CN102323319A - 一种烟草中果胶含量的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种烟草中果胶含量的检测方法，属烟草分析检测技术领域。本发明的烟草果胶含量的测定方法，根据果胶酶具有很强的专一性的特点，运用果胶酶对样品进行前处理生成了半乳糖醛酸，简化了样品前处理的过程，同时，根据半乳糖醛酸具有还原性的特性，采用电位滴定方法对烟草中果胶含量进行了测定，减少了人为误差。本发明的烟草果胶含量的测定方法，包括标准曲线及线性范围确定、样品处理及果胶含量的确定步骤。本发明的特点在于：用酶解-电位滴定分析方法测定烟叶中果胶含量，消除了浓硫酸对显色反应的影响，操作简单，重复性好，回收率高，设备投资小，能满足烟草中果胶含量的批量测定。

Description

一种烟草中果胶含量的检测方法

技术领域：

本发明涉及一种烟草中果胶含量的检测方法，属烟草分析检测技术领域。 

背景技术：

果胶是烟草中细胞壁物质的重要组成部分，约占烟叶质量的6％～13％，对烟叶结构的稳定性及其热解产物都有重要影响，其化学组成主要以α(1→4)键合的D一半乳糖醛酸为基本结构.果胶含量过高时会使烟草在燃吸时不完全并产生甲醇，还会产生强烈的刺激性，青杂气重的不良影响。因此准确的测定烟草中果胶含量有很重要的意义。 

目前，果胶的测定方法主要有重量法、咔唑比色法、3，5-二硝基水杨酸法(DNS)、高效液相色谱法(HPLC)、流动分析法及气相色谱法(GC)。其中重量法操作复杂且重复性差，咔唑比色法和高效液相色谱法皆是把果胶酸解成半乳糖醛酸，但半乳糖醛酸遇酸容易形成内酯物质，造成测定值偏低.气相色谱法需衍生化，操作复杂。3，5二硝基水杨酸法、流动分析法皆是把果胶酶解成半乳糖醛酸。3，5二硝基水杨酸法的准确精度不够，流动分析法仪器稳定性不好，浪费试剂。 

发明内容：

本发明目的在于克服现有技术之不足，而提供一种方法简单、成本低、效率高和分析数据精确的烟草果胶含量的测定方法。 

本发明根据果胶酶具有很强的专一性的特点，运用果胶酶对样品进行前处理生成了半乳糖醛酸，简化了样品前处理的过程，同时，根据半乳糖醛酸具有还原性的特性，首次在烟草行业内采用电位滴定方法对烟草中果胶含量进行了测定，减少了人为误差。 

本发明的烟草果胶含量的测定方法，包括标准曲线及线性范围确定、样品处理及果胶含量的确定步骤；具体如下： 

(1)标准曲线及线性范围确定： 

a.称取精确到0.001g的半乳糖醛酸标准品1.000g，溶解于水中，定容至100mL的容量瓶中， 得到1mg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于温度为4-5°的冰箱中； 

b.分别移取1mg/mL的半乳糖醛酸原液：0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分别注入100mL容量瓶中，稀释至刻度，得到一组浓度为0.005g/mL、0.01g/mL、0.015g/mL、0.02g/mL、0.025g/mL的半乳糖醛酸标准溶液，将上述梯度浓度的标液采用电位滴定仪测定半乳糖醛酸，制作标准曲线，在浓度为0.005g/mL～0.025g/mL范围内相关系数为0.9994； 

(2)样品处理： 

a.称取精确到0.0001g的1.0000g烟末置于150mL平底烧瓶中，加入50mL 85％乙醇，±80℃回流30min，沸腾开始计时；然后过滤，待乙醇过滤完后，用蒸馏水多次洗涤残渣，直至乙醇洗涤干净； 

b.将残渣转移至200mL烧杯中，准确加入15mL pH＝4柠檬酸三钠/柠檬酸缓冲溶液和果胶酶溶液，在58℃水浴中水解2h，分别加入菲林试剂A、B液各25mL，使其发生反应生成Cu₂O，用H₂SO₄和NH₄Fe(SO₄)₂12H₂O溶液溶解；其中： 

菲林试剂A液：取硫酸铜结晶34.69g，加适量水溶解，加硫酸0.5mL，再加水稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内； 

菲林试剂B液：取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g，加水溶解，稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内； 

(3)果胶含量的确定 

用电位滴定仪测定半乳糖醛酸含量，按常规方法用标准曲线求取果胶的百分含量。

本发明的特点在于：用酶解-电位滴定分析方法测定烟叶中果胶含量，消除了浓硫酸对显色反应的影响，操作简单，重复性好，回收率高，设备投资小，能满足烟草中果胶含量的批量测定。 

附图说明：

附图为标准曲线图。 

具体实施方式：

本方法采用的设备均为市场购买。方法的具体操作步骤如下： 

1.酶解-电位滴定分析方法标准曲线及线性范围 

a.准确称取半乳糖醛酸标准品1.000g(精确到0.001g)置于100mL容量瓶中，定容，保存于温度为4-5°的冰箱中。 

b.分别移取1mg/mL的半乳糖醛酸原液：0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，分别注入100mL容量瓶中，稀释至刻度，得到一组浓度为0.005g/mL、0.01g/mL、0.015g/mL、0.02g/mL、0.025g/mL的半乳糖醛酸标准溶液，将上述梯度浓度的标液采用电位滴定仪测定半乳糖醛酸，制作标准曲线(附图所示)，在浓度为0.005g/mL～0.025g/mL范围内相关系数为0.9994。 

2.样品处理： 

a.准确称取1.0000g烟末(精确到0.0001g)置于150mL平底烧瓶中，加入50mL85％乙醇，±80℃回流30min，沸腾开始计时。然后过滤，待乙醇过滤完后，用蒸馏水多次洗涤残渣，直至乙醇洗涤干净。 

b.将残渣转移至200mL烧杯中，准确加入15mL pH＝4柠檬酸三钠/柠檬酸缓冲溶液和果胶酶溶液，在58℃水浴中水解2h，分别加入菲林试剂A、B液各25mL，使其发生反应生成Cu₂O，用H₂SO₄和NH₄Fe(SO₄)₂12H₂O溶液溶解。其中： 

菲林试剂A液：取硫酸铜结晶34.69g，加适量水溶解，加硫酸0.5mL，再加水稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内。 

菲林试剂B液：取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g，加水溶解，稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内。 

3、果胶含量的确定 

用电位滴定仪测定半乳糖醛酸含量，按常规方法用标准曲线求取果胶的百分含量。

4、对比实验 

酶解-电位滴定分析方法和用比色法测定果胶含量(以半乳糖醛酸计)，能够得到酶解-电位滴定分析方法，重复性较好。 

烟样果胶的分析结果 

实际应用表明：用比色法测定果胶物质时，操作较复杂，半乳糖醛酸只有在浓硫酸中才能充分显色，故对其显色反应有较大影响，易产生人为误差。酶解-电位滴定分析方法测定烟叶中果胶含量，消除了浓硫酸对显色反应的影响，操作简单，重复性好，回收率高，设备投资小，能够满足烟样果胶含量的批量测定。 

Claims (1)

1.一种烟草中果胶含量的检测方法，其特征在于该检测方法包括标准曲线及线性范围确定、样品处理及果胶含量的确定步骤；具体如下：

(1)标准曲线及线性范围确定：

a.称取精确到0.001g的半乳糖醛酸标准品1.000g，溶解于水中，定容至100mL的容量瓶中，得到1mg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于温度为4-5°的冰箱中保存；

b.分别移取1mg/mL的半乳糖醛酸原液：0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ML，分别注入100mL容量瓶中，稀释至刻度，得到一组浓度为0.005g/mL、0.01g/mL、0.015g/mL、0.02g/mL、0.025g/mL的半乳糖醛酸标准溶液，将上述梯度浓度的标液采用电位滴定仪测定半乳糖醛酸，制作标准曲线，在浓度为0.005g/mL～0.025g/mL范围内相关系数为0.9994；

(2)样品处理：

a.称取精确到0.0001g的1.0000g烟末置于150mL平底烧瓶中，加入50mL 85％乙醇，±80℃回流30min，沸腾开始计时；然后过滤，待乙醇过滤完后，用蒸馏水多次洗涤残渣，直至乙醇洗涤干净；

b.将残渣转移至200mL烧杯中，准确加入15mL pH＝4柠檬酸三钠/柠檬酸缓冲溶液和果胶酶溶液，在58℃水浴中水解2h，分别加入菲林试剂A、B液各25mL，使其发生反应生成Cu₂O，用H₂SO₄和NH₄Fe(SO₄)₂12H₂O溶液溶解；其中：

菲林试剂A液：取硫酸铜结晶34.69g，加适量水溶解，加硫酸0.5mL，再加水稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内；

菲林试剂B液：取酒石酸钾钠173g与氢氧化钠50g，加水溶解，稀释至500mL，用精制石棉过滤，贮存于具有橡皮塞的玻璃瓶内；

(3)果胶含量的确定

用电位滴定仪测定半乳糖醛酸含量，用标准曲线求取果胶的百分含量。 

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