CN102391106A

CN102391106A - 一种从下田菊中提取高纯度下田菊酸b的方法

Info

Publication number: CN102391106A
Application number: CN2011102639891A
Authority: CN
Inventors: 刘东锋; 郭琴
Original assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2011-09-08
Filing date: 2011-09-08
Publication date: 2012-03-28

Abstract

本发明涉及一种从下田菊中提取高纯度下田菊酸B的方法，包括以下三个步骤：1）乙醇提取：将下田菊全草粉碎，采用回流提取或连续提取等方法用乙醇提取，提取液浓缩至无醇味；2）大孔树脂吸附：将所得浓缩液通过大孔吸附树脂分离，水醇梯度洗脱，洗脱液减压回收乙醇，得到提取物；3）高速逆流色谱纯化：将所得提取物用高速逆流色谱法进一步纯化，得到纯度95%以上的下田菊酸B。本发明实现后与传统工艺相比，具有简便、快速、制备量大、产品纯度高等优点，易于推广使用。

Description

一种从下田菊中提取高纯度下田菊酸B的方法

技术领域

本发明属于天然药物领域，具体涉及一种从下田菊中提取高纯度下田菊酸B的方法。

背景技术

下田菊酸B（Adenostemmoic acid B），分子式为C₂₀H₂₈O₅，分子量为348.44，CAS号为130217-16-2，是一种贝壳杉烷型二萜酸类化合物，为无色针晶，mp.273-274℃。药理研究表明，下田菊酸B具有细胞毒活性，对L-517Y细胞呈细胞毒作用，100mg/kg×5d，延命率178%。

下田菊（Adenostemma lavenia(L.)O.Ktze.）系菊科（Compositae）下田菊属植物，为一年生草本，别名白龙须（云南思茅）、水胡椒、风气草、汗苏麻等，主产于长江流域以南以及沿海和西南各地，生于林下及潮湿处。全草入药，具清热利湿，解毒消肿之功效，可用于感冒高热、支气管炎、咽喉炎、扁桃体炎、黄疸型肝炎的治疗，外治痈疥疮疡、蛇咬伤等。下田菊资源丰富，但对其化学成分研究较少。杨永利等采用水蒸气蒸馏法、两相溶剂萃取法提取下田菊地上部分的挥发油，采用GC-MS法分离并鉴定其挥发油的化学成分。主要成分为α-荜澄茄油烯、石竹烯和γ-榄香烯等。现有文献中还没有检索到从下田菊中提取制备高纯度下田菊酸B的工艺报道。

发明内容

本发明的目的就是提供一种从下田菊中提取高纯度下田菊酸B的方法，以填补目前高纯度下田菊酸B提取制备技术的空白。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种从下田菊中提取高纯度下田菊酸B的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）乙醇提取：将下田菊全草粉碎，投入提取罐，加入体积百分比60%-95%的乙醇，采用回流提取或连续提取等方法提取2-4小时，收集提取液浓缩至无醇味；

2）大孔树脂吸附：将所得浓缩液通过大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱至流出液无色，再用水醇梯度洗脱，洗脱梯度依次为5%-20%乙醇、75%-80%乙醇，收集洗脱液减压回收乙醇，得到提取物；

3）高速逆流色谱纯化：将所得提取物用高速逆流色谱法进一步纯化，采用正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，得到纯度95%以上的下田菊酸B。

步骤2）所述大孔吸附树脂可选AB-8、D101、HPD100等极性或非极性大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂与原料的质量比为1:10-50。

步骤3）所述洗脱系统正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其体积比为（12-17）：（18-23）：（18-23）：（15-20）。

本发明的有益效果是：

本发明以价格便宜的大孔吸附树脂为载体，以乙醇为溶剂梯度洗脱，再通过高速逆流色谱进一步分离纯化，得到纯度大于95%的下田菊酸B产品，本发明方法工序简单、快速、绿色环保，产品纯度高。

具体实施方式

实施例1：

将下田菊全株药材粉碎，取500g加入3L80%乙醇溶液加热回流提取2小时，过滤，滤渣再加入2.5L80%乙醇溶液回流提取2小时，过滤，合并两次提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的D101大孔吸附树脂柱，大孔树脂的重量为33.5g，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用10%乙醇、75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得到下田菊酸提取物。将下田菊酸B提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（12:18:18:15）为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶剂得到下田菊酸B，经HPLC法测定，其纯度为97.4%。

实施例2：

将下田菊全株药材粉碎，取500g加入5L65%乙醇溶液加热回流提取3.5小时，过滤；滤渣再加入4L65%乙醇溶液回流提取2小时，过滤；滤渣再重复上述操作提取2小时，合并三次提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，大孔树脂的重量为25g，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用10%乙醇、80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得到下田菊酸B提取物。将下田菊酸B提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（15:20:19:17）为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶剂得到下田菊酸B，经HPLC法测定，其纯度为96.6%。

实施例3：

将下田菊全株药材粉碎，取1000g加入8L72%乙醇溶液索氏提取3小时，收集提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的HPD100大孔吸附树脂柱，大孔树脂的重量为33.5g，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用15%乙醇、75%乙醇洗脱，收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得到下田菊酸B提取物。将下田菊酸B提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（14:23:23:20）为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶剂得到下田菊酸B，经HPLC法测定，其纯度为95.8%。

实施例4：

将下田菊全株药材粉碎，取2000g加入10L95%乙醇溶液加热回流提取3小时，过滤，滤渣再加入8L95%乙醇溶液回流提取2小时，过滤，合并两次提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，大孔树脂的重量为40g，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用20%乙醇、80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得到下田菊酸提取物。将下田菊酸B提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（17:21:21:19）为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶剂得到下田菊酸B，经HPLC法测定，其纯度为96.2%。

实施例5：

将下田菊全株药材粉碎，取5000g加入35L60%乙醇溶液索氏提取4小时，收集提取液，减压浓缩至无醇味，将浓缩液通过预处理好的D101大孔吸附树脂柱，大孔树脂的重量为200g，先用去离子水洗脱至洗脱液无色，再依次用5%乙醇、80%乙醇洗脱，收集80%乙醇洗脱液，减压浓缩得到下田菊酸B提取物。将下田菊酸B提取物采用高速逆流色谱法进行纯化，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水（13:19:19:15）为溶剂系统，下相为流动相，上相为固定相，收集下田菊酸B流分，回收溶剂得到下田菊酸B，经HPLC法测定，其纯度为96.8%。

Claims

1.一种从下田菊中提取高纯度下田菊酸B的方法，其特征在于包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的提取高纯度下田菊酸B的方法，其特征在于，步骤2）所述大孔吸附树脂可选AB-8、D101、HPD100等极性或非极性大孔吸附树脂，所述大孔吸附树脂与原料的质量比为1:10-50。

3.根据权利要求1所述的提取高纯度下田菊酸B的方法，其特征在于，步骤3）所述洗脱系统正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水，其体积比为（12-17）：（18-23）：（18-23）：（15-20）。