CN102395678A

CN102395678A - 玉米抗茎腐病主效qtl、与主效qtl连锁的分子标记和应用

Info

Publication number: CN102395678A
Application number: CN201080025943XA
Authority: CN
Inventors: 徐明良; 杨琴; 郭延玲; 张东峰; 尹光明; 陈绍江
Original assignee: China Agricultural University
Current assignee: China Agricultural University
Priority date: 2009-12-14
Filing date: 2010-12-02
Publication date: 2012-03-28
Anticipated expiration: 2030-12-02
Also published as: WO2011072478A1; CN102395678B

Abstract

本发明公开了一种玉米抗茎腐病主效QTL、与主效QTL连锁的分子标记和应用。本发明提供的QTL，定位于第10号染色体上，位于分子标记SSR334和SSR58之间。本发明还提供了该主效QTL的59对分子标记。本发明提供的分子标记与茎腐病抗性在统计水平上显著相关，可以用于玉米抗茎腐病的分子标记辅助育种，产生抗性品种或改良玉米品种对茎腐病的抗性。

Description

玉米抗茎腐病主效 QTL、与主效 QTL连锁的分子标记和应用技术领域

本发明涉及一种玉米抗茎腐病主效 QTL、与主效 QTL连锁的分子标记和应用。背景技术

玉米茎腐病是世界各玉米产区普遍发生的重要土传病害，玉米进入乳熟期，整株叶片突然出现青灰色干枯，根部、茎基部呈现水渍状腐烂，致早枯，影响灌浆，降低千粒重。除了导致产量降低外，茎腐病还造成玉米倒伏，影响收获，同时对籽粒品质也有一定程度的影响。

玉米茎腐病病原比较复杂，病原菌的种类及优势小种问题，国内外报道不尽一致，我国主要的致病菌是禾谷镰刀菌 Fusarium graminearum Schw. ) 和肿囊腐霉菌 Pythium in f la tum Ma tth. ) (龚士琛，闫漱琴，张瑞英等（2004 ) 玉米抗茎腐病育种研究进展，黑龙江农业科学， 4: 28-30 ) 。禾谷镰刀菌的腐生菌丝体及厚壁孢子在作物残茬上越冬，在玉米播后至抽雄吐丝期不断由根系侵入，病菌在植株体内蔓延扩展，玉米乳熟期达显症高峰，高温、高湿利于发病（Parry DW， Jenkinson P, McLeod L (1995) Fusarium ear bl ight (scab) in smal l grain cereals-a review. Plant Pathol 44 : 207 - 38； Ledencan T, Simic D, Brkic I, Jambrovic A, Zdunic Z (2003) Resistance of maize inbreds and their hybrids to Fusarium stalk rot. Czech J. Genet Plant Breed 39 : 15 - 20)。

目前在我国，玉米茎腐病已经发展为玉米生产中的第一大病害。江苏、河南、山东、四川和广西均有发生。近年四川省、河南省新乡地区发病严重。黄淮地区由于秋涝严重，造成茎腐病发病严重，给当地造成严重损失。经调查一般年份发病率 10%〜20%，个别年份和地区可达 70%以上；减产 25%〜30%，重者甚至绝收。由于玉米茎腐病性状极为复杂，受环境影响很大，从而导致抗性测定的误差增大，因此，开展对玉米茎腐病的遗传基础研究相当困难。鉴于玉米茎腐病对经济和生态都有很重要的影响，培育抗病品种成为控制病害流行的有效手段，可以将多个抗茎腐病 QTL 导入优良的自交系改良品种抗性。

玉米对禾谷镰刀菌茎腐病的抗性机制，有两种不同的看法。一般认为玉米对茎腐病的抗性是数量性状，由多个基因控制。 Kappelmen和 Thompson (Kappelman AJ， Thompson DL ( 1966 ) Inheritance of resistance to Diplodia stalk-rot in corn. Crop Sci 6 : 288-290 ) 的研究结果表明，玉米对茎腐病的抗性受少数基因控制，加性效应和显性效应均起作用。 Hooker ( Hooker, AL (1978) Genetics of disease resistance in maize, p. 319 - 322. In : Maize Breeding and Genetics, Walden, D. B. (Ed. ) . John Wi ley & Sons, New York. ) 也认为玉米对茎腐病的抗性是受多基因控制的。 Ρέ等（Ρέ ME, Gianfranceschi L， Taramino G， et al. (1993) Mapping quantitative trait loci (QTLs) for resistance to Gibberel la zeae infection in maize. Mol Gen Genet 241 : 11 -丄 6)利用高抗茎腐病的自交系 B87 和高感自交系 33-16组配的 150个 F_{2: 3}家系，通过接种禾谷镰刀菌鉴定性状，定位了 5 个抗茎腐病的 QTL位点，分别位于 1、 3、 4、 5和 10号染色体上。也有人认为玉米对茎腐病的抗性可能受一对完全显性单基因控制。杨典洱等认为玉米茎腐病的抗性受单基因控制，并将其定位在 6号染色体。

发明公开

本发明的目的是提供玉米抗茎腐病主效 QTL、与主效 QTL连锁的分子标记和应用。本发明提供的玉米抗茎腐病的主效数量性状基因位点（主效 QTL) qRfgl, 定位于第 10号染色体上，位于分子标记 SSR334和 SSR58之间（物理距离约为 500Kb ) 。

本发明提供的与玉米抗茎腐病的主效数量性状基因位点连锁的分子标记（引物对），为标记 CAPS372、标记 CAPS353、标记 CAPS401、标记 CAPS402、标记 CAPS429、标记 SSR35、标记 SSR36、标记 SSR44、标记 SSR46、标记 SSR47、标记 SSR77、标记 SSR85、标记 SSR87、标记 SSR90、标记 SSR93、标记 SSR100、标记 SSR198、标记 SSR114、标记 SSR118、标记 SSR120、标记 SSR334、标记 SSR337、标记 SSR343、标记 SSR344、标记 SSR58、标记 SSR239、标记 SSR243、标记 SSR248、标记 SSR255、标记 SSR256、标记 SSR106、标记 SSR105、标记 SSR300、标记 SSR30 U标记 SSR302、标记 SSR12、标记 SSR14、标记 SSR285、标记 SSR179、标记 SSR261、标记 SSR152、标记 SSR147、标记 SSR156、标记 SSR164、标记 SSR172、标记 SSR173、标记 STS01、标记 STS378、标记 STS373、标记 STS400、标记 STS414、标记 STS416、标记 STS444、标记 STS446、标记 STS434、标记 STS02、标记 STS03、标记 STS04或标记 STS06 ; 所述标记 CAPS372由序列表的序列 1所示 DNA和序列表的序列 2所示 DNA组成。所述标记 CAPS353由序列表的序列 3所示 DNA和序列表的序列 4所示 DNA组成。所述标记 CAPS401由序列表的序列 5所示 DNA和序列表的序列 6所示 DNA组成。所述标记 CAPS402由序列表的序列 7所示 DNA和序列表的序列 8所示 DNA组成。所述标记 CAPS429由序列表的序列 9所示 DNA和序列表的序列 10所示 DNA组成。所述标记 SSR35由序列表的序列 1 1所示 DNA和序列表的序列 12所示 DNA组成。所述标记 SSR36由序列表的序列 13所示 DNA和序列表的序列 14所示 DNA组成。所述标记 SSR44 由序列表的序列 15所示 DNA和序列表的序列 16所示 DNA组成。所述标记 SSR46由序列表的序列 17所示 DNA和序列表的序列 18所示 DNA组成。所述标记 SSR47由序列表的序列 19所示 DNA和序列表的序列 20所示 DNA组成。所述标记 SSR77由序列表的序列 21所示 DNA和序列表的序列 22所示 DNA组成。所述标记 SSR85由序列表的序列 23所示 DNA和序列表的序列 24所示 DNA组成。所述标记 SSR87由序列表的序列 25所示 DNA和序列表的序列 26所示 DNA组成。所述标记 SSR90由序列表的序列 27所示 DNA和序列表的序列 28所示 DNA组成。所述标记 SSR93由序列表的序列 29所示 DNA和序列表的序列 30所示 DNA组成。所述标记 SSR100由序列表的序列 31所示 DNA和序列表的序列 32所示 DNA组成。所述标记 SSR198由序列表的序列 33所示 DNA和序列表的序列 34所示 DNA组成。所述标记 SSR114由序列表的序列 35所示 DNA和序列表的序列 36所示 DNA组成。所述标记 SSR118由序列表的序列 37所示 DNA和序列表的序列 38所示 DNA组成。所述标记 SSR120由序列表的序列 39所示 DNA和序列表的序列 40所示 DNA组成。所述标记 SSR334由序列表的序列 41所示 DNA和序列表的序列 42所示 DNA组成。所述标记 SSR337由序列表的序列 43所示 DNA和序列表的序列 44所示 DNA组成。所述标记 SSR343由序列表的序列 45所示 DNA和序列表的序列 46所示 DNA组成。所述标记 SSR344由序列表的序列 47所示 DNA和序列表的序列 48所示 DNA组成。所述标记 SSR58由序列表的序列 49 所示 DNA和序列表的序列 50所示 DNA组成。所述标记 SSR239由序列表的序列 51 所示 DNA和序列表的序列 52所示 DNA组成。所述标记 SSR243由序列表的序列 53 所示 DNA和序列表的序列 54所示 DNA组成。所述标记 SSR248由序列表的序列 55 所示 DNA和序列表的序列 56所示 DNA组成。所述标记 SSR255由序列表的序列 57 所示 DNA和序列表的序列 58所示 DNA组成。所述标记 SSR256由序列表的序列 59 所示 DNA和序列表的序列 60所示 DNA组成。所述标记 SSR106由序列表的序列 61 所示 DNA和序列表的序列 62所示 DNA组成。所述标记 SSR105由序列表的序列 63 所示 DNA和序列表的序列 64所示 DNA组成。所述标记 SSR300由序列表的序列 65 所示 DNA和序列表的序列 66所示 DNA组成。所述标记 SSR301 由序列表的序列 67 所示 DNA和序列表的序列 68所示 DNA组成。所述标记 SSR302由序列表的序列 69 所示 DNA和序列表的序列 70所示 DNA组成。所述标记 SSR12由序列表的序列 71所示 DNA和序列表的序列 72所示 DNA组成。所述标记 SSR14由序列表的序列 73所示 DNA和序列表的序列 74所示 DNA组成。所述标记 SSR285由序列表的序列 75所示 DNA和序列表的序列 76所示 DNA组成。所述标记 SSR179由序列表的序列 77所示 DNA和序列表的序列 78所示 DNA组成。所述标记 SSR261 由序列表的序列 79所示 DNA和序列表的序列 80所示 DNA组成。所述标记 SSR152由序列表的序列 81所示 DNA和序列表的序列 82所示 DNA组成。所述标记 SSR147由序列表的序列 83所示 DNA和序列表的序列 84所示 DNA组成。所述标记 SSR156由序列表的序列 85所示 DNA和序列表的序列 86所示 DNA组成。所述标记 SSR164由序列表的序列 87所示 DNA和序列表的序列 88所示 DNA组成。所述标记 SSR172由序列表的序列 89所示 DNA和序列表的序列 90所示 DNA组成。所述标记 SSR173由序列表的序列 91所示 DNA和序列表的序列 92所示 DNA组成。所述标记 STS01由序列表的序列 93所示 DNA 和序列表的序列 94所示 DNA组成。所述标记 STS378由序列表的序列 95所示 DNA 和序列表的序列 96所示 DNA组成。所述标记 STS373由序列表的序列 97所示 DNA 和序列表的序列 98所示 DNA组成。所述标记 STS400由序列表的序列 99所示 DNA 和序列表的序列 100所示 DNA组成。所述标记 STS414由序列表的序列 101所示 DNA 和序列表的序列 102所示 DNA组成。所述标记 STS416由序列表的序列 103所示 DNA 和序列表的序列 104所示 DNA组成。所述标记 STS444由序列表的序列 105所示 DNA 和序列表的序列 106所示 DNA组成。所述标记 STS446由序列表的序列 107所示 DNA 和序列表的序列 108所示 DNA组成。所述标记 STS434由序列表的序列 109所示 DNA 和序列表的序列 110所示 DNA组成。所述标记 STS02由序列表的序列 111所示 DNA 和序列表的序列 112所示 DNA组成。所述标记 STS03由序列表的序列 113所示 DNA 和序列表的序列 114所示 DNA组成。所述标记 STS04由序列表的序列 115所示 DNA 和序列表的序列 116所示 DNA组成。所述标记 STS06由序列表的序列 117所示 DNA 和序列表的序列 118所示 DNA组成。

本发明还保护辅助筛选抗茎腐病玉米的专用引物，包括如下标记（引物对）中的至少一对：所述标记 CAPS372、所述标记 CAPS353、所述标记 CAPS401、所述标记 CAPS402、所述标记 CAPS429、所述标记 SSR35、所述标记 SSR36、所述标记 SSR44、所述标记 SSR46、所述标记 SSR47、所述标记 SSR77、所述标记 SSR85、所述标记 SSR87、所述标记 SSR90、所述标记 SSR93、所述标记 SSR100、所述标记 SSR198、所述标记 SSR114、所述标记 SSR118、所述标记 SSR120、所述标记 SSR334、所述标记 SSR337、所述标记 SSR343、所述标记 SSR344、所述标记 SSR58、所述标记 SSR239、所述标记 SSR243、所述标记 SSR248、所述标记 SSR255、所述标记 SSR256、所述标记 SSR106、所述标记 SSR105、所述标记 SSR300、所述标记 SSR301、所述标记 SSR302、所述标记 SSR12、所述标记 SSR14、所述标记 SSR285、所述标记 SSR179、所述标记 SSR261、所述标记 SSR152、所述标记 SSR147、所述标记 SSR156、所述标记 SSR164、所述标记 SSR172、所述标记 SSR173、所述标记 STS01、所述标记 STS378、所述标记 STS373、所述标记 STS400、所述标记 STS414、所述标记 STS416、所述标记 STS444、所述标记 STS446、所述标记 STS434、所述标记 STS02、所述标记 STS03、所述标记 STS04 和所述标记 STS06。所述茎腐病具体可为由禾谷镰刀菌 Fusariwn graminearwn Schw. ) 引起的茎腐病。

所述专用引物在制备抗茎腐病玉米的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。本发明还保护一种辅助筛选抗茎腐病玉米的试剂盒，包括以上任一所述专用引物。

本发明提供的辅助筛选抗茎腐病玉米的方法，包括如下（1 ) 至（59 ) 中任一所述的步骤：

( 1 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 CAPS372进行 PCR扩增，如果得到 697bp且能被限制性内切酶 PvuI I酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 2 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 CAPS353进行 PCR扩增，如果得到 435bp且不能被限制性内切酶 Cfrl酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 3 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 CAPS401进行 PCR扩增，如果得到 541bp且能被限制性内切酶 Bgl l酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 4 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 CAPS402进行 PCR扩增，如果得到 719bp且能被限制性内切酶 Mnl l酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 5 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 CAPS429进行 PCR扩增，如果得到 531bp且能被限制性内切酶 Avail酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(6) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR35进行 PCR扩增，如果得到 150bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(7) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR36进行 PCR扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(8) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR44进行 PCR扩增，如果得到 230bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(9) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR46进行 PCR扩增，如果得到 120bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(10) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR47进行 PCR扩增，如果得到 260bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(11) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR77进行 PCR扩增，如果得到 230bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(12) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR85进行 PCR扩增，如果得到 150bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(13) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR87进行 PCR扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(14) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR90进行 PCR扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(15) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR93进行 PCR扩增，如果得到 230bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(16) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR100进行 PCR扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(17) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR198进行 PCR扩增，如果得到 166bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(18) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR114进行 PCR扩增，如果得到 240bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(19) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR118进行 PCR扩增，如果得到 225bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(20) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR120进行 PCR扩增，如果得到 254bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(21) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR334进行 PCR扩增，如果得到 301bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(22) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR337进行 PCR扩增，如果得到 96bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(23) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR343进行 PCR扩增，如果得到 244bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(24) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR344进行 PCR扩增，如果得到 164bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(25) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR58进行 PCR扩增，如果得到 120bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(26) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR239进行 PCR扩增，如果得到 188bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(27) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR243进行 PCR扩增，如果得到 294bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(28) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR248进行 PCR扩增，如果得到 253bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(29) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR255进行 PCR扩增，如果得到 207bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(30) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR256进行 PCR扩增，如果得到 218bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(31) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR106进行 PCR扩增，如果得到 llObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(32) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR105进行 PCR扩增，如果得到 llObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(33) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR300进行 PCR扩增，如果得到 215bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(34) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR301进行 PCR扩增，如果得到 210bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(35) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR302进行 PCR扩增，如果得到 202bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(36) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR12进行 PCR扩增，如果得到 236bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(37) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR14进行 PCR扩增，如果得到 210bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(38) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR285进行 PCR扩增，如果得到 370bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(39) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR179进行 PCR扩增，如果得到 270bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(40) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR261进行 PCR扩增，如果得到 173bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(41) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR152进行 PCR扩增，如果得到 150bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； (42) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR147进行 PCR扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(43) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR156进行 PCR扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(44) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR164进行 PCR扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(45) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR172进行 PCR扩增，如果得到 260bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(46) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR173进行 PCR扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(47) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS01进行 PCR扩增，如果得到 500bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(48) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS378进行 PCR扩增，如果得到 567bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(49) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS373进行 PCR扩增，如果得到 177bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(50) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS400进行 PCR扩增，如果得到 292bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(51) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS414进行 PCR扩增，如果得到 396bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(52) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS416进行 PCR扩增，如果得到 180bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(53) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS444进行 PCR扩增，如果得到 669bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(54) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS446进行 PCR扩增，如果得到 584bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(55) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS434进行 PCR扩增，如果得到 429bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(56) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS02进行 PCR扩增，如果得到 1500bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(57) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS03进行 PCR扩增，如果得到 300bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(58) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS04进行 PCR扩增，如果得到 1200bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(59) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 STS06进行 PCR扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。

所述待测玉米可为高抗玉米茎腐病的自交系 1145和高感茎腐病的自交系 Y331 杂交衍生的后代，具体可为如下 10个近等基因系： NIL1、 NIL2、 NIL3、 NIL4、 NIL5、 NIL6、 NIL7、 NIL8、 NIL9、 NIL10。上述 10个近等基因系是通过如下方法制备的：以高抗玉米茎腐病的自交系 1145为供体亲本，高感茎腐病的自交系 Y331为受体亲本，杂交得到 F1代植株；将 F1代植株（供体亲本）与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到植株；用所述标记 SSR58检测植株，选择 10株该位点带型为杂合的植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到 10个对应的 BCy^家系；用所述标记 SSR58检测 BCy^家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的 BCgFi家系；用所述标记 SSR58检测 BCgFi家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的 BC^Fi家系；用所述标记 SSR58检测家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的 BCsFi家系；用所述标记 SSR58检测 BCsFi家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的 BCs 植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的 BCeFi家系；用所述标记 SSR58检测 BC^Fi家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的 BCe 植株进行自交，得到对应的 BC₆F₂家系；用所述标记 SSR58检测 BC₆F₂家系，每个系选择 1株该位点带型与 1145—致的 BC₆F₂ 植株进行自交，得到对应的 BC₆F₃家系，即为最终获得的 10个近等基因系，分别命名为 NIL1、 NIL2、 NIL3、 NIL4、 NIL5、 NIL6、 NIL7、 NIL8、 NIL9、 NIL10。用所述 SSR58检测植株即以待测玉米的基因组 DNA为模板，用所述标记 SSR58进行 PCR扩增，显示 l lObp和 120bp条带的植株为带型为杂合的植株。所述茎腐病具体可为由禾谷镰刀菌 ( Fu sari urn graminearum Schw. ) 弓 |起的莲腐病。

所述专用引物可用于玉米育种。具体来说，先采用上述方法鉴定出的候选的抗茎腐病玉米，将所述候选的抗茎腐病玉米进行育种。

本发明旨在揭示玉米对禾谷镰刀菌茎腐病的抗性遗传位点，以及提高玉米对茎腐病抗性的遗传改良方法。

附图说明

图 1为两个亲本、 F₁及BC₁F₁群体抗性分布； A: 1145 ； B_: Y331 ; C_: 1145/Y331 F_{i ;} D: 群体。

图 2为利用 BC BCf BC^重组单株对 qRfgl QTL扫描结果。

图 3为 qRfgl的精细定位； A : 24个 BC_{3 :4}家系将 qRfgl限定到 umc2349和 phi062 之间； B : 34个 BC₄F_1:2家系将 qRfgl限定到 STS01和 umcl246之间； C : 38个 BC_4:5家系将 qRfgl限定到 SSR118和 SSR248之间； D : 41个 BC_{5 :6}家系将 qRfgl限定到 SSR334 和 SSR58之间，物理距离为 500kb; 注： 1 : 实心的矩形表示杂合等位基因区段，空心的矩形表示纯合的 Y331等位基因区段； 2: 小写字母 a表示分析每个基因型组抗性时统计所用的分子标记； 3: 小写字母 b表示统计每个基因型组抗性时所用的后代群体大小。图 4为 qRfgl的效应验证。

图 5为与主效 QTL连锁的分子标记检测 1145衍生的近等基因系的电泳结果图；图 5-1〜图 5-45分别表示分子标记 CAPS372、标记 CAPS353、标记 CAPS401、标记 CAPS402、标记 SSR35、标记 SSR44、标记 SSR46、标记 SSR47、标记 SSR77、标记 SSR85、标记 SSR93、标记 SSR100、标记 SSR198、标记 SSR118、标记 SSR120、标记 SSR334、标记 SSR343、标记 SSR344、标记 SSR58、标记 SSR239、标记 SSR243、标记 SSR248、标记 SSR255、标记 SSR106、标记 SSR300、标记 SSR301、标记 SSR302、标记 SSR12、标记 SSR14、标记 SSR285、标记 SSR179、标记 SSR261、标记 SSR152、标记 SSR156、标记 SSR164、标记 SSR172、标记 SSR173、标记 STS01、标记 STS378、标记 STS373、标记 STS400、标记 STS02、标记 STS03、标记 STS04和标记 STS06检测近等基因系的电泳结果图；每张电泳图中泳道自左至右依次为亲本 1145、亲本 Y331、近等基因系 NIL1、 NIL2、 NIL3、 NIL4。实施发明的最佳方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均购自常规生化试剂公司。

高抗玉米茎腐病的自交系 1145 : 获自国家农作物种质保存中心，编号 0L010203。高感茎腐病的自交系 Y331 : 获自国家农作物种质保存中心，编号 0L010345。禾谷镰刀菌 Fusari應 graminear應 Sc m. ：中国农业微生物菌种保藏管理中心 (Agricultural Culture Col lection of China英文缩写 ACCC)，菌株保藏编号 36249，为中国北方地区优势茎腐病致病菌。

以下实施例中接种试验的步骤如下：

( 1 )将禾谷镰刀菌分生孢子接种在 PDA培养基上，于 25°C培养 5〜7天，至菌丝体长满整个平板，即可保存于 4°C待用。

( 2 ) 选用玉米籽粒作为禾谷镰刀菌再扩繁的培养基。首先，将清洗后的玉米籽粒于水中浸泡约 20h，在普通铝锅内煮 lh，晾干；其次，将晾干后的籽粒装入耐高温高压的聚丙烯塑料袋中于 121 °C灭菌 20min; 最后，待灭菌的籽粒冷却至室温后，将长满菌丝体的平板切成小块放入其中，混匀，于 25°C暗培养约 15天，菌丝体即长满整个籽粒培养基。

( 3 ) 在玉米抽雄期，采用土埋伤根法进行人工接种，实施例中的每株材料都进行接种鉴定。接种前，将培养好的禾谷镰刀菌玉米籽粒培养基倒在一起混匀，以保证接种的一致性。接种时，在距离植株约 5cm处竖直向下刨开土壤，切断部分根系，埋入约 70g籽粒培养基。接种后灌溉，使田间保持一定的湿度，病原菌可利用株间的湿度迅速繁殖、侵染。

调查分三次进行，在接种后 30天左右进行第一次调查，每隔一星期调查一次。典型的茎腐病症状表现为：茎基部变褐变软，易倒伏，果穗倒挂，叶片青枯或黄枯，导致整个植株早衰或死亡。实施例中，结合调查时期和典型的茎腐病症状，将植株的茎腐病抗性分为 1〜6级，分级标准如下： 6级：第一次调查感病死亡； 5级：第二次调查感病死亡； 4级：第二次调查叶片青枯或黄枯，第三次调查茎基部变软，植株倒伏； 3级：第二次调查植株完全健康，第三次调查叶片有部分青枯或黄枯，茎基部变褐，但未变软； 2级：第二次调查植株完全健康，第三次调查叶片有部分青枯或黄枯，茎基部健康； 1级：第三次调查植株完全健康。

实施例 1、玉米抗茎腐病主效 QTL及其与主效 QTL连锁的分子标记的发现实施例 1中所采用的植物材料如下：高抗玉米茎腐病的自交系 1145;高感茎腐病的自交系 Y331 ; 高抗玉米茎腐病的自交系 1145 (供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）杂交得到的 F1代植株；将 F1代植株自交得到 F2代植株；将 F2代植株诱导单倍体，用秋水仙素进行加倍，最终得到 41个 DH系； F1代植株（供体亲本) 和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到的植株（2004年共获得 500 株）；选择高抗（抗性为 1级）的植株（供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到群体（2005年共获得 1035株）； 19个重组单株（供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到群体（2006年共获得 2182株）； 24个重组单株（供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到 BCA群体（2007年共获得 2664株）； 34个 BC 重组单株自交得到 BC₄F₂ 群体（2007年共获得 2667株）； 38个重组单株（供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到群体（2008年共获得 4113株）； 41个重组单株（供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到群体（2009 年共获得 4035株）。

一、表型分析

选用高抗玉米茎腐病的自交系 1145 (供体亲本）、高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）、高抗玉米茎腐病的自交系 1145 (供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）杂交得到的 F1代植株、高抗玉米茎腐病的自交系 1145 (供体亲本）和高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）杂交组配回交群体 ^(^^分别进行多年单点（北京）的茎腐病抗性鉴定（接种试验）。

1145表现为完全免疫， Y331感病率为 80% (图 1A和 1B) 。在调查的 73个植株中， 83. 6%表现为与 1145抗性水平完全一样的免疫水平， 13. 7%表现为轻微的抗病症状，另外 2. 7%表现为中级的抗病类型（图 1C) 。由于 1145对禾谷镰刀菌茎腐病是完全免疫的，推测在杂合背景下，抗性是由不完全显性基因控制的。共有 500个植株进行了接种鉴定分级，性状分布如图 1D所示，抗病植株与感病植株的比例不符合 1 : 1，因此也表明抗性可能是由多个位点控制的。

每个关键的重组单株的后代均进行性状鉴定。从 2006年到 2009年，统计的抗病组的材料感病率的范围是 18. 24% - 42. 82%,感病组的材料感病率的范围是 47. 38% - 89. 03%，非重组的阳性对照材料和阴性对照材料也表现出类似的感病率范围，这也说明玉米对镰刀菌茎腐病的抗性受年份影响，是一个复杂的数量性状。

二、构建连锁图谱

从 500个植株中，随机选择 47个高抗茎腐病的材料和 47个高感茎腐病的材料。选择极端性状的个体进行定位可以提高对主效 QTL的检测效率。取玉米苗期叶片用于提取 DNA。 PCR产物在 6%的聚丙烯酰胺胶上分离，银染显色。 SSR引物的名称及序列信息来自数据库 Maize GDB (http : //www. maizegdb. org) 。在亲本间共分析了 630对 SSR引物，其中 118对有明显多态性，用这 118对引物检测 94个定位群体的基因型。其中， umcl800和 umcl257在群体中表现出严重的偏分离，这两个标记没有整合到染色体区段中，因此也不会影响 QTL分析的结果。

用 MAPMAKER 3. Ob进行连锁图谱构建。使用 "group "指令进行两点分析，推测在 L0D值大于 3. 0时可能的连锁群。参照 Maize GDB部分已经定位的标记顺序，利用三点和多点分析构建连锁群的框架结构，采用 " try"和 " compare "命令将没有连锁的分子标记整合到连锁群的框架结构中。通过多点分析相邻两标记间的重组率，利用 Kosambi函数将重组值转换为图距单位（cM) 。构建了包含 116个 SSR分子标记的连锁图谱，总遗传距离为 1633 cM，分子标记平均遗传距离为 14cM。

三、抗禾谷镰刀菌茎腐病的 QTL分析

利用 QTL cartographer v2. 5软件，采用复合区间作图法 ( Composite Interval Mapping ， CIM)进行 QTL定位和效应估计（Zeng， 1994)。根据 Churchi l l和 Doerge 的方法，设定 QTL的显著水平为 0. 05，模拟运算 1000次。 L0D值为 3. 1。共检测到 2个 QTL与镰刀菌茎腐病抗性显著相关，分布在第 1、 10染色体上。主效 QTU ^/?/^) 位于第 10染色体 bins 10. 03/4，可以解释表型变异的 36. 3%；另一个 QTL ( _QRfg2) 位于第解释表型变异 o

1染色体 bins 1. 09/10，可的 8. 9%。两 o个 QTL的增效基因均来自于 1145 (表 1)。

群体定位的抗镰刀菌茎腐病 QTL结果

为了验证主效 QTL，利用卡方测验比较主效 QTL区段内每个分子标记杂合基因型的频率在抗感群之间的差异。如果抗病群中的杂合基因型频率显著高于感病群体中杂合基因型的频率，则表明在这个分子标记附近存在一个推测的 QTL位点。结果如表 2所示，位于主效 QTL区段的每一个分子标记其 P-value值均小于 0. 0001 , 这表明此区段存在一个抗茎腐病的 QTL位点。

表 2 主效 QTL ^/？区段各分子标记基因型与抗性相关性分析

Bins 杂合体比例（％)

分子标记 x 2 P-value

抗病群体感病群体

10. 03 72. 92 25 20. 2017 〈0. 0001

10. 03 umcl336 70. 83 16. 6667 〈0. 0001

10. 03 umc2349 77. 08 25 26. 053 〈0. 0001

10. 03 umc2336 68. 75 22. 92 20. 3077 〈0. 0001

10. 04 umcl246 77. 08 35. 42 16. 9312 〈0. 0001

10. 04 phi062 66. 67 27. 08 〈0. 0001

10. 04 umcl053 68. 75 22. 92 20. 3077 〈0. 0001

10. 04 umc2350 72. 92 27. 08 〈0. 0001 10. 04 umcl l l5 72. 92 25 22. 0512 〈0. 0001

10. 04 umcl678 72. 92 25 22. 0512 〈0. 0001

10. 04 umcl280 77. 08 25 26. 053 〈0. 0001

此外，利用 41个 DH系， 96个单株， 390个 BCy^单株和 1406个 BCA单株，通过分析其不同基因型之间的感病率有无显著性差异，从而验证主效 QTL的准确性。用 8个位于主效 QTL区段的分子标记检测 41个 DH系。在 20个感病群体中， 19个植株中 7个分子标记 umcl246、 umcl053、 umcl453、 umc2350、 umcl l l5、 umcl678 and umcl280 出现与感病亲本 Y331 (2/2)相同的基因型，另外一个植株的基因型与抗病亲本 1145 (1/1)相同；同时，在 17个抗病群体中，这 7个分子标记均出现与 1145 (1/1) 相同的基因型。对两种基因型组的抗病率统计发现，当主效 QTL位点基因型为 1/1 时，抗病率为 94. 4%; 基因型为 2/2时，感病率为 100%。这一结果说明此区域存在一个主效 QTL。对 96个 F₂群体分析表明，纯合的 1/1基因型个体抗病率为 86. 4%，纯合的 2/2基因型个体抗病率为 29. 4%；在 390个 BCy^群体中，杂合的 1/2基因型个体抗病率为 55. 9%，纯合的 2/2基因型个体抗病率为 26. 8%；在 1406个 BC^^群体中，杂合的 1/2基因型个体抗病率为 51. 1%，纯合的 2/2基因型个体抗病率为 26% (表 3) 。这一系列的数据都说明，定位的主效 QTL区域是正确的。

表 3 不同群体不同基因型组抗病率分析

χ2 c os, ι=3. 84 ; χ2 。,。₅， ₂=5. 99

' Ι/ ：纯合体，两个等位基因均来自 1145; '2/2' ：纯合体，两个等位基因均来自 Y331 ; ' 1/2' ：杂合体，一个等位基因来自 1145，另一个等位基因来自 Υ331。

四、在主效 QTL ^？/ 的置信区间开发高密度分子标记

由于定位群体的数目有限以及性状鉴定的复杂性，以上定位的主效 QTL区段很大，可能包含很多其他的微效 QTL，在分子育种中很难有效利用，所以需要进一步精细定位缩小主效 QTL的区段，为分子标记辅助选择提供有效标记，同时为基因克隆奠定基础。

搜索网上公布的位于主效 QTL区域内的 BAC， EST, 和 IDP序列信息，开发新的分子标记。利用这些序列信息可以开发 SSR ( simple sequence repeat ) 标记， STS (sequence-tagged site)标记和 CAPS (cleaved ampl ified polymorphic sequence) 标记。利用 SSR Hunter 1. 3软件，依据软件默认的参数搜索 BAC序列中存在的 SSR，得到 SSR及其上下游各 150bp的序列，通过比 NCBI (http： //www, ncbi. nlm. nih. gov/) 网站上 HTGS 数据库，获得低拷贝或单拷贝序列用于设计引物。所有的引物都用 PRIMER5. 0进行设计，参数设计如下： ①引物长度为 20bp， GC含量为 40%〜60%； ②无二级结构和连续的单核苷酸重复。若 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，在亲本 1145和 Y331之间有多态性，则是发展成功的 SSR标记。选到的 30个 BAC序列中，用 SSR Hunter软件共搜索到了 320个 SSRs，将包含这些 SSRs的序列分别比对 HTGS数据库，最终获得 180个低拷贝的序列设计引物。通过亲本多态性筛选，开发成功 41 个条带清晰单一的 SSR标记，平均多态性比率为 22. 8%。 SSR标记开发的效率有限，主要是由于其缺乏合适的旁邻序列来设计引物。

为了进一步在目标区段开发 STS和 CAPS标记，首先需要将在两亲本上扩增条带单一的 PCR产物分别克隆到质粒载体上，每个亲本选择三个阳性克隆进行测序以减少错配误差；其次，利用 CLUSTALX软件将三个阳性克隆的序列与原始序列做多重比对，以确保获得正确的信息；最后，将测序正确的两个亲本的序列进行成对比对，找到两亲本的差异位点，若是插入缺失多态性则发展成为 STS标记，若是单碱基变异且与常用的限制性内切酶位点相关则发展成为 CAPS标记。对于 EST序列，引物通常设计在两个外显子上，通过扩增内含子可以有效利用内含子中的变异； IDP 来源的序列，引物设计的原则是尽量获得较大的片段以寻找差异； BAC序列中低拷贝的序列均可以用来设计引物。共设计了 74对引物，最终获得条带清楚的 12个共显性的 STS标记， 1个显性的 STS标记和 5个 CAPS标记。由于显性标记无法区分杂合体与纯合显性个体，所以没有采用。这些开发成功的 SSR、 STS和 CAPS标记通过检测重组单株的基因型，可以获得其在遗传图谱中的相对位置，同时参考已公布的玉米物理图谱进行比较。

对于已存在的关键的 SSR标记，如果扩增效果欠佳或条带模糊，则在大群体中筛选交换株会比较困难，必须进一步优化。以位于主效 QTL区段的 SSR标记 umcl053 为例。首先，从 GenBank中找到 umcl053对应的原始序列 AF0433464, 在原始引物两侧外围重新设计一对引物；通过两对引物组配，可获得 4对引物组合；每对引物组合同时扩增两个亲本， PCR产物在 2%琼脂糖凝胶上分离，选择最佳组合；最终获得了一个理想的引物对 umcl053RP和 AF0433464LP, 扩增条带清晰，多态性明显。利用这种改良的 SSR标记，不仅可以节省时间、降低成本，同时也提高了实验数据的可靠性。

在主效 QTL 的置信区间，共开发了 41 个 SSR标记， 12 个共显性 STS标 1个显性的 STS标记和 5个 CAPS标记（表 4) 。

记

表 4 精细定位 ^/？开发的分子标记详细信息位置扩增片段

标记名称类型引物序列 (⁵'-³') 右引物序列退火温度

大小切酶

五、精细定位 qRfgl

体通过后代的基因型和表型验证用于精细定位；第三，由于玉米茎腐病的复杂性，采取后代测验的方法验证交换株的基因型和抗性，从而提高精细定位的准确性。对于每一个重组单株，种植 60〜80株或更多的回交后代测定基因型和抗性，如果种子足够多则种植两个重复。所有重组单株的每一棵后代均鉴定基因型和抗性，通过统计分析推测其对应的亲本的性状。抗性级别为 1、 2、 3的统计为抗病组，抗性级别为 4、 5、 6的统计为感病组。

每一世代的重组单株，首先鉴定其整个区段分子标记的基因型，通过后代中杂合个体的抗病率与纯合个体抗病率的差值表示相应的重组单株的性状值，利用 CM 作图法逐步缩小主效 QTL的区段。

利用群体将 ^？/^置信区间定位在第 10染色体 bnlgl079和 umcl280之间。为了精细定位此主效 QTL，利用分子标记辅助选择，不断选择关键的重组单株发展高代回交群体。从 1406个 BCgFi群体中，选择了 24个在 qRfgl区段发生重组的个体，用新的分子标记饱和目标区段，对其后代群体（2664个 BCA) 进行基因型和抗性统计分析得到对应重组单株的表型值， QTL扫描将 qRfgl置信区间缩小到 umc2349 和 phi062之间， L0D值是 4. 79，可解释表型变异的 50. 83%。同样，对 34 个重组单株（后代为 2667个 BC₄F₂植株）的分析也将 qRfgl定位到 umc2349和 phi062 之间， L0D值是 7. 76，可解释表型变异的 65. 47%。

为了获得更多的重组单株，更准确地判断交换发生的位置，加入了 22个新的分子标记。利用 umc2349， STS01, umcl246 and phi062筛选到 38个 BC^Fi重组单株，对这些重组单株又用位于目标区段的 22个新的分子标记进行检测，发现只有 12个分子标记位点有交换发生，其余 10个分子标记与相邻位点无交换。采用相同的方法分析这 38个 BC^Fi重组单株（后代为 4113个植株），将 ^？/?/ 置信区间缩小到 STS01和 SSR106之间， L0D值是 11. 93，可解释表型变异的 76. 07%。从 BC^ 群体中共筛选到 41个位于 STS01〜SSR106之间的重组单株，利用新开发的分子标记饱和此区段，对其 4035个 BCe 后代基因型和抗性统计分析得到相应交换株的表型， QTL扫描发现 qRfgl的置信区间缩小到 SSR337和 STS400之间， L0D值是 16. 94，可解释表型变异的 80. 49%。

BCsF^ BCf BC^重组单株对 qRfgl QTL扫描结果见图 2和表 5。

表 5 利用 BCsF^ BC BC^重组单株对 QTL扫描结果

此外，将每一世代的重组单株按照其分子标记的交换类型分为若干基因型组，每个组内都有两个以上重组单株。对于每一个基因型组，利用 t-test ( 0. 05)分析组内重组单株对应的后代中杂合个体（带有供体片段）的抗病率与纯合个体（不带供体片段）的抗病率有无显著差异。若重组单株所带的供体片段带有抗病基因，则其后代中杂合个体的抗病率会明显高于纯合个体的抗病率，反之亦然。则表明抗性与对应的杂合区段显著相关，从而推断相应的亲本重组类型带有抗病区段。通过比较不同重组类型带有的供体片段的大小及其后代测验推测的抗性，可以将主效 QTL精细定位到很小的区段（表 6) 。

表 6 主效 QTL精细定位

对每个世代的重组单株按交换位点分为不同的基因型组，组内利用 t-test ( 0. 05)分析获得推测的抗性，比较不同基因型组带有的供体片段大小及其后代测验推测的抗性，一步一步将限定到更小的范围，具体定位过程如图 3所示。通过对 38个 BC^Fi重组单株（后代为 4113个 BC^i植株）的分析，将 qRfgl限定到 SSR118和 SSR248之间（图 3C)，物理距离约为 1300kb。在 41 个 BC^重组单株中，类型 I I I的重组类型（后代为 165个 BCe 植株）其杂合区段位于 SSR334的下游，性状表现为抗病，类型 VI I的重组类型（后代为 334个 BCe 植株）其杂合区段位于 SSR344的下游，性状表现为感病，因此，将 qRfgl定位到 SSR334和 SSR58之间，物理距离约为 500kb。

六、 qRfgl效应分析

连续四年对 BC B^F^ BQF!和 BCe 群体进行 qRfgl的效应分析，结果表明，来自于抗病亲本 1145的主效 QTL qRfgl在 Y331背景下可以将抗性提高 32%〜43%，结果如图 4所示。 2006年的 BC3 群体统计发现，带有区段的杂合个体抗病率为 66. 2%，不带 qRfgl区段的纯合个体抗病率为 33. 9%，主效 QTL qRfgl在 Y331 背景下将抗性提高了 32. 3%； 2007年 BC^Fi群体统计结果显示， qRfgl在 Y331背景下将抗性提高了 43. 3%； 2008年 BC^i群体统计表明， qRfgl在 Y331背景下将抗性提高了 36. 7%; 2009年 BCeFi群体统计表明， qRfgl在 Y331 背景下将抗性提高了 34. 3%。以上结果充分证明，不同年份间、不同群体间 qRfgl 的效应能稳定遗传。因此，可以直接利用分子标记辅助选择将主效 QTL ^/？ / 导入到各类自交系中，改良对茎腐病的抗性。

实施例 2、玉米抗茎腐病主效 QTL及其与主效 QTL连锁的分子标记的应用本实施例应用的实验材料为 10个由抗病自交系 1145衍生的抗茎腐病近等基因系。本实施例中的 PCR扩增程序见表 7，应用各个分子标记 PCR采用的退火温度见表 4。

表 7 实施例 2中的 PCR扩增程序 33 cyc les

、 10个由抗病自交系 1145衍生的抗茎腐病近等基因系的制备及其抗性等级 1、 10个由抗病自交系 1145衍生的抗茎腐病近等基因系的制备

标记 SSR58由如下两条引物组成：

上游引物： 5 ' -GACGCTGCACAATAGGTTCT-3 ' (序列表的序列 49 ) ；下游引物： 5 ' -TCATATACACCGACGACCTG-3 ' (序列表的序列 50 ) 。

用标记 SSR58检测植株即以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR58进行 PCR扩增，带型显示 l lObp和 120bp两条带的植株为杂合的植株。

以高抗玉米茎腐病的自交系 1145为供体亲本，高感茎腐病的自交系 Y331为受体亲本，杂交得到 F1代植株；

将 F1代植株（供体亲本）与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到植株；

用标记 SSR58检测植株，选择 10株该位点带型为杂合的植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到 10个对应的家系；用分子标记 SSR58检测 BC^家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的 Β(¾植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的 BC^家系；用分子标记 SSR58检测 BC^家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的 Β(¾植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的 BC₄Fi家系；用分子标记 SSR58检测 BC₄Fi家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的 BCA植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的家系；用分子标记 SSR58检测家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的植株作为供体亲本，与高感茎腐病的自交系 Y331 (受体亲本）回交得到对应的家系；用分子标记 SSR58检测 BCe 家系，每个系选择 1株该位点带型为杂合的植株进行自交，得到对应的 BC₆F₂家系；

用分子标记 SSR58检测 BC₆F₂家系，每个系选择 1株该位点带型与 1145—致（即用标记 SSR58进行 PCR扩增，带型显示 120bp—条带）的 BC₆F₂植株进行自交，得到对应的 BC₆F₃家系，即为最终获得的 10个近等基因系，分别命名为 NIL1、NIL2、NIL3、 NIL4、 NIL5、 NIL6、 NIL7、 NIL8、 NIL9、 NIL10。

将高抗玉米茎腐病的自交系 1145、高感茎腐病的自交系 Y331和 10个近等基因系的植株作为待测玉米，分别进行各个标记的应用性能检测。

2、各个近等基因系的茎腐病抗性等级

将高抗玉米茎腐病的自交系 1145、高感茎腐病的自交系 Y331和 10个近等基因系待测玉米（每系 40株）分别进行接种试验，确定茎腐病抗性等级平均值，结果见表 8。

表 8 各个近等基因系的茎腐病抗性等级平均值

待测玉米抗病平均等级

自交系 1145 1 自交系 Y331 6

NIL1 1. 5

NIL2 1. 2

NIL3 1. 7

NIL4 2. 5

NIL5 1. 8

NIL6 1. 3

NIL7 1. 9

NIL8 1. 7

NIL9 2. 1

NIL10 1. 7 一、标记 CAPS372在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 CAPS372由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CATCGTCAGGTAGGAGTCGT-3' (序列表的序列 1) ；

下游引物： 5' -GAGCGTGCGGAGAGAATAAG-3' (序列表的序列 2) 。

用标记 CAPS372分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 CAPS372进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 697bp的扩增产物标记为 +。

(4)用限制性内切酶 PvuII酶切扩增产物， 1%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物能够被 PvuII酶切的标记为 + (PvuII酶切应得到 306bp和 391bp的酶切产物）。

结果见表 9。部分样本的电泳图见图 5-1。

表 9 应用标记 CAPS372的 PCR扩增结果和 PCR扩增产物 PvuII酶切结果

结果表明：如果得到 697bp的扩增产物且能被限制性内切酶 PvuII酶切，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。

二、标记 CAPS353在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 CAPS353由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CGCTAAGTCGGACCAGTAAT-3' (序列表的序列 3) ；

下游引物： 5' -CCTGAGGCACGTAACGGTAT-3' (序列表的序列 4) 。

用标记 CAPS353分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 CAPS353进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 435bp的扩增产物标记为 +。

(4) 用限制性内切酶 Cfrl酶切扩增产物， 1%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，不能够被 Cfrl酶切的标记为 + (Cfrl酶切应得到 128bp和 307bp的酶切产物）。

结果见表 10。部分样本的电泳图见图 5-2。表 10 应用标记 CAPS353的 PCR扩增结果和 PCR扩增产物 Cfrl酶切结果

结果表明：如果得到 435bp的扩增产物且不能被限制性内切酶 Cfrl酶切，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。

三、标记 CAPS401在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 CAPS401由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GGCATAAGTTCAGAGAGGTT-3' (序列表的序列 5) ；

下游引物： 5' -CAAGACATCTCAAGGCTCAA-3' (序列表的序列 6) 。

用标记 CAPS401分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

( 1 ) 提取待测玉米的基因组 DNA;

( 2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 CAPS401进行 PCR扩增；

( 3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 541bp的扩增产物标记为 +。

(4) 用限制性内切酶 Bgll酶切扩增产物， 1%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，能够被 Bgll酶切的标记为 + (Bgll酶切应得到 429bp和 112bp的酶切产物）。

结果见表 11。部分样本的电泳图见图 5-3。

表 11 应用标记 CAPS401的 PCR扩增结果和 PCR扩增产物 Bgll酶切结果

NIL8 + +

NIL9 + +

NIL10 + +

结果表明：如果得到 541bp的扩增产物且能被限制性内切酶 Bgll酶切，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。

四、标记 CAPS402在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 CAPS402由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TCGCTCTTGAGCCTTGAGAT-3' (序列表的序列 7) ；

下游引物： 5' -GCAACGCATGGAGTATCAAC-3' (序列表的序列 8) 。

用标记 CAPS402分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 CAPS402进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 719bp的扩增产物标记为 +。

(4) 用限制性内切酶 Mnll酶切扩增产物， 1%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，能够被 Mnll酶切的标记为 + (Mnll酶切得到 407bp和 312bp的酶切产物）。

结果见表 12。部分样本的电泳图见图 5-4。

表 12 应用标记 CAPS402的 PCR扩增结果和 PCR扩增产物 Mnll酶切结果

结果表明：如果得到 719bp的扩增产物且能被限制性内切酶 Mnll酶，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。

五、标记 CAPS429在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 CAPS429由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TGATACAAGCTGCACTTCAT-3' (序列表的序列 9) ；

下游引物： 5' -GAATCCTCATCGCTCACTTC-3' (序列表的序列 10) 。

用标记 CAPS429分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA; (2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 CAPS429进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 531bp的扩增产物标记为 +。

(4)用限制性内切酶 Avail酶切扩增产物， 1%琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，能够被 Avail酶切的标记为 + (Avail酶切应得到 274bp和 257bp的酶切产物）。

结果见表 13

表 13 应用标记 CAPS429的 PCR扩增结果和 PCR扩增产物 Avail酶切结果

结果表明：如果得到 531bp的扩增产物且能被限制性内切酶 Avail酶切，所述玉米为候选的抗茎腐病玉米。

六、标记 SSR35在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR35由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CTAGAAGACGAACGACGCAC-3' (序列表的序列 11) ；

下游引物： 5' -CCGTAGCAAGAACTCAGCAG-3' (序列表的序列 12)

用标记 SSR35分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR35进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 150bp的扩增产物标记为 +。结果见表 14。部分样本的电泳图见图 5-5

表 14 应用标记 SSR35的 PCR扩增结果

待测玉米 PCR扩增产物待测玉米 PCR扩增产物自交系 1145 + 自交系 Y331 136bp

NIL1 + NIL6 +

NIL2 + NIL7 136bp

NIL3 + NIL8 +

NIL4 136bp NIL9 +

NIL5 + NIL10 + 结果表明：如果得到 150bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。七、标记 SSR36在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR36由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CCTTGCCTTCATCACATCAC-3' (序列表的序列 13) ；

下游引物： 5' -GCCACCTGAGGAGGAGAATA-3' (序列表的序列 14) 。

用标记 SSR36分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR36进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 lOObp的扩增产物标记为 +。结果见表 15。

表 15 应用标记 SSR36的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 lOObp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米八、标记 SSR44在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR44由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CAGACACAGTCATGGCATTG-3' (序列表的序列 15) ；

下游引物： 5' -GATGGCTGCATCGACAGGTA-3' (序列表的序列 16) 。

用标记 SSR44分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR44进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 230bp的扩增产物标记为 +。结果见表 16。部分样本的电泳图见图 5-6。

表 16 应用标记 SSR44的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 230bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米九、标记 SSR46在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用标记 SSR46由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GTGCCTTGCCTTCATCACAT-3' (序列表的序列 17) ；

下游引物： 5' -GAATAGTAGTGCGGCAGCAG-3' (序列表的序列 18) 。

用标记 SSR46分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR46进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 120bp的扩增产物标记为 +。结果见表 17。部分样本的电泳图见图 5-7。

表 17 应用标记 SSR46的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 120bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十、标记 SSR47在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR47由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CACACACATCCACAAGACCT-3' (序列表的序列 19) ；

下游引物： 5' -TCCAAGACAAGAGCTTCAGC-3' (序列表的序列 20) 。

用标记 SSR47分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR47进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 260bp的扩增产物标记为 +。结果见表 18。部分样本的电泳图见图 5-8。

表 18 应用标记 SSR47的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 260bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米十一、标记 SSR77在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR77由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GCATCGCAAGCACCTCTCTT-3' (序列表的序列 21) ；下游引物： 5' -TCCTTCGTATGAGCCGTTAC-3' (序列表的序列 22)

用标记 SSR77分别对各个玉米品种进行检 ί贝步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR77进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 230bp的扩增产物标记为 +。结果见表 19。部分样本的电泳图见图 5-9。

表 19 应用标记 SSR77的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 230bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十二、标记 SSR85在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR85由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GGATCTTCGTTGCAGTTCTT-3' (序列表的序列 23) ；

下游引物： 5' -CATCAGTGATCCTCCACCAT-3' (序列表的序列 24) 。

用标记 SSR85分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR85进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 150bp的扩增产物标记为 +。结果见表 20。部分样本的电泳图见图 5-10。

表 20 应用标记 SSR85的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 150bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米十三、标记 SSR87在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR87由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CGATGCAGCAGATTCCTCGT-3' (序列表的序列 25) ；

下游引物： 5' -CATGCACATGATTGGTTGGT-3' (序列表的序列 26) 。

用标记 SSR87分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下： (1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR87进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 lOObp的扩增产物标记为 +。结果见表 21。

表 21 应用标记 SSR87的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 lOObp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十四、标记 SSR90在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR90由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GGTAAGTATCGGACATTCCT-3' (序列表的序列 27) ；

下游引物： 5' -CCGGGAGCATGTATCTGTAT-3 ' (序列表的序列 28) 。

用标记 SSR90分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR90进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 lOObp的扩增产物标记为 +。结果见表 22。

表 22 应用标记 SSR90的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 lOObp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十五、标记 SSR93在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR93由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CGCCGTACAGACTGCTATGA-3' (序列表的序列 29) ；

下游引物： 5' -CACATGCTACGACTGCGATG-3' (序列表的序列 30) 。

用标记 SSR93分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR93进行 PCR扩增； (3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 230bp的扩增产物标记为 +。结果见表 23。部分样本的电泳图见图 5-11。

表 23 应用标记 SSR93的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 230bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十六、标记 SSR100在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR100由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CGTGCGACTAAGGATAGCTG-3' (序列表的序列 31) ；

下游引物： 5' -CGACCACGATACAACCTCAT-3' (序列表的序列 32) 。

用标记 SSR100分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR100进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 lOObp的扩增产物标记为 +。结果见表 24。部分样本的电泳图见图 5-12。

表 24 应用标记 SSR100的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 lOObp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十七、标记 SSR198在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR198由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GCCTCCACTTCAGCATACCA-3' (序列表的序列 33) ；

下游引物： 5' -CCATCTTCATTCCATCCACC-3' (序列表的序列 34) 。

用标记 SSR198分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR198进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 166bp的扩增产物标记为 +。结果见表 25。部分样本的电泳图见图 5-13。表 25 应用标记 SSR198的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 166bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十八、标记 SSR114在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR114由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CTCGTGCTTATACCATCTCC-3' (序列表的序列 35) ；

下游引物： 5' -TAGAAGACCTCGTGGCATGT-3' (序列表的序列 36) 。

用标记 SSR114分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR114进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 240bp的扩增产物标记为 +。结果见表 26。

表 26 应用标记 SSR114的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 240bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。十九、标记 SSR118在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR118由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TACGCATCGTCATCGTCGTC-3' (序列表的序列 37) ；下游引物： 5' -CCTCCATCGCTTGTCGTGTT-3' (序列表的序列 38) 。

用标记 SSR118分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR118进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 225bp的扩增产物标记为 +。结果见表 27。部分样本的电泳图见图 5-14。

表 27 应用标记 SSR118的 PCR扩增结果待测玉米 PCR扩增产物待测玉米 PCR扩增产物自交系 1145 + 自交系 Y331 219bp

NIL1 + NIL6 +

NIL2 + NIL7 +

NIL3 + NIL8 +

NIL4 + NIL9 +

NIL5 + NIL10 +

结果表明：如果得到 225bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十、标记 SSR120在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR120由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GATTAGCGGATAACGGACAG-3' (序列表的序列 39) ；下游引物： 5' -TCCAATCCAATCCAATCCAG-3' (序列表的序列 40) 。

用标记 SSR120分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR120进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 254bp的扩增产物标记为 +。结果见表 28。部分样本的电泳图见图 5-15。

表 28 应用标记 SSR120的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 254bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二 ^一、标记 SSR334在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR334由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TTCGAGCATGCCAAAGAAGT-3' (序列表的序列 41) ；下游引物： 5' -GGTGCACACAGACATGGAAT-3' (序列表的序列 42) 。

用标记 SSR334分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR334进行 PCR扩增； ( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 301bp的扩增产物标记为 +。结果见表 29。部分样本的电泳图见图 5-16。

表 29 应用标记 SSR334的 PCR扩增结果 NIL2 + NIL7 +

NIL3 + NIL8 +

NIL4 + NIL9 +

NIL5 + NIL10 +

结果表明：如果得到 301bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十二、标记 SSR337在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR337由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CACCAGCTTAATTGTCCTGT-3' (序列表的序列 43) ；下游引物： 5' -CCACCGTAACAACTCGTACT-3' (序列表的序列 44) 。

用标记 SSR337分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR337进行 PCR扩增；

(3) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 96bp的扩增产物标记为 +。结果见表 30。

表 30 应用标记 SSR337的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 96bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十三、标记 SSR343在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR343由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CTATCCCACCGTTGCTTCCT-3' (序列表的序列 45) ；下游引物： 5' -CTGAGAGATCGAGCGAGGAT-3' (序列表的序列 46) 。

用标记 SSR343分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR343进行 PCR扩增； ( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 244bp的扩增产物标记为 +。结果见表 31。部分样本的电泳图见图 5-17。

表 31 应用标记 SSR343的 PCR扩增结果

NIL4 + NIL9 +

NIL5 + NIL10 +

结果表明：如果得到 244bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十四、标记 SSR344在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR344由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GCATGGCTCATCCCTTACTT-3' (序列表的序列 47) ；下游引物： 5' -TGAGAGATCGAGCGAGGATA-3' (序列表的序列 48) 。

用标记 SSR344分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR344进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 164bp的扩增产物标记为 +。结果见表 32。部分样本的电泳图见图 5-18。

表 32 应用标记 SSR344的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 164bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十五、标记 SSR58在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR58由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GACGCTGCACAATAGGTTCT-3' (序列表的序列 49) ；下游引物： 5' -TCATATACACCGACGACCTG-3' (序列表的序列 50) 。

用标记 SSR58分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR58进行 PCR扩增；

( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 120bp的扩增产物标记为 +。结果见表 33。部分样本的电泳图见图 5-19。

表 33 应用标记 SSR58的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 120bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十六、标记 SSR239在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR239由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GGACTGCTAGATGCCATGTT-3' (序列表的序列 51) ；下游引物： 5' -CTACAAGCCAAGCCTGGATT-3' (序列表的序列 52) 。

用标记 SSR239分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR239进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 188bp的扩增产物标记为 +。结果见表 34。部分样本的电泳图见图 5-20。

表 34 应用标记 SSR239的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 188bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十七、标记 SSR243在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR243由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TAGAGGACGTTGTTGGAGAG-3' (序列表的序列 53) ；下游引物： 5' -CTGATCGAGAGTGTCGTGAG-3' (序列表的序列 54) 。

用标记 SSR243分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR243进行 PCR扩增； ( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 294bp的扩增产物标记为 +。结果见表 35。部分样本的电泳图见图 5-21。

表 35 应用标记 SSR243的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 294bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十八、标记 SSR248在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用标记 SSR248由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TTCAAGTAGCAGCATGCATC-3' (序列表的序列 55) ；下游引物： 5' -GACGAGATACGCGACTACGA-3' (序列表的序列 56) 。

用标记 SSR248分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR248进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 253bp的扩增产物标记为 +。结果见表 36。部分样本的电泳图见图 5-22。

表 36 应用标记 SSR248的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 253bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。二十九、标记 SSR255在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR255由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TCGACGAGATACGCGACTAC-3' (序列表的序列 57) ；下游引物： 5' -CAGTACAAAGCCGATCCAAG-3' (序列表的序列 58) 。

用标记 SSR255分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR255进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 207bp的扩增产物标记为 +。结果见表 37。部分样本的电泳图见图 5-23。

表 37 应用标记 SSR255的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 207bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十、标记 SSR256在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR256由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GCCAAGAGTTCTAAGCACTG-3' (序列表的序列 59) ；下游引物： 5' -TTCAAGTAGCAGCATGCATC-3' (序列表的序列 60) 。

用标记 SSR256分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR256进行 PCR扩增； ( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 218bp的扩增产物标记为 +。结果见表 38。

表 38 应用标记 SSR256的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 218bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。

^—、标记 SSR106在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR106由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TTGAAGTCAGCAGGAGTTGG-3' (序列表的序列 61) ；下游引物： 5， -CTTGCTTGCTCTTGGTCCAC-3 ' (序列表的序列 62) 。

用标记 SSR106分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR106进行 PCR扩增；

(3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 llObp的扩增产物标记为 +。结果见表 39。部分样本的电泳图见图 5-24。

表 39 应用标记 SSR106的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 llObp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十二、标记 SSR105在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR105由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GTTCATCCTGATTCCCATCC-3 ' (序列表的序列 63) ；下游引物： 5' -CAGCCTTGCTTCTACACCAC-3' (序列表的序列 64) 。

用标记 SSR105分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下： (1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR105进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 llObp的扩增产物标记为 +。结果见表 40。

表 40 应用标记 SSR105的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 llObp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十三、标记 SSR300在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR300由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TGCCTCACCTGCGTAATGTG-3' (序列表的序列 65) ；下游引物： 5' -CTGCTGCCACTGCCATCTAC-3' (序列表的序列 66) 。

用标记 SSR300分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR300进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 215bp的扩增产物标记为 +。结果见表 41。部分样本的电泳图见图 5-25。

表 41 应用标记 SSR300的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 215bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十四、标记 SSR301在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR301由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CCATCTCTGTTGTCTTGGAT-3' (序列表的序列 67) ；下游引物： 5' -GTCGAGGTACAGTCTTGCAT-3 ' (序列表的序列 68) 。

用标记 SSR301分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR301进行 PCR扩增； (3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 210bp的扩增产物标记为 +。结果见表 42。部分样本的电泳图见图 5-26。

表 42 应用标记 SSR301的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 210bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十五、标记 SSR302在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR302由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TAATGGCAGACCGAGTCTTC-3' (序列表的序列 69) ；下游引物： 5' -CTCGCTCTTAACTGCTACGC-3' (序列表的序列 70) 。

用标记 SSR302分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR302进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 202bp的扩增产物标记为 +。结果见表 43。部分样本的电泳图见图 5-27。

表 43 应用标记 SSR302的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 202bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十六、标记 SSR12在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR12由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CATCATCGTCGTCATCGGTC-3' (序列表的序列 71) ；下游引物： 5' -TCATCCATGTTATGCCTGCC-3' (序列表的序列 72) 。

用标记 SSR12分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR12进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 236bp的扩增产物标记为 +。结果见表 44。部分样本的电泳图见图 5-28。表 44 应用标记 SSR12的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 236bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十七、标记 SSR14在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR14由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CTGGACTCCACAACCTCATC-3' (序列表的序列 73) ；下游引物： 5' -CCGGCACTGTAAGTACATTG-3' (序列表的序列 74) 。

用标记 SSR14分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR14进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 210bp的扩增产物标记为 +。结果见表 45。部分样本的电泳图见图 5-29。

表 45 应用标记 SSR14的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 210bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十八、标记 SSR285在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR285由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GAGACATAGCGGCTTATGGT-3' (序列表的序列 75) ；下游引物： 5' -CGCTTATTGTGAGCTGCTCT-3' (序列表的序列 76) 。

用标记 SSR285分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR285进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 370bp的扩增产物标记为 +。结果见表 46。部分样本的电泳图见图 5-30。

表 46 应用标记 SSR285的 PCR扩增结果待测玉米 PCR扩增产物待测玉米 PCR扩增产物自交系 1145 + 自交系 Y331 374bp

NIL1 + NIL6 +

NIL2 + NIL7 374bp

NIL3 + NIL8 +

NIL4 + NIL9 374bp

NIL5 + NIL10 +

结果表明：如果得到 370bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。三十九、标记 SSR179在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR179由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GTAAGCAACATACCCTCTGT-3' (序列表的序列 77) ；下游引物： 5' -CGAAAAACTATGAGTACGGA-3' (序列表的序列 78) 。

用标记 SSR179分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR179进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 270bp的扩增产物标记为 +。结果见表 47。部分样本的电泳图见图 5-31。

表 47 应用标记 SSR179的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 270bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十、标记 SSR261在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR261由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GGAGTATCAATCTTCGAGGC-3' (序列表的序列 79) ；下游引物： 5' -GTGGTCAATGCAATTCAGAG-3' (序列表的序列 80) 。

用标记 SSR261分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR261进行 PCR扩增； ( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 173bp的扩增产物标记为 +。结果见表 48。部分样本的电泳图见图 5-32。

表 48 应用标记 SSR261的 PCR扩增结果 NIL2 + NIL7 177bp

NIL3 + NIL8 +

NIL4 + NIL9 177bp

NIL5 + NIL10 +

结果表明：如果得到 173bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十一、标记 SSR152在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR152由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GTATATGTAGCCAGGCATCC-3' (序列表的序列 81) ；下游引物： 5' -CTCTTCCTCTCGCAATGTTG-3' (序列表的序列 82) 。

用标记 SSR152分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR152进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 150bp的扩增产物标记为 +。结果见表 49。部分样本的电泳图见图 5-33。

表 49 应用标记 SSR152的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 150bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十二、标记 SSR147在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR147由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TTGTGTCAACACCTCCAGAT-3' (序列表的序列 83) ；下游引物： 5' -GCGCCTAGGAAGATTAAGTG-3' (序列表的序列 84) 。

用标记 SSR147分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR147进行 PCR扩增； ( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 lOObp的扩增产物标记为 +。结果见表 50。

表 50 应用标记 SSR147的 PCR扩增结果

NIL4 + NIL9 106bp

NIL5 + NIL10 +

结果表明：如果得到 lOObp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十三、标记 SSR156在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR156由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GGTGTATGAAGTGCTTGGTA-3' (序列表的序列 85) ；下游引物： 5' -GGGTTAGGGTCCTGTAAGTA-3' (序列表的序列 86) 。

用标记 SSR156分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR156进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 250bp的扩增产物标记为 +。结果见表 51。部分样本的电泳图见图 5-34。

表 51 应用标记 SSR156的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 250bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十四、标记 SSR164在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR164由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CACGCAGTCATGTGAGGTCC-3' (序列表的序列 87) ；下游引物： 5' -GGAGGCAGACTCTTGGCGAT-3' (序列表的序列 88) 。

用标记 SSR164分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR164进行 PCR扩增； ( 3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 250bp的扩增产物标记为 +。结果见表 52。部分样本的电泳图见图 5-35。

表 52 应用标记 SSR164的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 250bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十五、标记 SSR172在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR172由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CCAATGTGGTCTCAGAAACG-3' (序列表的序列 89) ；下游引物： 5' -CCGAAAATGATGCAGAATGT-3' (序列表的序列 90) 。

用标记 SSR172分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR172进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 260bp的扩增产物标记为 +。结果见表 53。部分样本的电泳图见图 5-36。

表 53 应用标记 SSR172的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 260bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十六、标记 SSR173在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 SSR173由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GACGTGGTAGGACCGTTGAA-3' (序列表的序列 91) ；下游引物： 5' -CATGCGAGACCCGTTGAAAT-3' (序列表的序列 92) 。

待测玉米为 10个由抗病自交系 1145衍生的抗茎腐病近等基因系。

用标记 SSR173分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 SSR173进行 PCR扩增；

(3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 250bp的扩增产物标记为 +。结果见表 54。部分样本的电泳图见图 5-37。

表 54 应用标记 SSR173的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 250bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十七、标记 STS01在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS01由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CCTCCGGTACGCACCTTACT-3' (序列表的序列 93) ；下游引物： 5' -CCAAGGTCAACTTCAGCCAT -3' (序列表的序列 94) 。

用标记 STS01分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS01进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 500bp的扩增产物标记为 +。结果见表 55。部分样本的电泳图见图 5-38。

表 55 应用标记 STS01的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 500bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十八、标记 STS378在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS378由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TGCAGCAGGTTCATGTTTAT-3 ' (序列表的序列 95) ；下游引物： 5' -TTCCAACTTATCAGCGACGA-3' (序列表的序列 96) 。

用标记 STS378分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS378进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 567bp的扩增产物标记为 +。结果见表 56。部分样本的电泳图见图 5-39。

表 56 应用标记 STS378的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 567bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。四十九、标记 STS373在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS373由如下两条引物组成：上游引物： 5' -CATCAAGTTACCCCTGGTTT-3' (序列表的序列 97) ；下游引物： 5' -GCCAACGAGAGTAGCAGTCT-3' (序列表的序列 98) 。

用标记 STS373分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS373进行 PCR扩增；

(3 )6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 177bp的扩增产物标记为 +。结果见表 57。部分样本的电泳图见图 5-40。

表 57 应用标记 STS373的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 177bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十、标记 STS400在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS400由如下两条引物组成：

上游引物： 5， -TTGACATTACACCACTTTCT-3 ' (序列表的序列 99) ；下游引物： 5' -CGTATAATTTAGAGCGTGTT-3 ' (序列表的序列 100) 。

用标记 STS400分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS400进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 292bp的扩增产物标记为 +。结果见表 58。部分样本的电泳图见图 5-41。

表 58 应用标记 STS400的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 292bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五 ^一、标记 STS414在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS414由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CCATAGACCAGTCGCACATT-3' (序列表的序列 101) ；下游引物： 5' -GCCTGACATCACGTACCAGT-3' (序列表的序列 102) 。用标记 STS414分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS414进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 396bp的扩增产物标记为 +。结果见表 59。

表 59 应用标记 STS414的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 396bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十二、标记 STS416在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS416由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TCCGTTCGACCTGTGCCATT-3' (序列表的序列 103) ；下游引物： 5' -CCGAATGTCCAGCCTTACAA-3' (序列表的序列 104) 。

用标记 STS416分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS416进行 PCR扩增； (3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 180bp的扩增产物标记为 +。结果见表 60。

表 60 应用标记 STS416的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 180bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十三、标记 STS444在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS444由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -ACTGGATGGAATGGATGGAT-3' (序列表的序列 105) ；下游引物： 5' -GACGAATAATGATGGCTGCT-3' (序列表的序列 106) 。

用标记 STS444分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA; (2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS444进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 669bp的扩增产物标记为 +。结果见表 61。

表 61 应用标记 STS444的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 669bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十四、标记 STS446在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS446由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -TAGTGCAACACGTCCGATCT-3' (序列表的序列 107) ；下游引物： 5' -GCCTAGCGTAGCCATTCAAT-3' (序列表的序列 108) 。

用标记 STS446分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS446进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 584bp的扩增产物标记为 +。结果见表 62。

表 62 应用标记 STS446的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 584bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十五、标记 STS434在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS434由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GTGATATTCCGGTGCCTAGT-3' (序列表的序列 109) ；下游引物： 5' -CATGACATGGTGCTTGATCT-3' (序列表的序列 110) 。

用标记 STS434分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS434进行 PCR扩增；

(3 ) 6%聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 429bp的扩增产物标记为 +。结果见表 63。

表 63 应用标记 STS434的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 429bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十六、标记 STS02在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS02由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -ATCTACAACGGCACGCTGAT-3' (序列表的序列 111) ；下游引物： 5' -CCTCCAGTTCTAGCCAGCTT-3' (序列表的序列 112) 。

用标记 STS02分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS02进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 1500bp的扩增产物标记为 +。结果见表 64。部分样本的电泳图见图 5-42。

表 64 应用标记 STS02的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 1500bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十七、标记 STS03在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS03由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CTTGTATCATCAGCTAGGGCATGT-3' (序列表的序列 113) ；下游引物： 5' -GTGATCTGAACGCCAACCTC-3' (序列表的序列 114) 。

用标记 STS03分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS03进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 300bp的扩增产物标记为 +。结果见表 65。部分样本的电泳图见图 5-43。

表 65 应用标记 STS03的 PCR扩增结果待测玉米 PCR扩增产物待测玉米 PCR扩增产物自交系 1145 + 自交系 Y331 320bp

NIL1 + NIL6 +

NIL2 + NIL7 320bp

NIL3 + NIL8 +

NIL4 320bp NIL9 320bp

NIL5 + NIL10 +

结果表明：如果得到 300bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十八、标记 STS04在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS04由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -GTGCCAAGGACAGTGTCAAT-3' (序列表的序列 115) ；下游引物： 5' -CTTCAGGACCATCGAACAGA-3' (序列表的序列 116) 。

用标记 STS04分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS04进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 1200bp的扩增产物标记为 +。结果见表 66。部分样本的电泳图见图 5-44。

表 66 应用标记 STS04的 PCR扩增结果

结果表明：如果得到 1200bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。五十九、标记 STS06在辅助筛选抗茎腐病玉米中的应用

标记 STS06由如下两条引物组成：

上游引物： 5' -CGACCAACACATTTCCTACG-3' (序列表的序列 117) ；下游引物： 5' -CAAGAAGGACCCAGAGAACG-3' (序列表的序列 118) 。

用标记 STS06分别对各个玉米品种进行检测，步骤如下：

(1) 提取待测玉米的基因组 DNA;

(2) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用标记 STS06进行 PCR扩增；

(3) 1%琼脂糖凝胶电泳检测 PCR扩增产物，得到 250bp的扩增产物标记为 +。结果见表 67。部分样本的电泳图见图 5-45。

表 67 应用标记 STS06的 PCR扩增结果 NIL1 + NIL6 +

NIL2 + NIL7 224bp

NIL3 + NIL8 +

NIL4 224bp NIL9 224bp

NIL5 + NIL10 + 结果表明：如果得到 250bp的扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。以上各个标记的应用中：高抗玉米茎腐病的自交系 1145、高感茎腐病的自交系 Y331 的 PCR扩增产物和酶切产物均进行测序验证，其大小均与电泳结果一致； 10 个近等基因系的 PCR扩增产物和酶切产物可以以高抗玉米茎腐病的自交系 1145、高感茎腐病的自交系 Y331作为 marker。

工业应用

本发明定位了一个抗玉米茎腐病的主效数量性状位点 qRfgl, 通过与玉米抗茎腐病主效数量性状位点 qRfgl紧密连锁的分子标记检测抗病自交系 1145及其衍生品系中是否含有该位点，大大提高抗茎腐病玉米的选择效率。利用本发明的方法，通过分子标记辅助选择，获得了一系列抗茎腐病的近等基因系材料。分子标记辅助选择可以有效获得环境友好的抗性材料，从而克服病害造成的产量和经济损失。本发明提供了一系列分子标记位点，这些位点与茎腐病抗性在统计水平上显著相关，检测这些分子标记可以用于玉米抗茎腐病的分子标记辅助育种，产生抗性品种或改良玉米品种对茎腐病的抗性。

本发明所解决的问题如下：（1 ) 完成了玉米抗禾谷镰刀菌茎腐病主效数量性状位点 qRfgl的精细定位，将 qRfgl定位到第 10号染色体分子标记 SSR334和 SSR58 之间，物理距离约为 500Kb; ( 2 )发明了一些与抗禾谷镰刀菌茎腐病主效 QTL qRfgl 紧密连锁的分子标记，可以直接利用分子标记辅助选择将主效 QTL导入到各类自交系中，改良对茎腐病的抗性；（3 )发明了一种精细定位主效抗病 QTL的方法；（4) 连续四年对不同世代的分离群体进行抗性鉴定及效应分析，结果表明，来自于抗病亲本 1145的主效 QTL qRfgl在 Y331背景下将茎腐病抗性提高了约 34%，年份间、不同群体间能稳定遗传。（5 ) 筛选了一些在分子标记 SSR334和 SSR58之间发生重组的单株，为下一步基因克隆奠定基础。

本发明的优点如下：（1) 挖掘了一个抗茎腐病的主效 QTL g/?/^, 并将其精细定位到了 500kb的范围，在此区段内开发了一系列可靠的分子标记，为分子育种和品种分子设计提供了精确的信息。（2 ) 采用后代测验的方法验证亲代基因型和表型，保证了试验数据的准确性。（3 ) 同时采用 QTL软件分析法和 t-test统计分析推测亲代表型的方法对主效 QTL精细定位，确保统计分析的准确性。（4) 抗性调查分三次进行，一方面减少田间数据的记录错误，另一方面可方便分析每个单株的发病过程，为分析植物抗病机理提供具体资料。（5 ) 连续四年鉴定 ^/？ / 的效应，保证了在精确育种中应用的实用价值。

Claims

权利要求

1、玉米抗茎腐病的主效数量性状基因位点，定位于第 10号染色体上，位于分子标记 SSR334和 SSR58之间。
2、权利要求 1所述主效数量性状基因位点的分子标记，为标记 CAPS372、标记 CAPS353、标记 CAPS401、标记 CAPS402、标记 CAPS429、标记 SSR35、标记 SSR36、标记 SSR44、标记 SSR46、标记 SSR47、标记 SSR77、标记 SSR85、标记 SSR87、标记 SSR90、标记 SSR93、标记 SSR100、标记 SSR198、标记 SSR114、标记 SSR118、标记 SSR120、标记 SSR334、标记 SSR337、标记 SSR343、标记 SSR344、标记 SSR58、标记 SSR239、标记 SSR243、标记 SSR248、标记 SSR255、标记 SSR256、标记 SSR106、标记 SSR105、标记 SSR300、标记 SSR301、标记 SSR302、标记 SSR12、标记 SSR14、标记 SSR285、标记 SSR179、标记 SSR261、标记 SSR152、标记 SSR147、标记 SSR156、标记 SSR164、标记 SSR172、标记 SSR173、标记 STS01、标记 STS378、标记 STS373、标记 STS400、标记 STS414、标记 STS416、标记 STS444、标记 STS446、标记 STS434、标记 STS02、标记 STS03、标记 STS04或标记 STS06 ;

所述标记 CAPS372由序列表的序列 1所示 DNA和序列表的序列 2所示 DNA组成；所述标记 CAPS353由序列表的序列 3所示 DNA和序列表的序列 4所示 DNA组成；所述标记 CAPS401由序列表的序列 5所示 DNA和序列表的序列 6所示 DNA组成；所述标记 CAPS402由序列表的序列 7所示 DNA和序列表的序列 8所示 DNA组成；所述标记 CAPS429由序列表的序列 9所示 DNA和序列表的序列 10所示 DNA组成；所述标记 SSR35由序列表的序列 1 1所示 DNA和序列表的序列 12所示 DNA组成；所述标记 SSR36由序列表的序列 13所示 DNA和序列表的序列 14所示 DNA组成；所述标记 SSR44 由序列表的序列 15所示 DNA和序列表的序列 16所示 DNA组成；所述标记 SSR46由序列表的序列 17所示 DNA和序列表的序列 18所示 DNA组成；所述标记 SSR47由序列表的序列 19所示 DNA和序列表的序列 20所示 DNA组成；所述标记 SSR77由序列表的序列 21所示 DNA和序列表的序列 22所示 DNA组成；所述标记 SSR85由序列表的序列 23所示 DNA和序列表的序列 24所示 DNA组成；所述标记 SSR87由序列表的序列 25所示 DNA和序列表的序列 26所示 DNA组成；所述标记 SSR90由序列表的序列 27所示 DNA和序列表的序列 28所示 DNA组成；所述标记 SSR93由序列表的序列

29所示 DNA和序列表的序列 30所示 DNA组成所述标记 SSR100由序列表的序列 31所示 DNA和序列表的序列 32所示 DNA组成所述标记 SSR198由序列表的序列 33所示 DNA和序列表的序列 34所示 DNA组成所述标记 SSR114由序列表的序列 35所示 DNA和序列表的序列 36所示 DNA组成所述标记 SSR118由序列表的序列 37所示 DNA和序列表的序列 38所示 DNA组成所述标记 SSR120由序列表的序列 39所示 DNA和序列表的序列 40所示 DNA组成所述标记 SSR334由序列表的序列 41所示 DNA和序列表的序列 42所示 DNA组成所述标记 SSR337由序列表的序列 43所示 DNA和序列表的序列 44所示 DNA组成；所述标记 SSR343由序列表的序列 45所示 DNA和序列表的序列 46所示 DNA组成；所述标记 SSR344由序列表的序列 47尸所/ T不示 U DINAA和序亍夕列 U衣表 t的J序亍夕列 LI 4488尸所/ Τ不示 U D1NAA組组成乂；； f所, 述标记 SSR58由序列表的序列 49 所示 D ^N^ΤA^Λ和η序列表的序^列'ι 50所示 DNA组成；所 fie述标记 _SSR239由序列表的序歹 I¹ 5 ^{C 1}1 所 7示Γ, DDNNAA和和序序列歹 II表表的的序序列歹 II 5522所所示示 DDNNAA銪组成成：；所所述标记 SSR243由序列表的序歹 I 53 所示 DNA和序列表的序列 54所示 DNA组成所述标记 SSR248由序列表的序歹 I 55 所示 DNA和序列表的序列 56所示 DNA组成所述标记 SSR255由序列表的序歹 I 57 所示 DNA和序列表的序列 58所示 DNA组成所述标记 SSR256由序列表的序歹 I 59 所示 DNA和序列表的序列 60所示 DNA组成所述标记 SSR106由序列表的序歹 I 61 所示 DNA和序列表的序列 62所示 DNA组成所述标记 SSR105由序列表的序歹 I 63 所示 DNA和序列表的序列 64所示 DNA组成所述标记 SSR300由序列表的序歹 I 65 所所示示 DDNNAA和和序序列列表表的的序序列列 6666所所；示 DNA组成；所 _{Γ Ι}述^^标」、记 SSoRiv30w 1i 由 m序^列u表^的p'j序^歹 Ii 67 所示 DNA和序列表的序列 68所示 DNA组成；所述标记 SSR302由序列表的序歹【 _ν 69 所 Γ/ Ι示J、 DNA和m序T列J表^ 的n'J序T列J 70 υ所 r/ l示J、 D uNi^AA组成乂；；所尸/ T述Jd标R^记G SSSSRR1122由由序序列列表表的的序序列列 77 :1所示示 DDNNAA和和序序列列表表的的序序列列 7722所所示示 DDNNAA组组成成；；所所述述标标记记 SSSSRR1144由由序序列列表表的的序序列列 7733月所示 DNA和序列表的序列 74所示 DNA组成；所述标记 SSR285由序列表的序列 75所示 Π υ DΝΐNΝΛAΑ和 ¾序序了 7列别U^表芜的[的TJ序序了列别 77fi υ6 /所所7 I云示J Π DΝNAΑ细组成 Rft .；所所 ^述标+二^记 SSR1^79 ^由序 ^列*,ι表 Λ的/,序 ^列*,ι 77

DNA和序列表的序列 78所示 DNA组成所述标记 SSR261 由序列表的序列 79 DNA和序列表的序列 80所示 DNA组成所述标记 SSR152由序列表的序列 81所示 DNA和序列表的序列 82所示 DNA组成所述标记 SSR147由序列表的序列 83所示 DNA和序列表的序列 84所示 DNA组成所述标记 SSR156由序列表的序列 85所示 DNA和序列表的序列 86所示 DNA组成所述标记 SSR164由序列表的序列 87所示 DNA和序列表的序列 88所示 DNA组成所述标记 SSR172由序列表的序列 89所示 DNA和序列表的序列 90所示 DNA组成所述标记 SSR173由序列表的序列 91所示 DNA和序列表的序列 92所示 DNA ϊ组\成；所述标记 STS01由序列表的序列 93所示 DNA 和序列表的序列 94所示 DNA组成；所述标记 SτTςS3¾⁷78« ώ由序ι¾列^ιΙ表* ή的^序ι¾列^ιΙ ( 95所示 DNA 和 /|·μ序 /Τ'列 U表 -P的 0 'J序 /^Γ列 U 96所 /7 I示,J、 D ^N丄、A n组 i=±L成W；所述：记 STS373由序列表的序列 97所示 DNA 和序列表的序列 98所示 DNA组成；所述标、记 STS400由序列表的序列 99所示 DNA 和序列表的序列 100所示 DNA组成；所述标：记 STS414由序列表的序列 101所示 DNA 和和序斤列夕 I」表衣的 t J序斤列夕 l」 110U2所尸 Λ示不 D UNNAA组成；;所 ΡΆ述Μ标ν^ '记 STi S4^1i6u由 m序; J ^列U表^的M -J序; 列 1 i03所 _Π \示 /」、 DNA 和 ¾Π序Ι¾列万 ||表害的序列万 II 110044所 Wr^示: Π DΜNAΛ 所 f¾i¾述R标i*记 STS444由序≠?列r表的序列 105所示 DNA 和 ,Ι 序列表的序列 106所 I示 /j DNA组 ¾R成P乂；；所述述标记 STS446由序列表的序列 107所 f示 DNA 和序列表的序列 108所示 DNA组组；成 ¾;；尸所/ Γ述标记 STS434由序列表的序列 109所示 DNA 和序列表的序列 110所示 DNA组成；. 所 f¾i述标*记 STS02由序列表的序列 111所示 DNA 和序列表的序列 112所示 DNA组成；所述标记 STS03由序列表的序列 113所示 DNA 和序列表的序列 114所示 DNA组成；所述标际记 STS04由i序y列^表zm的i序列 115所示 DNA 和序列表的序列 116所示 DNA组成；所述标记 STS06由序列表的序列 117所示 DNA 和序列表的序列 118所示 DNA组成。

3、辅助筛选抗茎腐病玉米的专用引物，包括如下标记中的至少一对：权利要求 2所述标记 CAPS372、权利要求 2所述标记 CAPS353、权利要求 2所述标记 CAPS401、权利要求 2所述标记 CAPS402、权利要求 2所述标记 CAPS429、权利要求 2所述标记 SSR35、权利要求 2所述标记 SSR36、权利要求 2所述标记 SSR44、权利要求 2所述标记 SSR46、权利要求 2所述标记 SSR47、权利要求 2所述标记 SSR77、权利要求 2所述标记 SSR85、权利要求 2所述标记 SSR87、权利要求 2所述标记 SSR90、权利要求 2所述标记 SSR93、权利要求 2所述标记 SSR100、权利要求 2所述标记 SSR198、权利要求 2所述标记 SSR114、权利要求 2所述标记 SSR118、权利要求 2所述标记 SSR120、权利要求 2所述标记 SSR334、权利要求 2所述标记 SSR337、权利要求 2 所述标记 SSR343、权利要求 2所述标记 SSR344、权利要求 2所述标记 SSR58、权利要求 2所述标记 SSR239、权利要求 2所述标记 SSR243、权利要求 2所述标记 SSR248、权利要求 2所述标记 SSR255、权利要求 2所述标记 SSR256、权利要求 2所述标记 SSR106、权利要求 2所述标记 SSR105、权利要求 2所述标记 SSR300、权利要求 2 所述标记 SSR301、权利要求 2所述标记 SSR302、权利要求 2所述标记 SSR12、权利要求 2所述标记 SSR14、权利要求 2所述标记 SSR285、权利要求 2所述标记 SSR179、权利要求 2所述标记 SSR261、权利要求 2所述标记 SSR152、权利要求 2所述标记 SSR147、权利要求 2所述标记 SSR156、权利要求 2所述标记 SSR164、权利要求 2 所述标记 SSR172、权利要求 2所述标记 SSR173、权利要求 2所述标记 STS01、权利要求 2所述标记 STS378、权利要求 2所述标记 STS373、权利要求 2所述标记 STS400、权利要求 2所述标记 STS414、权利要求 2所述标记 STS416、权利要求 2所述标记 STS444, 权利要求 2所述标记 STS446、权利要求 2所述标记 STS434、权利要求 2 所述标记 STS02、权利要求 2所述标记 STS03、权利要求 2所述标记 STS04和权利要求 2所述标记 STS06。
4、如权利要求 3所述的专用引物，其特征在于：所述茎腐病是由禾谷镰刀菌

{ Fu sari urn graminearum) 弓 |起的。
5、权利要求 3或 4所述专用引物在制备抗茎腐病玉米的试剂盒中的应用。
6、如权利要求 5 所述的应用，其特征在于：所述茎腐病是由禾谷镰刀菌 { Fu sari urn graminearum) 弓 |起的。
7、一种辅助筛选抗茎腐病玉米的试剂盒，包括权利要求 3或 4所述专用引物。
8、如权利要求 7 所述的试剂盒，其特征在于：所述茎腐病是由禾谷镰刀菌 ( Fusarium graminearum) 弓 |起的。
9、一种辅助筛选抗茎腐病玉米的方法，包括如下（1 ) 至（59 ) 中任一所述的步骤：

( 1 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 CAPS372进行

PCR扩增，如果得到 697bp且能被限制性内切酶 PvuI I酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 2 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 CAPS353进行 PCR扩增，如果得到 435bp且不能被限制性内切酶 Cfrl酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 3 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 CAPS401进行

PCR扩增，如果得到 541bp且能被限制性内切酶 Bgl l酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 4) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 CAPS402进行 PCR扩增，如果得到 719bp且能被限制性内切酶 Mnl l酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 5 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 CAPS429进行 PCR扩增，如果得到 531bp且能被限制性内切酶 Avai l酶切的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 6 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR35进行 PCR 扩增，如果得到 150bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 7 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR36进行 PCR 扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 8 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR44进行 PCR 扩增，如果得到 230bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； ( 9 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR46进行 PCR 扩增，如果得到 120bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 10 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR47进行 PCR 扩增，如果得到 260bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 11 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR77进行 PCR 扩增，如果得到 230bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 12 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR85进行 PCR 扩增，如果得到 150bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 13 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR87进行 PCR 扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； ( 14)以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR90进行 PCR 扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 15 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR93进行 PCR 扩增，如果得到 230bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 16 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR100进行 PCR扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 17 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR198进行 PCR扩增，如果得到 166bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； (18) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR114进行 PCR扩增，如果得到 240bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(19) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR118进行 PCR扩增，如果得到 225bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； (20) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR120进行

PCR扩增，如果得到 254bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(21) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR334进行 PCR扩增，如果得到 301bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(22) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR337进行 PCR扩增，如果得到 96bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(23) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR343进行 PCR扩增，如果得到 244bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(24) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR344进行 PCR扩增，如果得到 164bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； (25)以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR58进行 PCR 扩增，如果得到 120bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(26) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR239进行 PCR扩增，如果得到 188bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(27) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR243进行 PCR扩增，如果得到 294bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(28) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR248进行 PCR扩增，如果得到 253bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(29) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR255进行 PCR扩增，如果得到 207bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； (30) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR256进行

PCR扩增，如果得到 218bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(31) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR106进行 PCR扩增，如果得到 llObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(32) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR105进行 PCR扩增，如果得到 llObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(33) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR300进行 PCR扩增，如果得到 215bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

(34) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR301进行 PCR扩增，如果得到 210bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； (35) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR302进行

PCR扩增，如果得到 202bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； (36)以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR12进行 PCR 扩增，如果得到 236bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 37 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR14进行 PCR 扩增，如果得到 210bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 38 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR285进行 PCR扩增，如果得到 370bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 39 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR179进行 PCR扩增，如果得到 270bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 40 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR261进行 PCR扩增，如果得到 173bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； ( 41 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR152进行

PCR扩增，如果得到 150bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 42 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR147进行 PCR扩增，如果得到 lOObp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 43 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR156进行 PCR扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 44 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR164进行 PCR扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 45 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR172进行 PCR扩增，如果得到 260bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； ( 46 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 SSR173进行

PCR扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 47 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS01进行 PCR 扩增，如果得到 500bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 48 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS378进行 PCR扩增，如果得到 567bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 49 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS373进行 PCR扩增，如果得到 177bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 50 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS400进行 PCR扩增，如果得到 292bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； ( 51 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS414进行

PCR扩增，如果得到 396bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 52 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS416进行 PCR扩增，如果得到 180bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 53 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS444进行 PCR扩增，如果得到 669bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 54 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS446进行 PCR扩增，如果得到 584bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； ( 55 ) 以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS434进行 PCR扩增，如果得到 429bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 56 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS02进行 PCR 扩增，如果得到 1500bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米； ( 57 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS03进行 PCR 扩增，如果得到 300bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 58 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS04进行 PCR 扩增，如果得到 1200bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米；

( 59 )以待测玉米的基因组 DNA为模板，用权利要求 2所述标记 STS06进行 PCR 扩增，如果得到 250bp的 PCR扩增产物，所述待测玉米为候选的抗茎腐病玉米。
10、如权利要求 9 所述的方法，其特征在于：所述茎腐病是由禾谷镰刀菌 ( Fusarium graminearum) 弓 |起的。
11、权利要求 3或 4所述专用弓 I物在玉米育种中的应用。
12、如权利要求 11所述的应用，其特征在于：采用权利要求 9或 10所述方法鉴定出的候选的抗茎腐病玉米，将所述候选的抗茎腐病玉米进行育种。