CN102321034A - 硫代苯二氮卓类化合物及其作为药物的用途 - Google Patents

硫代苯二氮卓类化合物及其作为药物的用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种硫代苯二氮卓类化合物及其作为药物的用途。本发明化合物结构如式(I)所示，包括其光学异构体、外消旋体、顺反异构体以及任意组合或其药用盐。本发明的化合物可作为p53-MDM2蛋白相互作用小分子抑制剂，可制备抗肿瘤药物。

Description

硫代苯二氮卓类化合物及其作为药物的用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体的说，是硫代苯二氮卓类化合物及其作为药物的用途。
背景技术
p53蛋白是一种抑癌蛋白，它的失活与50％～60％的癌症发生密切相关。其原因可能是p53抑癌蛋白的转录激活结构域连接有细胞癌蛋白，如最早在小鼠细胞系的双微染色体基因扩增中发现的一个基因(murine double minute2，MDM2)，在鼠和人(同源基因为HDM2)的多处组织都有表达。(Michael SC，et al.Regulation of p53 stability and activity in response to genotoxic stress[J].Mvta Res，2000，462：179-188.)
在正常细胞中，MDM2和野生型p53(wt-p53)有着精细的平衡，其相互调节形成负反馈回路：p53诱导MDM2的表达，MDM2与p53结合形成p53-MDM2复合物，使p53泛素化，被蛋白酶降解。p53在细胞内低浓度又可减少MDM2基因转录，将p53-MDM2负反馈环路关闭，使p53回到维持正常功能状态的水平。MDM2也对p53的转录活性有直接抑制作用，高表达的MDM2基因产物可使p53失活。近年来设计可阻断p53-MDM2相互作用的化合物，激活p53抑癌活性是肿瘤治疗的新策略之一。
2005年Grasberger等人基于此策略通过ThermoFluor法得到了一类高活性的苯二氮卓类p53-MDM2小分子抑制剂。(Grasberger，B.L.et alDiscovery and cocrystal structure of benzodiazepinedione HDM2 antagoniststhat activate p53 in cells.J.Med.Chem.2005，48，909-912.)其中，TDP222669的蛋白结合抑制活性达到80nM。
尽管合成得到的苯二氮卓类具有优秀的p53-MDM2蛋白相互作用抑制活性，但是其这类化合物存在着共同的缺点：透膜能力差、快速清除、生物利用度低等。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种硫代苯二氮卓类化合物，以克服现有技术所存在的上述缺点和不足。本发明为改善其缺点，结合苯二氮卓类化合物良好的蛋白结合抑制活性，根据生物电子等排的原理，引入硫原子，提供了一种透膜能力强、生物利用度高的一类全新结构的硫代苯二氮卓类小分子抑制剂。
本发明的另一目的提供一种硫代苯二氮卓类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。
本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：
作为本发明的第一方面，一种硫代苯二氮卓类化合物，包括光学异构体、外消旋体、顺反异构体以及任意组合或其药用盐，结构如式(I)；
其中R1是氢、羟基、氨基、任选取代的胺基、低级烷基、卤素、低级卤代烷基、低级烷氧基、低级链烯基、氰基、低级氰基烷基、硝基、低级硝基烷基、酰胺基、低级酰胺基烷基、肼基、低级肼基烷基、叠氮基、低级叠氮基烷基、任选取代的三唑环、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧基、羟基、羧基或烷氧基羰基、任选取代的羟基亚胺烷基；
优选R1是氢、羟基、氨基、任选取代的胺基、低级烷基、酰胺基、低级酰胺基烷基、卤素、低级卤代烷基、低级烷氧基、硝基、氰基；
R2是氢、低级烷基、低级烷氧基、低级链烯基、环烷基、芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、环烷基烷基、芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基团是任选取代的；
优选R2是氢、任意取代的芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、环烷基烷基、芳烷基或杂芳基烷基；
R3是-COORa、-COOM、-OH、-ORa、-NHRa、-NRaRa、-SOORa、-NHCONHRa、-NHCONRaRa、-CH2Ra，其中Ra是氢、低级烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱和杂环，并且M是阳离子；
优选R3是-COORa、-COOM、-SOORa，其中Ra是氢、低级烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱和杂环，并且M是阳离子；
R4是氢、羟基、氨基、任选取代的氨基、低级烷基、卤素、低级卤代烷基、低级烷氧基、低级链烯基、氰基、低级氰基烷基、硝基、低级硝基烷基、酰胺基、低级酰胺基烷基、肼基、低级肼基烷基、叠氮基、低级叠氮基烷基、任选取代的三唑环、任选取代的芳基、任选取代的芳烷基、任选取代的杂芳基、任选取代的饱和或部分不饱和杂环、任选取代的芳烷基或杂芳基烷基、任选取代的芳氧基、任选取代的杂芳氧基、羟基、羧基或烷氧基羰基、任选取代的羟基亚胺烷基；
优选R4是芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、芳烷基或杂芳基烷基。所述每一基团是任选取代的；
R5是氢、低级烷基、任选取代的环烷基、任选取代的环烷基烷基、任选取代的芳烷基或杂芳基烷基、-(CH2)nCOOH，并且n为不小于0的整数；
优选R5是氢、低级烷基、-(CH2)nCOOH，并且n为1至6之间的整数；
X是O或者S。
在本文中，与烷基和烷氧基有关的术语“低级”指含1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、甲硫基、乙硫基、甲氧基和乙氧基，与术语链烯基或链炔基有关的术语“低级”指含2至6个碳原子和一个或多个双键或三键的基团，例如：乙烯基、烯丙基、异烯丙基、戊烯基、己烯基、丙烯基、乙炔基、丙炔基和丁炔基。术语环烷基是指含3至7个碳的环，例如，环丙基、环丁基、环戊基或环己基。术语芳基指单、二或三环烃化合物，其中至少一个环为芳香环，每个环含最多7个碳原子，例如，苯基、萘基、蒽基、联苯基或茚基。术语卤素指氯、溴、碘或氟。相应于术语低级卤代烷基、低级氰基烷基、低级硝基烷基、低级酰胺基烷基、低级肼基烷基、低级烷氧基低级烷基、低级叠氮基烷基、低级芳烷基、低级羟基烷基、低级烷硫基低级烷基和低级烷基低级磺酰基烷基的基团分别被一个至三个卤素、氰基、硝基、酰胺基、肼基、烷氧基、叠氮基、芳基、羟基、低级烷基硫基低级烷基或低级磺酰基烷基取代。低级烷基氨基可含有一个或两个低级烷基，例如表示NHCH3、NHCH2CH3、N(CH3)2或CH3NCH2CH3。
式(I)化合物选自：
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-氨丙基-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(8-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(8-(4-氯-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(新戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(异丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(正戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(正丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(环丙甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(4-三氟甲基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(环己基甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(萘-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(4-甲氧基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(噻吩-3-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(8-(4-溴-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(8-(4-氟-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(呋喃-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯；
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-1-乙基-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(3-(4-氯苯基)-4-(1-(4-氯苯基)-2-甲氧基-2-羰基甲基)-5-氧-2-硫-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[e][1，4]-二氮杂卓-1-基)乙酸
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
本发明化合物的七元环的3位以及4位氮上含有两个非对称碳原子，有R和S两种构型。其外消旋体可通过拆分的方法[如Cristina Faggi等的方法：Synthesis 2002，No.18，2756-2760]得到光学纯的对映体。本发明包括这些对映体构型和它们的各种结合，以及外消旋化合物。
本发明还提供了该类硫代苯二氮卓类化合物的制备方法。合成路线以及具体制备方法如下：
Figure BDA0000066529930000061
合成苯二氮卓化合物的一般方法：将醛(0.1mmol)和胺(0.1mmol)在甲醇(1mL)中室温搅拌30分钟后向该溶液中加入新鲜制备的环己烯-1-异腈(0.11mmol)，继之加入芳基或杂芳基氨基酸(0.1mmol)。将溶液室温搅拌2天后，直接将甲醇浓缩，蒸干后加入10mL冰醋酸和0.2g铁粉，50℃加热1小时后滤去铁粉，用水将醋酸洗净，二氯甲烷萃取三次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。产品用柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝3∶1)，得到标题化合物。
合成单硫代苯二氮卓化合物的一般方法：将0.1mmol苯二氮卓化合物用2mL四氢呋喃溶解后，加入0.055mmol劳森试剂，70℃加热4小时，将溶剂浓缩，柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝5∶1)，得标题化合物。
合成双硫代苯二氮卓化合物的一般方法：将0.1mmol苯二氮卓化合物用2mL四氢呋喃溶解后，加入0.2mmol劳森试剂，70℃加热6小时，将溶剂浓缩，柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1)，得标题化合物。
在1位上将苯二氮卓烷基化的一般方法：将要进行烷基化的苯二氮卓(0.1mmol)和烷基化剂(0.15mmol)溶解与无水DMF中，加入0.2mmol碳酸钾，80℃加热12-16小时，将反应过滤、浓缩，柱层析分离(石油醚∶乙酸乙酯＝9∶1)得到1-烷基化的化合物。
用还原氨化在苯胺上进行取代反应的一般方法：
Figure BDA0000066529930000071
将氨基取代的苯二氮卓(0.1mmol)和醛(0.1mmol)加到5mL甲醇中，用冰醋酸将pH调至6，室温搅拌1小时后加入氰基硼氢化钠(0.2mmol)，继续反应过夜。次日，浓缩拌样，柱层析分离，得到氨基取代苯二氮卓。
作为本发明的第二方面，本发明的某些化合物可按照常规方法制备为药用盐的形式。包括其有机酸盐及无机酸盐：无机酸包括(但不限于)盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸、硝酸等，有机酸包括(但不限于)乙酸、马来酸、富马酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、对甲苯磺酸、水杨酸、草酸等。
上述任一化合物，包括光学异构体、外消旋体、顺反异构体以及任意组合或其药用盐，在作为p53-MDM2蛋白相互作用小分子抑制剂的药物用途。
进一步，所述用途是在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
经体外抗肿瘤活性研究，本发明的化合物具有良好的抗肿瘤活性，它们可用于治疗肿瘤，包括食道、胃、肠、直肠、口腔、咽、喉、肺、结肠、乳腺、子宫、子宫内膜、卵巢、前列腺、睾丸、膀胱、肾、肝、胰腺、骨、结缔组织、皮肤、眼、脑和中枢神经系统等部位发生的癌症，以及甲状腺癌、白血病、霍金氏病、淋巴瘤和骨髓瘤等。
本发明的有益效果：
本发明化合物可用在制备抑制p53-MDM2蛋白相互作用的药物方面。
本发明化合物及其盐类具有良好的抗肿瘤活性，多个化合物高于阳性对照药nutlin-3a，因此本发明化合物及其盐类可以用于制备抗肿瘤药物。
具体实施方式
以下结合具体实施例，对本发明作进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，如《分子克隆：实验室手册》(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的条件或厂商提供的条件进行。
实施例1：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000081
采用合成苯二氮卓化合物的一般方法，用167mg邻硝基苯甲酸，140mg对氯苯甲醛，200mg 2-氨基-2-(4-氯-苯基)乙酸酸甲酯和117mg环己烯-1-异腈室温反应两天得到白色粉末状固体310mg(66.2％)；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.78(s，1H，NH)，δ6.84-7.53(m，12Ar-H)，δ6.29(s，1H，CHCOO)，δ5.32(s，1H，COCH)，δ3.77(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C24H18Cl2N2O4)：467.57[M-H]。
实施例2：2-(8-氨基-3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000082
采用常规合成苯二氮卓化合物的一般方法，用212mg 2，4-二硝基苯甲酸，140mg对氯苯甲醛，200mg 2-氨基-2-(4-氯-苯基)乙酸酸甲酯和117mg环己烯-1-异腈得到淡黄色固体270mg(55.9％)；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NH)，δ6.18-7.48(m，11Ar-H)，δ5.90(s，1H，CHCOO)，δ5.72(s，2H，NH2)δ5.20(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C24H19Cl2N3O4)：485.29[M+H]。
实施例3：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-氨丙基-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000091
采用合成苯二氮卓化合物的一般方法，用212mg 2，4-二硝基苯甲酸，140mg对氯苯甲醛，200mg 2-氨基-2-(4-氯-苯基)乙酸酸甲酯和117mg环己烯-1-异腈得到实施例二的2-(8-氨基-3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯270mg。再采用还原氨化在苯胺上进行取代反应的一般方法，与乙醛得到标题化合物；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NHCO)，δ6.19-7.48(m，11Ar-H)，δ6.19(s，1H，CHCOO)，δ5.90(s，1H，NH)，δ5.21(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.84(t，2H，NHCH2)，δ1.46(m，2H)，δ0.85(t，3H，CH3)；
MS(ESI，C27H25Cl2N3O4)：526.80[M+H]，524.43[M-H]。
实施例4：2-(8-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
采用类似于实施例三的方法，与苯甲醛反应得到，白色固体；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.45(s，1H，NHCO)，δ6.21-7.45(m，16Ar-H)，δ6.20(s，1H，CHCOO)，δ5.96(s，1H，NH)，δ5.20(s，1H，COCH)，δ4.17(d，2H)，δ3.72(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H25Cl2N3O4)：574.52[M+H]，572.59[M-H]。
实施例5：2-(8-(4-氯-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000101
采用类似于实施例三的方法，与对氯苯甲醛反应得到，白色固体；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.45(s，1H，NHCO)，δ6.20-7.46(m，15Ar-H)，δ6.17(s，1H，CHCOO)，δ5.94(s，1H，NH)，δ5.20(s，1H，COCH)，δ4.17(d，2H)，δ3.71(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H24Cl3N3O4)：606.62[M-H]。
实施例6：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(新戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000102
采用类似于实施例三的方法，与新戊醛反应得到，白色固体；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.40(s，1H，NHCO)，δ6.22-7.47(m，11Ar-H)，δ6.19(s，1H，CHCOO)，δ5.98(s，1H，NH)，δ5.21(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.75(m，2H)，δ0.85(s，9H，3CH3)；
MS(ESI，C29H29Cl2N3O4)：554.82[M-H]。
实施例7：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(异丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000111
采用类似于实施例三的方法，与新戊醛反应得到，白色固体；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.42(s，1H，NHCO)，δ6.20-7.47(m，11Ar-H)，δ6.19(s，1H，CHCOO)，δ5.92(s，1H，NH)δ5.22(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.72(m，2H)，δ1.74(m，1H)，δ0.85(d，6H，2CH3)；
MS(ESI，C28H27Cl2N3O4)：1103.59[2M+Na]。
实施例8：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(正戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000112
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NHCO)，δ6.18-7.47(m，11Ar-H)，δ6.17(s，1H，CHCOO)，δ5.90(s，1H，NH)，δ5.21(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.87(t，2H)，δ1.44(m，2H)，δ1.25(s，4H，2CH2)，δ0.85(s，3H，CH3)；
MS(ESI，C29H29Cl2N3O4)：554.95[M+H]
实施例9：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(正丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000113
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NHCO)，δ6.19-7.48(m，11Ar-H)，δ6.18(s，1H，CHCOO)，δ5.90(s，1H，NH)，δ5.22(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.88(t，2H)，δ1.44(m，2H)，δ1.25(s，2H，CH2)，δ0.86(s，3H，CH3)；
MS(ESI，C28H27Cl2N3O4)：540.90[M+H]，538.68[M-H]。
实施例10：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(环丙甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000121
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NHCO)，δ6.22-7.48(m，11Ar-H)，δ6.19(s，1H，CHCOO)，δ5.93(s，1H，NH)，δ5.22(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.80(t，2H)，δ0.94(m，H)，δ0.40(t，2H，CH2)，δ0.15(t，2H，CH2)；
MS(ESI，C28H27Cl2N3O4)：538.81[M+H]，536.70[M-H]。
实施例11：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(4-三氟甲基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000122
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NHCO)，δ6.19-7.66(m，15Ar-H)，δ6.17(s，1H，CHCOO)，δ5.94(s，1H，NH)，δ5.20(s，1H，COCH)，δ4.29(d，2H)，δ3.71(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C32H24Cl2F3N3O4)：642.92[M+H]。
实施例12：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(环己基甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000131
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.41(s，1H，NHCO)，δ6.19-7.47(m，11Ar-H)，δ6.18(s，1H，CHCOO)，δ5.90(s，1H，NH)，δ5.21(s，1H，COCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.74(m，2H)，δ1.98(m，1H)，δ1.65-0.85(m，10H)；
MS(ESI，C31H31Cl2N3O4)：1184.27[2M+Na]。
实施例13：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(萘-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000132
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NHCO)，δ7.0-7.86(m，16Ar-H)，δ6.25(d，J＝8.6Hz，ArH)，δ6.18(s，1H，CHCOO)，δ6.01(s，1H，NH)，δ5.19(s，1H，COCH)，δ4.34(d，2H)，δ3.71(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C35H27Cl2N3O4)：624.41[M+H]。
实施例14：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(4-甲氧基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000133
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.44(s，1H，NHCO)，δ6.21-7.46(m，15Ar-H)，δ6.18(s，1H，CHCOO)，δ5.97(s，1H，NH)，δ5.20(s，1H，COCH)，δ4.09(d，2H)，δ3.72(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C32H27Cl2N3O5)：1231.41[2M+Na]。
实施例15：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(噻吩-3-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.46(s，1H，NHCO)，δ6.23-7.47(m，14Ar-H)，δ6.19(s，1H，CHCOO)，δ5.99(s，1H，NH)，δ5.22(s，1H，COCH)，δ4.13(d，2H)，δ3.72(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C29H23Cl2N3O4S)：580.74[M+H]。
实施例16：2-(8-(4-溴-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000142
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.45(s，1H，NHCO)，δ6.20-7.49(m，15Ar-H)，δ6.18(s，1H，CHCOO)，δ5.93(s，1H，NH)，δ5.20(s，1H，COCH)，δ4.15(d，2H)，δ3.71(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H24BrCl2N3O4)：654.47[M+H]。
实施例17：2-(8-(4-氟-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.45(s，1H，NHCO)，δ6.21-7.47(m，15Ar-H)，δ6.18(s，1H，CHCOO)，δ5.93(s，1H，NH)，δ5.20(s，1H，COCH)，δ4.15(d，2H)，δ3.71(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H24FCl2N3O4)：1207.96[2M+Na]。
实施例18：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-8-(呋喃-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000152
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.48(s，1H，NHCO)，δ6.18-7.54(m，14Ar-H)，δ6.17(s，1H，CHCOO)，δ6.01(s，1H，NH)，δ5.21(s，1H，COCH)，δ4.14(d，2H)，δ3.72(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C29H23Cl2N3O5)：1151.93[2M+Na]。
实施例19：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000153
采用合成单硫代苯二氮卓化合物的一般方法以实施例一所得化合物为原料与劳森试剂反应得到标题化合物；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.77(s，1H，NH)，δ7.08-7.50(m，12Ar-H)，δ6.26(s，1H，CHCOO)，δ5.31(s，1H，CSCH)，δ3.77(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C24H18Cl2N2O3S)：483.56[M-H]。
实施例20：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000161
采用合成双硫代苯二氮卓化合物的一般方法以实施例一所得化合物为原料与劳森试剂反应得到标题化合物；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.77(s，1H，NH)，δ7.22-7.68(m，12Ar-H)，δ6.46(s，1H，CHCOO)，δ5.36(s，1H，CSCH)，δ3.78(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C24H18Cl2N2O2S2)：499.84[M-H]。
实施例21：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-1-乙基-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000162
采用在1位上将苯二氮卓烷基化的一般方法，将2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯与碘乙烷反应得到标题化合物；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ10.77(s，1H，NH)，δ7.08-7.50(m，12Ar-H)，δ6.26(s，1H，CHCOO)，δ5.31(s，1H，CSCH)，δ3.77(s，3H，COOCH3)，δ3.22(q，2H，NCH2)，δ1.25(t，3H，CH3)；
MS(ESI，C26H22Cl2N2O3S)：514.67[M+H]。
实施例22：2-(3-(4-氯苯基)-4-(1-(4-氯苯基)-2-甲氧基-2-羰基甲基)-5-氧-2-硫-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[e][1，4]-二氮杂卓-1-基)乙酸
Figure BDA0000066529930000171
采用在1位上将苯二氮卓烷基化的一般方法，将2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯与溴乙酸反应得到标题化合物；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ11.90(s，1H，COOH)，δ6.98-7.56(m，12Ar-H)，δ6.16(s，1H，CHCOO)，δ5.20(s，1H，CSCH)，δ4.10(s，2H，CH2)，δ3.77(s，3H，COOCH3)，δ3.22(q，2H，NCH2)，δ1.25(t，3H，CH3)；
MS(ESI，C26H22Cl2N2O3S)：544.57[M+H]。
实施例23：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-氨丙基-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000172
采用合成单硫代苯二氮卓化合物的一般方法以实施例三所得化合物为原料与劳森试剂反应得到标题化合物；
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.44(s，1H，NHCO)，δ6.25-7.53(m，11Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.05(s，1H，NH)δ5.75(s，1H，CSCH)，δ3.72(s，3H，COOCH3)，δ2.84(t，2H，NHCH2)，δ1.46(m，2H)，δ0.85(t，3H，CH3)；
MS(ESI，C27H25Cl2N3O3S)：542.24[M+H]
实施例24：2-(8-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000181
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.45(s，1H，NHCO)，δ6.12-7.52(m，16Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.06(s，1H，NH)，δ5.75(s，1H，CSCH)，δ4.18(d，2H)，δ3.73(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H25Cl2N3O3S)：590.15[M+H]，588.42[M-H]。
实施例25：2-(8-(4-氯-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000182
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.45(s，1H，NHCO)，δ6.10-7.52(m，15Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.08.(s，1H，NH)，δ5.74(s，1H，CSCH)，δ4.18(d，2H)，δ3.70(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H24Cl3N3O3S)：622.61[M-H]。
实施例26：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(新戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000191
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.40(s，1H，NHCO)，δ6.33-7.53(m，11Ar-H)，δ6.15(s，1H，CHCOO)，δ6.10(s，1H，NH)，δ5.75(s，1H，CSCH)，δ3.71(s，3H，COOCH3)，δ2.74(m，2H)，δ0.85(s，9H，3CH3)；
MS(ESI，C29H29Cl2N3O3S)：570.70[M-H]。
实施例27：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(异丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000192
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.43(s，1H，NHCO)，δ6.30-7.53(m，11Ar-H)，δ6.07(s，1H，CHCOO)，δ6.07(s，1H，NH)，δ5.75(s，1H，CSCH)，δ3.71(s，3H，COOCH3)，δ2.72(t，2H)，δ1.74(m，1H)，δ0.85(d，6H，2CH3)；
MS(ESI，C28H27Cl2N3O3S)：1103.59[2M+Na]。
实施例28：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(正戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000193
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.44(s，1H，NHCO)，δ6.25-7.52(m，11Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.05(s，1H，NH)，δ5.75(s，1H，CsCH)，δ3.71(s，3H，COOCH3)，δ2.89(t，2H)，δ1.44(m，2H)，δ1.25(s，4H，2CH2)，δ0.85(t，3H，CH3)；
MS(ESI，C29H29Cl2N3O3S)：572.56[M+H]。
实施例29：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(正丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000201
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.44(s，1H，NHCO)，δ6.25-7.53(m，11Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.06(s，1H，NH)，δ5.75(s，1H，CSCH)，δ3.71(s，3H，COOCH3)，δ2.88(t，2H)，δ1.44(m，2H)，δ1.25(m，2H，CH2)，δ0.86(t，3H，CH3)；
MS(ESI，C28H27Cl2N3O3S)：554.81[M-H]。
实施例30：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(环丙甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000202
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.44(s，1H，NHCO)，δ6.28-7.53(m，11Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.09(s，1H，NH)，δ5.75(s，1H，CSCH)，δ3.71(s，3H，COOCH3)，δ2.80(t，2H)，δ0.94(m，H)，δ0.40(t，2H，CH2)，δ0.15(t，2H，CH2)；
MS(ESI，C28H27Cl2N3O3S)：554.87[M+H]。
实施例31：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(4-三氟甲基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000211
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.44(s，1H，NHCO)，δ6.30-7.67(m，15Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.09(s，1H，NH)，δ5.74(s，1H，CSCH)，δ4.30(d，2H)，δ3.70(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C32H24Cl2F3N3O3S)：656.60[M-H]。
实施例32：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(环己基甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.42(s，1H，NHCO)，δ6.25-7.53(m，11Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.05(s，1H，NH)，δ5.74(s，1H，CSCH)，δ3.71(s，3H，COOCH3)，δ2.74(m，2H)，δ1.98(m，1H)，δ1.65-.85(m，10H)；
MS(ESI，C31H31Cl2N3O3S)：594.66[M-H]。
实施例33：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(萘-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000213
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.44(s，1H，NHCO)，δ7.14-7.87(m，17Ar-H)，δ6.17(s，1H，CHCOO)，δ6.10(s，1H，NH)，δ5.72(s，1H，CSCH)，δ4.36(d，2H)，δ3.69(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C35H27Cl2N3O3S)：642.75.41[M+H]。
实施例34：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(4-甲氧基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000221
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.45(s，1H，NHCO)，δ6.29-7.53(m，15Ar-H)，δ6.11(s，1H，CHCOO)，δ6.10(s，1H，NH)，δ5.74(s，1H，CSCH)，δ4.10(d，2H)，δ3.72(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C32H27Cl2N3O4S)：618.64[M-H].
实施例35：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(噻吩-3-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.46(s，1H，NHCO)，δ6.20-7.53(m，14Ar-H)，δ6.15(s，1H，CHCOO)，δ6.11(s，1H，NH)，δ5.75(s，1H，CSCH)，δ4.16(d，2H)，δ3.71(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C29H23Cl2N3O3S2)：594.64[M-H].
实施例36：2-(8-(4-溴-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000231
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.44(s，1H，NHCO)，δ6.27-7.95(m，15Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.08(s，1H，NH)，δ5.73(s，1H，CSCH)，δ4.17(d，2H)，δ3.71(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H24BrCl2N3O3S)：668.79[M+H]。
实施例37：2-(8-(4-氟-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000232
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.45(s，1H，NHCO)，δ6.30-7.52(m，15Ar-H)，δ6.10(s，1H，CHCOO)，δ6.10(s，1H，NH)，δ5.74(s，1H，CSCH)，δ4.17(d，2H)，δ3.70(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C31H24FCl2N3O3S)：1239.59[2M+Na]。
实施例38：2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(呋喃-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
Figure BDA0000066529930000233
1H-NMR(500MHz，DMSO-d6)：δ12.43(s，1H，NHCO)，δ6.30-8.51(m，14Ar-H)，δ6.09(s，1H，CHCOO)，δ6.09(s，1H，NH)，δ5.74(s，1H，CSCH)，δ4.28(d，2H)，δ3.70(s，3H，COOCH3)；
MS(ESI，C29H23Cl2N3O4S)：1181.31[2M+Na]。
实施例39：荧光偏振法测定p53-MDM2蛋白结合抑制活性
用与MDM2残基1-118结合的p53来测定MDM2的抑制。这种复合物的已公开的晶体结构(Kussie等，Science 274：948-953(1996))证实含有p53结合位点的片断，并且我们已经解析了p53肽类似物MPRFMDYWEGLN的X-衍射结构(Bottger等，J.Mol.Biol.269：744-756(1997)).本实例使用5-FAM-(β-A)-(β-A)-FM-Aib-pY-(6-Cl-DL-Trp)-E-Ac3c-LN-NH2(PMDM6-F)，其Kd达到了1nM。将5μl试验化合物、MDM2(10nM)与PMDM6-F(1nM)(buffer：100mM磷酸三钾，pH7.5；100μg/ml BGG；0.02％叠氮钠)加入96孔黑色平底酶标板中至终体积125μl，室温孵育2小时后，用Biotek-Synergy H4读取荧光偏振值。用Graphpad Prism绘制曲线，计算得蛋白结合抑制常数(Ki)。本发明化合物其范围在0.32μM至＞100μM不等。
将高活性的化合物nutlin-3a以同样的条件配成阳性对照品溶液。
试验结果见表1，其中，样品是指相应实施例中制备的苯二氮卓类以及硫代苯二氮卓类化合物(例如实施例一即2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯)。
表1 测试化合物对p53-MDM2蛋白相互作用抑制常数Ki(单位：μM)
Figure BDA0000066529930000241
实施例40：本发明化合物的抗肿瘤活性试验
对本发明的化合物进行了肿瘤细胞增殖抑制试验，试验方法采用常规的MTT法(如吕秋军主编《新药药理学研究方法》，2007：242-243)。
细胞株选用天然表达野生型p53的U-2OS(人成骨肉瘤细胞)、和天然p53缺失的Saos-2(人骨肉瘤细胞)进行对照实验，由上海医药工业研究院药理实验室冻存和传代。培养液为DMEM+10％FBS+双抗。
MTT溶液配制：称取MTT 0.5克，溶于100ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存。
样品配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入PBS(-)配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。
将高活性的化合物nutlin-3a以同样的条件配成阳性对照品溶液。MTT法。96孔板每孔加入浓度为5-6×104个/ml的细胞悬液100μl，置37℃，5％CO2培养箱内。24h后，加入样品液，10μl/孔，设双复孔，37℃，5％CO2作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用MK-2全自动酶标仪测570nm OD值。计算半数抑制浓度IC50。
试验结果见表2，其中，样品是指相应实施例中制备的苯二氮卓类以及硫代苯二氮卓类化合物(例如实施例一即2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二氧-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯)。
表2测试化合物对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50(单位：μg/ml)
Figure BDA0000066529930000261
以上实验结果表明，本发明的化合物具有良好的抗肿瘤活性，多个化合物高于阳性对照药nutlin-3a，因此本发明化合物及其盐类可以用于制备抗肿瘤药物。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。

Claims (7)

1.一种硫代苯二氮卓类化合物，包括光学异构体、外消旋体、顺反异构体以及任意组合或其药用盐，结构如式(I)；
Figure FDA0000066529920000011
R1是氢、羟基、氨基、任选取代的胺基、低级烷基、酰胺基、低级酰胺基烷基、卤素、低级卤代烷基、低级烷氧基、硝基、氰基、肼基、低级肼基烷基、叠氮基、低级叠氮基烷基、羟基、羧基或烷氧基羰基、任选取代的羟基亚胺烷基；
R2是氢、任意取代的芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、环烷基烷基、芳烷基或杂芳基烷基；
R3是-COORa、-COOM、-SOORa，其中Ra是氢、低级烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱和杂环，并且M是阳离子；
R4是芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环、芳烷基或杂芳基烷基，所述每一基团是任选取代的；
R5是氢、低级烷基、-(CH2)nCOOH，并且n为1至6之间的整数；
X是O或者S；
所述低级烷基为含1至6个碳原子直链或支链烷基；低级烷氧基为含1至6个碳原子直链或支链烷氧基；低级卤代烷基为含1至3个卤原子取代的低级烷基；低级氰基烷基、低级酰胺基烷基、低级肼基烷基、低级叠氮基烷基分别为连接有氰基、酰胺基、肼基、叠氮基的低级烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R2、R4是独立地任意取代的芳基、杂芳基、饱和或部分不饱和杂环。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R3是-COORa、-COOM，其中Ra是氢、低级烷基、任选取代的环烷基或任选取代的饱和或部分不饱和杂环，并且M是阳离子。
4.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R3是-COORa，其中Ra是氢、低级烷基。
5.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述所述化合物选自下列化合物：
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-氨丙基-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(8-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(8-(4-氯-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(新戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(异丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(正戊基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(正丁基氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(环丙甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(4-三氟甲基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(环己基甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(萘-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(4-甲氧基-苄氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(噻吩-3-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(8-(4-溴-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(8-(4-氟-苄氨基-3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)-2(4-氯-苯基)乙酸甲酯
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-5-氧-2-硫-8-(呋喃-2-甲氨基)-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯；
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-1-乙基-5-氧-2-硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯
2-(3-(4-氯苯基)-4-(1-(4-氯苯基)-2-甲氧基-2-羰基甲基)-5-氧-2-硫-2，3，4，5-四氢-1H-苯并[e][1，4]-二氮杂卓-1-基)乙酸
2-(4-氯-苯基)-2-(3-(4-氯-苯基)-2，5-二硫-2，3-二氢-1H-苯并[e][1，4]二氮杂卓-4(5H)基)乙酸甲酯。
6.权利要求1至5中的任一化合物，包括光学异构体、外消旋体、顺反异构体以及任意组合或其药用盐，在作为p53-MDM2蛋白相互作用小分子抑制剂的药物用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，所述用途是在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003095625A2 (en) * 2002-05-13 2003-11-20 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Method for cytoprotection through mdm2 and hdm2 inhibition
CN1596114A (zh) * 2001-11-13 2005-03-16 三维药物公司 取代的1,4－苯并二氮杂䓬类及其在治疗癌症中的应用
CN101868453A (zh) * 2007-09-21 2010-10-20 詹森药业有限公司 Mdm2与p53间相互作用的抑制剂

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1596114A (zh) * 2001-11-13 2005-03-16 三维药物公司 取代的1,4－苯并二氮杂䓬类及其在治疗癌症中的应用
WO2003095625A2 (en) * 2002-05-13 2003-11-20 3-Dimensional Pharmaceuticals, Inc. Method for cytoprotection through mdm2 and hdm2 inhibition
CN101868453A (zh) * 2007-09-21 2010-10-20 詹森药业有限公司 Mdm2与p53间相互作用的抑制剂

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BRUCE L. GRASBERGER，等: "Discovery and Cocrystal Structure of Benzodiazepinedione HDM2 Antagonists That Activate p53 in Cells", 《J. MED. CHEM.》 *
庄春林 等: "干扰p53-MDM2蛋白相互作用的小分子抑制剂的研究进展", 《中国药物化学杂志》 *

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