CN102423308A

CN102423308A - 两种溴酚类化合物及其可药用盐在制备保护心肌缺血再灌注损伤药物中的应用

Info

Publication number: CN102423308A
Application number: CN2011102929979A
Authority: CN
Inventors: 李青山; 王�义; 冯秀娥; 韩玲革
Original assignee: Shanxi Medical University
Current assignee: Shanxi Medical University
Priority date: 2011-09-30
Filing date: 2011-09-30
Publication date: 2012-04-25
Anticipated expiration: 2031-09-30
Also published as: CN102423308B

Abstract

本发明公开了两种溴酚类化合物及其可药用盐的医药用途，具体为在制备心肌缺血再灌注损伤保护药物中的应用。这两种化合物及其可药用盐能在大鼠心脏急性缺血时对心肌细胞进行保护，从而使得大鼠心脏的功能完整。常规静脉给药后，能提高心肌缺血再灌注后SOD能力，改善心肌顺应性，显著降低心肌缺血再灌注后的血清LDH、血清CK、血清cTnT和MDA水平，减少心肌损伤，还能显著抑制和降低心肌缺血再灌注后的FasmRNA，从而抑制心肌缺血再灌注后的心肌细胞凋亡。因此，这两种溴酚类化合物及其可药用盐具有明确的对心肌缺血再灌注损伤保护的功能，从而为临床治疗心肌缺血再灌注损伤提供新的方法和手段，为临床用药开辟新的方向。

Description

两种溴酚类化合物及其可药用盐在制备保护心肌缺血再灌注损伤药物中的应用

技术领域

本发明属于全新化合物用途领域，具体为化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮及其可药用盐和化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮及其可药用盐在制备心肌缺血再灌注损伤保护药物中的应用。

背景技术

心肌缺血再灌注损伤(MIRI)是指在心肌缺血后的一定时间内恢复血供，在灌注血液的过程中会导致缺血心肌发生更严重的损伤。目前认为心肌缺血再灌注损伤发生的生理变化主要是氧自由基（OFR）大量产生、钙超载、内皮细胞激活。补体系统和肾素血管紧张素系统等变化，心肌缺血再灌注损伤发生的细胞学基础是心肌细胞凋亡，诱发心律失常、心猝死和心脏顿抑所致的心功能减退等心血管疾病。

针对心肌缺血再灌注损伤，目前常用钙离子拮抗剂、β-受体拮抗剂、氧自由基清除剂等药物，来预防和控制因心肌缺血再灌注损伤所诱发心律失常、心猝死和心脏顿抑所致的心功能减退等心血管减退等心血管疾病的发生，但至今未获得真正满意的结果。

本发明系首次发现两种海洋溴酚类化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮（简称M48）和2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮（简称M49）具有良好的保护心肌缺血再灌注损伤的活性，同时具有低毒，副作用小等特点，且价格低廉，具有良好的开发价值及运用前景，其化学结构式分别为：

、

。

以上两种化合物已公开，具体见论文《海洋来源卤酚类化合物的合成与生物活性研究》。

但是到目前为止，对化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮及其可药用盐以及化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮及其可药用盐的保护心肌缺血再灌注损伤的药理作用国内外尚无相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮及其可药用盐和化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮及其可药用盐的新的药理用途，具体为在制备心肌缺血再灌注损伤保护药物中的应用。

本发明的另一个目的在于提供一种新的心肌缺血再灌注损伤保护药物，该药物是以化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮或其可药用盐，或是化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮或其可药用盐为活性成分，并且该药物还可以与药学上可接受的普通药用载体组合使用，例如稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂等；该药物还可以根据不同的要求制成注射剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂或微乳剂等常用制剂。

其中，所述的化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮和化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮的可药用盐是本领域技术人员所熟知的，其制备方法也是能够实现的（以镁盐为例）：取化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮，在氨水中将溴酚类化合物溶解，后加入溶有MgCl₂的氨水反应。待充分反应后，用布氏漏斗抽滤不溶物得滤饼，将滤饼用水溶解除不溶物，脱溶剂后得到黄色粉末状固体 ,即2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮的可药用盐，其结构式为：

。

取2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮适量，在氨水中将溴酚类化合物溶解，后加入溶有MgCl2的氨水反应。待充分反应后，用布氏漏斗抽滤不溶物得滤饼，将滤饼用水溶解，除去不溶物，滤液中加同体积的乙醇脱溶剂后得到棕黄色粉末状固体即2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮的可药用盐，其结构式为：

。

本发明通过使用化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮及其可药用盐和化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮及其可药用盐进行不同的药理试验，表明其能够显著降低心肌的缺血再灌注损伤，具有很好的保护心肌缺血再灌注损伤的功能，此外，通过毒性实验，表明其还具有毒性低的特点。

本发明中化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮及其可药用盐和化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮及其可药用盐具有很好的保护心肌缺血再灌注损伤的功能，在生理学水平上能提高心肌抗氧化（SOD ）能力，改善心肌顺应性，显著降低心肌缺血再灌注后的血清LDH 、血清cTnT和心肌氧化（MDA ）水平，减少心肌损伤；在细胞学水平上该两种溴酚类化合物能显著抑制和降低心肌缺血再灌注后的Fas mRNA及其蛋白表达，从而抑制心肌缺血再灌注后的心肌细胞凋亡，能增加Bcl-2 mRNA及其蛋白表达，使Bcl-2 / BAX的比值提高，抑制缺血再灌注后的心肌细胞的凋亡；因此该两种溴酚类化合物具有保护心肌缺血再灌注损伤的功能，为卤酚类化合物拓展了新的临床应用领城。

具体实施方式

以下通过具体的实验实施例来对本发明中的两种溴酚类化合物及其它们的可药用盐具有保护心肌缺血再灌注损伤的功能作进一步的阐述，需要说明的是以下的实施例都为说明性的，并不对本发明做任何限定。

实施例1

1、M48、M49对大鼠的不同生理指标参数的影响

1.1实验动物：实验动物为SD大鼠60只，雌雄各半，随机分为10个组，其中一组为伪手术组，其余九组建立SD大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。

1.2实验分组：实验用药物为一组为伪手术组，即结扎时只穿过不结扎；二组为模型组；三组为溶剂对照组；四组为M48低剂量组5mg/Kg；五组为M48中剂量组10mg/Kg；六组为M48高剂量组15mg/Kg；七组为M49低剂量组5mg/Kg；八组为M49中剂量组10mg/Kg；九组为M49高剂量组15mg/Kg；十组用阳性对照药果糖二磷酸钠l0ml/Kg。

1.3实验方法：采用20%乌拉坦5ml/kg 经腹腔注射麻醉。麻醉成功后，记录正常Ⅱ导联心电图（Electrocardiogram，ECG）。常规施行气管切开术并行气管插管、正压人工辅助呼吸。在大鼠胸骨旁左侧3.0 cm 处，3～5 肋间，剪断第3～5 肋骨行开胸术。进入胸膜腔后，打开心包，在动脉圆锥与左心耳之间冠状动脉左前降支（Left anterior descending，LAD）处穿线，除假手术组外，其余各组在LAD 下拉紧结扎线使硅胶管压迫LAD 造成血流阻断（以ECGⅡ导联ST 段抬高0.1 mV 或T 波高耸，心肌颜色变为暗红色，作为LAD 结扎成功的标志）。LAD 供血区域—左心室左前壁缺血45 min 后，松开结扎线，恢复血液LAD 再灌流。除模型组和假手术组静脉注射生理盐水10ml/kg以及溶剂组静脉注射空白溶剂10ml/kg作为对照外，其余各组分别经股静脉推注相应组别实验用药物，再灌注血液3小时。同时用常规生理仪器检测各实验动物组在缺血前、缺血后60分钟、再灌注后180分钟的时间，用常规检测仪检测下述生理指标：血清CK、血清cK 一MB、血清LDH、血清cTnT、心肌氧化（MDA）、心肌抗氧化（SOD)。

1.4实验结果（表1）

表1 ：M48、M49对大鼠的不同生理指标参数的影响

从表1中的实验结果可以看出：用药四至十组对CK、CK一MB、LDH、cTnT、MDA、SOD的生理指标比模型组（二组）有显著提高，而各个化合物的效果高剂量组强于中剂量组和低剂量组，也强于十组。并且中剂量组强于低剂量组，说明M48，M49在用量为5mg/Kg对改善缺血再灌注后的氧自由基（OFR ）、钙超载、内皮细胞激活、补体系统和肾素一血管紧张素系统有效，在10mg/Kg范围内疗效较显著, 在15mg/Kg范围内疗效最显著。

2、M48镁盐、M49镁盐对大鼠的不同生理指标参数的影响

2.1实验动物：与实施例1中的1.1的相同。

2.2实验分组：一组为伪手术组，即结扎时只穿过不结扎；二组为模型组；三组为溶剂对照组；四组为M48镁盐低剂量组5mg/Kg；五组为M48镁盐中剂量组10mg/Kg；六组为M48镁盐高剂量组15mg/Kg；七组为M49镁盐低剂量组5mg/Kg；八组为M49镁盐中剂量组10mg/Kg；九组为M49镁盐高剂量组15mg/Kg；十组用阳性对照药果糖二磷酸钠l0ml/Kg。

2.3实验方法：同实施例1中的1.3相同。

2.4实验结果（表2）

表2：M48镁盐、M49镁盐对大鼠的不同生理指标参数的影响

从表2中的实验结果可以看出：用药四至十组对CK、CK一MB、LDH、cTnT、MDA、SOD的生理指标比模型组（二组）有显著提高，而各个化合物的效果高剂量组强于中剂量组和低剂量组，也强于十组。并且中剂量组强于低剂量组，说明M48可药用盐以及M49可药用盐在用量为5mg/Kg对改善缺血再灌注后的氧自由基（OFR ）、钙超载、内皮细胞激活、补体系统和肾素一血管紧张素系统有效，在10mg/Kg范围内疗效较显著, 在15mg/Kg范围内疗效最显著。

实施例2

1、M48、M49对大鼠心肌缺血再灌注的心肌梗死面积的影响

1.1具体实验：

实验动物、实验分组都与实施例1中的1相同，实验方法基本与实施例1中的1的方法相同，不同之处在于本实验再灌注相应组别实验用药物后再静脉注射1%EvansBlue，对心肌进行染色。随后用1%的TTC进行复染，分析梗死面积，计算公式如下：

梗死面积=(梗死区面积／心肌总面积)×100%

1.2实验结果（表3）：

表3：M48，M49对大鼠心肌缺血再灌注的心肌梗死面积的影响

从表3中的实验结果可以看出：用药四至十组对心肌梗死面积比模型对照组（二组）有显著提高，而各个化合物的效果高剂量组强于中剂量组和低剂量组，也强于十组。并且中剂量组强于低剂量组，说明M48，M49在用量为5mg/Kg对改善缺血再灌注后心肌组织的损伤有效，在10mg/Kg范围内疗效较显著, 在15mg/Kg范围内疗效最显著。

2、M48镁盐、M49镁盐对大鼠心肌缺血再灌注的心肌梗死面积的影响

2.1实验动物、实验分组、实验方法同实验例2中的1, 不同之处在于药用组中的M48和M49分别用M48和M49的镁盐代替，即一组为伪手术组，即结扎时只穿过不结扎；二组为模型组；三组为溶剂对照组；四组为M48镁盐低剂量组5mg/Kg；五组为M48镁盐中剂量组10mg/Kg；六组为M48镁盐高剂量组15mg/Kg；七组为M49镁盐低剂量组5mg/Kg；八组为M49镁盐中剂量组10mg/Kg；九组为M49镁盐高剂量组15mg/Kg；十组用阳性对照药果糖二磷酸钠l0ml/Kg。

2.2实验结果（表4）

表4：M48镁盐，M49镁盐对大鼠心肌缺血再灌注的心肌梗死面积的影响

从表4中的实验结果可以看出：用药四至十组对心肌梗死面积比模型对照组（二组）有显著提高，而各个化合物盐的效果高剂量组强于中剂量组和低剂量组，也强于十组。并且中剂量组强于低剂量组，说明M48可药用盐以及M49可药用盐在用量为5mg/Kg对改善缺血再灌注后心肌组织的损伤有效，在10mg/Kg范围内疗效较显著, 在15mg/Kg范围内疗效最显著。

实施例3

1、M48，M49对大鼠心肌缺血再灌注时心肌组织的NO的影响

1.1具体实验：

实验动物、实验分组都与实施例1中的1的方法相同，实验方法基本与实施例1中的1的方法相同，不同之处在于再灌注相应组别实验用药物3小时后检测心肌组织的一氧化氮（NO）指标。

1.2实验结果（表5）：

表5：M48，M49对大鼠心肌缺血再灌注时心肌组织的NO的影响

从表5中的实验结果可以看出：用药四至十组对心肌梗死面积比模型对照组（二组）有显著下降，尤其是高剂量组对NO水平下降更明显，说明M48，M49能抑制缺血再灌注所导致的心肌细胞凋亡。

2、M48镁盐，M49镁盐对大鼠心肌缺血再灌注时心肌组织的NO的影响

2.1实验动物、实验分组、实验方法同实验例3中的1, 不同之处在于药用组中的M48和M49分别用M48和M49的镁盐代替。

2.2实验结果（表6）

表6：M48镁盐，M49镁盐对大鼠心肌缺血再灌注时心肌组织的NO的影响

从表6中的实验结果可以看出：用药四至十组对心肌梗死面积比模型对照组（二组）有显著下降，尤其是高剂量组对NO水平下降更明显，说明M48可药用盐以及M49可药用盐能抑制缺血再灌注所导致的心肌细胞凋亡。

实施例4

1、M48，M49对大鼠缺血再灌注后心肌细胞的mRNA的影响

1.1具体实验：

实验动物、实验分组都与实施例1中的1的方法相同，本实验的方法为：在缺血前5天各给四至十组灌服相应组别实验用药物，每日分二次灌服，灌服7天后手术结扎缺血，缺血40分钟后再灌注血液，给一组二组在缺血前7天灌服生理盐水，三组灌服空白溶剂。灌服7天后一组不结扎缺血，然后用TUNEL染色、透射电镜、Westem Blotting 、酶联免疫吸附等技术分别检测各组心肌细胞的FaS mRNA及其蛋白表达、Bcl-2 mRNA及其蛋白表达。

1.2实验结果（表7）：

表7：M48，M49对缺血再灌注后心肌细胞的mRNA的影响

从表7中的实验结果可以看出：对Fas mRNA及其蛋白表达M48，M49高剂量均比中剂量以及低剂量有显著降低，且与伪手术组无显著差异，说明M48，M49高剂量时能抑制FaS mRNA及其蛋白表达，抑制缺血再灌注后的心肌细胞的凋亡；因此M48，M49能增加Bcl-2 mRNA及其蛋白表达，使Bcl-2/ BAX的比值提高，抑制缺血再灌注后的心肌细胞的凋亡。

2、M48镁盐，M49镁盐对大鼠缺血再灌注后心肌细胞的mRNA的影响

2.2实验结果（表8）

表8：M48镁盐，M49镁盐对大鼠缺血再灌注后心肌细胞的mRNA的影响

从表8中的实验结果可以看出：对Fas mRNA及其蛋白表达M48可药用盐以及M49可药用盐高剂量均比中剂量以及低剂量有显著降低，且与伪手术组无显著差异，说明M48可药用盐以及M49可药用盐高剂量时能抑制FaS mRNA及其蛋白表达，抑制缺血再灌注后的心肌细胞的凋亡；因此，M48可药用盐以及M49可药用盐能增加Bcl-2 mRNA及其蛋白表达，使Bcl-2/ BAX的比值提高，抑制缺血再灌注后的心肌细胞的凋亡。

实施例5

以下是证明化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮以及2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮具有低毒性的具体实验实施例：

1、实验方法：

分别取化合物M48、M49 0.5g置研钵中，加入少量纯水润湿后研磨，研磨均匀后一边加0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）一边继续研磨，最后定容至5ml，配成0.1g/ml浓度备用。用时置37℃恒温水浴器中20min后取出使用。

2、不同剂量组实验：

2000mg/kg剂量组：取体重20±1.0g小鼠，禁食不禁水过夜（16h）后随机分组，分别为空白对照组、给药组，每组10只，雌、雄各半。给药组一次灌胃给药0.2ml/10g.bw；总剂量为2000mg/kg；对照组给予等容量0.5%CMC-Na。然后连续观察14天，记录反应情况及死亡率,计算最大耐受量测定。

5000mg/kg剂量组：实验方法与上述2000mg/kg剂量组实验方法相同，但给药总剂量为5000mg/kg。

3、实验结果：

一次灌胃总剂量为2000mg/kg后，动物均出现倦伏、活动减少，40分钟后基本恢复正常，其余未观察到与用药有关的不良反应或毒性反应，与对照组比较无明显差异。连续观察14天，动物均无死亡。实验结束后称量体重并解剖动物进行观察，亦未发现有肉眼可见的病理变化。

一次灌胃总剂量为5000mg/kg后，动物出现倦伏、活动减少，3天后基本恢复正常，也未观察到与用药有关的不良反应或毒性反应，与对照组比较无明显差异，连续观察14天，动物均无死亡。故最大耐受量（MTD）可达到5000mg/kg.bw。

以上毒性实验说明化合物M48以及M49作为保护心肌缺血再灌注损伤药物毒性很低。所以进一步地，化合物M48和M49相对应的可药用盐也具有低毒性的特点，这也是本领域技术人员所熟知的。

结论：

通过上述各实施例可以说明M48，M49及其可药用盐，能显著降低心肌的缺血再灌注损伤，为防止心肌缺血再灌注损失提供了新的应用药物，尤其是高剂量组的效果更显著，并且具有低毒性的特点。这样拓宽了M48，M49及其可药用盐应用范围，为M48，M49及其可药用盐在临床的应用开创的新的用途。

Claims

1.化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮及其可药用盐和化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮及其可药用盐在制备心肌缺血再灌注损伤保护药物中的应用。

2.一种心肌缺血再灌注损伤保护药物，其特征在于：所述药物的活性成分为化合物2,3-二溴-4,5-二羟基二苯甲酮或其可药用盐，或是化合物2,3’-二溴-4,5,6’-三羟基二苯甲酮或其可药用盐。

3.根据权利要求2所述的一种心肌缺血再灌注损伤保护药物，其特征在于：该药物还可以与药学上可接受的普通药用载体组合使用。

4.根据权利要求2或3所述的一种心肌缺血再灌注损伤保护药物，其特征在于：所述药物为注射剂、片剂、滴丸剂或胶囊剂。

5.根据权利要求3所述的一种心肌缺血再灌注损伤保护药物，其特征在于：所述的可接受的普通药用载体为稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、润滑剂。