CN102416000A - 一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球及其制备方法，所述壳聚糖季铵盐大孔微球的组成重量份为壳聚糖季铵盐1-10份、β-环糊精或其衍生物0.5-5份、致孔剂0.5-5份，粒径为0.5～10μm，制备方法主要是过滤和喷雾干燥；本发明的优点在于：通过使用壳聚糖的季铵盐，改变了壳聚糖在中性或生理条件下壳聚糖会失去其正电性的缺陷，作为肺吸入微球具有明显的缓释作用，同时具有良好的生物相容性及降解性，从而扩大了其作为药物载体的应用范围，制备方法具有操作简便、工艺稳定、易于工业化生产的优点。

Description

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种用于肺吸入的大孔微球，具体地说是一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球及其制备方法，属于肺部缓控释给药领域。

背景技术

肺部缓控释给药是近年发展起来的新型给药系统，微球沉积于肺部可以延缓药物的释放，增加药物疗效且可保护药物不受酶的水解；将药物包裹在制剂的内部，增大了药物的稳定性；能有效减少药物对呼吸道及肺部的刺激和毒性，已成为肺部控释给药载体研究的热点。但是肺吸入给药要求良好的粉雾剂特性、有效的肺部沉积率、载体要有良好的安全性及适宜的空气动力学粒径（1-5 μm之间）。LPPs(Large Porous Particles, LPPs)直径5 μm以上、密度小于0.4 g/cm3的大孔微球载体给药系统应用于肺部给药，易在肺部沉积，不易被肺泡清除，且能使药物在肺部缓慢释放。具有更大尺寸的空心或多孔微粒，容易通过简易的吸人装置传递至肺部，当其进入肺部而暴露在湿润的肺部环境中，便逐渐溶解分散，持续释放出药物。这种大孔微球载体给药系统应用于肺部增加了沉积率，具有广泛的用前应用前景。

壳聚糖是一种天然可降解的高分子材料，具有良好的物理化学特性、生物相容性和生物可降解性。壳聚糖的生物粘附性、促吸收效应等特性，使其在生物粘附给药系统、透膜给药系统、靶向给药系统的开发中倍受青睐。壳聚糖作为药物载体可以控制药物释放，延长药物疗效、降低药物毒副作用，提高难溶性药物的溶出和药物的稳定性，加强制剂的靶向给药能力。

壳聚糖的阳离子聚合物能与粘膜的负电荷相互作用，提高粘附性和降低清除率。近年来，以壳聚糖为载体材料应用于肺部缓控释给药系统的研究已引起国内外许多科学家的高度重视。研究显示，壳聚糖能打开细胞连接，促进药物通过上皮组织转运，提高生物利用度5-10倍；而且对粘膜功能的影响是可逆的，具有正电荷的性质，尤其适用于肺部给药系统。带正电荷的壳聚糖纳米粒能吸附到带负电的肿瘤细胞表面，通过电荷中和，抑制肿瘤生长。因而，壳聚糖作为肺吸入微球具有明显的缓释作用，同时具有良好的生物相容性及降解性。然而，壳聚糖具有酸溶性，在中性或生理条件下壳聚糖将失去其正电性，从而限制了其作为药物载体的更广泛应用。

发明内容

本发明设计了一种用于肺吸入的壳聚糖季铵铵盐大孔微球及其制备方法，该壳聚糖季铵铵盐大孔微球具有良好的肺吸入特性及生物相容性，能够作为肺吸入的载体，制备方法操作简便、易于工业化生产。

经研究发现，壳聚糖的衍生物壳聚糖季铵盐(HTCC)即N-(2-羟基)丙基-3-甲基氯化铵壳聚糖，既保留了壳聚糖的诸多优点，改善了水溶性，同时又具有更多的正电荷，可以与肿瘤细胞表面负电荷结合，因而抑瘤作用较壳聚糖更强。具有更强的粘膜粘附性和促渗透性，因而更适合于粘膜给药。

本发明的技术方案为：

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，由以下重量份的成分组成：

壳聚糖季铵盐1-10份；

β-环糊精或其衍生物0.5-5份；

致孔剂0.5-5份；

所述的壳聚糖季铵盐大孔微球的粒径为0.5～10 μm；

所述的壳聚糖季铵盐为高、中、低分子量壳聚糖季铵盐中的一种；

所述的高分子量的壳聚糖季铵盐为分子量1360kDa或1100 kDa的壳聚糖季铵盐的一种；

所述的中分子量的壳聚糖季铵盐为分子量450kDa或350kDa的壳聚糖季铵盐的一种；

所述的低分子量的壳聚糖季铵盐为170kDa或50kDa的壳聚糖季铵盐的一种。

进一步地，所述的壳聚糖季铵盐的取代度为90%。

进一步地，所述的壳聚糖季铵盐的取代度为85%。

进一步地，所述的壳聚糖季铵盐的取代度为80%。

进一步地，所述的壳聚糖季铵盐的取代度为73%。

所述的β-环糊精衍生物为2-羟丙基-β-环糊精；

所述的致孔剂为丙二醇嵌段聚醚、碳酸氢铵、聚乙二醇、氯仿、聚苯乙烯球中的一种。

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，包括以下步骤：

（1）根据上述配比要求配制各组分的混合溶液；

其中，壳聚糖季铵盐1-10 g/ml、β-环糊精或其衍生物0.5-5 g/ml、致孔剂0.5-5 g/ml；

（2）将上述步骤（1）的混合溶液经0.45 μｍ的微孔滤膜过滤，调节混合滤液质量浓度为0.5-1.5％；

（3）将上述步骤（2）的滤液经蠕动泵导入喷雾干燥器，进行喷雾干燥，制成粉末微球；喷雾干燥条件为：喷雾干燥进口温度为120-170 ℃，出口温度为80-100 ℃，喷嘴流速400-800 L/h，进样速度5-25 ml/min，气流量400-600 L/h；

（4）将上述步骤（3）得到的微球收集于干燥器，备用。

所述的壳聚糖季铵盐大孔微球粒径分布范围在0.5～10 μm之间，外观较圆整，粒径分布比较均匀，表面光滑，具有大孔结构，生物相容性良好。

壳聚糖季铵盐是一种重要的壳聚糖衍生物，不但有典型的季铵盐的性质如保湿性和抗菌性，而且保持了壳聚糖原有的良好的成膜性、生物相容性和生物降解等性能，在医用材料食品工业等领域有潜在的应用价值。壳聚糖季铵盐利用壳聚糖子中存在活性铵基，与三元环氧衍生物发生亲核取代反应，所用环氧衍生物为2, 3-环氧丙基三甲基氯化铵，已有工业化生产。如对壳聚糖进行季铵化改性可以使其在中性或碱性条件下也能溶于水，从而拓展了其应用范围。这些衍生物的制备一方面可改善它们的溶解性能。更重要的是不同取代基的引入可赋予壳聚糖更多的功能。经研究发现，壳聚糖的衍生物壳聚糖季铵盐(HTCC)即N-(2-羟基)丙基-3-甲基氯化铵壳聚糖，既保留了壳聚糖的诸多优点，改善了水溶性，同时又具有更多的正电荷，可与气道粘膜表面所带负电荷结合，具有更强的粘膜粘附性和促渗透性，因而更适合于粘膜给药。近年来壳聚糖季铵盐这一新材料多应用于开发壳聚糖季铵盐纳米粒子，壳聚糖季铵盐复合物，壳聚糖季铵盐复合膜等的制备，但很少利用壳聚糖季铵盐进行肺吸入给药系统的开发。利用壳聚糖季铵盐制备肺吸入微球给药系统，为生物医药领域研究提供了新思路。

本发明的优点在于：通过使用壳聚糖的季铵盐，改变了壳聚糖在中性或生理条件下壳聚糖会失去其正电性的缺陷，作为肺吸入微球具有明显的缓释作用，同时具有良好的生物相容性及降解性，从而扩大了其作为药物载体的应用范围，制备方法具有操作简便、工艺稳定、易于工业化生产的优点。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明。

附图说明

图1壳聚糖季铵盐肺吸入大孔微球的形态；

图2壳聚糖季铵盐肺吸入大孔微球的形态；

图3上颚纤毛的光镜图；

图4上颚纤毛的透射电镜图；

图5 埋植部位光镜照片。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，由以下成分制备而成：

壳聚糖季铵盐1g；

β-环糊精衍生物0.5 g；

致孔剂0.5g；

所述的壳聚糖季铵盐为分子量为1360kDa的高分子量的壳聚糖季铵盐，取代度为90%。

所述的β-环糊精衍生物为2-羟丙基-β-环糊精（Hp-β-CD）；

所述的致孔剂为丙二醇嵌段聚醚（F68）。

上述壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，包括以下步骤：

（1）根据上述配比要求配制各组分的混合溶液，称取真空干燥的Hp-β-CD，溶于200 mL的HTCC(分子量130万)蒸溜水，将F68溶于上述配制好的混合溶液中；

（2）经0.45 μｍ的微孔滤膜过滤，调节混合滤液质量浓度为0.5-1.5％；

（3）将过滤后的溶液经蠕动泵导入Büchi1290小型喷雾干燥器的双流向螺旋式喷嘴(直径0.7 mm)，控制气流量400 L/H，进风温度（进口温度）为120℃，出风温度（出口温度）为80℃，进样速度5ml/min，喷嘴流速400 L/h，喷雾干燥“一步”制成粉末微球；

（4）收集微球于盛有氯化钙的干燥器中放置72 h，备用，结果见图2。

结果：所述的壳聚糖季铵盐大孔微球粒径分布范围在0.5～10 μm之间，平均粒径为9.5μm，外观较圆整，粒径分布比较均匀，表面光滑，具有大孔结构，生物相容性良好。

实施例2

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，由以下成分制备而成：

壳聚糖季铵盐10 g；

β-环糊精5g；

致孔剂5g；

所述的壳聚糖季铵盐为分子量为1100kDa的高分子量的壳聚糖季铵盐，取代度为90%。

所述的致孔剂为碳酸氢铵。

上述壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，包括以下步骤：

（1）根据上述配比要求配制各组分的混合溶液，称取真空干燥的β-环糊精，溶于200 mL的HTCC(分子量130万)蒸溜水，将碳酸氢铵溶于上述配制好的混合溶液中；

（2）经0.45 μｍ的微孔滤膜过滤，调节混合滤液质量浓度为0.5-1.5％；

（3）将过滤后的溶液经蠕动泵导入Büchi290小型喷雾干燥器的双流向螺旋式喷嘴(直径0.7 mm)，控制气流量450 L/H，进风温度为130℃，出风温度为85℃，进样速度10ml/min，喷嘴流速500 L/h，喷雾干燥“一步”制成粉末微球；

（4）收集微球于盛有氯化钙的干燥器中放置72 h，备用，结果见图1。

结果：所述的壳聚糖季铵盐大孔微球粒径分布范围在0.5～10 μm之间，平均粒径为7.3μm，外观较圆整，粒径分布比较均匀，表面光滑，具有大孔结构，生物相容性良好。

实施例3

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，由以下成分制备而成：

壳聚糖季铵盐5 g；

β-环糊精衍生物2.5 g；

致孔剂 2.5 g；

所述的壳聚糖季铵盐为分子量为450kDa的中分子量的壳聚糖季铵盐，取代度为85%。

所述的β-环糊精衍生物为2-羟丙基-β-环糊精；

所述的致孔剂为聚乙二醇（PEG）。

上述壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，包括以下步骤：

（1）根据上述配比要求配制各组分的混合溶液，称取真空干燥的Hp-β-CD，溶于200 mL的HTCC(分子量130万)蒸溜水，将聚乙二醇溶于上述配制好的混合溶液中；

（2）经0.45 μｍ的微孔滤膜过滤，调节混合滤液质量浓度为0.5-1.5％；

（3）将过滤后的溶液经蠕动泵导入Büchi290小型喷雾干燥器的双流向螺旋式喷嘴(直径0.7 mm)，控制气流量500 L/H，进风温度为140℃，出风温度为90℃，进样速度15ml/min，喷嘴流速600 L/h，喷雾干燥“一步”制成粉末微球；

（4）收集微球于盛有氯化钙的干燥器中放置72 h，备用。

结果：所述的壳聚糖季铵盐大孔微球粒径分布范围在0.5～10 μm之间，平均粒径为5.8μm，外观较圆整，粒径分布比较均匀，表面光滑，具有大孔结构，生物相容性良好。

实施例4

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，由以下成分制备而成：

壳聚糖季铵盐3g；

β-环糊精1.5g；

致孔剂 1.5g；

所述的壳聚糖季铵盐为分子量为170kDa的中分子量的壳聚糖季铵盐，取代度为80%。

所述的致孔剂为氯仿。

上述壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，包括以下步骤：

（1）根据上述配比要求配制各组分的混合溶液，称取真空干燥的β-环糊精，溶于200 mL的HTCC(分子量130万)蒸溜水，将氯仿溶于上述配制好的混合溶液中；

（2）经0.45 μｍ的微孔滤膜过滤，调节混合滤液质量浓度为0.5-1.5％；

（3）将过滤后的溶液经蠕动泵导入Büchi290小型喷雾干燥器的双流向螺旋式喷嘴(直径0.7 mm)，控制气流量550 L/H，进风温度为160℃，出风温度为95℃，进样速度20ml/min，喷嘴流速700 L/h，喷雾干燥“一步”制成粉末微球；

（4）收集微球于盛有氯化钙的干燥器中放置72 h，备用。

结果：所述的壳聚糖季铵盐大孔微球粒径分布范围在0.5～10 μm之间，平均粒径为2.6μm，外观较圆整，粒径分布比较均匀，表面光滑，具有大孔结构，生物相容性良好。

实施例5

一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，由以下成分制备而成：

壳聚糖季铵盐3 g；

β-环糊精衍生物1.5g；

致孔剂 1.5g；

所述的壳聚糖季铵盐为分子量为170kDa的中分子量的壳聚糖季铵盐，取代度为73%。

所述的β-环糊精衍生物为2-羟丙基-β-环糊精；

所述的致孔剂为聚苯乙烯球。

上述壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，包括以下步骤：

（1）根据上述配比要求配制各组分的混合溶液，称取真空干燥的Hp-β-CD，溶于200 mL的HTCC(分子量130万)蒸溜水，将聚苯乙烯球溶于上述配制好的混合溶液中；

（2）经0.45 μｍ的微孔滤膜过滤，调节混合滤液质量浓度为0.5-1.5％；

（3）将过滤后的溶液经蠕动泵导入Büchi290小型喷雾干燥器的双流向螺旋式喷嘴(直径0.7 mm)，控制气流量600 L/H，进风温度为170℃，出风温度为100℃，进样速度25ml/min，喷嘴流速800 L/h，喷雾干燥“一步”制成粉末微球；

（4）收集微球于盛有氯化钙的干燥器中放置72 h，备用。

结果：所述的壳聚糖季铵盐大孔微球粒径分布范围在0.5～10 μm之间，平均粒径为0.9μm，外观较圆整，粒径分布比较均匀，表面光滑，具有大孔结构，生物相容性良好。

实施例6

纤毛毒性试验

蛙的上腭被广泛用于研究呼吸道粘膜毒性，本实验以中华大蟾蜍上腭粘膜纤毛动物模型，采用在体法，通过测定纤毛继续运动时间来评价对HTCC/Hp-β-CD的纤毛毒性。

2.1 材料与方法

实验动物：中华大蟾蜍，体重30～40 g，♀♂兼有，潍坊医学院动物中心提供。

实验仪器：CK2型倒置显微镜：日本OLYMPUS公司。

实验方法：取中华大蟾蜍18只，随机分为3组，每组6只:生理盐水组（NS）、壳聚糖季铵盐大孔微球组（MS I）。将蟾蜍仰卧固定在蛙板上，使口腔张开，用止血钳牵拉，防止闭合和吞咽。分别将MS I大孔微球 (20 mg)应用到蟾蜍上腭部位，以生理盐水(0.5 ml)作为对照，保留4 h，其间滴加生理盐水保持润湿。用眼科小剪刀分离上腭黏膜，取约3 mm×3 mm大小的上腭黏膜，生理盐水洗净血块及残留药物，黏膜面向上平铺于载玻片上，滴加生理盐水，轻轻盖上盖玻片，于40倍光学显微镜下观察黏膜纤毛的运动情况，随后搁置于加有少量纯化水的层析缸中，密闭，使水蒸气接近饱和状态，环境温度为20～25 ℃。以后每隔适当时间取出标本，显微镜观察，如纤毛继续运动则放回层析缸，直至纤毛运动停止，记录从给药开始至纤毛运动停止所持续的时间。显微镜及电镜观察纤毛形态。所得数据以均数±标准差（mean±SD）表示，SPSS13.0软件包进行统计学处理。采用双侧t检验，显著性检验水准（α）取双侧0.05，即P < 0.05为差异具有显著性意义。MS I大孔微球纤毛持续运动时间的测定结果见表1。

表1 壳聚糖季铵盐大孔微球纤毛持续运动时间结果(n=6, mean±SD)

与生理盐水组比较:  ^bp >0.05

2.2 结果与讨论 

蛙的上腭粘膜被广泛用来研究呼吸道粘膜的纤毛毒性，纤毛运动频率是最准确、重复性好、敏感性高的评价呼吸道粘膜毒性的方法，因为微球直接接触粘膜。MS I纤毛持续运动时间分别为553.33 min，纤毛运动频率为84.34%，成微球后生物相容性良好。光镜、透射电镜，见图3-4，观察生理盐水及微球MS I组对纤毛细胞无影响，纤毛细胞无异常。

实施例7 

肺泡灌洗液乳酸脱氢酶活性和总蛋白测定

一、试验材料

实验药品：考马斯亮兰试剂盒：南京建成生物工程研究所。戊巴比妥：广州化学试剂厂；Triton-X 100：中国医药（集团）上海化学试剂公司产品。

实验仪器：日立7080型全自动生化分析仪（日立公司，日本）；DYCP-31B型电泳仪：北京六一仪器厂。 

实验动物：健康雄性SD大鼠16只，体重160～180 g。大鼠饲养于室温通风柜内，每笼4只，标准饲料，自由饮水。

二、实验方法：

实验大鼠分为正常组，磷酸盐缓冲液（PBS）组，Triton-X 100组和壳聚糖季铵盐大孔微球组。大鼠用于肺泡灌洗液（BALF）用于中乳酸脱氢酶（LDH）测定。用0.3%戊巴比妥40 mg/kg麻醉，大鼠仰卧于鼠台上，固定，分别用1%碘酒及75%酒精消毒颈部皮肤，用手术刀纵向切开皮肤长约1 cm，盖上高温消毒过的中间开孔的纱布。暴露气管，PBS和Triton-X 100组分别用注射器将100 μl PBS（pH7.4），100 μl Triton-X 100 (0.25% Triton-X 100 PBS溶液)；正常组未作处理。壳聚糖季铵盐大孔微球(20 mg)。按每只大鼠的体重准确称取药粉并将其放入装置内，同时腹腔注射0.3%戊巴比妥钠40 mg/kg以麻醉大鼠，固定，暴露气管，作小的横形切口，将装置的前端软管轻柔推入气管，打开三通管，在大鼠吸气时将药粉用3 ml空气使药粉雾化吹入肺内。缝合气管，皮肤。术后精心喂养。24 h后，0.3%戊巴比妥40 mg/kg麻醉，心脏抽血处死，暴露气管，在环状软骨上用血管钳固定气管，其下作横形切口，置入连接注射器的硅胶管，固定。分3次缓慢注入PBS（pH7.4），每次注入量均为3 ml，反复按摩胸腔1 min后抽出。回吸收率﹥80%且无血液混入，否则应弃之。BALF置于离心管中，以1500 rpm/min在4℃下离心5 min。取上清液于无菌的冻存管，-70℃冻存，备用。日立7080型全自动生化分析仪待测LDH 及总蛋白测定。

所得数据以均数±标准差（mean±SD）表示，SPSS13.0软件包进行统计学处理。各组样本均先进行方差齐性检验，若方差齐同，采用One Way ANOVA统计分析，各组间显著性检验采用qNK检验，显著性检验水准（α）取双侧0.05，即p < 0.05为差异具有显著性意义的标准。

三、结果与讨论     

BALF中LDH和蛋白含量结果见表2。从表中可以看出，LDH活性滴入Triton-X 100 24 h后明显增加，与PBS和正常组比较差异有显著性（p < 0.05），而壳聚糖季铵盐大孔微球组虽然高于PBS组和正常组，但无统计意义（p > 0.05）。Triton-X 100组的蛋白质含量与PBS组、正常组和壳聚糖季铵盐大孔微球组比较，含量明显增加，差异有显著性（p < 0.05），壳聚糖季铵盐大孔微球亦高于PBS和正常组，差异有显著性（p < 0.05）；PBS和正常组比较差异无显著性（p > 0.05）。

表2 BALF中LDH活性和蛋白质含量测定结果（mean±SD）

﹡与 Triton-X 100 p 组比较<0.05

实施例8 

肌肉埋植实验

将聚合物微粒或纤维包埋在生物体内特定部位，随着埋植进程，不断取出包埋材料的组织，用光学或电子显微镜观察组织反应和材料的变化，直到材料消失和组织反应结束。这种研究还可评价材料的组织反应和生物相容性（张建湘等，1996）。本部分内容对所制备的微球进行埋植以评价其组织反应和生物相容性。

一、试验材料

实验药品：戊巴比妥钠：广州化学试剂厂。

实验仪器：全自动血液分析仪：XT-1800i，希森美康公司。日本；日立7080型全自动生化分析仪：日立公司，日本；LEICA 2135石蜡切片机，LEICA 1010组织脱水处理机及LEICA ST 4040全自动染色机：德国LEICA公司。

实验动物：健康雄性SD大鼠，体重160～180 g。大鼠饲养于室温通风柜内，标准饲料，自由饮水。

二、实验方法：

体内埋植：将大鼠30只随机分为壳聚糖季铵盐大孔微球（MS I）及正常对照组。用0.3%戊巴比妥40 mg/kg腹腔注射麻醉，大鼠俯卧于鼠台上，固定，背部剪毛形成4 cm×4 cm的手术视野，分别用1%碘酒及75%酒精消毒背部皮肤，用手术刀纵向切开皮肤长约1 cm，沿脊柱两侧等距离的两个肌肉位点，用止血钳分离脊柱两侧肌肉，暴露肌肉，形成足够空隙，分别将紫外线消毒的60 mg微球MS I植入大鼠背部；正常组未作处理。分层严密缝合。术后伤口每日2次用1%碘伏消毒，连续4天，观察伤后愈合情况。

取材和观察：各组分别于术后第1、2、4、6、8周，用0.3%戊巴比妥40 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰卧于鼠台上，固定。再俯卧于鼠台上，切开背部皮肤和筋膜，观察手术区肌肉组织的变化，将埋植周围组织整体取出，肉眼观察包膜的变化，10%的甲醛溶液中固定24 h，机器干燥，脱水，石蜡包埋，冠状切片，HE染色，制成病理切片。光镜下观察。

三、结果与讨论

组织学观察

早期（1w）镜下观察，MS I植入微球周围主要以成纤维细胞多，新生血管及肉芽组织，以中性粒细胞聚集为主，淋巴细胞较少，可见巨噬细胞，个别区域有吞噬异物的多核巨细胞。2周时微球各组可见炎性细胞逐渐减少，炎症减轻，淋巴细胞增多，形成淋巴滤泡，间质水肿。4周时，炎症继续减轻，炎性细胞明显减少，血管开始减少。6周时，可见微球各组少量散在的炎症细胞浸润，成纤维细胞和毛细血管明显减少，胶原纤维变细。8周时，各组炎症反应明显减轻，炎性细胞已很少见，纤维组织明显减少，埋植部位基本恢复正常，未见明显的结缔组织增生。组织学观察表明，随着时间的延长，微球引起的组织炎症逐渐减少并慢慢消失，这是由于微球埋植给药引起的炎症刺激作用逐渐消失, 壳聚糖季铵盐大孔微球具有良好的组织相容性。

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为重量百分数。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，其特征在于，由以下重量份的成分组成：

壳聚糖季铵盐1-10份；

β-环糊精或其衍生物0.5-5份；

致孔剂0.5-5份；

所述的壳聚糖季铵盐大孔微球的粒径为0.5～10 μm；

所述的壳聚糖季铵盐为高、中、低分子量壳聚糖季铵盐中的一种；

所述的高分子量的壳聚糖季铵盐为分子量1360kDa或1100 kDa的壳聚糖季铵盐的一种；

所述的中分子量的壳聚糖季铵盐为分子量450kDa或350kDa的壳聚糖季铵盐的一种；

所述的低分子量的壳聚糖季铵盐为170kDa或50kDa的壳聚糖季铵盐的一种。

2.根据权利要求1所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，其特征在于：所述的壳聚糖季铵盐的取代度为90%。

3.根据权利要求1所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，其特征在于：所述的壳聚糖季铵盐的取代度为85%。

4.根据权利要求1所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，其特征在于：所述的壳聚糖季铵盐的取代度为80%。

5.根据权利要求1所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，其特征在于：所述的壳聚糖季铵盐的取代度为73%。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，其特征在于：所述的β-环糊精衍生物为2-羟丙基-β-环糊精。

7.根据权利要求1-5中任意一项所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球，其特征在于：所述的致孔剂为丙二醇嵌段聚醚、碳酸氢铵、聚乙二醇、氯仿、聚苯乙烯球中的一种。

8.一种如权利要求1-7中任意一项所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）根据上述配比要求配制各组分的混合溶液；

其中，壳聚糖季铵盐1-10 g/ml、β-环糊精或其衍生物0.5-5 g/ml、致孔剂0.5-5 g/ml；

（2）将上述步骤（1）的混合溶液经0.45 μｍ的微孔滤膜过滤，调节混合滤液质量浓度为0.5-1.5％；

（3）将上述步骤（2）的滤液经蠕动泵导入喷雾干燥器，进行喷雾干燥，制成粉末微球；喷雾干燥条件为：喷雾干燥进口温度为120-170 ℃，出口温度为80-100 ℃，喷嘴流速400-800 L/h，进样速度5-25 ml/min，气流量400-600 L/h；

（4）将上述步骤（3）得到的微球收集。

9.根据权利要求1所述的用于肺吸入的壳聚糖季铵盐大孔微球的制备方法，其特征在于，所述的喷雾干燥条件为：气流量550 L/h，喷雾干燥进口温度为160℃，出口温度为95℃，喷嘴流速700 L/h，进样速度20ml/min。

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