CN102465159A - 微生物法制备艾利西平的一种合成工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及杂环化学和微生物技术领域，具体为微生物法制备艾利西平的一种合成工艺。鉴于现有技术中所有反应试剂毒害大，反应步骤多，拆分困难，原料转化率低等缺点，本发明提供了一种新的制备醋酸艾司利卡西平的合成方法，以奥卡西平为底物，以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.2230发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂，进行生物转化反应即得到艾利西平。
Description
技术领域
本发明涉及杂环化学和微生物技术领域，尤其涉及一种手性化合物的制备和微生物的用途技术领域。
背景技术
醋酸艾司利卡西平(Eslicarbazepine acetate，ESL，S-(-)-10-acetoxy-10，11-dihydro-5H-dibenz/b，f/azepine-5-carboxamide)，代号为BIA 2-093，又称艾司利卡西平醋酸酯，醋酸艾司利卡西平分子式C17H16N2O3，分子量296.32，CAS号：236395-14-5，结构式如下：
醋酸艾司利卡西平
是一种新型抗癫痫药物，能选择性抑制导致癫痫发作的神经细胞快速放电，通过调节钠通道活动来产生治疗作用，安全性好，尤其是神经精神副作用低。不仅可以显著降低难控制性癫痫部分性发作患者的发作频率，还可以提高患者生活质量降低抑郁症状。
从报道的文献看，醋酸艾司利卡西平的合成方法为：均以奥卡西平为原料，经化学方法制得艾利西平，再酰化得到成品；因此，在药物的整个开发和制备过程中，艾利西平的合成尤为重要。
艾利西平，目前常见的制备方法有以下几种：
方法一：Portela(坡特拉)公司在专利CN02813993.3(专利名称：(S)-(+)-和(R)-(-)-10，11-二氢-10-羟基-5H-二苯并[b，f]氮杂卓-5-酰胺的制备方法，申请日期：2002年5月10日)中先将奥卡西平还原为利卡西平，然后再经手性拆分得到艾利西平，路线如下：
奥卡西平 利卡西平
10-O-二-O，O′-乙酰酒石酸半酯 艾利西平
它以奥卡西平为起始原料，在乙醇/水溶剂中与硼氢化钠发生氢化还原反应，得到利卡西平(即外消旋体)，然后使该外消旋体在吡啶和-二甲基氨基吡啶存在的条件下，与拆分试剂(2R，3R)-二-O，O’-乙酰基酒石酸酐反应，得到非对映异构体10-O-二-O，O’-乙酰酒石酸半酯，最后经碱性水解得到艾利西平。
该方法存在如下问题：
浪费反应原料，工艺成本高。因为奥卡西平本身就是极昂贵的物质，即使拆分程序效率很高(基于单个非对映异构体约98％收率)，那么要分离出艾利西平也意味着损失约50％的原料。
方法二：为了提高反应原料的利用率，Portela(坡特拉)公司研究开发了如下工艺，并在专CN200480019893.9(专利名称：(S)-(+)和(R)-(-)-10，11-二氢-10-羟基-5H-二苯并[b，f]氮杂卓-5-甲酰胺及其旋光富集混合物的外消旋化方法，申请日：2004年5月11)中描述：
即在反应完成生成艾利西平(即(S)-利卡西平)后，回收旋光富集的(R)-利卡西平，使其与氯化试剂进行氯化反应，得到氯化物(V)，进而水解得到利卡西平(即外消旋艾利西平)，进而将其重新收入的拆分循环中。
与方法一相比，该方法的使用提高了反应原料的利用率，但是该方法也存在一些不足，如反应转化率不高，反应步骤繁琐，大量非环境友好有机溶剂的使用，不易工业化应用等。
方法三：意大利Farchemia公司的专利WO2006056339(专利名称：(S)-(+)-10，11-二氢-10-羟基-5H-二苯并[b，f]氮杂卓-5-甲酰胺的制备方法，申请日：2005年11月15日)报道了以5-氰基-10-羟基-10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂卓(如下式(1)所示化合物)为原料，用邻苯二甲酸酐酯化，S-1-苯乙胺拆分得到S-5-氰基-10-羟基-10，11-二氢-5H-二苯并[b，f]氮杂卓(如下式(6)所示化合物)，水解得到艾利西平的方法，如下面反应式表示：
该工艺使用了相对便宜的拆分试剂(S)-1-苯基乙基胺。但该方法路线长，试剂多，整条路线反应后收率很低。
方法四：诺华公司在其专利CN200710112634.6(专利名称：制备10，11-二氢-10-羟基-5H-二苯并[b，f]氮杂卓-5-甲酰胺的对映选择性方法及其新晶形，申请日：2003年10月6日)中公开了一种手性合成艾利西平的方法，具体的地说是以奥卡西平为原料，经不对称催化氢化得到艾利西平：
奥卡西平 艾利西平
该路线也存在一些缺点，所用氢源为叔氨类化合物与甲酸的混合物，会使反应产生副产物，需经柱层析进行分离纯化，且所用到的手性催化剂成本很高，在此反应中手性催化剂与奥卡西平用量约为1∶100，催化剂用量较大，还需继续筛选催化剂。
方法五：Portela(坡特拉)公司的专利CN200680036421.3(专利名称：奥卡西平的不对称催化还原，申请日：2006年4月21日)报道了用不同于专利CN200710112634.6(即方法四)的手性催化剂和配体，以奥卡西平为原料一步反应得到艾利西平，转化率99％，ee％＝98％。同样地，缺点为：所用氢源为叔氨类化合物与甲酸的混合物，会使反应产生副产物，使分离纯化困难；所用反应溶剂为混合溶剂，从而降低了溶剂的回收利用率；反应温度很高，在大于100℃条件下才可进行反应，且催化剂用量较大，所以还需继续筛选催化剂。
鉴于艾利西平良好的药物前景，因此需要开发一种具有选择性好，催化剂用量低，反应转化率高，绿色环保，原子经济性高的催化剂来合成艾利西平。
发明内容
本发明的目的是克服上述现有技术中反应试剂毒害大，反应步骤多，拆分困难，原料转化率低等缺点，提供一种新的制备醋酸艾司利卡西平的合成方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种微生物转化法制备醋酸艾司利卡西平的方法，其特征在于所述方法是以奥卡西平为底物，以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.2230发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂，进行生物转化反应制得艾利西平，艾利西平经醋酸酯化获得醋酸艾司利卡西平。
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC No.2230，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，地址：北京市朝阳区大屯路中科院微生物研究所，100101，保藏日期2007年10月24日，保臧编号CGMCC No.2230，已于在先申请CN200710161147A中作为新菌株予以保护。
菌株来源：本发明中所述的微生物菌株酿酒酵母CGMCC No.2230是从杭州市西湖啤酒厂附近的土壤中筛选得到。将土壤中分离得到的菌株用于转化乙酰乙酸乙酯，得到酿酒酵母CGMCC No.2230具有良好的转化奥卡西平生产艾利西平的能力。
所述酿酒酵母CGMCC No.2230的菌落特征：在琼脂培养基上呈现出乳白色、有光泽、平坦、边缘整齐、湿润、表面光滑，质地均匀的菌落形态。
进一步，所述方法包括：在pH 5.0～8.0的磷酸盐缓冲液中，以奥卡西平为底物、以酿酒酵母CGMCC No.2230发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂，于25～45℃下进行转化反应8～40小时，反应结束后，转化液经分离纯化得到所述艾利西平。
所述奥卡西平在磷酸盐缓冲液中的初始浓度为0.05～0.5mol/L。
所述含酶菌体细胞用量以细胞干重计为1～50g/g底物。
为提高转化效率，所述磷酸盐缓冲液中还可添加50～150g/L的葡萄糖作为辅助底物，加入体积比为5％的乙醇作为助溶剂。
所述含酶菌体细胞由如下方法制备得到：将酿酒酵母CGMCC No.2230接种至发酵培养基中，培养温度为26～35℃，摇床转速为150～200r/min，培养18～30h得到含有含酶菌体细胞的发酵液；所述发酵培养基按如下组成配制：葡萄糖26～32g/L，酵母粉2～4g/L，硫酸铵3～6g/L，无水MgSO4 0.2～0.4g/L，K2HPO4·3H20 0.5～1.5g/L，KH2PO4 0.6～1.5g/L，自然pH值，溶剂为水。菌株需要先用斜面培养基进行活化培养获得斜面活化菌种，活化菌种再经种子培养获得种子液再接入发酵培养液进行发酵产酶培养。本发明中，该酿酒酵母菌株的斜面培养、种子培养及发酵培养均可按照本领域常规方法进行，亦可参照CN 200710161147 A中的培养方法。
所述分离纯化方法如下：反应结束后将转化液加入等体积正己烷连续萃取5次，正己烷层加入无水硫酸钠脱水，抽滤后，得到的正己烷溶液蒸馏除去正己烷即得所述艾利西平。
具体的，所述方法如下：
(1)斜面培养：将酿酒酵母CGMCC No.2230接种到斜面培养基，26～35℃培养4～6天得菌体斜面；所述的斜面培养基按如下组成配制：麦芽汁5～15g/L，酵母粉2～4g/L，蛋白胨4～6g/L，葡萄糖7～12g/L，琼脂15～25g/L，自然pH值，溶剂为水；121℃灭菌20min，灭菌后冷却制成斜面；
(2)种子培养：从斜面培养基取一环菌体转接到种子培养基，26～35℃，摇床转速为150～200r/min，培养18～26h得种子液；所述的种子培养基按如下组成配制：葡萄糖26～32g/L，酵母粉2～4g/L，硫酸铵3～6g/L，无水MgSO4 0.2～0.4g/L，K2HPO4·3H20 0.5～1.5g/L，KH2PO4 0.6～1.5g/L，自然pH值，溶剂为水；
(3)发酵培养：取种子液，以体积比10～20％的接种量接种于发酵培养基中，培养温度为26～35℃，摇床转速为150～200r/min，培养18～30h得到含有含酶菌体细胞的发酵液，离心分离得到所述含酶菌体细胞；所述发酵培养基按如下组成配制：葡萄糖26～32g/L，酵母粉2～4g/L，硫酸铵3～6g/L，无水MgSO4 0.2～0.4g/L，K2HPO4·3H20 0.5～1.5g/L，KH2PO4 0.6～1.5g/L，自然pH值，溶剂为水；
(4)生物转化：在pH 5.0～8.0的磷酸盐缓冲液中，加入0.05～0.5mol/L的奥卡西平和体积比为5％的乙醇，添加50～150g/L的葡萄糖作为辅助底物有利于提高底物的摩尔转化率，以及细胞干重质量为奥卡西平1～50倍的菌体细胞，于25～45℃下进行转化反应8～40小时；
(5)分离纯化：反应结束后将转化液加入等体积正己烷连续萃取5次，正己烷层加入无水硫酸钠脱水，抽滤后，得到的正己烷溶液蒸馏除去正己烷即得所述艾利西平。
(6)醋酸艾司利卡西平的制备：可采用WO2007012793中的合成方法，具体为将艾利西平与4-(N，N-二甲氨基)吡啶混合，溶解在二氯甲烷中，加入吡啶，将反应混合物加热回流，向其中滴入醋酸酐，继续反应，得到醋酸醋酸艾司利卡西平。
得到的艾利西平纯品可用液相色谱-质谱联用仪检测确定产物的纯度和分子量。
摩尔转化率和产物(S)-3-羟基丁酸乙酯对映体过剩值(ee％)采用安捷伦1200高效液相色谱分析检测。色谱柱为大赛璐手性OD-H(250×4.6mm，5μm)色谱柱，流动相为正己烷-异丙醇(80∶20)。手性柱可以检测到(R)-利卡西平和(S)-利卡西平两种对映体的含量，进一步计算出反应的摩尔转化率和艾利西平的对映体过剩值(ee％)。
本发明中采用微生物细胞不对称还原奥卡西平来制备艾利西平，可以获得高对映体过剩值的产品，添加5％的乙醇作为助溶剂，添加50～150g/L的葡萄糖作为辅助底物有利于提高底物的摩尔转化率。
本发明采用的微生物转化法制备艾利西平与化学合成法、酶催化法相比具有以下优点：①微生物菌体易于大规模培养，可以获得大量的生物催化剂，比化学催化剂成本低廉；②生产菌株安全，环境友好，反应条件温和；④易于实现大规模工业化生产；⑤操作简便，摩尔转化率较高；⑥反应过程中不需要添加价格昂贵的辅酶。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此。
实施例1：
斜面培养：将CGMCC No.2230菌种接种至斜面培养基，30℃培养4～6天。所述的斜面培养基按如下组成配制：麦芽汁10g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，自然pH值，溶剂为水；121℃灭菌20min，灭菌后冷却制成斜面。
种子培养和发酵：种子和发酵培养基均采用液体培养基，按如下组成配制：葡萄糖30g/L，酵母粉3g/L，硫酸铵5g/L，无水MgSO4 0.25g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，KH2PO4 1g/L，121℃灭菌20min。用NaOH或HCl溶液调整液体培养基的pH值为7.0。
用接种针从斜面培养基中取一接种环菌体接种在含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得种子液。将种子液以体积比10％的接种量接种于含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得发酵液，发酵液离心，得菌体。
在含有100ml pH7.0磷酸盐缓冲液的三角瓶中加入上述所得菌体5g(干重)，加入奥卡西平，使其浓度分别为0.05mol/L、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.5mol/L，添加5％的乙醇作为助溶剂，置于30℃，180r/min的摇床中反应32h。反应结束后，将转化液用等体积正己烷萃取5次，合并正己烷萃取溶液，减压蒸馏浓缩至萃取剂总量的五分之一，用高效液相色谱测定萃取液中底物的摩尔转化率和艾利西平的对映体过剩值。
表1：底物初始浓度对转化率及艾利西平对映体过剩值的影响
实施例2：
斜面培养：将CGMCC No.2230菌种接种至斜面培养基，30℃培养4～6天。所述的斜面培养基按如下组成配制：麦芽汁10g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，自然pH值，溶剂为水；121℃灭菌20min，灭菌后冷却制成斜面。
种子培养和发酵：种子和发酵培养基均采用液体培养基，按如下组成配制：葡萄糖30g/L，酵母粉3g/L，硫酸铵5g/L，无水MgSO4 0.25g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，KH2PO4 1g/L，121℃灭菌20min。用NaOH或HCl溶液调整液体培养基的pH值为7.0。
用接种针从斜面培养基中取一接种环菌体接种在含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得种子液。将种子液以10％的接种量接种于含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得发酵液，发酵液离心，得菌体。
在含有100ml pH7.0磷酸盐缓冲液的三角瓶中加入上述所得菌体5g(干重)，加入奥卡西平浓度为0.3mol/L，添加5％的乙醇作为助溶剂，加入辅助底物葡萄糖浓度分别为10g/L、30g/L、50g/L、70g/L、100g/L、150g/L，置于30℃，180r/min的摇床中反应32h。反应结束后，将转化液用等体积正己烷萃取5次，合并正己烷萃取溶液，减压蒸馏浓缩至萃取剂总量的五分之一，用高效液相色谱测定萃取液中底物的摩尔转化率和艾利西平的对映体过剩值。
表2：添加葡萄糖对转化率及艾利西平对映体过剩值的影响
实施例3：
斜面培养：将CGMCC No.2230菌种接种至斜面培养基，30℃培养4～6天。所述的斜面培养基按如下组成配制：麦芽汁10g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，自然pH值，溶剂为水；121℃灭菌20min，灭菌后冷却制成斜面。
种子培养和发酵：种子和发酵培养基均采用液体培养基，按如下组成配制：葡萄糖30g/L，酵母粉3g/L，硫酸铵5g/L，无水MgSO4 0.25g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，KH2PO4 1g/L，121℃灭菌20min。调整液体培养基的pH值为7.0。
用接种针从斜面培养基中取一接种环菌体接种在含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得种子液。将种子液以10％的接种量接种于含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得发酵液，发酵液离心，得菌体。
在含有100ml pH7.0磷酸盐缓冲液的三角瓶中加入上述所得菌体5g(干重)，加入奥卡西平浓度为0.3mol/L，添加5％的乙醇作为助溶剂，加入辅助底物葡萄糖70g/L，在180r/min的摇床中分别于25℃、30℃、35℃、40℃、45℃下反应32h。反应结束后，将转化液用等体积正己烷萃取5次，合并正己烷萃取溶液，减压蒸馏浓缩至萃取剂总量的五分之一，用高效液相色谱测定萃取液中底物的摩尔转化率和艾利西平的对映体过剩值。
表3：反应温度对转化率及艾利西平对映体过剩值的影响
实施例4：
斜面培养：将CGMCC No.2230菌种接种至斜面培养基，30℃培养4～6天。所述的斜面培养基按如下组成配制：麦芽汁10g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，自然pH值，溶剂为水；121℃灭菌20min，灭菌后冷却制成斜面。
种子培养和发酵：种子和发酵培养基均采用液体培养基，按如下组成配制：葡萄糖30g/L，酵母粉3g/L，硫酸铵5g/L，无水MgSO4 0.25g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，KH2PO4 1g/L，121℃灭菌20min。调整液体培养基的pH值为7.0。
用接种针从斜面培养基中取一接种环菌体接种在含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得种子液。将种子液以10％的接种量接种于含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得发酵液，发酵液离心，得菌体。
在含有100ml pH7.0磷酸盐缓冲液的三角瓶中加入上述所得菌体5g(干重)，加入奥卡西平浓度为0.3mol/L，添加5％的乙醇作为助溶剂，加入辅助底物葡萄糖浓度为70g/L，置于30℃，180r/min的摇床中分别反应8h、16h、24h、32h、40h。反应结束后，将转化液用等体积正己烷萃取5次，合并正己烷萃取溶液，减压蒸馏浓缩至萃取剂总量的五分之一，用高效液相色谱测定萃取液中底物的摩尔转化率和艾利西平的对映体过剩值。
表4：反应时间对转化率及艾利西平对映体过剩值的影响
实施例5：
斜面培养：将CGMCC No.2230菌种接种至斜面培养基，30℃培养4～6天。所述的斜面培养基按如下组成配制：麦芽汁10g/L，酵母粉3g/L，蛋白胨5g/L，葡萄糖10g/L，琼脂20g/L，自然pH值，溶剂为水；121℃灭菌20min，灭菌后冷却制成斜面。
种子培养和发酵：种子和发酵培养基均采用液体培养基，按如下组成配制：葡萄糖30g/L，酵母粉3g/L，硫酸铵5g/L，无水MgSO4 0.25g/L，K2HPO4·3H2O 1g/L，KH2PO4 1g/L，121℃灭菌20min。调整液体培养基的pH值为7.0。
用接种针从斜面培养基中取一环菌体接种在含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得种子液。将种子液以10％的接种量接种于含有100ml液体培养基的250ml三角瓶中，于30℃、180r/min的条件下培养24h获得发酵液，发酵液离心，得菌体。
在含有100ml pH7.0磷酸盐缓冲液的三角瓶中分别加入上述所得菌体分别为2g、5g、8g、11g、14g(干重)，加入奥卡西平0.3mol/L，添加5％的乙醇作为助溶剂，加入辅助底物葡萄糖浓度为70g/L，置于30℃，180r/min的摇床中反应32h。反应结束后，将转化液用等体积正己烷萃取5次，合并正己烷萃取溶液，减压蒸馏浓缩至萃取剂总量的五分之一，用高效液相色谱测定萃取液中底物的摩尔转化率和艾利西平的对映体过剩值。
表5：菌体量对转化率及艾利西平对映体过剩值的影响
采用微生物转化法利用微生物细胞中氧化还原酶对底物的立体专一性催化的特性，可以实现奥卡西平的不对称还原得到S构型的利卡西平，即艾利西平。同时，微生物细胞中含有供给还原反应的辅酶，利用微生物细胞中完整的辅酶再生体系，可以通过添加廉价的辅助底物(蔗糖或葡萄糖等)实现辅酶的原位再生，有利于底物奥卡西平实现完全转化，达到较高的底物转化效率。
综上所述，将艾利西平酯化后可以得到醋酸艾司利卡西平。采用微生物不对称还原奥卡西平可以制备艾利西平，艾利西平经乙酸酯化后生成醋酸艾司利卡西平。该途径是制备醋酸艾司利卡西平的绿色合成路线，是合成醋酸艾司利卡西平的有效方法。
需要说明的是在本发明中提及的所有文献在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，以上所述的是本发明的具体实施例及所运用的技术原理，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改而不背离本发明的精神与范围，这些等价形式同样落在本发明的范围内。
Claims (8)
1.一种艾利西平的制备方法，其特征在于，以奥卡西平为底物，以酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CGMCC No.2230发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂，进行生物转化反应制得艾利西平。
2.根据权利要求1所述的艾利西平的制备方法，其特征在于所述方法包括，在pH 5.0～8.0的磷酸盐缓冲液中，以乙酰乙酸乙酯和为奥卡西平底物、以酿酒酵母CGMCC No.2230发酵获得的含酶菌体细胞为生物催化剂，于25～45℃下进行转化反应8～40小时，得到所述艾利西平。
3.如权利要求1或2所述的艾利西平的制备方法，其特征在于所述奥卡西平在磷酸盐缓冲液中的初始浓度为0.05～0.5mol/L。
4.如权利要求2所述的艾利西平的制备方法，其特征在于所述含酶菌体细胞用量以细胞干重计为1～50g/g底物。
5.如权利要求2所述的艾利西平的制备方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液中添加5％的乙醇作为助溶剂。
6.如权利要求2所述的艾利西平的制备方法，其特征在于所述磷酸盐缓冲液中添加有50～150g/L的葡萄糖作为辅助底物。
7.如权利要求1，2或4所述的艾利西平的制备方法，其特征在于所述含酶菌体细胞由如下方法制备得到：将酿酒酵母CGMCC No.2230接种至发酵培养基中，培养温度为26～35℃，摇床转速为150～200r/min，培养18～30h得到含有含酶菌体细胞的发酵液；所述发酵培养基按如下组成配制：葡萄糖26～32g/L，酵母粉2～4g/L，硫酸铵3～6g/L，无水MgSO40.2～0.4g/L，K2HPO4·3H20 0.5～1.5g/L，KH2PO4 0.6～1.5g/L，自然pH值，溶剂为水。
8.如权利要求2所述的艾利西平的制备方法，其特征在于所述艾利西平的分离纯化方法如下：反应结束后将转化液加入等体积正己烷连续萃取5次，正己烷层加入无水硫酸钠脱水，抽滤后，得到的正己烷溶液蒸馏除去正己烷即得所述艾利西平。
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