CN102415993B

CN102415993B - 一种盐酸纳美芬药物组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN102415993B
Application number: CN 201110395606
Authority: CN
Inventors: 黄毅; 刘键; 黄层霄; 彭俊; 张宇玄; 熊昕
Original assignee: TONGYUAN PHARMACEUTICAL IND CO Ltd WUHAN
Current assignee: Zhuhai homologous Pharmaceutical Co., Ltd.
Priority date: 2011-12-03
Filing date: 2011-12-03
Publication date: 2013-01-09
Anticipated expiration: 2031-12-03
Also published as: CN102415993A

Abstract

本发明涉及盐酸纳美芬药物组合物其产品为盐酸纳美芬注射液，每毫升注射液由0.1mg或1mg盐酸纳美芬、9.0mg氯化钠、0.3mg乙二胺四乙酸二钠和调节注射液pH为3.75-3.85的盐酸及余量的注射用水按下法制备而成：将盐酸纳美芬、氯化钠和乙二胺四乙酸二钠混合后用注射用水溶解，搅拌均匀，加注射用水至全量；用0.1mol/L盐酸调药液pH值在3.75-3.85范围内；用0.22μm微孔滤膜过滤；121℃水浴灭菌15分钟，得到盐酸纳美芬注射液。本发明盐酸纳美芬药物组合物成分简单，其影响因素、长期稳定试验以及安全性试验表明，产品杂质少且稳定性安全性好。

Description

一种盐酸纳美芬药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及盐酸纳美芬药物组合物及其制备方法。

背景技术

阿片受体拮抗剂在临床上主要用于阿片类药物过量或中毒的急救、手术后的麻醉催醒、酒精中毒的急救、戒毒后的防复吸、休克的辅助治疗、酒精依赖的辅助治疗等。尚处于研究阶段的适应症包括减肥、戒烟、儿童孤独症、自残、间质性膀胱炎等等。随着临床用途的不断扩展，近几年阿片受体拮抗剂的用量急剧增加。

阿片受体拮抗剂国内现有品种，从药代动力学参数，可供选择的剂型及给药途径综合考虑，还不能完全满足临床的各种需要。例如，适合急救的注射液只有盐酸纳洛酮一个品种，而盐酸纳洛酮与常用阿片类镇痛药比较其作用时间过短，用于这类镇痛药中毒的患者时，须密切监视患者状况，通常需要重复给药。否则，将导致中毒症状的反复。同时，现有品种的口服生物利用度均较低，限制了较便利的口服给药方式，影响了一些适应症的使用。因此，研究人员一直致力于开发更理想的新一代阿片受体拮抗剂。

盐酸纳美芬是在上世纪七十年代深入研究纳洛酮及纳曲酮的过程中，在改造和优化母体化合物结构的基础上，针对现有阿片受体拮抗剂存在的不足，设计开发的一种化合物。盐酸纳美芬完全保留了纳洛酮、纳曲酮纯拮抗剂的特点，对阿片受体无激动作用，且不产生依赖性。与纳洛酮、纳曲酮相比又具有作用时间长、口服生物利用度高、用药剂量小，安全范围宽等优点，因此，盐酸纳美芬具有高效低毒的特点，成为新一代阿片受体拮抗剂中最有发展潜力的品种。

纳美芬为纳曲酮的亚甲基同类物，是一种可注射用的长效阿片类拮抗剂。纳美芬与阿片类激动剂竞争中枢神经系统中的μ、δ、к受体的作用位点，但本身并无激动作用。1995年已获美国FDA批准用于逆转阿片类药物的作用，包括呼吸抑制、昏睡和低血压。在急诊室还可用于已知或可疑的阿片类过量的救治。现有动物试验及临床试验证明本品还有治疗酒精依赖的作用。本品不良反应轻微，仅少量病人出现恶心和呕吐，比纳洛酮安全性高。因此，本品具有作用强度大、持续时间长、生物利用度高、副作用少等优点。

纳美芬与纳洛酮一样，均属于阿片受体纯拮抗剂，在无阿片样物质存在下，不产生其它任何副作用，在化学药中属于安全性较高的品种。与纳洛酮相比，纳美芬可供选择的给药途径更为广泛而且更加便利。纳美芬的口服固体制剂更适合非急症的治疗。早期的临床试验证明纳美芬的戒酒作用较纳曲酮更好，尤其适合有家族史的酗酒者，且未见纳曲酮在大剂量时出现的肝毒性副作用。纳美芬在小范围试验的适应症还有阿片依赖患者的快速脱瘾。

纳美芬（Nalmefene，ORF 11676）为一种阿片受体拮抗剂，与纳洛酮、纳曲酮结构相似，是6-亚甲基纳曲酮类似物，为一种长效阿片受体拮抗剂，不仅增强了纳美芬与阿片受体的结合能力，且增强了药物的口服生物利用度，作用时间与纳洛酮相比更持久。纳美芬经FDA批准用于手术后逆转阿片药物的作用，包括呼吸抑制、镇静和低血压，在急诊科还用于阿片药物过量或疑有过量的救治。

盐酸纳美芬注射液用于完全或部分翻转阿片类物质效应，包括由天然或人工合成的阿片类物质引起的呼吸抑制。

但是，研究发现纳美芬在溶液状态下长期放置可被氧化，生成2，2’-双纳美芬（即双聚体）。现有技术生产的盐酸纳美芬注射液室温放置，有较显著量的纳美芬被氧化成双聚体（Sataya S. Murthy 等人，Stabillity of revex，Nalmefene Hydrocholoride Injection in Injectable Solutions，J. Pharm. Biomed. Anal.. 15（1996），221-226）。

为了克服上述问题，研究者通过加入一种或多种组份，来减少或限制纳美芬的氧化。但是增加新的组份不仅会影响纳美芬的药用效果，而且会带来新的问题（如杂质含量及存放后的稳定性）。授权公告号CN101406474B的中国专利在背景技术中指出“参照CN895251中说明书中公开的技术方案制备的纳美芬注射液，虽然双聚体有所减少，但是其灭菌后产生极性更强的杂质，仍不能充分满足质量稳定性要求”，为此，CN101406474B专利提供了一种盐酸纳美芬注射液，其包括治疗有效量的盐酸纳美芬和药用载体，所述药用载体包括等渗调节剂、抗氧化剂和pH调节剂，并任选地含有螯合剂，其中所述抗氧化剂为色氨酸（参见该专利权利要求1）。该专利通过选用色氨酸作为抗氧化剂可以提高注射液的稳定性，经高温条件下放置10天及40℃加速试验6个月，样品外观性状、pH、有效成分含量及有关物质等均无明显变化；但未见超过一年的稳定性试验及数据。

在保证药物安全性、有效性的前提下，确保药物能在常温条件下的长期稳定性，可提高药物的使用价值和社会价值。

发明内容

本发明所要解决的问题就是提供一种质量稳定、成分简单的盐酸纳美芬药物组合物及其产品制备方法。

为实现上述目的，本发明提供了一种盐酸纳美芬注射液，每毫升注射液由0.1mg或1mg盐酸纳美芬、9.0mg氯化钠、0.1-0.3mg乙二胺四乙酸二钠和调节注射液pH为3.75-3.85的盐酸及余量的注射用水按下法制备而成：将盐酸纳美芬、氯化钠和乙二胺四乙酸二钠混合后用注射用水溶解，搅拌均匀，加注射用水至全量；用0.1mol/L盐酸调药液pH值在3.75-3.85范围内；用0.22μm微孔滤膜过滤；121℃水浴灭菌15分钟，得到盐酸纳美芬注射液。

所述乙二胺四乙酸二钠先用注射用水溶解，在70-80℃加热处理10-20分钟，然后与盐酸纳美芬和氯化钠混合。

申请人意外发现，在每毫升注射液含有0.1mg或1mg盐酸纳美芬盐酸纳美芬的注射液中加入0.3mg乙二胺四乙酸二钠，可以大大提高注射液的稳定性。申请人还发现，先将乙二胺四乙酸二钠加热处理后再与盐酸纳美芬和氯化钠混合，能取得更好的效果。

本发明临床用量用法：静脉注射或肌肉注射。术后使用的推荐剂量不超过1.0μg/kg、治疗阿片类药物过量的推荐剂量不超过1.5 mg/70 kg。

本发明盐酸纳美芬药物组合物成分简单，其影响因素、长期稳定试验以及安全性试验表明，产品杂质少且稳定性、安全性好。

具体实施方式

实施例1：

物料名称用量

盐酸纳美芬（以游离碱计） 0.1g

氯化钠 9.0g

乙二胺四乙酸二钠 0.3g

0.1mol/L盐酸至pH为3.8

注射用水适量

全量 1000ml

盐酸纳美芬注射液（1ml:0.1mg）：其制备方法包括下述步骤：

1）按处方量称取主药、氯化钠和乙二胺四乙酸二钠，加入注射用水总量的20%，搅拌使其溶解均匀，再加注射用水至全量；

2）用0.1mol/L盐酸调药液pH值在3.8，经0.02um微孔滤膜过滤至澄明。

3）半成品检验（pH、含量）合格后，分别灌封于安瓿中；

4）熔封；5）用121℃水浴灭菌15分钟，检漏，灯检，存放待检。

实施例2：

物料名称用量

盐酸纳美芬（以游离碱计） 2.0g

氯化钠 18.0g

乙二胺四乙酸二钠 0.6g

0.1mol/L盐酸至pH为3.80

注射用水适量

全量 2000ml

盐酸纳美芬注射液（2ml:2mg）：，其制备方法同实施例1：

实施例3

盐酸纳美芬注射液（1ml:0.1mg）处方同实施例1，其制备方法：

1) 按处方量称取乙二胺四乙酸二钠，加入注射用水总量的20%使其完全溶解后，在75℃加热处理15分钟得到乙二胺四乙酸二钠溶液；

2) 将处方量的主药和氯化钠加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，加入注射用水总量20%的注射用水搅拌至均匀，再加注射用水至全量；

3) 用0.1mol/L盐酸调药液pH值在3.8，经0.02um微孔滤膜过滤至澄明；

4) 半成品检验（pH、含量）合格后，分别灌封于安瓿中；

5) 熔封；6）用121℃水浴灭菌15分钟，检漏，灯检，存放待检。

实施例4

盐酸纳美芬注射液（处方同实施例2），其制备方法同实施例3。

比较例1：

物料名称用量

盐酸纳美芬（以游离碱计） 0.1g

氯化钠 9.0g

0.1mol/L盐酸至pH为3.8

注射用水适量

全量 1000ml

盐酸纳美芬注射液（1ml:0.1mg）其制备方法与实施例1类似，只是未加入乙二胺四乙酸二钠。

比较例2：处方（1ml:0.1mg）为盐酸纳美芬0.1g、氯化钠9.0g、色氨酸0.0025g、盐酸至pH为3.8，注射用水至1000ml。其制备方法：

1）按处方取盐酸纳美芬加入全量20%的注射用水，搅拌至完全溶解；

2）加入上述量的氯化钠、色氨酸，搅拌使溶解；再加注射用水至全量；

3）用0.1mol/L盐酸调药液pH值在3.8，经0.02um微孔滤膜过滤至澄明；

4）半成品检验（pH、含量）合格后，分别灌封于安瓿中；

5）熔封；6）用121℃水浴灭菌15分钟，检漏，灯检，存放待检。

比较例3：盐酸纳美芬注射液（1ml:0.1mg），其制备方法同实施例1：

物料名称用量

盐酸纳美芬（以游离碱计） 0.1g

氯化钠 9.0g

亚硫酸氢钠 0.02g

乙二胺四乙酸二钠 0.05g

0.1mol/L盐酸至pH为3.8

注射用水适量

全量 1000ml

比较例4：盐酸纳美芬注射液, 处方为盐酸纳美芬0.1g、氯化钠9.0g、色氨酸0.005g、乙二胺四乙酸二钠0.005g、盐酸至pH为3.8，注射用水至1000ml。其制备方法同比较例2。

一、稳定性考察试验

影响因素试验、长期稳定性试验的检查项目参照《中国药典》2005年版二部附录XIX C药物稳定性试验指导原则选定，主要项目的检查方法如下：

含量测定：照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录Ⅴ D）测定。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇－0.02mol/L磷酸氢二铵（用磷酸调节pH值至5.5）水溶液（42∶58）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按盐酸纳美芬峰计算应不低于2000。

测定法取经105℃干燥至恒重的盐酸纳美芬对照品约11mg（约相当于纳美芬10mg），精密称定，置100ml量瓶中，加稀释液适量使溶解，加水稀释至刻度，摇匀，吸取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取本品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

有关物质：取本品，作为供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。另精密称取盐酸双纳美芬对照品（C₄₂H₄₈N₂O₆·2HCl）适量，加流动相溶解并制成每1ml中含双纳美芬（C₄₂H₄₈N₂O₆）1.0μg的溶液，作为盐酸双纳美芬对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，精密量取对照溶液100μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分的峰高约为记录仪满量程的20%；再精密量取供试品溶液、空白溶液、对照溶液和盐酸双纳美芬对照品溶液各100μl，分别注入液相色谱仪，记录供试品溶液的色谱图至主峰保留时间的4倍。供试品溶液的色谱图中，如有与盐酸双纳美芬峰保留时间一致的色谱峰，其峰面积不得大于盐酸双纳美芬对照品溶液面积（1.0%），其它杂质中最大单杂质不得大于对照溶液峰面积的（0.5%），各杂质峰面积的总和不得大于对照溶液主峰面积（1.5%）。

、影响因素试验

影响因素试验数据

本发明实施例1-4和比较例1-4在光照（4500lx）及高温（60℃）条件下放置5天、10天，其澄明度、pH值和含量检查指标均没有明显变化。实施例1-4有关物质均没有明显变化（尤其是实施例3、实施例4变化更小，提示先将溶于水的乙二胺四乙酸二钠加热处理后再与盐酸纳美芬和氯化钠混合有利于注射液的稳定）；而比较例2、4的其他杂质（包括最大单杂，不包括盐酸双纳美芬杂质）变化较小，盐酸双纳美芬及总杂有一定程度增加；而比较例1、3变化显著，其中比较例1的盐酸双纳美芬、总杂均超过规定限制，比较例3的其他杂质超过规定限制（提示单位计量的注射液中加入0.05乙二胺四乙酸二钠可能会一定程度降低盐酸双纳美芬的含量，但注射液中同时加入亚硫酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠可能会导致其他杂质的增加）。

、长期稳定性试验

长期稳定性试验数据

本发明实施例1-4在长期试验条件下存放至24个月，各项检测指标均无明显变化（尤其是实施例3、实施例4，更显稳定，提示本发明注射液的技术方案中：先将溶于水的乙二胺四乙酸二钠加热处理后再与盐酸纳美芬和氯化钠混合，能给本发明带来显著的效果，且利于室温长期保存）；而比较例1-4在存放18-24个月期间其有关物质变化显著，除比较例2的18个月其他杂质和盐酸双纳美芬杂质含量接近规定限值外，比较例1-4的其他杂质、盐酸双纳美芬及总杂的含量均不同程度超过规定限值。

长期试验结果表明：本发明实施例1-4在室温保存至24个月内稳定，尤其实施例3、实施例4更显稳定。

二、本发明注射液的刺激性试验、过敏性和溶血试验：

【试验药物和材料】

1. 受试药物：

（1）供试品：盐酸纳美芬注射液，规格1ml:0.1mg，批号20090101，由山西普德药业有限公司提供。

（2）阴性对照品：0.9%氯化钠注射液，250mL/瓶，批号20100321，由江苏通用药业有限公司生产。

（3）马血清：100mL/瓶，批号201004，由中国医学科学院血液学研究所生产。

2. 实验动物：

（1）家兔，壹级，雌雄兼用，体重2.5-3.0kg，由北京市海淀兴旺实验动物中心提供，许可证号：SCXK(京)2006-0006。

（2）豚鼠，普通级，雌雄兼用，体重250-350g, 由北京市海淀兴旺实验动物中心提供，许可证号：SCXK(京)2006-0006。

【实验室条件】温度18-28℃，湿度55±15%，自然光照明，家兔单笼饲养，动物使用自动饮水器，给予固体饲料，购自中国医学科学院实验动物研究所繁育场。豚鼠6只一笼，每天定时喂饲新鲜蔬菜及苜蓿粉。所有笼具均定时更换、清洗、消毒。

【试验方法与结果】

1. 盐酸纳美芬注射液的血管刺激性实验

取体重2.5-3.0kg健康大耳白家兔8只，随机分两组（一组是对照组，一组是给药组），每组4只。给药组分别耳缘缓慢静脉注射本发明注射液1mL/kg，浓度为1mg/mL。保持药液在给药血管内流经或滞留约3分钟。对照组等速等量注射0.9%氯化钠注射液。每天给药一次，连续5天。给药期间每天肉眼观察给药局部血管有无血栓形成，周围组织有无红肿瘀血等炎症反应。于末次给药24小时后处死动物，迅速取其耳组织（从给药局部向心方向3cm取下），10%福尔马林固定，石蜡包埋，常规制片，HE染色，光镜下观察血管及周围组织形态学改变。

结果给药期间肉眼观察，各组兔耳缘静脉注射局部未见明显红、肿、瘀血等症状。给药组与对照组比较未见明显差别。结果见表1。

表1 血管刺激性实验肉眼观察记录

注：无血栓（-）小血栓1-4mm（+）中血栓5-14mm（++）大血栓15mm以上（+++）

无炎症变化（-）轻度炎症3cm范围（+）中度炎症范围1/3耳壳（++）

强度炎症范围1/2耳壳-全耳（+++）

组织学观察：给药组兔耳缘静脉血管壁完整，光滑。未见内皮损伤，无血栓形成及周围组织水肿、炎细胞浸润、炎症、坏死等病理变化。给药组与对照组比较无明显差别。

2. 盐酸纳美芬注射液的肌肉刺激性试验

取健康无伤家兔两只，雌雄兼用，分别在其左右两腿股四头肌内以无菌操作注入本发明注射液1mL/每侧。单次给药，注射后48小时处死动物，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射局部刺激反应，并按表2换算相应的反应级。

表2 刺激反应分级

反应级	刺激反应
		0	无明显变化
1	血管变化限于耳缘静脉，可能有坏死或栓塞也可见中度水肿，纤维蛋白沉积或出血
		2	变化类似1，水肿，纤维蛋白沉积，出血或炎细胞侵润扩展至半只耳壳
3	变化类似2，但耳缘静脉以外的静脉也有栓塞或/和坏死，水肿，纤维蛋白沉积，出血或炎细胞侵润扩展至半只耳壳以上，但栓塞坏死限于半只耳壳
		4	变化类似3，但病变扩展至2/3耳壳
5	变化类似4，但全耳发生弥漫性变化

结果给药部位和远离注射处血管组织均未见异常，观察评分均为0。表明盐酸纳美芬注射液局部刺激性符合静脉注射用药的检查要求。

3. 盐酸纳美芬注射液的过敏试验

取体重250-350g健康豚鼠18只，随机分为3组（供试品组、阴性对照组、阳性对照组）每组6只。连续3次，隔日腹腔注射浓度为1mg/mL的供试品0.5mL/只，0.9%氯化钠注射液（阴性对照）1mL/只和马血清（阳性对照）0.1mL/只进行致敏。然后将供试品组、阴性对照组和阳性对照组分别分成两组，每组3只，分别在第一次注射后第14日及21日静脉注射供试品液1mL/只、0.9%氯化钠注射液1mL/只和马血清0.2mL/只进行激发，在注射后15分钟内，观察注射药液的豚鼠是否出现过敏反应。如有竖毛、呼吸困难或咳嗽3声等现象中的两种或两种以上者，或有抽搐、虚脱或死亡等现象之一者，则判为阳性。阴性对照组不得出现过敏反应。而注射马血清的豚鼠应全部出现过敏反应，而且6只豚鼠中应有4只以上出现死亡。

结果，阴性对照液及盐酸纳美芬注射液两次静脉给药后15分钟内每组各6只豚鼠均未出现过敏反应，马血清两次静脉给药后1分钟内6只豚鼠全部出现咳嗽、呼吸抑制、抽搐直至死亡。见表3。

表3 盐酸纳美芬注射液过敏试验结果（n=6）

组别	致敏剂量	激发剂量	过敏反应情况
				阴性对照组	0.5mL/只	1mL/只	0/6
盐酸纳美芬注射液	0.5mL/只	1mL/只	0/6
				马血清阳性对照组	0.1mL/只	0.2mL/只	6/6

结果表明：在本试验条件下本发明盐酸纳美芬注射液过敏试验未出现全身过敏反应。

4. 盐酸纳美芬注射液溶血试验

4.1 2%红血球混悬液的制备

取兔血数毫升，放入盛有玻璃珠的三角瓶中振摇10分钟，除去纤维蛋白原、使成脱纤血液，加约10倍量的生理盐水，摇匀、离心，除去上清液，沉淀的红血球再用生理盐水如法洗涤2-3次，至上清液不呈红色为止。将所得红血球用生理盐水稀释成2%的混悬液，实验当天使用，用时摇匀。

4.2 试验操作

取试管7只，按表4配比量依次加入2%红血球混悬液和生理盐水，混匀后，于37℃恒温箱放置半小时，然后分别加入不同体积浓度为1mg/mL的本发明注射液（第6管为阴性对照管），摇匀后，置37±0.5℃恒温箱中。开始每隔15分钟观察一次，1小时后，每隔1小时观察一次，连续观察4小时，如溶液呈透明红色，即溶血。如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，表示有红细胞凝集作用。

表4 盐酸纳美芬注射液溶血试验配比量

4.3 试验结果：

7号管在加入了蒸馏水后不久溶液即出现溶血现象，而加入药液的各实验管（1-5管）和6号生理盐水管溶液在规定的时间内均未呈透明红色，也未有棕红色或红棕色絮状沉淀出现，表明本发明盐酸纳美芬注射液未出现溶血与凝集作用。结果见表5。

表5 盐酸纳美芬注射液溶血试验结果

注：+++ 完全溶血；++ 部分溶血； +凝集； -不溶血，也不发生凝集

从表中可见：本发明盐酸纳美芬注射液在4小时内未引起溶血或凝集反应。

由以上试验结果表明盐酸纳美芬注射液全身过敏试验合格，溶血性试验及局部血管、肌肉刺激性试验符合静脉注射用安全性检查的要求。

Claims

1.盐酸纳美芬注射液，每毫升注射液由0.1mg或1mg盐酸纳美芬、9.0mg氯化钠、0.3mg乙二胺四乙酸二钠和调节注射液pH为3.75-3.85的盐酸及余量的注射用水按下法制备而成：将盐酸纳美芬、氯化钠和乙二胺四乙酸二钠混合后用注射用水溶解，搅拌均匀，加注射用水至全量；用0.1mol/L盐酸调药液pH值在3.75-3.85范围内；用0.22μm微孔滤膜过滤；121℃水浴灭菌15分钟，得到盐酸纳美芬注射液；所述乙二胺四乙酸二钠先用注射用水溶解，在70-80℃加热10-20分钟，然后与盐酸纳美芬和氯化钠混合。

2.权利要求1所述盐酸纳美芬注射液的制备方法，包括以下步骤：将盐酸纳美芬、氯化钠和乙二胺四乙酸二钠混合后用注射用水溶解，搅拌均匀，加注射用水至全量；用0.1mol/L盐酸调药液pH值在3.75-3.85范围内；用0.22μm微孔滤膜过滤；121℃水浴灭菌15分钟，得到盐酸纳美芬注射液；所述乙二胺四乙酸二钠先用注射用水溶解，在70-80℃加热10-20分钟，然后与盐酸纳美芬和氯化钠混合。