CN102389568B - 一种预防金鲳鱼溃疡病的疫苗 - Google Patents
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Abstract
一种预防金鲳鱼溃疡病的疫苗，本发明涉及一种疫苗。本发明提供了粪肠球菌(Enterococcus faecalis)在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途；还提供了一种疫苗，它是由粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成，还提供了该疫苗在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生抗溃疡的免疫力，能有效的预防金鲳鱼溃疡病。
Description
技术领域
本发明涉及一种鱼用疫苗，特别涉及一种预防金鲳鱼溃疡病的疫苗。
背景技术
金鲳鱼学名卵形鲳鲹，地方名称黄蜡鲳，金鲳，属硬骨鱼纲，鲈形目，鲹科，鲳鲹属。金鲳鱼具有肉质鲜美，营养丰富等特点，深受消费者欢迎。因此，金鲳鱼的养殖在全国范围内得到了迅速发展，其养殖规模与养殖产量都逐年增加。
但近年来在海南金鲳鱼养殖区发生了一种以体表皮肤溃疡，眼球突出，眼内有出血点，解剖观察发现肝、肾等明显肿大、充血为病变特征的“溃疡病”，具有传染性强，死亡率高等特点，给养殖户带来了巨大的经济损失。同时，由于药物的滥用，导致了耐药性的产生，给该病的治疗带来了很大的困难，并且，由于过度用药，导致鱼体内抗生素残留超标，给水产品品质造成影响，由此导致的经济损失，严重阻碍了金鲳鱼养殖在我国的健康发展。
为避免盲目用药带来的损失，提供一种特异性预防金鲳鱼溃疡病的疫苗是一个亟待解决的问题。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种新的疫苗。
本发明提供了粪肠球菌(Enterococcus faecalis)在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。根据现有文献报道，引起金鲳鱼溃疡病的致病菌是弧菌属的溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌和假单胞杆菌，粪肠球菌引起该病尚属首次发现。
本发明又提供了一种疫苗，它是由粪肠球菌(Enterococcus faecalis)和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。
优选地，上述疫苗包含致免疫有效量的灭活的粪肠球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。
所述的粪肠球菌是保藏号为CGMCC1.2135粪肠球菌菌株。
进一步优选地，所述的粪肠球菌是保藏号为CCTCC NO：M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌JC-1：TW-YYS-17菌株；所述的致免疫有效量为不低于1×105CFU/ml，优选为1×105-1×108CFU/ml；所述的辅料或者载体为水或吸附剂，所述的水为生理盐水或蒸馏水，所述的吸附剂是沸石或硅藻土。
本发明还提供了一种联合用药物，其包含前述疫苗以及透皮吸收促进剂且任选一种或多种药学上可接受的辅料或载体。
优选地，所述透皮吸收剂为氮酮，或莨菪碱。
本发明还提供了上述的疫苗在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。
优选地，所述的预防金鲳鱼溃疡病的药物是通过注射或者浸泡的方式给药的。
本发明最后提供了一种粪肠球菌(Enterococcus faecalis)菌株，它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号为CCTCC NO：M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌JC-1：TW-YYS-17菌株。
本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生抗溃疡的免疫力，有效的预防金鲳鱼溃疡病。
附图说明
图116S rDNA扩增结果，1道为阳性对照；2～5道为鉴定样品；6道为空白对照；M道为DNAmaker I。
具体实施方式
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
实施例1菌株的分离鉴定
1、实验材料与方法
1.1实验材料
金鲳鱼病原菌的分离纯化菌株：来源于海南临高县深海网箱养殖基地自然发病的金鲳鱼病灶处，并命名为JC-1：TW-YYS-17，简称JC-1，使用TSA培养基培养，并用细菌基因组DNA提取试剂盒提取基因组DNA，-20℃保存备用。培养的细菌保存于4℃冰箱备用。
试剂耗材：16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit(TAKARA)、细菌基因组DNA提取试剂盒(Tiangen)、测序引物(TAKARA)、蔗糖等生化鉴定管(杭州微生物试剂公司)、血琼脂平板及麦康凯平板(杭州微生物试剂公司)、琼脂糖(TianGen)、DNA Maker(TianGen)。
2、实验方法
(1)革兰氏染色剂观察
取过夜培养的新鲜斜面一支，用接种环挑取少量菌体，涂在滴有少量无菌生理盐水的载玻片上，进行革兰氏染色，于显微镜下观察染色结果。
(2)16S rDNA的扩增与分析
以提取的细菌基因组DNA作为模板，使用宝生物的16S rDNA BacterialIdentification PCR试剂盒扩增细菌的16S rDNA全长，16S-free H2O作为阴性对照，试剂盒中的DNA作为阳性对照。PCR体系及扩增程序如下：
PCR体系：
阴性对照使用1μL的16S-free H2O替代模板DNA，阳性对照取1μl的Positive Control DNA作为模板。
PCR扩增程序：
取5μL扩增产物进行琼脂糖凝胶(琼脂糖的浓度为1％)电泳分析，结果见图1。阳性对照及样品扩增产物确认无误，同时阴性对照确认无污染后。将PCR产物送上海生工生物工程技术服务有限公司测序。使用RDP数据库和NCBI Blast数据库进行16S rDNA序列比对分析，得到细菌的种属。
(3)细菌生化鉴定
根据16S rDNA序列比对分析结果，对分离株进行生化鉴定，鉴定方法按照鉴定手册进行。
3、鉴定结果
(1)培养及染色观察
JC-1菌株为革兰氏阳性细菌，单个、成双或短链排列，在血琼脂平板上呈较小、灰白色、湿润、凸起的菌落，在麦康凯琼脂平板上形成较小、干燥、粉红色菌落。
(2)16SrDNA扩增及分析
JC-1菌株经16SrDNA测序，结果表明该片段有1264bp，其16SrDNA序列为：
AGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCCACGATGCATAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCGGCAATGGACGAAAGTCTGACCGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGTTTTCGGATCGTAAAACTCTGTTGTTAGAGAAGAACAAGGACGTTAGTAACTGAACGTCCCCTGACGGTATCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGAGACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCTGCAGCAAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTTTGACCACTCTAGAGATAGAGCTTTCCCTTCGGGGACAAAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATTGTTAGTTGCCATCATTTAGTTGGGCACTCTAGCGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGGAAGTACAACGAGTCGCTAGACCGCGAGGTCATGCAAATCTCTTAAAGCTTCTCTCAGTTCGGATTGCAGGCTGCAACTCGCCTGCATGAAGCCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTTGTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTTGGAGCCAGCCGCCTAAGGTGGGATAGATGATTGGGGTGAAGTCGAAGCAAAGATCCAGG
将获得的序列在RDP数据库进行在线Classifer，结果表明该菌属于肠球菌属的细菌，再将获得的序列与Genbank中已报道的16S rDNA序列进行Blast分析，结果表明JC-1菌在系统发育树上与Enterococcus faecalis聚为一簇，其同源性为100％，结合形态学和生化特征，将其鉴定为Enterococcusfaecalis。
(3)生化鉴定结果
表1 JC-1菌株的生理生化特征
| 测定项目 | JC-1菌 | 粪肠球菌 | 金黄色葡萄球菌 |
| 动力 | - | - | - |
| 色素 | - | - | + |
| 蔗糖 | + | + | + |
| 甘露醇 | + | + | + |
| 乳糖 | + | + | + |
| 精氨酸 | + | + | d |
| 海藻糖 | + | + | + |
| 棉子糖 | - | - | - |
| 阿拉伯糖 | - | - | - |
| 丙酮酸盐 | + | + | + |
| 0.04％亚碲酸盐 | + | + | + |
注：“+”为阳性，“-”为阴性，“d”为11-89％为阳性
JC-1菌：分离自海南临高县深海网箱养殖基地病鱼
粪肠球菌：来源于中国微生物菌株保藏管理中心，编号为1.2135
金黄色葡萄球菌：来源于中国微生物菌株保藏管理中心，编号为1.0363
结合16S rDNA、形态学特征及生理生化特征，将JC-1：TW-YYS-17鉴定为粪肠球菌Enterococcus faecalis，进一步命名为金鲳鱼粪肠球菌JC-1：TW-YYS-17(Enterococcus faecalis JC-1：TW-YYS-17)，并于2011年3月17日将该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2011071。
实施例2粪肠球菌JC-1与粪肠球菌标准菌株(CGMCC 1.2135)对金鲳鱼致病性比较研究
1、材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株
金鲳鱼粪肠球菌(JC-1)分离并鉴定的来自自然感染发生溃疡病的金鲳鱼，保藏号为CCTCC M 2011071。
粪肠球菌标准菌株(CGMCC1.2135)，购于中国微生物菌株保藏管理中心。
1.1.2实验鱼
实验鱼：购于海南海丰深海网箱养殖场的健康金鲳鱼(Trachinotusovatus)，平均体重200.5+5.0g，实验前于水族箱内驯养1周。
2、实验方法
2.1细菌培养
将粪肠球菌JC-1和粪肠球菌标准菌株(CGMCC1.2135)分别接种TSA，28℃培养24h，活化菌接种TSB，28℃，120r/min摇床培养24h，培养物通过比浊法和平板计数法确定细菌浓度并采用生理盐水将细菌浓度调节为1.0×108cfu/mL
2.2实验分组与细菌接种
将试验鱼140尾平均分成7个组，6个实验组和1个对照组，对应注射物按0.2mL/尾进行注射，具体见表2，观察14天内的死亡数量和死亡率。
表2实验分组
3、实验结果
细菌注射后连续观察14天的死亡情况，具体结果见下表3：
表3死亡记录表
4、结论
由表3可知，金鲳鱼粪肠球菌(JC-1)与粪肠菌模式菌(CGMCC1.2135)对金鲳鱼都具有致病、致死性，但两者在毒性强弱上有差异，相同浓度情况下，金鲳鱼粪肠球菌(JC-1)比粪肠菌模式菌(CGMCC1.2135)毒性强。
实施例3粪肠球菌JC-1与粪肠球菌标准菌株(保藏号为CGMCC1.2135)制备的灭活全菌疫苗的免疫效果比较研究
1、材料
菌种：粪肠球菌JC-1，分离并鉴定的来自自然感染发生溃疡病的金鲳鱼，保藏号为CCTCC M 2011071；粪肠球菌标准菌株，其保藏号CGMCC1.2135，购于中国微生物菌株保藏管理中心。
实验鱼：购于海南海丰深海网箱养殖场的健康金鲳鱼(Trachinotusovatus)，平均体重400.2±5.9g，实验前于水族箱内驯养1周。
2、实验方法
(1)疫苗的制备
将粪肠球菌JC-1和粪肠球菌标准菌株(CGMCC1.2135)分别接种TSA平板，再用PBS洗下接种一系列的TSB肉汤经逐级增菌培养，采用平板计数法确定细菌浓度后，用浓度为0.5％(V/V)福尔马林，28℃灭活48h，制成全菌灭活疫苗。灭活前取样，通过平板计数法得出福尔马林灭活疫苗中含菌量为1.0×108CFU/mL。
(2)疫苗安全性检查
将制备的两种灭活全菌苗接种绵羊鲜血TSA琼脂平板，28℃恒温培养24-48h后观察平板上是否有细菌生长以判定菌体疫苗中是否含有未灭活的病原菌；同时采用腹腔注射的方法，将制备的菌体疫苗按正常接种量的5倍与10倍剂量接种健康金鲳鱼进行人工感染实验，接种后观察14d，检查菌体疫苗是否对健康金鲳鱼致病。
(3)保护性实验
实验分组：将120尾健康金鲳鱼随机平均分成6组，每组20尾。粪肠球菌JC-1和粪肠球菌标准菌株(CGMCC1.2135)制备的灭活全菌疫苗分别采用浸泡与注射两种免疫途径对金鲳鱼进行免疫，同时采用生理盐水设置对照组。
免疫后3周，采用粪肠球菌JC-1对免疫组与对照组的实验鱼进行人工攻毒感染，每尾实验鱼腹腔注射粪肠球菌JC-11.0×108CFU/ml病原菌0.2mL，观察各实验组的发病死亡情况，得出保护率。
3、结果
(1)疫苗的安全性
将两种疫苗0.1mL种于绵羊鲜血TSA琼脂平板，在28℃下培养24-48h，未发现细菌生长。制备灭活全菌疫苗按正常接种量的5倍与10倍剂量接种健康金鲳鱼进行人工感染实验，观察14d未发现接种实验鱼异常。试验结果表明浓度为0.5％(V/V)的福尔马林在28℃条件下对病原菌进行48h的灭活，能将病原菌彻底灭活，制备的疫苗是安全的。
(2)疫苗的保护性
将金鲳鱼粪肠球菌JC-1和粪肠球菌标准菌株(CGMCC 1.2135)制备的全菌灭活苗，采用注射与浸泡两种免疫途径对健康金鲳鱼进行免疫3周后，用1.0×108CFU/ml的金鲳鱼粪肠球菌JC-1对免疫后的实验鱼进行人工感染实验，按照下列公式计算相对免疫保护率(RPS)：
RPS(％)＝(对照组死亡率-实验组死亡率)/对照组死亡率×100％
结果如表4所示：
表4粪肠球菌JC-1与标准菌株(CGMCC1.2135)制备的疫苗的保护性比较
由表4可知，粪肠球菌JC-1制备的全菌灭活疫苗和粪肠球菌标准菌株CGMCC1.2135制备的全菌灭活苗对“溃疡病”均有保护作用，但是前者对“溃疡病”的保护率明显高于后者。另外，从表4也可以看出，在两种免疫途径中，注射方式的免疫效果好于浸泡方式。
实验证明，粪肠球菌(Enterococcus faecalis)可用于制备预防金鲳鱼溃疡病的疫苗，且在制备免疫预防金鲳鱼“溃疡病”疫苗的应用上，从自然感染发生溃疡病的金鲳鱼分离的粪肠球菌JC-1比粪肠球菌标准菌株(CGMCC1.2135)具有更强的针对性和更好的应用前景。
实施例4本发明粪肠球菌JC-1灭活疫苗的制备
1、材料
粪肠球菌JC-1：分离自自然感染发生溃疡病的金鲳鱼，保藏号为CCTCCM 2011071；健康金鲳鱼：购自海南某养殖场，平均体重500.6±7.1g，实验前于水族箱内驯养1周。
2、方法
(1)疫苗的制备
将粪肠球菌JC-1接种到TSA斜面培养基上28℃恒温培养24h，挑取菌落接种于TSA平板培养基上28℃恒温培养24h，用无菌生理盐水洗脱，调整菌液浓度为1.0×108CFU/mL，再加入0.6％的福尔马林在28℃振荡灭活24h，即为灭活的全菌疫苗，4℃环境中保藏备用。
(2)疫苗安全性检查
将制备的灭活全菌苗(浓度为1.0×108CFU/ml)接种于绵羊鲜血TSA琼脂平板，28℃恒温培养24-48h后观察平板上是否有细菌生长以判定菌体疫苗中是否含有未灭活的病原菌；同时采用腹腔注射的方法，将制备的菌体疫苗(浓度为1.0×108CFU/ml)按正常接种量的5倍与10倍剂量接种健康金鲳鱼进行人工感染实验，接种后观察14d，检查该疫苗是否对健康金鲳鱼致病。
(3)保护性实验
实验分组：将200尾健康金鲳鱼随机平均分成10组，每组20尾。将制备的灭活全菌苗10倍稀释，分别采用浸泡与注射两种免疫途径对金鲳鱼进行免疫，同时采用生理盐水设置对照组。
免疫后3周，采用粪肠球菌JC-1对免疫组和对照组的实验鱼进行人工攻毒感染，每尾实验鱼腹腔注射0.2ml粪肠球菌JC-11.0×108CFU/ml，观察各实验组的发病死亡情况，得出保护率，评定疫苗的免疫效果。
3、结果
(1)疫苗的安全性
将该疫苗0.1ml接种于绵羊鲜血TSA琼脂平板，在28℃下培养24-48h，未发现细菌生长。用制备的灭活的全菌疫苗按正常接种量的5倍与10倍剂量对健康金鲳鱼进行攻毒感染，观察14d未发现接种鱼发现异常。实验结果表明浓度为0.5％(V/V)的福尔马林在28℃条件下对病原菌进行48h的灭活，能将病原菌彻底灭活，制备的疫苗是安全的。
(2)疫苗的保护性
保护性实验结果见表5：
表5粪肠球菌JC-1灭活疫苗免疫后的保护情况
由表5可知，用本实施例制备的灭活的粪肠球菌JC-1全菌疫苗经浸泡与注射的方式免疫金鲳鱼后，金鲳鱼均能产生抵抗“溃疡病”的能力，且抵抗能力随着疫苗菌体浓度的升高而增强；两种免疫途径相比，注射免疫的免疫效果好于浸泡免疫途径。
实验证明，本发明制备得到了免疫效果好的灭活疫苗，在灭活疫苗中菌液浓度大于1.0×105CFU/ml时，该疫苗即对“溃疡病”具有抵抗作用，且该灭活疫苗中菌液浓度为1.0×108CFU/ml时，疫苗仍然安全。
实施例5灭活疫苗水剂和粉剂的制备
1、粪肠球菌灭活疫苗的制备
(1)菌种复苏
在无菌条件下，取4℃条件下保存的粪肠球菌JC-1(保藏号为CCTCC M2011071)用接种环从菌种管中挑取少量细菌接种到10ml TSB肉汤，将接种后的肉汤放入水浴振荡器中，28℃，110r/min，振荡培养24h。
(2)菌液增殖培养
a，初级培养
把复苏培养的菌液10ml接种再次接种500ml TSB肉汤，将接种后的肉汤放入水浴振荡器中，28℃，110r/min，振荡培养48h。
b，菌液次级培养
将次级培养的TSB肉汤均匀的涂布在制备好的TSA平板上，将涂布好的TSA平板放入28℃恒温培养箱中培养48h(培养时间以细菌苔长满整个平板为度)；在无菌工作室，用灭菌的生理盐水冲洗平板上生长的菌苔，将洗下的菌悬液置于灭菌的输液瓶中。
c，洗脱菌液扩大培养
将从平板上洗脱的菌液按每10ml接种200ml TSB肉汤，进行菌液的扩大培养，28℃，110r/min，振荡培养48h。得到高浓度的细菌悬液。
d，菌液的计数
对增殖培养后的菌液采用平板稀释细菌技术方法进行计数：
选取大小一致的平板清洗高压灭菌后，制备TSA平板备用；
无菌操作将在菌苗制备过程中取的菌液进行倍比(10n)稀释备用；
将稀释的菌液取0.1ml涂布TSA平板，28℃，恒温箱中培养36小时，计数菌落个数；
选择平均菌落数在30-300个之间稀释度的平板，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数，则为该菌的细菌总数。
疫苗中含有的细菌数合适的浓度为1.0×108CFU/ml
(3)菌液的灭活
对扩大培养的菌液，按体积比例添加5-6％的甲醛，放入水浴振荡器中，28℃，110r/min，振荡48h灭活。
(4)灭活效果检查
灭活后的菌悬液每次需进行灭活效果的检查，在无菌操作下用接种环挑取少量灭活的菌苗在TSA平板上划线，将划线后的平皿置于入28℃恒温培养箱中，培养48h，检查有无细菌生长，若有细菌生长需再进行灭活处理，若无细菌生长则进行下面的操作程序。
(5)菌苗的分装
灭活完全的疫苗，无菌操作进行分装于500ml灭菌高温瓶中，并对橡胶塞有孔隙的应采用石蜡封闭，即为灭活疫苗水剂。分装好的灭活疫苗应置于4℃保存，备用。制备放入水剂浸泡免疫使用时可以与10mg/L的氮酮促渗剂联合应用，可同时混合使用，也可单独使用。
在上述制备得到分装好的福尔马林灭活的全菌疫苗水溶液的基础上，进一步制成粉剂的方法有如下两种：
1、冷冻干燥法
将无菌操作条件下分装好的福尔马林灭活的全菌疫苗水溶液，放入真空冷冻干燥机进行预冻，待预冻达到一定温度时抽真空干燥。冻干结束后，充入干燥无菌的空气进入干燥箱，然后尽快地进行加塞封口，以防重新吸入空气中的水分。
2、低温烘干法
将无菌操作条件下分装好的福尔马林灭活全菌疫苗水溶液在低温条件下进行水分蒸发烘干，加入吸附剂沸石或硅藻土低温烘干，烘干后的粉剂存放于无菌的玻璃瓶中。整个操作过程需在无菌条件下进行，烘干温度在40℃-50℃，以免影响抗原性。
干燥后加入辅料可溶性淀粉，得到灭活疫苗粉剂，规格：11.0×108CFU/g。
综上，本发明提供的疫苗可刺激金鲳鱼产生抗溃疡的免疫力，能有效的预防金鲳鱼溃疡病，可避免农药的过度施用，是大规模水产养殖实现安全、生态的一种有效方法，可以提高金鲳鱼的品质，实现良好的经济效益。
Claims (12)
1.粪肠球菌（Enterococcus faecalis）在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途；所述药物包含致免疫有效量的灭活的粪肠球菌。
2.一种疫苗，其特征在于：它是由灭活的粪肠球菌（Enterococcus faecalis）和药学上可接受的辅料或者载体制备而成；所述的粪肠球菌是保藏号为CCTCC NO：M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌 JC-1：TW-YYS-17菌株。
3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于：所述疫苗包含致免疫有效量的灭活的粪肠球菌以及药学上可接受的辅料或者载体。
4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述的致免疫有效量为不低于1×105CFU/ml。
5.根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述的致免疫有效量为1×105-1×108 CFU/ml。
6.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于：所述的辅料或者载体为水或吸附剂。
7.根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述的水为生理盐水或蒸馏水，所述的吸附剂是沸石或硅藻土。
8.一种联合用药物，其特征在于：它包含权利要求2-7任意一项所述的疫苗以及透皮吸收促进剂。
9.根据权利要求8所述的联合用药物，其特征在于：所述透皮吸收剂为氮酮，或莨菪碱。
10.权利要求2-7任意一项所述的疫苗在制备预防金鲳鱼溃疡病的药物中的用途。
11.根据权利要求10所述的用途，其特征在于：所述的预防金鲳鱼溃疡病的药物是通过注射或者浸泡的方式给药。
12.一种粪肠球菌（Enterococcus faecalis）菌株，其特征在于：它是由中国典型培养物保藏中心保藏的保藏号为CCTCC NO：M 2011071的金鲳鱼粪肠球菌 JC-1：TW-YYS-17菌株。
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Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1261916A (zh) * | 1997-05-06 | 2000-08-02 | 人体基因组科学有限公司 | 粪肠球菌多核苷酸及多肽 |
| WO2001032205A1 (fr) * | 1999-10-29 | 2001-05-10 | Takeda Schering-Plough Animal Health K.K. | Preventifs muqueux contre la mastite |
| CN101067120A (zh) * | 2006-11-29 | 2007-11-07 | 康哲医药研究(深圳)有限公司 | 粪肠球菌cms－h001及其应用 |
| CN101275158A (zh) * | 2007-11-05 | 2008-10-01 | 孙卫 | 优良粪肠球菌的筛选制备方法及其应用 |
| CN101277708A (zh) * | 2005-10-06 | 2008-10-01 | 雀巢技术公司 | 用于改良免疫性的益生肠道球菌 |
-
2011
- 2011-11-24 CN CN201110378121.6A patent/CN102389568B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1261916A (zh) * | 1997-05-06 | 2000-08-02 | 人体基因组科学有限公司 | 粪肠球菌多核苷酸及多肽 |
| WO2001032205A1 (fr) * | 1999-10-29 | 2001-05-10 | Takeda Schering-Plough Animal Health K.K. | Preventifs muqueux contre la mastite |
| CN101277708A (zh) * | 2005-10-06 | 2008-10-01 | 雀巢技术公司 | 用于改良免疫性的益生肠道球菌 |
| CN101067120A (zh) * | 2006-11-29 | 2007-11-07 | 康哲医药研究(深圳)有限公司 | 粪肠球菌cms－h001及其应用 |
| CN101275158A (zh) * | 2007-11-05 | 2008-10-01 | 孙卫 | 优良粪肠球菌的筛选制备方法及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| Evaluation of the low dose level of a heat-killed and dried cell preparation of Enterococcus faecalis to prevent porcine edema disease using experimental infection model with enterotoxcemic Escherichia coli in weaning pigs;Tsukahara et al;《Journal of Veterinary Medical Science》;20070228;第69卷(第2期);参见摘要 * |
| Tsukahara et al.Evaluation of the low dose level of a heat-killed and dried cell preparation of Enterococcus faecalis to prevent porcine edema disease using experimental infection model with enterotoxcemic Escherichia coli in weaning pigs.《Journal of Veterinary Medical Science》.2007,第69卷(第2期),103-109. |
| 抗肠球菌感染免疫治疗策略的基础理论;黄孝天等,1;《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》;20051210(第06期);参见摘要 * |
| 黄孝天等,1.抗肠球菌感染免疫治疗策略的基础理论.《国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册》.2005,(第06期), |
Also Published As
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