CN102370691A - 风湿定中药制剂检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于制药领域，涉及一种风湿定中药制剂检测方法，特别涉及风湿定片的检测方法。所述检测方法包括对药物成分的鉴别方法和欧前胡素的含量测定方法。

Description

风湿定中药制剂检测方法

技术领域

本发明属于制药领域，涉及一种风湿定中药制剂检测方法，特别涉及风湿定片的检测方法。

背景技术

风湿定片收载于部颁药品标准(WS3-B-2297-97)，由八角枫、白芷、甘草、徐长卿等四味中药材组成，主要用于活血通络，除痹止痛、风湿性关节炎、类风湿性关节炎、颈肋神经痛、坐骨神经痛。白芷为本方中的主药之一，所含化学成分以挥发油、香豆素类为主，具有散风除湿，通窍止痛，消肿排脓之功效。现代药理实验表明白芷中所含欧前胡素为其重要活性成分之一，多采用HPLC法测定其含量来控制白芷药材及其成药质量。本品在原部颁标准中无含量测定方法，因此本控制方法建立高效液相色谱法测定欧前胡素的含量，可以更有效地控制该成药的质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种风湿定中药制剂的检测方法。

本发明所述检测方法，提高了风湿定中药制剂质量的专属性和质量稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。

本发明所述的检测方法，包括对药物成分的鉴别方法和欧前胡素的含量测定方法。

其中，所述药物成分的鉴别，包括以下3种方法：

a.取本品约5g，研细，加乙醚15ml，密塞，轻摇，在室温浸渍1小时，滤过，滤液自然挥干，残渣加丙酮0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性的5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。

b.取上述乙醚浸提后的药渣，挥去乙醚后加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液置水浴上挥去甲醇，加1％盐酸水溶液25ml，并转移至分液漏斗中，用氯仿振摇提取2次，每次15ml，弃去氯仿液，水层用氨试液调pH值至10，用氯仿振摇提取3次，每次15ml，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，蒸去氯仿，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取八角枫对照药材10g，加适量水煮沸1小时，滤过，滤液浓缩至10ml，用盐酸调pH值至2，自“转移至分液漏斗中，用氯仿振摇提取2次，……”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(90∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

c.取本品约5g，研细，加水50ml，置水浴中加热回流30分钟，滤过，取滤液用正丁醇提取2次。每次30ml，合并正丁醇液，加水40ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材同法制成对照药材溶液，另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取以上三种溶液各2ul，分别点于1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶冰醋酸∶甲酸∶水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

所述含量测定，包括以下步骤：

照高效液相色谱法(2005年版附录VID)测定

色谱条件与系统适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，甲醇-水(59∶41)；为流动相；检测波长为248nm；理论板数按欧前胡素峰计算应不低于3000

对照品溶液的制备：精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品适量，研细(过80目筛)，取2g，精密称定，精密加入30％-100％甲醇25-50ml，称定重量，超声处理30-70分钟，放冷，过滤，取滤液5ml，蒸干，残渣用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含白芷以欧前胡素(C16H14O4)计不得少于0.02mg(每片以0.22g计)。

本发明的风湿定中药制剂的检测方法，既增加了定性鉴别方法又增加了有效成份的含量测定方法，提高了风湿定中药制剂质量的专属性和质量稳定性，确保了人们用药的安全性和有效性。本发明的检测方法，检测速度快，准确性高。

具体实施方式

通过以下具体实施例对本发明作进一步说明，但不起到限制作用。

实验例1、欧前胡素含量测定方法的研究

(1)仪器与试药

高效液相色谱仪，包括岛津LC-10AT泵，SPD-10AVP双通道紫外检测器，岛津柱温箱，浙江大学液相色谱工作站，欧前胡素对照品(批号：11826-200410供含量测定用，中国药品生物制品检定所)甲醇为美国Tedia色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。待测药物样品为风湿定片(批号：090101江西济民可信药业有限公司)

2)色谱条件参照白芷药材含量测定

色谱柱：Penomenex Luna C18(2)4.6mm×150mm柱温：30℃流动相：甲醇-水(59∶41)；检测波长为248nm；流速：1.0ml/min

3)检测波长的选择

取欧前胡素对照品溶液，在200nm～400nm范围内扫描，结果在248nm处有最大吸收，故选择248nm作为检测波长。

4)超声处理溶剂的选择：分别以50％甲醇、甲醇作为溶剂，照含量测定项下操作，对样品(批号：090101)中欧前胡素的含量进行测定，结果见表1。

表1  溶剂对测定结果的影响

因此，选用甲醇作为溶剂

5)提取条件的的选择：分别称取待测样品进行超声处理、水浴回流处理，测定样样品(批号：090101)中欧前胡素的含量，结果见表2

表2  提取条件对测定结果的影响

因此，选用超声处理作为提取条件。

6)超声处理时间的选择：照含量测定项下操作，超声处理时间分别为30、40、50、60、70分钟，测定样品(批号为：090101)中欧前胡素的含量，结果见表3

表3  超声处理时间对测定结果的影响

因此，超声处理时间选用60分钟。

7)空白试验

按处方中药味的比例，自配有含风湿定片的空白制剂，按上述方法制成空白溶液，依法测定，结果空白溶液在与欧前胡素对照品相同保留时间处未见显色谱峰，故认为无干拢。

8)线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液(0.01021mg/ml)2、4、6、8、10ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品的进样(ug)为横纵标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表4

表4  线性关系实验数据(n＝5)

Y＝600000X-10064

R＝0.9993

结果表明：在0.02042～0.1021ug范围内呈良好的线性关系。

9)稳定性试验

精密吸取对照品溶液10ul，间隔一定时间进样，测定欧前胡素的峰面积，BSD为：1.11％，结果表明24小时内测定结果稳定，结果见表5。

表5  稳定性试验数据(n＝5)

10)精密度试验

精密吸取供试品溶液10ul，注入液相色谱仪，测定欧前胡素的峰面积，重复进样5次，结果RSD为1.43％，见表6

表6  精密度试验数据(n＝5)

11)重现性试验

照含量测定项下操作，对同一批号(批号：090101)样品5份进行测定，求得相对标准偏差RSD为0.47％，结果见表7

表7  重现性试验数据

12)回收率试验

用加样回收，精密称取已知欧前胡素含量的同一批号(批号：0901010.038mg/片)的供试品约1g，分别精密加阿魏酸对照品溶液(0.1021mg/ml)一定量，照含量测定项下操作，按下式计算回收率，结果见表8

表8  加样回收率实验数据(n＝6)

平均回收率为：98.81％  RSD为0.63％

实验例2、风湿定片中欧前胡素的含量测定

照上述含量测定的方法操作，测了10批风湿定片中欧前胡素的含量，结果见表9

表9  复方羊角颗粒阿魏酸的含量测定

测得风湿定制剂中欧前胡素的含量均在0.038mg/片以上，考虑到工业放大中的损耗误差，因此在最低含量的基础上，下浮20％，因此得到检测标准为风湿定制剂每片中含欧前胡素含量应不低于0.02mg。

实施例3、风湿定制剂质量检测的方法

1、鉴别检测方法

a.取本品约5g，研细，加乙醚15ml，密塞，轻摇，在室温浸渍1小时，滤过，滤液自然挥干，残渣加丙酮0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性的5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点。

b.取上述乙醚浸提后的药渣，挥去乙醚后加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液置水浴上挥去甲醇，加1％盐酸水溶液25ml，并转移至分液漏斗中，用氯仿振摇提取2次，每次15ml，弃去氯仿液，水层用氨试液调pH值至10，用氯仿振摇提取3次，每次15ml，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，蒸去氯仿，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取八角枫对照药材10g，加适量水煮沸1小时，滤过，滤液浓缩至10ml，用盐酸调pH值至2，自“转移至分液漏斗中，用氯仿振摇提取2次，……”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨试液(90∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

c.取本品约5g，研细，加水50ml，置水浴中加热回流30分钟，滤过，取滤液用正丁醇提取2次。每次30ml，合并正丁醇液，加水40ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取甘草对照药材同法制成对照药材溶液，另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取以上三种溶液各2ul，分别点于1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯∶冰醋酸∶甲酸∶水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2、含量测定：照高效液相色谱法(2005年版附录VID)测定

色谱条件与系统适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，甲醇-水(59∶41)；为流动相；检测波长为248nm；理论板数按欧前胡素峰计算应不低于3000

对照品溶液的制备：精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品适量，研细(过80目筛)，取2g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，过滤，取滤液5ml，蒸干，残渣用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含白芷以欧前胡素(C16H14O4)计不得少于0.02mg(每片以0.22g计)。

Claims (5)

1.一种风湿定中药制剂的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括对药物成分的鉴别方法和欧前胡素的含量测定方法。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述药物成分的鉴别包括以下3种方法：

a.取本品5g，研细，加乙醚15ml，密塞，轻摇，在室温浸渍1小时，滤过，滤液自然挥干，残渣加丙酮0.5ml使溶解，作为供试品溶液，另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4∶1环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性的5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；

b.取上述乙醚浸提后的药渣，挥去乙醚后加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液置水浴上挥去甲醇，加1％盐酸水溶液25ml，并转移至分液漏斗中，用氯仿振摇提取2次，每次15ml，弃去氯仿液，水层用氨试液调pH值至10，用氯仿振摇提取3次，每次15ml，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，蒸去氯仿，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取八角枫对照药材10g，加适量水煮沸1小时，滤过，滤液浓缩至10ml，用盐酸调pH值至2，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90∶10∶1氯仿-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取本品5g，研细，加水50ml，置水浴中加热回流30分钟，滤过，取滤液用正丁醇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，加水40ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材同法制成对照药材溶液，另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取以上三种溶液各2ul，分别点于1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比为15∶1∶1∶2乙酸乙酯∶冰醋酸∶甲酸∶水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述含量测定方法包括以下步骤：

照2005年版附录VID高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，以体积比为59∶41甲醇-水为流动相；检测波长为248nm；理论板数按欧前胡素峰计算应不低于3000

对照品溶液的制备：精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品适量，研细，取2g，精密称定，精密加入30％-100％甲醇25-50ml，称定重量，超声处理30-70分钟，放冷，过滤，取滤液5ml，蒸干，残渣用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含白芷以欧前胡素计不得少于0.02mg。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述药物成分的鉴别包括以下3种方法：

a.取本品5g，研细，加乙醚15ml，密塞，轻摇，在室温浸渍1小时，滤过，滤液自然挥干，残渣加丙酮0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹皮酚对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比4∶1环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以盐酸酸性的5％三氯化铁乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝褐色斑点；

b.取上述乙醚浸提后的药渣，挥去乙醚后加甲醇50ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液置水浴上挥去甲醇，加1％盐酸水溶液25ml，并转移至分液漏斗中，用氯仿振摇提取2次，每次15ml，弃去氯仿液，水层用氨试液调pH值至10，用氯仿振摇提取3次，每次15ml，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，蒸去氯仿，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；另取八角枫对照药材10g，加适量水煮沸1小时，滤过，滤液浓缩至10ml，用盐酸调pH值至2，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10μl、对照药材溶液8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比90∶10∶1氯仿-甲醇-浓氨试液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碘化铋钾试液；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

c.取本品5g，研细，加水50ml，置水浴中加热回流30分钟，滤过，取滤液用正丁醇提取2次。每次30ml，合并正丁醇液，加水40ml洗涤，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取甘草对照药材同法制成对照药材溶液，另取甘草酸单铵盐对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取以上三种溶液各2ul，分别点于1％氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以体积比15∶1∶1∶2乙酸乙酯∶冰醋酸∶甲酸∶水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

所述含量测定方法，包括以下步骤：

照2005年版附录VID高效液相色谱法测定

色谱条件与系统适应性条件以十八烷基键合硅胶为填充剂，以体积比59∶41甲醇-水为流动相，检测波长为248nm，理论板数按欧前胡素峰计算应不低于3000；

对照品溶液的制备：精密称取欧前胡素对照品适量，加甲醇制成每1ml含10ug的溶液，即得；

供试品溶液的制备：取本品适量，研细，过80目筛，取2g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理60分钟，放冷，过滤，取滤液5ml，蒸干，残渣用甲醇溶解转移至10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，即得；

测定法  分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；本品每片含白芷以欧前胡素计不得少于0.02mg。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述中药制剂为片剂。