CN102335227A - 一种治疗老年痴呆的药物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种治疗老年痴呆的药物及其制备方法,它是由阿魏酸、淫羊藿总黄酮、黄芪总皂苷、天麻素和人参总皂苷制备而成,本发明在经验方基础上,以中药多靶点治疗和西药治疗机制明确的理论为基础,研制出了一种疗效好、毒副作用小的治疗老年痴呆的药物,经实验研究表明,本发明药物可以明显改善衰老小鼠的学习记忆能力,有效降低AChE、Glu水平,提升ChAT、SOD、GSH-px活力,有效抑制MDA生成,降低Aβ1-40含量,减弱神经细胞凋亡程度。
Description
技术领域
本发明涉及药物技术领域,特别是涉及一种治疗老年痴呆的药物及其制备方法。
背景技术
阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)即老年痴呆,是老年人常见的一种多发慢性进行性神经退化性疾病,临床上表现为记忆障碍、失认、空间记忆能力损害、抽象思维和计算能力损害、人格和行为改变等特征。随着全球人口老龄化,AD的发病率呈逐年上升的趋势。由于缺乏有效的治疗手段,AD已成为继心、脑血管疾病和肿瘤之后第4位危害人类健康的致死性疾病。因此,寻找防治AD的有效药物已经成为生命科学中亟待解决的问题。
AD发病隐袭,早期不易察觉,后期才出现全面性大脑病理改变,具有多因素、多途径、多层次致病的特征,目前还缺乏明确有效的根治手段,而中药对于治疗一些慢性疾病,特别是西药疗效不佳的慢性疾病具有独特优势。大量经过中药治疗的AD患者,不仅智能状况大为改善,而且还能延年益寿,究其原因可能是中药能从多靶点、多途径、多层次来调节机体的平衡,符合AD的致病特征,而且还具有毒副作用小、不易耐药的作用特点。因此,从中药或天然草药中寻找治疗AD的有效药物成为21世纪AD药物开发的重要源泉。随着人们的目光聚焦于中药或天然草药,对传统中药及方剂的物质基础研究进入到一个新的阶段,从中确实发现了一批对AD确有疗效的有效中药成分,如石杉碱甲、天麻素、人参皂苷、三七皂苷、何首乌二苯乙烯苷、淫羊藿苷、五味子乙素、丹参素等,而且一部分已经被制成新的制剂在临床上使用并取得一定的成效。但总体而言,与现代医学治疗效果近似,其临床治疗显效率普遍不高,其原因可能重蹈了西药靶点单一的覆辙。因此,借鉴中药多靶点治疗AD和西药治疗AD机制明确的特点,提高中医药治疗AD疗效的关键,在目前来看可能在于如何有效地将基于不同作用途径和靶位治疗AD的中药有效成分进行整合,通过整合可能会提高疗效,得出新的效果。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有中药或西药治疗老年痴呆显效率普遍不高、治疗机制不明确的缺陷,结合中药多靶点治疗和西药治疗机制明确的优点,提供一种疗效好、毒副作用小的治疗老年痴呆的药物及其制备方法。
申请人在2008年根据临床经验方申请了一件名称为“治疗老年痴呆的中药制剂及其制备方法”的发明专利,申请号为200810300977.X,经临床验证,该经验方对老年痴呆的治疗确有疗效,申请人对该经验方的多种单味药材进行了抗老年衰老活性物质的研究,结果发现该经验方中当归、人参的有效成分阿魏酸、人参总皂苷能对抗Aβ毒性作用,淫羊藿中的有效成分淫羊藿总黄酮能降低拟AD大鼠模型海马内Aβ1-40的含量,天麻中的有效成分天麻素可拮抗兴奋性氨基酸神经毒性,黄芪中的黄芪总皂苷可能通过抑制β-分泌酶而降低Aβ的产生。因此,发明人优选了阿魏酸、天麻素、淫羊藿总黄酮、人参总皂苷、黄芪总皂苷5种对AD治疗确有疗效而作用机制有所不同的中药成分,按正交设计进行整合,以对学习记忆能力、老化相关酶的影响为评价指标,优选了最佳的配伍方(即组分中药)。
为了解决前述技术问题,结合上述理论分析,本发明采用如下的技术方案:
按照重量份计算,本发明治疗老年痴呆的药物是由阿魏酸100~150份、淫羊藿总黄酮100~140份、黄芪总皂苷100~140份、天麻素20~40份和人参总皂苷5~15份制备而成。
进一步的,上述药物是由阿魏酸120~130份、淫羊藿总黄酮115~125份、黄芪总皂苷115~125份、天麻素25~35份和人参总皂苷8~12份制备而成。
最佳的,前述治疗老年痴呆的药物是由阿魏酸125份、淫羊藿总黄酮120份、黄芪总皂苷120份、天麻素30份和人参总皂苷10份制备而成。
前述治疗老年痴呆的药物的制备方法:取阿魏酸、淫羊藿总黄酮、黄芪总皂苷、天麻素和人参总皂苷,加入辅料,按常规制剂工艺制成药物制剂。
上述技术方案中,阿魏酸、人参皂苷能对抗Aβ毒性作用,淫羊藿总黄酮能降低拟AD大鼠模型海马内Aβ1-40的含量,天麻素可拮抗兴奋性氨基酸神经毒性,黄芪总皂苷可能通过抑制β-分泌酶而降低Aβ的产生。在200810300977.X所述配方的基础上,申请人进行了大量实验,具体如下:
一、最佳配伍方的优选
1.1实验材料
1.1.1 组方的来源
阿魏酸、天麻素、人参总皂苷均购自南京泽朗医药有限公司,纯度分别为98.00%、97.19%、80.68%。
黄芪总皂苷的制备:见参考文献(刘昌福,中国农学通报,2010, 26(9): 97-101)。黄芪总皂苷以黄芪甲苷计,应为80.67%。
淫羊藿总黄酮的制备:取淫羊藿粗粉,加27倍量水,浸泡2h,煎煮3次(每次均加27倍量水),每次1h,过滤,得提取液,提取液用AB-8型大孔吸附树脂吸附,用纯化水洗脱至接近无色后再用3体积柱的20%酒精洗脱,然后用5体积柱60%酒精洗脱,接取60%酒精洗脱液,加入9体积倍的乙酸乙酯萃取,然后再加入10体积倍的正丁醇萃取,分别减压回收溶剂至稠膏后合并,70℃真空干燥,得淫羊藿黄酮。淫羊藿总黄酮以淫羊藿苷计,应为61%。
1.1.2实验动物
昆明种小鼠,雌雄各半,2月龄,体重18~22g,由贵阳医学院实验动物中心提供[合格证号:SCXK(黔):2002-0001]。动物进入实验室后,普通颗粒饲料饲养,自由饮水,室温18~24 ℃,相对湿度50~85%。
1.1.3药品与试剂
D-半乳糖 Amresco 批号:D8310
吡拉西坦片(Piracetam) 湖北华中药业有限公司 批号:2081204
益智组分中药(YZCCM) 自制
蛋白测定试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20090215
MDA试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20090714
SOD试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20090628
1.1.4 主要仪器设备
Morris水迷宫 成都泰盟科技有限公司
BI2000图像分析系统 成都泰盟科技有限公司
721 分光光度计 上海第三分析仪器厂
-80℃超低温冰箱 Forma Scientic, Germany
37℃水浴箱 北京长源实验设备厂
旋涡混匀器 姜堰市康健医疗器具有限公司
5810-R 型台式冷冻离心机 Eppendorf,Germany
1.1.5主要试剂配制
D-半乳糖溶液:用无菌生理盐水将其稀释至2.4mg/ml的浓度,备用。
Piracetam 溶液: 生理盐水溶解药片并配制成相应浓度的药物备用。
YZCCM溶液:用生理盐水溶解并配置成相应浓度的药物备用。
1.2.实验方法
1.2.1正交试验设计
本发明为了全面考察各组方不同配比对衰老模型小鼠的治疗效果,我们设计了五因素二水平的正交试验,研究治疗的最佳组方,实验方案见表1。正交设计结果如表2。
表1 正交试验设计方案
表2 正交试验结果
1.2.2 动物筛选
昆明种小鼠,雌雄各半。进行Morris水迷宫训练,淘汰学习成绩优秀(逃避潜伏期≤5秒)和极差动物(逃避潜伏期≥110秒),选出138只合格小鼠。
Morris水迷宫装置:水迷宫由圆形水池、安全平台和记录系统三部分组成。(1) 水池直径100 cm,高60 cm,水深30 cm,水温保持在24±2℃,加入奶粉使池水浑浊不透明,将水池分为四个均等象限,池壁上固定位置贴一小幅画作为参照物;(2) 安全平台直径10 cm,高28 cm,位置固定在第一象限半径中点,置于水面下1cm;(3) 记录系统为BI2000系统行为学检测模块。
实验分为定向航行实验(palce navigation test)及空间探索实验(spatial probe test)。检测前将小鼠置于无安全平台的水池中游泳2min,使其适应水环境。检测时将小鼠置于有安全平台的水池中,经BI2000图像处理系统自动记录游泳轨迹及时间。每次实验安全平台固定在同一位置。
定向航行实验:小鼠每天上午进行训练,历时5天。将小鼠从安全平台之外的三个象限任一入水点面向池壁放入水中,记录小鼠在120s内找到安全平台的时间(逃避潜伏期)和游泳路径长度(搜索距离),并让小鼠在平台上停留10s。超过120s找不到安全平台的记为120s,并引导小鼠上安全平台。
空间探索实验:第6天撤除安全平台,并将小鼠从同一入水点放入水中,记录120s内小鼠在原安全平台所在象限的搜索时间(探索时间),以及小鼠在原安全平台所在象限游泳距离占总距离的百分比(探索距离百分比)。
实验均于上午8点进行,保持实验室内安静,温度、光照强度尽量一致,周围参照物位置固定,测试前抚摸小鼠,使其安静,消除恐惧感,检测结束后用毛巾将小鼠擦干。以定向航行实验和空间探索实验的成绩,反映小鼠的空间辨别学习记忆水平。
1.2.3 动物分组及模型制备
1.2.3.1 动物分组及模型制备
Morris水迷宫训练成绩稳定后,将筛选合格的小鼠按训练成绩随机分为10组:正常对照组(NS 10ml·kg-1)、模型组(NS 10ml·kg-1)实验组(共8组,按实验设计剂量给药)。除正常对照组外,其余各组均采用皮下注射5%D-半乳糖溶液120mg/kg造模,造模同时按上述剂量灌胃给药,每天1次,连续8周。
1.2.3.2 学习记忆能力测试
模型制备前和实验结束前分别用Morris水迷宫进行定向航行和空间探索实验。检测指标:逃避潜伏期、搜索距离、探索时间和探索距离百分比,观察各组小鼠空间辨别学习记忆能力的变化情况。
1.2.3.3组分中药对衰老小鼠神经递质的影响
取半侧脑组织电子天平称重,按1:9(每1克脑组织加9ml冰生理盐水)的比例制成10%脑匀浆(匀浆过程始终处于冰水浴中)。将组织匀浆分成数份,低温离心机离心15分钟,(0 ℃,3500 r/min),取上清液置-80℃冰箱保存,备用。按试剂盒操作,检测乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性及谷氨酸(Glu)含量。
1.2.3.4 组分中药对小鼠氧化衰老相关指标的影响
按照2.5的方法制备脑组织匀浆,备用。按试剂盒操作,分别测定小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽转移酶(GSH-px)、丙二醛(MDA)的含量。
1.2.4 数据处理
实验数据均以±s表示,采用SPSS12.0统计软件的单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行统计学显著性分析,组间差异显著性采用单因素方差分析中的LSD(Least-significant difference)方法进行多重比较检验,P﹤0.05有显著性差异,P﹤0.01有非常显著性差异。
1.3 实验结果
表3显示正常小鼠分组前定向航行成绩(逃避潜伏期及搜索距离)在第4天后基本稳定。
表4 正常小鼠分组后各组定向航行成绩(逃避潜伏期及搜索距离,)
表4显示正常小鼠分组后定向航行成绩(逃避潜伏期及搜索距离)各组间均无显著性差异。
表5显示正常小鼠分组后定向航行成绩(搜索时间及探索距离百分比)各组间均无显著性差异。
表6显示,给药后模型组小鼠定向航行成绩(逃避潜伏期及搜索距离)明显延长,与正常组比有显著性差异(P< 0.01)。实验组3、实验组4、实验组8与模型组比较有显著性差异(P< 0.05)。
表7显示给药后模型组小鼠空间探索成绩缩短,与正常组比有显著性差异(P< 0.01)。实验组3和实验组4与模型组比较有显著性差异(P< 0.05或0.01)。
表8 显示,模型组小鼠脑组织中SOD活性降低,MDA含量升高,与正常组比较有显著性差异(P<0.05或0.01),实验组2、实验组3、实验组4灌胃给药后小鼠脑组织中SOD活性升高,MDA含量降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.05或0.01)
表9 正交试验设计表及结果
表10 组分中药正交设计方差分析表
注:*P<0.05。综合评分=MDA值倒数/MDA值倒数max*20%+Sod值/SODmax*20%+探索时间倒数/探索时间倒数max*15%+搜索距离倒数值/搜索距离倒数值max*15%+探索时间百分比/探索时间百分比max*15%+搜索距离百分比/搜索距离百分比max*15%。
由表9中极差值R大小可知,RB>RA>RC>RD>RE,影响因素大小顺序为B>A>C>D>E,因此B是影响益智组分中药药效学的重要因素,因素A次之,因素E影响最小;从表10方差分析可见,因素B对益智组分中药药效学具有显著意义(P<0.05),结合极差R值的大小综合分析,最佳益智组分中药组方为A1B2C2 D2E2,即阿魏酸125mg、天麻素30mg、人参总皂苷10mg、淫羊藿总黄酮120mg、黄芪总皂苷120mg。
二、对衰老模型小鼠的药效学评价
2.1.实验材料
2.1.1实验动物
昆明种小鼠,雌雄各半,2月龄,体重18~22g,由贵阳医学院实验动物中心提供[合格证号:SCXK(黔):2002-0001]。动物进入实验室后,普通颗粒饲料饲养,自由饮水,室温18~24 ℃,相对湿度50~85%。
2.1.2药品与试剂
D-半乳糖 Amresco 批号:D8310
吡拉西坦片(Piracetam) 湖北华中药业有限公司 批号:2081204
益智组分中药(YZCCM) 自制
蛋白测定试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20090715
MDA试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20090914
SOD试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20090928
Glu试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20091021
Ache试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20091102
CTAh 试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20091016
GSP-xh试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20091123
Anti-β-Amyloid 1-40 南京建成生物工程有限公司 批号:20090717
细胞凋亡试剂盒 南京建成生物工程有限公司 批号:20091102
抗体稀释液 南京建成生物工程有限公司 批号:20091024
DAB显色盒 南京建成生物工程有限公司
PBS缓冲液 南京建成生物工程有限公司
中性树胶 南京建成生物工程有限公司
2.1.3 主要仪器设备
Morris水迷宫 成都泰盟科技有限公司
BI2000图像分析系统 成都泰盟科技有限公司
721 分光光度计 上海第三分析仪器厂
-80℃超低温冰箱 Forma Scientic, Germany
37℃水浴箱 北京长源实验设备厂
旋涡混匀器 姜堰市康健医疗器具有限公司
5810-R 型台式冷冻离心机 Eppendorf,Germany
2.1.4主要试剂配制
1.4.1 D-半乳糖溶液:用无菌生理盐水将其稀释至2.4mg/ml的浓度,备用。
1.4.2 Piracetam 溶液: 生理盐水溶解药片并配制成相应浓度的药物备用。
1.4.3 YZCCM溶液:用生理盐水溶解并配置成相应浓度的药物备用。
2.2实验方法
2.2.2动物筛选
取Wistar小鼠80只进行Morris水迷宫训练,淘汰学习成绩优秀(逃避潜伏期≤5秒)和极差动物(逃避潜伏期≥110秒),选出80只合格小鼠。
2.2.3 动物分组及模型制备
Morris水迷宫训练成绩稳定后,将筛选合格的小鼠按训练成绩随机分为7组:正常对照组(NS 10ml·kg-1)、模型组(NS 10ml·kg-1)、阳性组(0.72g/kg)、高剂量组(H)、中剂量组(M)、低剂量组(D)。除正常对照组外,其余各组均采用皮下注射5%D-半乳糖溶液120mg/kg造模,造模同时按上述剂量灌胃给药,每天1次,连续8周。
2.2.4 学习记忆能力测试
模型制备前和实验结束前分别用Morris水迷宫进行定向航行和空间探索实验。检测指标:逃避潜伏期、搜索距离、探索时间和探索距离百分比,观察各组小鼠空间辨别学习记忆能力的变化情况。
2.2.5 组分中药对衰老小鼠神经递质的影响
取半侧脑组织电子天平称重,按1:9(每1克脑组织加9ml冰生理盐水)的比例制成10%脑匀浆(匀浆过程始终处于冰水浴中)。将组织匀浆分成数份,低温离心机离心15分钟,(0 ℃,3500 r/min),取上清液置-80℃冰箱保存,备用。按试剂盒操作,检测乙酰胆碱转移酶(ChAT)活性、乙酰胆碱酯酶(AChE)活性及谷氨酸(Glu)含量。
2.2.6组分中药对小鼠氧化衰老相关指标的影响
按照2.5的方法制备脑组织匀浆,备用。按试剂盒操作,分别测定小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽转移酶(GSH-px)、丙二醛(MDA)的含量。
2.2.7免疫组化检测
2.2.7.1 HE染色
采用 Harris苏木素染色液染色,步骤如下:
(1)组织常规固定,石蜡包埋,切片常规脱蜡。
(2)二甲苯(I)中脱蜡10分钟,二甲苯(II)中脱蜡10分钟(切片透明)。
(3)100%乙醇(I)5分钟,100%乙醇(II)5分钟,95%乙醇3分钟;流水2分钟,用吸水纸吸干水分。
(4)Harris苏木素 染色 4~8分钟;自来水稍洗。
(5)1%盐酸水溶液分化5~10秒(切片由蓝变红);自来水洗返蓝15~30分钟。
(6)0.5%伊红(水溶性)染色30秒~1分。
(7)80%乙醇(I)脱水5分钟,95%乙醇(II)5分钟,100%乙醇(I)5分钟,100%乙醇(II)2分钟。
(8)入二甲苯(I)中透明2~3分钟,二甲苯(II)中透明5分钟。
(9)中性树胶封片。
(10)镜下观察
2.2.7.2 Aβ1-40含量测定
采用SABC免疫组化法染色,步骤如下:
(1)组织常规固定,石蜡包埋,切片常规脱蜡。
(2)0.1MPBS洗2次,每次5分钟;3%后H2O2浸泡10分钟,去除过氧化物;双蒸水洗3次,每次5分钟。
(3)抗原修复;(微波修复法)将切片置于0.01M(PH6.0)枸橼酸钠缓冲液中微波加热至沸腾后断电,维持10分钟,加蒸馏水至原刻度后重复加热至沸腾,断电,室温自然冷却。
(4)0.1MPBS洗2次,每次5分钟;滴加5%封闭液,室温放置20分钟;甩去多余液体,滴加稀释后的一抗(1:200),4℃过夜。
(5)取出后0.1MPBS洗3次,每次5分钟;滴加生物素化羊抗兔IgG,37℃水浴孵育20分钟;0.1MPBS洗3次,每次5分钟。
(6)滴加SABC,37℃水浴孵育20分钟;0.1MPBS洗4次,每次5分钟。
(7)DAB显色15分钟,蒸馏水洗。
(8)苏木素复染;梯度酒精脱水(80%,95%,100%),二甲苯透明,每步各10分钟。
(9)中性树胶封片。阴性对照组用0.01MPBS液代替一抗,其余步骤相同。在40×10倍光学显微镜下,采集动物组织免疫组化切片的图像数据,输入BI2000图像分析系统进行图像分析。
平均灰度值(Mean Gradation,MG):每张切片(每例动物标本)随机选取5个区域(视场),每个视场(视场面积:443268 μm2)选取5个阳性表达区域测量MG,代表其阳性表达率,切片染色越浅MG越大,阳性表达率越低,取其均数和标准差进行统计分析。
2.2.7.3细胞调亡检测
操作步骤:(按试剂盒说明)
(1)样品处理:组织常规固定,石蜡包埋,切片脱蜡入水。
(2)新鲜配制3%H202室温处理,室温处理ro分钟。蒸馏水洗涤2分钟×3次。
(3)标本片加TBs l:100新鲜稀释proteinaseK37℃消化10-15分钟,蒸馏水洗涤2分钟×3次。
(4)标本片加标记缓冲液(labelingBuffer),20μl,以保持切片湿润。按每张切片取TdT和DIG-UTP各1μl,加入18μl 标记缓冲液中,混匀。甩去切片上多余液体后加标记液,20μl/片。置样品于湿盒中,4℃标记过夜。
(5)TBS洗2分钟×3次。
(6)加封闭液50μl /片,室温30分钟,甩掉封闭液,不洗。
(7)用封闭液1:100稀释生物素化抗地高辛抗体,50μl片加至标本片上。置样品于湿盒中,37℃反应30分钟。TBS洗5分钟×4次。
(8)DAB显色:取lμl蒸馏水,分别加入DAB试剂盒中A、B、C试剂各一滴,混匀后加至标本片上,显色10-30分钟左右,水洗。
(9)苏木素轻度复染。TBS洗,蒸馏水洗。脱水、透明、封片。在40×10倍光学显微镜下,采集动物组织免疫组化切片的图像数据,输入BI2000图像分析系统进行图像分析。
平均灰度值(Mean Gradation,MG):每张切片(每例动物标本)随机选取5个区域(视场),每个视场(视场面积:443268 μm2)选取5个阳性表达区域测量MG,代表其阳性表达率,切片染色越浅MG越大,阳性表达率越低,取其均数和标准差进行统计分析。
2.2.4 数据处理
实验数据均以±s表示,采用SPSS12.0统计软件的单因素方差分析(One-Way ANOVA)进行统计学显著性分析,组间差异显著性采用单因素方差分析中的LSD(Least-significant difference)方法进行多重比较检验,P﹤0.05有显著性差异,P﹤0.01有非常显著性差异。
2.3. 实验结果
2.3.1 动物分组
正常小鼠分组前后的定向航行成绩如表11、表12。其中表11显示正常小鼠分组前定向航行成绩(逃避潜伏期及搜索距离)在第四天后基本稳定。
注:组间无显著性差异。
2.3.2 学习记忆能力测试
表13显示,与正常组相比,给药后模型组小鼠定向航行时间和距离明显延长,空间探索时间和距离百分比变小;与模型组相比,YZCCM组小鼠定向航行时间和距离缩短,空间探索时间和距离百分比增大,并有显著性差异。
注:模型组与正常组相比,## 表示有显著性差异(P< 0.01);给药组与模型组相比,*表示有显著性差异(P< 0.05);**表示有显著性差异(P< 0.01)。
2.3.2组分中药Glu含量、ChAT和AchE活性的影响
表14显示,与正常组相比,模型组小鼠脑组织中ChAT活性减弱,AChE活性增强,Glu含量升高,并有显著性差异;与模型组比较,YZCCM灌胃给药后小鼠脑组织中ChAT活性增强,AChE活性减弱,Glu含量降低,并有显著性差异。
注:模型组与正常组相比,## 表示有显著性差异(P< 0.01);给药组与模型组相比,*表示有显著性差异(P< 0.05);**表示有显著性差异(P< 0.01)。
2.3.4 CCM对小鼠氧化衰老相关指标的影响
表15显示,与正常组比较,模型组小鼠脑组织中SOD、GSH-px活性减弱,MDA含量升高,并有显著性差异;与模型组比较,CCM灌胃给药后小鼠脑组织中SOD、GSH-px活性增强,MDA含量降低,并有显著性差异。
表15 CCM对衰老小鼠氧化衰老相关指标的影响()
注:模型组与正常组相比,## 表示有显著性差异(P< 0.01);给药组与模型组相比,*表示有显著性差异(P< 0.05);**表示有显著性差异(P< 0.01)。
2.3.5免疫组化检测结果
2.3.5.1 HE染色 常规病理学检查,观察海马及皮层形态变化。
2.3.5.1.1 海马形态:光镜下观察,正常组、阳性组小鼠海马锥体细胞排列紧密,结构清晰;模型组小鼠锥体细胞细胞层次减少,极性消失,排列极度紊乱,神经元体积增大,细胞核体积缩小,结构模糊、有核固缩、碎裂、消失。益智组分中药灌胃给药组小鼠海马神经元层次增多,核固缩、核碎裂均较模型组减轻。
2.3.5.1.2 皮层形态:光镜下观察,正常组、阳性组小鼠皮层细胞形态结构未见异常;模型组小鼠脑组织水肿明显,神经元数量减少,并有大量细胞出现空泡样变性坏死;益智组分中药灌胃给药组小鼠的皮质神经元数量增多,结构清晰,无明显神经元坏死特征。
2.3.5.1 Aβ1-40免疫组化染色后小鼠海马区病理学检查
2.3.5.2 Aβ1-40含量测定
表16显示, 与正常组相比,模型组小鼠海马和皮质区灰度值明显降低,并有显著性差异;与模型组相比,CCM灌胃给药后小鼠海马和皮质区平均灰度值升高,并有显著性差异。
注:模型组与正常组相比,## 表示有显著性差异(P< 0.01);给药组与模型组相比,*表示有显著性差异(P< 0.05);**表示有显著性差异(P< 0.01)。
2.3.6细胞调亡检测
2.3.6.1 细胞凋亡病理学检查
与正常组相比,模型组小鼠海马和皮质区神经细胞核内可见大量深染的棕黄色颗粒,即凋亡水平,平均灰度值明显减少,阳性细胞数增加,并有显著性差异;与模型组比较,YZCCM组神经细胞染色较浅,细胞结构较好,平均灰度值均明显增高,阳性细胞数减少。
2.3.6.2 CCM对衰老小鼠神经细胞凋亡的影响
表17显示,与正常组相比,模型组平均灰度值降低,阳性细胞数增加,并有显著性差异;与模型组比较,YZCCM组平均灰度值均升高,阳性细胞数减少。
注:模型组与正常组相比,## 表示有显著性差异(P< 0.01);给药组与模型组相比,*表示有显著性差异(P< 0.05);**表示有显著性差异(P< 0.01)。
与现有技术相比,本发明在经验方基础上,以中药多靶点治疗和西药治疗机制明确的理论为基础,研制出了一种疗效好、毒副作用小的治疗老年痴呆的药物,经实验研究表明,本发明药物可以明显改善衰老小鼠的学习记忆能力,有效降低AChE、Glu水平,提升ChAT、SOD、GSH-px活力,有效抑制MDA生成,降低Aβ1-40含量,减弱神经细胞凋亡程度。
具体实施方式
实施例1:阿魏酸125mg、淫羊藿总黄酮120mg、黄芪总皂苷120mg、天麻素30mg和人参总皂苷10mg,整合后加入适量改性淀粉,于 70℃真空干燥,再加入适量滑石粉后混匀,制粒,装胶囊,制成胶囊1000粒。
用法用量:口服,一日3次,每次2粒。
实施例2:阿魏酸110mg、淫羊藿总黄酮130mg、黄芪总皂苷110mg、天麻素28mg和人参总皂苷6mg,整合后加入适量淀粉和糊精,混合后加入60%乙醇过筛制粒,于 60℃真空干燥,再加入适量硬酯酸镁后混匀,压片,制成片剂1000片。
用法用量:口服,一日3次,每次2片。
实施例3:阿魏酸140mg、淫羊藿总黄酮110mg、黄芪总皂苷130mg、天麻素32mg和人参总皂苷11mg,整合后加入适量淀粉和糊精,混合后加入适量蒸馏水制粒,于 60℃真空干燥后整粒,制成颗粒剂后分装。
用法用量:冲服,一日3次,每次1袋,开水冲服。
Claims (4)
1.一种治疗老年痴呆的药物,其特征在于:按照重量份计算,它是由阿魏酸100~150份、淫羊藿总黄酮100~140份、黄芪总皂苷100~140份、天麻素20~40份和人参总皂苷5~15份制备而成。
2.按照权利要求1所述治疗老年痴呆的药物,其特征在于:它是由阿魏酸120~130份、淫羊藿总黄酮115~125份、黄芪总皂苷115~125份、天麻素25~35份和人参总皂苷8~12份制备而成。
3.按照权利要求2所述治疗老年痴呆的药物,其特征在于:它是由阿魏酸125份、淫羊藿总黄酮120份、黄芪总皂苷120份、天麻素30份和人参总皂苷10份制备而成。
4.按照权利要求1至3任一所述治疗老年痴呆的药物的制备方法,其特征在于:取阿魏酸、淫羊藿总黄酮、黄芪总皂苷、天麻素和人参总皂苷,加入辅料,按常规制剂工艺制成药物制剂。
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