CN102327421A

CN102327421A - 治疗食管癌的活血行气中药制剂及其制备方法

Info

Publication number: CN102327421A
Application number: CN201110308544A
Authority: CN
Inventors: 贾永森; 马会霞; 王志文; 包巨太; 李继安; 吴范武
Original assignee: Hebei United University
Current assignee: Hebei United University
Priority date: 2011-10-13
Filing date: 2011-10-13
Publication date: 2012-01-25
Anticipated expiration: 2031-10-13
Also published as: CN102327421B

Abstract

本发明涉及一种治疗食管癌的活血行气中药制剂及其制备方法，属于治疗食管癌中药制剂技术领域。技术方案是由桃仁、红花、半枝莲、槟榔、升麻、白花蛇舌草组成，各中药组分的重量百分比为：桃仁15-20%，红花15-20%，半枝莲15-25%，槟榔10-15%，升麻15-25%，白花蛇舌草10-15%。治疗食管癌的活血行气中药制剂可以根据需要制成胶囊、片剂、散剂等。全方活血行气、散结止痛，能有效治疗食管癌患者吞咽梗阻、腑气不通之症。作用于脾胃、大肠等多个脏器，充分体现了中医学对人体有机整体的独特认识，通过调节全身机能，达到抗肿瘤的目的，疗效明确，药源广、成本低廉、生产和服用方便，治疗食管癌效果显著。

Description

治疗食管癌的活血行气中药制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗食管癌的活血行气中药制剂及其制备方法，属于治疗食管癌中药制剂技术领域。

背景技术

食管癌是消化道恶性肿瘤中的常见病、多发病，尤其在我国北方，特别是太行山东麓、南麓山区，由于当地水土、居民饮食习惯等原因，其发病率高达300/10万。因为早期食管癌没有特异症状和表现，发病出现症状大多数已进入中晚期，严重威胁着人民群众的身体健康。食管癌早期可以采取根治手术治愈，但对于中晚期患者尚缺乏有效治疗手段，目前，治疗方法仍以手术切除为主，配合化疗、放疗和免疫疗法，但都达不到理想效果，且治疗费用昂贵。

发明内容

本发明目的是提供一种治疗食管癌的活血行气中药制剂及其制备方法，疗效明确，药源广、成本低廉、生产和服用方便，解决背景技术中存在的上述问题。

本发明的技术方案是：

治疗食管癌的活血行气中药制剂，由桃仁、红花、半枝莲、槟榔、升麻、白花蛇舌草组成，各中药组分的重量百分比为：桃仁15-20%，红花15-20%，半枝莲15-25%，槟榔10-15%，升麻15-25%，白花蛇舌草10-15%。

治疗食管癌的活血行气中药制剂的制备方法，包含如下工艺步骤：选择中药桃仁、红花、半枝莲、槟榔、升麻、白花蛇舌草，洗净，打成粗末；按照重量百分比配制及煎煮，各中药组分的重量百分比为桃仁15-20%，红花15-20%，半枝莲15-25%，槟榔10-15%，升麻15-25%，白花蛇舌草10-15%；加水煎煮，过滤，将药渣再加水煎煮、过滤，水浴浓缩，成膏状，干燥，研碎，制成治疗食管癌的活血行气中药制剂。

治疗食管癌的活血行气中药制剂可以根据需要制成胶囊、片剂、散剂等。

更具体的工艺步骤：采用纱布滤掉杂质，加5倍水煎煮1小时，用纱布滤过，将药渣再加水煎煮30分钟，合并滤液，水浴上浓缩成膏状，放厚玻璃板，80℃烤箱中干燥；碾成细粉，通过60目筛，按重量分装，装入胶囊，制成胶囊。

本发明将桃仁、红花、半枝莲、槟榔、升麻、白花蛇舌草配伍，以活血行气为基础，配以具有清热解毒功效的半枝莲、白花蛇舌草组成。

桃仁苦甘，性平，活血祛瘀作用甚广，其主要成分为苦杏仁甙。现代药理研究报告指出, 苦杏仁甙的水解产物氢氰酸和苯甲醛对癌细胞有协同破坏作用，苦杏仁甙能帮助体内胰蛋白酶消化癌细胞的透明样黏蛋白被膜, 使白细胞能够接近癌细胞，以致吞噬癌细胞, 其水解产物氢氰酸及苯甲醛的进一步代谢产物，分别对改善病人的贫血及缓和肿瘤病人的疼痛有积极作用。

红花性温，味辛，活血、散瘀、止痛效果俱佳。红花可使全血凝固时间及血浆（缺血小板）复钙时间显著延长．从红花中分离出的有效成分红花黄色素，具有抑制血小板凝聚，增加纤维蛋白溶解酶活性，抑制体外血栓形成等作用。红花黄色素能延长家兔血浆的复钙时间、凝血酶原时间和凝血酶时间。表明其对凝血过程的内在凝血酶原及凝血酶-纤维蛋白的反应具有显著抑制作用，能促进癌肿瘀血消散。

半枝莲，性凉，味微苦，清热解毒，活血化瘀。动物实验证实，半枝莲对肉瘤180、艾氏腹水癌等均有一定抑制作用。现代药理研究证实，其所含的半枝莲素具有明显的抗肿瘤生长作用，即使是对治疗乏术的晚期肿瘤，亦有改善症状、抑制肿瘤增殖和延长患者生命的作用。

槟榔味苦、辛，性温；归胃、大肠经，消积散结，下气。现代药理研究证明从槟榔所得的聚酚化合物对艾氏腹水癌有显著的抑制作用，对宫颈癌Hela细胞有中度细胞毒作用。能下行破气滞，使食管瘤毒得散。

升麻味辛、微甘，性微寒；归脾、胃经，清热解毒，升举阳气。升清而降浊阴，与槟榔相配，一升一降，气行血通，有效解除食管梗阻症状。

白花蛇舌草，性味苦甘，寒，归脾、大肠经。清热解毒，利湿，对于癌肿解毒散结、消瘀止痛。现代药理研究表明，本药能有效刺激网状内皮糸统增生，增加吞噬细胞的吞噬能力，并使嗜银物质倾向致密化，增强机体的防御能力而达到增强免疫力的作用。

全方活血行气、散结止痛，能有效治疗食管癌患者吞咽梗阻、腑气不通之症。作用于脾胃、大肠等多个脏器，充分体现了中医学对人体有机整体的独特认识；通过调节全身机能，达到抗肿瘤的目的。

本发明的积极效果是：疗效明确，药源广、成本低廉、生产和服用方便，治疗食管癌效果显著。

附图说明

图1是本发明及其拆方对食管癌EC9706细胞形态的影响；

图2是本发明及拆方对EC9706细胞PI3K/AKT信号通路蛋白表达影响；

图3是本发明及拆方对EC9706细胞caspase-3凋亡信号通路蛋白表达的影响；

图4是本发明及拆方对食管癌EC9706细胞周期的影响。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步说明。

具体实施例的各种要组分重量百分比见下表：

	桃仁	红花	半枝莲	槟榔	升麻	白花蛇舌草
							实施例1	16.5	18	19	11.5	21	14
实施例2	17.2	16.3	22.5	12	17.6	14.4
							实施例3	15	19	23.2	14.5	15.7	12.6
实施例4	19.5	15.5	16.7	10.5	24.4	13.4
							实施例5	20	20	15.4	14	20	10.6
实施例6	15.1	17.1	20.8	15	17	15

本发明通过细胞实验研究，取得理想疗效，得到如下主要结论：

1.本发明通过药物抑制细胞实验，显微镜形态观察，本发明显著抑制食管鳞癌细胞的生长。

2.本发明通过MTT法检测表明，本发明对食管癌细胞半数抑制率为IC₅₀=798μg·mL^-1

3.本发明通过抑制PI3K/AKT信号通路肿瘤蛋白表达，切断肿瘤生长、浸润途径。

4.本发明通过促进caspase-3介导的肿瘤细胞凋亡通路各蛋白表达，诱发食管癌细胞凋亡。

5.本发明通过抑制细胞周期进入增殖S期，达到抑制食管癌细胞的增殖。

本发明抑制食管癌的实验研究结果：

(1)本发明及其拆方对食管癌EC9706细胞形态的影响，见附图1。

使用倒置显微镜在200倍目镜下观察各组细胞形态，与对照组相比，各药物组细胞增长缓慢，形体偏小、皱缩，细胞间隙加大；培养基内细胞残片增多，细胞集落变小，汇合率低，并随剂量增加而呈现明显差异。

(2)本发明及拆方对EC9706细胞生长抑制作用量效关系（MTT法），见下表

药物浓度μg/mL	CHI1	CHI2	T
				25	2.3±3.9	6.8±1.1	5.7±1.9
50	11.2±4.4	9.3±2.4	8.6±4.3
				100	18.1±5.3	16.4±1.4	11.4±2.5
200	27.9±2.9	19.1±0.9	16.9±3.5
				400	31.5±0.6	23.5±2.7	25.1±3.7
800	32.3±4.9	32.9±1.5	43.1±2.4
				1600	49.6±1.2^*	51.0±3.3^Δ	65.2±4.1
3200	56.4±5.6^*	73.9±3.6^Δ	83.0±5.6

注：CHI1：桃仁、红花、槟榔、升麻组；CHI2：半枝莲、白花蛇舌草组；T：本发明组。同一浓度抑制率比较：与本发明组比较，*：P＜0.01；Δ：P＜0.05

各方对EC9706细胞增殖抑制率（％）量效关系（ ±s）

结果提示，两拆方组随药物浓度增高而抑制率增高，具有明显的剂量依赖关系，其最大抑制率分别为56.4%和73.9%，本发明组抑制细胞生长强于两拆方组，具有显著性差异,达到83%，证明两拆方组具有协同作用。

本发明全方、活血行气拆方和半枝莲、白花蛇舌草拆方可不同程度地抑制EC9706细胞增殖，抑制率随药物浓度增加而上升，呈现量效依赖性关系，根据生长抑制作用量效关系拟合曲线方程求出各组IC₅₀值，分别是：活血行气拆方组IC₅₀=1709μg·mL^-1、半枝莲、白花蛇舌草拆方组IC₅₀=1413μg·mL^-1、全方组IC₅₀=798μg·mL^-1。

（3）本发明及拆方对EC9706细胞PI3K/AKT信号通路蛋白表达影响，见附图2。注：C：空白对照组；CHI1：桃仁、红花、槟榔、升麻组；CHI2：半枝莲、白花蛇舌草组；T：本发明组。

Western blot法检测显示应用本发明及拆方处理的EC9706细胞，PI3K/AKT通路各蛋白条带与对照组相比减弱，说明对其表达具有一定的抑制作用，抑制作用强弱依次为：T＞CH2＞CH1＞C

PI3K/AKT信号通路的发现已有十几年的历史,其在细胞代谢、细胞周期调控、血管生成等方面发挥重要作用。临床研究表明, PI3K/AKT通路与肿瘤的发生发展、转移、治疗耐药性密切相关；PI3K/Akt的活化通过磷酸化多个靶蛋白,导致肿瘤发生或细胞耐药，此通路通常被包括食管癌在内的多种肿瘤所激活。实验研究表明，该信号通路与细胞的生长、增殖、血管生成及凋亡逃避密切相关,尤其是在细胞的增殖和存活中起着重要的作用。PI3K能够产生第二信使，包括了广泛的细胞功能，如细胞增殖、浸润和转移，AKT是它的一个重要下游分子，是PI3K下游唯一一个促进细胞恶性转化的蛋白。AKT活化进一步作用于其下游分子如NF-κB、caspase-9等,从而促进细胞的异常分化与增殖。PI3K通路调控与肿瘤生长相关的转录因子，其中NF-κB发挥着重要作用，除了与免疫和炎症反应有关外，NF－κB还调节细胞增殖、凋亡和转移，在包括食管癌在内的许多肿瘤中都能被激活。已有的研究证据表明，PI3K/AKT通路的异常激活在食管癌的发生发展中起着重要作用。

在本次实验中我们用Western blot法检测对照组和本发明及拆方组中EGFR、PI3K、P-PI3K、AKT及NF-κB蛋白表达。结果显示应用本发明全方和两拆方处理EC9706细胞后，与对照组相比各蛋白表达有不同程度地减弱，全方作用强于拆方。实验结果说明本发明治疗食管癌的有效组分在活血行气类药。

研究证明，本发明中的各味药物正是紧扣食管癌气滞血瘀、津枯血燥的病机，以活血行气为主要功效治疗食管癌。

(4)本发明及拆方对EC9706细胞caspase-3凋亡信号通路蛋白表达的影响，见附图3。注：C：空白对照组；CHI1：桃仁、红花、槟榔、升麻组；CHI2：半枝莲、白花蛇舌草组；T：本发明组。

食管癌防治机制研究中肿瘤细胞凋亡是一个重要环节。尽管各种凋亡信号可刺激细胞内多种信号传导途径，但最终将汇集为Caspases蛋白酶级联放大反应这一共同通路，不同凋亡信号的刺激可激活多种Caspases，而活化的Caspases的作用又可随酶底物的性质和酶切位点的不同而产生多种生物学效应。因此Caspases家族被认为是细胞凋亡过程中的中枢效应器，是多条凋亡通路的汇聚点，是执行凋亡的最终途径。现已知Caspases的上游激活途径主要有死亡受体途径和线粒体/细胞色素C途径，它们均可引起Caspase-3的激活。Caspase-3活性抑制是肿瘤发生和发展中的主要分子机制。采用免疫组化技术检测53例食管鳞癌患者在鳞癌和癌旁组织中的Caspase-3蛋白阳性表达率的差异有统计学意义(c²=16.690,P＜0.001)，且Caspase-3蛋白表达与食管癌的分化程度和有无淋巴结转移有关。我们据此推测本发明对食管癌细胞增殖的抑制作用与Caspase-3介导的细胞凋亡信号通路有重要关系。

在本实验中，通过Western blot法检测对照组和本发明及拆方组中p53、Cyto-C，Caspase-3，bax蛋白表达，结果显示应用本发明和拆方处理EC9706细胞后，与对照组相比各蛋白表达有不同程度地增强，其中全方作用最强，两拆方稍弱。实验结果说明本发明抑制食管鳞癌细胞增殖的机制与促凋亡有关，其药效部位在活血行气类药物协同作用下产生。

（5）本发明及拆方对食管癌EC9706细胞周期的影响，见附图4。

细胞周期中的G1期代表了细胞生长处于抑制状态，其所占整个细胞百分比率就成为衡量细胞生长受抑制情况的重要指标。在使用本发明及其拆方作用于EC9706细胞后，发现本发明G1期占到了68.71％；S期细胞百分率一定程度上反应了细胞生长的情况，S期本发明拆方和全方与对照组比较，均有显著下降，流式细胞术结果显示，3组药物对EC9706细胞抑制强弱依次为：本发明＞半枝莲+白花蛇舌草组＞桃仁+红花+槟榔+升麻组。通过研究表明，本发明通过抑制EC9706细胞从G1期进入S、G2M增殖期，从而抑制了细胞的生长。

Claims

1.一种治疗食管癌的活血行气中药制剂，其特征在于由桃仁、红花、半枝莲、槟榔、升麻、白花蛇舌草组成，各中药组分的重量百分比为：桃仁15-20%，红花15-20%，半枝莲15-25%，槟榔10-15%，升麻15-25%，白花蛇舌草10-15%。

2.一种治疗食管癌的活血行气中药制剂的制备方法，其特征在于包含如下工艺步骤：选择中药桃仁、红花、半枝莲、槟榔、升麻、白花蛇舌草，洗净，打成粗末；按照重量百分比配制及煎煮，各中药组分的重量百分比为桃仁15-20%，红花15-20%，半枝莲15-25%，槟榔10-15%，升麻15-25%，白花蛇舌草10-15%；加水煎煮，过滤，将药渣再加水煎煮、过滤，水浴浓缩，成膏状，干燥，研碎，制成治疗食管癌的活血行气中药制剂。

3.根据权利要求2所述之治疗食管癌的活血行气中药制剂的制备方法，其特征在于更具体的工艺步骤：采用纱布滤掉杂质，加5倍水煎煮1小时，用纱布滤过，将药渣再加水煎煮30分钟，合并滤液，水浴上浓缩成膏状，放厚玻璃板，80℃烤箱中干燥；碾成细粉，通过60目筛，按重量分装，装入胶囊，制成胶囊。