CN102382889B - 人crybb1基因突变及其用途 - Google Patents

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CN102382889B CN201110354279.XA CN201110354279A CN102382889B CN 102382889 B CN102382889 B CN 102382889B CN 201110354279 A CN201110354279 A CN 201110354279A CN 102382889 B CN102382889 B CN 102382889B
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周新
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Abstract

本发明涉及人CRYBB1的基因突变及其与白内障的相关性。本发明提供了检测人CRYBB1基因突变的方法，并提供了相关的检测试剂盒。本发明方法是通过确定SEQIDNO:1所示序列中第18458位核苷酸，检测其是否存在C→T突变。本发明研究发现人CRYBB1基因的SEQIDNO:1所示序列中第18458位核苷酸存在C→T单核苷酸多态性，当发生C→T突变时，导致了βB1晶状体蛋白氨基酸序列SEQIDNO:2中Q227X的改变，形成了截短的βB1晶状体蛋白，与遗传性白内障的发病相关。本发明可以用于白内障的辅助诊断，用于发现遗传性白内障的潜在携带者，为该病的预防提供依据。

Description

人CRYBB1基因突变及其用途
技术领域
本发明涉及人CRYBB1的基因突变和分析人CRYBB1基因的突变的方法，以及此突变在白内障中辅助诊断的用途。
背景技术
晶状体蛋白首先在1893年由发现[C.T.，Untersuchungen der.Proteinsubstanzen in den lichtbrechenden Mediendes Auges.Z.Physiol.Chem.1893；18：61-106]。它是脊椎动物晶状体最主要的结构蛋白，占晶状体蛋白质总量的90％。晶状体蛋白有特殊的空间结构，这对于维持晶状体的透明性有非常重要的作用。晶状体蛋白根据分子量由大到小，可分为α-，β-，γ-晶状体蛋白。
β-晶状体蛋白(Beta crystallin，CRYB)可分为酸性蛋白(βA)及碱性蛋白(βB)两个亚组，每个亚组分别由3个基因编码(CRYBA1，2，3；CRYBB1，2，3)[Jochen Graw.Genetics of crystallins：Cataract andbeyond.Exp.Eye Res.2009；88：173-189]。其中位于22q11的编码βB1-晶状体蛋白的基因CRYBB1和位于22q11.2的编码βB2-晶状体蛋白的基因CRYBB2突变与先天性白内障的发生关系极其密切[Wang J.，MaX.，Gu F.，Liu N.，Hao X.，Wang K，Wang N and Zhu S.A missensemutation S228P in the CRYBB1 gene causes autosomal dominantcongenital cataract.Chin.Med.J.2007；120(9)：：820-824.，Yang J.，ZhuY，Gu F，He X，Cao Z，Li X，Tong Y，Ma X.A novel nonsense mutationin CRYBB1 associated with autosomal dominant congenital cataractMolecular Vision 2008；14：727-731]。
单核苷酸突变可能会对基因所编码的蛋白质产生重要影响，晶状体蛋白编码基因的分子研究有助于发现潜在的患病者。到目前为止，还没有人CRYBB1基因Q227X突变导致遗传性白内障病的报道。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种检测CRYBB1基因突变的方法。
本发明的第二个目的在于提供用于检测CRYBB1基因突变的试剂盒。
本发明在一常染色体显性遗传的三代核性白内障家系中发现位于CRYBB1基因上第六外显子的一个新突变Q227X。该C→T突变导致第四Greek Key基序上的227密码子由谷氨酸变成终止密码子，这一突变使CYBB1蛋白被截短了26个氨基酸，从而使其理化性质和功能发生改变。经研究发现，该突变与白内障形成显著相关。
为此，本发明第一方面，提供一种检测人CRYBB1基因的突变的方法，其包括以下步骤：
(a)确定在样品中人CRYBB1基因编码的氨基酸序列的第227位氨基酸，或该基因第18458至18460位碱基；
(b)检测该位置是否存在氨基酸Q→X的突变。
具体地，所述的突变是在SEQ ID NO：1第18458位核苷酸C→T的突变，使得其在此处形成终止密码。
本发明的第二方面，提供一种分离的核酸，它具有SEQ ID NO.1所示的序列，且第18458位为T，或者包括第18458位核苷酸的SEQID No.1所示序列的特异性片段。
进而本发明提供一种分子标记，其为上述SEQ ID No.1所述的核酸序列，或者所述的特异性片段，通过该分子标记，能够判断其是否存在白内障患病风险。
在本发明的第三方面，提供用于扩增包括上述多态位点的特异性引物。例如，该引物其长度为15-50bp，且特异性地杂交并扩增出含人CRYBB1基因的SEQ ID NO.1所示序列中第18458位核苷酸C→T突变。
在本发明的第四方面，提供一种可与上述SEQ ID No.1特异性杂交并检测所述多态位点寡核苷酸探针。例如，其长度为15-50bp，且特异性地杂交并检测含人CRYBB1基因的SEQ ID NO：1所示序列中第18458位核苷酸C→T突变。
在本发明的第五方面，提供了遗传性白内障分子诊断的试剂盒。该试剂盒包括用于人CRYBB1基因的第18458位核苷酸检测的试剂，或用于该基因转录的mRNA序列相应位点检测的试剂，或用于检测该基因表达产物相应位点检测的试剂。其可以是1)检测基因组的PCR试剂盒；或2)检测mRNA的荧光定量PCR试剂盒，或Northern检测试剂盒。例如可以包括上述的引物和/或本发明上述的寡核苷酸探针；或3)检测该突变蛋白的免疫试剂盒。
本发明研究发现人CRYBB1基因的SEQ ID NO：1所示序列中第18458位核苷酸C→T突变，导致了βB1晶状体蛋白氨基酸序列SEQID NO：2中Q227X的改变，形成了截短的βB1晶状体蛋白，与遗传性白内障的发病相关。本发明可以用于白内障的辅助诊断，用于发现白内障的潜在携带者，为该病的预防提供了依据。
附图说明
图1显示的是家系先证者CRYBB1基因第六个外显子的测序结果(正向)，图中146位碱基(相对于SEQ ID No.1的第18458位碱基)为C/T杂合(箭头所示)；
图2显示的是家系对照中CRYBB1基因第六个外显子的测序结果(正向)，图中151位碱基(相对于SEQ ID No.1的第18458位碱基)为C/C纯合(箭头所示)。
具体实施的方式
本发明人通过广泛而深入的研究，已经发现了人CRYBB1基因的突变(Q227X)在一个遗传性白内障家系中与疾病性状共分离，这种遗传性白内障发病年龄较早，且伴有眼球震颤，显示这个突变可能影响到基因的功能，使晶状体蛋白出现异常，导致了白内障的发生。
人CRYBB1基因的基因组序列为SEQ ID NO.1，编码的氨基酸序列为SEQ ID NO.2。人CRYBB1的基因组序列可以从GenBank中获得。
本技术领域的人员均知道，有许多的分析技术可以用于检测人CRYBB1基因的突变。这些技术包括(但不局限于)：DNA测序、杂交测序、酶促错配切割、异源双链分析、点杂交、寡核苷酸阵列(DNA芯片)、Mini-sequencing、Taqman技术、高温变性的熔解曲线(HRM)、变性的高效液相色谱(DHPLC)和分子信标等。
另一方面，本发明的检测方法被用于评估个体对白内障的易感性。
本发明的检测样品可以是从体液、组织甚至头发等样品中抽提的基因组DNA或mRNA。
用于本发明方法或检测试剂盒的引物和探针，根据CRYBB1基因的基因组序列(SEQ ID NO.1的序列)或cDNA序列进行设计，并用常规的合成技术进行合成即可。
以下结合具体实施例，进一步阐明本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下面实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按常规进行，或者按照试剂盒建议的条件完成。
实施例1基因组的抽提和测序
用常规的酚氯仿法从人的血液中提取基因组DNA，用于常规PCR扩增。
引物序列为：
正向引物：5-CTGGTCTGGCAGGGGTCTGGGTG-3
反向引物：5-TGAAGAAGGGTTGGGGCAAGGTA-3
反应体系：
扩增条件：
先进行95℃5min预变性，后进入35个循环扩增(95℃45秒，60℃30秒，72℃30秒)，最后72℃10min延伸，扩增出300bp的产物，进行直接测序。
实施例2突变的检测
采取研究对象的外周血，并提取其基因组DNA。在遗传性白内障家系中进行全基因组的连锁分析，定位候选区域。采用测序技术获得CRYBB1基因SNP位点的碱基序列。结合测序结果(测序方法按实施例1进行)和生物信息学的分析，经过家系内的病例对照分析和大样本对照的SNP筛查，确定CRYBB1基因的突变和遗传性白内障连锁在一起。
以下表格中的家系成员均知情同意参与本研究，所有入选成员均在武汉大学中南医院眼科接受眼部检查，确诊或排除遗传性白内障。
  个体编号  第六外显子第227位   白内障情况   视力和其他眼部情况
  1   C/C   无   视力良好
  2   C/T   有   视力稍差
  3   C/C   无   视力良好
  4   C/T   有   左眼外斜
  5   C/C   无   视力良好
  6   C/C   无   视力良好
  7   C/T   有   左眼0.2，右眼0.3
  8   C/C   无   视力良好
  9   C/C   无   视力良好
  10   C/C   无   视力良好
  11   C/T   有   视力差，有眼球震颤
  12   C/C   无   视力良好
  13   C/T   有   视力差，瞳孔变形
  14   C/C   无   视力良好
  15   C/T   有   视力差，右眼斜视
  16   C/C   无   视力良好
  17   C/T   有   未见异常
  18   C/T   有   左眼0.1，右眼0.3
  19   C/C   无   视力良好
  20   C/T   有   视力差，有眼球震颤
  21   C/T   有   视力差
  22   C/C   无   视力良好
  23   C/C   无   视力良好
  24   C/T   有   视力差
实施例3检测试剂盒
制备遗传性白内障的分子诊断试剂盒，其中含有下列可扩增出核酸序列(SEQ ID NO.1)的18458位突变的引物：
正向引物：5-CTGGTCTGGCAGGGGTCTGGGTG-3
反向引物：5-TGAAGAAGGGTTGGGGCAAGGTA-3
对患者和对照的扩增产物进行高分辨率熔解曲线分析，可以较容易的检测出18458位的突变。
此外，本发明还提供一种使用探针检测的分子诊断试剂盒，包括用于检测所述特异性位点的探针，其序列如SEQ ID No.5所示。由于未发生突变的序列不能和该探针杂交，因而通过杂交可以得出是否存在基因突变。
应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明进行各种修改或润色，然而均是以检测本发明所述的SNP位点相关，或者是该位点的各种形式的应用，这些修改或润色均属于本发明的范围。
序列表说明：
SEQ ID No.1是CRYBB1基因的核苷酸序列，包括第18458位的突变，SEQ ID No.2是其编码的氨基酸序列；SEQ ID No.3&4是扩增引物；SEQ ID No.5是检测探针。
序列表
 
                         SEQUENCE LISTING
 
<110>  武汉大学
 
<120>  人CRYBB1基因突变及其用途
 
<130> 
 
<160>  5    
 
<170>  PatentIn version 3.5
 
<210>  1
<211>  18630
<212>  DNA
<213>  Homo sapiens
 
 
<220>
<221>  CDS
<222>  (1709)..(1888)
 
<220>
<221>  CDS
<222>  (5838)..(5956)
 
<220>
<221>  CDS
<222>  (10007)..(10139)
 
<220>
<221>  CDS
<222>  (16007)..(16149)
 
<220>
<221>  CDS
<222>  (18355)..(18535)
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (18458)..(18458)
<223>  n is  c or t
 
<400>  1
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                               Met Ser Gln Ala Ala Lys Ala Ser           
                               1               5                          
 
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Ala Ser Ala Thr Val Ala Val Asn Pro Gly Pro Asp Thr Lys Gly Lys          
    10                  15                  20                           
 
ggg gcc cca cct gca gga aca tcc cct agt ccc ggc act acc ctg gcc       1828
Gly Ala Pro Pro Ala Gly Thr Ser Pro Ser Pro Gly Thr Thr Leu Ala          
25                  30                  35                  40           
 
cca aca acc gtg cct att acc agc gcc aag gcg gcg gaa ctg cct cct       1876
Pro Thr Thr Val Pro Ile Thr Ser Ala Lys Ala Ala Glu Leu Pro Pro          
                45                  50                  55               
 
ggg aac tac agg gtaaggacct gggggtgcag tggctgggtg ccatgccttc           1928
Gly Asn Tyr Arg                                                          
            60                                                           
 
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cctccgcacc tctttctcct cctttttctt ggcttatttt ctctcctttc tatttactct     2048
 
cccttttctt cttctccacc tccccagact cttatcctct gtccctattc tctttttccc     2108
 
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gctcatgcct gtaatcccag cactttggga ggccgaggca ggtggatcac ctgaggtcag     2288
 
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gctcactggg gcagcaggat ggcctcagac cctcaaaatt gctcgaggtg gtctgggctg     2768
 
aaaggcatcc tgtggagcaa ggtgtccagt cccctgggat ttggtttggt gtggtttcaa     2828
 
cctcaggtca cagaagtagg ccattttgca acccctagtt catgacacgc tctcatgtgg     2888
 
tcagtgcgtg gcaggttttt atttatgtac ctatttaatc attagtttta tttaatttct     2948
 
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ctgacaggat taagagatta aagtaaagac aggcatagga aagcacaagg gtattgattg     4448
 
gggaagtgat aagtgtccat gaaatcttta caatttatgt ttacagattg cagtaaagac     4508
 
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acaatccacg ttcttctgcc atggcttcag ccagttcctc cgtttggggt ccctgacttc     4628
 
ccgcaacatc ccggggcaca catacaggag tttctcttgg gcaaccaaag gtagaagtgg     4688
 
aagtgctggg tcatggttat atgaacctcc cctcctctta cagctgggga aactgaggct     4748
 
caaagaaggc agaaaattgt gccttggtcc atgtgaatgg caacgttgtc ccaacttgga     4808
 
acagcaagtg gacaaggaac caaacatgag gcttagtgag gagagaagat tagctcaagt     4868
 
tttcccctat gttgtggagg gttggatttg caagtgtctc ctgagcatca gctctgtggc     4928
 
aggtactggg gctggggctg gagatacaga aattgatcaa cctcaggccc tgccctggag     4988
 
gagtccttgg tctttggagg ggctgggtaa tgggagagag ggagtgcaga gagagaggga     5048
 
gaccccaaag caaaacagca gtgactgtgt ggtgggttag ttgtgctgct aatggggaga     5108
 
ggacagtggg ggatgctcaa ccaaggccga tggaggaagg ggcaatcaga gaaggcttcc     5168
 
tggagaaggt ggcacctgag cctaaaacag aataacgagc tggaatgcgt attagggaac     5228
 
ttcagttagg cagtgggagc tccaagctgg atatgtgtgg tggagaaggc attccaggca     5288
 
ggaggaatag cacaaagaaa ggcctgaaag ggaggttcat aagttcctaa tgatggcgca     5348
 
gatcttagct tcagaattag ggcatgaggc caggtgcaat ggctcatgcc tgtaatccca     5408
 
acactttggg aagccaaggc aggccaatca tttgagctca ggaattcgag accagcctga     5468
 
gcaacatggc aaaatcctgt ctctacaaaa aatagccagg catggtggtg ggtgcctgta     5528
 
atctcaacta ctcggaggct gaggtgggag gatcgcttga gcctgggagg cggaggttgc     5588
 
agtgagccat gattgcgcca ctgaacttca gctggggcga cagagtgaga ctcagaaaaa     5648
 
caaacaaaca aacaaaaaac aaaaatcagt aaagaattgg gggatgggag gacaggatca     5708
 
tttcacaaac tgtggctcat cacactttta tgtgactcct gcactgctgg cttttattta     5768
 
tgtagatact taatgaattt ttgactcccc cctcactctg cccttggcat gggggcttct     5828
 
ctcctgcag ctg gtg gtc ttc gaa ctg gaa aac ttc cag ggc cgt cga gca     5879
          Leu Val Val Phe Glu Leu Glu Asn Phe Gln Gly Arg Arg Ala        
                          65                  70                         
 
gaa ttc tcg ggg gag tgc tca aat ctg gca gac cgt ggc ttc gac cgt       5927
Glu Phe Ser Gly Glu Cys Ser Asn Leu Ala Asp Arg Gly Phe Asp Arg          
75                  80                  85                  90           
 
gtg cgc agc atc att gtc tcc gcg gga cc  gtgagtactg ggcggcggag         5976
Val Arg Ser Ile Ile Val Ser Ala Gly Pro                                  
                95                                                       
 
gggcacactc tctgccacag taaaatgacc acacaacagt agctgccatt tctccagcat     6036
 
ctgctctgtg cctgcggccg ttcgtactcc tggcacatac attatgtcca atcctcatat     6096
 
caaactgaag agggaggaat tgttctcaat ctcattttac ggatgaggaa actgaggctc     6156
 
ggagaggtga tccaattagc ataagatcac actggcagta agccatggtt ctgggctctg     6216
 
gagaaatgct gcttctacta tagcaaaaac tctagcccgg ccgggcgcgg tggctcacgc     6276
 
ctgtaatccc agcactttgg gaggccgagg cgggtggatc acgaggtcag gagatcgaga     6336
 
ccatcctggc taacaaggtg aaaccccgtc tctactaaaa atacaaaaaa ttagccgggc     6396
 
gtggtggcgg gcgcctgtag tcccagctac tcgggaggct gaggcaggag aatggcgtga     6456
 
acccgggaag cggagcttgc agtgagccga gattgcgcca ctgcagtctg cagtccggcc     6516
 
tgggcgacag agcgagactc cgtctcaaaa aaaaaaaaaa aacaaaaaaa aaaaaaacaa     6576
 
actctagccc attaccgagg gctgagagag gtcaaagagt gaagtgtcca ctcgctgtcc     6636
 
cctctcctgg gcgtccagct gcctgggagt aatgataagc atctgtggca cacccaccag     6696
 
gtgccaggca ctgactcggg accacaccta gatgattcac agtgctgtag gaggcagagg     6756
 
ctattcttat gcccacttga cagatggaaa gactgaggct cagagggggt gagtctctta     6816
 
cccaaggtca cctattggta agtggcacag ccaggattca actcaggttg attgagttca     6876
 
ttcctaaagc tcttaatcac catgcttcac tgcctgttcc tgtctctgtg ggtgtctctg     6936
 
ggccttagtg actcccatat aaaacaggga tagtcatcct tgggcagagt ggttgcccta     6996
 
tgtccagcct gtgtgtgctg aggtcagggt ggaggggcag ccccaggaca agatccacgc     7056
 
agctcgtttg ctcttgtctc ccccactttg aaagcctgca agggttccag tcatcctgta     7116
 
ttctgagccc attccgagat gagctttgag gtcagacaag cctgggtttg agtcctgact     7176
 
tcccctgttt gccttgttca gtgtgcaagc ctcagtttcc ccatctttga aatggggaga     7236
 
aggatggccc tcaccactcc tcacaggatt atgctgaggt ctgagggaga tcatacagca     7296
 
tgggcctgtt accttgtggg cacccaaaca tggcaggtga ctctgatggt cacgtaccca     7356
 
cctccctgcc cggtgaattt agccaactta tcctggaggc tacccgggac catttctacc     7416
 
tcctgcaccc tcagtgtggt caacgcagcc tcagctccac cctcagcccc aaaacccagc     7476
 
tggaagcaga agctaccgga tgtggccagc atgggttttc aggctttttt tggtaccagt     7536
 
gactcaaacc cagagtattt ctcctcaaac aaagatgcag ctggtgtctg acgtgtgcct     7596
 
tggagccgtg cctgatgggc atggaaacgg gcctgtggtc cgggggcctg ggtctgtgtg     7656
 
ggcgctggca gggccatggg aaaaaaagaa tgaagagggt gaggtaggca tggggaaagt     7716
 
gaggaggcct gcctgcctga aacccaggag actgcagcct gacacccaac accatcatgt     7776
 
gaccttaggc tggggactta acccctctta gcctcagttt ccatatctta taaattaaaa     7836
 
ttcctgccct accctctctc cctgcttgcg ggttgaaatg agccatggga gataagaaaa     7896
 
ggcatagata taaacattta aaatttagat cctcactggt cctgctgaag aagatagggg     7956
 
agattttagg gggacttggg catggtggca agaccacatc agtgtctgtt tttccagaag     8016
 
cctagacctc cagtttcctt ctccctttaa tcaggaacag tattaatttg gaggcttact     8076
 
ctgtgctgta tctgttccat gcattccctc ttttaggccc tcataatctc ccaacaaggt     8136
 
agatgcaaca aagtagatgt atcatttctt ctctgttact aaagcttagc aggtgtaagt     8196
 
gctgcccaaa tgcatgcagc aaatggcaaa gcttggatta gaattcaggt ctgtctgttt     8256
 
ccagggtctg tcctcttaac tcctacatga aaccaccttc caaggctccc ttcttattca     8316
 
cccatgcgtc tatccaccca tttattcatc atccatctac ttacccatgc atctacccat     8376
 
tcgtctattg atctatccat acatacatcc attctccatt tatacacacg tacccaccat     8436
 
gtgttctcca tcacccaccc atccatctat aaatctatcc atctacccac ccatccatct     8496
 
acccatctag ctatccatca attcaaccat cccttcatcc atccctttat ccatgcatcc     8556
 
attcatctgt ccatctaccc atccacctat ccatctattc aaccatcctt tcatccaccc     8616
 
atccatccac ccattcatct gtccatccat ccatctattc tcccatttat ttctcttcta     8676
 
ctccagacca gacagggctg aggcaaatgc aactctattc tgggaagaca aacatatctt     8736
 
taatttactc cagtgtggtt aactcatctc tcagacaaag acctgaggct cctgtgatgc     8796
 
attctgtctc agcccatggt gatagcccat catccttgtc tccttctggg gagagcaggg     8856
 
tcccagcagc cccctgggag aagatgctag tgtcagtgtc ccctcatccg tctctttttt     8916
 
cctaagaact cttgaacaca cggggagcaa aggtcaagga gttccttagt ctcagctttc     8976
 
tcatctacgg aatggggatt gtcttatcta ccccacctgc actgccacaa tccctggtcc     9036
 
ctgtaacaca agctcacttc ttgtccttaa tcaatcttca ctgggaaagc caggaaaatc     9096
 
ttccatctaa tttcaaactt ctaattagtc catgtaagga acctagcatc ttcataagcg     9156
 
ctatcacatt atattaccat aggtatctga gggtagatat taccatcatt cccttcccat     9216
 
tgcctcatac tagttactga gtatctcccg aataccaggc cagtatttac ccagcaagga     9276
 
tgcaaacacc tgtatcaatt tttcccttac ccctgtacct ccgagactgt cgttcattta     9336
 
atatatttca tttaaaatga tcctgctaac cacaaataaa cacattttaa aagaaccctg     9396
 
acaccacttt ttacaaatgg aaggctagta ttatttccta taagtaaaag gtatccatac     9456
 
aaaattaaca ataaacacaa aagtggtatt attatgttgc tattacacca ttgtctgctg     9516
 
gaggttctgg gctagtggtc ttttctctct ttgttacaaa agaaaaaaag gagagattag     9576
 
taagtgttaa aggcacatta acatcaaacg agcctttctc ctagctggcg tcaagtttca     9636
 
aatgtctatg tgttccttgg ctccaagtcc tgatagtact tgaagcatgt atgaacctta     9696
 
catctagaga aacagtgtgc tcagataatc acacacattt atctcactta atccttcacc     9756
 
aactccaagg aaacaggcat atgagtgtag atgagaaaca aaggctcaga gaggtaaagt     9816
 
cacttgccca tagtcacaca gcctgtaagt gtcagagcct aaaatcaaac ccagacatgt     9876
 
tcagccccct ttggactttc ctactgtcct cagggctgcc ttgccagggg agagagaaag     9936
 
gcaagtaggg agtgggggct tctactaacc atatgtctcc tgtctgcctc atggtccttc     9996
 
ttgtatccag c tgg gtc gcc ttt gag cag tcc aac ttc cgc ggg gag atg     10046
             Trp Val Ala Phe Glu Gln Ser Asn Phe Arg Gly Glu Met          
                             105                 110                     
 
ttc atc ctg gag aag ggc gag tac cct cgc tgg aac aca tgg tcg agc      10094
Phe Ile Leu Glu Lys Gly Glu Tyr Pro Arg Trp Asn Thr Trp Ser Ser          
    115                 120                 125                          
 
agc tac cgc agt gat cgg ctc atg tcc ttc cgg ccc atc aaa atg          10139
Ser Tyr Arg Ser Asp Arg Leu Met Ser Phe Arg Pro Ile Lys Met              
130                 135                 140                               
 
gtgagtggct ctccggctgg ggctggagaa tcagccaggc ggggcagggc aggtgtaagt    10199
 
ctgagatctg acaagggcaa gaaggagatg atggtgggta gggaggcgtg gcagcctccg    10259
 
agttgtcaaa ggaccgtgga ttcttgagct catcaattca tcagtgtcct taacacactc    10319
 
actacatacc cagctaggaa ccctgggcaa atgataagca caaaagcttc caagttagag    10379
 
ctaaaaactt cagcatcttc cttgattctc ttgatatccc tggctgcaca tttagacctt    10439
 
actgggagct tttttttttt ttttttttcc caaagatggg gttttgctgt gtcccccagc    10499
 
ctggtgtaca gtagtgtgat catagctcac tgcagccttg aactcctggc ctcaagtgat    10559
 
cctcccgcct gggcctccta aagtgctagg attacagccg tgagccacca tgccaggcct    10619
 
gggaaaactt ttcaaatttc agtgcccatt cgaaacacca aacatgctgg ttgcagatca    10679
 
tgcaatggct aagaagaggg atattgtagc cgggcatggt ggcccatgcc tgtaatccca    10739
 
gcactttggg aggctgaggt gggtggttac ccaaggtcag gagttcaaga ccagcctgat    10799
 
caacatgacg aaaccccgtc tttactaaaa atacaaaaat tagccgggcg tggtggcgca    10859
 
tgcctgtaat cccagctact agcaaggctg aggcaggaga attacttgaa cccgggagcc    10919
 
agaggttgca gtgagccgag atcatgccat tgcactccag ccggggtgac ggtgccagac    10979
 
tccatctcaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaag gagagggata ctgtagaaac gcagcttgaa    11039
 
cctcttaata ataagacaat atactgaatt agtttcttat aatatttaac taagtcaact    11099
 
tccagaagat tcaaggtcaa aatggtggcg atatctccaa gtgattcaca gttttttcca    11159
 
gaattaagtt gatgatgagt catgaaccag ctacatctta ctcaccaatg ttagttgctg    11219
 
atggtaaccg acttttgtct tccatgatgg gaacatttat aagaattttc atgaatgtgc    11279
 
atttgaggct atcaagtgcc aaccaccagc tgttttgaca tcaccaaatt tatcttaatg    11339
 
gattattcaa acagatcatt cccaacactt ttcgcagaat gtaagactga attatttgcc    11399
 
ttcatgatgc actctctgta agaattcaca gatgtctctc tcaatcattg aatggttctt    11459
 
atatgccaac ctatgttaag gggtttgttt ggaagagtga tcaaccaggg catttccagt    11519
 
agcttctaga agcttgctat tcaacataat aggcagtagc catatgtggc cattggacac    11579
 
ttgaattttg gctaaatgga gatgtgtcat aagtgtaaaa tacatattag gttttgaata    11639
 
catagtaaaa aaaattttaa agaatgtcaa caatgcattg atatcattat attggttaca    11699
 
tattgaaatt ataatatttt aggtatattt gtttaaataa aatatgttat tagaaatgtt    11759
 
tagaaatctc aaagcctaga ccccacccca gaccaattaa ttctgaatct ctagggctgg    11819
 
aactccggca ctgctatctt ttctatgccc tctaagtagt ccgtctgtgc agccagggct    11879
 
gagatccaac catctaattc aggggtgccc aatattttgg cttccctggc ccacgctgga    11939
 
agaattgtct tgggctacac ataaaataca ctatcactaa cgatagcgga tgagctttaa    11999
 
aacaattgca aaaaaaatct cataatgttt taagaaagtt cacaaatttg tgttgggcca    12059
 
cattcaaagc catcctgagc cacatgtggc ctgcaggccg caggttaaat aagcttggtc    12119
 
taacccttcc tctctctgcc ctgccacagt cctggtccag gccaccatca tctctgacct    12179
 
ggtcatcttc agctctctcc ctgctgggtt ccctgactcc tttccagccc cctgtcgtgg    12239
 
gaagttagag ggatcttttc aaaataaaaa aaaaaaataa acctgaccat cttctacttg    12299
 
aacccagaca ttttggttgg cctgtttcta ttttcctttt tttttttttt tttttttgag    12359
 
acacatctaa ctctgttgcc caggctggag tgtagtggca cgttctggct cactgcaacc    12419
 
ttcacctccc tggggcaagc aattctcctg cctcagcctc ccaagtagct gggattatag    12479
 
gtgtgcaccg ccacgcccag ataatttttg tattttttat agagacaggg tttcatcatg    12539
 
ttggccagga tggtctcaaa ctcctgatct caagtgatct acccgcctgg gcctcccaaa    12599
 
gtgctgggat tacaggcatg agccagtgcg cccaaccagt tggcctgttt ctgccaggct    12659
 
ctggttctag gctctgagtg caaaactgtg catcaaacag actaggtccc tgtcttcatg    12719
 
ggacttaagc tacccaggga ggcagctatc aaaaagctaa tcataaaaat ccatctacaa    12779
 
ttgcaaactg tggtaggtgt tacacaaagg ccatgcaatc taactaggaa agcagaagca    12839
 
ggaactgggg gctcagatat tgttagaggt gggagtggtc agggggtcat cagggaagcc    12899
 
agctcccaaa gtttggaaac caactcagcc acgtgaagag cagatggtaa agccttccag    12959
 
ggaacagtgt gtgcaaaact cctagagcaa cgatggactg gtgggaccaa gaaaattaaa    13019
 
ggtggccaac aaagctgcag cagagggagt ggaggaaaga gggaggcaag atgggagggg    13079
 
aggtggtggt ggagaccagg gtcttgtagg gtctcatagg tggtggcaag ttcagtcttg    13139
 
acccctctag cagtggggag ccattgacta acaaccttcc caaggccctc aagaccgtaa    13199
 
cagtaataag taatcattgt tgtactttta ccactggctg gtaattgcac taagggcatt    13259
 
tgtcttgcca tgccccaaag ggtcccctgt gcttacatcc ctgcctggca ccttgcactt    13319
 
gccttcctgc accctggcca cacagatatt gtcttgcaca ttcccacctc ccagcttttg    13379
 
cctatgcctt ctctgcctca gtgccttccc tcaaccctcc ttcccttctc agctttgtgc    13439
 
actcctcctt aacctccaag gtccctctct agtgtcactt cttccatgaa gccttccctg    13499
 
atctgctctg cttttctctg gaagaattaa ccagttcttt cttcatctat aatctcctac    13559
 
tggagtcttt cacagaagga tgcacttacg ttctgggctc ctcttcctcc tagtggtggt    13619
 
gaataacagt agataataac agtagataat cacagcatcc atttttaagc accaactacg    13679
 
tactgggtat attacctgcc ttttacataa tccctacaac tgtcctatgc tacaggctat    13739
 
gataacatgc attttaaaag caaggaaact gagactcaga agtagaaaat gactggccta    13799
 
aggccacaca gctgggagtt gctggggctg ggatttgaac caaggtctgt gggtttgaac    13859
 
ctagacactg aggtccggca tcactctgct atttcctgtt catctctttg gctcttcaaa    13919
 
cccttgggcc taaaacagtg catgatgact tttgaaaaga tggatgatcc ctgccctcag    13979
 
aaataacaga cgaactttaa aaacaagata cagggtcatg aaagcattaa aaataagtgc    14039
 
aagccagaac tgaatcatgt gcccacattc aagggtgggc ctggttgttt gtttgtttgt    14099
 
tttttgagac agagtcttgc tctgtcaccc aggctggagt gcagtgacac aatcttggct    14159
 
cactgcaacc tctgcctccc aggttcaagt gattctcctg cctcagcctc ctgagtagct    14219
 
gggactacag gtgcgtgcca ccacgcccag ctaattatta ttattattat tattattttg    14279
 
tatttttagt agagatgggg tttctccatg ttagtcaggc tggtctcgaa ctcctgacct    14339
 
tgtgatccca cccatcttgg cctcctaaag tgctgggatt acaggcgtga gccaccgcgc    14399
 
ccggccaggc ctgttttata gttggactga accgtgagtt gagtagccat gacaatccca    14459
 
cgaagcaata gtaaccccat tcttttttgt tgttgttgtt tgagacagtc ttgctctgtc    14519
 
gcccaggctg gagtgcagtg gtgtgatctc gcctcactgc aacctccacc tcccaggttc    14579
 
aagtgactct cctgcctcag cctcccgagt agctgggatt acaggcacat gtgattgcac    14639
 
ctggctaatt tttgcatttt tagtagagat ggggtttcac catgttggcc aggctggtct    14699
 
tggactcctg acctcaggtg atctacctgt ctcggcctcc caaagtgctg ggattacaga    14759
 
tgtgagccac catgcctggc aataacccca ttctacagat gaacaaactg aggctctgaa    14819
 
ggaggcagag taaaatgtcc aagatcacca gtgcataaat gtcagaggca ggatttgttt    14879
 
tttgtttttt tttttttttt tttgagacgg agtctcgctc tgttgcccag gttggtgtgc    14939
 
aagtggcacg atctcggctc actgcaagct ctgcctcctg ggttcacgcc attctcctgc    14999
 
ctcagcctcc caagtagctg ggactacagg ctcccaccac cacgcccggc taattttttt    15059
 
tgtattttta gtagagacgg ggtttcatcg tgttagccag gatggtcttg atctcctgac    15119
 
cacatgatct gcccgcctcg gcctcccaaa gtgctgggat tataggagtg agccatcgca    15179
 
cccggcctag aggcaggatt tgaacctaga tctgtgttcc accaatgttc cacgtttcac    15239
 
ctggtttgta agaagcattt acaaaagggc aattggttaa actcctgatg gcacagggac    15299
 
actgcttagg aatgaagtgt ttctctgaaa ggttctgccc ctccctggct gtgtgatgtt    15359
 
gatcaataag cttgacctct ctgagccttt ttgtccctga tcataatttt aaaaataata    15419
 
aatacttttt ttttttttga gacagggtct tgctctgtca cccaggctgg agtgcagtgg    15479
 
tgtaatcata tctcgctgca gcctcaactt cctgggctca agcaatcctc ctgcctcagc    15539
 
cttccaagta gctgagacta caggcatgca ccaccatgcc tggcaaatta aaaaaaaaat    15599
 
tatttttttg agagacagga tcttgctatg ttgcccaggc tggtcttgaa cccttggcct    15659
 
caagcagtcc tcccacctgg gcctctcaaa gtgctggaat tacagacatg agccatggca    15719
 
cccggccaat aaatgcattt attgagcact tgatgtatgc caggcatcgt gctcagtgct    15779
 
ctatatggat acactcattt catcctcacg aggaccctat gacgtgggag ttgtcatccc    15839
 
attttcctta tgtctccttc cagactagac agcagtggtc cctggagagt cccccagcag    15899
 
cctgaacagg ctcatctctc tcgctccaca cccagaaggc cccgctaagt ttcttctctt    15959
 
tgtcccattt gtacttcaca cacctgaccc ggcctctctt tccccag gat gcc cag      16015
                                                    Asp Ala Gln          
                                                    145                  
 
gag cac aaa atc tcc ctg ttt gaa ggg gcc aac ttc aag ggc aac acc      16063
Glu His Lys Ile Ser Leu Phe Glu Gly Ala Asn Phe Lys Gly Asn Thr          
        150                 155                 160                      
 
ata gag atc cag ggg gac gac gca ccc agt ctc tgg gtc tac ggc ttc      16111
Ile Glu Ile Gln Gly Asp Asp Ala Pro Ser Leu Trp Val Tyr Gly Phe          
    165                 170                 175                          
 
agt gac cgc gtg ggc agc gtg aag gtc tcc agt gga ac  gtaagcatcc       16159
Ser Asp Arg Val Gly Ser Val Lys Val Ser Ser Gly Thr                      
180                 185                 190                              
 
ctcctgccag gtccgcgtcc cctgcttcaa gcacaggcag aatcagaggc tgctcccctt    16219
 
acaggttata acatcagatt cctagagaag gccatggccc cttccacagt ctcccagtgc    16279
 
tggttcctgg gatcagccaa cagagctcta ttcctctggg gaatagagtc acactttgag    16339
 
gaattccagg tcagtgtaaa caaatcagct ctaaaaagct gttagatgga gaaaatagga    16399
 
gctgctaagc ctagttgggg ttgaaggagt aatcaactaa aagggccggc gctgatgtgg    16459
 
atagatgagg ctggatgcat ccaggagcag ggaatattca gggaaatcag aagcttctgg    16519
 
gagaatgaac agaatgagtt ctgagcagtg aatttgcatc ataagatggc cctgaccctg    16579
 
ctactgacat gctgaggaac tcgagtgagc ctaaacacct ctctgcctct cagtcttgcc    16639
 
agctaggcaa tgggcacaca aaattccctg atccaagagt gcccttcctg ctctgaacgc    16699
 
tcaggatctg aagctatcaa aacggagccc catgacctta tgtcatgaga atacatggaa    16759
 
gggccagatc aaaggagtca ctttatccat ccccctgcct ccaaatgacc atgccagaca    16819
 
cccttgatct cctctaggta aacgtaaggc tctgtctctc cattcccaga cttgttctga    16879
 
gctcctgtaa caccatcatg gctatggcct ttttcttgtt cctttctgcc tccctgaaac    16939
 
ctatatccct gccattcaag ccatctgaaa tatacggagc cttgtctgtg agccaggcac    16999
 
tgtgctaggt acactgggga aagcagcgat gaatacagcc aagttcctac cttcaaggaa    17059
 
cttacttggc ctagcaggga aacccagata tacctgtgag atggtgtcca acaatactag    17119
 
gtaaagaatg ggccagccag ggcaactgtg ttgtaggagg tcagaggagg agaggtttct    17179
 
aggatttggc tgtgtatgtt agggcagagg gcaggtcaaa ggtttatctg cagaggatgg    17239
 
aacttaaacc aggctttaca atatagggag ggggtctggc agaagcctgg aaagaccctc    17299
 
tcagcaaaga caatgagaga agttagaaat taatcactga tgataacttc tattgagtgc    17359
 
ttactatgta ccaaggactg tgctaaccac tttaaatgaa taactattaa atcttcataa    17419
 
caaaccaagg aggtgggtgc attatcatcc ccactgtaca gacagtacat tgaggttctg    17479
 
ataccttatc cacctagatt ctcacagcta gtaaatcaat ggcagagcta ggatttgaac    17539
 
ccacatatat ttgataccag agtatgtgtt cccagctgct acgcactgat gcacttacct    17599
 
acaaagaaaa ccaatttttt tttttttgag atggagtctc gctctgtccc tcaggctgga    17659
 
gtacagtggt gcaatctcag ctcactgcaa gctccgcctc ctgggttcac gccgttctcc    17719
 
tgcttcagtc tcccgagtag ctgggactac aggtgcccac caccacaccc tgctaatttt    17779
 
tttgtatttt tagtagagac ggggtttcac tgcattaacc aggatggtct cgatctcctg    17839
 
accttgtgat ttgcccgcct cagcctccct aagtgctggg attacaggct tgagccaccg    17899
 
cgcccagcca agaaaaccaa ttttttgaaa taacacttcc tctctttcat ttgcttcatt    17959
 
gttaaccagt ccctaagtcc tattcttgct tccttggatt tgttctctga gccctgcatc    18019
 
atcacgttta atgggatgtg tattcatatt cctaccatgc acaggcaaca tgcttagcaa    18079
 
acacttgagg tgcattctcc atttggtccc ccccagcact cttaataaaa ccaggcaccg    18139
 
tgaccatgct cacttcctag aaaaggaaac cgaggcctat cagagaggca aagtccttgc    18199
 
cccagggcac agagcaggaa gggatatagc caggacagaa gtgagagagc agccgactgc    18259
 
agggatcaat gaaggacagg ctggtctggc aggggtctgg gtgccaggca acgagacagg    18319
 
ctgtctccac tctgtccttc tcacttttct ctcag a tgg gtt ggc tat cag tat     18373
                                         Trp Val Gly Tyr Gln Tyr         
                                                 195                     
 
cct ggc tac cgc ggg tac cag tac ctc cta gag cct ggt gac ttc cgg      18421
Pro Gly Tyr Arg Gly Tyr Gln Tyr Leu Leu Glu Pro Gly Asp Phe Arg          
    200                 205                 210                          
 
cac tgg aat gag tgg gga gcc ttc cag cca cag atg nag tcc ctg cgt      18469
His Trp Asn Glu Trp Gly Ala Phe Gln Pro Gln Met Xaa Ser Leu Arg          
215                 220                 225                 230          
 
cgc ctg cgt gac aag cag tgg cac ctc gag ggg tcc ttc cct gtc ctg      18517
Arg Leu Arg Asp Lys Gln Trp His Leu Glu Gly Ser Phe Pro Val Leu          
                235                 240                 245              
 
gcc aca gag ccc ccc aag tgagtccaca cctcactctg ctaccttgcc             18565
Ala Thr Glu Pro Pro Lys                                                  
            250                                                          
 
ccaacccttc ttcatgttca attatttccc ccatttttcc caggcaaata aaattcccta    18625
 
aagcc                                                                18630
 
 
<210>  2
<211>  252
<212>  PRT
<213>  Homo sapiens
 
<220>
<221>  misc_feature
<222>  (227)..(227)
<223>  227位的'Xaa'表示Gln或氨基酸序列由此终止.
 
<400>  2
 
Met Ser Gln Ala Ala Lys Ala Ser Ala Ser Ala Thr Val Ala Val Asn
1               5                   10                  15     
 
 
Pro Gly Pro Asp Thr Lys Gly Lys Gly Ala Pro Pro Ala Gly Thr Ser
            20                  25                  30         
 
 
Pro Ser Pro Gly Thr Thr Leu Ala Pro Thr Thr Val Pro Ile Thr Ser
        35                  40                  45             
 
 
Ala Lys Ala Ala Glu Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Arg Leu Val Val Phe
    50                  55                  60                 
 
 
Glu Leu Glu Asn Phe Gln Gly Arg Arg Ala Glu Phe Ser Gly Glu Cys
65                  70                  75                  80 
 
 
Ser Asn Leu Ala Asp Arg Gly Phe Asp Arg Val Arg Ser Ile Ile Val
                85                  90                  95     
 
 
Ser Ala Gly Pro Trp Val Ala Phe Glu Gln Ser Asn Phe Arg Gly Glu
            100                 105                 110        
 
 
Met Phe Ile Leu Glu Lys Gly Glu Tyr Pro Arg Trp Asn Thr Trp Ser
        115                 120                 125            
 
 
Ser Ser Tyr Arg Ser Asp Arg Leu Met Ser Phe Arg Pro Ile Lys Met
    130                 135                 140                
 
 
Asp Ala Gln Glu His Lys Ile Ser Leu Phe Glu Gly Ala Asn Phe Lys
145                 150                 155                 160
 
 
Gly Asn Thr Ile Glu Ile Gln Gly Asp Asp Ala Pro Ser Leu Trp Val
                165                 170                 175    
 
 
Tyr Gly Phe Ser Asp Arg Val Gly Ser Val Lys Val Ser Ser Gly Thr
            180                 185                 190        
 
 
Trp Val Gly Tyr Gln Tyr Pro Gly Tyr Arg Gly Tyr Gln Tyr Leu Leu
        195                 200                 205            
 
 
Glu Pro Gly Asp Phe Arg His Trp Asn Glu Trp Gly Ala Phe Gln Pro
    210                 215                 220                
 
 
Gln Met Xaa Ser Leu Arg Arg Leu Arg Asp Lys Gln Trp His Leu Glu
225                 230                 235                 240
 
 
Gly Ser Phe Pro Val Leu Ala Thr Glu Pro Pro Lys
                245                 250        
 
 
<210>  3
<211>  23
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  3
ctggtctggc aggggtctgg gtg                                               23
 
 
<210>  4
<211>  23
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  4
tgaagaaggg ttggggcaag gta                                               23
 
 
<210>  5
<211>  30
<212>  DNA
<213>  人工序列
 
<400>  5
ccagccacag atgtagtccc tgcgtcgcct                                        30

Claims (5)

1.一种分离的核酸，其特征在于，所述分离的核苷酸序列是SEQ ID NO:1 所示的序列，且第18458位的核苷酸为T。
2.一种分子标记，其为权利要求1所述分离的核酸。
3.一种用于辅助诊断白内障的试剂盒，其为：1）检测基因组的PCR试剂盒，或2）检测mRNA的荧光定量PCR试剂盒，或 3）Northern 检测试剂盒；所述试剂盒包括序列为SEQ ID NO.3和4的引物对。
4.一种检测人CRYBB1基因突变的引物对，其核苷酸序列如SEQ ID No.3和4所示。
5.一种寡核苷酸探针，其序列如SEQ ID NO.5所示。
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晶状体蛋白βB1基因错义突变引起常染色体显性遗传性白内障;唐思梦 等;《眼视光学杂志》;20090930;第11卷(第5期);346-349 *
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