体结合分子具有对比天然ErbB1、ErbB3或ErbB4中任一种更多的ErbB配体的可检测的结合活性。

13.权利要求12所述的DNA序列，其还包括用于在宿主中表达嵌合ErbB配体结合分子的另外的DNA序列。

14.权利要求12所述的DNA序列，其中所述DNA序列在活的宿主细胞中。

15.一种药物组合物，其包含具有对比天然ErbB1、ErbB3或ErbB4中任一种更多的ErbB配体的可检测的结合活性的嵌合ErbB配体结合分子和药学上可接受的赋形剂。

16.权利要求15所述的药物组合物，其包含与来源于ErbB1的LII的至少一部分连接的来自ErbB4的亚单位LI的至少一部分和药学上可接受的赋形剂。

17.权利要求15所述的药物组合物，其包含与来源于ErbB1的LII的至少一部分连接的来自ErbB3的亚单位LI的至少一部分和药学上可接受的赋形剂。

18.一种用于结合ErbB配体的组合物，其包含固定在固体支持物上的具有对比天然ErbB1、ErbB3或ErbB4中任一种更多的ErbB配体的可检测的结合活性的嵌合ErbB配体结合分子。

19.一种用于治疗患有对一种或多种ErbB配体敏感的癌症的患者的方法，包括施用权利要求15所述的药物组合物。

20.一种用于治疗患有对一种或多种ErbB配体敏感的癌症的患者的方法，包括将具有对比天然ErbB1、ErbB3或ErbB4中任一种更多的ErbB配体的可检测的结合活性的嵌合ErbB配体结合分子固定在固体支持物上并且使来自患有对一种或多种ErbB配体敏感的癌症的患者的生物液体通过所述固体支持物以除去ErbB配体的至少一部分。

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