CN102466809A - 肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，包括以下步骤：将1.0～3.0×10⁶HCT116细胞接种至培养瓶中，进行培养。细胞贴壁后移除原有培养基，先后加入完全培养基和放射性培养基，并进行密封。加入氢氧化海胺于闪烁瓶，并用翻口乳胶塞及封口膜将闪烁瓶瓶口密封。通过真空采血针组件分别连接培养瓶及闪烁瓶，放入培养箱中培养。结束时，用医用注射器向培养瓶中一次性注入4～10M的H₂SO₄，终止细胞代谢反应，将备用细胞计数。注射完毕后，令注射器活塞退至平衡位置，将整个装置在30～40℃下恒温静置12～24小时。最后向闪烁瓶内注入闪烁液，并将闪烁瓶内的液体混匀至澄清，避光后放入计数仪内，测定¹⁴CO₂的每分放射性计数。本发明的实施步骤相对简单，便于操作。

Description

肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法

技术领域

本发明涉及一种气体的收集方法，尤其涉及一种肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法。 

背景技术

现有的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法是在一个密闭的环境中收集细胞代谢产生的放射性二氧化碳。 

底部液体为细胞培养液，细胞在瓶底贴壁生长。瓶底中间的柱子，为一支持物，作用是支撑上面的圆柱形的管子，管子内加上二氧化碳的收集液体氢氧化季胺，瓶子的侧臂内加入H₂SO₄。整个体系用橡胶盖密封。 

具体来说其过程如下： 

1、预先在培养瓶侧壁中加入0.3ml 6N H₂SO₄，用橡胶盖密封整个体系； 

2、用医用注射器通过橡胶盖，向瓶底加入细胞和细胞培养液5ml，进行培养，其中，细胞培养液中含有放射性的葡萄糖，可以使细胞通过有氧化而生成放射性的二氧化碳； 

3、培养一段时间后，终止反应。通过注射，向圆柱形管子内加入氢氧化季胺0.5ml，同时将侧臂内的硫酸倒入细胞培养的部位，使硫酸杀死细胞，并充分释放出放射性的二氧化碳； 

4、将整个体系放置在震荡器上，在37℃的条件下震荡3小时； 

5、将收集有放射性二氧化碳的氢氧化季胺抽出来，加入闪烁瓶中，与闪烁液混匀，测量放射性二氧化碳的放射性计数。 

但是这样采用的仪器体积大，计数也不精确，无法适应不同的精确测 量需求。 

发明内容

本发明的目的就是为了解决现有技术中存在的上述问题，提供一种肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法。 

本发明的目的通过以下技术方案来实现： 

肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其包括以下步骤：步骤①，将1.0～3.0×10⁶HCT116细胞接种至培养瓶中，培养至细胞贴壁。步骤②，移除原有培养基，加入2～3ml的完全培养基和100μL的放射性培养基，并对培养瓶进行密封；所述的放射性培养基中含有¹⁴C-葡萄糖。步骤③，加入2～3ml氢氧化海胺于闪烁瓶，将闪烁瓶瓶口密封。步骤④，通过真空采血针组件分别连接培养瓶及闪烁瓶，放入37℃培养箱中培养15分钟至3小时。步骤⑤，培养结束时，用医用注射器向培养瓶中一次性注入H₂SO₄，终止细胞代谢反应，将备用细胞计数。步骤⑥，注射完毕后，令注射器活塞退至平衡位置，将整个装置在30～40℃下恒温静置12～24小时。步骤⑦，向闪烁瓶内注入5～10mL闪烁液，并将闪烁瓶内的液体混匀至澄清，避光若干小时后，放入计数仪内，测量每分¹⁴C放射性计数，测定¹⁴CO₂的含量。 

上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤②所述的¹⁴C-葡萄糖的添加量为0.1～2μCi。 

进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤②所述的完全培养基添加量为2ml。 

更进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤②与步骤③所述的密封分别为用翻口乳胶塞和封口膜密封培养瓶瓶口；用翻口乳胶塞和封口膜密封闪烁瓶瓶口。 

更进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：步骤④所述的真空采血针组件是两端带有针尖的联通导管，其两端的针尖分 别连接培养瓶及闪烁瓶。 

再进一步地，上述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其中：所述的计数仪为Quantulus 1220低本底液体闪烁计数仪。 

本发明技术方案的优点主要体现在：本发明在实施过程中所采用到的设备体积小，有利于实施中的搬运、灭菌。并且，本发明的实施步骤相对简单，便于操作，值得推广。 

本发明的目的、优点和特点，将通过下面优选实施例的非限制性说明进行解释。这些实施例仅是应用本发明技术方案的典型范例，凡采取等同替换或者等效变换而形成的技术方案，均落在本发明要求保护的范围之内。 

具体实施方式

肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其与众不同之处在于：首先将1.0～3.0×10⁶HCT116细胞接种至培养瓶中并培养培养48小时至细胞贴壁至贴壁。具体来说，常规使用的培养瓶有25mL、50mL、75mL等规格，本发明需要的培养瓶是尽可能小的，因为这样可以在同样条件下减少放射性葡萄糖的加入量，也就是在同样的放射性葡萄糖的加入量下得到更高的放射性葡萄糖的作用浓度，所以实际选用的培养瓶的体积为25mL的，1.0～3.0×10⁶HCT116细胞正好适合于种植在25mL培养瓶的底面，并贴壁后进行实验。 

并且，HCT116是结肠癌细胞株中的一种，本实验方法适合培养各种贴壁的肿瘤细胞，如：MCF-7(人乳腺癌细胞株)、MDA-MB-231(人乳腺癌细胞株)、U87(人胶质瘤细胞株)、U251(人胶质瘤细胞株)、PANC-1(人胰腺癌细胞株)、SW-1990(人胰腺癌细胞株)、Hela(人宫颈癌细胞株)等等，具体的接种数目可以视细胞种类和培养瓶的体积而定。 

接着，移除原有培养基，加入2～3ml的完全培养基和100μL的放射性培养基，并用翻口乳胶塞及封口膜进行密封。并且，采用的放射性培养基 中含有0.1～2μCi的¹⁴C-葡萄糖。加入2～3ml氢氧化海胺于闪烁瓶，在此使用的吸收液的体积视根据25mL培养瓶中的细胞所产生的二氧化碳的量来定的，采用2～3mL可以保证将产生的二氧化碳全部吸收。同时，用翻口乳胶塞及封口膜将闪烁瓶瓶口密封。 

之后，通过真空采血针组件分别连接培养瓶及闪烁瓶，放入37℃培养箱中培养15分钟至3小时。具体来说，这个培养时间就是放射性葡萄糖被细胞代谢的时间，可以根据不同的实验需要更改，但本发明的优势在于测定短时间内的细胞代谢程度。因此，本发明采取的测定时间为1小时，如果要缩短的话，15分钟亦可。并且，对于一些特殊数据的采集，可以延长到2至3小时。 

当培养结束时，用医用注射器向培养瓶中一次性注入H₂8O₄，终止细胞代谢反应，将备用细胞计数。具体来说，此步骤中的体积数和酸的种类和浓度，选择的原则如下：酸的体积不易过大，因为整个装置是密闭的，所以额外的从体系外加入液体将会改变整个体系的压强，当体系压强过大时，将有可能造成密闭性的破坏，甚至出现少量液体被压强排除瓶外的情况。所以，我们需要选用强酸，并且是浓酸。而我们可以选择的有容易得到的强酸有：硫酸、盐酸和硝酸。并且，采用的量以8mL为最大值。 

随即，当注射完毕后，令注射器活塞退至平衡位置，将整个装置在30～40℃下恒温静置12～24小时。最后，向闪烁瓶内注入5～10mL闪烁液，并将闪烁瓶内的液体混匀至澄清，避光若干小时后，放入计数仪内，测量每分 ¹⁴C放射性计数，测定¹⁴CO₂的含量即可。 

就本发明一较佳的实施方式来看，完全培养基添加量为2ml。使用到的真空采血针组件是两端带有针尖的联通导管，其两端的针尖分别连接培养瓶及闪烁瓶。再者，考虑到计数的准确性，采用的计数仪为Quantulus 1220低本底液体闪烁计数仪。 

通过上述的文字表述可以看出，采用本发明后，实施过程中所采用到的设备体积小，有利于实施中的搬运、灭菌。并且，本发明的实施步骤相对简单，便于操作，值得推广。 

Claims (6)

1.肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其特征在于包括以下步骤：

步骤①，将1.0～3.0×10⁶HCT116细胞接种至培养瓶中，培养至细胞贴壁；

步骤②，移除原有培养基，加入2～3ml的完全培养基和100μL的放射性培养基，并对培养瓶进行密封；所述的放射性培养基中含有¹⁴C-葡萄糖；

步骤③，加入2～3ml氢氧化海胺于闪烁瓶，将闪烁瓶瓶口密封；

步骤④，通过真空采血针组件分别连接培养瓶及闪烁瓶，放入37℃培养箱中培养15分钟至3小时；

步骤⑤，培养结束时，用医用注射器向培养瓶中一次性注入H₂SO₄，终止细胞代谢反应，将备用细胞计数；

步骤⑥，注射完毕后，令注射器活塞退至平衡位置，将整个装置在30～40℃下恒温静置12～24小时；

步骤⑦，向闪烁瓶内注入5～10mL闪烁液，并将闪烁瓶内的液体混匀至澄清，避光若干小时后，放入计数仪内，测量每分¹⁴C放射性计数，测定¹⁴CO₂的含量。

2.根据权利要求1所述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其特征在于：步骤②所述的¹⁴C-葡萄糖的添加量为0.1～2μCi。

3.根据权利要求1所述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其特征在于：步骤②所述的完全培养基添加量为2ml。

4.根据权利要求1所述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其特征在于：步骤②与步骤③所述的密封分别为用翻口乳胶塞和封口膜密封培养瓶瓶口；用翻口乳胶塞和封口膜密封闪烁瓶瓶口。

5.根据权利要求1所述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其特征在于：步骤④所述的真空采血针组件是两端带有针尖的联通导管，其两端的针尖分别连接培养瓶及闪烁瓶。

6.根据权利要求1所述的肿瘤细胞代谢放射性气体的收集方法，其特征在于：所述的计数仪为Quantulus 1220低本底液体闪烁计数仪。