CN1261916A - 粪肠球菌多核苷酸及多肽 - Google Patents

Abstract

本发明涉及来自粪肠球菌的新基因及其编码的多肽,还提供了载体、宿主细胞、抗体及其生产方法。本发明还涉及用于检测生物学样品中的肠球菌核酸、多肽和抗体的诊断方法。本发明进一步涉及用于预防或降低肠球菌感染的新的疫苗。

Description

粪肠球菌多核苷酸及多肽

发明领域

本发明涉及新的粪肠球菌基因的核苷酸及多肽，同时提供载体、宿主细胞及产生其的重组方法。还提供的是使用本发明的粪肠球菌核苷酸及多肽的探针、引物及抗体检测粪肠球菌的诊断方法。本发明进一步小及鉴别粪肠球菌活性的兴奋剂和拮抗剂的筛选方法，以及利用粪肠球菌核苷酸及多肽所制的疫苗。

发明背景

从本世纪以来肠球菌就被看作人类的致病源，Thiercelin于1988年首次描述此种显微生物。肠球菌属中包括粪肠球菌，它是该属之中最为常见的病原体，全部肠球菌感染中的80-90％是由其导致的。见Lewis等(1990)欧洲临床微生物感染疾病杂志，9：111-117。

近年来肠球菌感染的发病率有所增加，肠球菌如今已经是医院病原体报道频率中的第二位。肠球菌感染被特别关注是因为它对抗微生物剂的抗性。近来对肠球菌的集中关注不仅因为它医院感染的增加，而且因为它对抗微生物剂值得注意的和不断增强的抗性。这些因素是相互促进的，抗性使得肠球菌能够在大量使用抗微生物剂的环境下存活；医疗部门提供消除或抑制可疑细菌的抗生素，从而对抗性微生物提供了一个选择优势，而且医院还经过手和环境污染的通常途径提供了抗性肠球菌扩散的可能性。

抗微生物的抗性可以分为两种类型，遗传或内在的属性以及获得性的。内在抗性的基因，同其他的种属特性一样，位于染色质上。获得性抗性是由于已有DNA的突变或者获得了新的DNA。肠球菌表现出的各种遗传性质包括对半合成的抗青霉素酶青霉素、先锋霉素、低水平的氨基糖苷类、和低水平的氯洁霉素的抗性。获得性抗性包括对氯霉素、红霉素、高水平的氯洁霉素、高水平的氨基糖苷类、利用青霉素酶的青霉素、fluoroquinolones、和万古霉素的抗性。对无青霉素酶的高水平的青霉素的抗性和对fluoroquinolones的抗性还不清楚是质粒还是转座子介导的，推测其原因是由于突变。

虽然肠球菌在人体中主要的集中于胃肠道，但此细菌也可以存在于胆囊、尿道和阴道中。

粪肠球菌作为主要的病原体出现于心内膜炎、菌血症、尿道感染(UTIs)、内腹膜感染、软组织感染、和新生儿败血症(Lewis 1990，同上)。七十年代和八十年代中肠球菌被明确为主要的医院病原体。在，美国它如今已经是医院获得性感染的第四位致病因，以及是菌血症的第三位致病因。其中，肠球菌菌血症的死亡率从12％至68％，肠球菌败血症的死亡率从4至50％。见Emori，T.G.(1993)临床微生物综述，6：428-442。

肠球菌寄生于胃肠道的能力，以及其多种先天的和获得的抗性特点，意味着该种微生物，通常是相对低毒性的，具有极佳的机会而成为二级侵入病菌。由于肠球菌的医院分离物表现出对非常常用的抗微生物剂的抗性，所以可能增加了成功治疗和控制肠球菌感染的难度，特别是当各种抗性基因存在于一个菌株之中时，这在未来的某一天很可能会出现。

由粪肠球菌介导或加剧的疾病的病原学，涉及粪肠球菌基因的程序化表达，对此类基因及其表达类型的鉴定，将极大地增加我们对该微生物与其宿主相互作用的了解。关于粪肠球菌基因和基因组结构的知识将促进我们对疾病病原学的了解，有助于获得预防、治疗和诊断疾病更为有利的新方法。因此，有必要对粪肠球菌的基因组以及该微生物的多核苷酸进行鉴定。

发明概述

本发明提供了分离的粪肠球菌多核苷酸和多肽。示于表1及SEQID NO：1至SEQ ID NO：496(奇数SEQ ID NO为多核苷酸序列，偶数SEQ ID NO为多肽序列)。本发明一方面提供了分离的核酸分子，此分子包含具有选自以下一组核苷酸序列的多核苷酸：(a)示于表1的核苷酸序列；(b)编码示于表1的任何氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；(c)与(a)或(b)中任何核苷酸序列互补的核苷酸序列。本发明还提供了以上(a)、(b)及(c)的核酸分子的片段。

本发明的进一步实施方案包括分离的核酸分子，其包含具有与上述(a)，(b)或(c)的任何核苷酸序列至少具有90％，优选至少95％，96％，97％，98％或99％相同性的核苷酸序列的多核苷酸，或在严格杂交条件下与以上(a)，(b)或(c)中多核苷酸杂交的多核苷酸。本发明另外的核酸实施方案涉及含有编码具有以上(a)中氨基酸序列的粪肠球菌多肽的携带表位部分的氨基酸序列的多核苷酸的分离的核酸分子。

本发明还涉及包含本发明的分离的核酸分子的重组载体，含重组载体的宿主细胞，以及制备如此载体及宿主细胞的方法。本发明进一步涉及这些载体在利用重组技术生产粪肠球菌多肽或肽中的应用。

本发明进一步提供了具有选自表1所述任何多肽或其片段的氨基酸序列的氨基酸序列的分离的粪肠球菌多肽。

本发明的多肽还包括具有与表1所述序列具有至少70％，优选至少75％，80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％相似性的氨基酸序列的多肽，以及具有与以上序列有至少70％，优选75％，更优选80％，85％，90％，95％，96％，97％，98％或99％相同性的氨基酸序列的多肽；以及编码如此多肽的分离的核酸分子。

本发明还提供了包括一个或多个表1所述粪肠球菌多核苷酸或多肽或其片段，以及药物学可接受稀释剂，载体或赋形剂的单组分疫苗或多组分疫苗，其中粪肠球菌多肽以有效刺激动物体对肠球菌属成员或至少粪肠球菌的免疫应答的量存在。本发明的粪肠球菌多肽还可以与一种或多种其它肠球菌或非肠球菌微生物的一种或多种免疫原组合，以生产能刺激抗肠球菌属成员以及任选地一种或多种非肠球菌微生物的免疫应答的多组分疫苗。

本发明的疫苗可以DNA形式应用，如“裸露的”DNA，其中DNA编码一种或多种肠球菌多肽以及任选地一种或多种非肠球菌微生物多肽。编码一种或多种多肽的DNA可被构建成这些多肽被表达作融合蛋白质。

本发明的疫苗也可作为基因工程微生物或宿主细胞的组分而应用。这样表达一种或多种粪肠球菌多肽的基因工程微生物或宿主细胞可用于动物。例如该基因工程微生物或宿主细胞可在其细胞表面或在其周质空间内含有本发明的一种或多种粪肠球菌多肽。另外该基因工程微生物或宿主细胞可分泌一种或多种粪肠球菌的多肽。本发明的疫苗也可与免疫系统调节剂(如CD86及GM-CSF)共用于动物。

本发明还提供了一种诱导动物对一种或多种肠球菌属成员、优选一种或多种粪肠球菌分离物的应答的方法，包括给动物施用上述疫苗。

本发明另外提供了一种诱导动物体内保护性免疫应答，以有效地预防、降低或控制肠球菌属成员，优选至少粪肠球菌的感染的方法，包括给动物施用含有一种或多种表1所述的多核苷酸或多肽，或其片段的组合物。另外这些多肽或其片段可以与另一种免疫原缀合和/或与佐剂混合应用。

本发明另外还涉及施用本发明的一种或多种粪肠球菌多肽而在动物体内诱发的抗体，以及生产该抗体及其片段的方法。本发明还涉及重组抗体及其片段，以及生产如此抗体及其片段的方法。

本发明也提供了检测动物体内由肠球菌属成员表达的表1的多核苷酸的诊断方法。一种如此方法包括分析来自动物的样品中编码粪肠球菌多肽的多核苷酸的表达，此表达可直接分析(如利用对表1所述氨基酸序列应答中诱发的抗体分析多肽水平)，或间接分析(如分析对表1所述氨基酸序列有特异性的抗体)。多核苷酸的表达也可通过检测表1的核酸加以分析。如此方法的一个例子包括利用PCR扩增并检测肠球菌核酸序列。

本发明还涉及具有全部或部分表1所述核苷酸序列(奇数SEQ IDNos)的核酸探针，其能在严格条件下与肠球菌核酸杂交。本发明进一步涉及一种检测得自动物的生物学样品中一种或多种肠道菌核酸的方法，所述一种或多种核酸编码肠球菌多肽，此方法包括：(a)在能发生杂交的条件下将样品与一种或多种上述核酸探针接触，(b)检测所述一种或多种探针与生物学样品中存在的肠球菌核酸的杂交。

本发明的多肽的其它应用包括：尤其是在免疫分析中作为附加表位，在SDS-PAGE凝胶上作为分子量标记，作为分子筛凝胶过滤柱的分子量标记以检测粪肠球菌；产生与本发明的粪肠球菌多肽特异结合的抗体以在免疫分析中检测粪肠球菌；产生抗粪肠球菌及其它肠球菌菌种的免疫应答；以及作为抗粪肠球菌，其它肠球菌菌种及其它细菌的疫苗。

本发明的分离的核酸分子，尤其是DNA分子可用作探针用于基因定位及在生物学样品中鉴别粪肠球菌，例如通过Southern及Northern印迹分析。本发明的多核苷酸也可用于利用特定粪肠球菌多核苷酸的引物经PCR检测粪肠球菌。本发明的分离的多核苷酸也可用于生产本发明的多肽。

详细描述

本发明涉及重组粪肠球菌核酸及其片段。本发明还涉及重组粪肠球菌多肽及其片段。本发明也涉及利用这些多肽产生免疫应答，并对肠球菌属成员，至少是粪肠球菌分离物所导致疾病提供免疫防护的方法。本发明进一步涉及编码抗原性粪肠球菌多肽的核酸序列，及检测生物学样品中粪肠球菌核酸及多肽的方法。本发明还涉及特异于本发明的多肽及肽的抗体以及检测宿主动物体内产生的这种抗体的方法。

定义

以下定义用于阐明发明人所认为的本发明的主题。

本文所用的术语“病原体”意指一种导致动物疾病状态或患病的物质。本定义包括例如细菌、原虫、真菌、病毒及后生动物寄生虫，其可导致疾病状态或使被如此生物体感染的动物易患病(如二次感染)，另外还包括导致动物患病的肠球菌属的菌种及菌株。

本文所用术语“微生物”意指任何活的生物系统，包括病毒，不管它是否是病原体。

本文所用术语“肠球菌”意指是肠球菌属成员的任何细菌菌种或菌株，本领域技术已知这些菌种及菌株，且包括病原性的及非病原性的。

本文所用术语“本发明的一种或多种粪肠球菌多肽”意指含有表1所述一种或多种粪肠球菌多肽的氨基酸序列(偶数SEQ ID NOS)的多肽。这些多肽可作为融合蛋白被表达，其中本发明的多肽与另外的源自肠球菌或非肠球菌的氨基酸序列连接。该术语进一步包括含本发明粪肠球菌多肽的片段的多肽。本说明书还提供了附加的定义。

表1说明：

表1提供了阐述编码粪肠球菌多肽的基因的信息。此表列出了由代表粪肠球菌的字母EF，及随后紧接着的给本发明的粪肠球菌基因编号的三位任意数字代码组成的基因鉴别码。三位数后接着数字1-4。1代表前三位数代表的基因的全长开放读框。2代表由前三位数代表的基因编码的全长多肽。3代表由前三位数代表的基因的多核苷酸片段，用于产生抗原性多肽。4代表由前三位数代表的基因的抗原性多肽片段，用于刺激免疫应答或用作疫苗。每个基因及片段的核苷酸及氨基酸序列以表1所列的SEQ ID NO方式示于序列表内。

表2说明：

表2列出本发明多肽与得自GenBank及德温特数据库的序列之间最匹配序列的登录号。这些登录号是熟知其名称的本领域技术人员通用的数据库进入号。GenBank命名的说明可得自National Centerfor Biotechnoloty Information。纵列1列出本发明的基因或ORF，纵列2列出GenBank或德温特数据库中“匹配”基因序列的登录号，纵列3列出“匹配”基因的说明，纵列4与5分别列出由BLAST计算出的高分值及最小总概率。与GenBank及德温特的任何多肽序列没有显著相同性/相似性的本发明的多肽未列在表2中。与GenBank及德温特的一种以上多肽有显著相同性/相似性的本发明多肽多次列出。

表3说明：

本发明的粪肠球菌多肽可包括表3所指明的天然突变或人为操作所致的一个或多个保守氨基酸取代。优选少量变化，如不明显影响蛋白质的折叠或活性的保守氨基酸取代。表3表明的以下一组的残基可以被其它一种所取代：芳香族的、疏水的、极性的、碱性的、酸性的及小的。

 表4说明：

表4列出本发明人用Jameson and Wolf，(1988)Comp.Appl.Biosci.4：181-186中的算法推出的，包括表1所述每个全长粪肠球菌多肽中存在的抗原性表位携带片段的抗原性表位的残基。Jameson-Wolf抗原性分析是利用计算机程序PROTEAN进行的(Version 3.11.for thePower MacIntosh，DNASTAR，Inc.，1228 South Park Street Madison，WI)。示于表1的粪肠球菌多肽可以是含有表4所述残基的一个或多个抗原性表位。应理解的是根据用于推断抗原决定簇的分析标准，决定簇的确切位置可以轻微变化。表4所述残基及位置相应于表1及序列表中示出的每个全长基因序列的氨基酸序列。经Jameson-Wolf算法识别不具有抗原性表位的本发明多肽未列于表2。

编码抗原性粪肠球菌多肽的核酸序列的筛选

测序的粪肠球菌基因组DNA得自粪肠球菌菌株V586。此粪肠球菌菌株V586于1997年5月2日保藏在ATCC，10801 University Blvd.Manassas，VA 20110-2209，保藏号55969。

一些包含在本文揭示的粪肠球菌基因组的片段的亚群中的ORFs经使用下述一系列筛选标准而被衍生。该ORFs在氨基末端被甲硫氨酸或缬氨酸残基限定，且在羧基末端通常由终止密码子限定。

大多数筛选序列由完整ORFs组成。不含有完整ORF的多肽可经检测相应多核苷酸序列是否在多肽序列中最后一个氨基酸残基的密码子之后含有终止密码子而检测出。不总是优选在异源系统中表达完整ORF。经普通实验方法表达和纯化高疏水性蛋白质可能比较复杂。本文所述一些多肽疫苗候选物已被轻微修饰以简化重组蛋白质的生产。例如编码高疏水区的核苷酸序列，如那些发现位于氨基末端的信号序列的序列，已被从用于多肽表达的一些结构中排除。进一步地在羧基末端的任何高疏水性氨基酸序列也已从重组表达构建体中清除。这样，在一个实施方案中，代表截短的或修饰的ORF的多肽可用作抗原。

本领域已知许多筛选潜在免疫原性多肽的方法，本文揭示的许多ORF是在筛选粪肠球菌ORFs基础上筛选几个潜在的免疫原性方面。一套筛选标准如下：

1、I型信号序列：氨基末端I型信号序列通常指导新生蛋白质穿过细胞质和外膜到达细菌细胞外。得自Escherichia coli的研究的实验结果提示：典型I型信号序列包括以下生物化学及物理学属性(Izard，J.W.and Kendall，D.A.，Mol.Microbiol.13：765-773(1994))。I型信号序列的长度大约为15-25个主要为疏水的氨基酸残基，并在最后氨基末端有净正电荷。另外该型信号序列的中心区在疏水环境中采取α-螺旋构型。最后，围绕裂解实际位点的区域理想地有6个残基长，且在-1及-3位内有小侧链氨基酸。

2、IV型信号序列：IV型信号序列是除上述I型信号序列之外的一些类型的功能信号序列的一个例子。尽管功能相关，IV型信号序列呈现特有的一系列生化及物理性质(Strom，M.S.and Lory，S.，J.Bacteriol.174：7345～7351(1992))。它们典型地具有6-8个带净碱性电荷的氨基酸，后接另外的16～30个主要为疏水的残基。IV型信号序列的裂解位点典型地位于氨基末端的前6-8个氨基酸之后。另外，IV型信号序列一般在相对于裂解位点的+1位含有一苯丙氨酸残基。

3、脂蛋白：对26个细菌脂蛋白前体裂解位点的研究明确了脂蛋白裂解的共有氨基酸序列。接近3/4的受测细菌脂蛋白前体在相对于裂解位点的-3～+1位含有序列L-(A，S)-(G，A)-C(Hayashi，S.and Wu，H，C.，J.Bioenerg.Biomembr.22：451-471(1990))。

4、LPXTG基序：已实验性检测出大多数在革兰化阳性菌表面发现的锚定蛋白具有高保守羧基末端序列。源自如化脓链球菌，S.mutans，粪肠球菌，肺炎链球菌及其它微生物的50多种如此蛋白质，已基于其胞外位置及羧基末端氨基酸序列被鉴定(Fischetti，V.A.，ASM News62：405～410(1996))。保守区由与推测作为跨膜区的15-20个疏水氨基酸偶联的羧基最末端的6个带电氨基酸组成。与跨膜区紧邻的是几乎在所有测试蛋白质中都保守的6个氨基酸的序列。此区域氨基酸序列为L-P-X-T-G-X，其中X是任一氨基酸。

筛选包括前述标准的抗原性及免疫原性粪肠球菌多肽的算法已研制出。该算法与美国专利申请08/781,986(申请日1997年1月3日)中所述相似，其全文引入本文作参考。本发明人利用此算法筛选免疫学有效的粪肠球菌多肽，结果筛选出一些所揭示的ORFs。含有在这一组内鉴别的多肽的多肽可以经本领域技术标准及本文进一步阐述的方法生产。

核酸分子：

测序的粪肠球菌基因组DNA得自粪肠球菌菌株V586。如本文所述，本发明的多核苷酸经常规应用熟知的标准DNA克隆及测序程序而易于得到。例如以下将提供获得文库及测序的具体方法。许多粪肠球菌菌株可用于制备粪肠球菌基因组DNA以克隆并获得本发明的多肽和多核苷酸，许多粪肠球菌菌株可从认可的保藏机构如美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得。应裂解的是不同的粪肠球菌菌株的核酸和氨基酸序列可能会有细微变异。本发明提供了来自所有粪肠球菌菌株的包括本发明多核苷酸和多肽的基因。

除了特别指明，所有本文中经DNA分子测序而确定的核苷酸序列都使用自动DNA测序仪(如Model 373，Applied Biosystems，Inc.，Foster City，CA)测定，且由本文确定的DNA分子编码的多肽的所有氨基酸序列都经如上确定的DNA序列的翻译而推导出。因而正如本领域已知的经此自动化程序确定的任何DNA序列均可能含有一些误差，所以本文确定的任何核苷酸序列可能含有一些误差。自动化确定的核苷酸序列典型地与测序的DNA分子的实际核苷酸序列至少有90％，更典型地具有至少95％-99.9％的相同性。实际序列可以其它手段包括本领域熟知的人工DNA测序法更精确地确定。本领域还已知，与实际序列相比在所确定的核苷酸序列中一个单插入或缺失，将导致核苷酸序列翻译中的移码，这样由所确定的核苷酸序列编码的推导的氨基酸序列从这种插入或缺失处起始将完全不同于由测序的DNA分子实际编码的氨基酸序列。在表1与列于表1的克隆的核酸序列或由列于表1的克隆表达的蛋白质的氨基酸序列之间有冲突的情况下，列于表1的克隆是正确的。核酸分子或多核苷酸的“核苷酸序列”意指DNA或RNA序列。使用本文提供的信息，如表1中的核苷酸序列，编码粪肠球菌多肽的本发明的核酸分子可通过标准克隆及筛选步骤，如用基因组DNA作为起始材料克隆DNA的步骤而获得。参见如Sambrook等，分子克隆实验手册(冷泉港，纽约，第2版，1989)；Ausubel等，分子生物学当前方案(John Wiley and Sons，N.Y.1989)。作为本发明的例证说明，表1所述的核酸分子在衍生自粪肠球菌基因组DNA的DNA文库中发现。

本发明的核酸分子可以是RNA形式如mRNA，或是DNA形式如经克隆获得或合成产生的DNA及基因组DNA。DNA可以是双链或单链的。单链的DNA或RNA可以是编码链，也已知为有义链，或其可以是非编码链，也指作反义链。

“分离的”核酸分子意指一核酸分子，DNA或RNA，已从其原始环境中分离出。这包括含有分离自原始染色体的本发明粪肠球菌多核苷酸的DNA区段。这些片段包括只由粪肠球菌DNA组成的分离的片段及含有异源序列如载体序列或其它外源DNA的片段。例如，包含于载体中的重组DNA分子为本发明之目的被认为是分离的。分离的DNA分子的其它实例包括保持在外源宿主细胞中的重组DNA分子或溶液中(部分或基本)纯化的DNA分子。分离的RNA分子包括本发明DNA分子的体内或体外RNA转录物。根据本发明的分离的核酸分子还包括合成产生的如此分子。

另外，本发明的分离的核酸分子包括含有与上述那些分子基本上不同的序列，但由于遗传密码的简并性仍编码本发明粪肠球菌多肽及肽(如表1的多肽)的DNA分子。即所有编码本发明粪肠球菌多肽的可能的DNA序列。其包括本领域已知的遗传密码及物种特异性密码子优势。这样，产生上述简并变体以例如针对特定宿主优化密码子表达(如将细菌mRNA中密码子转换至哺乳动物或其它细菌宿主如大肠杆菌优选的密码子)是本领域技术人员的常规工作。

本发明还提供具有表1所示核苷酸序列的分离的核酸分子或具有与上述任一序列互补的序列的分离的核酸分子。该分离的分子，尤其是DNA分子可被用作基因定位的探针及用于鉴定生物学样品中粪肠球菌，如经PCR，Southern印迹，Northern印迹或其它杂交分析形式。

本发明进一步涉及编码本文所述核苷酸序列的一部分或片段的核酸分子。该片段包括表1的核苷酸序列或表1所列质粒克隆中所含的粪肠球菌核苷酸序列的一部分，选自任意两个整数的至少10个连续的核苷酸长度，第一个整数相当于5’核苷酸位置，而第二个整数相应于3’核苷酸位置，其中在表1中各个核苷酸序列的第一个核苷酸是位置1。即，每一种5′和3′核苷酸位置的组合，其片段至少占据了10个连续的核苷酸，都包括在本发明之中。至少意味着一个片段的长度可以是10个连续的核苷酸或者是任意一个在10和表1的全部核苷酸长度减去1之间的整数。因此，包括于本发明的连续片段，由表1的核苷酸序列中任何5′和3′核苷酸碱基位点限定，其中连续片段长度是任意一个在10和全部核苷酸长度减去1之间的整数。

进一步，本发明包括含有以核苷酸数而非根据核苷酸位置限定大小的片段的多核苷酸。本发明包括任何的片段大小，基于连续的核苷酸，它是在10和全部核苷酸长度减去1之间的整数。优选的连续的核苷酸片段的大小包括20个核苷酸、30个核苷酸、40个核苷酸、50个核苷酸。其他优选的连续的核苷酸片段，可用作诊断探针或引物，包括长度为50-300个核苷酸的片段，其中包括，如上所述，片段大小为50-300之间的任何一个整数。根据本发明，相应于大部分(即使不是全部)表1所示的核苷酸序列或表1所列的质粒克隆的粪肠球菌核苷酸序列的较大片段也是有用的。优选的大小，当然意味着举例性示出而非对本发明的限制，所有大小的片段，相应于任意一个在10和全部核苷酸长度减去1之间的整数，都包括在本发明之中。本发明的其它优选的核酸片段包括编码表4所示的粪肠球菌多肽的携带表位部分的核酸分子。

本发明还提供了对于任何表1的核苷酸序列或表1所列的质粒克隆的任意片段的排除，所述的片段如上所述，根据5′和3′碱基位点或者根据核苷酸碱基的大小而确定。任何数目的表1的核苷酸序列或表1所列的质粒克隆的片段，根据5′和3′碱基位点或者根据核苷酸的大小确定，如上所述，可以被排除于本发明之外。

另一方面，本发明提供了含有在严格杂交条件下与上述本发明的核苷酸分子中的多核苷酸(如表1的核苷酸序列或列于表1的质粒克隆的粪肠球菌序列)的一部分杂交的多核苷酸的分离的核酸分子。“严格杂交条件”意指在含有50％甲酰胺，5X SSC(150mM NaCl，15mM柠檬酸三钠)，50mM磷酸钠(PH7.6)，5X Denhardt’s溶液，10％葡聚糖硫酸酯，及20μg/ml变性的剪切鲑精DNA的溶液中，在42℃温育过夜，随后在大约65℃以0.1×SSC洗滤膜。

与多核苷酸的“一部分”杂交的多核苷酸意指与对照多核苷酸的至少15个，优选至少20个，更优选至少30个，最优选至少30-70(如50个)个核苷酸碱基杂交的多核苷酸(DNA或RNA)。如上所述这些多核苷酸可用作诊断性探针及引物。“至少20个核苷酸碱基长”的多核苷酸部分意指来自对照多核苷酸(如表1所示核苷酸序列)的核苷酸序列的20个或更多个连续的核苷酸碱基。可用作探针及引物的与表1的核苷酸序列杂交的多核苷酸部分如上所述也可精确地由5’及3’碱基位置限定或由核苷酸碱基大小限定或以相同方式精确地排除。

本发明的核酸分子包括那些编码表1的全长粪肠球菌多肽及表1的粪肠球菌多肽一部分的核酸分子。本发明还包括那些编码上述全长序列及其它序列的核酸，所述的其它序列如那些编码附加的分泌性前导序列，如前蛋白序列，蛋白原序列或前蛋白原序列。本发明另外还包括编码上述全长序列及其部分，并包括由不同来源的核酸序列编码的附加异源氨基酸序列的核酸。

本发明还包括编码上述蛋白质序列以及另外的非编码序列包括例如但不限于非编码5’及3’序列的核酸。这些序列包括在转录及mRNA加工如mRNA的核糖体结合及稳定性中起作用的转录的非翻译序列。也包含于本发明的是提供其它功能性质的其它编码序列。

由此，编码多肽的核苷酸序列可以与一标记序列，如编码促进融合蛋白纯化的肽的序列融合。在本发明此方面的某些实施方案中，标记氨基酸序列是6-组氨酸肽，如pQE载体(QIAGEN，Inc.，9259 EtonAvenue，Chatsworth，CA，91311)及其它可商购的质粒中提供的标记。例如6-组氨酸为融合蛋白提供了便利的纯化，参见Gentz etal.，(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.86：821-24。“HA”标记是用于纯化的另一种肽，其相当于衍生自流感血凝素蛋白的表位。参见Wilson etal.，(1984)Cell 37：767。如下所述，其它如此融合蛋白包括在N-或C-末端融合Fc的本发明的粪肠球菌多肽。

变体多核苷酸及突变多核苷酸

本发明另外涉及编码表1粪肠球菌多肽的部分、类似物或衍生物的核酸分子的变体，及其变体多肽包括粪肠球菌多肽的部分，类似物及衍生物。变体可自然发生如天然等位基因变体。“等位基因变体”意指占据了生物体染色体上的给定基因座的基因的几种可变形式中的一种，参见如B.Lewin，Genes IV(1990)。非天然发生的变体可用本领域已知诱变技术产生。

这种核酸变体包括由核苷酸取代、缺失或添加产生的变体。取代、缺失或添加可涉及1个或多个核苷酸。变体可在编码区、非编码区或此二区内变化。在编码区内的变化可产生保守或非保守氨基酸取代、缺失或添加。此中尤为优选的是不改变本发明粪肠球菌蛋白质或其部分的性质及活性的沉默取代、添加及缺失。在此考虑下尤为优选保守取代。

这种多肽变体包括由氨基酸取代、缺失或添加产生的变体。该取代、缺失或添加可涉及一个或多个残基。变化可产生保守或非保守氨基酸取代、缺失或添加。此中尤为优选的是不改变本发明粪肠球菌蛋白质或其部分的性质及活性的沉默取代、添加及缺失。在此考虑下尤为优选保守取代。

本发明还涉及重组载体，其包括本发明的分离的核酸分子，并涉及含此重组载体的宿主细胞，以及制备该载体及宿主细胞的方法以及用其经重组技术产生粪肠球菌多肽或肽的方法。

本发明所涉及的核酸分子与表1所示核酸序列至少有90％，95％，96％，97％，98％或99％的相同性。包括上述的核苷酸序列并不考虑它们是否编码具有粪肠球菌活性的多肽。这是因为即使某个核酸分子不编码具有粪肠球菌活性的多肽，本领域的熟练技术人员也知道如何利用此核酸分子，例如，用作杂交探针。本发明的不编码具有粪肠球菌活性的多肽的核酸分子的应用包括，尤其是，从DNA文库中分离粪肠球菌的基因或其等位基因变体、通过Northern Blot分析来检测粪肠球菌mRNA表达样品、怀疑受粪肠球菌污染的环境样品。

优选地，核酸分子具有与表1的核酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的序列，它实际上编码具有粪肠球菌活性的多肽。“具有粪肠球菌活性”是指，在特定的可以测定蛋白活性的生物学试验中，能够显示出与本发明的粪肠球菌蛋白相似的，而不必须是相同活性的蛋白。

根据遗传密码的简并性，本领域的普通技术人员能够立刻找出大量的核酸分子，它们具有与表1的核酸序列至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同性的序列，编码具有粪肠球菌活性的多肽。实际上，由于这些核苷酸序列的简并性变异体都编码相同的多肽，因而熟练的技术人员甚至无需进行上述的比较试验。在本领域中进而还应意识到，在非简并性变异体中，相当一部分也是编码具有粪肠球菌活性的蛋白。这是因为熟练的技术人员完全了解不大可能或不可能严重影响蛋白功能的氨基酸取代(例如，以一个脂肪族氨基酸替换另一个脂肪族氨基酸)，如下文中所进一步阐述的。

本发明的多肽，预期与来自其它细菌的具有高度的结构相同性/相似性的多肽相比较，其生物学活性或功能是相似或相同的。表2列出了GenBank和德温特数据库中获得的最匹配的多肽序列的查询号和说明。因而预期本发明的多肽的生物学活性或功能与表2列出的来自其他细菌属、种或菌株的多肽是相似或相同的。

具有与本发明的参照核苷酸序列具有至少，例如，95％的“相同性”的核苷酸序列的多核苷酸，是指该多核苷酸的核苷酸序列，每100个核苷酸中，除了最多5个点突变之外，与编码粪肠球菌多肽的参照核苷酸序列是相同的。就是说，为了获得一个具有与参照核苷酸序列具有至少95％相同的核苷酸序列的多核苷酸，参照序列中最多5％的核苷酸可以被缺失、插入、或被另一个核苷酸所取代。查询的参照序列可以是表1的完整的序列、ORF(开放阅读框)、或者任何本文所述的特定片段。

实际上，任何特定的核酸分子或者多肽是否至少与本发明的核苷酸序列具有至少90％、95％、96％、97％、98％或99％相同性，是可以利用已知的计算机软件很方便地确定。在一个查询序列(本发明的一个序列)和一个目的序列之间确定出最佳的全面匹配的优选方法，也称为全局序列列比，可以利用基于Brutlag等的算法的FASTDB计算机程序进行，见Brutlag等，计算机应用生物科学，6：237-245。在序列列比中，查询和目的序列都是DNA序列。RNA序列可以先将U转换为T之后再比较。所说的全局序列列比的结果是一个百分比相同性。计算DNA序列百分比相同性的FASTDB列比中使用的优选参数为：Matrix＝Unitary，k-rple＝4，Mismatch Penalty＝1，JoiningPenalty＝30，Randomization Group Length＝0，Cutoff Score＝1，GapPenalty＝5，Gap Size Penalty＝0.05，Window Size＝500或为目的核苷酸序列的长度，哪个更短取哪个。

如果目的序列由于5′或3′缺失而非由于内部缺失而比查询序列短，则必须对结果做一个手工修正。这是因为FASTDB程序在计算百分比相同性时不考虑目的序列5′或3′末端的缺失。对于目的序列相对于查询序列的5′或3′末端的缺失，百分比相同性的修正通过计算查询序列上作为目的序列5′或3′末端的碱基数，它不是匹配的/对准的，作为查询序列全部碱基的百分比。FASTDB通过序列列比的结果确定一个核苷酸是否是匹配的/对准的。此百分数再从百分比相同性中减去，该百分比相同性是通过上述的FASTDB程序用特定的参数计算出的，最后获得一个最终的百分比相同性得分。只有目的序列5′或3′末端之外的核苷酸，正如通过FASTDB列比而显示的，它们不与查询序列匹配/对准，才被用于调节百分比相同性得分的计算。

例如，一个90个核苷酸的目的序列与一个100个核苷酸的查询序列列比以确定百分比相同性。缺失发生于目的序列的5′末端，因而FASTDB列比不显示出5′末端前10个核苷酸的匹配/对准。这10个未配对的核苷酸为序列的10％(查询序列5′或3′末端不匹配/对准的核苷酸数量)，因而从FASTDB程序计算的百分比相同性得分中减去10％。如果其余的90个核苷酸完全匹配，则最终的百分比相同性就是90％。在另一个例子中，一个90个核苷酸的目的序列与一个100个核苷酸想比较。这回缺失是内部缺失，因而目的序列的5′或3′末端的核苷酸没有不与查询序列匹配/对准的。这种情况下，FASTDB程序计算的百分比相同性就是正确的。重复一下，只对目的序列的5′或3′末端的不与查询序列相匹配/对准的核苷酸才手工矫正。再没有其它的为了本发明的目的手工修正了。

载体及宿主细胞

本发明还涉及包括本发明的分离的DNA分子的载体、含重组载体的宿主细胞，以及由宿主细胞表达的本发明粪肠球菌多肽和肽的生产。

使用熟知技术如感染、转导、转染、转载，电穿孔及转化将重组构建物导入宿主细胞。此载体可以是例如噬菌体，质粒、病毒或逆转录病毒载体。逆转录病毒载体可以是复制型或复制缺陷型载体。在后种情况下，病毒增殖通常只在互补宿主细胞中发生。

多核苷酸可与含可选择标记的载体连接以在宿主内增殖，通常质粒载体以沉淀物如磷酸钙沉淀物被导入，或以与带电脂类的复合物被导入。如果载体是病毒，其可在体外使用一合适的包装细胞系而被包装，然后转导入宿主细胞。

优选的是含有相应于感兴趣的多核苷酸的顺式作用控制区的载体。适当的反式作用因子可经宿主、互补载体或在导入宿主时由载体本身提供。

在与此有关的某些优选实施方案中，载体提供可被诱导的和/或特异于细胞类型的特异表达。在如此载体中尤为优选的是那些被易于操作的环境因素如温度及营养添加剂诱导的载体。

用于本发明的表达载体包括染色体衍生的、附加体衍生的及病毒衍生的载体，如衍生自细菌质粒，噬菌体，酵母附加体，酵母染色体元件，病毒如杆状病毒、乳多空病毒、痘苗病毒、腺病毒、禽痘病毒、假狂犬病毒及逆转录病毒的载体，以及衍生自其组合的载体如粘粒及噬菌粒。

DNA插入片段应可操纵地连于一适当启动子如λ噬菌体PL启动子，大肠杆菌trp及tac启动子，SV40早期及晚期启动子，以及逆转录病毒LTRs启动子等。本领域技术人员也知其它合适启动子。表达构建物还包括转录起始和终止的位点，以及在转录区的为进行翻译的核糖体结合位点。由构建物表达的成熟转录物的编码部分优选包括在起始处的翻译起始位点以及在被翻译多肽末端的终止密码子(UAA，UGA或UAG)。

如上所述，表达载体优选包括至少一个可选择标记。如此标记包括对于真核细胞培养物的二氢叶酸还原酶或新霉素抗性，及用于培养E.coli及其它细菌的四环素、卡那霉素或氨苄青霉素抗性基因。合适的宿主包括但不限于细菌细胞如E.coli，链霉菌属及鼠伤寒沙门氏菌细胞；真菌细胞如酵母细胞；昆虫细胞如Drosophil S2及SpodopteraSf9细胞；动物细胞如CHO，COS及Bowes黑素瘤细胞；及植物细胞。上述宿主细胞的合适培养基及条件为本领域技术人员所知。

优选用于细菌内的载体包括得自Qiagen的pQE70，pQE60，pQE9，pQE10；得自Stratagene的PBS载体，Phagescript载体，Bluescript载体，pNH8A，pNH16a，pNH18A，pNH46A；得自Novagen的pET系列载体；以及得自Pharmacia的ptrc99a，pKK223-3，pKK233-3，pDR540，pRIT5。优选的真核载体是得自Sratagene的pWLNEO，pSV2CAT，pOG44，pXT1和pSG；及得自Pharmacia的pSVK3，pBPV，pMSG及pSVL。技术人员也十分了解其它合适载体。

适用于本发明的已知细菌启动子包括E，coli lacI及lacZ启动子，T3，T5和T7启动子，gpt启动子，λPR及PL启动子及trp启动子。适当的真核启动子包括CMV立即早期启动子，HSV胸苷激酶启动子，早期及晚期SV40启动子，逆转录病毒LTRs的启动子如Rous肉瘤病毒(RSV)启动子，以及金属硫蛋白启动子如鼠金属硫蛋白-I启动子。

构建物导入宿主细胞可经磷酸钙转染、DEAE-右旋糖介导的转染、阳离子脂类介导的转染、电穿孔、转导、感染或其它方法而实现。如此方法见于许多标准实验室手册中所述(如Davis，et al.，BasicMethods In Moleculer Biology(1986))。

编码本发明多肽的DNA经高等真核生物的转录可通过在载体中插入一增强子序列而提高。增强子是DNA的顺式作用元件，通常大约从10～300个核苷酸，功能是提高启动子在给定宿主细胞类型中的转录活性。增强子的实例包括位于复制起点晚期侧第100～270位核苷酸的SV40增强子，巨细胞病毒早期启动子增强子，复制起点晚期侧的多瘤增强子及腺病毒增强子。

为了翻译的多肽分泌入内质网腔、周质空间或胞外环境中，适当的分泌信号可掺入表达多肽内，如KDEL氨基酸序列。信号可以是多肽内源性的或是异源信号。

多肽可以以修饰的方式如融合蛋白表达，且不仅可包括一个分泌信号，还包括另外的异源功能区。例如另外的氨基酸区尤其是带电荷氨基酸可加至多肽的N-末端以增强在纯化或接下来的操作及贮存期间在宿主细胞中的稳定性及持续性。肽基序也可加至多肽以促进纯化。此区可在多肽的最终制备之前被清除。肽基序加至多肽以引起分泌或排泄，增强稳定性及促进纯化等是本领域熟知且常规的技术。一优选的融合蛋白含有一用于加溶蛋白质的来自免疫球蛋白的异源区。例如，EP-A-0 464533(加拿大专利2045869)揭示了含有免疫球蛋白分子的恒定区的各个部分及另一种人蛋白或其部分的融合蛋白。在许多情况中，融合蛋白中的Fc部分非常适用于治疗及诊断，且由此导致如改良药物动力学性质(EP-A 0232 262)。另一方面，对于某些应用，需要在融合蛋白以所述有利方式被表达、检测及纯化后缺失Fc部分。当Fc部分被证实有碍于治疗及诊断时，如当融合蛋白用作抗原用于免疫时尤其如此。在药物发现中，例如人蛋白如hIL-5-受体已与Fc融合用于高效率筛选分析之目的以鉴别hIL-5的拮抗剂。参见Bennett，D.等(1995)J.Molec.Recogn.8：52-58及Johanson，K.et al.(1995)J.Biol.Chem.270(16)：9459-947l。

粪肠球菌多肽可经熟知方法从重组细胞培养物中回收及纯化，这些方法包括硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取；阴离子或阳离子交换层析，磷酸纤维素层析、疏水作用层析，亲和层析、羟磷灰石层析，凝集素层析及高压液相层析(“HPLC”)用于纯化。本发明多肽包括天然纯化产物，化学合成步骤的产物及从原核或真核宿主包括如细菌、酵母、高等植物、昆虫及黑素瘤细胞中经重组技术生产的产物。多肽及片段

本发明进一步提供了一种具有表1的氨基酸序列的分离的粪肠球菌多肽，或包含上述多肽的一部分的肽或多肽。变体和突变体多肽

为改善或改变本发明的粪肠球菌多肽的特性，可进行蛋白质工程。可应用本领域技术人员已知的重组DNA技术以产生含有单一或多重氨基酸取代、缺失，添加的新突变蛋白，或融合蛋白。如此修饰的多肽可显示如增强的活性或提高的稳定性。另外，可将它们以高产率纯化并呈现比相应天然多肽更好的溶解性，至少在一定纯化及贮藏条件下是如此。N-末端及C-末端缺失突变体

本领域已知一个或多个氨基酸可从N-末端或C-末端缺失而不明显丧失其生物功能。例如Ron etal.，J.Biol.Chem.，268：2984-2988(1993)报道了修饰的KGF蛋白即使3，8或27个N-末端氨基酸残基缺失仍具有肝素结合活性，据此本发明提供了从表1所示粪肠球菌多肽的氨基酸序列的氨基末端缺失一个或多个残基的多肽，以及编码该多肽的多核苷酸。

相似地，已知许多有生物学功能的C-末端缺失突变蛋白的实例。例如γ干扰素由于在蛋白质羧基末端缺失8-10个氨基酸残基而呈现近10倍高的活性。参见如Dobeli，etal.(1988)J.Biotechnology7：199～216。据此本发明提供了从表1所示粪肠球菌多肽的氨基酸序列羧基末端缺失一个或多个残基的多肽。本发明的还提供了氨基及羧基末端均缺失一个或多个氨基酸的多肽，如下所述。

本发明还涉及编码本文所述氨基酸序列的一部分或片段以及本文所述的分离的氨基酸序列的一部分或片段的多核苷酸。片段包含表1所述的氨基酸序列的部分，至少长度为5个连续的氨基酸，选自任意两个整数，其中一个整数代表N末端的位置。本发明的多肽的起始密码子位置为1。在表1的任何给定的氨基酸序列中至少具有5个连续的氨基酸残基长度的片段的N末端和C末端位置的各种组合，都包括在本发明之中。一个片段可以至少是5个连续的氨基酸残基长度，或者长度在5至氨基酸序列全长减1之间的任何整数。因此，包括于本发明之中的是由表1的氨基酸序列上的任何N末端和C末端氨基酸位置所确定的连续片段，其中该连续片段的长度可以是5至氨基酸序列全长残基数减1之间的任一整数。

而且，本发明还包括那些所含片段并非由N末端和C末端位置确定，而是由氨基酸残基大小确定的多肽。本发明包括任何片段大小，其连续的氨基酸残基数是在5至氨基酸序列全长减1之间的一个整数。优选的连续多肽片段的大小包括约5个氨基酸残基、约10个氨基酸残基、约20个氨基酸残基、约30个氨基酸残基、约40个氨基酸残基、约50个氨基酸残基、约100个氨基酸残基、约200个氨基酸残基、约300个氨基酸残基、和约400个氨基酸残基。此优选的大小当然是对本发明的例举的而非限制，因为长度为任何一个在5至氨基酸序列全长减1之间的整数的大小的片段都包括在本发明范围之内。本发明还提供了对任何如上所述由N末端和C末端位置确定的或者由氨基酸残基数大小确定的片段的排除。任何如上所述由N末端和C末端位置确定的或者由氨基酸残基数大小确定的片段都可以被排除。

上述的片段不必是活性的，因为它们可能用于，例如，免疫试验、表位作图、表位附加、产生对蛋白的某个特定部分的抗体、作为疫苗、和作为分子量标准。其它突变体

除上述蛋白质的N-及C-末端缺失形式之外，本领域技术人员也应认识到一些粪肠球菌多肽的氨基酸序列在不明显影响蛋白质结构或功能之下可被改变。如果涉及此序列差异，应记得在蛋白质上有确定活性的关键区域。

这样，本发明还包括基本上呈现粪肠球菌多肽活性或包括粪肠球菌蛋白区域例如如下所述蛋白质一部分的粪肠球菌多肽的变异。如此突变体包括缺失、插入、倒位、重复及类型取代等根据本领域已知通用规则而选择的方式，因而很少影响活性。例如涉及怎样产生表型沉默氨基酸取代的指导已提供。有两种研究氨基酸序列对改变的耐受性的主要手段。参见Bowie，J.V.等(1990)，Science 247：1306-1310。第一种方法依于进化过程，其中突变是经自然选择认可或排斥的，第二种方法是利用遗传工程在克隆的基因的特异位置导入氨基酸变化，并经选择或筛选以鉴定保持功能性的序列。

这些研究已揭示蛋白质是令人惊奇地耐受氨基酸取代的。此研究表明在蛋白质一定位置的氨基酸改变是允许的。例如多数隐蔽氨基酸残基要求非极性侧链，而通常很少表面侧链的特征是保守的。其它如此表型沉默取代如本文所参考的Bowie等(出处同上)所述。显而易见的保守取代是置换，在脂肪族氨基酸Ala，Val，Leu及Ile之间一个取代另一个；Ser及Thr羟基的互换，Asp与Glu酸性残基的交换，Asn和Gln酰胺残基间替换，Lys和Arg碱性残基的交换以及Phe、Tyr芳香族残基间的取代。

这样表1的多肽或由表1所列质粒编码的多肽的片段、衍生物、类似物或同系物，可以是：(1)其中一个或多个氨基酸残基被保守或非保守氨基酸残基(优选保守氨基酸残基)取代，且如此取代的氨基酸残基可由或不由遗传密码编码；或(2)其中一个或多个氨基酸残基包括一个取代基团；或(3)其中粪肠球菌多肽与其它化合物如提高多肽半衰期的化合物(如聚乙二醇)融合；或(4)其中附加氨基酸与上述形式多肽融合，如IgG Fc融合区肽或前导或分泌序列或用于纯化上述形式多肽的序列或蛋白原序列。根据本文教导，如此片段、衍生物及类似物被认为是本领域技术人员的知识范围内。

由此，本发明粪肠球菌多肽可包括由天然突变或人为操作产生的一个或多个氨基酸取代、缺失或添加。如上所述，优选较少的改变，如保守氨基酸取代，其不明显影响蛋白质的折叠或活性(见表3)。

本发明粪肠球菌蛋白质中为功能所必需的氨基酸可由本领域已知方法如定位诱变或丙氨酸扫描诱变加以鉴别。参见Cunning ham etal.，(1989)Science 244：1081-1085。后种程序是在分子中每个残基导入单一丙氨酸突变。然后将所得突变体分子应用适当的测定特定蛋白质功能的分析测试其生物活性。

最感兴趣的是带电荷氨基酸用其它带电荷或中性氨基酸取代，这样可产生具有高度所需改良特性如较少聚集的蛋白质。聚集在当制备药物配方时不仅降低活性而且带来问题，因为聚集物可以是免疫原性的。见Pinckard et al.，(1967)Clin.Exp.Immunol.2：331-340；Robbins，et al.，(1987)Diabetes 36：838-845；Cleland，et al.，(1993)Crit.Rev.Therapeutic Drug Carrier Systems 10：307-377。

本发明的多肽优选以分离形式提供，且优选是基本上纯化的。粪肠球菌多肽的一重组产生的变体可经Smith等(1988)Gene 67：31-40中所述的一步法基本上纯化。本发明的多肽可使用本领域熟知的蛋白质纯化方法，应用直接抗本发明多肽的抗体从天然或重组来源中纯化。

本发明还提供了含有选自以下一组的氨基酸序列的分离的粪肠球菌多肽：(a)具有表1所示完整氨基酸序列的全长粪肠球菌多肽的氨基酸序列；(b)具有表1所示除N-末端甲硫氨酸外完整氨基酸序列的全长粪肠球菌多肽的氨基酸序列；(c)由表1所列质粒编码的完整氨基酸序列；(d)由表1所列质粒编码的除N-末端甲硫氨酸外的完整氨基酸序列。本发明的多肽也包括具有与以上(a)、(b)、(c)及(d)所述序列至少有80％，优选90％，更优选95％，96％，97％，98％或99％相同性的氨基酸序列的多肽。

进而，本发明的多肽还包括与上述多肽具有至少90％相似性的，优选的至少95％相似性的，更为优选的至少96％，97％，98％或99％相似性的多肽。

本发明进一步的实施方案涉及含有粪肠球菌多肽的氨基酸序列的多肽，其中所含有的氨基酸序列带有至少1个保守性氨基酸置换，但不超过50个保守性氨基酸置换，不超过40个保守性氨基酸置换，不超过30个保守性氨基酸置换，以及不超过20个保守性氨基酸置换。还提供了含有粪肠球菌多肽的氨基酸序列的多肽，其中所含有的氨基酸序列带有至少1个保守性氨基酸置换，但不超过10，9，8，7，6，5，4，3，2，或1个保守性氨基酸置换。

本发明中一个多肽所带有的氨基酸序列至少，例如，95％“相同于”查询氨基酸序列，这是指，除了在目的多肽序列上每100个氨基酸可以包含有最多5个氨基酸不同于查询氨基酸序列的变化，目的多肽的氨基酸序列相同于查询氨基酸序列。换言之，为了获得所带有的氨基酸序列至少95％“相同于”查询氨基酸序列的一个多肽，目的序列上最多5％的氨基酸残基可以被插入、缺失、(indels)或被其他氨基酸所置换。参照序列这些变化可以发生在参照氨基酸序列的氨基端或羧基端位置，或者两末端之间的任何之处，可以是在参照序列的残基间单个分散的或是在参照序列间的一个或多个的连续组。

实践中，一个特定的多肽是否，如本文所述的，至少95％，97％，98％，或99％相同于SEQ ID NOS：l-982序列所编码的氨基酸序列，可以方便地利用已知的计算机程序来确定。确定查询序列(本发明的一个序列)与目的序列之间的最佳全局匹配，也被称作全局序列列比的优选方法，可以利用根据Brutlag等(1990)，计算机应用生物科学，6：237-245的算法的FASTDB计算机程序。序列列比中，查询序列和目的序列都是氨基酸序列。所说的全局序列列比的结果是百分比相同性。FASTDB氨基酸列比中所用的优选的参数为：Matrix＝PAM，k-rple＝2，Mismatch Penalty＝1，Joining Penalty＝20，Randomization Group Length＝0，Cutoff Score＝1，Window Size＝序列长度，Gap Penalty＝5，Gap Size Penalty＝0.05，Window Size＝500或为目的氨基酸序列的长度，哪个更短取哪个。

如果目的序列由于N端或C端缺失而非由于内部缺失而比查询序列短，则必须对百分比相同性的结果做一个手工修正。这是因为FASTDB程序在计算全局百分比相同性时不考虑目的序列N端或C末端的缺失。对于目的序列相对于查询序列的N端或C末端的缺失，百分比相同性的修正通过计算查询序列上作为目的序列N端或C末端的残基数，它不与相应的目的序列匹配/对准，作为查询序列全部残基的百分比。FASTDB通过序列列比的结果确定一个氨基酸残基是否是匹配的/对准的。将此百分数再从百分比相同性中减去，该百分比相同性是通过上述的FASTDB程序用特定的参数计算出的，最后获得一个最终的百分比相同性得分。这个最终的百分比相同性得分才可用于本发明的目的。只有目的序列N端或C端的核苷酸，它们不与查询序列匹配/对准，才被用于调节百分比相同性得分的计算。

例如，一个90个氨基酸残基的目的序列与一个100个氨基酸残基的查询序列列比以确定百分比相同性。缺失发生于目的序列的N末端，因而FASTDB列比不匹配/对准N末端前10个氨基酸残基。这10个未配对的核苷酸为序列的10％(查询序列N或C末端不匹配/对准的残基数量)，因而从FASTDB程序计算的百分比相同性得分中减去10％。如果其余的90个残基完全匹配，则最终的百分比相同性就是90％。在另一个例子中，一个90个残基的目的序列与一个100个残基比较。这回缺失是内部缺失，因而目的序列的N或C末端的残基没有不与查询序列匹配/对准的。这种情况下，FASTDB程序计算的百分比相同性就是正确的。重复一下，只对目的序列的N或C末端的不与查询序列相匹配/对准的残基才手工修正。再没有其它的用于本发明的目的手工修正了。

上述的多肽序列不考虑它们是否具有其正常的生物活性。这是因为即使某个特定的多肽分子不具有生物活性，本领域的熟练的技术人员也知道如何利用该多肽，例如，用作疫苗或用于产生抗体。不具有粪肠球菌活性的本发明的多肽的其它用途包括，尤其是，通过本领域所熟知的方法，用做附加表位、用于表位作图、和SDS-PAGE凝胶或分子筛凝胶过滤的分子量标准。

如下文所述，本发明的多肽还可以用于产生多克隆或单克隆抗体，它们可以用于基检测粪肠球菌的蛋白表达或用作增强或抑制粪肠球菌蛋白功能的兴奋剂或拮抗剂。而且，这些多肽还可以用于酵母二倍杂交系统以“捕获”结合了那些也是本发明所说的兴奋剂或拮抗剂的蛋白的粪肠球菌蛋白。见，例如，Fields等，(1989)，自然，340：245-246。表位携带部分

另一方面本发明提供了含有本发明粪肠球菌多肽的表位携带部分的肽及多肽，这些表位是本发明多肽的免疫原性或抗原性表位。“免疫原性表位”是当整个蛋白或多肽是免疫原时激发抗体应答的蛋白质的一部分，这些免疫原性表位据信仅限于分子上几个位点。另一方面，抗体可结合的蛋白质分子上的区域指作“抗原性决定簇”或“抗原性表位”。蛋白质的免疫原性表位数一般少于抗原性表位数。参见Geysen et al.，(1983)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：3998-4002。预测的抗原性表位示于下表4。需指明表4只列出含有预测具有最高抗原性的表位的氨基酸残基。表4中未列出的多肽及多肽的一部分不认为是无抗原性的。它是由于它们在体内仍可是抗原性的但只不过不能被所用特定算法识别。这样表4列出含优选抗原性表位的氨基酸残基而未列出全部。含其它抗原性表位的氨基酸残基可通过类似于Jameson-Wolf分析的算法或应用本文所述的或本领域已知的方法经体内测试抗原性应答来加以检测。

至于选择具有抗原性表位(即含抗体可结合的蛋白质分子的区域)的肽或多肽，本领域熟知模拟部分蛋白质序列的相对短的合成肽一般能激发与所部分模拟的蛋白反应的抗血清，参见Sutcliffe，etal.，(1983)Science 219：660-666。能激发与蛋白质反应的血清的肽，通常以蛋白质一级序列代表，其可被一系列简单化学规则定性，且被限为即不在完整蛋白的免疫显性区(即免疫原性表位)也不在氨基或羧基末端。非常疏水且一般为6个或较少残基的肽在诱导与所模拟的蛋白结合的抗体方面没有作用；而较长的尤其含有脯氨酸残基的肽通常有效。参见Sutcliffe，et al.，(前述)P.661。例如20个根据这些准则设计的，含有覆盖75％流感病毒血凝素HA1多肽链序列的8～39个残基的肽中的18个，诱导与HA1蛋白或完整病毒反应的抗体；来自MuLV聚合酶的全部12个肽及来自狂犬病糖蛋白的全部18个肽均诱导沉淀各自蛋白质的抗体。

本发明的抗原性表位携带肽及多肽因而可用于产生与本发明多肽特异性结合的，包括单克隆抗体的抗体。高比例的经融合抗原表位携带肽免疫的供体脾细胞获得的杂交瘤一般分泌与天然蛋白反应的抗体。参见Sutcliffe，et al.，(前述)p.663。由抗原性表位携带肽或多肽产生的抗体可用于检测所模拟的蛋白质，且不同肽的抗体可用于跟踪经翻译后加工的蛋白前体的不同区域的结局。此肽及抗肽抗体可用于各种所模拟的蛋白质的定性或定量分析，如用于竞争分析中，这是由于已显示短肽(如大约9个氨基酸)也可结合并在免疫沉淀分析中替代较长肽。参见Wilson，et al.，(1984)Cell 37：767-778。本发明的抗肽抗体也可用于所模拟的蛋白的纯化，如应用本领域已知方法经吸附层析纯化。

根据以上准则设计的本发明抗原性表位携带肽及多肽优选含有包含于本发明多肽的氨基酸序列内的至少7个，优选至少9个，更优选大约10～50个氨基酸(即7～50间任一整数)的序列。但含有本发明多肽氨基酸序列较长部分的肽或多肽，含有大约50～100个氨基酸或更长甚至包括本发明多肽的全部氨基酸序列，也被认为是本发明的表位携带肽及多肽，并也可用于诱导与所模拟的蛋白反应的抗体。优选地选择的表位携带肽的氨基酸序列能提供在水溶液中的高溶解性，即此序列包括比较亲水的残基且高疏水序列优选尽量避免，且尤其优选含脯氨酸残基的序列。

可用于产生肠球菌特异免疫应答或抗体的抗原性多肽或肽的非限制性实例包括表1鉴定的氨基酸序列的一部分。尤其表4揭示了一系列参与本发明抗原性表位携带片段内的抗原性的非限制性残基。因而本发明提供的本发明多肽的分离且纯化的抗原性表位携带片段包括表4的肽序列。含有表4的肽序列的抗原性表位携带片段优选含有本发明多肽的至少7个，优选至少9个，更优选大约10～50个氨基酸(即7～50间任一整数)的序列。即包含于本发明内的是含有表4的一个或多个序列的7～50个氨基酸长的抗原性多肽。因而在大多数情况下，表4的多肽仅构成抗原性多肽的一部分。所有含表4一个或多个序列的7～50个氨基酸长的序列的组合都包括在内。此抗原性表位携带片段可根据如上对于本发明多肽片段的描述由连续氨基酸残基数或N-末端及C-末端位置限定，其中起始密码子是残基1。本发明的任何所述的抗原性表位携带片段也可以相同方式排除。

本发明的表位携带肽及多肽可经任何生产肽或多肽的常规方法包括使用本发明核酸分子的重组方法加以生产。例如本发明的表位携带氨基酸序列可与在重组生产及纯化期间以及免疫产生抗肽抗体期间作为载体的较长多肽融合。表位携带肽也可用已知化学合成法合成。例如，Houghten阐述了一简单的合成大量肽的方法，如10～20mg的248种代表HA1多肽一个区段的单氨基酸变体的不同的13个氨基肽，在少于4周的时间内制备并鉴定(经ELISA型结合研究)(Houghten，R.A.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：5131-5135(1985))。这种“同时多重肽合成(SMPS)”方法进一步阐述于美国专利4,631,211(Houghten and coworkers)(1986)。在此程序中，各种肽的固相合成的树脂包含在分离的溶剂可通透袋内，使参与固相方法中许多相同的重复步骤得以最佳利用。一个完整手工程序使500～1000或更多个合成酶同时应用(Houghten.Et al.，(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.82：5131-5135，5134)。

本发明的表位携带肽及多肽根据本领域熟知方法用于诱导抗体，参见Sutcliffe，et al.，(前述)；Wilson.Et al.，(前述)；及Bittle，et al.，(1985)J.Gen.Virol 66：2347-2354。一般地，动物可用游离肽接种；但抗肽抗体效价可经肽与大分子载体如匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)或破伤风类毒素的偶联加以加强。例如含半胱氨酸的肽可经使用如MBS的接头与载体偶联，而其它肽可经使用更一般的连接剂如戊二醛与载体偶联。动物如兔，鼠可用游离肽或载体偶联肽接种，如腹内和/或皮内注射含大约100μg肽或载体蛋白及Freund’s佐剂的乳液接种。需要几次加强注射，如在大约2周间隔，以提供可经如使用吸附在固体表面的游离肽经ELISA分析可加以检测的抗肽抗体的有效效价。抗肽抗体在接种的动物血清中的效价可经选择抗肽抗体，如经固体支持体吸附及根据本领域熟知方法选择的抗体的洗脱加以提高。

本发明的免疫原性表位携带肽，即当整个蛋白质免疫时激发抗体应答的那些蛋白质部分，根据本领域已知方法被鉴定。例如，Geysen，等(前述)揭示了在ELISA中起反应的足够纯度的上百个肽在固体支持体上的快速并行合成的步骤。接着不将其移出支持体也很容易检测合成的肽与抗体的相互作用。在此方式中，具有所需蛋白质免疫原性表位的肽可经本领域技术人员常规鉴定。例如口蹄病病毒包被蛋白中免疫学重要的表位经Geysen等(前述)通过合成覆盖蛋白质全部213个氨基酸序列的一重叠系列的所有208个可能六肽，以7个氨基酸的分辨率加以定位，然后合成一完整取代系列的肽，其中表位内所有20个氨基酸依次每个位置被取代，并检测赋予与抗体反应的特异性的特定氨基酸。这样可由此方法常规生产本发明表位携带肽的肽类似物。Geysen的美国专利4,708,781(1987)还阐述了具有所需蛋白质的免疫原性表位的肽的鉴定方法。

另外Geysen的美国专利5,194,392，to(1990)，阐述了检测或确定互补于感兴趣抗体的特定互补位(抗原结合位点)，是表位拓扑等价物(即“模拟位”)的单体(氨基酸或其它化合物)的序列的一般方法。Geysen的美国专利4,433,092(1989)，阐述了检测或确定互补于相应特定受体的配体结合位点的配体拓扑等价物的单体之序列的方法。相似地，Houghtenn，R.A.et al.的美国专利5,480,971，to(1996)揭示了线性C₁-C₇-烷基烷基化的寡肽及及该肽的群和文库，以及利用该寡肽群及文库测定与相应受体分子优选结合的烷基化寡肽序列的方法。这样，本发明表位携带肽的非肽类似物通过这些方法也可常规生产。在“多肽及片段”段溶中例证的每个文献的全部揭示在此都并入参考。

本领域技术人员应意识到，本发明的多肽及上述其表位许多片段可与免疫球蛋白(IgG)恒定区的部分组合，形成嵌合多肽。这些融合蛋白促进纯化并在体内呈现延长的半衰期。这已示出，如由人CD4-多肽的头二个功能区及哺乳动物免疫球蛋白重或轻链的恒定区的各个功能区组成的嵌合蛋白质。(EPA 0,394,827；Traunecker et al.，(1988)Nature 331：84-86)。由于IgG部分而具有二硫化物连接的二聚体结构的融合蛋白质，比单体粪肠球菌多肽或其片段在结合及中和其它分子中更有效。参见Fountoulakis et al.(1995)J.Biochem.270：3958-3964。编码上述粪肠球菌多肽表位的核酸也可与感兴趣的基因重组作为附加表位，以帮助表达多肽的检测及纯化。抗体

本发明所使用的粪肠球菌蛋白特异的抗体，可以通过对抗完整的粪肠球菌蛋白或其抗原性多肽片段而产生，它可以连同载体蛋白如白蛋白一起提供给动物系统(如兔或鼠)，或者，如果它足够长(至少25个氨基酸)，也可以不连同载体。

本文中所用的“抗体”(Ab)或者“单克隆抗体”(Mab)是指，包括完整的分子、单链全抗体、和抗体片段。本发明的抗体片段包括Fab和F(ab′)2和其他的包括单链Fvs(scFv)和二硫键连接的(sdFv)片段。本发明还包括对本发明的多肽特异的嵌合的和人源化单克隆抗体和多克隆抗体。本发明的抗体可以通过各种方法制备。例如，可以将表达本发明的多肽或其抗原性片段的细胞施用于动物，以诱导产生含有多克隆抗体的血清。例如，制备出粪肠球菌多肽或其片段的制品，并纯化至其不含有天然的污染物的程度。然后将该制品导入动物以产生具有较强特异活性的多克隆抗血清。

在一个优选的方法中，本发明的抗体适当克隆抗体或其结合片段。这种单克隆抗体可以通过杂交瘤技术制备。见，例如，Harlow等“抗体：实验室手册”，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版，1988)；Hammerling等，“单克隆抗体和T细胞杂交瘤”，563-683(Elsevier，N.Y.，1981)。Fab和F(ab′)2片段可通过蛋白酶切割产生，所用的酶如木瓜蛋白酶(产生Fab片段)或胃蛋白酶(产生F(ab′)2片段)。或者，结合粪肠球菌多肽的片段、嵌合体、和人源化抗体可以通过应用重组DNA技术或者通过合成化学，以本领域所熟知的方法来制备。

另外，能够结合本发明的多肽抗原的其它抗体，可以利用抗个体基因型抗体通过一个两步程序产生。该方法利用的原理在于抗体本身就是一个抗原，并且可以获得一个抗第二抗体的抗体。根据该方法，用粪肠球菌多肽特异性抗体来免疫动物，优选的是大鼠，然后筛选脾细胞确定出可产生抗体的克隆，该抗体结合粪肠球菌多肽特异性抗体的能力可以被粪肠球菌多肽抗原所阻断。这种抗体含有针对粪肠球菌多肽特异性抗体的抗个体基因型抗体，它可用以免疫动物诱导更进一步的粪肠球菌多肽特异性抗体的形成。

本发明的抗体及其片段可以按照被该抗体所识别并特异结合的本发明多肽的那一部分来描述。结合本发明多肽的片段的抗体可以同样按照上述描述多肽片段的方式来描述，例如，按照N末端和C末端的位置或按照连续的氨基酸残基的大小。如前文所述，许多本发明多肽的抗体结合片段，也同样不包括在本发明之中。因此，本发明包括特异结合与特别描述的本发明多肽的片段的抗体，并且考虑了同样的排除在外的情况。

本发明的抗体及其片段也可以根据它们的交叉反应来描述。不结合除了粪肠球菌之外的肠球菌属其它种的多肽的抗体和片段也包括在本发明之中。同样，只结合肠球菌属的抗体和片段，例如，不结合除了肠球菌属之外其它属的细菌的抗体和片段，也包括在本发明之内。诊断分析

本发明进一步涉及了通过检测编码本发明的肠球菌多肽的基因的表达，来检测动物体内肠球菌的感染的方法。该方法包括对动物的组织或体液中的肠球菌特异抗体、核酸、或蛋白的分析。对特异的肠球菌核酸的分析，可利用本发明的核酸序列作为杂交探针或引物，通过PCR或杂交技术进行。例如可见，Sambrook等，“分子克隆：实验室手册”，(Cold Spring Harbor Laboratory Press，第2版，1989，第54页参考文献)；Eremeeva等(1994)临床微生物杂志，32：803-810(通过PCR扩增的DNA限制片段长度多态性，描述了斑点热组立克次氏体种内的差异)和Chen等，1994，临床微生物杂志，32：589-595(通过PCR检测B.burgdorferi核酸)。

与肠球菌感染相关的病情一旦确诊，本发明就可以用于监测病情的进展或衰退，这是因为如果患者表现出的增强的肠球菌基因表达，他将比该基因低水平表导时显现出更加糟糕的临床结果。

“生物学样品”是指，从带有肠球菌多肽、mRNA、或DNA的动物、细胞系、组织培养物、或其他来源中获得的任何生物学样品。生物学样品包括体液(诸如唾液、血液、血浆、尿、粘液、滑液等等)、组织(诸如肌肉、皮肤、和软骨)和任何其它的被怀疑含有肠球菌多肽或核酸的生物学来源。获取生物学样品诸如组织的方法是本领域所熟知的。

本发明可以用于检测动物中与感染肠球菌相关的疾病。优选的动物包括猴、猿、猫、狗、鸟、牛、猪、鼠、马、兔和人。尤为优选的是人。

可以利用任何适当的技术诸如单步骤的胍-硫氰酸-酚-氯仿法(Chomczynski等，1987，分析生物化学，162：156-159中所述)从生物学样品中分离总RNA。然后利用任何适当的方法，具有与SEQ IDNOS：1-982中确定的核苷酸序列充分同源性的编码肠球菌多肽的mRNA可以进行与互补序列之间的杂交。这些方法包括Norther印迹分析、S1核酸酶作图、多聚酶链反应(PCR)、结合多聚酶链反应的反转录(RT-PCR)、以及结合连接酶链反应的反转录(RT-LCR)。

Northern印迹分析可以按照Harada等(1990)，细胞，63：303-312中所述进行。简单地说，从上述的生物学样品中制备出总RNA。对于Norther印迹，将RNA在适当的缓冲液(诸如乙二醛/二甲基亚砜/磷酸钠中缓冲液)中变性，进行琼脂糖凝胶电泳并转移到硝酸纤维滤纸上。RNA通过UV连接仪连接到滤纸上之后，将滤纸在含有甲酰胺，SSC，Denhardt溶液，变性鲑精，SDS和磷酸钠缓冲液的溶液之中预杂交。以通过适当方法(如³²P-DNA标记系统(Amersham))标记的SEQ ID NOS：1-982所示的粪肠球菌多核苷酸序列作为探针。杂交过夜后，将滤纸洗涤并对x光胶片曝光。本发明中上述的用作探针的DNA优选地至少长度在15个核苷酸以上。

S1作图可以按照Fujita等(1987)，细胞，49：357-367中所述的方法进行。为了制备用于S1作图的探针DNA，将上述的本发明的粪肠球菌DNA序列的有义链作为模板，合成带标记的反义DNA。然后用适当的限制内切酶消化反义DNA，产生所需长度的进一步的DNA探针。这种反义探针可用于显示出相应靶mRNA(即编码肠球菌多肽的mRNA)的保护条带。

编码肠球菌多肽的mRNA水平可以通过例如Makino等(1990)，技术，2：295-301所述的RT-PCR方法来检测。通过这种方法，聚丙烯酰铵凝胶条带中“扩增子”的放射性与靶mRNA的起始浓度线性相关。简单地说，该方法包括将生物学样品中分离的总RNA加入到含有RT引物和适当缓冲液的反应混合液之中。温育使引物退火之后，混合物中加入RT缓冲液，dNTPs，DTT，Rnase抑制剂和反转录酶。温育完成RNA的反转录之后，将RT产物以标记引物进行PCR。或者不用标记引物，而在PCR反应混合物中加入标记的dNTP。在DNA温度循环仪上，以常规的技术进行PCR扩增。经过适当数量的循环完成扩增之后，将PCR反应混合物在聚丙烯凝胶上进行电泳。干胶后，利用成像分析仪定量适当条带中的放射性(相应于编码本发明的肠球菌多肽的mRNA)。RT和PCR反应的成分和条件、试剂盒凝胶浓度、和标记方法是本领域所熟知的。熟练的技术人员显然可以对此RT-PCR的方法进行变化。其它的能够检测本发明的核酸的PCR方法可以从“PCR引物：实验室手册“(C.W.Dieffenbach等主编，Cold Spring Harbor Lab Press，1995)中找到。

本发明的多核苷酸，包括DNA和RNA，可以通过生物芯片技术用于检测本发明的多核苷酸或包括粪肠球菌在内的肠球菌。本发明包括高密度芯片矩阵(＞1000个寡核苷酸/cm²)和低密度芯片矩阵(＜1000个寡核苷酸/cm²)。含有本发明的多核苷酸矩阵的生物芯片可以用于在生物或环境样品中检测肠球菌，包括粪肠球菌，和用于诊断带有粪肠球菌或其他肠球菌感染的动物，包括人。本发明的生物芯片除了本发明的多核苷酸序列还可包括其他病原，包括细菌、病毒、寄生虫、和真菌的多核苷酸序列，从而用于不同的病原的快速检测。此生物芯片还可以用于监测粪肠球菌或其他肠球菌的感染，和监测临床上药物治疗和实验室药物开发中导致的遗传学变化(缺失、插入、错配等等)。含有本发明的多核苷酸矩阵的生物芯片还可以用于同时监测包括本发明的那些在内的多种基因的表达。用来组成所需矩阵的多核苷酸可以使用用于片段那样的相同方式来表示，例如，通过它们的5‘和3′端的位置或者包括的连续碱基对的长度。本发明的多聚核酸通过生物芯片技术用于检测包括粪肠球菌在内的肠球菌的方法和特殊应用，包括那些本领域所熟知的和下列的：美国专利号5510270，5545531，5445934，5677195，5532128，5556752，5527681，5451683，5424186，5607646，5658732，和国际专利公开号WO/9710365，WO/9511995，WO/9743447，WO/9535505，在此提及可供参考其全文。

使用本发明的多核苷酸的生物传感器也可用于检测、诊断和监测粪肠球菌或其他肠球菌及其感染。使用本发明的多核苷酸的生物传感器还可用于检测本发明特定的多核苷酸。使用本发明的多核苷酸的生物传感器还可用于监测临床上药物治疗和实验室药物开发中导致的遗传学变化(缺失、插入、错配等等)。本发明的多聚核酸通过生物传感器用于检测包括粪肠球菌在内的肠球菌的方法和特殊应用，包括那些本领域所熟知的和下列的：美国专利号5721102，5658732，5631170，和国际专利号WO/9735011，WO/9720203，在此提及可供参考其全文。

因此，本发明包括含有本发明的多核苷酸的生物芯片和生物传感器以及应用方法。

对生物学样品中肠球菌多肽水平的测试可以利用本来于任何所熟知的方法进行，如基于抗体的技术。例如，组织中表达的肠球菌多肽可以通过经典的免疫组织学方法来研究。其中，一级抗体(多克隆或单克隆的)提供了特异识别，而二级监测系统可以利用荧光、酶、或其他共扼连接的二级抗体。从而可以得到病理测验的组织切片的免疫组织学染色结果。组织也可以用尿素和中性去污剂来抽提，以释放肠球菌多肽进行Wester印迹或斑点/狭缝测验。例如可参见Jalkanen，M.等，(1985)细胞生物学杂志，101：976-985；Jalkanen，M.等(1987)细胞生物学杂志，105：3087-3096。在这项基于阳离子固相应用的技术中，肠球菌的定量可以通过一个分离的肠球菌多肽作为标准而完成。该技术也可以应用于体液检测。

其它可用于检测肠球菌基因表达的抗体方法包括免疫试验，诸如ELISA和放免试验(RIA)。例如，可以将一个肠球菌多肽特异的单克隆抗体作为免疫吸收剂和酶标记探针，用以检测和定量肠球菌多肽。样品中存在的肠球菌的数量可以通过参照一个标准制备物种的数量，利用线性衰减计算机算法计算出来。此种ELISA在Iacobelli等(1988)的乳腺癌研究于治疗，11：19-30中有所描述。在另一个ELISA试验中，可利用两个不同的特异单克隆抗体检测体液中的肠球菌多肽。该试验中，一个抗体用作免疫吸收剂而另一个抗体用作酶标探针。

上述的技术基本上可以通过“一步”或“两步”试验进行。“一步”试验包括将肠球菌多肽与带有标记的抗体混合液接触。“两步”试验包括与带有标记的抗体混合液接触之前的洗涤。其它常规的方法也可以适当应用。通常需要将试验系统中的一个组份固定在一个制成物上，从而使得系统中其它的组份与该组份接触并可方便地从样品中除去。本发明所包括的上述方法的变化和其它的免疫学方法可见Harlow等，抗体：实验室手册，(Cold Spring Harbor LaboratoryPress，第2版，1988)。

合适的酶标记包括，例如，那些来自氧化酶的，它们可以通过与底物的反应催化产生过氧化氢。尤为优选的是葡萄糖氧化酶，它具有良好的稳定性并且其底物(葡萄糖)能够很方便地获得。氧化酶标记的活性可以通过测量酶标抗体/底物反应中形成的过氧化氢的浓度来测试。除了酶，其它合适的标记包括，放射性同位素，如碘(¹²⁵I，¹²¹I)、碳(¹⁴C)、硫(³⁵S)、氚(³H)、铟(¹¹²In)、锝(^99mTc)、和荧光标记，如荧光素和若丹明，以及生物素。

用于本发明的肠球菌特异抗体的其它合适的标记如下文所述。合适的酶标记的例子包括苹果酸脱氢酶、肠球菌核酸酶、δ-5-类固醇异构酶、酵母乙醇脱氢酶、α-磷酸甘油脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、β半乳糖苷酶、核糖核酸酶、尿素酶、过氧化氢酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、葡糖淀粉酶、和乙酰胆碱酯酶。

合适的放射性同位素标记的例子包括³H，¹¹¹In，¹²⁵I，¹³¹I，³²P，³⁵S，¹⁴C，⁵¹Cr，⁵⁷To，⁵⁸Co，⁵⁹Fe，⁷⁵Se，¹⁵²Eu，⁹⁰Y，⁶⁷Cu，²¹⁷Ci，²¹¹At，²¹²Pb，⁴⁷Sc，¹⁰⁹Pd等等。¹¹¹In是体内成像时使用的一个优选的同位素，它可以防止¹²⁵I或¹³¹I标记的单克隆抗体在肝脏的脱卤问题。此外该放射性核苷具有成像所需的更为良好的γ射线能量。参见，例如，Perkins等(1985)，核医学欧洲杂志，10：296-301；Carasquillo等(1987)，核医学杂志，28：281-287。例如，与带有1-(p-异硫氰酰苯甲基)-DPTA的单克隆抗体相配合的¹¹¹In在非肿瘤组织中，尤其是在肝脏中几乎不被吸收，因而增强了肿瘤定位的特异性。参见Esteban等(1987)核医学杂志，28：861-870。

合适的非放射性同位素标的例子记包括¹⁵⁷Gd，⁵⁵Mn，¹⁶²Dy，⁵²Tr，和⁵⁶Fe。

合适的荧光标记的例子包括¹⁵²Eu标记、荧光素标记、异硫氰酸标记、若丹明标记、藻红素标记、别藻蓝素标记、和荧光胺标记。

合适的毒素标记的例子包括假单胞菌毒素，白喉毒素、蓖麻毒蛋白和霍乱毒素。

化学发光标记的例子包括鲁米那标记、异鲁米那标记、芳香族吖啶酯标记、咪唑标记、吖啶盐标记、草酸酯标记、虫萤光素标记、虫萤光素酶标记、和水母发光蛋白标记。

核磁共振的对照试剂的实例包括重金属核，如Gd，Mn，和铁。

将上述标记与抗体结合的通常技术可参见Kennedy等(1976)临床化学学刊70：1-31；和Schurs等(1977)临床化学学刊81：1-40。后者所提及的结合技术有戊二醛法、过氧化物法、二顺丁烯二酰亚胺法、m-顺丁烯二酰亚胺苯甲基-N-羟基-丁二酰亚胺酯法，这些方法在此提及可供参考。

在相关的方面，本发明还包括用于筛选含有对粪肠球菌感染的特异抗体的血清的诊断试剂盒。这种试剂盒可以包括有分离的粪肠球菌抗原，该抗原带有至少对一种抗粪肠球菌的抗体具有特异免疫反应的表位。在一个特定的实施方案中，该试剂盒可以包括一个重组产生的或化学合成的肽或多肽抗原。该肽或多肽抗原可以附着于一个固相支撑物上。

在一个更为具体的实施方案中，上述试剂盒的检测方法包括一个非附着、报告因子标记的、抗人的抗体。此实施方案中，抗体与粪肠球菌抗原的结合可以通过报告因子标记的抗体与粪肠球菌多肽抗体的结合来检测。

在相关的方面，本发明还包括在一个样本中检测粪肠球菌感染的方法。该检测方法包括将来自样本的体液，优选的是血清，与分离的粪肠球菌抗原反应，检测结合抗体的抗原。在一个特定的实施方案中，该检测方法包括一个附着于一个固相支持物上的多肽抗原，并将血清与该支持物反应。然后将该支持物与一个报告因子标记的抗人的抗体反应。然后检测该支持物上存在的报告因子标记的抗体。

上述试验和试剂盒中所使用的固相表面剂是通过周知的技术制备的，将蛋白材料附着在固相支持物材料上，如聚合小珠、浸润棒、96孔板或滤纸材料。这些附着方法一般包括蛋白与支持物的非特异吸附或蛋白的共价吸附，通常是通过一个游离的胺基团结合于固相支持物上的一个化学反应基团，诸如激活的羧基、羟基、或醛基团。另外也可以使用抗生物素蛋白链菌素包被的多孔板，结合用以生物素化的抗原。

本发明的多肽和抗体，包括其片段，利用生物芯片和生物传感器技术，可以用于检测包括粪肠球菌在内的肠球菌。本发明的生物芯片和生物传感器可以含有用以检测抗体的本发明的多肽，它能够特异识别包括粪肠球菌在内的肠球菌。本发明的生物芯片和生物传感器还可以含有能够特异识别本发明的多肽的抗体，概括多肽可用以检测包括粪肠球菌在内的肠球。含有本发明的多肽和抗体的生物芯片和生物传感器可以用于在生物和环境样品中检测包括粪肠球菌在内的肠球菌，并用于诊断带有粪肠球菌或其他肠球菌感染的包括人在内的动物。因此，本发明包括含有本发明的多肽和抗体的生物芯片和生物传感器及其使用方法。

本发明的生物芯片和生物传感器，除了本发明的多肽序列，可以进一步含有其它病原的多肽序列，包括细菌、病毒、寄生虫、和真菌的多肽序列，从而用于不同病原的快速检测和诊断。本发明的生物芯片和生物传感器，除了本发明的抗体及其片段，可以进一步含有其它病原所特异的抗体或其片段，包括细菌、病毒、寄生虫、和真菌的多肽序列，从而用于不同病原的快速检测和诊断。本发明的生物芯片和生物传感器还可以用于监测粪肠球菌或其他肠球菌的感染，和监测临床上药物治疗和实验室药物开发中导致的遗传学变化(缺失、插入、错配等等)。含有本发明的多肽和抗体的生物芯片和传感器还可以用于同时监测包括本发明的那些在内的多种多肽的表达。用来组成生物芯片和生物传感器的多肽，可以用与片段相同方式来表示，例如，通过它们的N端和C端的位置或者连续氨基酸残基的长度。本发明的多肽和抗体通过生物芯片和生物传感器技术用于检测包括粪肠球菌在内的肠球菌的方法和特殊应用，包括那些本领域所熟知的和下列的：美国专利号55658732，5135852，5567301，5677196，5690894和国际专利公开号WO/9729366，WO/9612957，在此提及可供参考其全文。治疗兴奋剂及拮抗剂-分析及分子

本发明还提供了筛选鉴定那些增强或阻断本发明粪肠球菌多肽生物活性的化合物的方法。本发明还提供了化合物杀死或减缓粪肠球菌生长的场所。包括粪肠球菌配体的粪肠球菌拮抗剂预防性或治疗性限制抗生素抗性的能力可由本领域熟练技术人员容易地测试。参见Straden et al.(1997)J.Bacteriol.179(1)：9-16。

兴奋剂是提高本发明多肽天然生物学功能或以与本发明多肽相似的方式起作用的化合物，而拮抗剂降低或消除如此功能，潜在的拮抗剂包括小的有机分子、肽、多肽及与本发明多肽结合从而抑制或消灭其活性的抗体。

拮抗剂可用于如抑制肽聚糖交联桥的构成。抗粪肠球菌的抗体可用于结合粪肠球菌并抑制其活性以处理抗生素抗性。一些上述拮抗剂可与药物学可接受载体组合应用。

疫苗

本发明还提供了含有一种或多种本发明多肽的疫苗。疫苗组合物的异质性可以通过联合本发明的粪肠球菌多肽而获得。这种多组份的疫苗是需要的，因为它比单一的多肽疫苗，可能在对抗多种肠球菌属菌株和种系时而产生更为有效的保护性免疫应答。

本领域的技术人员知道，多组份疫苗可产生针对多种免疫原组份的抗体产物。参见，Decker等(1996)，感染疾病杂志174：S270-275。另外，最近的乙型肝炎、白喉、破伤风、百日咳四价疫苗已经表现出，能够在婴儿中对所有四种病原体产生保护水平的抗体。参见，Aristegui，J.等(1997)，一秒15：7-9。

本发明除了单组份疫苗还包括多组份疫苗。这些疫苗含有不止一个多肽、免疫原或抗原。因此，多组份疫苗是一个含有一个以上的本发明的粪肠球菌多肽的疫苗。

进而包括在本发明范围之内的还有全细胞和全病毒疫苗。这类疫苗可重组产生并涉及一种或多种SEQ ID NOS：1-92描述的粪肠球菌多肽的表达。例如，本发明的粪肠球菌多肽可以是分泌或者定位在细胞内，在细胞表面或者胞浆内。而且，当应用重组病毒时，本发明的粪肠球菌多肽可以，例如，定位在病毒包被内，在衣壳表面，或在衣壳内部。利用表达异源蛋白的全细胞疫苗是本领域所熟知的。参见，Robinson，K.等(1997)自然生物技术15：653-657；Sirard，J.等(1997)感染免疫学65：2029-2033；Chabalgoity，J.等(1997)感染免疫学65：2402-2412。这些细胞可以活体给药或者在给药前灭活。Chabalgoity，J.等，同上，例如，报道了成功地在小鼠中利用活的减活的Salmonella疫苗菌株，该菌株在细胞表面表达融合蛋白形式的扁蠕虫脂肪酸结合蛋白。

多组份疫苗还可以利用本领域已知的技术，通过联合一种或多种本发明的粪肠球菌多肽或其片段，以及另外的非肠球菌组份(如，白喉毒素或破伤风毒素，和/或其他已知可以产生免疫应答的组份)一起来制备。这种疫苗可用于对肠球菌属和非肠球菌的病原体产生保护性免疫应答。

本发明的疫苗还包括DNA疫苗。DNA疫苗近来被开发用于多种感染性疾病。参见Boyer等(1997)自然医学3：526-532；Spier，R.(1996)疫苗14：1285-1288。这种DNA疫苗含有编码一个或多个本发明的粪肠球菌多肽的核苷酸序列，其特定的形式能表达该目的多肽。例如，在小鼠中直接施用编码B.burgdorgeri OspA的质粒DNA，表现出产生了保护性免疫，而抗疏螺旋体的感染。参见Luke等(1997)感染性疾病杂志175：91-97。

本发明还涉及与一个能够调节免疫应答的分子一起联合使用疫苗。Kim等(1997)自然生物技术15：641-646，例如，报道了将刺激免疫应答的DNA序列的编码分子共同给药时，由DNA免疫产生的免疫应答的增强了。以同样的方式，本发明的疫苗也可以与编码免疫调节因子的核酸或者与免疫调节因子本身一起共同给药。这些免疫调节因子包括粒细胞巨噬菌体集落刺激因子(GM-CSF)和CD86。

本发明的疫苗可以通过被动免疫或者主动免疫用于提供对肠球菌感染的抗性。当本发明的疫苗通过主动免疫提供对肠球菌感染的抗性时，可将本发明的疫苗施用于动物以产生保护性免疫应答，防止或消弱肠球菌的感染。当本发明的疫苗通过被动免疫提供对肠球菌感染的抗性时，可将疫苗提供给一个宿主动物(如，人、狗或大鼠)，并回收所产生的抗血清，将此抗血清直接提供给怀疑受到肠球菌属成员感染的受体上。

用毒素分子标记抗体或抗体片段的能力，提供了另一种进行被动免疫治疗肠球菌感染的方法。在这个实施方案种，将能够识别本发明所述的粪肠球菌多肽或其片段以及肠球菌的抗体或抗体片段，在对患者给药之前用毒素分子标记。但这种毒素衍生的抗体结合到肠球菌细胞上时，毒素基元就可定位在这些细胞上并导致其死亡。

本发明因而涉及并提供了一种用于防止或消弱肠球菌感染的方法，导致感染的微生物带有的抗原可被由本发明的多肽应答产生的抗血清所识别和结合。本文中疫苗能够“防止或消弱”疾病是指，对动物施用该疫苗可导致该疾病症状的全部或部分消弱(如，抑制)，或者该动物对此疾病完全或部分的免疫力。

该疫苗的施用可以用于“预防性”或“治疗性”目的。当用于预防时，该化合物在出现任何肠球菌感染的症状之前提供。该化合物的预防性给药是为了防止、消弱以后感染。当用于治疗目的时，该化合物在检测到显示动物受到肠球菌成员的感染而产生的症状症状之时或之后给药。该化合物的治疗性给药是用以消弱实际的感染。因此，本发明的粪肠球菌多肽及其片段可以在感染发病之前(为了防止或消弱预期的感染)或者在试剂的感染已经开始之后给药。

本发明的多肽，编码天然蛋白得一部分或其功能性衍生物，都可以以纯化的形式或者结合以大分子载体给药。这种载体的实例是蛋白和碳水化合物。合适的蛋白可以作为大分子载体增强本发明的多肽的免疫原性，包括匙孔嘁血蓝蛋白(KLH)、白喉毒素、百日咳毒素、牛血清白蛋白、卵清蛋白。将本发明的多肽与这种大分子载体结合的方法在Harlow等“抗体：实验室手册”，(Cold Spring HarborLaboratory Press，第2版，1988)中有所描述。

组合物是“药学或生理学可接受的”是指，其给药能够被受体患者所忍受。该试剂的以“有效治疗浓度”给药是指，给药剂量是生理学足够的。试剂是“生理学足够的”是指，其存在可导致受体患者中可检测的变化。

虽然在所有的实例中，本发明的疫苗是作为药学可接受的化合物来给药的，但本领域的熟练技术人员可以认识到，药学可接受的化合物的组合物是根据给药动物而变化的。例如，用于人的疫苗通常就不与Freund佐剂联合给药。而且，本发明的肠球菌多肽的纯度水平在对人给药时也通常要高于对非人动物的给药。

正如本领域普通技术人员所理解的，当本发明的疫苗提供给一个动物时，它是一种含有盐、缓冲液、佐剂、或其他用以提高组合物效力的物质。佐剂是能够用来特别增强特异的免疫应答的物质。这些物质通常执行两种功能：(1)保护抗原防止给药后被迅速代谢，和(2)非特异地刺激免疫应答。

通常佐剂和组合物在提供于免疫系统之前先混合，或者单独提供于被免疫动物的相同位点。佐剂可以松散地根据组合物分为几类。这些类别中包括油类佐剂(例如，Freund完全和不完全佐剂)无机盐(例如，AlK(SO₄)₂，AlNa(SO₄)₂，AlNH₄(SO₄)₂，硅，高岭土，和碳)，多聚和公司(例如，多聚IC和多聚AU)，和某些特定的天然物质(例如(SO₄)₂’，来自Mycobacterium tuberculosis的蜡D，和来自Cornebacterium parvum或Bordetella pertussis和Brucella属成员的物质)其他可用做佐剂的物质是皂甙，如Quil A(Superfos A/S，Denmark)。本发明使用的优选的佐剂包括铝盐，诸如AlK(SO₄)₂，AlNa(SO₄)₂，和AlNH₄(SO₄)₂。适合于用作疫苗组合物的材料的实例在“Remington′s药物科学”，1324-1341页，(Osol，A.ed.，MackPublishing，Easton PA(1980)中有所描述。(在此提及可参考)。

本发明的治疗组合物可以肠道外通过注射、快速灌输、鼻咽吸收(经鼻咽)、皮肤吸收、或口服给药。该组合物还可以通过肌肉内、静脉内给药。肠道外给药的组合物包括无菌水或非水性的溶液，悬液和乳剂。非水相溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油诸如橄榄油、和可注射的有机酯诸如乙基油酸。可以使用载体或封闭包衣来增加皮肤的渗透性并增强抗体的吸收。口服的液体剂量形式通常可以含有质脂体溶液。用于悬浮质脂体的合适的形式包括，含有本领域所通常使用的的惰性稀释液，诸如水，乳剂、悬剂、溶剂、糖浆和酏剂。除了惰性稀释液，该组合物还包括佐剂，湿润剂，乳化剂，和悬浮剂，或甜味剂，香味剂，或芳香剂。

本发明的治疗组合物也可以以胶囊形式给药。例如，将疫苗包装在由聚(DL-丙交酯-联-乙交酯)组成的生物降解型微球胶囊进行的鼻内免疫。参见Shahin，R.等(1995)感染免疫学63：1195-1200。类似地，还可以使用口服胶囊包装的Salmonella typhimurium抗原。参见Allaoui-Attarki，K.等(1997)感染免疫学65：853-857。本发明的胶囊包装疫苗可以通过给中途径包括那些将疫苗与粘膜接触的途径(例如，鼻内、结肠内、十二指肠内)。

当采取多次给药方案时，有多种技术可以用来免疫接种计时。可以多次使用本发明的组合物以提高免疫动物体内免疫球蛋白的表达水平和多样性。通常，如果进行多次免疫，应当间隔一或两个月进行。

根据本发明，“有效量”的治疗组合物是指，它足够完成所需的生物学效力。一般地能够提供有效量的组合物药量是根据许多因素而变化的：如动物或人的年龄、病情、性别、和疾病范围，以及可能的由本领域普通技术人员来调节其它变化因素。

本发明的抗原制剂可以单一或多次剂量的有效量给药。本发明的有效量的组合物每次用量0.01-1,000μg/ml，优选的每剂0.1-500μg/ml，更为优选的是10-300μg/ml。实施例实施例1：从粪肠球菌保藏样品中分离选择的DNA克隆

可以使用三种方法从粪肠球菌基因组DNA文库中分离含有本发明的多核苷酸的粪肠球菌克隆。将粪肠球菌菌株V586保藏，作为获取粪肠球菌菌株的一个方便的来源，当然可以使用本领域所熟知的多种粪肠球菌菌株。

粪肠球菌基因组DNA由下述方法制备。在丰富培养基〔例如类胰蛋白酶大豆培养基，脑心混合培养基，或SUPER培养基〕中过夜生长的20ml细菌，收集菌体，用TES〔30mM Tris-pH8.0，25mMEDTA，50mMNaCl〕洗两次，重悬于5ml高盐TES(2.5MNaCl)加入溶葡萄球菌素至终浓度50μg/ml，于37℃缓慢旋转1小时以得到原生质体细胞。然后将溶液置于培养箱〔或摇动的水浴〕并升温至55℃。加入500ml的20％sarcosyl裂解细胞。接着，加入盐酸胍至终浓度7M(5.5ml有3.69g).混合物于55℃缓慢搅拌60-90分钟〔溶液应清亮〕。用覆盖有2.85M CsCl的2.0ml 5.7MCsCl在非常干净的SW41管中建立CsCl梯度。梯度仔细覆盖包括DNA的盐酸胍溶液。以30,000rpm20℃旋转梯度24小时，收集低DNA条带。加入TE缓冲液只体积5ml。在DNA加入蛋白酶K(10μg/ml)37℃反应过夜，乙醇沉淀。沉淀的DNA用适当的缓冲液重悬。

第一个方法中，利用与本发明的多核苷酸相应的多核苷酸探针，通过筛选质粒化的粪肠球菌基因组文库来直接分离质粒。其是，根据已报导的序列用Applied Biosystems DNA合成仪合成30-40个核苷酸的特定多核苷酸。例如在T4多核苷酸激酶作用下用³²P-γ-ATP标记寡聚核苷酸，用常规方法纯化。〔参照，例如，Sambrook等，分子克隆：实验室手册〔冷泉港，N.Y.，第二版1989〕；Ausubel等，现代生物学方法〔John Wiley和Sons，N.Y.1989〕。转化物置于1.5％琼脂板上(包括合适的选择试剂，例如氨苄)至密度为每板150个转化物(克隆)。按照细菌菌落常规筛选法用尼龙膜筛选这些板。参照，例如，Sambrook等，分子克隆：实验室手册〔冷泉港，N.Y.，第二版1989〕；Ausubel等，现代生物学方法〔John Wiley和Sons，N.Y.1989〕或其它本领域熟练人员所知的技术。

另一种方法，合成两条来自表1的多核苷酸5′和3′端的15-25个核苷酸的引物，并用粪肠球菌基因组DNA作模板PCR扩增目的DNA。在常规反应条件完成PCR反应，如在25μl反应混合物中含0.5μg上述模板DNA。一个方便的反应混合物是1.5-5mM MgCl₂，0.01％(w/v)明胶，dATP，dCTP，dGTP，dTTP各20μM，两引物各25pmol和0.25个单位的Taq聚合酶。35个PCR循环〔94℃变性1分钟；55℃复性1分钟72℃延伸1分钟〕用Perkin-Elmer Cetus自动热循环仪。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳分析，切下并纯化目的大小的DNA条带。PCR产物通过亚克隆和测序DNA产物来确证所选序列。

最后，表1的DNA序列的重叠寡核苷酸可以由化学合成，然后使用本领域所熟知的PCR技术便可得到所需长度的核苷酸序列。实施例2(a)：肠球菌多肽在大肠杆菌的表达及纯化

将细菌表达载体pQE60用于在细菌中表达本发明的多肽片段，它们可用于下面讨论的软组织和系统感染模型中。(QIAGEN，Inc.，9259 Eton Avenue，Chtsworth，CA，91311)。pQE60编码有氨苄抗性基因，细菌复制起始位点(“ori”)，IPTG诱导启动子，核糖体结合序列(“RBS”)，还可以编码六个组氨酸以便能亲和吸附至nickel-nitrilo-tri-acetic acid(“Ni-NTA”)亲和树脂(QIAGEN，Inc.，同上)上，并有适合的单一的限制性内切酶位点。这些元件可以使插入的编码多肽的DNA序列表达出羧基端带有六个组氨酸残基(即，“6Xhis标签”)的多肽。

以与编码表1中所示的部分粪肠球菌多核苷酸的3’和5’端序列退火的PCR寡核苷酸引物，从粪肠球菌基因组DNA中扩增到编码有本发明所需的粪肠球菌蛋白的DNA序列，并在其引物3’和5’端加有能连入pQE60载体的限制性内切酶位点。

为了克隆到成熟的蛋白，5’引物为含有适当的内切酶识别位点，其后面为表1中所需的粪肠球菌多核苷酸的氨基端编码序列的核苷酸。本领域的普通熟练技术人员应当明白开始于3’和5’引物的蛋白编码序列可能会扩增到长于或短于编码任一所需的完整蛋白的成熟形式。3’端引物为这样一个序列：含有适当的酶切位点，接着为互补于表1中多肽编码序列3’末端的序列，但没有终止密码，从而可以使阅读框通过酶切位点与pQE60载体的六个组氨酸密码子相连。

扩增的粪肠球菌DNA片段和pQE60载体用识别共有位点的限制性内切酶消化然后连接。粪肠球菌DNA就以这样的方式插入pQE60载体，即将粪肠球菌蛋白编码区置于IPTG诱导的启动子下游并在起始密码子AUG与六个组氨酸密码子之间。

连接产物可用通用的方法如Sambrook et al.同上所述的转入感受态大肠杆菌细胞株M15/rep4中，此菌株含有多拷贝的质粒pREP4，此质粒表达有lac阻遏物以及带有卡那霉素抗性(“Kanr”)该菌株用于完成本文所述的解释性实施例，也是在众多的可表达粪肠球菌多肽的菌株中仅有的一个可以通过商业渠道获得的(QIAGEN，Inc.，同上)。转化子可以通过能够在氨苄和卡那抗性的LB平板上生长而得以确证。质粒DNA可从抗性菌落中提取并经限制性内切酶酶切，PCR，DNA测序分析得以确证。

在加入氨苄青霉素(100μg/ml)和卡那霉素(25μg/ml)的LB液体培养基中培养含有所需结构的菌落过夜。过夜培养物以1∶25-1∶250的接种量扩大培养。当细胞生长至适当的密度时(600nm处OD值为0.4-0.6)，加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为1mM使1ac阻遏物失活，从而诱导1ac阻遏物敏感的启动子启动转录。细胞被继续培养3-4小时，然后离心收获菌体。

将菌体在4℃，pH8，6M的盐酸胍溶液中搅拌3-4小时。细胞碎片通过离心除去，含有粪肠球菌多肽的上清被加入Ni-NTA亲和树脂柱(QIAGEN，Inc.，同上)，带有6X组氨酸标记的蛋白与该树脂有高度的亲和力，这样便可进行简单的一步纯化过程(细节参看：TheQIAexpressionist，1995，QIAGEN，Inc.，同上)。简言之，在PH8，6M盐酸胍中上清被加入亲和柱，先用10个柱体积的PH6，6M的盐酸胍洗柱，最后用PH5，6M的盐酸胍将粪肠球菌多肽洗脱下来。

经纯化的蛋白通过对含盐的磷酸缓冲溶液(PBS)或50mM醋酸钠，PH6，加入200mM氯化钠的缓冲液进行透析复性。也可以将蛋白固定在亲和柱上进行复性。推荐的做法如下：用6-1M尿素在500mM NaCl，20％甘油，20mM Tris/HCl PH7.4，并含有蛋白酶抑制剂的情况下线性梯度复性，复性将在1.5小时或更长的时间内完成。复性后蛋白可通过加入250mM immidazole洗脱下来。Immidazole可以最后通过对PBS或PH6，50mM醋酸钠，加入200mM氯化钠的缓冲液透析除去。纯化后的蛋白于4℃或-80℃保存。

本发明的某些多肽用非变性的方法制备。对于这些多肽，在4℃下每升的细胞被重悬于25ml的裂解缓冲液A中(裂解缓冲液A为：50mM磷酸钠，300mM氯化钠，10mM 2-巯基乙醇，10％甘油，PH7.5，并在每50ml缓冲液中加入一片无EDTA的蛋白酶抑制剂混合制剂(Boehringer Mannheim #1873580)550nm处每毫升的OD值为大约10-20。悬浮物通过-70℃(可使用乙醇-干冰浴获得)至室温间反复冻熔三次。将细胞在冰浴中以大约80W的功率，10秒钟的脉冲，超声破碎三分钟多，用来裂解细胞。被超声处理的样品在4℃下以15000RPM离心30分钟。用加有1ml CL-4B树脂的层析柱处理上清液用以清除能非特异吸附在琼脂糖柱子上的蛋白，收集穿透峰。

预澄清的穿透峰被用于过Ni-NTA亲和柱(QIAGEN，Inc.，同上)。带有6X组氨酸标记就会以高度的亲和力结合到Ni-NTA树脂上，便可一步将蛋白进行纯化。简言之，在4℃下将上清在裂解液A中被加入，柱子首先用10体积的裂解液洗柱直至A280降至基线。然后，用5体积的40mM咪唑(92％裂解液A/8％缓冲液B)(缓冲液B：50mM磷酸钠，300mM氯化钠，10％甘油，10mM2-巯基乙醇，500mM咪唑，最终PH7.5)。通过调节裂解液A和缓冲液B的比例逐渐增加咪唑的浓度来洗脱蛋白。可使用三个不同的浓度：3体积的75mM咪唑，3体积的150mM咪唑，5体积的500mM咪唑。含有纯化的蛋白的组分根据蛋白大小分别用8％，10％，14％SDS-PAGE来分析。为了将蛋白置入方便使用的缓冲液，可将纯化的蛋白对PBS溶液透析2次。被纯化的蛋白置于4℃或-80℃保存。

下面的又一种方法也可用于纯化大肠杆菌以包含体形式表达的粪肠球菌多肽。除了特殊情况，以下步骤均在4-10℃下操作。

大肠杆菌发酵生产期完成后，细胞被冷却至4-10℃，然后以15000rpm连续离心(Heraeus Septech)收集细胞。根据期望的产率的每单位重量收获细胞和所需的纯化后的蛋白的量，适合的细胞重量，将培养物悬浮于含有100mMTris，50mMEDTA，PH7.4的缓冲溶液中。细胞用锋利的混匀器打散成均匀的悬浮物。

然后细胞通过将溶液以4000-6000psi的压力通过微流化器(Microfluidicds，Corp.or APV Gaulin，Inc.)两次被裂解，再加入NaCl至终浓度为0.5M，以7000Xg离心15分钟。用0.5M NaCl，100mM Tris，50mM EDTA，PH7.4洗一次获得的沉淀。

获得的包含体用1.5M盐酸胍溶解2-4小时。7000xg离心15分钟后，弃沉淀，含有粪肠球菌多肽的上清被置于4℃保温过夜以便于盐酸胍进一步抽提。

接下来的高速离心(30,000Xg)用于去除不可溶的颗粒，盐酸胍溶解的蛋白通过迅速与20倍体积的缓冲液(含有50mM钠，PH4.5，150mM NaCl，2mM EDTA)混合并强烈搅拌，使蛋白重新复性。再进一步纯化以前被复性的稀释的蛋白溶液不要混合，于4℃放置12小时。

为了澄清重折叠的粪肠球菌多肽溶液，用事先装好0.16μm滤膜并有合适的表面积的用40mM醋酸钠PH6.0平衡的切向过滤装置(如：Filtron)进行过滤。过滤后的样品通过阳离子交换树脂(如：Poros HS-50，Perspective Biosystems)。先用40mM醋酸钠PH6.0溶液洗，再用同样的缓冲液分别加入250mM，500mM，1000mM，1500mM，NaCl后进行梯度洗脱。在280nm处对洗脱峰进行连续监测。收集的样品用SDS-PAGE电泳检测。

含有粪肠球菌多肽的溶液混合后加4倍体积的水。将稀释的样品加入事先准备好的串联的强阳离子柱(如：Poros HS-50，PerspectiveBiosystems)和弱阴离子树脂柱(如：Poros CM-20，PerspectiveBiosystems)。柱子事先用40mM醋酸钠PH6.0的溶液平衡后，两种柱子都用40mM醋酸钠PH6.0 200mM NaCl的溶液洗柱℃M-20柱用范围在0.2M NaCl，50mM醋酸钠，PH6.0至1.0M NaCl，50mM醋酸钠，PH6.5的缓冲液线形梯度洗脱，在A₂₈₀连续检测洗脱峰的条件下分步收集。通过检测(如：16％SDS-PAGE)后，将含有粪肠球菌多肽的分步收集样品集中起来。

经过以上的重折叠和纯化步骤，获得的粪肠球菌多肽纯度大于95％。5μg样品上样于16％SDS-PAGE凝胶经考马斯蓝染色后，看不见大的杂质条带。纯化的蛋白也经过内毒素/LPS杂质检验，根据LAL方法检测的LPS含量小于0.1ng/ml。实施例2(b)肠球菌多肽在大肠杆菌中的另外一种表达和纯化

另外，本发明中的一些多肽用pQE10载体表达和纯化，用于以下讨论中的软组织和系统性感染模型。其区别在于插入的编码DNA片段可表达此多肽以及共价联于此多肽氨基末端的六个组氨酸残基(即‘6X his标签’)。在此实施例中用到pQE10载体(QIAGEN公司，9259 Eton Avenue，Chatsworth，CA，91311)。pQE10载体的组成安排使得编码本发明中多肽的插入DNA序列可表达此多肽及氨基末端共价联接的六个组氨酸残基(即‘6X his标签’)。

编码表1的多肽的所需部分的DNA序列，由来自粪肠球菌基因组DNA的PCR寡核苷酸引物扩增。将PCR引物与为本发明中多肽的所需氨基酸序列编码的核苷酸序列退火。分别在引物序列的5’和3’末端加上含有限制性酶切位点的另外的核苷酸，以利于克隆入pQE10载体。

为了克隆本发明的多肽，选取5’和3’引物扩增相应编码序列。本领域的普通技术人员能够理解的是，可改变蛋白编码序列的5’和3’引物开始处，以扩增出任何所需部分的编码本发明多肽的DNA。5’引物的设计使得6X his标签的编码序列与限制性酶切位点串联排列，这样可与粪肠球菌多肽的阅读框架保持一致。3’引物设计中引入终止密码子。按照上文对pQE60质粒所述那样，将扩增的片段克隆，并表达蛋白。

编码表1的氨基酸序列的DNA序列也可以通过与如上描述相似的程序作为融合蛋白克隆和表达，其中优选地用pET-32(+)载体(Novagen，601 Science Drive，Madison，WI53711来替代pQE10载体。

上述的方法并不限于实际产生的多肽片段。上述的方法同下述的方法一样，都可以用来产生全长多肽或其所需的片段。实施例2(c)粪肠球菌多肽在大肠杆菌中的另一种表达和纯化

本实施例中使用细菌表达载体pQE60(QIAGEN公司，9259Eton Avenue，Chatsworth，CA，91311)进行细菌表达。然而在此实施例中，多肽编码序列的插入阻碍了六个组氨酸密码子的翻译，产生的多肽不带有6X his标签。

利用同编码粪肠球菌多肽所需部分的核苷酸5’和3’端序列退火的PCR寡核苷酸引物，从保藏的粪肠球菌基因组DNA克隆中，扩增编码粪肠球菌氨基酸序列所需部分的DNA序列。在5’和3’引物序列上加入含有限制性酶切位点的另外核苷酸，以利于克隆入载体pQE60。

为了克隆本发明中的多肽，选取5’和3’引物扩增相应编码序列。本领域的普通技术人员能够理解的是，可改变蛋白编码序列的5’和3’引物开始处，以扩增出任何所需部分的编码本发明多肽的DNA。3’和5’引物含有合适的限制性内切酶位点，后接分别与编码序列的5’和3’末端互补的核苷酸。3’引物设计中引入框内终止密码子。

用可识别引物上限制性酶酶切位点的限制性内切酶消化扩增出的粪肠球菌DNA片段和载体pQE60，然后将切割后的DNA连接。在经限制性酶切割的pQE60载体上的粪肠球菌DNA的插入使得粪肠球菌蛋白的编码区域包括位于IPTG诱导的启动子下游的相关终止密码子和并与起始AUG同框。该相关终止密码子阻止了插入位点下游六个组氨酸密码子的翻译。

连接产物可用通用的方法如Sambrook et al.同上所述的方法转入感受态大肠杆菌细胞株M15/rep4中，此菌株含有多拷贝的质粒pREP4，此质粒表达有1ac阻遏物以及带有卡那霉素抗性(“Kanr”)该菌株用于完成这里所述的解释性实施例，也是在众多的可表达粪肠球菌多肽的菌株中仅有的一个可以通过商业渠道获得的(QIAGEN，Inc.，同上)。转化子可以通过能够在氨苄青霉素和卡那霉素的LB平板上生长而得以确证。质粒DNA可从抗性菌落中提取并经限制性内切酶酶切，PCR，DNA测序分析得以确证。

在加入氨苄青霉素(100μg/ml)和卡那霉素(25μg/ml)的LB液体培养基中培养含有所需结构的菌落过夜。过夜培养物以1∶25-1∶250的接种量扩大培养。当细胞生长至适当的密度时(600nm处OD值为0.4-0.6)，加入异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷(IPTG)至终浓度为1mM使lac阻遏物失活，从而诱导lac阻遏物敏感的启动子启动转录。细胞被继续培养3-4小时，然后离心收获菌体。

为了纯化粪肠球菌多肽，将细胞在4℃，于6M盐酸胍pH8的溶液中搅拌3～4小时。离心去除细胞残片，将含有粪肠球菌多肽的上清对200mM NaCl的50mM醋酸钠pH 6的缓冲液透析。或者，将蛋白通过对含有蛋白抑制剂的500mM NaCl，20％甘油，25mM Tris/HClpH7.4的溶液透析也可以获得很好的复性。复性后通过离子交换，疏水作用及分子筛层析进一步纯化。或者，利用亲和层析步骤如抗体柱，也可以获得纯的粪肠球菌多肽。将纯化的蛋白于4℃保存或-80℃冻存。

下述另一种方法可用于纯化在大肠杆菌中表达的作为包含体形式存在的粪肠球菌多肽。除非具体说明，所有下述步骤均在4-10℃进行。

当大肠杆菌发酵生产期完成后，细胞被冷却至4-10℃，然后以15000RPM连续离心(Heraeus Septech)收集细胞。根据每单位重量收获细胞期望的产率和所需的纯化后的蛋白的量，将合适的细胞量，悬浮于含有100mMTris，50mM EDTA，PH7.4的缓冲溶液中。细胞用锋利的混匀器打散成均匀的悬浮物。

然后细胞通过将溶液以4000-6000psi的压力通过微流化器(Microfluidicds，Corp.或APV Gaulin，Inc.)两次被裂解，再加入NaCl至终浓度为0.5M，以7000Xg离心15分钟。用0.5M NaCl，100mM Tris，50mM EDTA，PH7.4洗一次获得的沉淀。

获得的包含体用1.5M盐酸胍溶解2-4小时。7000xg离心15分钟后，弃沉淀，含有粪肠球菌多肽的上清被置于4℃保温过夜以便于盐酸胍进一步抽提。

接下来的高速离心(30000Xg)用于去除不可溶的颗粒，盐酸胍溶解的蛋白通过迅速与20倍体积的缓冲液(含有50mM钠，PH4.5，150mM NaCl，2mM EDTA)混合并强烈搅拌，使蛋白重新复性。再进一步纯化以前被复性的稀释的蛋白溶液不要混合，于4℃放置12小时。

为了澄清重折叠的粪肠球菌多肽溶液，用事先装好0.16μM滤膜并有合适的表面积的用40mM醋酸钠PH6.0平衡的切向过滤装置(如：Filtron)进行过滤。过滤后的样品通过阳离子交换树脂(如：Poros HS-50，Perspective Biosystems)。先用40mM醋酸钠PH6.0溶液洗，再用同样的缓冲液分别加入250mM，500mM，1000mM，1500mM，NaCl后进行梯度洗脱。在280nm处对洗脱峰进行连续监测。收集的样品用SDS-PAGE电泳检测。

含有粪肠球菌多肽的溶液混合后加4倍体积的水。将稀释的样品加入事先准备好的串联的强阴离子柱(Poros HQ-50，PerspectiveBiosystems)和弱阴离子树脂柱(Poros CM-20，PerspectiveBiosystems)。柱子事先用40mM醋酸钠PH6.0的溶液平衡后，两种柱子都用40mM醋酸钠PH6.0 200mM NaCl的溶液洗柱。CM-20柱用范围在0.2M NaCl，50mM醋酸钠，PH6.0至1.0M NaCl，50mM醋酸钠，PH6.5的缓冲液线形梯度洗脱，在A₂₈₀连续检测洗脱峰的条件下分步收集。将含有粪肠球菌多肽的分步收集样品(如由16％SDS-PAGE检测)集中起来。

经过以上的重折叠和纯化步骤，获得的粪肠球菌多肽纯度大于95％。5μg样品上样于16％SDS-PAGE凝胶经考马斯蓝染色后，看不见大的杂质条带。纯化的蛋白也经过内毒素/LPS杂质检验，根据LAL方法检测的LPS含量小于0.1ng/ml。实施例2(d)在其他细菌中克隆和表达粪肠球菌

粪肠球菌多肽还可以用S.Skinner等(1988)分子微生物学2：289-297或J.I.Moreno(1996)蛋白表达纯化8(3)：332-340的方法在粪肠球菌中表达；用C.Rush等1997应用微生物学生物技术47(5)：537-542的方法在乳杆菌中表达；用Chang等美国专利号No：4,952,508方法在枯草杆菌中表达。实施例3在COS细胞中的克隆和表达

将部分粪肠球菌多肽的编码DNA克隆到表达载体pDNAI/Amp或pDNAIII(可从Invitrogen公司购得)上，从而构建出粪肠球菌表达质粒。表达载体pDNAI/Amp含有：(1)大肠杆菌复制起始位点，可有效地在大肠杆菌或其他原核细胞中增殖；(2)氨苄青霉素抗性基因，以利于含质粒的原核细胞的选择；(3)SV40复制起始位点，以利于在真核细胞中的增殖；(4)一个CMV启动子，一个多聚接头，一个SV40的内含子；(5)几个编码血细胞凝集素片段的密码子(即“HA”标签，便于纯化)，其后面跟有终止密码子和多腺苷酸信号，从而使得DNA方便地置于CMV启动子的表达控制之下，同时通过多聚接头上限制性酶切位点可操纵地与SV40内含子及多腺苷酸信号连接。HA标签相应于来源于流感血细胞凝集素蛋白的表位，其描述可见Wilson等1984细胞37：767所介绍的。HA标签与靶蛋白的融合便于通过识别HA表位的抗体来检测和获得重组蛋白。另外，pDNAIII含有选择性的新霉素标记。

编码粪肠球菌多肽的DNA克隆入载体的多接头区域，使得重组蛋白的表达处于CMV启动子的调控之下。质粒构建策略如下：利用含有限制性酶切位点的引物，从粪肠球菌基因组DNA提取物中扩增出DNA。引物同上面粪肠球菌在大肠杆菌表达质粒构建中所描述。5’引物中含有一个Kozak序列，一个起始密码子，和粪肠球菌多肽5’编码区核苷酸。3’引物含有互补于粪肠球菌DNA3’编码序列的核苷酸，一个终止密码子，和方便的限制性位点。

将PCR扩增的DNA片段和载体pDNAI/Amp用合适的限制性酶切割并连接。连接混合物转化适当的大肠杆菌菌株，如SURE^TM(Stratagene Cloning Systems，La Jolla，CA 92037)，转化培养物涂布于氨苄青霉素培养基平板，温育培养氨苄青霉素抗性克隆。从抗性克隆中分离质粒DNA，通过限制性分析或其他手段检测编码粪肠球菌多肽片段的存在。

为了表达重组粪肠球菌多肽，用DEAE-葡聚糖方法，如Sambrook等(同上)所描述，将如上所述的表达载体转染COS细胞。将细胞在载体适当表达粪肠球菌的条件下温育培养。

表达的粪肠球菌-HA融合蛋白用如Harlow等(如上)方法放射性标记或免疫沉淀鉴定。为此目的，转染两天后，通过在含35S-半胱氨酸培养基培养8小时来标记细胞。收集细胞和培养基，洗涤细胞，用含去污剂的RIPA缓冲液：150mM NaCl，1％NP-40，0.1％SDS，0.5％DOC，50mM TRIS pH7.5裂解细胞，如Wilson等描述(同上)。来自细胞裂解物和培养基质的蛋白用HA特异性单克隆抗体沉淀。预期大小的表达产物可见于细胞裂解物，而阴性对照中则不可见。实施例4在CHO细胞中的克隆和表达

本实施例中利用载体pC4来表达粪肠球菌多肽。质粒pC4衍生于质粒pSV2-dhfr(ATCC保藏号37146)。该质粒中含有受SV40早期启动子控制的小鼠的DHFR基因。用该质粒转染缺乏二氢叶酸的中国仓鼠卵巢细胞或其他细胞后，可通过在补充有化疗试剂氨甲喋呤的选择性培养基(alpHa minusMEM，Life Technologies)中生长进行筛选。细胞中DHFR基因的扩增对氨甲喋呤(MTX)有抗性作用，这点已有报道，见Alt等，1978，生物化杂志253：1357-1370；Hamlin等1990，生物化学和生物物理学杂志1097：107-143；Page等，1991，生物技术9：64-68。DHFR基因扩增的结果是，在增加MTX浓度的培养基中生长的细胞，通过过度产生靶酶，DHFR，逐渐产生对该药物的抗性。如果用第二个基因连接于DHFR基因，它通常也会共同扩增并过度表达。此方法可产生携带1000多个拷贝扩增基因的细胞系，这是本领域技术人员周知的。然后，当去除氨甲喋呤时，就可获得将扩增基因整合入宿主一个或多个染色体的细胞系。

pC4质粒含有Rouse肉瘤病毒长末端重复序列(LTR)强的启动子，可表达目的多肽，Cullen等(1985)分子细胞生物学5：438-447；和分离自人巨细胞病毒(CMV)立即早期基因增强子的片段，Boshart等，1985，细胞41：521-530。启动子的下游是允许基因整合的单个限制性酶切割位点，如BamHI，XbaI，和Asp718。在这些位点之后，质粒还含有大鼠前胰岛素原基因3’内含子和多聚腺苷酸位点。也可以将其他高效启动子用于表达，如人β-肌动蛋白启动子，SV40早期或晚期启动子，或来自于其他反转录病毒，如HIV和HTLV1的长末端重复。可以利用Clontech的Tet-Off和Tet-On基因表达系统，和类似系统来进行可调方式的哺乳细胞粪肠球菌多肽表达(Gossen等1992，美国科学院研究进展89：5547-5551)。还可以利用用mRNA其他信号的多聚腺苷酸化，如来自人生长激素和珠蛋白基因。在染色体中整合有所需基因的稳定的细胞系，也可以通过共转染选择性标记如gpt，G418或潮霉素来筛选。在开始时选用多个标记会更为有利，如G418+氨甲喋呤。

用限制性酶消化pC4质粒，并通过本领域技术人员所熟知的方法，用牛肠磷酸酶去磷酸化。将载体用1％琼脂糖凝胶分离。利用与基因需求部分5’和3’序列相匹配的PCR寡核苷酸引物，扩增出编码粪肠球菌多肽的DNA。合成并利用含有限制性位点，一个Kozak序列，一个AUG起始密码子粪肠球菌多肽5’区核苷酸的5’引物。合成并利用含有限制性位点，终止密码子，互补于粪肠球菌多肽3’编码序列的核苷酸的3’引物。用限制性酶切消化扩增的片段，然后再在1％琼脂糖凝胶上纯化。分离的片段和去磷酸化的载体用T4DNA连接酶连接。转化大肠杆菌HB101或XL-1 BLUE细胞，用如限制性酶切分析鉴定携带外源片段插入pC4质粒的细菌。

利用缺乏活性DHFR基因的中国仓鼠卵巢细胞进行转染。将5μg表达质粒pC4用脂质体-介导的转染试剂，如Lipofectin ^TM或Lipofect AMINE^TM(LifeTechnologies Gaithersburg MD)同0.5μgpSVneo质粒共转染。pSVneo质粒含有主要的选择标记，来自Tn5的neo基因，它为可编码一种酶，从而对一组抗生素，包括G418产生抗性。将细胞接种于含1mg/ml G418的α-MEM培养基。两天后，将细胞用胰酶消化，接种于含10，25或50ng/ml的氨甲喋呤及1mg/mlα-MEM培养基的杂交瘤克隆板(Greiner，德国)。大约10～14天后，将单个克隆用胰酶消化并接种于含不同浓度氨甲喋呤(50nM，100nM，200nM，400nM，800nM)的6-孔petri氏培养皿或10ml烧瓶。能在最高浓度氨甲喋呤中生长的克隆转移至新的含更高浓度氨甲喋呤(1μM，2μM，5μM，10mM，20mM)的6-孔培养板。重复同样的操作直至获得在100-200μM浓度氨甲喋呤中生长的克隆。目的基因产物的表达利用如SDS-PAGE，Western blot或反相HPLC方法进行分析。实施例5 粪肠球菌的定量鼠软组织感染模型

对包括多肽和肽的本发明的组合物，检测了其作为疫苗或可增强/刺激针对某种细菌(如粪肠球菌)免疫反应的能力。首先将小鼠(如NIH瑞士雌性小鼠，约7周龄)用本发明的组合物以生物保护有效剂量或免疫增强/刺激有效剂量处理，使用的是本领域已知的方法，见Harlow等，抗体：实验室手册(冷泉港实验室出版社，第二版，1988)。适当的起始剂量的实例为20μg每只动物。

将用来攻击小鼠的目的细菌如粪肠球菌过夜培养生长。培养物在适当的培养基中稀释至5×10⁸pfu/ml，充分混匀，系列稀释，滴定。所需剂量进一步按1∶2的比例，用在无菌PBS(3g/100ml)中事先溶胀的无菌Cytodex 3微载体珠来稀释。将小鼠轻微麻醉使其温顺而有活动能力，在每只动物腹股沟处静脉注射0.2ml Cytodex 3珠/细菌混合液。视注射日为第一天，四天后，处死动物，取其脓肿内容物置于含1ml无菌PBS的15ml锥形管中。脓肿内容物经酶解处理，按照下文所述涂板。

首先在锥形管放置无菌的玻璃珠，一起振荡使脓肿破裂。每管加入3.0ml预先制备的酶混合物(1.0ml胶原酶(4.0m/ml)，1.0ml胰蛋白酶(6.0mg/ml)和8.0mlPBS)，37℃放置20分钟。将溶液离心，弃上清。加入0.5mlH₂O，振荡，室温温育10分钟。加入0.5ml培养基，将样品系列稀释，涂布于琼脂培养板，37℃过夜培养。计算板上清楚分散的克隆，同阳性及阴性对照样品比较并定量。通过将本发明的组合物的有效剂量与本领域已知的组合物在小鼠和人上的有效剂量相比较，本方法可用于确定组合物并决定适合于人和其他动物的有效剂量。利用上述对小鼠的试验数据，可以推断出使用本发明的组合物，在用于对人和其他动物进行有效治疗时的剂量。可以理解的是，需要对人和其他动物做进一步研究，用本领域已知的临床方法，确定出最为有效的剂量。实施例6 粪肠球菌感染的鼠系统性嗜中性白细胞减少模型

利用以下的定量鼠系统性嗜中性白细胞减少模型，检测了包括多肽和肽的本发明的组合物作为疫苗的功能或增强/刺激针对某种细菌(如粪肠球菌)免疫应答的能力。使用本领域已知的方法，见Harlow等，抗体：实验室手册(冷泉港实验室出版社，第二版，1988)，用本发明的组合物，以生物保护有效剂量或免疫增强/刺激有效剂量，对小鼠(如NIH瑞士雌性小鼠，约7周龄)治疗。合适的起始剂量的实例为20μg/每只动物。对小鼠腹腔内注射250-300mg/kg环磷酰胺。以注射环磷酰胺日为第一日，小鼠5天内不做治疗，使其开始恢复PMNL’S。

将所需的用以感染小鼠的细菌，如粪肠球菌过夜培养生长。培养物在适当的培养基中稀释至5×10⁸ pfu/ml，充分混匀，系列稀释，滴定。所需剂量进一步用4％Brewer’s酵母培养基1∶2稀释。对小鼠腹腔注射细菌/Brewer’s酵母。将Brewer’s酵母溶液单独作为对照使用。感染后第一周，每天观察两次，两周后每天观测一次，确定发病率和死亡率。实验最后处死动物。通过将本发明的组合物的有效剂量与本领域已知的组合物在小鼠和人上的有效剂量相比较，本方法可用于确定组合物并决定适合于人和其他动物的有效剂量。利用上述对小鼠的试验数据，可以推断出使用本发明的组合物，在用于对人和其他动物进行有效治疗时的剂量。可以理解的是，需要对人和其他动物做进一步研究，用本领域已知的临床方法，确定出最为有效的剂量。

在本文所提及的所有公开的出版物(包括专利，专利申请，期刊文章，实验手册，书，或其他文件)都可供参考。

本发明并不限于本文描述的特定的实施方案所确定的范围，它们只是用以阐明本发明的某些方面。除了本文显示和描述的，功能上相当的方法及内容也包括在发明的范围之内，通过上述的描述及所附的图表，本领域的熟练技术人员将会对此非常明白。此类修正也落入后文所附的权利要求的范围之内。表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列EF001-1  (SEQ ID NO：1)TGAAAGAATA TTGCCAGAAC GTGGCGAGCA AATTGTTTTA TAAATTTTTT TAAGGGAGAGAAAAAAATGA AGTTCAAAAC TCTAGCAACA ACAGTGTTAG CAACCGCAGC TATTTTCGCATTGGGGGCTT GTGGTAACGG TAATGGGGCC AAAGAATCAA ACGATATTGT GAAAGAAGTGAAGGAAGATA CGACAATCAC TTTCTGGCAT GCAATGAATG GGGTTCAAGA AGAAGCGTTAACAAAATTAA CGAAAGACTT CATGAAAGAA AATCCAAAAA TTAAAGTGGA ATTACAAAATCAATCTGCTT ACCCTGATTT ACAAGCCAAA ATCAATTCGA CTTTAACTTC ACCAAAAGATTTACCAACAA TTACGCAAGC GTACCCAGGC TGGTTATGGA ATGCTGCACA AGATGAAATGTTAGTGGACT TAAAACCATA TATGGATGAT GACACAATCG GCTGGAAAGA TGCAGAGCCAATTCGTGAAG TATTGTTAGA CGGCGCCAAA ATCGACGGCA AACAATACGG CATTCCATTTAATAAATCGA CAGAAATGTT ATTCTATAAT GCTGATTTGT TGAAAGAATA TGGTGTTGAAGTACCGAAAA CATTAGAGGA ATTAAAAGAA GCTTCTAAAA CAATTTACGA AAAATCCAACAAAGAAGTCG TTGGTGCTGG TTTTGACTCG TTAAATAACT ATTACGCAAT TGGAATGAAAAACAAAGGCG TTGATTTTAA TAAAGACTTA GATTTAACAA GCAAAGATTC ACAAGAAGTCGTGGACTATT ACCGTGATGG TATCGAAGCA GGTTACTTCC GCACAGCTGG TTCAGATAAATATTTATCTG GCCCATTTGC AAACAAAAAG GTAGCAATGT TTGTCGGTAG TATTGCTGGTGCTGGTTTTG TTCAAAAAGA TGCTGAAGCT GGTGGCTATG AATACGGTGT TGCACCACGTCCTGAAAAAA TCAACTTACA ACAAGGAACA GATATTTATA TGTTCGATAG TGCTACGCCAGAACAACGGA CAGCGGCATT TGAATTCATG AAATTCTTAG CTACTCCTGA TTCACAATTGTACTGGGCAC AACAAACAGG TTATATGCCA ATTTTAGAAT CTGTTTTACA CAGTGATGAGTACAAAAATT CTAAGACAAC CAAAGTACCT GCACAACTTG AAAACGCAGT AAAAGATTTATTCGCTATCC CAGTAGAAGA AAATGCTGAT TCAGCCTATA ATGAAATGCG GACAATTATGGAAAGTATTT TTGCTTCATC AAATAAAGAC ACGAGAAAAT TATTGAAAGA TGCAACATCACAATTTGAAC AAGCATGGAA CCAATAAEF001-2 (SEQ ID NO：2)MKFKTLATT VLATAAIFAL GACGNGNGAK ESNDIVKEVKEDTTITFWHA MNGVQEEALT KLTKDFMKEN PKIKVELQNQ SAYPDLQAKI NSTLTSPKDLPTITQAYPGW LWNAAQDEML VDLKPYMDDD TIGWKDAEPI REVLLDGAKI DGKQYGIPFNKSTEMLFYNA DLLKEYGVEV PKTLEELKEA SKTIYEKSNK EVVGAGFDSL NNYYAIGMKNKGVDFNKDLD LTSKDSQEVV DYYRDGIEAG YFRTAGSDKY LSGPFANKKV AMFVGSIAGAGFVQKDAEAG GYEYGVAPRP EKINLQQGTD IYMFDSATPE QRTAAFEFMK FLATPDSQLYWAQQTGYMPI LESVLHSDEY KNSKTTKVPA QLENAVKDLF AIPVEENADS AYNEMRTIMESIFASSNKDT RKLLKDATSQ FEQAWNQEF001-3 (SEQ ID NO：3)TT GTGGTAACGG TAATGGGGCC AAAGAATCAA ACGATATTGT GAAAGAAGTGAAGGAAGATA CGACAATCAC TTTCTGGCAT GCAATGAATG GGGTTCAAGA AGAAGCGTTAACAAAATTAA CGAAAGACTT CATGAAAGAA AATCCAAAAA TTAAAGTGGA ATTACAAAATCAATCTGCTT ACCCTGATTT ACAAGCCAAA ATCAATTCGA CTTTAACTTC ACCAAAAGATTTACCAACAA TTACGCAAGC GTACCCAGGC TGGTTATGGA ATGCTGCACA AGATGAAATGTTAGTGGACT TAAAACCATA TATGGATGAT GACACAATCG GCTGGAAAGA TGCAGAGCCAATTCGTGAAG TATTGTTAGA CGGCGCCAAA ATCGACGGCA AACAATACGG CATTCCATTTAATAAATCGA CAGAAATGTT ATTCTATAAT GCTGATTTGT TGAAAGAATA TGGTGTTGAAGTACCGAAAA CATTAGAGGA ATTAAAAGAA GCTTCTAAAA CAATTTACGA AAAATCCAACAAAGAAGTCG TTGGTGCTGG TTTTGACTCG TTAAATAACT ATTACGCAAT TGGAATGAAAAACAAAGGCG TTGATTTTAA TAAAGACTTA GATTTAACAA GCAAAGATTC ACAAGAAGTCGTGGACTATT ACCGTGATGG TATCGAAGCA GGTTACTTCC GCACAGCTGG TTCAGATAAATATTTATCTG GCCCATTTGC AAACAAAAAG GTAGCAATGT TTGTCGGTAG TATTGCTGGT表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列GCTGGTTTTG TTCAAAAAGA TGCTGAAGCT GGTGGCTATG AATACGGTGT TGCACCACGTCCTGAAAAAA TCAACTTACA ACAAGGAACA GATATTTATA TGTTCGATAG TGCTACGCCAGAACAACGGA CAGCGGCATT TGAATTCATG AAATTCTTAG CTACTCCTGA TTCACAATTGTACTGGGCAC AACAAACAGG TTATATGCCA ATTTTAGAAT CTGTTTTACA CAGTGATGAGTACAAAAATT CTAAGACAAC CAAAGTACCT GCACAACTTG AAAACGCAGT AAAAGATTTATTCGCTATCC CAGTAGAAGA AAATGCTGAT TCAGCCTATA ATGAAATGCG GACAATTATGGAAAGTATTT TTGCTTCATC AAATAAAGAC ACGAGAAAAT TATTGAAAGA TGCAACATCACAATTTGAAC AAGCATGGAA CCAAEF001-4  (SEQ ID NO：4)CGNGNGAK ESNDIVKEVKEDTTITFWHA MNGVQEEALT KLTKDFMKEN PKIKVELQNQ SAYPDLQAKI NSTLTSPKDLPTITQAYPGW LWNAAQDEML VDLKPYMDDD TIGWKDAEPI REVLLDGAKI DGKQYGIPFNKSTEMLFYNA DLLKEYGVEV PKTLEELKEA SKTIYEKSNK EVVGAGFDSL NNYYAIGMKNKGVDFNKDLD LTSKDSQEVV DYYRDGIEAG YFRTAGSDKY LSGPFANKKV AMFVGSIAGAGFVQKDAEAG GYEYGVAPRP EKINLQQGTD IYMFDSATPE QRTAAFEFMK FLATPDSQLYWAQQTGYMPI LESVLHSDEY KNSKTTKVPA QLENAVKDLF AIPVEENADS AYNEMRTIMESIFASSNKDT RKLLKDATSQ FEQAWNQEF002-1  (SEQ ID NO：5)TAAATAGCGG AGGTAGTACA AATGAAATTT TGGAAAAAAG GCTTAACAGC GGCAGCGCTGTTAGCAGTGG CGGCAGTAAC TTTAACAGCA TGTGGTGGTT CAAGTGAAAA GAAAGCAACTGAAAAGAGTG AAGATGGCAA AACAAAATTA ACAGTAACTA CTTGGAATTA TGACACGACCCCAGAATTTG AGAAATTATT CAGAGCTTTT GAAGCGGAAA ATCCTGATAT CACTATTGAACCGGTGGACA TTGCTTCAGA TGATTATGAC ACAAAAGTAA CAACGATGCT TTCATCAGGAGATACGACGG ATATTTTAAC CATGAAAAAC TTACTTTCAT ATTCTAATTA CGCGCTACGCAATCAATTGG TGGATTTAAC CGATCACGTT AAAGATTTAG ATATCGAACC TGCCAAAGCAAGTTACGAGA TGTATGAAAT CGATGGTAAA ACCTATGCTC AGCCTTACCG TACAGATTTCTGGGTATTGT ATTACAATAA AAAAATGTTT GATGAAGCCG GAATTGCCTA TCCCGATAACTTAACTTGGG ATGAATATGA AGCGTTAGCG AAAAAATTAT CTAAACCAGA AGAACAAGTATATGGTGCCT ATCAACATAC TTGGCGCTCA ACCGTTCAAG CGATTGCTGC TGCTCAAAACAATGCCAATT TGATTGAACC AAAATACAAT TATATGGAAA CTTATTATGA TCGCGCATTGAGAATGCAAA AAGATCAATC ACAAATGGAT TTTGGAACAG CAAAATCAAC AAAAGTAACGTATCAATCAC AATTTGAAAA TTCAAAAGCG GCGATGATGT ACATGGGTAG CTGGTACATGGGGACTTTAT TAACAAACAT TGATGATGGC AAAACAAATG TCGAATGGGG GATTGCCGAAATACCACAAC AAGAAAAAGG CAAAGCAACT ACCTTTGGCT CACCGACAAG TTTTGCAATTAATAAA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EETKKVI AETSKGANVP AWETFGKKEF009-3  (SEQ ID NO：31)TTGTG CATCGGGGTC TGTGAAGGAT ACTAAGACAG AAACCGTTAA ACTAGGGGTTGTAGGAACAA AAAATGATGA ATGGGAATCG GTCAAAGACC GTTTGAAAAA GAAAAATATTGATTTACAAT TGGTAGAATT TACAGACTAT ACGCAACCAA ACGCAGCATT AGCAGAAAAAGAAATTGATT TAAATGCCTT TCAGCATCAA ATCTTTTTAG ACAATTACAA TAAAGAGCATGGAACGAAAT TAGTATCAAT TGGCAATACA GTCAATGCAC CATTGGGAAT TTACGCTAATAAATTGAAAG ATATCACGAA AATTAAAGAC GGCGGAGAAA TTGCTATTCC TAATGACCCAACGAATGGCG GGCGGGCGTT AATTTTATTA CAAACTGCAG GACTGATAAA AGTAGATCCTGCGAAACAGC AACTACCGAC TGTCAGTGAT ATTACTGAAA ATAAACGCCA ATTGAAAATAACTGAATTAG ATGCTACGCA AACAGCGCGC GCTTTACAAG ATGTCGATGC TTCAGTGATTAATAGCGGCA TGGCTGTCGA TGCTGGGTAT ACACCAGATA AAGATGCTAT TTTCTTAGAACCTGTAAACG AAAAAGCGAA ACCTTATGTG AACATTGTCG TGGCCCGAGA AGAAGATCAA表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列GAGAATAAAC TTTATCAAAA AGTTGTAGAA GAATATCAAC AAGAAGAAAC GAAAAAGGTCATTGCAGAAA CATCAAAAGG CGCCAATGTT CCAGCCTGGG AAACATTTGG TAAAAAAEF009-4 (SEQ ID NO：32)CASGSVKDT KTETVKLGVV GTKNDEWESV KDRLKKKNIDLQLVEFTDYT QPNAALAEKE IDLNAFQHQI FLDNYNKEHG TKLVSIGNTV NAPLGIYANKLKDITKIKDG GEIAIPNDPT NGGRALILLQ TAGLIKVDPA KQQLPTVSDI TENKRQLKITELDATQTARA LQDVDASVIN SGMAVDAGYT PDKDAIFLEP VNEKAKPYVN IVVAREEDQENKLYQKVVEE YQQEETKKVI AETSKGANVP AWETFGKKEF010-1 (SEQ ID NO：33)TGAAAGAATA AAATTGTACA GGAGGAAATA AGGAATGAAA AAATGGCAAA AAGGATTAGCCGTAGCTGGC GCACAGCTTT AGCTGTAGGA CTAAGCGCGT GCGGTAAATC TTCAAAAGATGCAGCGTCAA AAGGTGATGA TAGTACACCA ACGTTATTAA TGTATCGTGT TGGGGACAAACCAGATAATT ATGACCAATT AATCGATAAT GCGAATAAAA TTATCGAGAA AAAAATTGGGGCAAAATTAA AAATGGAATT TGTTGGTTGG GGCGATTGGG ACCAAAAAAT GTCAACAATCGTTGCTTCTG GTGAAAGCTA TGATATTTCA TTAGCACAAA ATTATGCAAC GAATGCACAAAAAGGCGCCT ATGCTGATTT AACTGATTTA GCACCTAAAT ATGCCAAAGA AGCCTATGATCAATTGCCAG ATAACTATAT TAAAGGAAAT ACGATTAATG GAAAACTGTA TGCGTTCCCAATTTTAGGTA ACTCTTACGG TCAACAAGTT TTAACTTTTA ATAAAGAATA TGTCGATAAATACAATTTAG ATATTAGTAA AGTCGATGGT AGTTATGAAA GTGCAACGGA AGTTCTAAAAGAATTCCNTA AAAANGANCC AAATATTGCT GCTTTTGCTA TCGGCCAAAC ATTCTTTGCAACAGGTAATT ATGACTTCCC TATTGGTAAC CAATATCCAT TTGCAGTAAA AACAACTGATACTGGCTCAC CAAAAATTAT TAACCAATAT GCCGACAAAG ACATGATTAA TAACTTAAAAGTCTTGCATC AATGGTATAA AGATGGCTTG ATTCCAACAG ATGCTGCTAC AAGTACAACACCATATGACT TAAATACCAA TACTTGGTTT ATGCGTCAAG AAACACAAGG ACCTATGGATTATGGTGATA CAATCTTAAC ACAAGCTGCT GGCAAACCAC TTGTTTCTCG TCCACTAACAGAACCATTAA AAACAACAGC TCAAGCGCAA ATGGCTAACT ATGTTGTTGC AAACACGTCTAAAAACAAAG AAAAATCTGT TGAATTGTTA GGTTTATTAA ACAGCAATCC AGAATTGTTAAACGGACTTG TTTATGGTGA AGAAGGCAAA CAATATGAAA AAGTTGGCGA TGATCGTGTGAAATTGTTGA AAGATTACAC ACCAACAACT CATTTGAGTG CTTGGAACAC AGGAAACAACTTAATCATTT GGCCAGAAGA ATCTGTCACT GAAGAAATGG TTAAAGAACG TGATAAGAGCATCGAAGAAG CAAAAGATTC ACCAATTCTT GGTTTTACTT TTGTAAATGA TAAAGTGAAAACTGAAATCA CTAACGTTGC TACAGTTATG AACCGTTACG CAGCAAGCTT AAATACAGGAACTGTTGATC CAGAAGAAAC ACTTCCAAAA TTAATGGATG ACCTAAAAAC AGCTGGCTGGGATAAAGTTC AAAAAGAAAT GCAAACACAA TTAGACGAAT ATATCCAATC TCAAAAATAAEF010-2 (SEQ ID NO：34)MAKRISR SWRTALAVGL SACGKSSKDA ASKGDDSTPT LLMYRVGDKPDNYDQLIDNA NKIIEKKIGA KLKMEFVGWG DWDQKMSTIV ASGESYDISL AQNYATNAQKGAYADLTDLA PKYAKEAYDQ LPDNYIKGNT INGKLYAFPI LGNSYGQQVL TFNKEYVDKYNLDISKVDGS YESATEVLKE FXKXXPNIAA FAIGQTFFAT GNYDFPIGNQ YPFAVKTTDTGSPKIINQYA DKDMINNLKV LHQWYKDGLI PTDAATSTTP YDLNTNTWFM RQETQGPMDYGDTILTQAAG KPLVSRPLTE PLKTTAQAQM ANYVVANTSK NKEKSVELLG LLNSNPELLNGLVYGEEGKQ YEKVGDDRVK LLKDYTPTTH LSAWNTGNNL IIWPEESVTE EMVKERDKSIEEAKDSPILG FTFVNDKVKT EITNVATVMN RYAASLNTGT VDPEETLPKL MDDLKTAGWDKVQKEMQTQL DEYIQSQKEF010-3  (SEQ ID NO：35)表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列GT GCGGTAAATC TTCAAAAGATGCAGCGTCAA AAGGTGATGA TAGTACACCA ACGTTATTAA TGTATCGTGT TGGGGACAAACCAGATAATT ATGACCAATT AATCGATAAT GCGAATAAAA TTATCGAGAA AAAAATTGGGGCAAAATTAA AAATGGAATT TGTTGGTTGG GGCGATTGGG ACCAAAAAAT GTCAACAATCGTTGCTTCTG GTGAAAGCTA TGATATTTCA TTAGCACAAA ATTATGCAAC GAATGCACAAAAAGGCGCCT ATGCTGATTT AACTGATTTA GCACCTAAAT ATGCCAAAGA AGCCTATGATCAATTGCCAG ATAACTATAT TAAAGGAAAT ACGATTAATG GAAAACTGTA TGCGTTCCCAATTTTAGGTA ACTCTTACGG TCAACAAGTT TTAACTTTTA ATAAAGAATA TGTCGATAAATACAATTTAG ATATTAGTAA AGTCGATGGT AGTTATGAAA GTGCAACGGA AGTTCTAAAAGAATTCCNTA AAAANGANCC AAATATTGCT GCTTTTGCTA TCGGCCAAAC ATTCTTTGCAACAGGTAATT ATGACTTCCC TATTGGTAAC CAATATCCAT TTGCAGTAAA AACAACTGATACTGGCTCAC CAAAAATTAT TAACCAATAT GCCGACAAAG ACATGATTAA TAACTTAAAAGTCTTGCATC AATGGTATAA AGATGGCTTG ATTCCAACAG ATGCTGCTAC AAGTACAACACCATATGACT TAAATACCAA TACTTGGTTT ATGCGTCAAG AAACACAAGG ACCTATGGATTATGGTGATA CAATCTTAAC ACAAGCTGCT GGCAAACCAC TTGTTTCTCG TCCACTAACAGAACCATTAA AAACAACAGC TCAAGCGCAA ATGGCTAACT ATGTTGTTGC AAACACGTCTAAAAACAAAG AAAAATCTGT TGAATTGTTA GGTTTATTAA ACAGCAATCC AGAATTGTTAAACGGACTTG TTTATGGTGA AGAAGGCAAA CAATATGAAA AAGTTGGCGA TGATCGTGTGAAATTGTTGA AAGATTACAC ACCAACAACT CATTTGAGTG CTTGGAACAC AGGAAACAACTTAATCATTT GGCCAGAAGA ATCTGTCACT GAAGAAATGG TTAAAGAACG TGATAAGAGCATCGAAGAAG CAAAAGATTC ACCAATTCTT GGTTTTACTT TTGTAAATGA TAAAGTGAAAACTGAAATCA CTAACGTTGC TACAGTTATG AACCGTTACG CAGCAAGCTT AAATACAGGAACTGTTGATC CAGAAGAAAC ACTTCCAAAA TTAATGGATG ACCTAAAAAC AGCTGGCTGGGATAAAGTTC AAAAAGAAAT GCAAACACAA TTAGACGAAT ATATCCAATC TCAAAAAEF010-4  (SEQ ID NO：36)CGKSSKDA ASKGDDSTPT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CCCAGTAAA TGATAATTTTGTTATTCGTG AAGATGTCTA TAATGCATTA GGCAAGCCAG ACGTTTCAAC ACCAGAAAATTTTGAAAAAG TCATGCAACA GATTAAAGAA AAATATCCTG AGATGACCCC AATGGGCTTC表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列ACCACAGTGG GCGATGGTGC AGGACCATTT TTAGACAAAT TACAAGACTT CTTAGGTGTTCCTTTAGAGG ATAAAAATGG TAAATACTAT GATCGAAATT TAGATAAAGA ATATTTAGAATGGTTAAAAA CATTTAATGA TGTTTACCGA GCAGGCAATA TTAGTGATGA TAGCTTCACAGATGATGGGG CAACGTTTGA TGAAAAAGTG AAACAAGGAA ATTATGCAAC CATGCTCGTTGCTGGAACCA GTGGTCAAGG TGGGAACTTC ACAGAATTTA TGAAAAAATC TGGCACACGTTATATAGCCA TTGATGGACC AAGTAGCACT TCTGGCCGAA AACCAACATT AAATCAAACCGGCATTTCAG GTTGGTTAAG TAATTACATT ACGAAAGATG CGAAAGATCC AGCAAAAGTCACTCAACTGT TCACATATTT AATTGATGAA CCGGGACAAA TTTTAACAAA ATATGGCGTTGAAGGAGTTA CTTATGCGTA CAATGATCAA GGAAAAATTG ATTATTTACC AGAAGTGAAAAAATTAGAAC AAACAGACAA TGATGCCTAC AACAAAAAAT ATGGCATTAG TCGTTTCCTATACTTTAACA ACGACCGTGT CAATAAACTA AAAGTACCAA TGGAAAGTGC TTTAACGCAAATGCAAGAAT GGGGCAAAGG AAAATTAGTC CCACATTTCG TAATTGAAAA TATTAATCCAGATGCAGGAA CGCCGGAAGC TCGTGCGAAT GAAGCGATTG AAACCAAACT AAATACAACCGTTATTTCAA TGATTCGTGC GAAAGATGAT AAAGCCTTTG ACAAATCTTT AGAAGACTACAAAGCATTCT TAAAATCAAA TAAATGGGAT GCAATTGAAA AAATAAAATC TGAGAAAATGGCGGAAAACA GAGACAAACT TAAGEF018-4  (SEQ ID NO：68)CSGGEKKASSDVSIK DRYELDEKTP AWKLDKKKEP TKIKWYINSD WTALPFGKDV TTAQIKKDLNVDIEFISGDD SKLNAMISSG DMPDIVTLTE KTGQAALKAD SWAYSLNDLA KKYDPYLMKVVNQDTFKWYA LEDGKTYGYP NYSNTKADYE SGNIPVNDNF VIREDVYNAL GKPDVSTPENFEKVMQQIKE KYPEMTPMGF TTVGDGAGPF LDKLQDFLGV PLEDKNGKYY DRNLDKEYLEWLKTFNDVYR AGNISDDSFT DDGATFDEKV KQGNYATMLV AGTSGQGGNF TEFMKKSGTRYIAIDGPSST SGRKPTLNQT GISGWLSNYI TKDAKDPAKV TQLFTYLIDE PGQILTKYGVEGVTYAYNDQ GKIDYLPEVK KLEQTDNDAY NKKYGISRFL YFNNDRVNKL KVPMESALTQMQEWGKGKLV PHFVIENINP DAGTPEARAN EAIETKLNTT VISMIRAKDD KAFDKSLEDYKAFLKSNKWD AIEKIKSEKM AENRDKLKEF019-1  (SEQ ID NO：69)TAAAGGAGTT ACACAATGAA ACTTTTAAAA AAGACGGTCC TAATTGGTAC AACCCTTCTTCTTGGTTCAT TCTTACTCGC AGCTTGTGGT AATACGAATA AAGAAGCCAA CAACGCTGACAAAACACATG AAGTAACAGA TACCTTAGGC AATAAAGTAA CCGTCCCCGC GAAACCCAAACGGATTATTG CGAGTTATTT AGAAGATTAT CTAGTTGCAT TAGGAGAAAA ACCAGTGGCACAATGGACAG TTGGACAAGG CAGCATTCAA GATTATTTAG CGAAAGAATT GAAAGATGTCCCCACTATTT CCTATGACTT GCCATATGAA GCGGTTCTAA AATTTGAACC TGACTTATTATTAATCAGTT CATCTGCTCT AGTTGAAGGC GGTAAATACA AAGAATACAG TAAAATTGCGCCAACTTATG TAGTCAAAAA CGGCGAAAAT GTCACCTGGC GTGATCAATT GGAAGATATTGCCACTGTTT TAGATAAAAA AGAACAAGCG AAAAAAGTGT TAGAAGATTA TGATACCTTAACCAAAGGCG TCCAAGAATA TCTTGGCAAA AAAGATGCTG GCAAATCTGC GGCAGTCTTATGGGTAACCA ACAACCAAGT CTTTATGGTT AGCGATAATC GCTCAAGCGG AACCGTGCTCTATCAGGACT TAGGCCTCCA AGTTCCAAAA TTAGTGGAAG AAATTTCTAA AAACGCTACTGCGGATTGGA ATCAAGTTTC TTTAGAAAAA TTAGCTGAGC TTGACGCAGA CCACATTTTCCTTGTAAACA GCGATGAATC AGCACCTCTT TTCCAAGAAG CAATTTGGAA GAACTTACCTGCTGTGAAAA ATAACCAAGT TCATACCTAT GATAAAAAAA GTAGTTGGTT ATACAACGGACCTATTGCGA ATACTCAAAT TGTTGAAGAT GTAAAAAAAG CGCTCTTAAA TTAAEF019-2 ((SEQ ID NO：70)MKLLKK TVLIGTTLLL GSFLLAACGN TNKEANNADK THEVTDTLGN KVTVPAKPKRIIASYLEDYL VALGEKPVAQ WTVGQGSIQD YLAKELKDVP TISYDLPYEA VLKFEPDLLL表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列ISSSALVEGG KYKEYSKIAP TYVVKNGENV TWRDQLEDIA TVLDKKEQAK KVLEDYDTLTKGVQEYLGKK DAGKSAAVLW VTNNQVFMVS DNRSSGTVLY QDLGLQVPKL VEEISKNATADWNQVSLEKL AELDADHIFL VNSDESAPLF QEAIWKNLPA VKNNQVHTYD KKSSWLYNGPIANTQIVEDV KKALLNEF019-3 (SEQ ID NO：71)TTGTGGT AATACGAATA AAGAAGCCAA CAACGCTGACAAAACACATG AAGTAACAGA TACCTTAGGC AATAAAGTAA CCGTCCCCGC GAAACCCAAACGGATTATTG CGAGTTATTT AGAAGATTAT CTAGTTGCAT TAGGAGAAAA ACCAGTGGCACAATGGACAG TTGGACAAGG CAGCATTCAA GATTATTTAG CGAAAGAATT GAAAGATGTCCCCACTATTT CCTATGACTT GCCATATGAA GCGGTTCTAA AATTTGAACC TGACTTATTATTAATCAGTT CATCTGCTCT AGTTGAAGGC GGTAAATACA AAGAATACAG TAAAATTGCGCCAACTTATG TAGTCAAAAA CGGCGAAAAT GTCACCTGGC GTGATCAATT GGAAGATATTGCCACTGTTT TAGATAAAAA AGAACAAGCG AAAAAAGTGT TAGAAGATTA TGATACCTTAACCAAAGGCG TCCAAGAATA TCTTGGCAAA AAAGATGCTG GCAAATCTGC GGCAGTCTTATGGGTAACCA ACAACCAAGT CTTTATGGTT AGCGATAATC GCTCAAGCGG AACCGTGCTCTATCAGGACT TAGGCCTCCA AGTTCCAAAA TTAGTGGAAG AAATTTCTAA AAACGCTACTGCGGATTGGA ATCAAGTTTC TTTAGAAAAA TTAGCTGAGC TTGACGCAGA CCACATTTTCCTTGTAAACA GCGATGAATC AGCACCTCTT TTCCAAGAAG CAATTTGGAA GAACTTACCTGCTGTGAAAA ATAACCAAGT TCATACCTAT GATAAAAAAA GTAGTTGGTT ATACAACGGACCTATTGCGA ATACTCAAAT TGTTGAAGAT GTAAAAAAAG CGCTCTTAAA TEF019-4  (SEQ ID NO：72)CGN TNKEANNADK THEVTDTLGN KVTVPAKPKRIIASYLEDYL VALGEKPVAQ WTVGQGSIQD YLAKELKDVP TISYDLPYEA VLKFEPDLLLISSSALVEGG KYKEYSKIAP TYVVKNGENV TWRDQLEDIA TVLDKKEQAK KVLEDYDTLTKGVQEYLGKK DAGKSAAVLW VTNNQVFMVS DNRSSGTVLY QDLGLQVPKL VEEISKNATADWNQVSLEKL AELDADHIFL VNSDESAPLF QEAIWKNLPA VKNNQVHTYD KKSSWLYNGPIANTQIVEDV KKALLNEF020-1 (SEQ ID NO：73)TGAGGAGATG AGAAAATGAA AAAGGTAGTT TCAATTTTGT TGATGGTTGT TGCAGTCTTCACATTAACTG CATGTAATGG TTCTAAATTA GATAAAACAG GTGAAGAATT TAAAAATTCTATAATGAAAG ATTCTTCATA TGGTGATGAA TATTCAGAAG ATGGTTTTAG TTTTTTAATATATAAAGATA AAGACACTAA TCGTTATTTG GCTGATGTTT GGGTTCCTGT TAAAGATGAAACTAGCGCAT TGGAGTATTT TTATTATTAT GATGAAGATA AGCGATTAGA TAGTACTAAAAGTAAAGTAA CCTTTGATGA TATGAAAGCT AGTGGAAACT ATGAAGTAGT GTATAAATCAGGGAAATTTA AATAAEF020-2 (SEQ ID NO：74)MKKVVS ILLMVVAVFT LTACNGSKLD KTGEEFKNSI MKDSSYGDEY SEDGFSFLIYKDKDT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AGTAGCCGC TATTTGGATT ATCAAGAGAT GATTAATGTTGTTCCAGAAA AACTGCCCAT TTTATTAATT GGTGGTCAAT TAAGTCCAAC AGATTTAAGTGATGGAACGG TGCCGTTATC TAGTGCCTTA GCAGTCAACG CCTTGCTAAG ACAGCGAGGAACTCAAGTCA CTAGCCAGAT TATTAAAGGA GAAAATGCAC AACATAGTCA ATTACATGAAAATCCTGAAG TAGATCAATT GCTAATCGAA TTTCTATGGC CGAGTAAAAA ATAGEF050-2  (SEQ ID NO：186)MNMPKN IXYFSLLMGL VLLLSACQIG ATTKDDNQAATKEATVELNR TTTPTLFFHG YAGTKNSFGS LLHRLEKQGA TTQELVLLVK PDGTVVKERGALSGKATNPS VQVLFEDNKN NEWNQTEWIK NTLLYLQKNY QVNKANIVGH SMGGVSGLRYLGTYGQDTSL PKIEKFVSIG APFNDFIDTS QQQTIETELE NGPTEKSSRY LDYQEMINVVPEKLPILLIG GQLSPTDLSD GTVPLSSALA VNALLRQRGT QVTSQIIKGE NAQHSQLHENPEVDQLLIEF LWPSKKEF050-3 (SEQ ID NO：187)表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列TTGCCAAATT GGGGCAACTA CGAAGGATGA CAACCAAGCCGCCACAAAAG AAGCAACTGT TGAGTTAAAC CGCACAACAA CACCAACGCT TTTTTTTCATGGTTACGCAG GAACTAAAAA TTCGTTTGGC TCGTTACTGC ATCGCTTGGA GAAACAAGGTGCCACAACTC AAGAATTAGT GCTACTCGTT AAACCTGATG GGACCGTGGT TAAAGAGCGAGGAGCTTTAA GTGGCAAAGC GACGAATCCC AGTGTTCAAG TTCTATTTGA AGATAATAAAAACAATGAAT GGAATCAAAC AGAATGGATA AAAAACACAT TACTCTATTT ACAAAAAAATTATCAAGTGA ACAAAGCCAA TATTGTCGGG CACTCTATGG GTGGTGTTAG TGGTTTACGTTATTTAGGAA CCTATGGGCA AGATACATCG TTACCTAAAA TTGAAAAATT CGTCAGCATTGGAGCACCTT TCAATGATTT TATTGATACG AGTCAACAGC AAACCATCGA AACGGAACTAGAAAACGGCC CCACAGAAAA AAGTAGCCGC TATTTGGATT ATCAAGAGAT GATTAATGTTGTTCCAGAAA AACTGCCCAT TTTATTAATT GGTGGTCAAT TAAGTCCAAC AGATTTAAGTGATGGAACGG TGCCGTTATC TAGTGCCTTA GCAGTCAACG CCTTGCTAAG ACAGCGAGGAACTCAAGTCA CTAGCCAGAT TATTAAAGGA GAAAATGCAC AACATAGTCA ATTACATGAAAATCCTGAAG TAGATCAATT GCTAATCGAA TTTCTATGGC CGAGTAAAAA ATAGEF050-4  (SEQ ID NO：188)CQIG ATTKDDNQAATKEATVELNR TTTPTLFFHG YAGTKNSFGS LLHRLEKQGA TTQELVLLVK PDGTVVKERGALSGKATNPS VQVLFEDNKN NEWNQTEWIK NTLLYLQKNY QVNKANIVGH SMGGVSGLRYLGTYGQDTSL PKIEKFVSIG APFNDFIDTS QQQTIETELE NGPTEKSSRY LDYQEMINVVPEKLPILLIG GQLSPTDLSD GTVPLSSALA VNALLRQRGT QVTSQIIKGE NAQHSQLHENPEVDQLLIEF LWPSKKEF051-1  (SEQ ID NO：189)TAAAAGAAAA GAGGCGTTCA AATGTCTAAA CAAAAAAAGG CTGTGTTCCT GCTTAGTTTATTCAGTTTAG TTGCCCTAAT TGCTGCATGT ACAAATCAGC CGCAAAAAGA AACAGTTTCAACAAAAAAAG AAGAAATAAC CCTTGCGGCA GCAGCTAGCT TAGAATCAGT CATGGAGAAGAAAATTATTC CAGCCTTTGA AAAAGAGCAT CCAGATATTC AGGTAACTGG AACCTATGATAGTTCTGGAA AATTACAGAT GCAAATTGAA AAAGGCCTAA AAGCCGATGT ATTTTTCTCAGCTTCGACAA AACAAATGAA TGCATTGGTT GCAGAAAAAC TAATTAATAA AAAAAGTGTCGTTCCTTTAT TGGAAAACCA GCTCGTTCTT ATTGTGCCTA ACCAAGATCA AGCAAAGTGGCATGATTTTT CTGATTTAAA AAAAGCCCAA ATGATAGCAA TTGGTGATCC TGCAAGTGTTCCAGCTGGTC AATATGCCGA AGAAGGCTTA AAAGCTTTAG GCGCTTGGTC TTATGTAGAAAAACACGCAA GCTTTGGCAC GAATGTAACA GAAGTCCTTG AATGGGTAGC TAATGCAAGTGCAGAAGCTG GCTTAGTTTA TGCGACAGAT GCAGCAACCA ATTCAAAAGT AGCGATTGTTGCGGCCATGC CTGAAGCTGT TTTGAAAAAG CCAATTATCT ATCCAGTTGG TAAAGTTGCCGCCTCTAAGA AACAAAAATC AGCAGATGCT TTTTTAAATT TTTTACAGAG TCAACAATGCAGAAAATATT TTGANAATAT TGGCTTTAAG TTAACAAAGT AGEF051-2  (SEQ ID NO：190)MSKQ KKAVFLLSLF SLVALIAACT NQPQKETVST KKEEITLAAA ASLESVMEKKIIPAFEKEHP DIQVTGTYDS SGKLQMQIEK GLKADVFFSA STKQMNALVA EKLINKKSVVPLLENQLVLI VPNQDQAKWH DFSDLKKAQM IAIGDPASVP AGQYAEEGLK ALGAWSYVEKHASFGTNVTE VLEWVANASA EAGLVYATDA ATNSKVAIVA AMPEAVLKKP IIYPVGKVAASKKQKSADAF LNFLQSQQCR KYFXNIGFKL TKEF051-3  (SEQ ID NO：191)ATGT ACAAATCAGC CGCAAAAAGA AACAGTTTCAACAAAAAAAG AAGAAATAAC CCTTGCGGCA GCAGCTAGCT TAGAATCAGT CATGGAGAAG表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列AAAATTATTC CAGCCTTTGA AAAAGAGCAT CCAGATATTC AGGTAACTGG AACCTATGATAGTTCTGGAA AATTACAGAT GCAAATTGAA AAAGGCCTAA AAGCCGATGT ATTTTTCTCAGCTTCGACAA AACAAATGAA TGCATTGGTT GCAGAAAAAC TAATTAATAA AAAAAGTGTCGTTCCTTTAT TGGAAAACCA GCTCGTTCTT ATTGTGCCTA ACCAAGATCA AGCAAAGTGGCATGATTTTT CTGATTTAAA AAAAGCCCAA ATGATAGCAA TTGGTGATCC TGCAAGTGTTCCAGCTGGTC AATATGCCGA AGAAGGCTTA AAAGCTTTAG GCGCTTGGTC TTATGTAGAAAAACACGCAA GCTTTGGCAC GAATGTAACA GAAGTCCTTG AATGGGTAGC TAATGCAAGTGCAGAAGCTG GCTTAGTTTA TGCGACAGAT GCAGCAACCA ATTCAAAAGT AGCGATTGTTGCGGCCATGC CTGAAGCTGT TTTGAAAAAG CCAATTATCT ATCCAGTTGG TAAAGTTGCCGCCTCTAAGA AACAAAAATC AGCAGATGCT TTTTTAAATT TTTTACAGAG TCAACAATGCAGAAAATATT TTGANAATAT TGGCTTTAAG TTAACAAAGT AGEF051-4  (SEQ ID NO：192)CT NQPQKETVST KKEEITLAAA ASLESVMEKKIIPAFEKEHP DIQVTGTYDS SGKLQMQIEK GLKADVFFSA STKQMNALVA EKLINKKSVVPLLENQLVLI VPNQDQAKWH DFSDLKKAQM IAIGDPASVP AGQYAEEGLK ALGAWSYVEKHASFGTNVTE VLEWVANASA EAGLVYATDA ATNSKVAIVA AMPEAVLKKP IIYPVGKVAASKKQKSADAF LNFLQSQQCR KYFXNIGFKL TKEF052-1  (SEQ ID NO：193)TAAAGTAGGA GAAGCGCAAG CGAAAAAAGT GAATCAATCG GCAGCGTATC AAGTAGTGATCCCACAATGG GTACCATGGG TAGCATTATC TTTGACAGTA GCACTTGCTG GATTGATTGCTTACTTAGTT CGTCGTGGAG AGAAGTGGAA AAACGAAGGG GAAGTGACAT AATGAGANGANGAAATCTTC NGTTTTTATT ATTGTTGGTT CTATTAATTT ATATTCCTCA AACAACTTATGCAGAAAATA GGGAGACCAC AGAAGTCGGA ATCGGGTTTA CAAAAACTTC AGACATACCATCAAAAAAAA ATCCAGTTGT GAATGTATTG CCGCAAACAA CCATTCAATC GCTATCAATCGTTCGTAGCA GAACGCAAAT AAAAAGATTA CCTAAAACTG GTGACAATCG AATAACTTGGCTAAGCTGGT TTGGCATATT GTTTTTAATA AGTAGTTTTT GGCTGTTTCT ATTTAGACAATTATGTAGAA AAGGAGAATA AEF052-2  (SEQ ID NO：194)MRXXNLXFLLLLVL LIYIPQTTYA ENRETTEVGI GFTKTSDIPS KKNPVVNVLP QTTIQSLSIVRSRTQIKRLP KTGDNRITWL SWFGILFLIS SFWLFLFRQL CRKGEEF052-3  (SEQ ID NO：195)AGAAAATA GGGAGACCAC AGAAGTCGGA ATCGGGTTTA CAAAAACTTC AGACATACCATCAAAAAAAA ATCCAGTTGT GAATGTATTG CCGCAAACAA CCATTCAATC GCTATCAATCGTTCGTAGCA GAACGCAAAT AAAAAGATEF052-4  (SEQ ID NO：196)ENRETTEVGI GFTKTSDIPS KKNPVVNVLP QTTIQSLSIVRSRTQIKREF053-1  (SEQ ID NO：197)TAGTCATGGC ACCATAACAA GGAGGAGAGA AGTGAGATGA AAAAATACCT TTTGCTTAGT表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列TGTTTTTTAG GTCTTTTCAG CTTCTGTCAT TCAGACACTG CGTTTGGAGA AGCAGCTTATGAAAATAGTG GTGTTGTCTC CTTTTATGGA ACGTATGAAT ATCCCACAGA AGAGTCGACAACAGCGACTA GTAATTCTTC CACAACGACC GAACCCACCA AGCCAGCTGA CGGAGGCGCTTCATCCGTCC TTTCTTCTGG CGTATATGGA TCGCGACAAG GAAGATTACC AGCGACAGGTACCACCAATC AAGCACCATT TATTTATTTG GGAATCAGCC TTATCACTAT AGGCATATTATTTATTAAAA GGAGAAGAGA AGATGAAAAA AACAGTATTA GCAGTAGTAG GGATTGTAGGATTTAGEF053-2  (SEQ ID NO：198)MKKYLLLSC FLGLFSFCHS DTAFGEAAYE NSGVVSFYGT YEYPTEESTTATSNSSTTTE PTKPADGGAS SVLSSGVYGS RQGRLPATGT TNQAPFIYLG ISLITIGILFIKRRREDEKN SISSSRDCRIEF053-3  (SEQ ID NO：199)TTTGGAGA AGCAGCTTATGAAAATAGTG GTGTTGTCTC CTTTTATGGA ACGTATGAAT ATCCCACAGA AGAGTCGACAACAGCGACTA GTAATTCTTC CACAACGACC GAACCCACCA AGCCAGCTGA CGGAGGCGCTTCATCCGTCC TTTCTTCTGG CGTATATGGA TCGCGACAAG GAAGAEF053-4  (SEQ ID NO：200)FGEAAYE NSGVVSFYGT YEYPTEESTTATSNSSTTTE PTKPADGGAS SVLSSGVYGS RQGREF054-1  (SEQ ID NO：201)TAAATAAAAA ATTATTTGGA GGAAATTACA ATGAAAAAAA TTATTTTATC AAGCTTGTTTAGTGCAGTAC TAGTATTCGG TGGCGGAAGT ATAACAGCAT TCGCTGACGA TTTAGGACCAACAGATCCAG CAACTCCACC AATTACCGAA CCAACTGATT CTAGTGAACC TACGAATCCTACTGAGCCGG TGGATCCTGC AGAACCGCCA GTAATACCAA CTGATCCAAC AGAACCAAGCAAGCCAACCG AGCCTACAAC ACCGAGTGAG CCAGAAAAGC CAACAGAACC AACAACGCCAATTGATCCTG GAACGCCGGT TGAACCGACT GAACCAAGCG AGCCAACAGA ACCTAGTCAACCAACCGAGC CTACAACACC AAGCGAACCA GAAAAACCTG TTACTCCAGA ACAACCGAAAGAACCAACTC AACCAGTGAT TCCAGAAAAA CCAGCAGAAC CAGAAACACC AAAAACTCCTGAACAGCCCA CTAAACCAAT AGACGTAGTC GTTACACCTA GTGGAGAAAT TGATAAAACGAATCAATCGG CAGGAACACA ACCAAGTATT CCTATTGAAA CAAGCAACTT AGCGGAGGTAACACATGTAC CAAGTGAAAC TACTCCAATT ACAACAGAAG CTGGGGAAGA AATTGTAGCAGTAGATAAAG GTGTTCCGTT AACCAAAACA CCAGAAGGAT TAAAACCAAT TAGCAGCTCGTATAAGGTTT TACCTAGCGG AAACGTTGAG GTAAAAGCAA GTGATGGAAA AATGAAAGTATTGCCACATA CAGGAGAGAA ATTCACACTC CTTTTCTCTG TATTGGGAAG CTTCTTTGTATTAATTTCAG GATTCTTTTT CTTTAAAAAG AATAAGAAAA AAGCTTAAEF054-2  (SEQ ID NO：202)M KKIILSSLFS AVLVFGGGSI TAFADDLGPT DPATPPITEP TDSSEPTNPTEPVDPAEPPV IPTDPTEPSK PTEPTTPSEP EKPTEPTTPI DPGTPVEPTE PSEPTEPSQPTEPTTPSEPE KPVTPEQPKE PTQPVIPEKP AEPETPKTPE QPTKPIDVVV TPSGEIDKTNQSAGTQPSIP IETSNLAEVT HVPSETTPIT TEAGEEIVAV DKGVPLTKTP EGLKPISSSYKVLPSGNVEV KASDGKMKVL PHTGEKFTLL FSVLGSFFVL ISGFFFFKKN KKKAEF054-3  (SEQ ID NO：203)表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列AACAGATCCAG CAACTCCACC AATTACCGAA CCAACTGATT CTAGTGAACC TACGAATCCTACTGAGCCGG TGGATCCTGC AGAACCGCCA GTAATACCAA CTGATCCAAC AGAACCAAGCAAGCCAACCG AGCCTACAAC ACCGAGTGAG CCAGAAAAGC CAACAGAACC AACAACGCCAATTGATCCTG GAACGCCGGT TGAACCGACT GAACCAAGCG AGCCAACAGA ACCTAGTCAACCAACCGAGC CTACAACACC AAGCGAACCA GAAAAACCTG TTACTCCAGA ACAACCGAAAGAACCAACTC AACCAGTGAT TCCAGAAAAA CCAGCAGAAC CAGAAACACC AAAAACTCCTGAACAGCCCA CTAAACCAAT AGACGTAGTC GTTACACCTA GTGGAGAAAT TGATAAAACGAATCAATCGG CAGGAACACA ACCAAGTATT CCTATTGAAA CAAGCAACTT AGCGGAGGTAACACATGTAC CAAGTGAAAC TACTCCAATT ACAACAGAAG CTGGGGAAGA AATTGTAGCAGTAGATAAAG GTGTTCCGTT AACCAAAACA CCAGAAGGAT TAAAACCAAT TAGCAGCTCGTATAAGGTTT TACCTAGCGG AAACGTTGAG GTAAAAGCAA GTGATGGAAA AATGAAAGTATEF054-4  (SEQ ID NO：204)DDLGPT DPATPPITEP TDSSEPTNPTEPVDPAEPPV IPTDPTEPSK PTEPTTPSEP EKPTEPTTPI DPGTPVEPTE PSEPTEPSQPTEPTTPSEPE KPVTPEQPKE PTQPVIPEKP AEPETPKTPE QPTKPIDVVV TPSGEIDKTNQSAGTQPSIP IETSNLAEVT HVPSETTPIT TEAGEEIVAV DKGVPLTKTP EGLKPISSSYKVLPSGNVEV KASDGKMKVEF055-1  (SEQ ID NO：205)TAACAAAAGG TTGTTTTGTC TTTCTTGTGT AAAAGGGCAA GAAAGGCTAG CGAGTTAAAAGGAGGTTTTT CAATGAAAAA AAAGCGTTAT TTAATGATTG TGTGTCTACT ATCTTCTCCTAGTTTTTTTA TAAATGTTGA AGCGTCTGAT GGTGGTTCTA GTTCGGTGGG GATTGAATTTTACCAAAATC CGAGAACACC CGCTCCTAAA GATCCCCCAC CGAAAACAGA TGCGCCAGCTGCTGATCCCA AGGAACCAGC TGGTCCTCCG CAAGGAGATC AACGAAGTGG TGGTTCGACACAGACCACCA CAACTGGCTC AACGCTCCCT CGTACAGGGA GCAAGAGTCA GGCAAATTTGAGCATTCTCN GNTTCGCCTT AATCGGTTTG GCGGGAATCG TACATAGAAA GAAGGGACGACATGAAGCAA ACTAAEF055-2  (SEQ ID NO：206)MKKKRYL MIVCLLSSPS FFINVEASDG GSSSVGIEFYQNPRTPAPKD PPPKTDAPAA DPKEPAGPPQ GDQRSGGSTQ TTTTGSTLPR TGSKSQANLSILXFALIGLA GIVHRKKGRH EANEF055-3  (SEQ ID NO：207)AGCGTCTGAT GGTGGTTCTA GTTCGGTGGG GATTGAATTTTACCAAAATC CGAGAACACC CGCTCCTAAA GATCCCCCAC CGAAAACAGA TGCGCCAGCTGCTGATCCCA AGGAACCAGC TGGTCCTCCG CAAGGAGATC AACGAAGTGG TGGTTCGACACAGACCACCA CAACTGGCTC AACGEF055-4 (SEQ ID NO：208)SDG GSSSVGIEFYQNPRTPAPKD PPPKTDAPAA DPKEPAGPPQ GDQRSGGSTQ TTTTGST表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列EF056-1 (SEQ ID NO：209)TAAATGAAAA AAAAGCGTTA TTTAATAATT GCGTGTTTAC TATTTTCCCC TAGTTTTTTTATAAATGTTG AAGCATCTGA GGGTGGTTCT AGTTCGGTGG GAATTGAATT TTACCAAAATCCGGCAACAC CCGCTCCTAA AGATGCCCCA CCGAAAACAG ATGAGCCAGC TGCGGATCCCAAGGAACCAG CTGGTCCTCT GCAAGGAGAT CAACGAAGTG GTGGTTCGAC ACAGACCACCACAGCTGGCT CGCAGCTCCC TCGTACAGGA AGCAAGAGTC AGGCAAACCT GAGCATTCTTGGTCTTGTCT TGATTGGTCT TGTCGGAATG GTCCAGAGAA AGAAGGGACG ACATGAAGCAAACTAAEF056-2  (SEQ ID NO：210)MKKKRYLIIA CLLFSPSFFI NVEASEGGSS SVGIEFYQNP ATPAPKDAPP KTDEPAADPKEPAGPLQGDQ RSGGSTQTTT AGSQLPRTGS KSQANLSILG LVLIGLVGMV QRKKGRHEANEF056-3  (SEQ ID NO：211)ATCTGA GGGTGGTTCT AGTTCGGTGG GAATTGAATT TTACCAAAATCCGGCAACAC CCGCTCCTAA AGATGCCCCA CCGAAAACAG ATGAGCCAGC TGCGGATCCCAAGGAACCAG CTGGTCCTCT GCAAGGAGAT CAACGAAGTG GTGGTTCGAC ACAGACCACCACAGCTGGCT CGCAGEF056-4  (SEQ ID NO：212)SEGGSS SVGIEFYQNP ATPAPKDAPP KTDEPAADPKEPAGPLQGDQ RSGGSTQTTT AGSQEF057-1  (SEQ ID NO：213)TAATGTTTAT TGGCTGGGCC AGTCAATGTT GAAAATGGGG AAGGAGGAAT TCAGATGAAAATCATAAAAA GGTTTAGTTT GGTATGTTTA GGGCTATTGA TCATTGGGTT GCNAACAAAAAGCGNTATGG CTGAAGAAAA TAATTATGAA TCAAATGGTC AAGCGAGCTT CTATGGTACCTACGTTTATG AGAATGAAAA AGAGTCAAAT GACGTAGCGT ATACCCAACA ATCAGAAGAACAGGGAAGAA ACAATTTAGC TGCTTCTGGA CAAGCAGTTT TACCTAAAAC AGGCGAGTCTGAAAATCCGC TGTATTCCTT GATAGGAGTT AGTTTGTTGG GGATAGTCAT TTATTTAATTAATAAAATGA AACGAGAGAA GGAGTTTATT TAAEF057-2  (SEQ ID NO：214)MKI IKRFSLVCLG LLIIGLXTKS XMAEENNYES NGQASFYGTYVYENEKESND VAYTQQSEEQ GRNNLAASGQ AVLPKTGESE NPLYSLIGVS LLGIVIYLINKMKREKEFIEF057-3 (SEQ ID NO：215)AAA TAATTATGAA TCAAATGGTC AAGCGAGCTT CTATGGTACCTACGTTTATG AGAATGAAAA AGAGTCAAAT GACGTAGCGT ATACCCAACA ATCAGAAGAACAGGGAAGAA ACAATTTAGC TGCTTCTGGA CAAGCAGTTTEF057-4  (SEQ ID NO：216)EENNYES NGQASFYGTYVYENEKESND VAYTQQSEEQ GRNNLAASGQ AV表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列EF058-1  (SEQ ID NO：217)TGAAGAACGT TCTATTTGGT TGACGATTGC AGGCCTGCTA ATCATTGGGA TGGTAGTCATTTGGCTATTT TATCAAAAAC AAAAAAGAGG AGAGAGAAAA TGAAGCAATT AAAAAAAGTTTGGTACACCG TTAGTACCTT GTTACTAATT TTGCCACTTT TCACAAGTGT ATTAGGGACAACAACTGCAT TTGCAGAAGA AAATGGGGAG AGCGCACAGC TCGTGATTCA CAAAAAGAAAATGACGGATT TACCAGATCC GCTTATTCAA AATAGCGGGA AAGAAATGAG CGAGTTTGATAAATATCAAG GACTGGCAGA TGTGACGTTT AGTATTTATA ACGTGACGAA CGAATTTTACGAGCAACGAG CGGCAGGCGC AAGCGTTGAT GCAGCTAAAC AAGCTGTCCA AAGTTTAACTCCTGGGAAAC CTGTTGCTCA AGGAACCACC GATGCAAATG GGAATGTCAC TGTTCAGTTACCTAAAAAAC AAAATGGTAA AGATGCAGTG TATACCATTA AAGAAGAACC AAAAGAGGGTGTAGTTGCTG CTACGAATAT GGTGGTGGCG TTCCCAGTTT ACGAAATGAT CAAGCAAACAGATGGTTCCT ATAAATATGG AACAGAAGAA TTAGCGGTTG TTCATATTTA TCCTAAAAATGTGGTAGCCA ATGATGGTAG TTTACATGTG AAAAAAGTAG GAACTGCTGA AAATGAAGGATTAAATGGCG CAGAATTTGT TATTTCTAAA AGCGAAGGCT CACCAGGCAC AGTAAAATATATCCAAGGAG TCAAAGATGG ATTATATACA TGGACAACGG ATAAAGAACA AGCAAAACGCTTTATTACTG GGAAAAGTTA TGAAATTGGC GAAAATGATT TCACAGAAGC AGAGAATGGAACGGGAGAAT TAACAGTTAA AAATCTTGAG GTTGGTTCGT ATATTTTAGA AGAAGTAAAAGCTCCAAATA ATGCAGAATT AATTGAAAAT CAAACAAAAA CACCATTTAC AATTGAAGCAAACAATCAAA CACCTGTTGA AAAAACAGTC AAAAATGATA CCTCTAAAGT TGATAAAACAACACCAAGCT TAGATGGTAA AGATGTGGCA ATTGGCGAAA AAATTAAATA TCAAATTTCTGTAAATATTC CATTGGGGAT TGCAGACAAA GAAGGCGACG CTAATAAATA CGTCAAATTCAATTTAGTTG ATAAACATGA TGCAGCCTTA ACTTTTGATA ACGTGACTTC TGGAGAGTATGCTTATGCGT TATATGATGG GGATACAGTG ATTGCTCCTG AAAATTATCA AGTGACTGAACAAGCAAATG GCTTCACTGT CGCCGTTAAT CCAGCGTATA TTCCTACGCT AACACCAGGCGGCACACTAA AATTCGTTTA CTTTATGCAT TTAAATGAAA AAGCAGATCC TACGAAAGGCTTTAAAAATG AGGCGAATGT TGATAACGGT CATACCGACG ACCAAACACC ACCAACTGTTGAAGTTGTGA CAGGTGGGAA ACGTTTCATT AAAGTCGATG GCGATGTGAC AGCGACACAAGCCTTGGCGG GAGCTTCCTT TGTCGTCCGT GATCAAAACA GCGACACAGC AAATTATTTGAAAATCGATG AAACAACGAA AGCAGCAACT TGGGTGAAAA CAAAAGCTGA AGCAACTACTTTTACAACAA CGGCTGATGG ATTAGTTGAT ATCACAGGGC TTAAATACGG TACCTATTATTTAGAAGAAA CTGTAGCTCC TGATGATTAT GTCTTGTTAA CAAATCGGAT TGAATTTGTGGTCAATGAAC AATCATATGG CACAACAGAA AACCTAGTTT CACCAGAAAA AGTACCAAACAAACACAAAG GTACCTTACC TTCAACAGGT GGCAAAGGAA TCTACGTTTA CTTAGGAAGTGGCGCAGTCT TGCTACTTAT TGCAGGAGTC TACTTTGCTA GACGTAGAAA AGAAAATGCTTAAEF058-2  (SEQ ID NO：218)MKQLKKVW YTVSTLLLIL PLFTSVLGTTTAFAEENGES AQLVIHKKKM TDLPDPLIQN SGKEMSEFDK YQGLADVTFS IYNVTNEFYEQRAAGASVDA AKQAVQSLTP GKPVAQGTTD ANGNVTVQLP KKQNGKDAVY TIKEEPKEGVVAATNMVVAF PVYEMIKQTD GSYKYGTEEL AVVHIYPKNV VANDGSLHVK KVGTAENEGLNGAEFVISKS EGSPGTVKYI QGVKDGLYTW TTDKEQAKRF ITGKSYEIGE NDFTEAENGTGELTVKNLEV GSYILEEVKA PNNAELIENQ TKTPFTIEAN NQTPVEKTVK NDTSKVDKTTPSLDGKDVAI GEKIKYQISV NIPLGIADKE GDANKYVKFN LVDKHDAALT FDNVTSGEYAYALYDGDTVI APENYQVTEQ ANGFTVAVNP AYIPTLTPGG TLKFVYFMHL NEKADPTKGFKNEANVDNGH TDDQTPPTVE VVTGGKRFIK VDGDVTATQA LAGASFVVRD QNSDTANYLKIDETTKAATW VKTKAEATTF TTTADGLVDI TGLKYGTYYL EETVAPDDYV LLTNRIEFVVNEQSYGTTEN LVSPEKVPNK HKGTLPSTGG KGIYVYLGSG AVLLLIAGVY FARRRKENAEF058-3  (SEQ ID NO：219)表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列AGAAGA AAATGGGGAG AGCGCACAGC TCGTGATTCA CAAAAAGAAAATGACGGATT TACCAGATCC GCTTATTCAA AATAGCGGGA AAGAAATGAG CGAGTTTGATAAATATCAAG GACTGGCAGA TGTGACGTTT AGTATTTATA ACGTGACGAA CGAATTTTACGAGCAACGAG CGGCAGGCGC AAGCGTTGAT GCAGCTAAAC AAGCTGTCCA AAGTTTAACTCCTGGGAAAC CTGTTGCTCA AGGAACCACC GATGCAAATG GGAATGTCAC TGTTCAGTTACCTAAAAAAC AAAATGGTAA AGATGCAGTG TATACCATTA AAGAAGAACC AAAAGAGGGTGTAGTTGCTG CTACGAATAT GGTGGTGGCG TTCCCAGTTT ACGAAATGAT CAAGCAAACAGATGGTTCCT ATAAATATGG AACAGAAGAA TTAGCGGTTG TTCATATTTA TCCTAAAAATGTGGTAGCCA ATGATGGTAG TTTACATGTG AAAAAAGTAG GAACTGCTGA AAATGAAGGATTAAATGGCG CAGAATTTGT TATTTCTAAA AGCGAAGGCT CACCAGGCAC AGTAAAATATATCCAAGGAG TCAAAGATGG ATTATATACA TGGACAACGG ATAAAGAACA AGCAAAACGCTTTATTACTG GGAAAAGTTA TGAAATTGGC GAAAATGATT TCACAGAAGC AGAGAATGGAACGGGAGAAT TAACAGTTAA AAATCTTGAG GTTGGTTCGT ATATTTTAGA AGAAGT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AAAA GAAAGTCAGC CAGCTACAGC AACTACACCA表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列GTCGACTTAG CCACACCAAC CATTGATTCT ATTACCGGAA ATTCTAGTAA AGGTTACGAAATCACTGGAA CGGCGGAGCC AAAAACCACT ATTGATGTCC GTGACGCAGA CGGAACCATCATTGCTGCTA CAACTGCTAA CGAAACCGGC CAATATACGG TGACTCTACC AGCTGGCGTAGTGACACCAG GAGAAACGAT TACGATTATT AGCAAAGATG GCGCAGGTAA TGAAAGTCAACCAGCTACAG CCGTTATTCC AGCGGATGTT GTTTTAGCGG CGCCAACTAT TACGAAGGTTGAAGGAAACA AAGCCAATGG CTATACAGTC ACTGGAACTG CTGATCCAAA TGTCACGGTTCAATTTTACA ATAGCAGTGA ACAATTATTG GCAAGTGGCA ATACAACTAC TGGAGGTACCTTCTCCGTTC ATATTGCAGC AGGGTTAGCA ACAGAAAAAG AAACGTTAAC CGCACTAACCACAGATACAC AAGGAAATGT GAGTCCTAAA ACCACATTTA TGACGCCAGC CGATATTACGGGAGAACCAG AGATTAAAAT TGCGGCACCA ACTGTTTCTT CAGTTTTAGG AACGTCTAAAGCCGGCTACC TCATCAAAGG AACAGCTGAA CCAAACCGAA TCATTCAAAT TAGTAACCGACTATTAAGAA GTGTGATTGC TGTAGGTGCC ACCGATGCTG AAGGCAACTT CGCTATCCAATTAACAGCGG GACAAGCGAC TGCTCAACAA AGTTTACTTG CGACAGCTAC CGATGGCGCAGGACATTACA GTACGGCTAC AACCTTCATG ACGCCAGCCG ACCCAACGAA TCCTGGAGGAGGCAATGGTA ACACTGGCGG AAATAACGGC AATACAGGCG GCAATACAGG AAACAATGGCGCAACTGGCG GGAATAATGG GAATGGTTCA AACACAGGTT CAAATCCAAA TGGAGGTTCTGGTTTAGGCA CAACAGGTTC TGGCTTAGGT TCACTAGGCA ATGGCCTCGG TACAAATGGTAGTGGCTACC ACCCTAAACT AAGTACCATC AGTTATGGCA CTGGAAATCA CGGGAAAACAGGCTACTTAC CTAGCACAGG TGAAAAAGAG TCTTCAGCCG TGACAACAAG TTTGTTTGGCGCCTTTGTCG CACTCCTTGC GAGCATGGGA ATCATCAAAC GCAAACGTAA AAACTAGEF069-2  (SEQ ID NO：262)M KKKIVEDFNR KSQHKKWTKR KMLNLAISSG LLFTSLAIPVSIAVTSGTIS ASAAVLDIEL LSNVTSNNDS GTSTSNRWTA ANQNQPVNFT VSGGALADASAVFSGQKQAV LVVPPELRGN VAAAGSAAIN TNVTIDLSKV TFLTAVLNAA NDLTNVITQITSGALGNLTG VDIDLTEVNR QLELVNNIEN LGAASFTAPE TLAADGSYIS APISDGLGLVLAQNVSNILQ DLNAAVQALE AKGTSIPSNL VAAAINAALL PVKGTVNVAV SGALPLLAVGGSGVNELVDA SLLGTTTVTL PTTVSTPQNL SNNLDARFVG TVVQTDLLDV NLLATADGVSNIYFAAGTTS EVTAPTITGV TGNSTAGYEV KGTADANATV EIRNAGGTVI GTGTADGTGAFTVTVPAGEA GANETLTAVA KNASGTEXTP TTFQTPADEA TVTAPTITGV TGNSTAGYEVKGTADANATV EIRNAGGTVI GTGTADGTGA FTVTVPAGEA GANETLTAVA KNASGTESTPTTFQTPADEA TVTAPTITGV TGNSTAGYEV KGTADANATV EIRNAGGAVI GTGTADGTGAFTVTIPAGEA GANETLTAVA KNASGTESTP TTFQTPADPN TPVATPIVET VTGSTTKGYEVKGTAEVGTT IEVRDAAGTV LGTATTGTDG KYTVTLDSGT ATANQTLSVV AKNASGTESQPATATTPADV TAPTVDNITG NSGSGYEITG TADPNTTIEV RDPSGAVIGT GTSDANGDFTVTLPTGTTNP GDTLTVIGKD NAGNESQPTE VLVPADATVT APTVTGVTGN SVAGYQVTGTADPNATIEIR DADGNVIATG TADGTGSFAV NLPAGTANAN ETLTALAKDP AGNTSTPTTFQTPADEVVAP PSVDKVTGNT TQGYQVTGTA ELGTTIEVRA TDGTVLGTAT TGPTGQYTVTLASGKATAKQ TVNVVAKNDT GLESQPTTAM TPADVTTPTI GDITGDSTTG YEITGTADPNTTIEVRNPDG TIIGTTTTDD QGNFTVDLPA GAANPGDTLT VVGKDGDGNE SQPTEVTVPEDATVAAPTVT TVTGTTATGY QVTGTAEPNV TIEIHNEAGL VIATGTTDGA GAFTITLPTGTATANEALTA IAKDAAGKES NPTAFKTPAD PDAPVATPTV DKITGSTTNG YQVVGAAEVGTTVEVRDADG TVLGMATTGT DGKYTVTLEP GKASANETIT VVAKNATGKE SQPATATTPVDLATPTIDSI TGNSSKGYEI TGTAEPKTTI DVRDADGTII AATTANETGQ YTVTLPAGVVTPGETITIIS KDGAGNESQP ATAVIPADVV LAAPTITKVE GNKANGYTVT GTADPNVTVQFYNSSEQLLA SGNTTTGGTF SVHIAAGLAT EKETLTALTT DTQGNVSPKT TFMTPADITGEPEIKIAAPT VSSVLGTSKA GYLIKGTAEP NRIIQISNRL LRSVIAVGAT DAEGNFAIQLTAGQATAQQS LLATATDGAG HYSTATTFMT PADPTNPGGG NGNTGGNNGN TGGNTGNNGATGGNNGNGSN TGSNPNGGSG LGTTGSGLGS LGNGLGTNGS GYHPKLSTIS YGTGNHGKTGYLPSTGEKES SAVTTSLFGA FVALLASMGI IKRKRKNEF069-3  (SEQ ID NO：263)表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列AGGTGAA GCAGGTGCGA ATGAAACGTT AACCGCCGTAGCGAAAAACG CCAGCGGTAC AGAAAGTACG CCAACAACGT TCCAAACGCC AGCGGATCCTAATACGCCCG TGGCGACGCC AATTGTTGAG ACTGTAACAG GTAGTACAAC AAAAGGCTATGAGGTCAAAG GGACTGCTGA AGTTGGCACC ACCATTGAGG TTCGCGATGC AGCTGGCACGGTCCTTGGTA CTGCAACAAC TGGAACTGAC GGAAAATATA CAGTGACTTT AGATTCAGGAACAGCAACAG CAAATCAAAC GCTGAGCGTT GTAGCGAAAA ACGCTAGTGG CACGGAAAGTCAACCAGCAA CGGCGACAAC ACCAGCTGAT GTCACTGCAC CAACAGTTGA TAACATCACAGGCAACTCTG GTTCGGGTTA TGAAATTACA GGAACAGCAG ACCCTAACAC AACAATCGAAGTTCGTGATC CATCTGGGGC AGTCATTGGT ACAGGTACCT CTGATGCGAA TGGTGATTTTACTGTAACGC TACCAACGGG AACGACCAAT CCTGGGGATA CGTTAACAGT GATTGGAAAGGATAACGCGG GAAATGAAAG TCAACCGACT GAAGTCCTTG TTCCTGCTGA TGCCACGGTTACAGCACCAA CTGTAACAGG AGTAACAGGT AATTCAGTTG CTGGTTATCA GGTGACAGGCACCGCTGATC CGAATGCTAC CATCGAAATT CGTGATGCAG ATGGGAACGT GATTGCAACAGGGACTGCCG ATGGGACTGG TTCCTTTGCT GTGAACCTTC CAGCTGGGAC GGCAAATGCGAATGAAACAT TGACAGCGTT AGCCAAAGAT CCTGCTGGCA ATACAAGTAC ACCGACAACCTTCCAAACAC CAGCAGATGA AGTAGTGGCA CCGCCAAGTG TCGACAAAGT TACTGGGAATACAACACAAG GATATCAAGT GACAGGTACC GCTGAACTTG GCACCACCAT TGAAGTTCGTGCAACAGACG GAACAGTTTT AGGCACCGCA ACAACTGGAC CGACTGGCCA ATATACTGTGACGTTAGCTT CAGGAAAAGC AACAGCTAAA CAAACAGTGA ATGTAGTTGC TAAAAATGATACTGGACTTG AGAGTCAACC AACTACAGCT ATGACACCCG CTGATGTTAC CACACCAACAATTGGTGACA TTACTGGAGA TTCAACAACT GGTTATGAAA TCACTGGGAC GGCGGACCCTAATACCACCA TTGAAGTACG GAACCCAGAT GGAACAATTA TTGGTACAAC GACAACGGATGATCAAGGAA ACTTTACTGT GGACCTTCCA GCGGGAGCCG CTAATCCTGG TGATACATTAACAGTTGTTG GAAAAGACGG TGACGGCAAT GAAAGTCAAC CAACGGAAGT GACGGTCCCTGAAGATGCAA CCGTAGCAGC ACCAACTGTG ACGACTGTTA CAGGAAEF069-4  (SEQ ID NO：264)AGEA GANETLTAVA KNASGTEXTP TTFQTPADEA TVTAPTITGV TGNSTAGYEVKGTADANATV EIRNAGGTVI GTGTADGTGA FTVTVPAGEA GANETLTAVA KNASGTESTPTTFQTPADEA TVTAPTITGV TGNSTAGYEV KGTADANATV EIRNAGGAVI GTGTADGTGAFTVTIPA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GT GACACCAGAAGGAGAAACGA CAAAATCAAT CCCAGTAAAT AGTACACTTT GGACAGAGGG GGTTCCTTTACCAAATGCCG TTCCTATCGG CAAAAAAGTT TCAGTTGCTT TCACAACTCG CGCAACAGGGAAACCAAACA CTGTTTTGAA AGCAGAAGTT GTAGTATTTG GTGGTATTAA AGATAGTACAGTGGATAACT TCGTGAGAAT TCGTCCAAAT GATCAAGAAG TAGTCACACC AACGACCGAAGGCTTCATCA GTGTGCCAAC CTTCGACTTC GGCCAAGTGG GCGTTGCAGG AACTAAGCAACAACACAGCT TGAAACAAGC CGCGGATTAC TACGGTAACG GCACACGGAA TCCGTATCTGCGGATTAAGA AAACGCAACC CAATTGGAGC TTAACAGCGC AACTGTCACA ACCAAAATCAGCGACAGACA GCTTGCCTAC AGCGACCCGC TTATTATTAG GGGCGGCGCC TGTCTCTAGCTTTACCAATT ACAATCAACC AACCGAGTTG AAAAATACGG TCGGTACCAC GAGTGCCATTAGCTTAACAG CCAACAACAC AGCAACGAGT ATTATTGCCA ACAAGCAATT CACAGGTAGTAATGTTTATC AGTTGGACTT CACCTTCAAT AATGTCAAAC TTGAAGTGCC AGCCAATCAAGGTGTTAAAG GGCAACAATA CAAGGCCGCA GTTACATGGA ACCTAGTTAC AGEF108-4(SEQ ID NO：420)VTIES SPTAESSAKEETQASSVKEE TTKASTENSQ VTTDTSQEEA TKEAEKEEPQ AEVEQAETPI IPKPKKINMKATYSFSAETY QFGFVNESGQ LINPDIIPIT YSYAKGSWKT DGYNRKWTSM VQGSASTVGNLKNVIMPATS VVMPPGPSYE GTQEVYTNFS IRIPKYYASA SLYNREGKID STYPLPAIALAGTRPLSLTQ SSVISALALT SKGDNVYTPR ETFFGGDPAG VKFTNFLYRI NDFDVKGNNIGYKTVSSPIY YHLTNRRVTE NFVDTSGAKI TPPSNFTQGK QTVINSDPYT FQQSGFLPETYKVGTKSYRF KGWYKGKTKT EPLATTKTPS YKVTYDDNDD LTVVYEEFSG YELPASTNQFGFVDEATNKL IAPDQVQMKY NLTLNENNKK TVMSSNLTGT DTATLKNLSV PVNYFEQYRVNTFYGASDIT FTLPKRYKSI NITKSDGKTD PAFPLPKIYN IDQVEMSHMP VTTYNKLKQLSGQTFGFNAL ADQPEFYTKT LFGTESGIDD PVNYYTMSGP VYYYLENRKV TENFVDTNGAKITPPTGFTQ GKKTVITSDA YTFKQAGTLP DTYTTGGKTY KFKGWYKGKS ILNTLTTTKAPSYQVTYDDN DDLNVVYEEE TVTTVYPSVD MNFVNEKGGA FTPALTFSGK YYAQSTSAYLRTDLYDVTSK NNGNGQYTVS INNGSMPLSQ ELLKKYNNGQ PISATNRLQF NVDKLAIDQQLKYVDSIQLD TAQSSNLKSY RYVYTNNSSL VFDPNVAPAE VDLSSESLNL LNFDSDGTYFSNANNRLFYT HLGYSGTPGV NYLLVMFLFN AKPADKSKLV YKVTRKQVTE NFVDVNGAKITAPTGFTQGN QVPMNSNTFK YTAAKALPAT YTTGGKVYTF QGWYKGKTKP STLNKTTTPTFNATFDGNDD MTAMYKEEIP TASVTLTRPK EVIDTNTNVI WTTTITNTSK APLQNLTLKKGPNWSAGLTI PTFMEVTPEG ETTKSIPVNS TLWTEGVPLP NAVPIGKKVS VAFTTRATGKPNTVLKAEVV VFGGIKDSTV DNFVRIRPND QEVVTPTTEG FISVPTFDFG QVGVAGTKQQHSLKQAADYY GNGTRNPYLR IKKTQPNWSL TAQLSQPKSA TDSLPTATRL LLGAAPVSSFTNYNQPTELK NTVGTTSAIS LTANNTATSI IANKQFTGSN VYQLDFTFNN VKLEVPANQGVKGQQYKAAV TWNLVTEF109-1(SEQ ID NO：421)表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列AGGAGTAAAT TAATGAAAAA AAGTGTTATA ACTAGTTCTA TGTTAGCGGT TTTGTTGTCGGGATTTCTCG TTACCCCTAT TTCTGCTTAC GCTTTGGAAC GCTCTAAGGG AACTACTGAAGAAACGGTGG CTTCAGAAAC ATCTCTAACG GAGCGACAAA TGAGTAGCGG TGTCACTGAAGAAATGAACC CAAGCATCAT AAATTCTCAA GAGGAAACAG AAACAACGTC CACTTCCTCAACCTCCGATT CCACCACTGA AGTTTCTACA TCAGAAGTAA CAACTGTTAA TGATACAGAANATAGTAGCG ACGTACTGAA ACTACTTTGG NAACATCACN AAGTAATGAG GACACACCTATAGEF109-2(SEQ ID NO：422)MKKSVI TSSMLAVLLS GFLVTPISAY ALERSKGTTE ETVASETSLT ERQMSSGVTEEMNPSIINSQ EETETTSTSS TSDSTTEVST SEVTTVNDTE XSSDVLKLLW XHHXVMRTHLEF109-3(SEQ ID NO：423)GGAAC GCTCTAAGGG AACTACTGAAGAAACGGTGG CTTCAGAAAC ATCTCTAACG GAGCGACAAA TGAGTAGCGG TGTCACTGAAGAAATGAACC CAAGCATCAT AAATTCTCAA GAGGAAACAG AAACAACGTC CACTTCCTCAACCTCCGATT CCACCACTGA AGTTTCTACA TCAGEF109-4(SEQ ID NO：424)ERSKGTTE ETVASETSLT ERQMSSGVTE  EMNPSIINSQ EETETTSTSS TSDSTTEVSTSEF110-1(SEQ ID NO：425)TAAATAAAAA TGGATAAGGA GTGGCATAAT CTTATGAAAA AGTTCTCCAT ACGAAAAATTAGTGCTGGTT TTTTGTTTCT GATTTTAGTA ACTTTGATCG CCGGTTTTAG CTTGTCTGCAAATGCAGAAG AGTATATCGT TCCTGCCGAA AGTCATTCAC GACAAAAAAG ATCGTTACTGGACCCTGAGG ACAGAAGACA AGAAGTGGCA GATACAACCG AAGCGCCTTT TGCGTCAATCGGAAGAATCA TTTCCCCTGC CAGTAAACCA GGCTATATTT CTTTAGGAAC AGGCTTTGTTGTTGGAACCA ATACAATTGT CACCAATAAT CATGTGGCTG AAAGTTTTAA GAATGCCAAAGTATTAAATC CGAATGCCAA AGATGATGCT TGGTTTTATC CAGGTCGAGA TGGCAGTGCGACACCATTTG GCAAATTCAA AGTGATTGAT GTAGCTTTTT CCCCGAATGC GGATATTGCGGTAGTGACTG TCGGCAAACA AAACGATCGT CCAGATGGCC CAGAGTTGGG AGAAATTTTAACGCCATTTG TTTTGAAAAA GTTTGAATCT TCAGATACCC ATGTCACAAT ATCAGGCTATCCAGGTGAGA AAAACCACAC ACAATGGTCT CATGAAAATG ATTTGTTTAC ATCTAACTTTACAGACTTAG AAAATCCATT ACTATTTTAT GATATCGATA CAACCGGCGG TCAATCTGGTTCACCAATCT ATAATGATCA GGTTGAAGTA GTTGGTGTTC ATTCCAATGG CGGCATTAAGCAAACAGGAA ATCATGGTCA AAGACTAAAT GAAGTGAATT ATAACTTTAT TGTTAATCGAGTGAATGAAG AAGAAAATAA ACGTTTATCC GCTGTGCCAG CAGCGTAAEF110-2(SEQ ID NO：426)MKKFSIRKIS AGFLFLILVT LIAGFSLSAN AEEYIVPAES HSRQKRSLLDPEDRRQEVAD TTEAPFASIG RIISPASKPG YISLGTGFVV GTNTIVTNNH VAESFKNAKVLNPNAKDDAW FYPGRDGSAT PFGKFKVIDV AFSPNADIAV VTVGKQNDRP DGPELGEILTPFVLKKFESS DTHVTISGYP GEKNHTQWSH ENDLFTSNFT DLENPLLFYD IDTTGGQSGSPIYNDQVEVV GVHSNGGIKQ TGNHGQRLNE VNYNFIVNRV NEEENKRLSA VPAAEF110-3(SEQ ID NO：427)表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列AG AGTATATCGT TCCTGCCGAA AGTCATTCAC GACAAAAAAG ATCGTTACTGGACCCTGAGG ACAGAAGACA AGAAGTGGCA GATACAACCG AAGCGCCTTT TGCGTCAATCGGAAGAATCA TTTCCCCTGC CAGTAAACCA GGCTATATTT CTTTAGGAAC AGGCTTTGTTGTTGGAACCA ATACAATTGT CACCAATAAT CATGTGGCTG AAAGTTTTAA GAATGCCAAAGTATTAAATC CGAATGCCAA AGATGATGCT TGGTTTTATC CAGGTCGAGA TGGCAGTGCGACACCATTTG GCAAATTCAA AGTGATTGAT GTAGCTTTTT CCCCGAATGC GGATATTGCGGTAGTGACTG TCGGCAAACA AAACGATCGT CCAGATGGCC CAGAGTTGGG AGAAATTTTAACGCCATTTG TTTTGAAAAA GTTTGAATCT TCAGATACCC ATGTCACAAT ATCAGGCTATCCAGGTGAGA AAAACCACAC ACAATGGTCT CATGAAAATG ATTTGTTTAC ATCTAACTTTACAGACTTAG AAAATCCATT ACTATTTTAT GATATCGATA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KWNVKTA FGNETSTWTQASMVDDINKV LDITDVKVXX ENGKDVTDNG IVTQENNKVT FTMNKKDDSY SYLAGHTYTMTITTKIKTDA TDEELAPYIE QGGIPNQADL NFGNEGDVLH SNKPTVTPPA PTPEDPKKPEPKQPLKPKKP LTPTNHQAPT NPVNFGKSAS KGIHEF129-1 (SEQ ID NO：481)TGACAAGTGA AGAAACGTCT ATTTGCATCA GTATTACTAT GTTCATTAAC GCTATCAGCAATTGCTACCC CAAGCATCGC TTTGGCGGAC AATGTTGATA AAAAAATTGA AGAAAAAAATCAAGAAATTT CATCATTAAA AGCAAAACAA GGGGATTTAG CTTCACAAGT ATCTTCTTTAGAAGCAGAAG TATCTTCAGT ATTTGATGAA AGCATGGCTT TACGTGAACA AAAGCAAACACTAAAAGCAA AATCAGAACA ATTACAACAA GAAATTACAA ACTTGAATCA ACGTATTGAAAAACGTAACG AAGCAATCAA AAATCAAGCA CGTGATGTTC AAGTTAATGG ACAAAGCACAACAATGCTAG ATGCAGTTTT AGATGCGGAC TCAGTTGCAG ATGCAATCAG CCGTGTTCAAGCTGTTTCAA CAATCGTAAG TGCCAACAAC GACTTAATGC AACAACAAAA AGAAGACAAACAAGCCGTTG TTGATAAAAA AGCTGAAAAC GAGAAAAAAG TGAAACAACT TGAAGCAACAGAAGCTGAAT TAGAAACAAA ACGTCAAGAT TTACTTTCTA AACAATCTGA ATTAAACGTAATGAAAGCTT CATTAGCATT AGAACAATCA TCAGCTGAAA GTTCTAAAGC TGGCTTAGAAAAACAAAAAG CAGCTGCTGA AGCAGAGCAA GCACGCTTAG CTGCTGAACA AAAAGCTGCAGCTGAAAAAG CCAAACAAGC TGCTGCAAAA CCAGCTAAAG CTGAAGTGAA AGCAGAAGCACCAGTTGCCT CTTCATCAAC AACAGAAGCA CAAGCACCAG CAAGCTCAAG CTCAGCAACTGAATCAAGCA CGCAACAAAC AACTGAAACA ACTACACCAA GTACAGATAA TAGTGCAACAGAAAATACTG GCTCTTCTTC ATCAGAACAA CCAGTACAAC CTACAACACC AAGCGATAATGGAAATAATG GTGGCCAAAC TGGTGGTGGA ACAGTTACAC CAACACCAGA ACCAACACCAGCGCCTTCTG CTGATCCAAC AATCAATGCA TTGAACGTTC TACGTCAATC ATTAGGTTTACGTCCAGTAG TATGGGATGC AGGTTTGGCA GCTTCTGCAA CTGCTCGTGC AGCACAAGTTGAAGCAGGTG GCATTCCAAA TGATCACTGG TCTCGTGGAG ATGAAGTTAT CGCAATTATGTGGGCGCCAG GTAACTCAGT AATCATGGCG TGGTACAATG AAACAAACAT GGTAACAGCTTCAGGAAGCG GTCACCGTGA TTGGGAAATT AACCCAGGTA TTACGCGTGT CGGTTTTGGTTACTCAGGTA GCACAATCGT AGGACACTCA GCCTAA表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列EF129-2 (SEQ ID NO：482)VKKRLFASV LLCSLTLSAI ATPSIALADN VDKKIEEKNQ EISSLKAKQG DLASQVSSLEAEVSSVFDES MALREQKQTL KAKSEQLQQE ITNLNQRIEK RNEAIKNQAR DVQVNGQSTTMLDAVLDADS VADAISRVQA VSTIVSANND LMQQQKEDKQ AVVDKKAENE KKVKQLEATEAELETKRQDL LSKQSELNVM KASLALEQSS AESSKAGLEK QKAAAEAEQA RLAAEQKAAAEKAKQAAAKP AKAEVKAEAP VASSSTTEAQ APASSSSATE SSTQQTTETT TPSTDNSATENTGSSSSEQP VQPTTPSDNG NNGGQTGGGT VTPTPEPTPA PSADPTINAL NVLRQSLGLRPVVWDAGLAA SATARAAQVE AGGIPNDHWS RGDEVIAIMW APGNSVIMAW YNETNMVTASGSGHRDWEIN PGITRVGFGY SGSTIVGHSAEF129-3 (SEQ ID NO：483)GGAC AATGTTGATA AAAAAATTGA AGAAAAAAATCAAGAAATTT CATCATTAAA AGCAAAACAA GGGGATTTAG CTTCACAAGT ATCTTCTTTAGAAGCAGAAG TATCTTCAGT ATTTGATGAA AGCATGGCTT TACGTGAACA AAAGCAAACACTAAAAGCAA AATCAGAACA ATTACAACAA GAAATTACAA ACTTGAATCA ACGTATTGAAAAACGTAACG AAGCAATCAA AAATCAAGCA CGTGATGTTC AAGTTAATGG ACAAAGCACAACAATGCTAG ATGCAGTTTT AGATGCGGAC TCAGTTGCAG ATGCAATCAG CCGTGTTCAAGCTGTTTCAA CAATCGTAAG TGCCAACAAC GACTTAATGC AACAACAAAA AGAAGACAAACAAGCCGTTG TTGATAAAAA AGCTGAAAAC GAGAAAAAAG TGAAACAACT TGAAGCAACAGAAGCTGAAT TAGAAACAAA ACGTCAAGAT TTACTTTCTA AACAATCTGA ATTAAACGTAATGAAAGCTT CATTAGCATT AGAACAATCA TCAGCTGAAA GTTCTAAAGC TGGCTTAGAAAAACAAAAAG CAGCTGCTGA AGCAGAGCAA GCACGCTTAG CTGCTGAACA AAAAGCTGCAGCTGAAAAAG CCAAACAAGC TGCTGCAAAA CCAGCTAAAG CTGAAGTGAA AGCAGAAGCACCAGTTGCCT CTTCATCAAC AACAGAAGCA CAAGCACCAG CAAGCTCAAG CTCAGCAACTGAATCAAGCA CGCAACAAAC AACTGAAACA ACTACACCAA GTACAGATAA TAGTGCAACAGAAAATACTG GCTCTTCTTC ATCAGAACAA CCAGTACAAC CTACAACACC AAGCGATAATGGAAATAATG GTGGCCAAAC TGGTGGTGGA ACAGTTACAC CAACACCAGA ACCAACACCAGCGCCTTCTG CTGATCCAAC AATCAATGCA TTGAACGTTC TACGTCAATC ATTAGGTTTACGTCCAGTAG TATGGGATGC AGGTTTGGCA GCTTCTGCAA CTGCTCGTGC AGCACAAGTTGAAGCAGGTG GCATTCCAAA TGATCACTGG TCTCGTGGAG ATGAAGTTAT CGCAATTATGTGGGCGCCAG GTAACTCAGT AATCATGGCG TGGTACAATG AAACAAACAT GGTAACAGCTTCAGGAAGCG GTCACCGTGA TTGGGAAATT AACCCAGGTA TTACGCGTGT CGGTTTTGGTTACTCAGGTA GCACAATCGT AGGACACTCA GCCEF129-4 (SEQ ID NO：484)DN VDKKIEEKNQ EISSLKAKQG DLASQVSSLEAEVSSVFDES MALREQKQTL KAKSEQLQQE ITNLNQRIEK RNEAIKNQAR DVQVNGQSTTMLDAVLDADS VADAISRVQA VSTIVSANND LMQQQKEDKQ AVVDKKAENE KKVKQLEATEAELETKRQDL LSKQSELNVM KASLALEQSS AESSKAGLEK QKAAAEAEQA RLAAEQKAAAEKAKQAAAKP AKAEVKAEAP VASSSTTEAQ APASSSSATE SSTQQTTETT TPSTDNSATENTGSSSSEQP VQPTTPSDNG NNGGQTGGGT VTPTPEPTPA PSADPTINAL NVLRQSLGLRPVVWDAGLAA SATARAAQVE AGGIPNDHWS RGDEVIAIMW APGNSVIMAW YNETNMVTASGSGHRDWEIN PGITRVGFGY SGSTIVGHSAEF130-1 (SEQ ID NO：485)TGATACATTA AAAGGAGGGA AAATATGCGC CCAAAAGAGA AAAAAAGAGG AAAAAATTGGTTAATCAACA GTTTATTAGT TTTACTATTT ATCATTGGCT TAGCCTTAAT TTTTAACAATCAGATACGTA GTTGGGTGGT TCAACAAAAT AGCCGCTCGT ACGCCGTTAG CAAGTTGAAACCAGCTGATG TGAAGAAAAA TATGGCTCGT GAAACAACGT TTGACTTTGA TTCAGTTGAGTCCTTGAGCA CAGAAGCGGT GATGAAAGCC CAATTTGAAA ACAAAAACTT ACCTGTGATT表1.粪肠球菌基因的核苷酸和氨基酸序列GGTGCCATTG CGATACCAAG TGTCGAAATT AATTTGCCCA TTTTTAAAGG ATTGTCCAATGTCGCTTTAT TAACTGGTGC CGGGACCATG AAAGAAGATC AAGTCATGGG GAAAAACAATTATGCCTTGG CTAGTCATCG AACGGAAGAT GGCGTTTCCT TATTTTCACC TTTAGAAAGAACCAAAAAAG ACGAACTCAT TTATATCACT GATTTATCTA CTGTTTATAC ATACAAAATAACTTCTGTAG AAAAAATCGA ACCAACCCGT GTTGAGTTAA TTGATGACGT TCCTGGTCAAAATATGATTA CCTTAATTAC CTGTGGCGAT TTACAAGCAA CGACGCGAAT TGCTGTTCAAGGAACATTAG CAGCAACGAC GCCTATTAAA GACGCCAACG ACGATATGTT GAAGGCTTTCCAATTGGAGC AAAAAACTTT AGCCGATTGG GTGGCTTAAEF130-2 (SEQ ID NO：486)YIKRRENMRP KEKKRGKNWL INSLLVLLFI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TTACTTAGAGGGTCAGAGTGAGAAAGGGAAGGAAGATCCCCATGCTTGGTTAAATTTAGAAAACGGTATTATTTACGCTAAAAATATTGAAAAATGGTTAGCGGAAAAAGATCCTGATAATAAAAAATTCTATAAAGAAAATCTAGATAAGTATATTGAAAAGTTGGATTCTCTAGACAAAGAAGCTAAATCTAAATTTGCTTCAATTCCGAATGATAAAAAAATGATTGTTACAAGTGAAGGATGCTTtAAATATTTCTCGAAAGCGTATAATGTGCCTTCTGCTTACATTTGGGAAAtCAACACTGAAGAAGAAGGAACACCAGATCAAATAAAACACTTAGTTGAAAAATTACGCACAACAAAAGTTCCCTCCTTATTCGTAGAAAGTAGTGTGGACGATAGACCGATGAAAACAGTATCAAAAGATACCAATATTCCTATCTATTCAACGATTTTTACTGATTCAATTGCAGAAAAAGGACAAGATGGTGATAGTTACTATGCGATGATGAAATGGAACCTGGATAAAATTGCTGAAGGCCTTTCGAAATAAEF132-2 (SEQ ID NO：494)MMRKWKVVVGSLGMLIALFIFGACSTNSKDKDTVASNEKLKVVVTNSILADITENIAKDKIDLHSIVPIGKDPHEYEPLPEDVQKTSKADLIFYNGVNLXTGGNAWFTKLVKXANKEENKDYFAASDGIDVIYLEGQSEKGKEDPHAWLNLENGIIYAKNIEKWLAEKDPDNKKFYKENLDKYIEKLDSLDKEAKSKFASIPNDKKMIVTSEGCFKYFSKAYNVPSAYIWEINTEEEGTPDQIKHLVEKLRTTKVPSLFVESSVDDRPMKTVSKDTNIPIYSTIFTDSIAEKGQDGDSYYAMMKWNLDKIAEGLSK.EF132-3 (SEQ ID NO：495)ATGTTCAACAAATAGTAAAGACAAAGATACAGTGGCTTCGAACGAAAAATTAAAGGTAGTAGTTACTAATTCGATTTTAGCAGATATTACTGAAAATATAGCAAAAGATAAAATTGATTTACACAGTATCGTACCTATTGGGAAAGATCCCCACGAATATGAACCtTTGCCTGAAGATGTTCAAAAAACTTCAAAAGCAGATTTGATTTTTTATAACGGTGTTAACTTGGAmACTGGAGGAAATGCTTGGTTTACAAAATTAGTAAAAmATGCGAACAAAGAGGAAAACAAAGACTATTTTGCAGCAAGTGATGGCATAGATGTTATTTACTTAGAGGGTCAGAGTGAGAAAGGGAAGGAAGATCCCCATGCTTGGTTAAATTTAGAAAACGGTATTATTTACGCTAAAAATATTGAAAAATGGTTAGCGGAAAAAGATCCTGATAATAAAAAATTCTATAAAGAAAATCTAGATAAGTATATTGAAAAGTTGGATTCTCTAGACAAAGAAGCTAAATCTAAATTTGCTTCAATTCCGAATGATAAAAAAATGATTGTTACAAGTGAAGGATGCTTtAAATATTTCTCGAAAGCGTATAATGTGCCTTCTGCTTACATTTGGGAAAtCAACACTGAAGAAGAAGGAACACCAGATCAAATAAAACACTTAGTTGAAAAATTACGCACAACAAAAGTTCCCTCCTTATTCGTAGAAAGTAGTGTGGACGATAGACCGATGAAAACAGTATCAAAAGATACCAATATTCCTATCTATTCAACGATTTTTACTGATTCAATTGCAGAAAAAGGACAAGATGGTGATAGTTACTATGCGATGATGAAATGGAACCTGGATAAAATTGCTGAAGGCCTTTCGAAAEF132-4 (SEQ ID NO：496)CSTNSKDKDTVASNEKLKVVVTNSILADITENIAKDKIDLHSIVPIGKDPHEYEPLPEDVQKTSKADLIFYNGVNLXTGGNAWFTKLVKXANKEENKDYFAASDGIDVIYLEGQSEKGKEDPHAWLNLENGIIYAKNIEKWLAEKDPDNKKFYKENLDKYIEKLDSLDKEAKSKFASIPNDKKMIVTSEGCFKYFSKAYNVPSAYIWEINTEEEGTPDQIKHLVEKLRTTKVPSLFVESSVDDRPMKTVSKDTNIPIYSTIFTDSIAEKGQDGDSYYAMMKWNLDKIAEGLSK表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

Query	GenBank登录号	基因描述	BLAST分值	BLASTP-值
					EF002-2	gi|2338759	(AF018073)周质山梨糖醇结合蛋白；           SmoE[Rhodobacter	113	3.60E-18
EF003-2	gi|552773	假拟    [Escherichia coli]＞gnl|PID|d1012634假拟29.4	278	1.20E-53
					EF003-2	gi|2196996	脂蛋白同系物    [Treponema pallidum]＞gi|2108234 29K蛋白	309	3.30E-44
EF003-2	gi|146649	脂蛋白-28前体    [Escherichia coli]＞gi|290510	263	9.20E-40
					EF003-2	gi|148838	28 3kDa膜蛋白      [Haemophilus influenzae]	197	2.10E-39
EF003-2	gi|1573614	28 kDa膜蛋白    (hlpA)[Haemophilus influenzae]	197	7.80E-39
					EF003-2	gi|2314748	(AE000654)  外膜蛋白    [Helicobacter pylori]	263	4.60E-37
EF003-2	gi|349530	脂蛋白  [Pasteurella haemolytica]＞gi|150508脂蛋白	189	4.10E-29
					EF003-2	gnl|PID|e118435	类似于假拟蛋白    [Bacillus subtilis]	158	2.70E-26
EF003-2	gi|349532	脂蛋白  [Pasteurella haemolytica]＞pir|JN0753|JN0753外	200	1.20E-25
					EF003-2	gi|1336657	脂蛋白  [Bacillus subtilis]	182	2.70E-25
EF003-2	gnl|PID|e233873	假拟蛋白  protein[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1182900	186	1.30E-23
					EF003-2	gi|294071	脂蛋白    3[Pasteurella haemolytica]	199	6.60E-23
EF003-2	gi|349531	脂蛋白    [Pasteurlla haemolytica]＞pir|JN0752|JN0752外	198	1.30E-20
					EF003-2	gi|294070	脂蛋白  2[Pasteurella haemolytica]	198	1.80E-20
EF005-2	gi|537235	以gpmB命名的Kenn Rudd    [Escherichia coli]＞gi|1790856	127	6.20E-12
					EF006-2	gi|1552773	假拟    [Escherichia coli]＞gnl|PID|d1012634假拟29.4	255	1.40E-60

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF006-2	gi|349532	脂蛋白  [Pasteurella haemolytica]＞pir|JN0753|JN0753外	221	6.40E-49
					EF006-2	gi|2314748	(AE000654)    外膜蛋白    [Helicobacter pylori]	283	2.70E-48
EF006-2	gi|2196996	脂蛋白同系物    [Treponema pallidum]＞gi|2108234 29K蛋白	267	4.40E-47
					EF006-2	gnl|PID|e118435	类似于假拟蛋白    [Bacillus subtilis]	359	1.80E-44
EF006-2	gi|349531	脂蛋白  [Pasteurella haemolytica]＞pir|JN0752|JN0752外	218	3.80E-41
					EF006-2	gi|294071	脂蛋白  3[Pasteurella haemolytica]	220	2.30E-38
EF006-2	gi|146649	脂蛋白  -28 precursor[Escherichia coli]＞gi|290510	193	2.60E-38
					EF006-2	gi|294070	脂蛋白    2[Pasteurella haemolytica]	218	1.20E-36
EF006-2	gi|148838	28 3kDa  膜蛋白    [Haemophilus influenzae]	112	8.50E-34
					EF006-2	gi|1573614	28 kDa  膜蛋白    (hlpA)[Haemophilus influenzae]	112	1.50E-33
EF006-2	gi|349530	脂蛋白    [Pasteurella haemolytica]＞gi|150508脂蛋白	114	4.30E-29
					EF006-2	gi|294069	脂蛋白    1[Pasteurella haemolytica]	114	1.30E-27
EF006-2	gi|1336657	脂蛋白    [Bacillus subtilis]	202	2.10E-26
					EF006-2	gnl|PID|e233873	假拟蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1182900	200	6.50E-25
EF008-2	gi|493017	心内膜炎特异抗原    [Enterococcus faecalis]	1590	2.70E-211
					EF008-2	gi|393269	粘着蛋白    [Streptococcus pneumoniae]	986	1.80E-129
EF008-2	gi|153834	特异于牙齿表面唾液薄膜的粘附素	973	1.00E-127
					EF008-2	gi|1575030	表面粘附素A前体    [Streptococcus pneumoniae]	934	2.90E-126
EF008-2	gi|153826	粘附素B[Streptococcus sanguis]＞pir|A43583|A43583粘附素B	916	3.90E-126
					EF008-2	gi|1184932	ScbA[Streptococcus crista]	915	3.40E-125
EF008-2	gi|1117994	表面抗原A变体前体    [Streptococcus pneumoniae]	917	5.60E-124

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF008-2	gi|310633	粘附素[Streptococcus gordonii]	891	6.00E-122
					EF008-2	gnl|PID|e255529	脂蛋白  [Staphylococcus epidermidis]	476	1.20E-99
EF008-2	gi|1573330	粘附素B前体    (fimA)[Haemophilus influenzae]	380	1.60E-68
					EF008-2	gi|1245464	YfeA [Yersinia pestis]＞gi|1245464 YfeA[Yersinia pestis]	355	1.20E-64
EF008-2	gi|755075	周质结合蛋白            [Synechocystis sp.]＞gnl|PID|d1018652 Mn	321	1.70E-62
					EF008-2	gi|1335912	Ew1A [Erysipelothrix rhusiopathiae]	232	4.40E-42
EF008-2	gnl|PID|e118595	与ABC转运蛋白相似(膜蛋白)    [Bacillus	204	4.10E-38
					EF008-2	gi|1777933	TroA[Treponema pallidum]	181	2.40E-35
EF009-2	gi|349531	脂蛋白    [Pasteurella haemolytica]＞pir|JN0752|JN0752外	391	4.00E-64
					EF009-2	gi|1552773	假拟    [Escherichia coli]＞gnl|PID|d1012634假拟29.4	359	1.90E-63
EF009-2	gi|294070	脂蛋白    2[Pasteurella haemolytica]	391	6.40E-63
					EF009-2	gi|349532	脂蛋白    [Pasteurella haemolytica]＞pir|JN0753|JN0753外	386	1.10E-61
EF009-2	gi|148838	28 3kDa  膜蛋白      [Haemophilus influenzae]	286	5.60E-60
					EF009-2	gi|1573614	28 kDa  膜蛋白    (hlpA)[Haemophilus influenzae]	286	7.60E-60
EF009-2	gi|294069	脂蛋白    1[Pasteurella haemolytica]	122	4.70E-59
					EF009-2	gi|146649	脂蛋白    -28precursor[Escherichia coli]＞gi|290510	326	2.20E-58
EF009-2	gi|349530	脂蛋白    [Pasteurella haemolytica]＞gi|150508脂蛋白	239	7.80E-57
					EF009-2	gi|294071	脂蛋白  3[Pasteurella haemolytica]	344	4.90E-56
EF009-2	gi|2314748	(AE000654)    外膜蛋白      [Helicobacter pylori]	319	4.20E-53
					EF009-2	gi|2196996	脂蛋白同系物    [Treponema pallidum]＞gi|2108234 29K蛋白	312	2.60E-41

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF009-2	gi|1336657	脂蛋白  [Bacillus subtilis]	234	4.00E-32
					EF009-2	gnl|PID|e233873	假拟蛋白      [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1182900	242	1.40E-31
EF009-2	gnl|PID|e118435	与假拟蛋白相似    [Bacillus subtilis]	102	6.80E-22
					EF011-2	gnl|PID|d100965	V的高铁蛇形菌素结合蛋白前体FatB	579	3.10E-98
EF011-2	gnl|PID|d100965	V的高铁蛇形菌素结合蛋白前体FatB	579	3.10E-98
					EF011-2	gnl|PID|e185374	ceuE基因产物    [Campylobacter coli]	284	1.30E-89
EF011-2	gnl|PID|e185374	ceuE基因产物  [Campylobacter coli]	284	1.30E-89
					EF011-2	gi|150756	40 kDa蛋白质[质粒  pJM1]＞pir|A29928|A29928膜相关	222	2.80E-52
EF011-2	gi|150756	40kDa蛋白质[质粒  pJM1]＞pir|A29928|A29928	222	2.80E-52
					EF012-2	gi|309662	信息素结合蛋白    [质粒  pCF10]＞pir|B53309|B53309	266	8.70E-116
EF012-2	gi|388269	traC [质粒  pAD1]＞pir|A53310|A53310  信息素  cAD1结合	252	1.10E-109
					EF012-2	gnl|PID|d101185	TRAC[Enterococcus faecalis]	281	3.60E-103
EF012-2	gnl|PID|d100655	TraC[Enterococcus faecalis]	277	2.30E-102
					EF012-2	gi|312940	苏氨酸激酶  [Streptococcus equisimilis]＞pir|S28153|S28153	227	1.90E-67
EF012-2	gi|48808	dciAE[Bacillus subtilis]	228	1.70E-46

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF012-2	pir|S16651|S166	dciAE蛋白  -Bacillus subtilis	228	1.00E-45
					EF012-2	gnl|PID|e118149	(AJ002571)DppE[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183316	228	3.80E-45
EF012-2	gi|40005	OppA  基因产物  [Bacillus subtilis]	281	3.90E-44
					EF012-2	gi|143603	孢子形成蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183163	281	7.70E-44
EF012-2	gnl|PID|d101563	周质寡肽结合蛋白前体	152	2.20E-43
					EF012-2	gi|1574679	寡肽结合蛋白	178	2.20E-42
EF012-2	gi|47802	Opp A(AA1-542)[Salmonella typhimurium]＞gi|47808前体	128	1.00E-37
					EF012-2	gi|882550	ORF_f535[Escherichia coli]＞gi|1789397(AE000384)f535；This 535 aa	228	5.30E-36
EF014-2	pir|D70070|D700	转录调控蛋白同系物ywtF-枯草芽孢杆菌	101	1.40E-27
					EF014-2	gnl|PID|e116988	荚膜多糖合成蛋白    [Streptococcus	121	9.50E-27
EF014-2	gi|2804769	(AF030373)推定的调控蛋白    [Streptococcuspneumoniae]	121	9.50E-27
					EF014-2	gnl|PID|e289126	未知  [Streptococcus pneumoniae]	121	1.00E-24
EF014-2	gi|2267239	ORF1[Staphylococcus epidermidis]	234	1.50E-24
					EF014-2	gi|485275	推定的调控蛋白    [Streptococcus pneumoniae]	121	3.90E-24
EF014-2	gi|2804735	(AF030367)推定的调控蛋白    [Streptococcuspneumoniae]	121	3.90E-24
					EF014-2	gi|2804747	(AF030369)推定的调控蛋白    [Streptococcuspneumoniae]	121	3.90E-24

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF014-2	gi|1762327	推定的转录调控蛋白    [Bacillus subtilis]	185	2.80E-22
					EF014-2	gi|143156	膜结合蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1184471	116	1.10E-21
EF014-2	gnl|PID|d101895	膜结合蛋白    LytR[Synechocystis sp.]	113	6.20E-20
					EF014-2	gi|1276874	EpsA[Streptococcus thermophilus]	103	4.00E-17
EF016-2	gnl|PID|e118566	与氨基酸ABC转运蛋白相似(结合蛋白)	194	3.70E-35
					EF016-2	gi|40934	精氨酸结合蛋白    [Escherichia coli]＞gi|769794 artJ	121	1.60E-31
EF016-2	gnl|PID|d101527	精氨酸结合周质蛋白2前体    [Escherichia	121	4.80E-31
					EF016-2	gi|687652	FliY[Escheririhia coli]＞gnl|PID|d1016464 FliY蛋白前体	160	5.70E-31
EF016-2	gi|2650410	(AE001090)谷氨酰胺ABC转运蛋白，周质谷氨酰胺结合	122	3.30E-29
					EF016-2	gi|1649035	高亲和性周质谷氨酰胺结合蛋白    [Salmonella	104	1.80E-27
EF016-2	gi|1574634	谷氨酰胺结合周质蛋白    (glnH)[Haemophilus	174	2.50E-27
					EF016-2	gi|41569	GlnH  前体    (AA-22 to 226)[Escherichia coli]＞gnl|PID|d1015250	106	4.70E-27
EF016-2	gnl|PID|d101527	精氨酸结合周质蛋白1前体    [Escherichia	109	3.70E-26
					EF016-2	gi|769791	artI[Escherichia coli]＞gi|769791 artI[Escherichia coli]	127	2.30E-25
EF016-2	gnl|PID|d100892	与Gln结合周质蛋白同源    [Bacillus	117	8.50E-24
					EF016-2	gi|154125	J蛋白  [Salmonella typhimurium]＞gi|47718读框	118	2.10E-23

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

		hisJ
					EF016-2	gnl|PID|d101688	组氨酸结合周质蛋白前体(HBP)	117	4.50E-23
EF016-2	gi|1166636	组氨酸结合周质蛋白    HisJ[Escherichia coli]	117	6.60E-23
					EF017-2	gi|388269	traC[质粒  pAD1]＞pir|A53310|A53310信息素    cAD1结合	421	4.50E-128
EF017-2	gnl|PID|d101185	TRAC[Enterococcus faecalis]	417	5.10E-124
					EF017-2	gnl|PID|d100655	TraC[Enterococcus faecalis]	414	4.40E-123
EF017-2	gi|309662	信息结合蛋白    [质粒  pCF10]＞pir|B53309|B53309	415	2.40E-119
					EF017-2	gi|40005	OppA基因产物    [Bacillus subtilis]	294	6.20E-82
EF017-2	gi|143603	孢子形成蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183163	290	2.80E-79
					EF017-2	gi|312940	苏氨酸激酶  [Streptococcus equisimilis]＞pir|S28153|S28153	241	2.40E-71
EF017-2	gi|48808	dciAE[Bacillus subtilis]	270	1.10E-61
					EF017-2	gnl|PID|e118149	(AJ002571)DppE[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183316	270	1.50E-61
EF017-2	pir|S16651|S166	dciAE蛋白-Bacillus subtilis	270	3.10E-60
					EF017-2	gi|304925	周质寡肽结合蛋白    [Escherichia coli]	171	2.60E-57
EF017-2	gi|147014	寡肽结合蛋白前体    [Escherichia coli]	171	8.70E-56
					EF017-2	gi|47802	Opp A(AA1-542)[Salmonella typhimurium]＞gi|47808前体	154	1.30E-52

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF017-2	gi|882550	ORF_f535[Escherichia coli]＞gi|1789397(AE000384)f535；This 535 aa	135	5.50E-52
					EF017-2	gi|1574679	寡肽结合蛋白    (oppA)[Haemophilus influenzae]	168	2.90E-43
EF019-2	gi|438458	类似于N-末端信号序列；可能是成熟蛋白	104	2.30E-17
					EF021-2	gnl|PID|e311492	未知    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1184232类似于  ABC	317	2.50E-103
EF021-2	bbs|173803	CD4+T细胞刺激抗原    [Listeria单核细胞质基因85EO-1167，	476	2.80E-81
					EF021-2	gi|581809	tmbC基因产物    [Treponema pallidum]＞pir|A43595|A43595	152	3.20E-71
EF021-2	gi|2688280	(AE001143)碱性膜蛋白    C(bmpC)[Borreliaburgdorferi]	101	5.50E-27
					EF021-2	gnl|PID|e117283	膜蛋白    A[Borrelia garinii]	142	6.50E-22
EF021-2	gnl|PID|e117283	膜蛋白    A [Borrelia burgdorferi]	141	9.20E-22
					EF021-2	gnl|PID|e117283	膜蛋白    A[Borrelia burgdorferi]＞gi|516592膜	141	9.20E-22
EF021-2	gnl|PID|e117283	bmpA(p39，ORF1)[Borrelia burgdorferi]	141	1.70E-21
					EF021-2	gi|508421	抗原  P39 [Borrelia burgdorferi]＞gi|2688281(AE001143)碱性	141	1.70E-21
EF021-2	gi|1753225	BmpA  蛋白[Borrelia burgdorferi]	141	2.70E-20
					EF021-2	gnl|PID|e117282	膜蛋白    A [Borrelia afzelii]	141	8.60E-20
EF021-2	gnl|PID|e117283	膜蛋白    A[Borrelia afzelii]	141	8.60E-20
					EF021-2	gnl|PID|e117283	膜蛋白    A[Borrelia afzelii]	141	8.60E-20
EF021-2	gnl|PID|e117282	bmpA(p39，ORF1)[Borrelia burgdorferi]	141	1.50E-19

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF022-2	gi|312940	苏氨酸激酶  [Streptococcus equisimilis]＞pir|S28153|S28153	324	5.90E-66
					EF022-2	gi|309662	信息素结合蛋白    [Plasmid pCF10]＞pir|B53309|B53309	307	5.60E-60
EF022-2	gnl|PID|d101185	TRAC[Enterococcus faecalis]	301	4.80E-59
					EF022-2	gnl|PID|e118149	(AJ002571)DppE[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183316	170	5.10E-59
EF022-2	gi|48808	dciAE[Bacillus subtilis]	170	5.20E-59
					EF022-2	gnl|PID|d100655	TraC[Enterococcus faecalis]	299	2.80E-58
EF022-2	pir|S16651|S166	dciAE蛋白-Bacillus subtilis	170	1.60E-57
					EF022-2	gi|388269	traC[质粒  pAD1]＞pir|A53310|A53310信息素    cAD1结合	280	2.70E-53
EF022-2	gi|40005	OppA  基因产物  [Bacillus subtilis]	154	7.30E-48
					EF022-2	gi|143603	孢子形成蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183163	154	3.10E-47
EF022-2	gi|2688227	(AE001139)寡肽ABC转运蛋白，周质	215	1.00E-36
					EF022-2	gi|2281458	(AF000366)寡肽通透酶同系物    AII[Borreliaburgdorferi]	215	1.00E-36
EF022-2	gi|304925	周质寡肽结合蛋白    [Escherichia coli]	131	1.30E-35
					EF022-2	gi|147014	寡肽结合蛋白前体    [Escherichia coli]	131	1.80E-34
EF022-2	gi|47802	Opp A(AA1-542)[Salmonella typhimurium]＞gi|47808前体	138	4.90E-34
					EF023-2	gi|309662	信息素结合蛋白    [质粒  pCF10]	231	4.70E-66

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

		＞pir|B53309|B53309
					EF023-2	gi|388269	traC[质粒  pAD1]＞pir|A53310|A53310  信息素  cAD1结合	223	4.80E-62
EF023-2	gnl|PID|d101185	TRAC[Enterococcus faecalis]	226	1.00E-58
					EF023-2	gnl|PID|d100655	TraC[Enterococcus faecalis]	226	4.40E-58
EF023-2	gi|48808	dciAE[Bacillus subtilis]	157	1.20E-57
					EF023-2	gnl|PID|e118149	(AJ002571)DppE [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183316	157	1.20E-57
EF023-2	pir|S16651|S166	dciAE蛋白  -Bacillus subtilis	157	3.80E-56
					EF023-2	gi|40005	OppA基因产物    [Bacillus subtilis]	137	2.30E-53
EF023-2	gi|143603	孢子形成蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183163	133	6.90E-53
					EF023-2	gi|47802	Opp A(AA1-542)[Salmonella typhimurium]＞gi|47808前体	135	2.00E-41
EF023-2	gi|2688227	(AE001139)寡肽ABC转运蛋白，周质	187	9.40E-41
					EF023-2	gi|2281458	(AF000366)寡肽通透酶同系物    AII[Borreliaburgdorferi]	187	1.90E-40
EF023-2	gi|882550	ORF_f535[Escherichia coil]＞gi|1789397(AE000384)f535；This 535 aa	155	1.30E-38
					EF023-2	gi|304925	周质寡肽结合蛋白    [Escherichia coli]	130	9.00E-37
EF023-2	gi|147014	寡肽结合蛋白前体    [Escherichia coli]	130	3.70E-34
					EF026-2	gi|2352482	(AF005097)未知  [Lactococcus lactis]	141	1.10E-23
EF027-2	gi|309662	信息素结合蛋白    [质粒  pCF10]	198	6.20E-71

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

		＞pir|B53309|B53309
					EF027-2	gnl|PID|d100655	TraC[Enterococcus faecalis]	202	1.50E-68
EF027-2	gnl|PID|d101185	TRAC[Enterococcus faecalis]	202	1.50E-68
					EF027-2	gi|388269	traC[Plasmid pAD1]＞pir|A53310|A53310  信息素    cAD1结合	213	8.30E-68
EF027-2	gnl|PID|e118149	(AJ002571)DppE[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183316	222	3.70E-41
					EF027-2	gi|48808	dciAE[Bacillus subtilis]	222	4.90E-41
EF027-2	pir|S16651|S166	dciAE蛋白    -Bacillus subtilis	222	1.10E-39
					EF027-2	gi|40005	OppA基因产物    [Bacillus subtilis]	251	4.10E-39
EF027-2	gi|143603	孢子形成蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183163	247	5.80E-39
					EF027-2	gi|312940	苏氨酸激酶    [Streptococcus equisimilis]＞pir|S28153|S28153	233	8.90E-33
EF027-2	gi|2688227	(AE001139)寡肽ABC转运蛋白，周质	131	2.40E-24
					EF027-2	gi|2281458	(AF000366)寡肽通透酶同系物     AII[Borreliaburgdorferi]	131	2.40E-24
EF027-2	gi|2281468	(AF000948)OppAIV[Borrelia burgdorferi]＞gi|2689891(AE000792)	117	3.00E-20
					EF027-2	gi|1574679	寡肽结合蛋白         (oppA)[Haemophilus influenzae]	130	3.50E-20
EF028-2	gnl|PID|d102047	B.subtilis碱性磷酸酶     IIIA；P19405分泌	996	3.60E-131
					EF028-2	pir|B39096|B39	碱性磷酸酶    (EC 3.1.3.1)III前体     -Bacillus	982	2.90E-129

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

	0
					EF028-2	gi|470383	碱性磷酸酶       A[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1182942	803	4.80E-119
EF028-2	gi|143324	APase I[Bacillus licheniformis]＞pir|A44828|A44828碱性	184	3.00E-54
					EF028-2	gi|147243	碱性磷酸酶前体    (EC 3.1.3.1)[Escherichia coli]	183	8.30E-54
EF028-2	gi|147237	碱性磷酸酶前体    (EC 3.1.3.1)[Escherichia coli]	178	4.40E-53
					EF028-2	gi|147239	碱性磷酸酶前体    (EC 3.1.3.1)[Escherichia coli]	178	4.40E-53
EF028-2	gi|147241	碱性磷酸酶前体    (EC 3.1.3.1)[Escherichia coli]	178	4.40E-53
					EF028-2	gi|1277127	phoA基因产物   [Cloning vector pFW_phoA1]＞gi|1277130phoA基因	174	4.90E-53
EF028-2	gi|147229	碱性磷酸酶        (EC 3.1.3.1)[Escherichia coli]	178	8.40E-53
					EF028-2	gi|818851	碱性磷酸酶    [合成结构]	174	1.10E-52
EF028-2	gi|147245	碱性磷酸酶    (phoA)(EC 3.1.3.1)[Escherichiafergusonii]	177	1.20E-52
					EF028-2	gi|147231	碱性磷酸酶前体    (EC 3.1.3.1)[Escherichia coli]	174	1.60E-52
EF028-2	gi147235	碱性磷酸酶前体    (EC 3.1.3.1)[Escherichia coli]	174	1.60E-52
					EF028-2	gi|1016010	具有N-末端Pe|B-前导序列和C-末端的碱性磷酸酶	174	1.60E-52
EF029-2	gi|1750126	YncB[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183421与微球菌类似	257	3.50E-55
					EF029-2	gnl|PID|e118360	与假拟蛋白相似    [Bacillus subtilis]	263	7.80E-53
EF029-2	gi|673492	核酸酶  [Staphylococcus aureus]＞pir|A00790|NCSAF微球菌	320	2.20E-39
					EF029-2	gi|532653	耐热核酸酶  [Staphylococcus hyicus]	155	9.10E-39

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF029-2	gi|47146	耐热核酸酶  [Staphylococcus intermedius]＞pir|S26079|S26079	145	4.90E-32
					EF030-2	gi|48808	dciAE[Bacillus subtilis]	149	1.10E-66
EF030-2	gnl|PID|e118149	(AJ002571)DppE[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183316	149	1.50E-66
					EF030-2	pir|S16651|S166	dciAE 蛋白-Bacillus subtilis	149	5.90E-66
EF030-2	gi|309662	信息素结合蛋白         [质粒pCF10]＞pir|B53309|B53309	227	7.40E-52
					EF030-2	gnl|PID|d101185	TRAC[Enterococcus faecalis]	237	7.40E-52
EF030-2	gnl|PID|d100655	TraC[Enterococcus faecalis]信息素cAD1结合	233	9.70E-51
					EF030-2	gi|388269	traC[质粒  pAD1]＞pir|A53310|A53310  信息素  cAD1结合	229	3.00E-48
EF030-2	gi|312940	苏氨酸激酶    [Streptococcus equisimilis]＞pir|S28153|S28153	277	3.00E-45
					EF030-2	gi|47802	Opp A(AA1-542)[Salmonella typhimurium]＞gi|47808前体	125	8.50E-34
EF030-2	gi|2688227	(AE001139)寡肽ABC转运蛋白，周质	211	4.80E-31
					EF030-2	gi|2281458	(AF000366)寡肽通透酶同系物      AII[Borreliaburgdorferi]	211	4.80E-31
EF030-2	gi|40005	OppA基因产物      [Bacillus subtilis]	148	1.20E-30
					EF030-2	gi|143603	孢子形成蛋白      [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183163	144	4.80E-30
EF030-2	gi|2281468	(AF000948)OppAIV[Borrelia burgdorferi]＞gi|2689891AE000792)	210	2.10E-29

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF030-2	gi|1574679	寡肽结合蛋白       (oppA)[Haemophilus influenzae]	148	6.00E-29
					EF033-2	gnl|PID|e118439	与铁结合蛋白相似    [Bacillus subtilis]	164	2.60E-14
EF033-2	pir|S54437|S544	氯高铁血红素结合蛋白-Yersinia enterocolitica	108	1.40E-11
					EF033-2	gi|1619623	氯高铁血红素结合蛋白[Yersinia enterocolitica]	108	2.00E-11
EF036-2	gnl|PID|d101022	ORF108[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1185766交替基因	544	1.20E-96
					EF036-2	gi|2622858	(AE000929)磷酸结合蛋白PstS[Methanobacterium	183	1.40E-45
EF036-2	gi|2622859	(AE000929)磷酸结合蛋白PstS同系物[Methanobacterium	158	2.40E-41
					EF036-2	gi|2688115	(AE001132)磷酸ABC转运蛋白，周质磷酸结合	117	1.10E-12
EF037-2	gi|2352482	(AF005097)未知      [Lactococcus lactis]	141	1.10E-23
					EF040-2	gi|1657516	假拟蛋白        [Escherichia coli]＞gi|1786511(AE000139)	208	1.90E-29
EF040-2	gi|293265	2-5A-依赖性   RNase[Mus musculus]＞pir|B45771|B45771	105	1.00E-17
					EF040-2	gi|287865	G9a[Homo sapiens]＞pir|S30385|S30385 G9a蛋白-人	143	8.30E-14
EF040-2	gi|311817	类红细胞锚蛋白[Mus musculus]＞pir|S37771|S37771锚蛋白	119	4.80E-13
					EF040-2	gi|191940	锚蛋白[Mus musculus]＞pir|I49502|I49502锚蛋白-鼠	119	4.90E-13
EF040-2	gi|747710	交替锚蛋白(variant 2.2)[Homo sapiens]	120	1.50E-12
					EF040-2	gi|178646	锚蛋白[Homo sapiens]	120	1.80E-12
EF040-2	gi|1845265	锚蛋白[Homo sapiens]	120	1.80E-12
					EF040-2	pir|A35049|A350	锚蛋白1，红细胞剪接形式2-人	120	1.80E-12

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF040-2	pir|B35049|B350	锚蛋白1，红细胞剪接形式3-人	120	1.80E-12
					EF040-2	gi|28702	锚蛋白(变体2.1)  [Homo sapiens]＞pir|S08275|SJHUK	120	1.80E-12
EF041-2	gi|388269	traC[质粒  pAD1]＞pir|A53310|A53310  信息素  cAD1结合	670	1.40E-87
					EF041-2	gnl|PID|d100655	TraC[Enterococcus faecalis]	662	1.50E-85
EF041-2	gnl|PID|d101185	TRAC[Enterococcus faecalis]	662	1.50E-85
					EF041-2	gi|309662	信息素结合蛋白         [质粒 pCF10]＞pir|B53309|B53309	648	1.20E-83
EF041-2	gi|48808	dciAE[Bacillus subtilis]	218	1.20E-57
					EF041-2	gnl|PID|e118149	(AJ002571)DppE[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183316	218	1.40E-57
EF041-2	pri|S16651|S166	dciAE  蛋白 -Bacillus subtilis	218	2.10E-56
					EF041-2	gi|882550	ORF_f535[Escherichia coli]＞gi|1789397(AE000384)f535；This 535 aa	146	7.30E-40
EF041-2	gi|143603	孢子形成蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183163	278	1.00E-34
					EF041-2	gi|40005	OppA  基因产物   [Bacillus subtilis]	279	1.00E-34
EF041-2	gi|47802	OppA(AA1-542)[Salmonella typhimurium]＞gi|47808前体	141	6.60E-30
					EF041-2	gi|304925	周质寡肽结合蛋白          [Escherichia coli]	160	1.90E-29
EF041-2	gi|1574679	寡肽结合蛋白      (oppA)[Haemophilus influenzae]	163	1.00E-28

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF041-2	gi|147014	寡肽结合蛋白前体            [Escherichia coli]	160	1.50E-28
					EF041-2	gi|2253286	(AF005657)纤溶酶原结合蛋白    [Borrelia burgdorferi]	134	5.00E-27
EF045-2	gi|308854	寡肽结合蛋白           [Lactococcus lactis]＞pir|E53290|E53290	437	3.20E-125
					EF045-2	gi|495181	寡肽结合蛋白           [Lactococcus lactis]	426	9.70E-124
EF045-2	gi|677945	AppA[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1183158   寡肽    ABC	154	2.30E-31
					EF045-2	gi|293014	肽结合蛋白             [Lactococcus lactis]＞pir|B47098|B47098	158	2.40E-14
EF048-2	gi|1574060	假拟[Haemophilus influenzae]＞pir|I64164|I64164	250	2.30E-41
					EF048-2	dbj||AB001488_2	(AB001488)与C4-二羧酸酯结合周质蛋白相似	208	3.60E-34
EF048-2	gi|466717	未发现识别线索     [Escherichia coli]＞gi|1790004(AE000435)	199	1.30E-30
					EF048-2	gi|46006	周质C4-二羧酸酯结合蛋白           [Rhodobactercapsulatus]	162	1.40E-25
EF048-2	gi|1573102	假拟       [Haemophilus influenzae]＞pir|H64143|H64143	244	3.80E-25
					EF048-2	gi|2l82530	(AE000085)Y4mM[Rhizobium sp.NGR234]	114	5.60E-18
EF048-2	gi|1572999	假拟      [Haemophilus influenzae]＞pir|E64141|E64141	116	5.90E-15
					EF049-2	gi|149581	成熟蛋白    [Lactobacillus paracasei]＞pir|A44858|A44858	241	2.40E-55
EF049-2	gi|47198	ORF(AA 1 to 299)[Lactococcus lactis cremoris]＞pir|S08083|S08083	239	1.00E-54
					EF049-2	gi|432402	成熟蛋白         [Lactococcus lactis]＞gi|623055蛋白酶	239	6.20E-54

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF049-2	gi|472835	ORF1 [Lactococcus lactis cremoris]	241	1.50E-53
					EF049-2	gi|39782	33kDa脂蛋白      [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e325181 33kDa	128	8.90E-40
EF051-2	gnl|PID|d101142	钼酸盐结合周质蛋白                    [Synechocystis sp.]	173	3.20E-50
					EF051-2	gnl|PID|e118602	交替基因名称      yvsD；与钼酸盐结合蛋白相似	314	5.90E-50
EF051-2	gi|1574546	sg基因座假拟     [Haemophilus influenzae]＞pir|A64175|A64175	161	2.20E-43
					EF051-2	gi|504498	周质钼酸盐结合蛋白        [Escherichia coli]＞gi|1147817	148	1.40E-30
EF051-2	gi|148939	ORF 8[Haemophilus influenzae]＞pir|S27583|S27583假拟	150	8.10E-28
					EF054-2	gi|150556	表面蛋白    [Plasmid pCF10]＞pir|A41826|A41826  可能	1490	1.80E-192
EF054-2	gnl|PID|e236571	细胞壁锚着信号       [Enterococcus faecalis]	515	8.10E-64
					EF054-2	gi|45738	ORFC[Enterococcus faecalis]＞pir|JH0204|JH0204假拟      30.5K	372	1.60E-58
EF054-2	gi|496520	orfiota[Streptococcus pyogenes]＞pir|S68125|S45091    假拟	362	1.30E-43
					EF054-2	gi|160693	子孢子表面蛋白    [Plasmodium yoelii]＞pir|A45559|A45559	286	4.30E-33
EF054-2	gi|1813523	PbTRAP[Plasmodium berghei]	305	1.30E-32
					EF054-2	gnl|PID|e225687	锌指蛋白      [Mus musculus]＞gnl|PID|e225688 锌	246	3.60E-26
EF054-2	gi|2290394	用来自病人的血清识别的IgG和IgE免疫反应抗原	242	1.40E-25

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF054-2	gi|2290392	用来自病人的血清识别的IgG和IgE免疫反应抗原	237	7.80E-25
					EF054-2	gi|46523	B  抗原 [Streptococcus agalactiae]	232	2.80E-23
EF054-2	pir|S15330|FCSO	IgA Fc  受体前体         -Streptococcus agalactiae	228	1.00E-22
					EF054-2	gi|1620100	Pro-and Glu-rich，PENPEV(10x)；与链球菌B相似	210	3.10E-21
EF054-2	gi63686	NF-Mc-末端    [Gallus gallus]	222	6.90E-21
					EF054-2	gi|63689	NF-M蛋白   [Gallus gallus]＞pir|S15762|S15762神经丝三联体	222	8.50E-21
EF054-2	gi|757867	TATA-  盒类似序列   (Us11)[Human herpesvirus 1]＞gi|291493 18	194	4.10E-19
					EF059-2	gnl|PID|e236571	细胞壁锚着信号      [Enterococcus faecalis]	418	5.60E-95
EF059-2	gi|150556	表面蛋白     [质粒  pCF10]＞pir|A41826|A41826可能	606	3.70E-87
					EF059-2	gi|45738	ORFC[Enterococcus faecalis]＞pir|JH0204|JH0204假拟       30.5K	366	9.30E-50
EF059-2	gi|496520	orfiota[Streptococcus pyogenes]＞pir|S68125|S45091假拟	367	5.90E-44
					EF059-2	gi|160693	子孢子表面蛋白         [Plasmodium yoelii]＞pir|A45559|A45559	344	1.10E-38
EF059-2	gi|1813523	PbTRAP[Plasmodium berghei]	295	2.50E-32
					EF059-2	gi|2290394	用来自病人的血清识别的IgG和IgE免疫反应抗原	251	3.00E-29
EF059-2	gi|2290392	用来自病人的血清识别的IgG和IgE免疫反应抗原	251	3.40E-29

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF059-2	gi|1620100	富Pro和Glu，     PENPEV(10x)；与链球菌B相似	253	6.40E-27
					EF059-2	gi|46521	Fc受体   [Streptococcus agalactiae]＞pir|A60234|A60234 IgAFc	197	2.70E-26
EF059-2	gi|46523	B  抗原  [Streptococcus agalactiae]	232	9.30E-26
					EF059-2	pir|S15330|FCSO	IgA Fc  受体前体    -Streptococcus agalactiae	232	9.30E-26
EF059-2	gnl|PID|e225687	锌指蛋白    [Mus musculus]＞gnl|PID|e225688锌	234	1.40E-22
					EF059-2	gi|425356	透明带蛋白    [Pseudopleuronectes americanus]	229	1.00E-21
EF059-2	gi|457769	胶原   [Bombyx mori]＞pir|S42886|S42886胶原-蚕	209	7.60E-19
					EF061-2	gnl|PID|e236571	细胞壁锚着信号  [Enterococcus faecalis]	925	8.10E-118
EF061-2	gi|150556	表面蛋白    [质粒  pCF10]＞pir|A41826|A41826可能	350	1.50E-107
					EF061-2	gi|496520	orfiota[Streptococcus pyogenes]＞pir|S68125|S45091假拟	308	1.40E-58
EF061-2	gi|45738	ORFC[Enterococcus faecalis]＞pir|JH0204|JH0204假拟        30.5K	322	6.40E-50
					EF061-2	gi|1813523	PbTRAP[Plasmodium berghei]	263	1.00E-26
EF061-2	gi|160693	子孢子表面蛋白        [Plasmodium yoelii]＞pir|A45559|A45559	241	9.00E-25
					EF061-2	gi|63686	NF-Mc-末端  [Gallus gallus]	232	2.10E-22
EF061-2	gi|63689	NF-M蛋白  [Gallus gallus]＞pir|S15762|S15762神经丝三联体	232	2.60E-22
					EF061-2	gi|2290392	用来自病人的血清识别的IgG和IgE免疫反应抗原	176	2.40E-21

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

					EF061-2	gi|1620100	富Pro和Glu，   PENPEV(10x)；与链球菌B相似	165	2.70E-20
EF061-2	gnl|PID|e225687	锌指蛋白         [Mus musculus]＞gnl|PID|e225688锌	197	7.80E-19
					EF061-2	gi|160355	散布重复抗原          [Plasmodium falciparum]	199	8.20E-18
EF061-2	gi|410750	散布重复抗原          [Plasmodium falciparum]	199	8.90E-18
					EF061-2	gi|2290388	用来自病人的血清识别的IgG和IgE免疫反应抗原	182	1.40E-17
EF061-2	gi|2290394	用来自病人的血清识别的IgG和IgE免疫反应抗原	180	2.80E-17
					EF062-2	gi|47049	asa1  基因产物 (AA1-1296)[Enterococcus faecalis]	3716	0
EF062-2	gi|43324	聚集物质         (ASP1)[Enterococcus faecalis]	4003	0
					EF062-2	gi|2109266	聚集物质         [Enterococcus faecium]	5523	0
EF062-2	gi|150555	聚集物质         [Plasmid pCF10]＞pir|H41662|H41662150K mating	6338	0
					EF062-2	gi|1100973	SspB前体      [Streptococcus gordonii]	110	9.90E-39
EF062-2	gi|47248	PAc  蛋白前体      (AA-38 to 1527)[Streptococcusmutans]	107	1.70E-38
					EF062-2	gnl|PID|d101507	表面蛋白抗原前体        [Streptococcus sobrinus]	132	5.00E-36
EF062-2	gi|47267	细胞表面抗原    I/II[Streptococcus mutans]＞pir|S06839|S06839	107	6.50E-36
					EF062-2	bbs|148453	SpaA＝心内膜炎免疫显性抗原         [Streptococcussobrinus，	132	1.20E-35

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF062-2	gi|47620	抗原   I/II[Streptococcus sobrinus]＞pir|A60338|A60338表面	132	2.90E-35
					EF062-2	pir|A35186|A351	唾液凝集素受体前体               -Streptococcus	109	2.10E-34
EF062-2	gi|1100971	SspA [Streptococcus gordonii]	110	3.80E-32
					EF062-2	gi|1100975	SspA[Streptococcus gordonii]	110	2.30E-21
EF063-2	gi|47049	asa1基因产物(AA1-1296)[Enterococcus faecalis]	3716	0
					EF063-2	gi|43324	聚集物质       (ASP1)[Enterococcus faecalis]	4003	0
EF063-2	gi|2109266	聚集物质       [Enterococcus faecium]	5523	0
					EF063-2	gi|150555	聚集物质       [质粒 pCF10]＞pir|H41662|H41662150K mating	6338	0
EF063-2	gi|1100973	SspB前体     [Streptococcus gordonii]	110	9.90E-39
					EF063-2	gi|47248	PAc蛋白前体    (AA-38 to 1527)[Streptococcusmutans]	107	1.70E-38
EF063-2	gnl|PID|d101507	表面蛋白抗原前体      [Streptococcus sobrinus]	132	5.00E-36
					EF063-2	gi|47267	细胞表面抗原    I/II[Streptococcus mutans]＞pir|S06839|S06839	107	6.50E-36
EF063-2	bbs|148453	SpaA＝心内膜炎免疫显性抗原          [Streptococcus	132	1.20E-35
					EF063-2	gi|47620	抗原  I/II[Streptococcus sobrinus]＞pir|A60338|A60338表面	132	2.90E-35
EF063-2	pir|A35186|A351	唾液凝集素受体前体           -Streptococcus	109	2.10E-34

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF063-2	gi|1100971	SspA[Streptococcus gordonii]	110	3.80E-32
					EF063-2	gi|1100975	SspA[Streptococcus gordonii]	110	2.30E-21
EF064-2	gi|47049	asa1基因产物  (AA1-1296)[Enterococcus faecalis]	3716	0
					EF064-2	gi|43324	聚集物质        (ASP1)[Enterococcus faecalis]	4003	0
EF064-2	gi|2109266	聚集物质        [Enterococcus faecium]	5523	0
					EF064-2	gi|150555	聚集物质        [Plasmid pCF10]＞pir|H41662|H41662150K mating	6338	0
EF064-2	gi|1100973	SspB前体    [Streptococcus gordonii]	110	9.90E-39
					EF064-2	gi|47248	PAc  蛋白前体   (AA-38 to 1527)[Streptococcusmutans]	107	1.70E-38
EF064-2	gnl|PID|d101507	表面蛋白抗原前体      [Streptococcus sobrinus]	132	5.00E-36
					EF064-2	gi|47267	细胞表面抗原    I/II[Streptococcus mutans]＞pir|S06839|S06839	107	6.50E-36
EF064-2	bbs|148453	SpaA＝心内膜炎免疫显性抗原    [Streptococcussobrinus，	132	1.20E-35
					EF064-2	gi|47620	抗原  I/II[Streptococcus sobrinus]＞pir|A60338|A60338表面	132	2.90E-35
EF064-2	pir|A35186|A351	唾液凝集素受体前体                -Streptococcus	109	2.10E-34
					EF064-2	gi|1100971	SspA[Streptococcus gordonii]	110	3.80E-32
EF064-2	gi|1100975	SspA[Streptococcus gordonii]	110	2.30E-21
					EF068-2	gi|790398	T06D8.1[Caenorhabditis elegans]	137	8.50E-17

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF068-2	gnl|PID|d102084	膜糖蛋白             [Equine herpesvirus 1]	210	5.80E-16
					EF068-2	gi|2286204	(AF011339)  未知   [Acinetobacter calcoaceticus]	121	8.40E-16
EF068-2	gi|330862	膜糖蛋白    [Equine herpesvirus 1]＞pir|H36802|VGBEX1	208	1.10E-15
					EF068-2	gi|1707247	部分CDS[Caenorhabditis elegans]	131	3.70E-15
EF068-2	gnl|PID|d102084	膜糖蛋白          [Equine herpesvirus 1]	203	6.20E-15
					EF068-2	gi|213392	抗冻糖蛋白         [Notothenia coriiceps]＞pir|A38420|A38420	102	4.60E-13
EF068-2	gnl|PID|e125464	(AL022022)PGRS-  家族蛋白    [Mycobacteriumtuberculosis]	145	1.50E-12
					EF068-2	gi|951460	FIM-C1基因产物     [Xenopus laevis]＞pir|A45155|A45155mucin	109	2.70E-12
EF069-2	gi|790398	T06D8.1[Caenorhabditis elegans]	137	8.50E-17
					EF069-2	gnl|PID|d102084	膜糖蛋白             [Equine herpesvirus 1]	210	5.80E-16
EF069-2	gi|2286204	(AF011339)未知    [Acinetobacter calcoaceticus]	121	8.40E-16
					EF069-2	gi|330862	膜糖蛋白            [Equine herpesvirus 1]＞pir|H36802|VGBEX1	208	1.10E-15
EF069-2	gi|1707247	部分CDS [Caenorhabditis elegans]	131	3.70E-15
					EF069-2	gnl|PID|d102084	膜糖蛋白    [Equine herpesvirus 1]	203	6.20E-15
EF069-2	gi|213392	抗冻糖蛋白    [Notothenia coriiceps]	102	4.60E-13

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

		＞pir|A38420|A38420
					EF069-2	gnl|PID|e125464	(AL022022)PGRS-  家族蛋白  [Mycobacteriumtuberculosis]	145	1.50E-12
EF069-2	gi|951460	FIM-C.1  基因产物  [Xenopus laevis]＞pir|A45155|A45155mucin	109	2.70E-12
					EF070-2	gi|790398	T06D8.1[Caenorhabditis elegans]	137	8.50E-17
EF070-2	gnl|PID|d102084	膜糖蛋白             [Equine herpesvirus 1]	210	5.80E-16
					EF070-2	gi|2286204	(AF011339)未知    [Acinetobacter calcoaceticus]	121	8.40E-16
EF070-2	gi|330862	膜糖蛋白           [Equine herpesvirus 1]＞pir|H36802|VGBEX1	208	1.10E-15
					EF070-2	gi|1707247	部分CDS[Caenorhabditis elegans]	131	3.70E-15
EF070-2	gnl|PID|d102084	膜糖蛋白          [Equine herpesviruus 1]	203	6.20E-15
					EF070-2	gi|213392	抗冻糖蛋白        [Notothenia coriiceps]＞pir|A38420|A38420	102	4.60E-13
EF070-2	gnl|PID|e125464	(AL022022)PGRS-  家族蛋白    [Mycobacteriumtuberculosis]	145	1.50E-12
					EF070-2	gi|951460	FIM-C.1基因产物    [Xenopus laevis]＞pir|A45155|A45155mucin	109	2.70E-12
EF071-2	gnl|PID|e306428	未命名蛋白产物    [Bacteriophagerlt]＞gi|1353566Lysin	127	2.00E-37
					EF071-2	gi|853751	N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶[Bacteriophage A511]	273	2.60E-36
EF073-2	gi|143830	xpaC[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|d1005803水解	173	7.10E-16

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF074-2	gi|1256698	几丁质酶[Serratia marcescens]＞gi|1256698几丁质酶[Serratia	618	2.60E-104
					EF074-2	gi|1763985	几丁质酶A[Vibrio harveyi]	526	2.80E-84
EF075-2	gi|143156	膜结合蛋白           [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1184471	593	1.70E-91
					EF075-2	pir|D70070|D700	转录调控蛋白同系物ywtF-Bacillus subtilis	118	1.90E-59
EF075-2	gi|1762327	推定的转录调控控蛋白        [Bacillus subtilis]	148	9.60E-53
					EF075-2	gi|1276874	EpsA[Streptococcus thermophilus]	239	2.20E-33
EF075-2	gnl|PID|e289126	未知  [Streptococcus pneumoniae]	150	1.20E-27
					EF075-2	gi|485275	推定的推定的调控蛋白[Streptococcus pneumoniae]	150	2.50E-27
EF075-2	gi|2804735	(AF030367)    推定的调控蛋白[Streptococcus pneumoniae]	150	2.50E-27
					EF075-2	gi|2804747	(AF030369)推定的调控蛋白[Streptococcus pneumoniae]	150	2.50E-27
EF075-2	gnl|PID|e116988	荚膜多糖合成蛋白             [Streptococcus	148	5.30E-27
					EF075-2	gi|2804769	(AF030373)推定的调控蛋白[Streptococcus pneumoniae]	148	5.30E-27
EF075-2	gi|1147744	PSR[Enterococcus hirae]	109	2.10E-23
					EF075-2	gi|790435	PSR[Enterococcus faecium]＞pir|S54177|S54177 PSR  蛋白	102	4.40E-19
EF075-2	gi|2267239	ORF1[Staphylococcus epidermidis]	109	8.50E-19
					EF075-2	gnl|PID|d101895	膜结合蛋白LytR               [Synechocystis sp.]	121	2.80E-16
EF077-2	gnl|PID|d101135	镉转运ATP酶                  [Synechocystis sp.]	396	2.30E-113

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF077-2	gi|150719	镉抗性蛋白           [质粒 pI258]＞pir|A32561|A32561	373	8.60E-112
					EF077-2	gi|143753	镉流出ATP酶        [Bacillus firmus]＞pir|D42707|D42707probable	361	8.10E-111
EF077-2	gi|152978	E1-E2镉流出腺苷三磷酸酶[Staphylococcus	381	4.30E-110
					EF077-2	gnl|PID|e248808	未知      [Mycobacterium tuberculosis]	298	3.50E-107
EF077-2	gi|495646	APP酶[Transposon Tn5422]	361	2.10E-106
					EF077-2	gnl|PID|e118497	与重金属转运ATP酶相似        [Bacillus	286	3.50E-104
EF077-2	gi|1699049	镉抗性蛋白            [Lactococcus lactis]	352	3.60E-100
					EF077-2	gnl|PID|e118603	与重金属转运ATP酶相似               [Bacillus	254	9.90E-100
EF077-2	gnl|PID|e306540	未知    [Mycobacterium tuberculosis]	352	5.20E-88
					EF077-2	gnl|PID|e263525	P型TAP酶    [Mycobacterium tuberculosis]＞gnl|PID|e249413	199	5.50E-86
EF077-2	gnl|PID|e264090	未知     [Mycobacterium tuberculosis]	250	3.00E-84
					EF077-2	gnl|PID|d101135	镉转运ATP酶                  [Synechocystis sp.]	260	1.00E-81
EF077-2	gi|1773166	可能的铜转运ATP酶               [Escherichia coli]＞gi|1786691	212	4.70E-80
					EF077-2	gi|1354935	可能的铜转运ATP酶               [Escherichia coli]	212	8.50E-79
EF078-2	gi|143331	碱性磷酸酶调控蛋白                 [Bacillus subtilis]	257	5.50E-58
					EF078-2	gi|410142	ORFX18[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1185580两组分传感蛋白	235	8.20E-51

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF078-2	gnl|PID|d101196	同源于       SP：PHOR_BACSU[Bacilllus subtilis]	219	4.20E-44
					EF078-2	gi|1575578	组氨酸蛋白激酶      [Thermotoga maritima]	191	7.10E-44
EF078-2	gi|2182990	组氨酸激酶    [Lactococcus lactis cremoris]	169	6.40E-40
					EF078-2	gi|2182992	组氨酸激酶    [Lactococcus lactis cremoris]	152	1.10E-39
EF078-2	gnl|PID|d101134	感觉转导组氨酸激酶           [Synechocystis sp.]	259	3.90E-38
					EF078-2	gi|149296	磷酸调控蛋白phoR          (gtg起始密码子1[Klebsiella	228	7.60E-33
EF078-2	gi|581188	phoR基因产物(AA1-431)[Escherichia coli]＞gi|1657596	226	1.60E-32
					EF078-2	gnl|PID|d101087	感觉转导组氨酸激酶           [Synechocystis sp.]	138	3.70E-32
EF078-2	gnl|PID|e266592	未知  [Mycobacterium tuberculosis]	232	1.10E-31
					EF078-2	gi|2182996	组氨酸激酶  [Lactococcus lactis cremoris]	206	1.30E-31
EF078-2	gnl|PID|d101135	感觉转导组氨酸激酶          [Synechocystis sp.]	256	1.30E-31
					EF078-2	gi|294893	磷酸调控蛋白phoR         (gtg起始密码子)[Shigella	225	1.60E-31
EF078-2	gi|288420	药物感觉蛋白       A[Synechocystis PCC6803]＞gnl|PID|d1017420	106	2.50E-31
					EF079-2	gi|2098719	推定的菌毛相关蛋白          [Actinomyces naeslundii]	183	8.60E-26
EF081-2	gi|467806	青霉素结合蛋白         [Enterococcus faecalis]	1356	2.10E-178
					EF081-2	gi|790429	低亲和性青霉素结合蛋白           5(PBP5)[Enterococcus	607	1.00E-78
EF081-2	gnl|PID|e208365	青霉素结合蛋白       5[Enterococcus faecium]	604	1.10E-78
					EF081-2	gi|790433	低亲和性青霉素结合蛋白           5(PBP5)[Enterococcus	604	2.70E-78

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF081-2	gi|790437	低亲和性青霉素结合蛋白         (PBP5)[Enterococcus	602	5.10E-78
					EF081-2	gi|790431	低亲和性青霉素结合蛋白         (PBP5)[Enterococcus	591	2.60E-77
EF081-2	gi|43342	D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基肽酶    [Enterococcus hirae]	587	9.30E-77
					EF081-2	gi|49000	D-丙氨酰-D-丙氨酸羧基肽酶    [Enterococcus hirae]	572	5.20E-74
EF081-2	gnl|PID|d100794	青霉素结合蛋白       [Bacillus subtilis]	149	7.40E-24
					EF081-2	gnl|PID|e315088	MecA1[Staphylococcus sciuri]	111	4.40E-19
EF081-2	gnl|PID|e286651	MecA蛋白  [Staphylococcus sciuri]	106	2.90E-18
					EF081-2	gnl|PID|e316581	MecA蛋白  [Staphylococcus sciuri]	111	2.90E-18
EF081-2	gnl|PID|e316607	MecA2蛋白  [Staphylococcus sciuri]	101	3.70E-14
					EF081-2	gnl|PID|e316613	MecA蛋白 [Staphylococcus sciuri]＞gi|46613mecA基因	101	3.70E-14
EF083-2	gi|496283	溶菌素   [噬菌体Tuc2009]	436	6.20E-176
					EF083-2	gi|530798	LysB[噬菌体phi-LC3]	421	3.00E-175
EF083-2	gi|166183	胞壁酰胺酶[噬菌体   CP-7]	186	1.20E-21
					EF083-2	gi|166188	胞壁酰胺酶[噬菌体   CP-9]＞pir|JQ0438|MUBPC9	188	5.00E-21
EF083-2	gi|623084	胞壁酰胺酶      [噬菌体    LL-H]	193	8.40E-20
					EF083-2	gi|166175	胞壁酰胺酶[噬菌体    CP-1]	175	3.40E-19
EF083-2	gnl|PID|e221272	溶菌酶  [噬菌体    CP-1]＞pir|A31086|MUBPCP	175	3.40E-19
					EF083-2	pir|JQ0437|MUBP	N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酸酰胺酶(EC 3.5.1.28)-噬菌体	171	9.50E-19
EF083-2	gi|410502	LysA[Bacteriophage mv4]＞pir|S38477|S38477分解酶lysA-	187	8.90E-17
					EF083-2	gi|793850	溶菌素[Lactobacillus  噬菌体    phi adh]＞gnl|PID|e1217314	117	5.60E-15

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

		溶菌素
					EF084-2	gi|2293312	(AF008220)YtfP[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1185879类似于	438	1.70E-140
EF084-2	gi|2367234	(AE000425)   假拟    43.8kD蛋白      rhsB-pit基因间	167	2.20E-51
					EF084-2	gi|912464	未发现识别线索      [Escherichia coli]	167	6.00E-51
EF084-2	gnl|PID|d101127	假拟蛋白         [Synechocystis sp.]＞pir|S76678|S76678	151	6.10E-42
					EF084-2	gi|1573954	假拟     [Haemophilus influenzae]＞pir|G64161|G64161	142	2.90E-40
EF085-2	gi|1209527	蛋白组氨酸激酶       [Enterococcus faecalis]	2023	8.00E-279
					EF085-2	gi|467057	phoR； B2168_C3_247[Mycobacterium leprae]＞pir|S72905|S72905	226	8.80E-23
EF085-2	gnl|PID|e119229	SenX3[Mycobacterium bovis BCG]	222	3.10E-22
					EF085-2	gnl|PID|e255152	未知    [Mycobacterium tuberculosis]＞gnl|PID|e321546SenX3	222	3.10E-22
EF085-2	gi|1778485	PcoS同系物  [Escherichia coli]＞gi|1786783(AE000162)f480；This	111	3.80E-16
					EF085-2	gi|149296	磷酸调控蛋白phoR          (gtg start codon)[Klebsiella	110	1.40E-14
EF085-2	gi|581188	phoR基因产物(AA1-431)[Escherichia coli]＞gi|1657596	103	5.30E-14
					EF085-2	gi|143331	碱性磷酸酶调控蛋白          [Bacillus subtilis]	118	4.90E-13
EF085-2	gi|537239	交替基因名称      phoM；CG Site No.395[Escherichia coli]	126	9.50E-13
					EF085-2	gi|147251	phoM[Escherichia coli]＞gi|809670 phoM  蛋白(1 is 3rdbase in	126	9.50E-13
EF085-2	gi|2182992	组氨酸激酶     [Lactococcus lactis cremoris]	109	5.90E-12

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF086-2	gi|437706	来自大肠杆菌的可变截短的翻译产物[Streptococcus	221	3.00E-54
					EF086-2	gi|437705	透明质酸酶[Streptococcus pneumoniae]	221	1.60E-53
EF086-2	gi|595847	透明质酸裂解酶[Streptococcus agalactiae]＞pir|A55137|A55137	203	3.30E-44
					EF086-2	gi|705406	透明质酸裂解酶[Staphylococcus aureus]	191	3.40E-42
EF086-2	gi|562086	透明质酸酶[Propionibacterium acnes]	198	6.00E-27
					EF087-2	gi|437706	来自大肠杆菌的可变截短的翻译产物[Streptococcus	221	3.00E-54
EF087-2	gi|437705	透明质酸酶  [Streptococcus pneumoniae]	221	1.60E-53
					EF087-2	gi|595847	透明质酸裂解酶  [Streptococcus agalactiae]＞pir|A55137|A55137	203	3.30E-44
EF087-2	gi|705406	透明质酸裂解酶  [Staphylococcus aureus]	191	3.40E-42
					EF087-2	gi|562086	透明质酸酶  [Propionibacterium acnes]	198	6.00E-27
EF088-2	gi|437706	来自大肠杆菌的可变截短的翻译产物Streptococcus	221	3.00E-54
					EF088-2	gi|437705	透明质酸酶  [Streptococcus pneumoniae]	221	1.60E-53
EF088-2	gi|595847	透明质酸裂解酶  [Streptococcus agalactiae]＞pir|A55137|A55137	203	3.30E-44
					EF088-2	gi|705406	透明质酸裂解酶  [Staphylococcus aureus]	191	3.40E-42
EF088-2	gi|562086	透明质酸酶  [Propionibacterium acnes]	198	6.00E-27
					EF091-2	gi|556016	与植物水应力蛋白相似         ORF2[Bacillus subtilis]	198	5.50E-21
EF091-2	gi|2353333	(AF016513)Ce-LEA[Caenorhabditis elegans]	189	2.40E-17

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF091-2	gnl|PID|e353216	种子成熟蛋白的同系物      [Arabidopsis thaliana]	146	3.60E-11
					EF091-2	gi|1161171	晚期胚胎发育丰富蛋白        [Picea glauca]	132	5.70E-11
EF091-2	pir|S04909|S049	胚胎蛋白       DC8(clone 8/10)-carrot	127	6.50E-11
					EF092-2	gi|2689898	(AE000792)PTS系统，纤维二糖特异性    IIB组分(celA)	145	4.00E-27
EF092-2	gnl|PID|d102048	B.subtilis，纤维二糖磷酸转移酶系统      celA；	116	1.40E-26
					EF096-2	gi|147329	转运蛋白      [Escherichia coli]＞gnl|PID|d1015409	532	2.10E-91
EF096-2	gi|1573475	亚精胺/腐胺结合周质蛋白前体(potD)	527	1.10E-79
					EF096-2	gi|1574803	亚精胺/腐胺结合周质蛋白前体(potD)	468	1.60E-75
EF096-2	gi|1142681	Lpp38[Pasteurella haemolytica]	446	4.40E-72
					EF096-2	gnl|PID|d101526	腐胺转运蛋白              PotF[Escherichia coli]	216	1.50E-54
EF096-2	gi|147334	周质腐胺结合蛋白              [Escherichia coli]	216	2.10E-53
					EF096-2	gi|2688565	(AE001165)亚精胺/腐胺ABC转运蛋白	240	2.00E-48
EF096-2	gi|1881733	PotD[Salmonella typhimurium]	253	2.70E-28
					EF096-2	gnl|PID|d101926	亚精胺/腐胺结合周质蛋白	243	4.20E-26
EF096-2	gnl|PID|e152543	potF基因产物    [Clostridium perfringens]	204	3.30E-21
					EF097-2	gi|622991	甘露醇转运蛋白      [Bacillus stearothermophilus]	547	4.90E-93
EF097-2	gi|42034	甘露醇通透酶    [Escherichia coli]＞gi|466737 甘露醇	535	5.50E-85

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

		特异的
					EF097-2	gi|633650	酶    II(mannitol)[Staphylococcus camosus]＞pir|S68193|S22385	516	2.10E-82
EF097-2	gi|882462	蛋白质-N(pi)-磷酸组氨酸-糖磷酸转移酶[Escherichia	509	3.00E-76
					EF097-2	gi|312763	蛋白质-N(pi)-磷酸组氨酸-糖磷酸转移酶[Escherichia	357	7.50E-70
EF097-2	gnl|PID|d100966	B的甘露醇转运蛋白同系物	492	3.10E-62
					EF097-2	gnl|PID|d100792	甘露醇特异性磷酸转移酶        II[Bacillus	484	5.20E-61
EF097-2	gi|1673855	(AE000020)Mycoplasma pneumoniae，PTS系统甘露醇特异的	232	3.50E-59
					EF097-2	gnl|PID|d100651	磷酸转移酶II，甘露醇特异的       [Mycoplasma	158	8.20E-18
EF097-2	pir|S77757|S777	磷酸转移酶II            (EC 2.7.1.69)，	103	2.00E-13
					EF100-2	gi|2058546	ComYC[Streptococcus gordonii]	193	7.30E-27
EF100-2	gi|2058546	ComYC[Streptococcus gordonii]	193	7.30E-27
					EF100-2	gi|142708	comG3基因产物  [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1185739comGC	150	2.90E-22
EF100-2	gi|142708	comG3  基因产物  [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1185739comGC	150	2.90E-22
					EF100-2	gi|148437	分泌组分           [Erwinia chrysanthemi]＞pir|E47021|E47021果胶的	134	4.40E-15

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF100-2	gi|148437	分泌组分           [Erwinia chrysanthemi]＞pir|E47021|E47021 pectic	134	4.40E-15
					EF100-2	gi|606262	ORF_o145[Escherichia coli]＞gi|693706 HopG[Escherichiacoli]	136	9.10E-13
EF100-2	gi|606262	ORF_o145[Escherichia coli]＞gi|693706 HopG[Escherichiacoli]	136	9.10E-13
					EF100-2	gi|38828	ExeG基因产物       [Aeromonas hydrophila]＞pir|S22910|I49905 protein	132	3.50E-12
EF100-2	gi|38828	ExeG基因产物       [Aeromonas hydrophila]＞pir|S22910|I49905 protein	132	3.50E-12
					EF100-2	gnl|PID|e117259	etpG[Escherichia coli]	131	5.10E-12
EF100-2	gnl|PID|e117259	etpG[Escherichia coli]	131	5.10E-12
					EF100-2	gi|42189	outG基因产物   [Erwinia carotovora]＞pir|S32861|S32861outG	130	9.90E-12
EF100-2	gi|42189	outG基因产物   [Erwinia carotovora]＞pir|S32861|S32861outG	130	9.90E-12
					EF100-2	gi|609628	推定的[Vibrio cholerae]	128	1.60E-11
EF100-2	gi|609628	推定的[Vibrio cholerae]	128	1.60E-11
					EF101-2	gnl|PID|d102573	bacG[Enterococcus faecalis]	106	3.60E-17
EF101-2	gnl|PID|e321943	假拟蛋白       [Enterococcus faecalis]＞gnl|PID|e321943	105	1.80E-16
					EF101-2	gnl|PID|e118502	与枯草芽孢杆菌的假拟蛋白相似             [Bacillus	113	1.80E-15
EF110-2	gi|43338	葡萄球菌丝氨酸蛋白酶同系物             [Enterococcusfaecalis]	1462	2.30E-195

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF110-2	gnl|PID|d100108	谷氨酸特异性蛋白酶前肽原             [Staphylococcus	106	3.70E-14
					EF110-2	gi|46687	前酶原       (AA-68 to 268)[Staphylococcus aureus]	106	6.70E-14
EF111-2	gi|606018	ORF_o783[Escherichia coli]＞gi|1789462(AE000390)假拟        88.3	477	8.10E-80
					EF121-2	gi|2626826	YfkN[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1182774 similar to	143	1.30E-96
EF121-2	gi|2313187	(AE000532)2＇，3＇-环状核苷酸-2′-磷酸二酯酶        (cpdB)	413	2.60E-82
					EF121-2	gi|48453	5＇-核苷酸酶  [Vibrio parahaemolyticus]＞gnl|PID|d1001218	279	8.50E-47
EF121-2	gi|757842	UDP-糖水解酶      [Escherichia coli]	239	1.60E-44
					EF121-2	gi|1773162	UDP-糖水解酶前体           [Escherichia coli]＞gi|1786687	239	1.60E-44
EF121-2	gi|47950	前体多肽        (AA-25 to 525)[Salmonella	229	2.10E-41
					EF121-2	gi|747913	2＇，3＇环状核苷酸-2′-磷酸二酯酶     [Yersinia	115	4.70E-36
EF121-2	gi|62772	5＇-核苷酸酶[Discopyge ommata]＞pir|S19564|S195645＇-核苷酸酶	137	5.80E-35
					EF121-2	gi|1573573	2＇，3＇-环状核苷酸-2＇-磷酸二酯酶     (cpdB)[Haemophilus	114	8.90E-34
EF121-2	gi|537054	2＇，3＇-环状核苷酸-2′-磷酸二酯酶     [Escherichia coli]	110	1.10E-31
					EF121-2	bbs|135915	5＇-核苷酸酶＝糖基磷酯酰基肌醇锚定蛋白{EC	128	7.70E-29
EF121-2	gi|1737443	5’-核苷酸酶   [Boophilus microplus]   磷酸二酯酶	104	1.60E-28
					EF121-2	gi|202551	5＇-核苷酸酶前体    (EC 3.1.3.5)[Rattus norvegicus]	138	6.10E-28
EF121-2	gi|349783	外-5＇-核苷酸酶  [Mus musculus]＞pir|JC2001|JC2001	136	1.10E-27

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF121-2	gi|23897	5＇-核苷酸酶  [Homo sapiens]＞pir|S11032|S110325′-(EC	133	1.60E-27
					EF122-2	gi|2626826	YfkN[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1182774类似于	143	1.30E-96
EF122-2	gi|2313187	(AE000532)2＇，3＇-环状核苷酸-2＇-磷酸二酯酶    (cpdB)	413	2.60E-82
					EF122-2	gi|48453	5＇-核苷酸酶[Vibrio parahaemolyticus]＞gnl|PID|d1001218	279	8.50E-47
EF122-2	gi|757842	UDP-糖水解酶       [Escherichia coli]	239	1.60E-44
					EF122-2	gi|1773162	UDP-糖水解酶前体         [Escherichia coli]＞gi|1786687	239	1.60E-44
EF122-2	gi|47950	前体多肽          (AA-25 to 525)[Salmonellatyphimurium]	229	2.10E-41
					EF122-2	gi|747913	2＇，3＇-环状核苷酸-2＇-磷酸二酯酶    [Yersinia	115	4.70E-36
EF122-2	gi|62772	5＇-核苷酸酶  [Discopyge ommata]＞pir|S19564|S19564 5＇-	137	5.80E-35
					EF122-2	gi|1573573	2＇，3＇-环状核苷酸-  2＇-磷酸二酯酶    (cpdB)[Haemophilus	114	8.90E-34
EF122-2	gi|537054	2＇，3＇-环状核苷酸-2＇-磷酸二酯酶      [Escherichia coli]	110	1.10E-31
					EF122-2	bbs|135915	5＇-核苷酸酶＝糖基磷酯酰基肌醇锚定蛋白{EC	128	7.70E-29
EF122-2	gi|1737443	5＇-核苷酸酶   [Boophilus microplus]	104	1.60E-28
					EF122-2	gi|202551	5＇-核苷酸酶前体       (EC 3.1.3.5)[Rattus norvegicus]	138	6.10E-28
EF122-2	gi|349783	外-5＇-核苷酸酶   [Mus musculus]＞pir|JC2001|JC2001	136	1.10E-27
					EF122-2核苷酸酶前体	gi|23897	5＇-核苷酸酶  [Homo sapiens]＞pir|S11032|S11032 5＇-核苷酸酶   (EC	133	1.60E-27
EF129-2	gi|43334	P54蛋白  [Enterococcus faecium]＞pir|S05542|S05542	630	9.40E-79

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

		假拟
					EF129-2	gi|512521	usp 45基因产物  [Lactococcus lactis]＞pir|JN0097|JN0097分泌的	374	1.30E-42
EF129-2	gi|149525	分泌蛋白    [Lactococcus lactis]	371	3.60E-42
					EF129-2	gnl|PID|e313022	假拟蛋白    [Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1186168	317	2.30E-33
EF130-2	gi|488339	α-淀粉酶[未鉴别的克隆载体]	621	6.70E-81
					EF130-2	gi|488336	ORF[未鉴别的克隆载体]	242	8.00E-27
EF130-2	bbs|112518	α-淀粉酶{N-末端区][人工序列，肽]	237	4.80E-26
					EF130-2	gnl|PID|e289144	ywpE[Bacillus subtilis]＞gnl|PID|e1184540 ywpE [Bacillus	129	5.40E-11
EF131-2	gnl|PID|e118528	青霉素结合蛋白      [Bacillus subtilis]	277	7.40E-43
					EF131-2	gi|488330	α-淀粉酶[未鉴别的克隆载体]	280	1.30E-31
EF131-2	gi|509249	未发现识别线索    [Lactobacillus plantarum]	274	1.10E-30
					EF131-2	gnl|PID|d102491	(AB009635)Fmt[Staphylococcus aureus]	170	5.60E-20
EF131-2	gi|515050	DD-肽酶前体    [Streptomyces lividans]＞pir|S48220|S48220	131	2.30E-14
					EF131-2	gi|153448	丝氨酸DD肽酶    [Streptomyces lividans]	131	1.20E-12
EF132-2	gi|153826	粘附素B [Streptococcus sanguis]＞pir|A43583|A43583粘附素B	1257	2.30E-166
					EF132-2	gi|1184932	ScbA [Streptococcus crista]	1248	3.70E-165
EF132-2	gi|310633	粘附素[Streptococcus gordonii]	1247	5.10E-165
					EF132-2	gi|393269	粘附蛋白    [Streptococcus pneumoniae]	1204	3.40E-163
EF132-2	gi|1575030	表面粘附素A前体    [Streptococcus pneumoniae]	1220	2.40E-161

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF132-2	gi|153834	特异于牙齿表面唾液薄膜的粘附素	1203	4.80E-159
					EF132-2	gi|1117994	表面抗原A变体前体             [Streptococcus pneumoniae]	1191	2.00E-157
EF132-2	gi|493017	心内膜炎特异性抗原    [Enterococcus faecalis]	931	3.70E-122
					EF132-2	gnl|PID|e255529	脂蛋白  [staphylococcus epidermidis]	453	3.20E-92
EF132-2	gi|1245464	YfeA[Yersinia pestis]＞gi|1245464 YfeA[Yersinia pestis]	364	3.60E-64
					EF132-2	gi|1573330	粘附素B前体    (fimA)[Haemophilus influenzae]	349	3.50E-63
EF132-2	gi|755075	周质结合蛋白    [Synechocystis sp.]＞gnl|PID|d1018652 Mn	326	6.80E-62
					EF132-2	gnl|PID|e118595	与ABC转运蛋白相似(膜蛋白)        [Bacillus	174	3.10E-32
EF132-2	gi|1777933	TroA[Treponema pallidum]	171	3.40E-32
					EF132-2	gi|790546	Tromp1[Treponema pallidum]	171	5.10E-32
					Query	德温特登录号	德温特基因描述	BLAST分值	BLASTP-值
EF003-2	W20909	H.pylori  外膜蛋白      14ge10705orf5.	268	4.20E-39
					EF003-2	W20166	Helicobacter pylori外膜蛋白      16225006.aa.	241	3.00E-27
EF006-2	W20909	H.pylori  外膜蛋白     14ge10705orf5.	283	1.20E-48
					EF006-2	W20166	Helicobacter pylori 外膜蛋白      16225006.aa.	266	1.10E-30
EF008-2	R37495	Pneumococcal菌毛蛋白       A.	967	1.20E-127
					EF008-2	W26367	Staphylococcus aureus唾液结合蛋白	467	7.50E-100
EF008-2	R79722	ROM前体        TROMP1.	181	8.00E-36
					EF008-2	W22134	Treponema pallidum稀有外膜蛋白             (TROMP-1).	181	8.00E-36
EF009-2	W20909	H.pylori  外膜蛋白           14ge10705orf5.	319	1.40E-53

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF009-2	W20166	Helicobacter pylori     外膜蛋白         16225006.aa.	278	2.50E-32
					EF012-2	R48035	类马链球菌的透明质酸合酶	227	3.20E-69
EF014-2	W14070	S.thermophilus 外多糖生物合成蛋白                  EpsR.	103	5.90E-19
					EF014-2	W22169	S.thermophilus 外多糖合成操纵子epsA基因产物	103	7.30E-18
EF016-2	W15799	发酵乳杆菌的粘附因子104R	157	9.60E-22
					EF016-2	W15793	粘附因子共有序列	103	1.00E-11
EF017-2	R48035	类马链球菌的透明质酸合酶	241	8.90E-71
					EF021-2	R31013	P39-alpha.	141	1.60E-19
EF021-2	R33280	P39-beta.	134	7.00E-14
					EF022-2	R48035	类马链球菌的透明质酸合酶	324	2.20E-65
EF023-2	R48035	类马链球菌的透明质酸合酶	155	9.90E-33
					EF023-2	R70152	Streptococcus pneumoniae菌株SPRU98 PlpA.	125	5.90E-17
EF027-2	R48035	类马链球菌的透明质酸合酶	233	2.20E-34
					EF028-2	W17830	嗜热碱性磷酸酶	202	7.70E-59
EF028-2	W11568	E.coli碱性磷酸酶突变体        D153H/Q329A.	182	7.90E-56
					EF028-2	W11570	E.coli碱性磷酸酶突变体        D153H/K328H/Q329A.	182	7.90E-56
EF028-2	W26300	E.coli碱性磷酸酶突变体D153H/K328H/Q329A/D330H.	182	1.10E-55
					EF028-2	W11565	E.coli碱性磷酸酶突变体        D153H/K328H/D330A.	182	3.10E-55
EF028-2	W11557	E.coli碱性磷酸酶突变体        D153H/D330N.	182	4.30E-55
					EF028-2	W11561	E.coli碱性磷酸酶突变体        D153H/D330A.	182	4.30E-55
EF028-2	W11555	E.coli碱性磷酸酶突变体        D153H/K328H/D330N.	182	4.70E-55

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF028-2	W11566	E.coli  碱性磷酸酶突变体     D153H/K328H/D330L.	182	1.20E-54
					EF028-2	W11569	E.coli  碱性磷酸酶突变体     K328H/Q329A.	180	1.70E-54
EF028-2	W11562	E.coli  碱性磷酸酶突变体     D153H/D330L.	182	1.70E-54
					EF028-2	R26980	Fv(FRP5)-phoA重组抗体	174	1.90E-54
EF028-2	W11567	E.coli  碱性磷酸酶突变体     Q329A.	179	2.30E-54
					EF028-2	W11558	E.coli  碱性磷酸酶突变体     K328H/D330N.	176	6.40E-54
EF028-2	W11563	E.coli  碱性磷酸酶突变体     K328H/D330A.	176	6.40E-54
					EF029-2	R10044	质粒  pOW360编码的人生长激素            (HGH)-核酸酶A	320	3.50E-40
EF029-2	R10041	质粒  pOW350核酸酶A产物	320	4.30E-40
					EF029-2	R73997	Staphylococcus aureus(Foggi)核酸酶信号及成熟序列	320	5.60E-40
EF029-2	R10043	质粒pOW360编码的人生长激素              (HGH)-核酸酶A	320	2.90E-38
					EF030-2	R48035	类马链球菌的透明质酸合酶	277	6.10E-47
EF040-2	R59077	2-5A-  依赖性   RNA-ase.	105	1.90E-18
					EF040-2	W12703	鼠2-5A-依赖性RNase	105	1.90E-18
EF040-2	R82661	部分鼠    2-5A-  依赖性  RNase.	105	1.90E-18
					EF041-2	R48035	类马链球菌的透明质酸合酶	225	6.30E-26
EF054-2	R26042	P.yoelii SSP2抗原	286	8.00E-34
					EF054-2	R85782	不具有IgA结合区的B类链球菌突变β抗原	232	3.30E-24
EF054-2	R85781	B类链球菌野生型β抗原	232	5.20E-24

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF054-2	P91941	前解痉蛋白原序列	204	3.10E-19
					EF054-2	W32519	胶原样多肽    SEQ ID NO：2.	180	7.50E-18
EF054-2	W12324	卤化银悬浮蛋白单体重复单位        #2.	180	7.50E-18
					EF054-2	W32522	胶原样多肽    SEQ ID NO：5.	192	1.60E-17
EF054-2	W12327	卤化银悬浮蛋白单体重复单位        #5.	192	1.60E-17
					EF054-2	W32520	胶原样多肽    SEQ ID NO：3.	189	2.40E-17
EF054-2	W32532	胶原样多肽    SEQ ID NO：15.	189	2.40E-17
					EF054-2	W12325	卤化银悬浮蛋白单体重复单位        #3.	189	2.40E-17
EF054-2	W12337	蛋白单体重复单位                  #5.	189	2.40E-17
					EF054-2	W12341	卤化银悬浮    FLAG(RTM)-标记蛋白  #2.	189	2.60E-17
EF054-2	W02098	S.mutans抗原  I/II.	161	5.40E-15
					EF054-2	W02096	S.mutans抗原  I/II  片段  (aa803-1114).	161	1.90E-13
EF059-2	R26042	P.yoelii SSP2抗原	344	1.90E-39
					EF059-2	R85782	不具有IgA结合区的B类链球菌突变β抗原	232	1.10E-26
EF059-2	R85781	B类链球菌野生型β抗原	232	1.70E-26
					EF059-2	P91941	前解痉蛋白原序列	200	1.50E-18
EF059-2	P60570	Falciparum散布重复抗原序列	186	4.60E-18
					EF059-2	W02096	S.mutans抗原I/II  片段  (aa803-1114).	167	8.20E-16
EF059-2	W02098	S.mutans抗原I/II.	167	4.90E-15
					EF059-2	R79625	心内膜炎特异性抗原区	147	4.40E-12
EF059-2	R26049	MSF前体	143	1.30E-11
					EF059-2	R28150	甜菜几丁质酶    1.	148	1.70E-11

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF059-2	R26842	来自           S.Aureus ATCC12600.的蛋白酶	147	2.10E-11
					EF059-2	R79643	Streptococcus sobrinus.的免疫显性抗原	151	2.10E-11
EF059-2	W07539	胶原样蛋白         (CLP).	146	3.00E-11
					EF061-2	R26042	P.yoelii SSP2抗原	241	1.70E-25
EF061-2	P60570	Falciparum散布重复抗原序列	199	1.60E-18
					EF061-2	R85782	不具有IgA结合区的B类链球菌突变β抗原	153	2.40E-14
EF061-2	R85781	B类链球菌野生型β抗原	153	3.60E-14
					EF061-2	P91941	前解痉蛋白原序列	163	9.70E-14
EF061-2	P83194	由cDNA克隆编码的生物粘附性前体蛋白序列	156	7.90E-13
					EF061-2	R28150	甜菜几丁质酶	156	9.10E-13
EF061-2	W02096	S.mutans抗原  I/II  片段 (aa803-1114).	148	1.20E-12
					EF061-2	P82971	来自cDNA52的生物粘附性前体蛋白	148	9.70E-12
EF061-2	W02098	S.mutans抗原  I/II.	148	1.50E-11
					EF062-2	W02098	S.mutans抗原   I/II.	107	1.20E-36
EF062-2	R79643	Streptococcus sobrinus的免疫显性抗原	132	3.00E-36
					EF063-2	W02098	S.mutans抗原  I/II.	107	1.20E-36
EF063-2	R79643	Streptococcus sobrinus的免疫显性抗原	132	3.00E-36
					EF064-2	W02098	S.mutans  抗原  I/II.	107	1.20E-36
EF064-2	R79643	Streptococcus sobrinus的免疫显性抗原	132	3.00E-36
					EF071-2	R85294	噬菌体R1-t LytR溶菌素	127	3.70E-38
EF071-2	R91515	Listeria噬菌体溶菌素  PLY511.	273	4.70E-37

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF075-2	W14070	S.thermophilus外多糖生物合成蛋白        EpsR.	239	4.20E-36
					EF075-2	W22169	S.thermophilus外多糖合成操纵子epsA基因产物	239	4.00E-34
EF077-2	R97280	Helicobacter-特异性ATPase 439.	258	4.10E-74
					EF077-2	R48036	Mycobacterium BCG免疫原	192	2.20E-67
EF077-2	W06712	Helicobacter-特异性ATPase 948(ORF-4).	220	2.50E-67
					EF077-2	R70419	人Wilson病基因ATP7B的大鼠同系物	186	9.80E-54
EF077-2	R72343	Wilson  病蛋白    ATP7B.	176	6.70E-40
					EF077-2	R06376	ssc1基因的产物	166	3.10E-28
EF077-2	R75396	Flea钠泵α亚基	146	2.40E-25
					EF077-2	W20891	H.Pylori转运蛋白    14ce20219orfl.	156	8.60E-14
EF078-2	R56667	Bacteroides fragilis RprX  调控应答蛋白	148	8.30E-18
					EF078-2	R74630	Tomato TGETR1  乙烯应答蛋白	130	7.80E-13
EF078-2	R69849	乙烯应答(ETR)基因产物	128	1.70E-11
					EF078-2	R69850	乙烯应答(ETR)突变蛋白	128	1.70E-11
EF078-2	R69851	乙烯应答(ETR)突变蛋白	128	1.70E-11
					EF078-2	R69852	乙烯应答(ETR)突变蛋白	128	1.70E-11
EF078-2	R69853	乙烯应答(ETR)突变蛋白	128	1.70E-11
					EF078-2	R24296	参与糖肽抗性的调控蛋白Van S	142	2.70E-11
EF081-2	R27253	青霉素结合蛋白PBP2A-epi	101	4.70E-16
					EF081-2	R27256	青霉素结合蛋白PBP2A-27R	101	6.00E-15
EF081-2	R27257	青霉素结合蛋白衍生物#1	101	6.20E-15
					EF081-2	R27258	青霉素结合蛋白衍生物#2	101	6.20E-15

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF081-2	R27259	青霉素结合蛋白衍生物    #3.	101	6.20E-15
					EF081-2	R27260	青霉素结合蛋白衍生物    #4.	101	6.20E-15
EF081-2	R27261	青霉素结合蛋白衍生物    #5.	101	6.20E-15
					EF081-2	R27263	青霉素结合蛋白衍生物    #7.	101	6.20E-15
EF081-2	R27264	青霉素结合蛋白衍生物    #8.	101	6.20E-15
					EF081-2	R27262	青霉素结合蛋白衍生物    #6.	101	6.50E-15
EF081-2	R30845	由mecA基因编码的序列	101	6.90E-15
					EF081-2	R27255	青霉素结合蛋白PBP2A-27R	101	6.90E-15
EF081-2	R31216	青霉素结合蛋白PBP2A-27R	101	7.00E-15
					EF110-2	R91042	V8 成熟蛋白酶  (aa1-213).	106	6.60E-16
EF110-2	R91043	V8 成熟蛋白酶  (aa1-214).	106	7.20E-16
					EF110-2	R91044	V8 成熟蛋白酶  (aa1-215).	106	7.80E-16
EF110-2	R26842	来自S.Aureus    ATCC12600.的蛋白酶	106	6.70E-15
					EF110-2	R29644	来自S.Aureus的蛋白酶	106	1.20E-14
EF110-2	W22218	由pV8RPT(-)结构编码的蛋白	106	7.60E-14
					EF110-2	R91033	β-半乳糖苷酶-V8蛋白酶融合蛋白	06	7.60E-14
EF110-2	R91034	β-半乳糖苷酶-V8蛋白酶融合蛋白	106	1.70E-13
					EF110-2	W22219	由pV8D结构编码的蛋白	106	7.60E-13
EF110-2	R91035	重组V8蛋白酶V8D融合蛋白	106	7.60E-13
					EF110-2	W22220	由pV8F结构编码的蛋白	106	7.90E-13
EF129-2	R14530	Usp45蛋白	374	2.40E-43
					EF129-2	R14150	由pUCRS(DSM 5803).编码的MSP	372	4.70E-43
EF131-2	R37495	Pneumococcal菌毛蛋白A	1185	6.80E-163

表2  本发明的多肽与GenBank和德温特数据库中的序列之间最匹配的序列

EF131-2	W26367	Staphylococcus aureus.唾液结合蛋白	418	3.70E-85
					EF131-2	R79722	ROM前体     TROMP1.	171	9.00E-31
EF131-2	W22134	Treponema pallidum稀有外膜蛋白        (TROMP-1).	171	9.00E-31

表3  保守的氨基酸取代

芳族疏水性极性碱性酸性小

苯丙氨酸色氨酸酪氨酸亮氨酸异亮氨酸缬氨酸谷氨酰胺天冬酰胺精氨酸赖氨酸组氨酸天冬氨酸谷氨酸丙氨酸丝氨酸苏氨酸甲硫氨酸甘氨酸

表4  包含抗原性表位携带部分的残基

EF001-2	从约Asp-150至约Lys-152，从约Ser-256至约Tyr-259，从约Lys-360至约Lys-363，从约Asn-406至约Asp-408。
EF002-2	从约Asp-80至约Asp-83；从约Asp-281至约Gly-283。
EF003-2	从约Asn-263至约Gly-266。
EF004-2	从约Asn-23至约Asn-26，从约Lys-83至约Ser-87，从约Tyr-154至约Asp-159。
EF005-2	从约Lys-249至约Glu-252。
EF006-2	从约Gly-23至约Asp-28。
EF008-2	从约Thr-92至约Gly-94，从约Pro-161至约Asp-165，从约G1y-287至约Thr-289。
EF010-2	从约Pro-129至约Asn-131。
EF012-2	从约Asp-77至约Asp-79，从约Asp-94至约Lys-98，从约Asp-256至约Thr-258，从约Glu-461至约Asn-468。
EF013-2	从约Thr-30至约Asp-32，从约Glu-73至约Ala-75，从约Gln-164至约Asn-166，从约Lys-193至约Gly-195。
EF014-2	从约Ser-203至约Aps-206，从约Gln-314至约Gly-316。
EF015-2	从约Pro-66至约Gly-69。
EF016-2	从约Lys-236至约Asn-239。
EF017-2	从约Ser-90至约Gly-93，从约Thr-197至约Lys-199，从约Lys-230至约Asn-233，从约Ser-428至约Gly-431。

表4  包含抗原性表位携带部分的残基

EF018-2	从约Lys-159至约Tyr-161，从约Asn-165至约Ser-167，从约Asn-250至约Arg-256，从约Asn-392至约Gly-395，从约Lys-416至约Tyr-418，从约Asn-428至约Arg-430。
EF019-2	从约Arg-209至约Ser-211，从约Lys-287到约Ser-290。
EF020-2	从约Lys-57至约Asn-62。
EF021-2	从约Ser-33至约Gly-35，从约Glu-77至约Gly-81，从约Asp-139至约Lys-141，从约Glu-255至约Ser-258，从约Gln-271至约Tyr-277。
EF023-2	从约Lys-232至约Asp-234，从约Arg-304至约Gly-306，从约Thr-453至约Arg-456，从约Ser-478至约Thr-480。
EF025-2	从约Arg-183至约Asp-185。
EF026-2	从约Ser-25至约Asp-30，从约Asp-90至约Asp-94，从约Gln-107至约Asn-110。
EF027-2	从约Gln-72至约Lys-74，从约Lys-229至约Asp-231。
EF028-2	从约Asp-186至约Gln-188。
EF029-2	从约Asp-118至约Lys-122，从约Asp-124至约Tyr-126。
EF031-2	从约Glu-30至约Gly-33。
EF034-2	从约Gln-25至约Gly-27，从约Glu-75至约Thr-77。
EF036-2	从约Gln-177至约Ser-179。
EF037-2	从约Ser-25至约Asp-30，从约Asp-90至约Asp-94，从约Gln-107至约Asn-110。

表4 包含抗原性表位携带部分的残基

		EF038-2	从约Asn-77至约Lys-79，从约Tyr-88至约Asn-92。
		EF040-2	从约Lys-167至约Gly-172，从约Lys-240至约Asn-242。
		EF044-2	从约Arg-192至约Gly-194，从约Asn-200至约Asn-203。
		EF045-2	从约Asp-159至约Asn-161，从约His-172至约Gly-174，从约Tyr-261至约Gly-264，从约Lys-305至约Glu-308。
		EF046-2	从约Ser-18至约Gly-23，从约Gln-41至约Ser-47，从约Thr-76至约Asp-78。
		EF047-2	从约Asn-28至约Asp-30，从约Asp-273至约Asn-277。
		EF048-2	从约Asp-138至约Lys-141，从约Asp-152至约Gly-154。
		EF051-2	从约Asp-73至约Gly-76。
		EF053-2	从约Ser-79至约Gly-82。
		EF055-2	从约Asp-26至约Gly-28，从约Gln-67至约Asp-69，从约Arg-71至约Gly-74，从约Arg-87至约Gly-89。
		EF056-2	从约Arg-71至约Gly-74，从约Arg-87至约Gly-89。
EF058-2	从约Lys-129至约Gly-133，从约Gln-571至约Tyr-573，从约Pro-586至约Gly-591。
EF065-2	从约Ser-236至约Tyr-239，从约Asp-350至约Gly-352，从约Lys-415至约Asn-418，从约Arg-446至约Asp-448，从约Asn-489至约Lys-491，从约Ser-516至约Asp-518，从约Glu-639至约Lys-642。

表4 包含抗原性表位携带部分的残基

		EF066-2	从约Ser-236至约Tyr-239，从约Asp-350至约Gly-352，从约Lys-415至约Asn-418，从约Arg-446至约Asp-448，从约Asn-489至约Lys-491，从约Ser-516至约Asp-518，从约Glu-639至约Lys-642。
		EF067-2	从约Ser-236至约Tyr-239，从约Asp-350至约Gly-352，从约Lys-415至约Asn-418，从约Arg-446至约Asp-448，从约Asn-489至约Lys-491，从约Ser-516至约Asp-518，从约Glu-639至约Lys-642。
		EF073-2	从约Met-98至约Arg-100，从约Arg-110至约Asp-112。
		EF074-2	从约Ser-53至约Tyr-59，从约Ser-86至约Gly-88，从约Pro-97至约Gln-100，从约Gln-230至约Gly-232。
		EF076-2	从约Asn-38至约Tyr-40，从约Asp-48至约Asn-53，从约Lys-79至约Gly-81。
		EF077-2	从约Arg-411至约Gly-413。
		EF078-2	从约Thr-294至约Gly-296，从约Aps-366至约Gln-368，从约Glu-524至约Gly-526。
		EF080-2	从约Glu-164至约Gly-166，从约Ser-206至约Tyr-208，从约Lys-239至约Gly-243。
		EF081-2	从约Asn-7至约Ser-11，从约Lys-77至约Tyr-80，从约Lys-112至约Asn-114，从约Gly-162至约Asp-164，从约Arg-181至约Gly-183。
		EF083-2	从约Gln-38至约Arg-40。
		EF084-2	从约Lys-140至约Asp-142，从约Gly-164至约Arg-166，

表4 包含抗原性表位携带部分的残基

	从约Arg-262至约Gly-264。
EF085-2	从约Asn-95至约Asp-97，从约Arg-112至约Asp-114，从约Asp-258至约Ser-260，从约Arg-401至约Ser-403。
EF086-2	从约Pro-112至约Gly-115，从约Ser-222至约Ser-224，从约Asn-296至约Gly-299，从约Thr-346至约Lys-348，从约Asp-428至约Ser-432。
EF087-2	从约Pro-112至约Gly-115，从约Ser-222至约Ser-224，从约Asn-296至约Gly-299，从约Thr-346至约Lys-348，从约Asp-428至约Ser-432。
EF088-2	从约Pro-112至约Gly-115，从约Ser-222至约Ser-224，从约Asn-296至约Gly-299，从约Thr-346至约Lys-348，从约Asp-428至约Ser-432。
EF090-2	从约Arg-2至约Arg-5。
EF091-2	从约Gln-40至约Asp-43。
EF093-2	从约Lys-95至约Gly-97。
EF094-2	从约Asp-314至约Asp-316。
EF095-2	从约Ser-328至约Thr-330，从约Asp-359至约Asp-363，从约Glu-637至约Gly-639，从约Asn-744至约Gly-746。
EF096-2	从约Pro-128至约Asn-130，从约Ser-193至约Asp-196。
EF097-2	从约Val-357至约Gly-359。
EF099-2	从约Glu-44至约Asp-47，从约Lys-154至约Gly-156，从约Asn-286至约Asp-289。

表4 包含抗原性表位携带部分的残基

		EF101-2	从约Lsy-40至约Asp-42，从约Pro-255至约Asn-258，从约Lys-288至约Gly-290。
		EF102-2	从约Asp-314至约Asp-316。
		EF104-2	从约Pro-232至约Lys-237，从约Ala-362至约Asn-366，从约Ser-421至约Gly-423，从约Lys-488至约Ser-490，从约Asp-550至约Asn-552，从约Pro-637至约Lys-640，从约Asp-727至约Gly-729，从约Asn-751至约Ser-754，从约Lys-771至约Asn-774，从约lle-835至约Asn-837，从约Pro-851至约Gly-853。
		EF105-2	从约Ser-40至约Gly-43，从约Asn-94至约Gln-97，从约Gln-220至约Gly-222，从约Asn-263至约Gly-265。
		EF106-2	从约Asp-72至约Gly-75，从约Thr-274至约Asp-277，从约Asn-310至约Arg-313。
		EF107-2	从约Thr-155至约Asn-157，从约Thr-189至约Asp-191，从约Arg-270至约Gly-272，从约Thr-330至约Lys-335，从约Asp-365至约Asp-368，从约Pro-451至约Asp-453，从约Gly-485至约Thr-488。
		EF108-2	从约Lys-142至约Trp-145，从约Thr-147至约Tyr-150，从约Arg-212至约Gly-214，从约Ser-248至约Asp-251，从约Asp-384至约Asp-387，从约Pro-481至约Arg-483，从约Lys-491至约Gly-494，从约Thr-619至约Gly-624，从约Asp-656至约Asp-659，从约Lys-717至约Asn-721，从约Ser-822至约Gly-824，从约Tyr-1137至约Thr-1141。
		EF110-2	从约Pro-123至约Gly-127，从约Thr-223至约Gly-225。
		EF111-2	从约Lys-207至约Asn-209，从约Asp-245至约Asn-248，

表4 包含抗原性表位携带部分的残基

	从约Lys-396至约Asp-398，从约Glu-429至约Ser-432，从约Thr-470至约His-474。
EF119-2	从约Asp-90至约Asn-92，从约Gln-142至约Gly-144。
EF121-2	从约Asn-159至约Asp-161，从约Asn-351至约Lys-353，从约Pro-658至约Gly-660，从约Lys-786至约Ser-789。
EF122-2	从约Asn-159至约Asp-161，从约Asn-351至约Lys-353，从约Pro-658至约Gly-660，从约Lys-786至约Ser-789。
EF123-2	从约Asn-331至约Arg-336，从约Asp-634至约Gly-636，从约Glu-780至约Ser-782，从约Tyr-909至约Asn-911，从约Lys-939至约Glu-942，从约Asp-1074至约Gly-1076，从约Asp-1367至约Gly-1369，从约Pro-1433至约Lys-1435，从约Gly-1516至约Asp-1518，从约Lys-1656至约Asp-1660，从约Lys-1860至约Gln-1863，从约Ser-1916至约Gln-1919，从约Pro-1940至约Gly-1942。
EF124-2	从约Asn-331至约Arg-336，从约Asp-634至约Gly-636，从约Glu-780至约Ser-782，从约Tyr-909至约Asn-911，从约Lys-939至约Glu-942，从约Asp-1074至约Gly-1076，从约Asp-1367至约Gly-1369，从约Pro-1433至约Lys-1435，从约Gly-1516至约Asp-1518，从约Lys-1656至约Asp-1660，从约Lys-1860至约Gln-1863，从约Ser-1916至约Gln-1919，从约Pro-1940至约Gly-1942。
EF125-2	从约Asn-331至约Arg-336，从约Asp-634至约Gly-636，从约Glu-780至约Ser-782，从约Tyr-909至约Asn-911，从约Lys-939至约Glu-942，从约Asp-1074至约Gly-1076，从约Asp-1367至约Gly-1369，从约Pro-1433至约Lys-1435，从约Gly-1516至约Asp-1518，从约Lys-1656至约Asp-1660，从约Lys-1860至约Gln-1863，从约Ser-1916至约Gln-1919，从约Pro-1940至约Gly-1942。

表4 包含抗原性表位携带部分的残基

EF126-2	从约Ser-236至约Tyr-239，从约Asp-350至约Gly-352，从约Lys-415至约Asn-418，从约Arg-446至约Asp-448，从约Asn-489至约Lys-491，从约Ser-516至约Asp-518，从约Glu-639至约Lys-642。
EF127-2	从约Ser-236至约Tyr-239，从约Asp-350至约Gly-352，从约Lys-415至约Asn-418，从约Arg-446至约Asp-448，从约Asn-489至约Lys-491，从约Ser-516至约Asp-518，从约Glu-639至约Lys-642。
EF128-2	从约Ser-236至约Tyr-239，从约Asp-350至约Gly-352，从约Lys-415至约Asn-418，从约Arg-446至约Asp-448，从约Asn-489至约Lys-491，从约Ser-516至约Asp-518，从约Glu-639至约Lys-642。
EF129-2	从约Asn-300至约Gly-302，从约Ser-316至约Gly-319，从约Asn-385至约His-387
EF131-2	从约Lys-201至约Tyr-204，从约Glu-263至约Ser-266。
EF132-2	从约Thr-26至约Ser-28。

关于微生物保藏的说明

(PCT细则13之二)

A.对说明书第  8    页，第    1       行所述的微生物的说明。
		B.保藏事项                               其它保藏在补充页中□
保藏单位名称美国典型培养物保藏中心
		保藏单位地址(包括邮政编码和国名)美国弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道10801号(20110-2209)
保藏日期1997年5月2日	保藏编号55969
		C.补充说明(必要时)                         本栏有补充页□
		D.本说明是为下列指定国作的(如果说明不是为所有指定国而作的)
		E.补充说明(必要时)
下列说明将随后向国际局提供(写出说明的类别，例如：“保藏的编号”)

PCT/RO/134表(1992年7月)

Claims (21)

1、一种分离的核酸分子，包括具有选自如下一组的核苷酸序列的多核苷酸：

(a)编码表1所示的任何一种氨基酸序列的多肽的核苷酸序列；或

(b)与(a)中的任何一种核苷酸序列互补的核苷酸序列；或

(c)与表1所示的任何一种核苷酸序列至少有95％相同性的核苷酸序列；或

(d)与互补于表1所示的任何一种核苷酸序列的核苷酸序列至少有95％相同性的核苷酸序列。

2、权利要求1的分离的核酸分子，包括在严格杂交条件下与具有与权利要求1的(a)或(b)的核苷酸序列相同的核苷酸序列的多核苷酸杂交的多核苷酸。

3、权利要求1的分离的核酸分子，包括编码权利要求1的(a)的多肽的表位携带部分的多核苷酸。

4、权利要求3的分离的核酸分子，其中所述的的多肽的表位携带部分包括表4所列的氨基酸序列。

5、制备重组载体的方法，包括将权利要求1的分离的核酸分子插入一种载体。

6、由权利要求5的方法制备的重组载体。

7、包括权利要求6的载体的宿主细胞。

8、生产多肽的方法，包括：

(a)培养权利要求7的宿主细胞使细胞表达蛋白质；以及

(b)回收所表达的多肽。

9、分离的多肽，包括选自如下一组的多肽：

(a)由表1的一种完整氨基酸序列组成的多肽；

(b)由表1的一种除了N-末端残基的完整氨基酸序列组成的多肽；

(c)具有生物学活性的(a)的多肽的片段；以及

(d)与特异于(a)的多肽的抗体结合的(a)的多肽的片段。

10、特异于权利要求9的多肽的分离的抗体。

11、由权利要求8的方法生产的多肽。

12、分离的多肽，包括与选自表1的任一种多肽的氨基酸序列至少有95％相同性的氨基酸序列。

13、分离的多肽抗原，包括表4所示的粪肠球菌表位的氨基酸序列。

14、分离的核酸分子，包括具有编码权利要求9的多肽的核苷酸序列的多核苷酸。

15、产生权利要求10的抗体的杂交瘤。

16、疫苗，包括：

(1)选自权利要求9的多肽的一种或多种粪肠球菌多肽；以及

(2)药物学可接受的稀释剂、载体或赋形剂；

其中所述的多肽以能激发动物中抗肠球菌属成员的保护性抗体的有效量存在。

17、预防或降低动物中由肠球菌属成员导致的感染的方法，包括将权利要求9的多肽给予所述动物，其中所述的多肽以有效预防或降低所述感染的量给药。

18、检测生物学样品中肠球菌核酸的方法，包括：

(a)在能发生杂交的条件下将所述样品与权利要求1的一种或多种核酸接触，以及

(b)检测所述的核酸与生物学样品中存在的一种或多种肠球菌核酸序列的杂交。

19、检测得自动物的生物学样品中肠球菌核酸的方法，包括：

(a)用聚合酶链反应扩增所述样品中的一种或多种肠球菌核酸序列，以及

(b)检测所述的扩增的肠球菌核酸。

20、用于检测得自动物的生物学样品中的肠球菌抗体的试剂盒，包括

(a)与固相支持物附着的权利要求9的多肽；以及

(b)检测设施。

21、检测得自动物的生物学样品中的肠球菌抗体的方法，包括

(a)将该样品与权利要求9的多肽接触；以及

(b)检测抗体-抗原复合物。