CN102335188A

CN102335188A - 淫羊藿苷在制备防治慢性阻塞性肺疾病药物中的用途

Info

Publication number: CN102335188A
Application number: CN2010102391590A
Authority: CN
Inventors: 董竞成; 曾丽绚; 吴金峰; 刘宝君; 曹玉雪; 张红英
Original assignee: Huashan Hospital of Fudan University
Current assignee: Huashan Hospital of Fudan University
Priority date: 2010-07-28
Filing date: 2010-07-28
Publication date: 2012-02-01

Abstract

本发明属生物医学领域，涉及中药有效成分淫羊藿苷的新的药用用途，具体涉及淫羊藿苷在制备防治慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。本发明经动物模型实验，结果显示，所述的淫羊藿苷能激活HPA轴和刺激内源性激素的分泌，及抑制NF-κB的活化，对香烟烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病动物模型的肺功能有保护作用；在体内对炎症细胞的浸润、促炎细胞因子的表达有抑制作用，对抑炎细胞因子的表达有促进作用。本发明的淫羊藿苷可作为活性成分，与药物学上可接受的载体制成防治慢性阻塞性肺疾病的药物组合物。

Description

淫羊藿苷在制备防治慢性阻塞性肺疾病药物中的用途

技术领域

本发明属生物医学领域，涉及中药有效成分淫羊藿苷的新的药用用途，具体涉及淫羊藿苷在制备防治慢性阻塞性肺疾病药物中的应用。

背景技术

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种气流受限不完全可逆、呈进行性发展、与肺部炎症反应有关的疾病。COPD主要累及肺脏，但也可引起全身(或称肺外)的不良效应。临床主要表现为慢性咳嗽、咳痰、气短或呼吸困难、喘息和胸闷，随着疾病的进展还会发生全身性炎症反应等，严重影响患者的劳动能力和生活质量。COPD患病人数多，死亡率高，社会经济负担重，已成为一个全球性的重要的公共卫生问题。调查显示，吸烟是COPD最主要的危险因素，全世界吸烟人群约13亿，而我国约有3亿多。据研究报道，我国于今后的20年中预计将有近6500万人死于COPD。因此，开展COPD炎症的干预和机制研究具有重要的理论指导意义和实用价值。

淫羊藿别名仙灵脾，其性温，味辛、甘，归肝、肾经，淫羊藿药材具有温补肾阳作用。淫羊藿苷(icarlin，ICA，C₃₃H₄₀O₁₅)是小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属Epimedium植物淫羊藿茎叶中提取的总黄酮的主要效应单体，现代药理研究证实：淫羊藿苷具有能提高机体免疫功能、调节骨代谢、抗衰老、抗肿瘤等功效。

至今为止，国内外尚未见有淫羊藿苷应用于防治慢性阻塞性肺疾病的相关研究报道。

发明内容

本发明的目的是提供中药有效成分淫羊藿苷的新的药用用途。具体涉及淫羊藿苷在制备防治慢性阻塞性肺疾病药物中的用途。

本发明所述淫羊藿苷，其具有下述式(I)的化学结构：

本发明结合以往相关研究基础，进行COPD大鼠模型实验，采用香烟烟雾暴露所致COPD大鼠模型，并用淫羊藿苷干预。结果显示，1.淫羊藿苷对香烟烟雾暴露所致COPD大鼠的肺功能有保护作用；2.淫羊藿苷在体内对香烟烟雾暴露所致COPD模型大鼠的炎症细胞的浸润、促炎细胞因子的表达有抑制作用，对抑炎细胞因子的表达有促进作用；3.淫羊藿苷的上述作用与激活HPA轴和刺激内源性激素的分泌，抑制NF-κB的活化有关。

本发明可制成防治慢性阻塞性肺疾病的药物组合物，其包括作为活性成分的淫羊藿苷，以及药物学上可接受的载体。

为了便于理解，以下将通过具体的附图和实施例对本发明的中药有效成分淫羊藿苷的新用途进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例和附图仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本发明的范围内对本发明做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本发明的范围内。

附图说明

图1.实验大鼠的肺功能。数据结果用means±SEM来表示(Groupsize：n＝6；：A组：正常组，B组：模型组，C组：地塞米松组，D组：淫羊藿苷5mg/kg，E组：淫羊藿苷10mg/kg，F组：淫羊藿苷20mg/kg。*为与正常组相比较P＜0.05。#为与COPD模型组相比较P＜0.05。

图2(A-F).实验大鼠肺组织病理光镜显微照片(HE染色×200)。A组：正常组，B组：模型组，C组：地塞米松组，D组：淫羊藿苷5mg/kg，E组：淫羊藿苷10mg/kg，F组：淫羊藿苷20mg/kg。

图3：ELISA检测血清和BALF中的细胞因子及血清中激素的浓度。结果用means±SEM来表示(Group size：n＝6；淫羊藿苷的用量：D组5mg/kg，E组10mg/kg，F组20mg/kg)。*为与正常组相比较P＜0.05。#为与COPD模型组相比较P＜0.05。(a)血清中IL-8、IL-6、TNF-α、IL-10的浓度。(b)肺泡灌洗液中IL-8、IL-6、TNF-α、IL-10的浓度。(c)血清中CRH的浓度。(d)血清中ACTH的浓度。(e)血清中CORT的浓度。

图4(A-F)：NF-κB p65在肺组织中的表达(*200)。A组：正常组，B组：模型组，C组：地塞米松组，D组：淫羊藿苷5mg/kg，E组：淫羊藿苷10mg/kg，F组：淫羊藿苷20mg/kg。

具体实施方式：

本发明的淫羊藿苷可采用常规方法提取，或市购获得。

实施例1

1.实验动物

36只健康清洁级雄性Sprague-Dauley(SD)大鼠(成都达硕生物科技有限公司实验动物技术公司提供)，月龄为21±1月，体重在500～600g。

2.分组和造模

SD大鼠随机分为6组：A组、B组、C组、D组、E组、F组，每组6只。

A组：正常组。大鼠被置于熏烟装置中，用新鲜空气暴露代替香烟烟雾暴露。从造模第8天开始采用灭菌生理盐水1ml灌胃，每日一次，每周5天，连续3周。

B组：COPD模型组。参照文献提供的方法[42-53]，将大鼠置于密闭木箱内熏烟，香烟是带过滤嘴的牡丹牌烤烟型香烟(上海烟草公司提供)，每支香烟含1.0mg尼古丁和13mg焦油。每次20支，每次1小时，一天2次，每周5天，共5周。熏烟的过程中，监测一氧化碳(CO)浓度(红外光谱仪)，同时监测总悬浮粒子(TSP)浓度(激光散射法)。CO的浓度被控制在280-350ppm范围，TSP的浓度被控制在70～110mg/m³[38，54]。从造模第8天开始采用灭菌生理盐水1ml灌胃，每日一次，每周5天，连续3周。

C组：地塞米松组。大鼠被置于如B组描述的熏烟装置中熏烟。从熏烟后第8天起给予地塞米松(上海通用药业股份有限公司提供；批号：060110；0.2mg/kg)灌胃，每天一次，每次1毫升，每周5天，连续3周。

D组：淫羊藿苷低剂量组(5mg/kg)。将大鼠置于熏烟装置中熏烟。将淫羊藿苷用灭菌生理盐水调至2.5mg/ml。从熏烟后第8天起用2.5mg/ml淫羊藿苷灌胃，每天一次，每次1毫升，每周5天，连续3周。

E组：淫羊藿苷中剂量组(10mg/kg)。将淫羊藿苷浓度调至5mg/ml。其余方法同D组。

F组：淫羊藿苷高剂量组(20mg/kg)。将淫羊藿苷浓度调至10mg/ml。其余方法同D组。

3.指标检测及结果

3.1检测实验模型大鼠的肺功能

结果显示，COPD模型组、地塞米松组、淫羊藿苷低剂量组、淫羊藿苷中剂量组的PEFR、MVV和FEV_0.3/FVC％均显著低于正常组(P＜0.05)，表明所述四组大鼠存在气流阻塞；淫羊藿苷高剂量组的PEFR、MVV和FEV_0.3/FVC％与正常组之间无显著性差异(P＞0.05)，地塞米松组的PEFR、MVV和FEV_0.3/FVC％与COPD模型组之间差异无显著性(P＞0.05)；淫羊藿苷高剂量组的PEFR、MVV和FEV_0.3/FVC％明显高于COPD模型组(P＜0.05)(如图1所示)。

3.2.大鼠的肺组织病理形态学改变

1)正常组：大鼠支气管粘膜上皮结构完整，支气管纤毛排列整齐，肺泡结构完整，气管及各级支气管仅见散在的杯状细胞，未见腺体增生及明显炎细胞浸润(如图2A所示)。

2)COPD模型组：气管粘膜上皮脱落、减少、紊乱，杯状细胞及腺体增生肥大，管壁有炎性细胞浸润；支气管粘膜皱壁增多变长，杯状细胞显著增生，腺体导管和小支气管腔内可见粘液栓及大量炎性细胞，管壁及其周围有明显炎细胞浸润，平滑肌显著增生肥厚，终末细支气管远端狭窄，呼吸细支气管及肺泡管囊状扩张，肺泡膨大，泡壁变薄，多个肺泡腔增大、破裂，相互融合，部分周边肺组织肺泡扩大(如图2B所示)。

3)地塞米松组：支气管上皮的破坏和炎症细胞浸润较COPD模型组轻，但总体接近于COPD模型组的病理改变。仍可见大量杯状细胞增生，肺泡腔扩大(如图2C所示)。

4)淫羊藿苷低(如图2D所示)、中(如图2E所示)、高(如图2E所示)剂量组：随着剂量的增加，炎性细胞浸润逐渐减轻。大鼠杯状细胞增生、肺泡扩张融合等，均较COPD模型组明显减轻。与正常组相比，低剂量组仍具有慢性支气管炎、阻塞性肺气肿的病理特点，而高剂量组的病理变化不明显，非常接近于正常组。

3.3细胞因子和HPA轴相关激素的ELISA结果显示，

图3a、b显示了COPD模型组大鼠血清和BALF中的IL-8、IL-6、TNF-α较正常组明显升高(P＜0.01)，淫羊藿苷高剂量组大鼠血清和BALF中的IL-8、IL-6、TNF-α较COPD模型组明显下降(P＜0.05)，由此可见淫羊藿苷能降低COPD大鼠血清和BALF中的IL-8、IL-6、TNF-α水平。COPD模型组和地塞米松组血清和BALF中的IL-10较正常组降低，淫羊藿苷干预后IL-10水平升高，并且随着剂量的增加而升高。

图3c显示了COPD模型组大鼠血清中的CRH浓度较正常组明显降低(P＜0.05)，淫羊藿苷组血清中的CRH浓度随着淫羊藿苷剂量的增高逐渐升高，淫羊藿苷高剂量组血清中的CRH浓度与COPD模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，淫羊藿苷高剂量组血清中的CRH浓度已接近正常组水平(P＞0.05)。

上述6个组中的血清ACTH变化无统计学意义(如图3d所示)。

COPD模型组血清CORT值较正常组明显下降(P＜0.05)，淫羊藿苷中、高剂量组血清CORT值较COPD模型组升高明显(P＜0.05)(如图3e所示)。

3.4肺组织中NF-κB p65免疫组化结果显示，

图4A显示了正常组的显微镜照片，正常组绝大部分支气管上皮细胞和大多数肺泡上皮细胞、小动脉内皮细胞的细胞核呈紫蓝色；

图4B显示了COPD模型组的显微照片，COPD模型组的支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞、小动脉内皮细胞的细胞核几乎全部被染成棕黄色，NF-κB p65阳性表达明显增多；

图4C显示了地塞米松组的显微照片，NF-κB p65阳性表达与COPD模型组相似，几乎所有的细胞核都被染成的棕黄色；

图4D显示了淫羊藿苷低剂量组的显微照片，细胞核的黄染程度和阳性细胞面积都有所减少，NF-κB p65阳性表达减少；

图4E显示了淫羊藿苷中剂量组的显微照片，细胞核的黄染程度明显减轻，阳性细胞面积减少，NF-κB p65阳性表达明显减少；

图4F显示了淫羊藿苷高剂量组的显微照片，随着淫羊藿苷用量的增加，细胞核黄染的泛围和程度都逐渐减轻，NF-κB p65阳性表达明显减少且淫羊藿苷高剂量组支气管上皮细胞和肺泡上皮细胞的细胞核呈紫蓝色，已接近正常组。

本发明实验结果显示，所述的淫羊藿苷对香烟烟雾暴露所致COPD大鼠的肺功能有保护作用；在体内对香烟烟雾暴露所致COPD模型大鼠的炎症细胞的浸润、促炎细胞因子的表达有抑制作用，对抑炎细胞因子的表达有促进作用；淫羊藿苷的上述作用与激活HPA轴和刺激内源性激素的分泌，抑制NF-κB的活化有关。

本发明的淫羊藿苷可作为活性成分，与药物学上可接受的载体制成防治慢性阻塞性肺疾病的药物组合物。

Claims

1.淫羊藿苷在制备防治慢性阻塞性肺疾病药物中的用途，所述的淫羊藿苷具有如下化学结构：

2.按权利要求1所述的用途，其特征在于所述的淫羊藿苷激活HPA轴和刺激内源性激素的分泌，抑制NF-κB的活化。

3.按权利要求2所述的用途，其特征在于所述的淫羊藿苷保护实验模型的肺功能。

4.按权利要求2所述的用途，其特征在于所述的淫羊藿苷抑制炎症细胞的浸润、促炎细胞因子的表达以及促进抑炎细胞因子的表达。

5.按权利要求3所述的用途，其特征在于所述的实验模型为香烟烟雾暴露所致的慢性阻塞性肺疾病实验模型。

6.一种防治慢性阻塞性肺疾病的药物组合物，其特征在于：其包括作为活性成分的淫羊藿苷，以及药物学上可接受的载体。