CN102432622B

CN102432622B - 4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN102432622B
Application number: CN201110362604.7A
Authority: CN
Inventors: 胡昆; 吴�琳; 任杰; 陈新; 辛文群
Original assignee: Changzhou University
Current assignee: Changzhou University
Priority date: 2011-11-16
Filing date: 2011-11-16
Publication date: 2014-07-23
Anticipated expiration: 2031-11-16
Also published as: CN102432622A

Abstract

本发明公开了一种4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物及其制备方法和用途，所说4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物具有式(1)所示结构，其中：R₁表示氢或甲基；R₂表示氢、烷基、芳基、杂芳基、杂芳烷基。该衍生物是以鬼臼毒素为原料经叠氮化、还原、加成消去得到异硫氰酸酯表鬼臼毒素，再将异硫氰酸酯表鬼臼毒素中间体与酰肼化合物反应得到胺基硫脲衍生物，然后再经成环得到相应4-胺基噁二唑衍生物。本发明制备方法简单、易操作。初步体外筛选实验表明，这些衍生物对正常细胞毒性均显著降低，同时一些化合物具有较好的抗肿瘤活性，可期望制备高效低毒的抗肿瘤药物。

Description

4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物及其制备方法和用途

技术领域：

本发明涉及一类4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物及其制备方法，以及含有它们的药物组合物并涉及所述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的应用。

背景技术：

鬼臼毒素(podophyllotoxin)，又叫鬼臼素、鬼臼毒、鬼臼脂素，属于木脂素类化合物中的环木脂内酯，是一种具抗肿瘤活性的天然产物。鬼臼毒素虽能抑制有丝分裂于中期，但其毒副作用较大，特别对胃肠道的毒性很大，不能直接用于临床。自20世纪50年代初开始，以它为母体进行改造合成并筛选了大量的衍生物，得到一些具有活性高、毒性低特点的衍生物有望用于临床肿瘤治疗。目前鬼臼毒素类化合物已经在抗肿瘤药物方面得到了很好的应用，已有依托泊甙(VP-16)、替尼泊甙(VM-26)等药物上市。其中，依托泊甙对肺癌、白血病、睾丸癌、卡波济氏瘤、尤因氏瘤、妊娠胚芽细胞癌、何杰金氏病、大细胞淋巴瘤、神经母细胞瘤和儿童横纹肌有显著疗效，还可与其它药物联合使用治疗卵巢癌、胃癌和肝癌。随着依托泊甙、替尼泊甙在临床上的应用广泛，其耐药性，水溶性差，严重的骨髓抑制，口服效果差等缺点成为问题。

发明内容：

本发明的目的在于设计在于寻找水溶性好、活性高的表鬼臼毒素衍生物，创制表鬼臼毒素抗癌新药，并提供易于实现的制备方法。先将鬼臼毒素4位α构型转化为β构型的4-胺基表鬼臼毒素，然后通过氨基硫脲环合引入噁二唑，合成结构新颖的4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物。

本发明提供4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物结构如下式(1)

其中结构式(1)中：

R₁表示氢或甲基；

R₂表示氢、C1-C20的烷基、C1-C20的环烷基、C6-C20的芳基、C1-C20的杂芳基、C1-C20杂环烷基；

优选地，本发明提供有式(1)的4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物，其中：

R₁代表甲基；

R₂代表氢；所说的烷基是指C1-C20的直链或支链烷基；

所说的环烷基是指单环或双环基团，它们是饱和或不饱和的但不具有芳族特征，它们含有3～10个碳原子，并且任选的被一个或多个相同或不同的选自卤素、C1-C6的直链或支链烷基、C1-C6的直链或支链三卤代烷基、羟基、胺基、C1-C6的直链或支链烷胺基或其中每个烷基部分都可以是C1-C6直链或支链烷基的二烷胺基的基团取代；

所说的芳基是指带有一个或几个取代基的苯基、苄基，其中每个基团任选地具有一个或多个相同或不同的选自下列的取代基：卤素、羟基、C1-C6的直链或支链烷基、C1-C6的直链或支链烷氧基、氰基、硝基、氨基、C1-C6的直链或支链烷胺基、其中每个烷基部分可以是C1-C6直链或支链烷基的二烷胺基、羧基、C1-C6的直链或支链烷氧羰基、C1-C6的直链或支链烷基羰基或其中氨基部分任选地被一个或两个相同或不同的C1-C6直链或支链烷基取代的氨羰基；

所说的杂芳基是指芳族单环基、芳族双环基或一个环为芳族而另一个环部分氢化的双环基，其中每个基团具有5-12个环原子并且在环系中包含1-3个选自氧、氮或硫的杂原子，所述杂芳基可任选地具有一个或多个相同或不同的选自下列的取代基：卤素、羟基、C1-C6的直链或支链烷基、C1-C6的直链或支链烷氧基、氰基、硝基、氨基、C1-C6的直链或支链烷胺基、其中每个烷基部分可以是C1-C6直链或支链烷基的二烷胺基、羧基、C1-C6的直链或支链烷氧羰基、C1-C6的直链或支链烷基羰基或其中氨基部分任选地被一个或两个相同或不同的C1-C6直链或支链烷基取代的氨羰基。

最优选地本发明提供有式(1)的4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物，其中R₁代表甲基；

R₂选自氢、甲基、苯基、对甲氧基苯基、对硝基苯基、2-噻吩基、2-呋喃基、3-吡啶基、4-吡啶基。

本发明所述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的“药用盐”指常规的酸加成盐，其保留了式(1)的生物有效性和特征，且与合适的非毒性有机酸或无机酸成的盐。如盐酸，氢溴酸，氢碘酸，硫酸，磷酸，硝酸，乙酸，酒石酸，水杨酸，甲磺酸，丁二酸，柠檬酸，苹果酸，乳酸，富马酸，马来酸等。在本发明中，本发明化合物特别优选的药用盐为盐酸盐。

本发明提供了含上述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物和药学上可被接受的赋形剂的药物组合物。

本发明所述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素生物或组合物可以用于制备各种抗肿瘤的药物。

特别是本发明提供了本发明的4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物在制备各种抗肿瘤的药物中的用途。

本发明另外提供了上述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的制备方法，其特征在于：以鬼臼毒素为原料经叠氮化、还原、加成消去得到异硫氰酸酯表鬼臼毒素(4)，再将其与酰肼化合物反应得到相应的胺基硫脲衍生物(5)，再经成环得到相应的4-胺基噁二唑衍生物(6)。酰肼化合物选自C1-C20的脂肪酰肼、C6-C20的芳酰肼或C1-C20的杂芳酰肼。

发明提供了用于合成4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的的合成路线如下：

本发明上述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物制备过程中所用溶剂为常用溶剂，如氯仿，甲醇，四氢呋喃等。鬼臼毒素购自南京泽朗医药植提技术有限公司，纯度98％。

根据中国常发肿瘤疾病及肿瘤细胞的敏感性，我们选择了DU-145(人前列腺癌细胞)、SGC-7901(人胃癌细胞)、A549(人非小细胞肺癌细胞)、SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞)、HepG2(人肝癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)、L929(成纤维细胞)作为体外细胞毒活性药理评价的指标，对合成的化合物进行了细胞毒筛选。实验表明本发明的4β-胺基噁二唑衍生物，能提高其水溶性，增强与肌体相互作用而提高抗癌活性，有望成为高效低毒的抗癌新药。

本发明的优点是：(1)提供了一种制备鬼臼毒素衍生物的方法；(2)在鬼臼毒素分子中4β位引入胺基噁二唑，由于含有胺基，这些衍生物可能具有某些类似生物碱的的生理活性，并使所合成的衍生物呈现一定的碱性，便于和无机酸或有机酸成盐来达到改善水溶性的目的；(3)这些衍生物对正常细胞毒性显著降低，其中一些化合物对肿瘤细胞具有较好的细胞毒性。

具体实施方法

实施例1化合物2的制备

在100mL圆底烧瓶中冰浴条件下依次加入鬼臼毒素(830mg，2mmol)、叠氮钠(650mg，10mmol)、氯仿20mL、三氟乙酸4mL，转至室温搅拌6h。TLC检测反应结束，加入饱和碳酸钠溶液(20mL)，分出有机层，有机层再分别用水(20mL)、饱和食盐水(20mL)洗，水层用乙酸乙酯(2×20mL)萃取后再用水(20mL)、饱和食盐水(20mL)洗，合并有机层，用无水MgSO₄干燥，滤除干燥剂，滤液减压蒸干，硅胶柱色谱分离(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1(体积比))，即得到目标产物。¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ2.91-2.98(1H，m，3-H)，3.18(1H，dd，J＝5.0Hz，2-H)，3.74(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.79(3H，s，4′-OCH₃)，4.28-4.35(2H，m，11-H)，4.63(1H，d，J＝5.5Hz，4-H)，4.78(1H，d，J＝4.0Hz，1-H)，6.02(1H，s，OCHO)，6.03(1H，s，OCHO)，6.26(2H，s，2′，6′-H)，6.59(1H，s，8-H)，6.81(1H，s，5-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ36.92(3-C)，41.26(2-C)，43.77(1-C)，56.33(3′，5′-OCH₃)，59.59(4′-OCH₃)，60.75(4-C)，67.58(11-C)，101.83(16-C)，108.38(2′，6′-C)，108.71(8-C)，111.15(5-C)，126.86(10-C)，132.21(9-C)，135.07(1′-C)，137.48(4′-C)，147.39(6-C)，149.02(7-C)，152.68(3′，5′-C)，174.05(13-C).

实施例2化合物3的制备

在50mL圆底烧瓶中依次加入叠氮鬼臼毒素(826mg，2mmol)、甲醇15ml、10％Pd/C80mg、在氢气环境下室温搅拌过夜。TLC检测反应结束后滤除Pd/C，滤液减压蒸干，硅胶柱色谱分离(石油醚∶乙酸乙酯＝1∶2(体积比))，即得到目标产物。¹HNMR(CDCl₃，500MHz)：δ2.81-2.88(1H，m，3-H)，3.30(1H，dd，J＝5.5Hz，2-H)，3.74(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.79(3H，s，4′-OCH₃)，4.21(1H，d，J＝4.0Hz，4-H)，4.27-4.33(2H，m，11-H)，4.56(1H，d，J＝5.0Hz，1-H)，5.96(1H，s，OCHO)，5.97(1H，s，OCHO)，6.30(2H，s，2′，6′-H)，6.49(1H，s，8-H)，6.82(1H，s，5-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ38.15(3-C)，40.20(2-C)，43.98(1-C)，48.95(4′-OCH₃)，56.28(3′，5′-OCH₃)，60.75(4-C)，68.18(11-C)，101.39(16-C)，108.44(2′，6′-C)，108.69(8-C)，110.31(5-C)，131.16(10-C)，134.22(9-C)，135.72(1′-C)，137.21(4′-C)，147.40(6-C)，147.60(7-C)，152.33(3′，5′-C)，175.37(13-C).

实施例3化合物4的制备

在50mL圆底烧瓶中依次加入氨基表鬼臼毒素(206mg，0.5mmol)、无水THF 4mL、Et₃N(3.5equiv，0.24mL)，冷却到0℃，将溶于1mL无水THF中的CS₂(0.05mL)缓慢加入，滴加完毕撤去冰浴，升至室温搅拌1.5h。再冷却至0℃，加入MsCl(0.043mL，1.1equiv)，加完后移除冰浴，室温搅拌1h。TLC检测反应结束后加乙酸乙酯20mL，分别用1NHCl(2×20mL)，水(20mL)，饱和食盐水(20mL)洗涤，并用无水MgSO₄干燥滤除干燥剂，滤液减压蒸干，硅胶柱色谱分离(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1(体积比))，即得到目标产物。MS(ESI，m/z)：[M+Na]⁺478.1；¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ2.88-2.95(1H，m，3-H)，3.13(1H，dd，J＝5.0Hz，2-H)，3.72(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.77(3H，s，4′-OCH₃)，4.25(1H，t，J＝10.5Hz，11-H)，4.39(1H，t，J＝8.5Hz，11-H)，4.63(1H，d，J＝5.0Hz，1-H)，5.13(1H，d，J＝4.0Hz，4-H)，5.99(1H，s，OCHO)，6.00(1H，s，OCHO)，6.24(2H，s，2′，6′-H)，6.53(1H，s，8-H)，6.85(1H，s，5-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ36.64(3-C)，41.67(2-C)，43.60(1-C)，56.38(3′，5′-OCH₃)，56.78(4′-OCH₃)，60.74(4-C)，67.87(11-C)，101.91(16-C)，108.26(2′，6′-C)，108.50(8-C)，110.52(5-C)，127.20(N＝C＝S)，131.46(10-C)，134.56(9-C)，137.47(1′-C)，139.89(4′-C)，147.83(6-C)，149.08(7-C)，152.72(3′，5′-C)，173.53(13-C).

实施例4 4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的制备通法

在50mL圆底烧瓶中依次加入异硫氰酸酯表鬼臼毒素(228mg，0.5mmol)、无水THF5mL、酰肼类化合物0.5mmol，室温搅拌2～6h，TLC检测原料完全反应，得到相应的胺基硫脲衍生物5a～5i，不经处理直接向体系中依次加入TsCl(106mg.1.2equiv)、吡啶(0.09mL，2.1equiv)，加热回流12～24h。TLC检测反应结束后，减压蒸除溶剂，硅胶柱色谱分离，即得到目标产物。

实施例5-13目标产物的R取代基如下：

实施例5化合物6a的合成

以甲酰肼为原料，按实施例4 4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的制备通法制备。MS(ESI，m/z)：[M+H]⁺482.2；¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ3.05-3.12(2H，m，2，3-H)，3.74(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.80(3H，s，4′-OCH₃)，3.94(1H，t，J＝9.0Hz，11-H)，4.49(1H，t，J＝6.5Hz，11-H)，4.60(1H，s，NH)，5.13(1H，d，J＝5.0Hz，1-H)，5.31(1H，d，J＝10.0Hz，4-H)，5.96(1H，s，OCHO)，5.99(1H，s，OCHO)，6.28(2H，s，2′，6′-H)，6.52(1H，s，8-H)，6.85(1H，s，5-H)，7.93(1H，s，CH＝N)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ36.59(3-C)，40.53(2-C)，42.69(1-C)，51.89(4′-OCH₃)，55.25(3′，5′-OCH₃)，59.74(4-C)，67.60(11-C)，100.73(16-C)，107.24(2′，6′-C)，108.00(8-C)，109.15(5-C)，127.45(10-C)，131.29(9-C)，133.61(1′-C)，136.35(4′-C)，146.50(6-C)，146.81(7-C)，147.75(5″-C)，151.67(3′，5′-C)，161.79(2″-C)，173.20(13-C).

实施例6化合物6b的合成

以乙酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+Na]⁺518.1；¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ2.41(3H，s，5″-CH₃)，3.00-3.07(2H，m，2，3-H)，3.74(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.80(3H，s，4′-OCH₃)，3.96(1H，t，J＝3.2Hz11-H)，4.47(1H，t，11-H)，4.59(1H，d，J＝3.2Hz，1-H)，5.08(1H，s，4-H)，5.97(1H，s，OCHO)，5.99(1H，s，OCHO)，6.28(2H，s，2′，6′-H)，6.53(1H，s，8-H)，6.85(1H，s，5-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ10.96(5″-CH₃)，37.71(3-C)，41.65(2-C)，43.77(1-C)，52.74(4′-OCH₃)，56.32(3′，5′-OCH₃)，60.77(4-C)，68.76(11-C)，101.75(16-C)，108.39(2′，6′-C)，109.01(8-C)，110.22(5-C)，128.69(10-C)，132.39(9-C)，134.60(1′-C)，137.56(4′-C)，147.89(6-C)，148.81(7-C)，152.76(3′，5′-C)，158.23(5″-C)，162.78(2″-C)，174.21(13-C).

实施例7化合物6c的合成

以苯甲酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+1]⁺558.2；¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ3.05-3.12(2H，m，2，3-H)，3.75(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.81(3H，s，4′-OCH₃)，4.04(1H，t，J＝10.0Hz，11-H)，4.52-4.55(1H，m，11-H)，4.63(1H，d，J＝3.5Hz，1-H)，5.19(1H，d，J＝7.0Hz，4-H)，5.97(1H，s，OCHO)，5.99(1H，s，OCHO)，6.30(2H，s，2′，6′-H)，6.54(1H，s，8-H)，6.91(1H，s，5-H)，7.45-7.49(3H，m，Ar-H)，7.88(2H，t，J＝2.0Hz，Ar-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ37.75(3-C)，41.69(2-C)，43.82(1-C)，52.85(4′-OCH₃)，56.35(3′，5′-OCH₃)，60.77(4-C)，68.74(11-C)，101.76(16-C)，108.46(2′，6′-C)，109.09(8-C)，110.22(5-C)，124.05(1″′-C)，125.96(2″′，6″′-C)，128.67(4″′-C)，129.03(3″′，5″′-C)，131.04(10-C)，132.43(9-C)，134.65(1′-C)，137.60(4′-C)，147.92(6-C)，148.84(7-C)，152.79(3′，5′-C)，159.69(5″-C)，162.63(2″-C)，174.20(13-C).

实施例8化合物6d的合成

以对甲氧基苯甲酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+1]⁺588.3；¹HNMR(CDCl₃，500MHz)：δ3.06-3.12(2H，m，2，3-H)，3.75(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.81(3H，s，4′-OCH₃)，3.86(3H，s，4″′-OCH₃)，4.04(1H，t，J＝9.6Hz，11-H)，4.53(1H，q，J＝7.0Hz，11-H)，4.62(1H，d，J＝4.1Hz，1-H)，5.13(1H，s，NH)，5.17(1H，d，J＝3.0Hz，4-H)，5.97(1H，s，OCHO)，5.99(1H，s，OCHO)，6.29(2H，s，2′，6′-H)，6.54(1H，s，8-H)，6.91(1H，s，5-H)，6.97(2H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)，7.81(2H，d，J＝8.8Hz，Ar-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ37.73(3-C)，41.66(2-C)，43.80(1-C)，52.72(4′-OCH₃)，55.44(4″′-OCH₃)，56.30(3′，5′-OCH₃)，60.76(4-C)，68.77(11-C)，101.72(16-C)，108.38(2′，6′-C)，109.13(8-C)，110.13(5-C)，114.50(3″′，5″′-C)，116.58(1″′-C)，127.67(2″′，6″′-C)，128.82(10-C)，132.34(9-C)，134.74(1′-C)，137.47(4′-C)，147.82(6-C)，148.72(7-C)，152.73(3′，5′-C)，159.59(5″-C)，161.84(2″′-C)，162.38(4″′-C)，174.34(13-C).

实施例9化合物6e的合成

以对硝基苯甲酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+1]⁺603.1；¹HNMR(CDCl₃，500MHz)：δ3.08-3.15(2H，m，2，3-H)，3.76(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.81(3H，s，4′-OCH₃)，4.02(1-H，t，J＝8.8Hz，11-H)，4.54(1H，t，J＝7.2Hz，11-H)，4.64(1H，d，J＝8.0Hz，1-H)，5.23(1H，s，4-H)，5.33(1H，s，NH)，5.98(1H，s，OCHO)，5.60(1H，s，OCHO)，6.30(2H，s，2′，6′-H)，6.56(1H，s，8-H)，6.90(1H，s，5-H)，8.06(2H，d，J＝8.4Hz，Ar-H)，8.34(2H，8.4，Ar-H)；¹³CNMR(CDCl₃，500MHz)：δ37.63(3-C)，41.67(2-C)，43.78(1-C)，52.99(4′-OCH₃)，56.36(3′，5′-OCH₃)，60.78(4-C)，68.57(11-C)，101.84(16-C)，108.45(2′，6′-C)，109.00(8-C)，110.29(5-C)，124.44(3″′，5″′-C)，126.62(2″′，6″′-C)，128.26(10-C)，129.49(1″′-C)，132.45(9-C)，134.54(1′-C)，137.61(4′-C)，147.98(4″′-C)，148.97(6-C)，149.06(7-C)，152.80(3′，5′-C)，157.93(5″-C)，163.21(2″-C)，174.04(13-C).

实施例10化合物6f的合成

以2-噻吩甲酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+1]⁺564.1；¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ3.00-3.07(1H，m，3-H)，3.11(1H，dd，J＝4.8Hz，J＝9.5Hz，2-H)，3.71(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.78(3H，s，4′-OCH₃)，4.01(1H，t，J＝9.7Hz，11-H)，4.46(1H，t，J＝8.1Hz，11-H)，4.56(1H，d，J＝4.7Hz，1-H)，5.16(1H，s，4-H)，5.83(1H，s，NH)，5.92(1H，s，OCHO)，5.96(1H，s，OCHO)，6.27(2H，s，2′，6′-H)，6.49(1H，s，8-H)，6.90(1H，s，5-H)，7.11(1H，t，J＝4.5Hz，4″′-H)，7.45(1H，d，J＝4.9Hz，3″′-H)，7.51(1H，d，J＝3.4Hz，5″′-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ37.66(3-C)，41.62(2-C)，43.75(1-C)，52.73(4′-OCH₃)，56.26(3′，5′-OCH₃)，60.77(4-C)，68.71(11-C)，101.74(16-C)，108.24(2′，6′-C)，109.12(8-C)，110.12(5-C)，125.30(4″′-C)，127.99(5″′-C)，128.24(3″′-C)，128.58(10-C)，128.98(2″′-C)，132.32(9-C)，134.72(1′-C)，137.32(4′-C)，147.81(6-C)，148.73(7-C)，152.69(3′，5′-C)，155.87(5″-C)，162.13(2″-C)，174.29(13-C).

实施例11化合物6g的合成

以2-呋喃甲酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+1]⁺548.3；¹H NMR(CDCl₃，500MHz)：δ3.08-3.15(2H，m，2，3-H)，3.73(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.80(3H，s，4′-OCH₃)，4.01(1H，d，J＝9.3 Hz，11-H)，4.50(1H，d，J＝7.1Hz，11-H)，4.60(1H，s，1-H)，5.18(1H，s，4-H)，5.51(1H，s，NH)，5.95(1H，s，OCHO)，5.98(1H，s，OCHO)，6.28(2H，s，2′，6′-H)，6.52(1H，s，8-H)，6.55(1H，s，1-H)，6.89(1H，s，3″′-H)，6.96(1H，d，J＝3.0Hz，4″′-H)，7.57(1H，s，5″′-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ37.70(3-C)，41.68(2-C)，43.80(1-C)，52.93(4′-OCH₃)，56.33(3′，5′-OCH₃)，60.84(4-C)，68.74(11-C)，101.82(16-C)，108.30(2′，6′-C)，109.11(8-C)，110.24(5-C)，112.04(4″′-C)，112.49(3″′-C)，128.49(10-C)，132.42(9-C)，134.67(1′-C)，137.44(4′-C)，139.35(5″′-C)，145.11(2″′-C)，147.92(7-C)，148.87(6-C)，152.71(5″-C)，152.77(3′，5′-C)，162.11(2″-C)，174.26(13-C).

实施例12化合物6h的合成

以烟酸酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+1]⁺559.2；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ3.13-3.14(2H，m，2，3-H)，3.76(6H，s，3′，5′-OCH₃)，3.82(3H，s，4′-OCH₃)，4.03(1H，t，J＝9.6Hz，11-H)，4.55(1H，d，J＝6.8Hz，11-H)，4.69(1H，d，J＝3.2Hz，1-H)，5.25(1H，s，4-H)，5.97(1H，s，OCHO)，5.99(1H，s，OCHO)，6.32(2H，s，2′，6′-H)，6.62(1H，s，8-H)，6.91(1H，s，5-H)，7.44(1H，dd，J＝2.4Hz，J＝5.2Hz，5″′-H)，8.19(1H，d，J＝4.8Hz，6″′-H)，8.36(1H，d，J＝8.0Hz，4″′-H)，9.17(1H，s，2″′-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ37.91(3-C)，41.84(2-C)，43.89(1-C)，52.65(4′-OCH₃)，56.33(3′，5′-OCH₃)，60.81(4-C)，68.79(11-C)，101.76(16-C)，108.33(2′，6′-C)，109.55(8-C)，110.14(5-C)，121.27(5″′-C)，124.44(1″′-C)，128.85(10-C)，132.18(9-C)，133.98(6″′-C)，134.74(1′-C)，137.45(4′-C)，145.61(6-C)，147.84(7-C)，148.74(4″′-C)，150.31(2″′-C)，152.78(3′，5′-C)，156.53(5″-C)，163.24(2″-C)，174.35(13-C).

实施例13化合物6i的化合物

以烟酸酰肼为原料，按实施例5方法制备。MS(ESI，m/z)：[M+1]⁺559.2；¹H NMR(CDCl₃，400MHz)：δ3.09-3.15(2H，m，2，3-H)，3.75(6H，s，3′，5′-OMe)，3.80(3H，s，4′-OCH₃)，4.02(1H，t，J＝9.2Hz，11-H)，4.53(1H，q，J＝6.0Hz，11-H)，4.62(1H，s，1-H)，5.22(1H，d，J＝4.8Hz，4-H)，5.80(1H，d，J＝5.6Hz，NH)，5.96(1H，s，OCHO)，5.99(1H，s，OCHO)，6.30(2H，s，2′，6′-H)，6.54(1H，s，8-H)，6.90(1H，s，5-H)，7.73(2H，d，J＝5.6Hz，2″′，6″′-H)，8.72(2H，d，J＝5.2Hz，3″′，5″′-H)；¹³C NMR(CDCl₃，500MHz)：δ37.60(3-C)，41.64(2-C)，43.73(1-C)，52.88(4′-OCH₃)，56.28(3′，5′-OCH₃)，60.77(4-C)，68.59(11-C)，101.22(16-C)，108.24(2′，6′-C)，109.03(8-C)，110.22(5-C)，119.36(2″′，6″′-C)，128.27(10-C)，131.13(9-C)，132.36(1′-C)，134.56(4′-C)，137.38(1″′-C)，147.91(6-C)，148.88(7-C)，150.66(3′，5′-C)，152.73(3″′，5″′-C)，157.63(5″-C)，163.16(2″-C)，174.08(13-C).

实施例14

用MTT法测定了目标化合物对六种人癌细胞增殖的抑制作用。选取DU-145(人前列腺癌细胞)、SGC-7901(人胃癌细胞)、A549(人非小细胞肺癌细胞)、SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞)、HepG2(人肝癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)6种肿瘤细胞为测试细胞株，并用一个正常细胞L929(成纤维细胞)作为对照，采用MTT法对所合成的化合物进行体外抗肿瘤活性评价，并以鬼臼毒素、VP-16以及五氟尿嘧啶为阳性对照药。取对数生长期的肿瘤细胞，离心后用RPMI 1640或DMEM培养液稀释成5×10⁴个/mL，接种于96孔板中。37℃培养过夜后加入不同浓度的样品，再孵育72h，加入10.0μL/well的MTT溶液(5mg·mL^-1)，于37℃孵化4h后，每孔加入150μL DMSO(溶解紫色甲臜晶体)。10分钟后，震荡后将孔板置于自动微孔板分光光度计上，在570nm和630nm处测定吸收度值，并用Bliss法计算半数有效抑制浓度(IC₅₀)。每组样品进行3次平行测试。

用MTT法测定了实施例中的9个化合物对六种人癌细胞DU-145(人前列腺癌细胞)、SGC-7901(人胃癌细胞)、A549(人非小细胞肺癌细胞)、SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞)、HepG2(人肝癌细胞)、Hela(人宫颈癌细胞)及正常细胞L929(成纤维细胞)的增殖抑制作用，结果见表1，这九种化合物对SH-SY5Y(神经母细胞瘤细胞)均有较好的抑制作用，且对正常细胞的毒性均远远小于阳性对照。其中化合物6b对人肝癌细胞HepG2和子宫颈癌细胞Hela的细胞毒活性超过了阳性对照，具有开发成高效低毒抗肿瘤药物的潜力。由表1初步推断4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的构效关系：对于HepG2、Hela细胞系，噁二唑环上5位取代基为脂肪烃的较无取代基以及取代基为芳基的衍生物的细胞毒活性高。

表1目标化合物对癌细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)

以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。

Claims

1.一种4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物，其化学结构通式为：

2.权利要求1所述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的制备方法，其特征在于：以鬼臼毒素为原料经叠氮化、还原、加成、消去得到异硫氰酸酯表鬼臼毒素(4)，再将异硫氰酸酯表鬼臼毒素中间体与酰肼化合物反应得到胺基硫脲衍生物(5)，然后再经成环得到相应4-胺基噁二唑衍生物(6)，酰肼化合物选自C1-C20的脂肪酰肼、C6-C20的芳酰肼或C1-C20的杂芳酰肼，合成4-胺基噁二唑衍生物的合成路线如下：

，其中R为甲基。

3.权利要求2所述4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的制备方法，其特征在于包括下列步骤：

①化合物(2)叠氮鬼臼毒素的制备：冰浴条件下依次加入鬼臼毒素、叠氮钠、氯仿、三氟乙酸，转至室温搅拌至反应结束；

②化合物(3)氨基表鬼臼毒素的制备：加入叠氮鬼臼毒素、甲醇、10%Pd/C、在氢气环境下室温搅拌过夜；

③化合物(4)异硫氰酸酯表鬼臼毒素的制备：依次加入氨基表鬼臼毒素、无水THF、Et3N，冷却到0℃，将溶于无水THF中的CS2缓慢加入，滴加完毕撤去冰浴，升至室温搅拌；再冷却至0℃，加入MsCl，加完后移除冰浴，室温搅拌；

④化合物(6)4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物的制备：异硫氰酸酯表鬼臼毒素、无水THF、酰肼类化合物，室温搅拌2～6h。

4.权利要求1所述胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物可药用酸的加成盐，其特征在于：所述可药用酸为盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、硝酸、乙酸、酒石酸、水杨酸、甲磺酸、丁二酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸或马来酸。

5.一种药物组合物，其特征在于：该组合物由权利要求1的4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物以及任选的一种或多种药学上可被接受的载体或赋形剂组成。

6.一种如权利要求1所述的4-胺基噁二唑表鬼臼毒素衍生物用途，其特征在于：该衍生物在制备治疗肝癌或者宫颈癌药物中应用。