CN102379956A - 一种更加安全的鱼腥草注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种更加安全的鱼腥草注射液，采用下述方法制备而成：取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用水蒸气蒸馏法制备蒸馏液；加入辅料制成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过28小时。

Description

一种更加安全的鱼腥草注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及中药领域，具体涉及一种更加安全的鱼腥草注射液及其制备方法。

背景技术

鱼腥草是中药三白草科多年生草本植物蕺菜(Howtingria cordata Thanb)的全草。现代药学研究表明，其含有葵酰乙醛、月桂醛、菠烯、月桂烯以及甲基正壬酮等挥发性成分。传统医学认为，其茎和叶可以入药，性微寒，味辛，归肺经，具有清热解毒，消肿排毒，利尿通淋之功效，主治肺痈吐脓、痰热咳喘、热痢热淋、痈肿疮毒等。鱼腥草在中医学早已经是传统药物。

近年来，人们对于鱼腥草进行了深入的研究，并开发出鱼腥草的注射液剂型。

早在上世纪60年代，我国科技人员即开始鱼腥草注射剂的研制，70年代开发成功并上市使用。该药是临床常用抗菌药物，具有不产生抗药性、价格低廉等优点，也是传统中药发展为现代中药制剂的典型。该药在抗病毒、退热等方面疗效可靠、速度快，被称为“中药抗生素”。

卫生部标准(WS3-B-3264-98)公开了鱼腥草注射液的制备方法，即“取鲜鱼腥草2000g进行水蒸气蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液约1000ml，加入7g氯化钠及5g聚山梨酯80，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌，即得。”

鱼腥草注射液因疗效突出而逐渐成为临床抗感染的重要治疗药物。但是随着广泛使用，其不良反应的报道也不断增多。

从国家药品不良反应监测中心数据库收到的使用鱼腥草注射液等注射剂的不良反应病例报告来看。主要的严重不良反应表现为过敏性休克、全身过敏反应和呼吸困难等，并有死亡病例发生。主要包括皮肤和全身过敏反应，临床表现为皮疹、剥脱皮炎；咳嗽、口干、气促、呼吸困难、急性肿水肿；恶心、呕吐；过敏性休克、过敏性哮喘、喉头水肿等。(连纯钢，薛佩华，孔德风，等.鱼腥草注射液引起过敏反应2例.药物不良反应杂志，2001，3(3)：198-20)

据报道，鱼腥草注射液每年产值在85亿元左右，2005年注射人次达到6亿。2006年6月，国家食品药品监督管理局叫停了鱼腥草注射液等7个注射剂品种，全国195家鱼腥草注射药品生产企业在06年估计损失20亿元。其最严重的问题是过敏性休克急性死亡。

研究表明，中药材在储运过程中由于环境温度、湿度等原因产生霉变，不仅影响其中有效成分的含量，而且还会产生毒素，引起产品的不良反应。

截至目前，还没有一种好的办法能有效地解决鱼腥草注射液引起不良反应的问题。

发明内容

本发明目的在于，克服现有技术的缺陷，提供一种鱼腥草注射液，该注射液具有制剂稳定、不良反应低等优点。

本发明另一目的在于提供了该鱼腥草注射液的制备方法。

采用下述方法制备而成：

取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液：将新鲜的鱼腥草药材用水蒸气蒸馏后，再将得到的蒸馏液重蒸馏，得到重蒸馏液；加入聚山梨酯80和氯化钠，混合均匀，加入注射用水调节体积，滤过，灌封，制备成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过28小时。

优选的，采用下述方法制备而成：

取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液：初次蒸馏提取得到的蒸馏液与新鲜鱼腥草的体积/质量比(v/w)为1∶0.5～1.5，重蒸馏提取的重蒸馏液与新鲜鱼腥草体积/质量比(v/w)为1∶1.5～2.5；加入0.05％～0.2％(按照鱼腥草药材的重量计)的聚山梨酯80和0.3％～0.45％(按照鱼腥草药材的重量计)的氯化钠，混合均匀，加入注射用水调节体积，滤过，灌封，制备成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过26小时。

最优选的，采用下述方法制备而成：

取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液：初次蒸馏提取得到的蒸馏液与新鲜鱼腥草的体积/质量比(v/w)为1∶1，重蒸馏提取的重蒸馏液与新鲜鱼腥草体积/质量比(v/w)为1∶2；加入0.125％(按照鱼腥草药材的重量计)的聚山梨酯80和0.45％(按照鱼腥草药材的重量计)的氯化钠，混合均匀，加入注射用水调节体积，滤过，灌封，制备成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过24小时。

需要说明的是，以上产品所述的“体积/质量比(v/w)”为蒸馏液的体积和新鲜鱼腥草的质量之比，单位分别为体积(L)/质量(kg)，或者体积(ml)/质量(g)。

所述聚山梨酯80满足下列要求：

颜色为无色至淡黄色，酸值≤2.0，皂化值为45～55，酸碱度为5.0～7.5，水分≤1.0％，炽灼残渣≤0.15％，过氧化值≤10，砷盐≤0.0002％，肉豆蔻酸≤1.0％，棕榈酸≤2.0％，棕榈油酸≤1.0％，硬脂酸≤2.0％，油酸≥90.0％，亚油酸≤3.0％，亚麻酸≤1.0％，环氧乙烷≤0.0001％，二氧杂环≤0.001％，每1mg中含内毒素的量小于0.6EU，溶血与凝集：取本品适量，精密称定，加水制成6mg/ml的溶液作为供试液，不得溶血。

本发明鱼腥草注射液中，每1ml注射液中相当于鱼腥草原药材量2g。

本发明一种更加安全的鱼腥草注射液的制备方法，由以下步骤组成：

取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液：将新鲜的鱼腥草药材用水蒸气蒸馏后，再将得到的蒸馏液重蒸馏，得到重蒸馏液；加入聚山梨酯80和氯化钠，混合均匀，加入注射用水调节体积，滤过，灌封，制备成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过28小时。

优选的，由以下步骤组成：

取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液：初次蒸馏提取得到的蒸馏液与新鲜鱼腥草的体积/质量比(v/w)为1∶0.5～1.5，重蒸馏提取的重蒸馏液与新鲜鱼腥草体积/质量比(v/w)为1∶1.5～2.5；加入0.05％～0.2％(按照鱼腥草药材的重量计)的聚山梨酯80和0.3％～0.45％(按照鱼腥草药材的重量计)的氯化钠，混合均匀，加入注射用水调节体积，滤过，灌封，制备成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过26小时。

最优选的，由以下步骤组成：

取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液：初次蒸馏提取得到的蒸馏液与新鲜鱼腥草的体积/质量比(v/w)为1∶1，重蒸馏提取的重蒸馏液与新鲜鱼腥草体积/质量比(v/w)为1∶2；加入0.125％(按照鱼腥草药材的重量计)的聚山梨酯80和0.45％(按照鱼腥草药材的重量计)的氯化钠，混合均匀，加入注射用水调节体积，滤过，灌封，制备成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过24小时。

需要说明的是，以上方法所述的“体积/质量比(v/w)”为蒸馏液的体积和新鲜鱼腥草的质量之比，单位分别为体积(L)/质量(kg)，或者体积(ml)/质量(g)。

本发明鱼腥草注射液中，每1ml注射液中相当于鱼腥草原药材量2g。

所述聚山梨酯80满足下列要求：

颜色为无色至淡黄色，酸值≤2.0，皂化值为45～55，酸碱度为为5.0～7.5，水分≤1.0％，炽灼残渣≤0.15％，过氧化值≤10，砷盐≤0.0002％，肉豆蔻酸≤1.0％，棕榈酸≤2.0％，棕榈油酸≤1.0％，硬脂酸≤2.0％，油酸≥90.0％，亚油酸≤3.0％，亚麻酸≤1.0％，环氧乙烷≤0.0001％，二氧杂环≤0.001％，每1mg中含内毒素的量小于0.6EU，溶血与凝集：取本品适量，精密称定，加水制成6mg/ml的溶液作为供试液，不得溶血。

中药材从生产到使用，必然经历储存和运输等阶段。在此过程中，由于储存条件的变化会引起药材的霉变甚至影响其中有效成分的含量。因此，由于药材霉变引发的药物自身物质的降解一直是影响鱼腥草注射液安全使用的主要原因之。

本发明针对鱼腥草药材的特点，选择了新鲜鱼腥草的贮藏条件。结果表明，GAP基地采收的鱼腥草药材，贮藏时间不超过24小时，贮藏温度不超过30℃。采用该方法得到的新鲜鱼腥草药材制备的鱼腥草注射液质量稳定，使用更安全、更稳定、无毒副作用。

其次，鱼腥草注射液中毒性反应还与其中含有的辅料密切相关。雷蕾等[雷蕾，蒲旭峰，杨奎等]，鱼腥草注射液静脉给药不良反应的实验研究1-犬静脉给药不良反应研究，中药药理于临床，2007，23(5)：131-133]发现，犬静脉给与鱼腥草注射液、聚山梨酯80氯化钠注射液后均在10分钟内出现烦躁、皮肤瘙痒、面部及皮肤红斑等严重不良反应。

针对这一问题，本发明通过调整鱼腥草药材的存储条件，使得鱼腥草药材更加稳定，从源头上更好地保证了产品的质量。

同时，通过大量研究减少聚山梨酯80的用量，最大限度减少鱼腥草注射液不良反应发生率。

并且，通过大量研究后控制聚山梨酯80的质量，使得本发明鱼腥草注射液的质量进一步取得了更好的效果。包括：

(1)高油酸的质量要求：使油酸原料中油酸的含量超过90％，以满足产品脂肪酸组成检测项下高油酸组成的要求，降低非油酸组分的含量，产品的油酸组成已经可以满足欧洲药典的要求，有效地避免了因油酸质量变化对产品纯度的影响。

(2)提高山梨醇酐的质量要求：通过生产工艺的改进，提高了山梨醇酐的含量，降低了水份量，减少了聚糖酐含量，使原料色泽变浅。

(3)采用高超的乙氧基化技术，产品分子量分布窄，产品中环氧乙烷和二噁烷等有害物质残留几乎为零，符合欧美药典标准。

(4)采用高效酯化催化剂，酯化转化率高，产品色泽浅，无需化学脱色(双氧水)处理，过氧化值容易达到药典标准，安全性更好。

(5)生产过程的无菌、无热原控制，符合注射用辅料的基本要求。

在此基础上，参考EP标准，建立了聚山梨酯80的质量标准，增加了脂肪酸含量的控制及环氧乙烷与二氧六环的限量检查。大幅度的提高了聚山梨酯80的质量。

试验例一鲜鱼腥草贮藏时间和条件进一步研究

1实验目的

通过本次研究，对刚采收的新鲜鱼腥草采用不同的时间和条件进行贮藏，并通过对鱼腥草整个贮藏过程中外观变化情况进行观察、测定鲜鱼腥草不同贮存期指标性成分含量及断定贮存期致腐微生物类别，基本搞清楚鱼腥草贮藏过程中指标性成分变化规律，贮藏过程中影响鱼腥草质量的主要因素，并找寻到对其控制的有效方法，从而保证鱼腥草贮藏过程的可控，为确定鲜鱼腥草的最佳贮存期和最佳贮存条件提供依据，以期与种源、栽培、田间管理、采收等研究形成一个完整研究链条。

2实验内容

对鱼腥草采收、加工、贮存过程中外观变化情况进行观察；采用气相色谱法对指标性成分进行检测；以鲜鱼腥草为研究对象，针对贮藏过程中腐烂变质鱼腥草进行微生物变化情况的研究，确定在鱼腥草贮藏过程中引起腐烂的微生物的类别。

3实验方法

3.1取样方法

为了保证实验的准确性，对整个实验进行三次重复。每次实验对鱼腥草采挖时间、天气状况、贮存地点、贮存时间、指标性成分含量检测取样编号和微生物实验取样时间做相应记录，见表1。

表1实验采挖取样实验记录表

3.2外观性状的观察

在采收、加工、运输、贮存过程中，分别在采收后、加工后、运输后和贮藏过程中进行外观性状观察，贮藏过程中每隔12小时观察一次，每次观察做好相应外观性状记录和照片收集，同时对贮藏过程中料堆中部的温度变化进行监测。

3.3贮存过程中堆内外温度的测定

贮存过程中每次含量测定取样时，对取样堆内温度和堆外温度进行测定记录。

3.4指标性成分含量检测

在上述进行外观性状观察的同时，取样进行4-甲基-1-异丙基-3-环己烯-1-醇、2-(4-甲基-3-环己烯基)异丙醇、甲基正壬酮3个指标性成分含量检测，样品从有标识的鱼腥草中随机取，每次取样量为1kg，取样的截止时间为鱼腥草出现腐烂时。为了保证能真实反应样品含量变化情况，在基地取的样品在基地实验室进行提取。

3.5腐致微生物的研究

从堆中不同部位取腐烂样本，先进行外观症状初步判断由哪类微生物引起的腐烂，然后切取病健部交界处组织，制样，用显微镜观察，初步判断是由什么病菌引起的腐烂，再进一步进行致腐菌的分离和种类鉴定。

4实验结果及分析

4.1鲜鱼腥草贮存期外观性状分析

对贮存过程中的鲜鱼腥草每隔12小时，进行外观性状观察，三次重复的观察记录内容见表2。

表2鲜鱼腥草贮存期外观性状观察

从表2可以看出，3次贮存期外观性状观察实验结果均表明：鲜鱼腥草贮存24小时无黄叶及腐烂，比较新鲜；贮存36小时，出现少量黄叶；贮存48小时有腐烂叶出现；贮存60小时叶片腐烂情况较明显，根茎部也出现腐烂现象。在贮藏堆放观察的60小时内，重复1中的鲜鱼腥草地下部分无腐烂症状出现。

4.2贮存过程中堆内外温度的测定

对贮存过程中每次含量测定取样时堆内和堆内温度作测定记录，记录数据见表3：

表3贮存过程中堆内外温度测定记录表

从鲜鱼腥草堆放12个小时起开始测堆内温度和气温，从表3可以看出，从第12个小时起，堆内温度明显高于同一时间的气温，并且随着贮藏时间的增加，温差越来越大，甚至可以达到20℃，究其原因一是堆内散发的热量不易散失，二是随着腐生性微生物的增加，这些微生物代谢也会释放热量使堆内温度升高。

4.3鲜鱼腥草贮存期不同时间段指标性成分含量分析

对鲜鱼腥草贮存期不同时间4-甲基-1-异丙基-3-环己烯-1-醇、2-(4-甲基-3-环己烯基)异丙醇、甲基正壬酮3种指标性成分含量进行测定，检测数据见表4：

表4三次实验指标性成分检测数据记录

从上述表2、3、4数据可以看出：4-甲基-1-异丙基-3-环己烯-1-醇呈现出“先降后升”的变化趋势，即在前48小时随着储藏时间的推移，含量降低，第48小时降低到最低，之后又升高；2-(4-甲基-3-环己烯基)异丙醇含量整体表现为降低的趋势；甲基正壬酮的含量则整体表现为“先升后降再升”的变化趋势，储藏到24小时、36小时时含量比第12小时时高，到第48小时的时候含量降到最低，贮存60小时后含量又升高。

对不同储藏条件(重复2和重复3)进行对比分析，在贮藏相同时间时，3个指标均表现为重复3比重复2的含量高，主要是可能是因为重复3是在阴凉条件下贮藏，重复2的贮藏条件为露天。

4.3鲜鱼腥草致腐微生物种类鉴定

经过致腐原因初判、致腐菌分离、致腐菌种类鉴定、分离致病菌的致腐性测定和温度对致腐菌生长的影响等几个步骤，得出三次重复中引起鲜鱼腥草霉变、腐烂原因，并鉴定出了致腐微生物种类，见表5。

表5鲜鱼腥草霉变、腐烂原因及致腐微生物种类

第一次重复确定了致腐病原细菌为欧氏杆菌属的胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwiniacarotovora)。据文献报导，该菌为害植物的种类很多，是植物及其产品在运输和贮藏过程中引起腐烂的主要病原细菌，致腐细菌能适应室外堆内较高温度，并引起腐烂。

第二次实验确定了致腐病原真菌有五种，其中引起霉变的主要是呈蓝绿色的萨氏曲霉，这五种真菌，除白绢病菌外，其余几种真菌均是很强的腐生性真菌，能引起很多植物材料在贮运过程中霉变的真菌。

第三次实验鉴定出引致鱼腥草霉变腐烂的放线菌为链霉菌属的二种放线菌：白孢类群放线菌和吸水类群放线菌，前者是主要致腐放线菌，这二种放线菌喜较高温度。

由此可见，引起鲜鱼腥草的腐烂的微生物种类复杂，只是在不同的在不同的温湿度条件下，引起腐烂的优势菌群不同。

5结论

3次重复对贮存期鲜鱼腥草外观性状的观察结果表明：鲜鱼腥草贮存24小时无黄叶及腐烂，比较新鲜；贮存36小时，出现少量黄叶；贮存48小时有腐烂叶出现。

3次重复中，鲜鱼腥草2-(4-甲基-3-环己烯基)异丙醇和甲基正壬酮3格指标性成分含量在储存过程中呈现不同的变化趋势，但均表现为到第48小时时含量最低，之后呈现上升的趋势。

在对引起鲜鱼腥草腐烂的病菌分析中，可以看出细菌、真菌和放线菌的一些种类均可引起鱼腥草的腐烂，在不同的采收和储藏条件下，引起腐烂的优势菌群不同。通过对3类致腐菌对温度敏感程度的分析，除白绢病菌(为鱼腥草田间病害常)外，其余病菌均在35℃左右生长最好，这也与鱼腥草贮藏过程中堆内温度35℃左右出现腐烂症状相一致。

在鲜鱼腥草的贮藏过程中，综合外观性状、含量和致腐微生物分析，为了保证鱼腥草的质量，鱼腥草的采收应选择在晴天或阴天进行，避免在雨天和晴天有露水的情况下进行采收；采收后应阴凉贮藏，贮藏过程中堆放不能过紧，堆内温度不能过高，最好控制在30℃以下；为了避免致腐微生物对鲜鱼腥草质量造成影响，鲜鱼腥草贮藏时间不宜超过24小时。

同时，本发明一种鱼腥草注射液所用的原药材采用了调整的鱼腥草贮存方法，确保了鱼腥草药材的稳定，进而使其注射液产品质量稳定，减少了热源反应，大大降低了临床试用过程中的不良反应。

试验例二鱼腥草全草储藏对鱼腥草注射液成品质量影响的研究

1、实验目的

通过对鲜鱼腥草全草储藏对鱼腥草注射液成品质量标响的研究，确定最佳临界储藏时间和堆内保持温度。

2、实验步骤

(1)分别取采摘12h、24h、36h、48h，堆内保持温度分别为25℃、30℃、35℃的鱼腥草原料，按照实施例1的方法制成注射液。

(2)按照药典标准，测定鱼腥草注射液各个质量指标。

3、实验结果

对合格成品鱼腥草注射液和设计的12组实验鱼腥草注射液，按照《中国药典》标准检测结果见表6。

4、结论

从表6研究可得出以下结论：

1、保存时间和保存温度，对鱼腥草注射液部分质量标准有很大的影响。

2、原料在堆内30℃以下状态下保存，在前24小时，pH值保持基本不变，但35℃状态下保存，pH值出现下降；在36小时后，pH值开始下降；其中堆内温度35℃下储藏时，在储藏到48小时，pH值下降到不合格。可能是因为随着细菌的滋生，鱼腥草中部分化学成分基团分解，生产挥发性有机酸，导致pH值有所降低。

3、从单体含量测定来看。原料储藏48小时的产品，4-甲基-1-异丙基-3-环己烯-1-醇含量基本不合格；原料储藏36-48小时的产品，2-(4-甲基-3-环己烯基)异丙醇和甲基正壬酮的含量也出现不合格，见表6。

4、在储藏24小时内，堆内保持温度在30℃以下，产品均合格，产品质量稳定。

综上讨论，认为原料从采摘后储藏前24小时，在三个堆内保持温度在30℃以下时，生产出来的注射液质量稳定，符合国家要求，故确定该条件为鱼腥草储藏条件为临界最佳(储藏温度小于30℃，储藏时间小于24小时)。

同时，与现有技术相比，本发明调整了氯化钠的用量，将氯化钠的用量变更为0.45％(相对于新鲜的鱼腥草药材)，使得鱼腥草注射液的原始渗透压以及稀释后(临床上，100ml鱼腥草注射液用250ml 5％葡萄糖注射液稀释)的渗透压均在280～310m mOsm，更适合临床使用。

试验例三鱼腥草注射液等渗调节的研究

按临床的方法，即100ml鱼腥草注射液用250ml 5％葡萄糖注射液稀释后考察了12批鱼腥草注射液渗透压。其中，样品1～6按照现有鱼腥草注射液标准制备，氯化钠的用量为新鲜鱼腥草药材的0.35％；样品7～12按照实施例1～6的方法制备。测定的渗透压结果，见表7。

表7、不同鱼腥草注射液中渗透压

试验例四多种吐温80严重不良反应的研究——食蟹猴类过敏试验

对2家企业生产的鱼腥草注射液，分别采用不同厂家、不同浓度吐温80做为增溶剂进行了比较研究。

1动物与材料

1.1实验动物

食蟹猴，体重4.5～6kg，雄性，由北京协尔鑫生物资源研究所提供，动物许可证号：SCXK(京)-0005。实验室环境：温度15～25℃，相对湿度40～60％。

1.2实验药品与试剂

本试验所用药品：①含0.125％(相对于新鲜鱼腥草药材)广州化学试剂厂生产吐温80的鱼腥草注射液，由湖南正清制药集团股份有限公司提供，严格按照药典标准制得鱼腥草重蒸馏液，再加入0.125％(相对于新鲜鱼腥草药材)广州化学吐温80，配成注射液，115℃灭菌30min，封装备用；②含0.125％、0.15％(相对于新鲜鱼腥草药材)南京威尔化工有限公司生产吐温80的鱼腥草注射液，均由四川雅安三九药业有限公司提供，严格按照药典标准制得鱼腥草重蒸馏液，再分别加入0.125％或0.15％浓度南京威尔吐温80，配成注射液，灭菌后封装备用。

吐温80：广州化学试剂厂，生产批号20081201-1；南京威尔化工有限公司，生产批号090901。

0.9％氯化钠注射液：北京双鹤药业，批号C200906092。

猴IgE、组胺ELISA试剂盒(48T)，美国Rapidbio Lab产品，生产批号：猴IgE 9B024s；猴组胺9B011s。

1.3主要仪器

输液泵，SK-600I，深圳深科医疗器械技术开发有限公司；GL-20B高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；全自动酶标仪：MULTISKAN MK3，Thermo，USA；电热恒温培养箱：DH4000A，天津泰斯特；MINI shaker：MH-1，kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER。2方法

2.1分组

将食蟹猴根据体重随机分组，每组3只，共4组。分别为：

A组：生理盐水组；

B组：含0.125％广州化学吐温80鱼腥草注射液组；

C组：含0.125％南京威尔吐温80鱼腥草注射液组；

D组：含0.15％南京威尔吐温80鱼腥草注射液组。

2.2试验方法

试验前3天观察食蟹猴的行为、毛色、精神状态及其大小便、饮食、摄水情况是否正常。试验开始前观察各组猴的眼睑、嘴、颈、腹部、四肢皮肤等情况，以及行为、步态、机体协调能力、精神状态等。动物固定后一次性给药，体积为40.0ml/kg，前肢静脉恒速滴注(速度为5ml/min，无菌操作)。给药前及给药后24h内观察每只猴的反应症状，记录症状出现时间、消失时间，并根据症状的轻重判定为典型、不典型及无症状。给药前及停药后10min取血检测组胺、IgE水平。若出现动物死亡，则立即进行解剖，肉眼观察各主要脏器有无明显异常，并对心、肝、脾、肺、肾、胸腺进行病理学检查。

2.3猴类过敏反应判断标准

2.3.1症状分级标准

类过敏试验的部分症状与试验操作、固定等因素导致动物惊恐、愤怒、挣扎、逃脱时出现的伴随表现较为相似，两者易于混淆而造成误判。故将给药后食蟹猴的表现分为典型症状、不典型症状及无症状3级。

表11猴症状分级标准

2.3.2猴类过敏反应判定标准

在判定受试药物是否可诱发食蟹猴出现类过敏反应时，需结合动物症状与血浆组胺值升高程度两个指标，进行综合判定。

表12猴类过敏反应判定标准

2.4数据处理数据均用

表示，各组之间的比较采用One-Way ANOVA(单因素方差分析)方法，方差齐性用Student-Newman-Keuls检验，方差不齐用TamhanesT2检验。P＜0.05为有统计学意义。

3结果

3.1症状分析

4组食蟹猴在给药后均未出现类过敏反应的典型症状，结果表明：2家企业生产的，分别使用0.125％、0.15％(相对于新鲜鱼腥草药材)浓度的2种国产吐温80配制的鱼腥草注射液，静脉滴注，均未诱发食蟹猴出现类过敏反应的典型症状。B组、C组各有1只猴在给药过程中出现以固定架搔挠面部，面部皮肽略显潮红的反应；D组1只猴给药时出现面部皮肤潮红轻肿、耳部红热等不典型症状。但这些症状少而轻，不能判定为类过敏反应的典型症状。

3.2血浆IgE

各组食蟹猴给药前、后血浆中IgE含量均低于ELISA试剂盒检测最低值0ug/ml，未发现规律性变化。

3.3血浆组胺

各组动物，仅B组(即含0.125％广州化学吐温80鱼腥草注射液组)血浆组胺升高64.27％，但未超过1倍以上。其他各组动物血浆组胺均无明显升高超过50％者。除B组一只猴药后组胺值升高至1.49ng/ml外，其余各只食蟹猴给药前、后血浆组胺值均低于1ng/ml。

表13各组食蟹猴给药前后血浆组胺含量变化情况

3.4食蟹猴类过敏反应判定结果

综合各组食蟹猴给药后的症状及血浆组胺值变化情况，结果显示：2个企业生产的，分别使用0.125％或0.15％浓度(相对于新鲜鱼腥草药材)的2种国产吐温80作为增溶剂的各组鱼腥草注射液，静脉滴注后，均未出现典型的类过敏反应。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步的阐述，并不对本发明限制。

实施例1

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入2.5g聚山梨酯80及9g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过24小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例2

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液1000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液800ml，加入2.5g聚山梨酯80及7g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过24小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例3

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液1000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液800ml，加入1.0g聚山梨酯80及8g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过20小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例4

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入2.5g聚山梨酯80及7g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过28小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例5

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液3000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入4.0g聚山梨酯80及8g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过20小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例6

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入2.4g聚山梨酯80及6.5g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮减时间不能超过24小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例7

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2500ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入2.5g聚山梨酯80及7.5g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过24小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例8

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入2.5g聚山梨酯80及6g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过24小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例9

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液800ml，加入2.5g聚山梨酯80及7g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过23小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例10

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入2.8g聚山梨酯80及7.5g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过24小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

实施例11

取鲜鱼腥草2000g进行水蒸汽蒸馏，收集初馏液2000ml，再进行重蒸馏，收集重蒸馏液1000ml，加入3g聚山梨酯80及9g氯化钠，混匀，加注射用水使成1000ml，滤过，灌封，灭菌即得。

其中，鲜鱼腥草为GAP基地原料，贮藏时间不能超过24小时，贮藏温度不能超过28℃。

所得鱼腥草注射液质量稳定，热源反应、有效成分含量符合质量标准要求。

Claims (18)

1.一种更加安全的鱼腥草注射液，采用下述方法制备而成：取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用水蒸气蒸馏法制备蒸馏液；加入辅料制成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过28小时。

2.权利要求1所述的注射液，其特征在于采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液，将新鲜的鱼腥草药材用水蒸气蒸馏后，再将得到的蒸馏液重蒸馏，得到重蒸馏液。

3.权利要求2所述的注射液，其特征在于初次蒸馏提取得到的蒸馏液与新鲜鱼腥草的体积/质量比(v/w)为1∶0.5～1.5，重蒸馏提取的重蒸馏液与新鲜鱼腥草体积/质量比(v/w)为1∶1.5～2.5。

4.权利要求1所述的注射液，其特征在于所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过26小时。

5.权利要求1所述的注射液，其特征在于所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过24小时。

6.权利要求1所述的注射液，其特征在于辅料为聚山梨酯80和氯化钠，其中，聚山梨酯80的用量为新鲜鱼腥草药材的0.05％～0.2％，氯化钠的用量为新鲜鱼腥草药材的0.3％～0.45％。

7.权利要求6所述的注射液，其特征在于聚山梨酯80的用量为新鲜鱼腥草药材的0.125％，氯化钠的用量为新鲜鱼腥草药材的0.45％。

8.权利要求6或7所述的注射液，其特征在于聚山梨酯80满足下列要求：

颜色为无色至淡黄色，酸值≤2.0，皂化值为45～55，酸碱度为5.0～7.5，水分≤1.0％，炽灼残渣≤0.15％，过氧化值≤10，砷盐≤0.0002％，肉豆蔻酸≤1.0％，棕榈酸≤2.0％，棕榈油酸≤1.0％，硬脂酸≤2.0％，油酸≥90.0％，亚油酸≤3.0％，亚麻酸≤1.0％，环氧乙烷≤0.0001％，二氧杂环≤0.001％，每1mg中含内毒素的量小于0.6EU，溶血与凝集：取本品适量，精密称定，加水制成6mg/ml的溶液作为供试液，不得溶血。

9.权利要求1所述的注射液，其特征在于每1ml注射液中相当于鱼腥草原药材量2g。

10.一种更加安全的鱼腥草注射液的制备方法，由下述步骤组成：取一定量的新鲜鱼腥草药材，采用水蒸气蒸馏法制备蒸馏液；加入辅料制成注射液；其中，所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过28小时。

11.权利要求10所述的方法，其特征在于采用两次水蒸气蒸馏法制备蒸馏液，将新鲜的鱼腥草药材用水蒸气蒸馏后，再将得到的蒸馏液重蒸馏，得到重蒸馏液。

12.权利要求11所述的方法，其特征在于初次蒸馏提取得到的蒸馏液与新鲜鱼腥草的体积/质量比(v/w)为1∶0.5～1.5，重蒸馏提取的重蒸馏液与新鲜鱼腥草体积/质量比(v/w)为1∶1.5～2.5。

13.权利要求10所述的方法，其特征在于所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过26小时。

14.权利要求10所述的方法，其特征在于所述新鲜鱼腥草药材的保鲜条件为：采收后的鱼腥草药材储藏于不超过30℃的温度下，时间不超过24小时。

15.权利要求10所述的方法，其特征在于辅料为聚山梨酯80和氯化钠，其中，聚山梨酯80的用量为新鲜鱼腥草药材的0.05％～0.2％，氯化钠的用量为新鲜鱼腥草药材的0.3％～0.45％。

16.权利要求15所述的方法，其特征在于聚山梨酯80的用量为新鲜鱼腥草药材的0.125％，氯化钠的用量为新鲜鱼腥草药材的0.45％。

17.权利要求15或16所述的方法，其特征在于聚山梨酯80满足下列要求：

颜色为无色至淡黄色，酸值≤2.0，皂化值为45～55，酸碱度为5.0～7.5，水分≤1.0％，炽灼残渣≤0.15％，过氧化值≤10，砷盐≤0.0002％，肉豆蔻酸≤1.0％，棕榈酸≤2.0％，棕榈油酸≤1.0％，硬脂酸≤2.0％，油酸≥90.0％，亚油酸≤3.0％，亚麻酸≤1.0％，环氧乙烷≤0.0001％，二氧杂环≤0.001％，每1mg中含内毒素的量小于0.6EU，溶血与凝集：取本品适量，精密称定，加水制成6mg/ml的溶液作为供试液，不得溶血。

18.权利要求10所述的方法，其特征在于其每1ml注射液中相当于鱼腥草原药材量2g。