CN102438629A - 神经酰胺产生促进剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供促进神经酰胺产生的医药品、化妆品等。本发明特别涉及以下述式(1)表示的化合物或其盐作为有效成分的神经酰胺产生促进剂。(式中，R¹表示膦酰基或氢原子；R²表示碳原子数为8～24的烷基或碳原子数为8～24的酰基；当R¹是膦酰基时R³表示碳原子数为1～24的烷基，当R¹是氢原子时R³表示膦酰基。)

Description

神经酰胺产生促进剂

技术领域

本发明涉及使神经酰胺增加的神经酰胺产生促进剂。

背景技术

作为鞘脂类的一种的神经酰胺是生物体整体中微量的脂质，但在皮肤最外侧层的角质中其占据脂质的一半以上，并且，神经酰胺在皮肤保湿结构、屏障结构中产生重要的作用。已知该神经酰胺在表皮细胞中产生并在角质细胞间分泌出后形成层状结构，从而可以发挥保湿功能。

然而，许多报道已指出，在皮肤干燥、皮肤粗糙、特应性皮炎、老年性皮肤干燥症、干癣等的皮肤疾病中，神经酰胺的正常代谢被妨碍，角质细胞间脂质中的神经酰胺的量减少，降低了皮肤的保湿机能和屏障机能。

对于这样的皮肤疾病，虽然尝试了从外部补充减少的神经酰胺的方法，但是该方法有不能长期地产生效果等的问题。

此外，近年来，有报道通过促进细胞内神经酰胺的产生，可诱导细胞凋亡、诱导分化、抑制增殖等现象的产生，并且作为控制细胞增殖、分化、凋亡等的细胞内信号分子受到注目。例如，已知：可通过从细胞外添加神经酰胺类似物的2-神经酰胺(D-赤-N-乙酰基神经鞘胺醇，D-erythro-N-acetylsphingosine)来诱导细胞凋亡、诱导分化、抑制增殖等的现象；或者通过用细菌的鞘磷脂酶来处理细胞，从而由鞘磷脂的分解来积累神经酰胺，并按照与加入C2-神经酰胺的情况同样的方式诱导细胞的增殖抑制、细胞凋亡。

因此认为：对于促进神经酰胺产生的物质可以期待具有诱导动物细胞的增殖抑制、诱导分化、细胞凋亡等效果，进而可以期待对于炎症性疾病、恶性肿瘤等由于细胞增殖或分化异常引起的疾病具有治疗效果(非专利文献1)。

此外，据报道：神经酰胺具有骨吸收抑制作用、骨强化作用、抑制牙槽骨减少作用，因此，神经酰胺对于骨质疏松、骨折、腰痛、风湿等的骨关节疾病的预防和改善是有用的(专利文献1)，并且对于牙周病的预防也有效果(专利文献2)。因此，也可以期待神经酰胺产生促进物质对于上述疾病的治疗效果。

此外，据报道神经酰胺具有赋予毛发弹性和韧性的作用以及改善毛发的触感的作用(专利文献3)，因此也可以期待神经酰胺产生促进物质具有上述效果。

另一方面，已知属于磷酸化甘油醚的1，3-二烷基甘油2-磷酸酯或其盐具有皮肤洗净效果(专利文献4)。然而，1，3-二烷基甘油2-磷酸酯或其盐具有促进神经酰胺产生的效果和保湿效果，并且这是至今不为人所知的。

此外，已知如1-烷基甘油-3-磷酸酯盐这样的磷酸化甘油醚的衍生物具有改善皮肤弹性的作用和使皮肤紧致的作用(专利文献5)，此外，据报道其还可以用作沐浴用制剂(专利文献6)等。然而，磷酸化甘油醚的衍生物具有促进神经酰胺产生的效果是至今不为人所知的。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特开2001-158736号公报

专利文献2：日本特开2001-158735号公报

专利文献3：日本特开平10-152421号

专利文献4：日本特开平7-268387号公报

专利文献5：日本特开2001-192315号

专利文献6：日本特开平11-139957号

非专利文献

非专利文献1：Molecular Cancer Therapeutics，5(2)，200-8(2006).

发明内容

1)本发明涉及以下述式(1)表示的化合物或其盐作为有效成分的神经酰胺产生促进剂。

(式中，R¹表示膦酰基或氢原子；R²表示碳原子数为8～24的烷基或碳原子数为8～24的酰基；当R¹是膦酰基时R³表示碳原子数为1～24的烷基，当R¹是氢原子时R³表示膦酰基。)

2)另外，本发明涉及一种保湿剂，其以上述式(1)表示的化合物或其盐作为有效成分。

(式中，R¹表示膦酰基，R²表示碳原子数为8～24的烷基，R³表示碳原子数为1～24的烷基。)

3)此外，本发明涉及用于制造上述1)中记载的神经酰胺产生促进剂的式(1)表示的化合物的用途。

4)此外，本发明涉及用于制造上述2)记载的保湿剂的式(1)表示的化合物的用途。

5)此外，本发明涉及一种促进神经酰胺产生的方法，其中，对于把皮肤保湿作为目的的人，给予用下述式(1)表示的化合物或其盐。

(式中，R¹表示膦酰基，R²表示碳原子数为8～24的烷基，R³表示碳原子数为1～24的烷基。)

附图说明

图1：表示涂布了配合1％化合物1的样品之后角质细胞层的水分量的图。

具体实施方式

本发明提供促进神经酰胺产生的医药品、化妆品等。

本发明者们对于安全性高的化合物进行了搜寻，并且意外地发现特定的磷脂衍生物具有促进神经酰胺产生的作用，可以用作神经酰胺产生促进剂。

本发明的神经酰胺产生促进剂能使神经酰胺增加，作为预防或改善炎症性疾病、骨关节疾病、牙周病等的医药品等是有用的，或者作为赋予毛发弹性和韧性并且改善毛发的触感的化妆品等也是有用的。

此外，本发明的神经酰胺产生促进剂使角质细胞间脂质中的神经酰胺增加，作为回复或维持皮肤的屏障机能以及保湿机能的化妆品、医药品等是有用的。

在式(1)中，对于R²而言，作为碳原子数为8～24的烷基，可以是直链或支链，优选碳原子数为10～22的烷基，更优选碳原子数为12～20的烷基。

作为上述碳原子数为8～24的烷基的具体例子，可以列举出辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基、2-庚基十一烷基、异硬脂基、12-甲基十七烷基、2-辛基十二烷基、3，7-二甲基辛基、3，7-二甲基辛-3-基、2-己基癸基、3，7，11-三甲基十二烷基、1，1，3，3-四甲基丁基、3，7，11，15-四甲基十六烷基、3，5，5-三甲基己基、2，3，4-三甲基戊-3-基、2，3，4，6，6-五甲基庚-3-基等。

此外，R¹是膦酰基的情况下，作为R²优选碳原子数为8～24的烷基。作为该碳原子数为8～24的烷基的优选的具体例子，所述碳原子数为8～24的烷基中，可以列举出正十四烷基、正十六烷基、正十八烷基、异硬脂基等，更优选正十四烷基。

另一方面，R¹为氢原子的情况下，在R²中，作为碳原子数为8～24的烷基的优选的具体例子，所述碳原子数为8～24的烷基中，可以列举出正十二烷基、正十四烷基、正十八烷基、异十八烷基、2-庚基十一烷基、异硬脂基、12-甲基十七烷基、2-辛基十二烷基等，更优选正十二烷基、正十四烷基、正十八烷基、2-庚基十一烷基、异硬脂基、12-甲基十七烷基、2-辛基十二烷基、十六烷基。

此外，在R²中，作为碳原子数为8～24的酰基，优选碳原子数为8～24的烷基羰基，更优选碳原子数为10～22的烷基羰基。作为优选的具体例子，可以列举出癸酰基、月桂酰基、十四烷酰基、十六烷酰基、硬脂酰基等，更优选十六烷酰基。

此外，作为R³，优选碳原子数为1～24的烷基，作为该碳原子数为1～24的烷基，可以是直链或支链，优选碳原子数为1～10的烷基，更优选碳原子数为1～6的烷基。

在R³中，作为碳原子数为1～24的烷基的具体例子，可以列举出甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基、二十二烷基、二十三烷基、二十四烷基、2-庚基十一烷基、异硬脂基、12-甲基十七烷基、2-辛基十二烷基、3，7-二甲基辛基、3，7-二甲基辛-3-基、2-己基癸基、3，7，11-三甲基十二烷基、1，1，3，3-四甲基丁基、3，7，11，15-四甲基十六烷基、3，5，5-三甲基己基、1-异丙基-1，2-二甲基丙基、1-异丙基-1，2，4，4-四甲基戊基等，优选甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基，更优选乙基。

此外，在本发明中，以式(1)表示的化合物的盐可以是药学上容许的盐，例如可以列举出锂盐、钠盐、钾盐等的碱金属盐，钙盐、镁盐等的碱土类金属盐，三甲基胺盐、三乙基胺盐等的烷基胺盐，季铵盐等的铵盐，三乙醇胺盐、二乙醇胺盐、单乙醇胺盐等的烷醇胺盐，赖氨酸盐、组氨酸盐、精氨酸盐等的碱性氨基酸盐等，优选钠盐、钾盐、精氨酸盐，更优选精氨酸盐。

如上所述，本发明化合物包含用下述式(1-a)和下述式(1-b)表示的化合物，但优选用式(1-a)表示的化合物。

(式中，R^2a表示碳原子数为8～24的烷基，R^3a表示碳原子数为1～24的烷基。)

(式中，R^2b表示碳原子数为8～24的烷基或碳原子数为8～24的酰基。)

在本发明中以式(1)表示的化合物或其盐可以用公知的方法(例如，日本特开2002-187817号公报)制造，可以使用提取于天然来源的物质。

例如，对1，3-二烷基甘油实施磷酸酯化，根据需要通过用适当的可以形成上述盐的碱进行中和而得到。

作为磷酸酯化试剂，例如可以使用三氯氧磷、三氯化磷、五氯化磷、聚磷酸、水和无水磷酸、磷酸和无水磷酸等(实验化学讲座1，有机化合物的合成Ⅰ，p206-210，化学同人社)。得到的化合物也可以用适当的公知方法进行分离精制。另外，1，3-二烷基甘油是公知的化合物，作为其原料的烷基缩水甘油醚可以用公知的方法制造(日本特开昭56-63974号公报)，例如，通过使烷基缩水甘油醚和醇在适当的酸或碱的存在下进行反应而得到。

如后述实施例所示，本发明的以式(1)表示的化合物或其盐在正常人类角质形成细胞中具有使神经酰胺的量增加的作用。神经酰胺在皮肤保湿结构、屏障结构中产生重要的作用(芋川玄爾：香妆会志，1(4)，250-253，1991)。在此，保湿机能是指，通过含有适度的水分使皮肤具有柔软性、使肌肤光滑美丽的机能。屏障机能是指，防止体内水分流失、使身体不干燥，并且防止外部的异物侵入体内的机能。

因此，本发明的以式(1)或(1-a)表示的化合物或其盐可以作为神经酰胺产生促进剂或保湿剂使用，还可以用来制造神经酰胺产生促进剂或保湿剂。该神经酰胺产生促进剂或保湿剂可以使角质细胞层中的神经酰胺增加，可以作为回复或维持皮肤屏障机能和保湿机能的医药品、医药部外品、化妆品等使用。此外，该神经酰胺产生促进剂或保湿剂以促进神经酰胺产生或保湿为理念，根据需要可以作为表示了其要点的医药部外品、化妆品使用。

本发明的神经酰胺产生促进剂使角质细胞层中的神经酰胺增加，作为回复或维持皮肤屏障机能以及保湿机能的化妆品、医药品等是有用的。

此外，具有神经酰胺产生促进作用的式(1)表示的化合物由于可以期待其抑制动物细胞增殖、诱导分化、诱导细胞凋亡等的效果，从而可以作为预防或治疗炎症性疾病、恶性肿瘤等由于细胞增殖或分化的异常而引起的疾病的医药品、医药部外品等使用(上述非专利文献1)，还可以作为预防或改善骨质疏松、骨折、腰痛、风湿等的骨关节疾病、预防或改善牙周病的医药品、医药部外品等使用(上述专利文献1和2)。此外，还可以作为赋予毛发弹性和韧性、改善毛发触感的医药部外品、化妆品等使用(上述专利文献3)。该神经酰胺产生促进剂以促进神经酰胺产生为理念，根据需要可以作为表示了其要点的医药部外品、化妆品使用。

将本发明神经酰胺产生促进剂和保湿剂作为医药品使用时的给药方式，例如可以是药片、胶囊、颗粒、散剂、糖浆等的口服制剂，或者是注射剂、软膏、乳霜等外用剂、栓剂、经皮吸收剂等的非口服制剂。在调制该医药制剂时，可以单独使用本发明的以式(1)表示的化合物或其盐，或者可以适当组合使用其它药学上容许的赋形剂、结合剂、增量剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂、分散剂、缓冲剂、防腐剂、调味剂、香料、成膜剂、载体、稀释剂等。

该制剂中本发明的以式(1)表示的化合物或其盐的含量优选为0.001～20质量％，更优选为0.01～5质量％。

此外，将本发明的神经酰胺产生促进剂和保湿剂作为医药品使用的情况下，每1个成人1天的给药量是，以本发明的以式(1)表示的化合物或其盐计算，例如可以是0.1～2000mg，优选为1～500mg。

此外，将本发明的神经酰胺产生促进剂和保湿剂作为医药部外品和化妆品使用的情况下，可以作为皮肤外用剂、洗净剂、化妆品，并且，根据使用方法不同，可以以美容液、化妆水、按摩剂、洗剂、乳液、凝胶、乳霜、软膏剂、粉末、面膜、颗粒、粉底、口红、沐浴剂、香波、护发素、生发剂、药片、胶囊、吸收性物品、片状制品等各种制剂形态提供。这样的各种剂型的医药部外品和化妆品可以由本发明的以式(1)表示的化合物或其盐单独调制，或者通过适当组合在医药部外品、皮肤化妆品以及洗净剂中配合的油性成分、保湿剂、粉体、色素、乳化剂、增溶剂、洗净剂、紫外线吸收剂、增粘剂、药效成分、香料、树脂、防菌防霉剂、植物提取物、醇类等来调制。另外，作为药效成分，可以列举出透明质酸钠等的其它保湿成分。

该医药部外品、化妆品中的本发明的以式(1)表示的化合物或其盐的含量优选为0.001～20质量％，更优选为0.1～5质量％。

实施例

制造例1：1-正十四烷基-3-乙基甘油-2-磷酸精氨酸盐(化合物1)的制造

在851.8g(18.5mol)乙醇中，在氮气气流下投入30g乙醇钠，升温至80℃后，滴加500g(1.85mol)十四烷基甘油醚。在该温度下搅拌18小时。其后，蒸馏除去乙醇，投入10.8g85％磷酸，水洗3次。水洗后，减压蒸馏，得到446g(收率76.2％)1-正十四烷基-3-乙基甘油。

在200ml甲苯中溶解232g(1.51mol)三氯氧磷，在氮气气氛下冷却至10℃以下之后，滴加400.0g(1.26mol)所得到的1-正十四烷基-3-乙基甘油和400ml甲苯的混合溶液，进一步，经30分钟滴加140.6g(1.39mol)三乙基胺和100ml甲苯的混合溶液。在相同温度下搅拌4小时后，慢慢投入800g水，在50℃下搅拌1小时。加入甲苯、异丙醇，分离水层后，洗净上层，蒸馏除去溶剂，得到511g无色透明油状物。将其中的200g溶解于乙醇-己烷混合溶剂中，加入86.5g(0.496mol)L-精氨酸，在60℃下搅拌至均匀后，冷却，投入至丙酮中，过滤析出的结晶后，减压干燥，得到266g(收率94％)1-正十四烷基-3-乙基甘油-2-磷酸精氨酸盐。

IR(cm^-1，ATR法)：3159，2922，2853，1632，1110，1053，919

¹H-NMR(D₂O，ppm)：0.67-1.73(m，32H)，3.03(t，J＝6Hz，2H)，3.28-3.59(m，11H)，4.11(m，1H)

制造例2：1-异硬脂基-3-丁基甘油-2-磷酸钠盐(化合物2)的制造

在10ml四氢呋喃中溶解2.10g(13.7mmol)三氯氧磷，在氮气气氛下冷却至10℃以下，滴加5.00g(12.5mmol)1-硬脂基-3-丁基甘油和10ml四氢呋喃的混合溶液，进一步，经30分钟滴加1.26g(12.5mmol)三乙基胺和10ml四氢呋喃的混合溶液。在相同温度下搅2小时后，投入1g水，在50℃下搅拌5小时。加入乙醚，分离水层后，洗净上层，蒸馏除去溶剂，得到6.18g无色透明油状物。向其中加入将1.05g碳酸氢钠溶解于50g水的溶液，在50℃下搅拌至均匀后，冷却，加入乙醚，分离水层后，减压干燥，得到3.49g(收率55.5％)1-异硬脂基-3-丁基甘油-2-磷酸钠盐。另外，1-异硬脂基-3-丁基甘油是使用1-异硬脂基甘油醚和丁醇按照与制造例1同样的方式合成的。

IR(cm^-1，ATR法)：2956，2923，2854，1653，1464，1377，1105，985

¹H-NMR(D₂O，ppm)：0.65-1.73(m，42H)，3.02(t，J＝6Hz，2H)，3.28-3.59(m，11H)，4.10(m，1H)

试验例1神经酰胺产生促进试验

<培养条件>

将正常人类表皮角质形成细胞(NHEK(F))播种至EpiLife-KG2(KURABO公司)6孔板，培养至融合性的状态。其后，换成EpiLife-KG2(没有增殖添加因子)，添加1％量的制造例中调制的化合物1(5mM)、化合物2(1mM)、参照溶液(10％乙醇)。培养3天后，按每一个孔回收各细胞。

<脂质提取>

从回收的细胞用Bligh and Dyer法提取脂质。将提取液氮挥发后，再溶解于氯仿、甲醇的溶液中，将其作为脂质样品。另外，蛋白质的量通过BCA法定量。

<神经酰胺量的解析>

提取的脂质中通过薄膜色谱分析法(TLC)用氯仿∶甲醇∶醋酸＝190∶9∶1水平展开2次。用喷雾器喷雾硫酸铜溶液后，用加热板烧结，检测神经酰胺。其后，用各蛋白量做除法，作为神经酰胺的量。结果在表1中表示。表中的数值表示将参照的神经酰胺量作为1时的相对值。

表1：

试验例2人类角质细胞层的水分量改善效果试验

1试验内容

1.1被试验者

男性10名(25～40岁：平均年龄30.5岁)

1.2样品

涂布样品使用含有1％化合物1的溶液与只有溶剂的对照溶液。溶剂使用95.0％乙醇∶1，3-BG∶精制水＝20∶10∶70。

样品涂布采取1天2次，一周涂布5天的方式。1次的涂布量是从眼药水瓶滴加2滴的分量(约100μl)。

1.3试验方法

试验方法是，在一侧颊部涂布配合1％化合物1的样品、另一侧颊部涂布对照溶液，4周后，用Corneo meter来进行角质细胞层的水分量的测定。涂布前以及涂布4周后测定颊部相同的区域，比较配合1％化合物1的样品的一侧和对照侧。

2结果

结果在图1中表示。

在配合1％化合物1的样品涂布组中，通过4周的涂布，角质细胞层的水分量较涂布对照溶液的一侧有上升(P＜0.1：t-test两侧)。

制造例3

(1)1-十二烷基甘油-3-磷酸二钠盐(化合物3)

在己烷中溶解0.5g(1.8mmol)十二烷基甘油醚，在50℃下加入0.85g(9mmol)105％聚磷酸，在70℃下搅拌12小时。其后，加入10g蒸馏水，再搅拌3小时，放冷后，加入乙醇，分离水层。浓缩有机层后，加入精制水、氢氧化钠，冷冻干燥后，得到0.66g的1-十二烷基甘油-3-磷酸二钠盐。

以下，通过与(1)同样的方法合成化合物4～9。

(2)1-十四烷基甘油-3-磷酸单精氨酸盐(化合物4)

(3)1-十八烷基甘油-3-磷酸二钠盐(化合物5)

(4)1-(2-庚基十一烷基)甘油-3-磷酸单精氨酸盐(化合物6)

(5)1-异硬脂基甘油-3-磷酸单精氨酸盐(化合物7)

(6)1-(12-甲基十七烷基)甘油-3-磷酸二钾盐(化合物8)

(7)1-(2-辛基十二烷基)甘油-3-磷酸单精氨酸盐(化合物9)

此外，购入以下所示化合物10和比较化合物1，供下述试验用。

(8)1-十六烷酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐(化合物10)

使用从ALEXIS公司购入的化合物

比较化合物1：单烷基(平均烷基链长C13)磷酸钾盐(花王株式会社)

试验例3：神经酰胺产生促进试验

<培养条件>

将正常人类表皮角质形成细胞(NHEK(F))播种至EpiLife-KG2(KURABO公司)6孔板，培养至融合性的状态。其后，换成EpiLife-KG2(没有增殖添加因子)，添加1％量的上述化合物3～10和比较化合物1的各溶液(化合物10为1mM，其余为5mM)、参照溶液(化合物5和比较化合物1为50％乙醇，化合物10为80％乙醇，其余为10％乙醇)。培养3天后，按每一个孔回收各细胞。

<脂质提取>

从回收的细胞用Bligh and Dyer法提取脂质。将提取液氮挥发后，再溶解于氯仿、甲醇，将得到的溶液作为脂质样品。另外，蛋白质量通过BCA法定量。

<神经酰胺量的解析>

提取的脂质中通过薄膜色谱分析法(TLC)用氯仿∶甲醇∶醋酸＝190∶9∶1水平展开2次。用喷雾器喷雾硫酸铜溶液后，用加热板烧结，检测神经酰胺。其后，用各蛋白量做除法，作为神经酰胺的量。结果在表2中表示。表中的数值表示将参照的神经酰胺量作为1时的相对值。

表2：

如表2所示，确认本发明化合物对于人类角质形成细胞有神经酰胺产生促进效果。

Claims (6)

1.一种神经酰胺产生促进剂，其以下述式(1)表示的化合物或其盐作为有效成分，

式中，R¹表示膦酰基或氢原子；R²表示碳原子数为8～24的烷基或碳原子数为8～24的酰基；当R¹是膦酰基时R³表示碳原子数为1～24的烷基，当R¹是氢原子时R³表示膦酰基。

2.如权利要求1所述的神经酰胺产生促进剂，其中，

R¹为膦酰基，R²为碳原子数为8～24的烷基，R³为碳原子数为1～6的烷基。

3.一种保湿剂，其以下述式(1)表示的化合物或其盐作为有效成分，

式中，R¹表示膦酰基，R²表示碳原子数为8～24的烷基，R³表示碳原子数为1～24的烷基。

4.式(1)表示的化合物在制造权利要求1或2所述的神经酰胺产生促进剂中的用途。

5.式(1)表示的化合物在制造权利要求3所述的保湿剂中的用途。

6.一种促进神经酰胺产生的方法，其中，

对于把皮肤保湿作为目的的人，给予用下述式(1)表示的化合物或其盐，

式中，R¹表示膦酰基，R²表示碳原子数为8～24的烷基，R³表示碳原子数为1～24的烷基。

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