CN102309743A

CN102309743A - 重组人血小板生成素的新用途

Info

Publication number: CN102309743A
Application number: CN201110220564A
Authority: CN
Inventors: 邢爽; 罗庆良; 从玉文; 熊国林; 谢玲
Original assignee: Institute of Radiation Medicine of CAMMS
Current assignee: Institute of Radiation Medicine of CAMMS
Priority date: 2011-08-03
Filing date: 2011-08-03
Publication date: 2012-01-11

Abstract

本发明公开了一种重组人血小板生成素的新用途。该新用途是重组人血小板生成素在制备预防和/或治疗辐射损伤药物中的应用。通过小鼠和恒河猴的辐射损伤救治实验，证明了TPO在照射后早期给药对急性辐射损伤救治作用明显。为寻找核辐射损伤早期救治药物及救治措施打下了坚实基础。

Description

重组人血小板生成素的新用途

技术领域

本发明涉及一种重组人血小板生成素的新用途。

背景技术

核能与核技术在工农业生产、医疗卫生、科学研究及国防事业等各个领域的应用日益广泛，它们在给人类带来巨大利益的同时，也存在潜在威胁。核战争、涉核恐怖袭击、地震或海啸等引起核电站发生核泄漏，而民用放射源、医疗照射等工作中由于管理不善或操作失误等因素都可导致人员受到射线照射。因此，开发高效、低毒且使用方便的抗辐射损伤药物非常必要。

国内外现有及在研的辐射防护药主要有抗氧化剂、P53抑制剂、调节细胞周期的小分子、细胞因子及造血生长因子等。其中以巯基类和雌激素类为代表的抗氧化剂是公认抗辐射效果较好的化合物，巯基类化合物WR2721因其显著的抗放作用已被FDA批准用于肿瘤患者放疗时的辅助药物。WR2721抗放效果好，但救治时间窗窄，仅于照前30分钟给药有效，且有明显的副作用。因此不适于装备及辐射事故病人的救治。雌激素类如“500”和“523”等抗放药物的抗放作用有限，仅适于重度以下骨髓型ARS的防治，且有明显的雌活性。因此，寻找抗放效果好、副作用小，尤其是照后早期治疗有效的抗放药物尤为必要。

发明内容

本发明的目的是提供重组人血小板生成素(rhTPO)的新用途。

本发明所提供的rhTPO的新用途是其在制备预防和/或治疗辐射损伤药物中的应用。所述辐射损伤包括不同种类的射线如X射线、γ射线等引起的辐射损伤。

本发明还保护一种预防和/或治疗辐射损伤药物。

本发明所提供的预防和/或治疗辐射损伤药物，其活性成分为重组人血小板生成素。

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

以重组人血小板生成素为活性成分制备的预防和/或治疗辐射损伤药物可以制成注射液、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。所述药物可在辐射前或辐射后24小时内皮下注射给药。

本发明以⁶⁰Coγ射线全身照射动物制备急性辐射损伤模型，研究rhTPO对急性辐射损伤的救治效果，并对其用药方案进行了探索。实验结果表明，照射后早期给予rhTPO干预可以提高8.0Gy一次全身照射C57小鼠的活存率，并能使7.0Gy全身照射所致的重度骨髓型放射病恒河猴全部存活，从而确定了rhTPO的抗辐射作用并明确了其早期救治的给药方案。

本发明的优点：

1、照射后早期仅两次皮下注射rhTPO即可明显提高致死剂量照射小鼠及亚致死剂量照射恒河猴的活存率，且其抗辐射效果较WR2721和雌激素类“500”更加有效。

2、照射后早期仅两次给药的用药方案即确保了rhTPO的抗辐射效果，同时还避免了因长期反复注射rhTPO而存在的副作用(可能产生抗体；长期使用rhTPO使血小板持续性增加可导致发生肺栓塞)。

附图说明

图1为rhTPO对致死剂量照射C57小鼠活存率的影响。

图2为rhTPO对7.0Gyγ射线全身照射恒河猴外周血血小板数的影响。

图3为rhTPO对7.0Gyγ射线全身照射恒河猴外周血白细胞数的影响。

图4为rhTPO对7.0Gyγ射线全身照射恒河猴外周血中性粒细胞数的影响。

图5为rhTPO对7.0Gyγ射线全身照射恒河猴外周血红细胞数的影响。

具体实施方式

下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

照射装置为中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所⁶⁰Co源(型号HFY-YC)。“500”由中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所研制生产，批号20070201。WR2721由大连美罗大药厂生产，商品名阿米福汀，批号53090902。rhTPO由沈阳三生制药有限公司生产，商品名特比澳，批号20090701。

实施例1、rhTPO对⁶⁰Coγ射线照射的C57小鼠的救治作用

1、实验动物：购自军事医学科学院动物中心的C57小鼠40只，体重16.0～18.0g，分为8.0Gy照射组、8.0Gy照射+rhTPO给药组、9.0Gy照射组、9.0Gy照射+rhTPO给药组，每组10只，雌雄各半。

2、照射条件：40只小鼠均单次全身照射⁶⁰Coγ射线，其中20只照射剂量为8.0Gy，另外20只为9.0Gy，照射剂量率为123cG/min。

3、给药：rhTPO给药组小鼠在照射后30min和24h各一次皮下注射rhTPO 100μg/kg，照射对照组皮下注射生理盐水。

4、观察指标：观察各组小鼠30、60天存活情况，计算活存率。

5、实验结果：rhTPO早期干预可显著提高致死剂量照射C57小鼠活存率，并延长活存时间。

8.0、9.0Gy⁶⁰Coγ全身照射C57小鼠30、60天活存率均为0，而照射后30min和24h各一次皮下注射rhTPO 100μg/kg可使8.0Gy照射C57小鼠30天和60天的活存率分别提高至100％和100％，使9.0Gy照射C57小鼠30天和60天的活存率分别提高至100％和20％(见图1)。

实施例2、rhTPO早期干预对7.0Gy⁶⁰Coγ射线照射的恒河猴的救治作用

1、实验动物：24只健康成年恒河猴(雌雄各半)，体重5.0±1.0kg，购自北京协尔鑫生物资源研究所，动物质量合格证号：SCXK(京)2005-0005。

2、实验方法

2.1动物分组动物按表1所示分组

表1恒河猴分组

2.2照射动物照射前10分钟用3.0％戊巴比妥钠(1ml/kg)静脉注射全身麻醉恒河猴，将其固定于特制照射椅上，全身双侧照射7.0Gy⁶⁰Coγ射线，照射距离4.75m，照射剂量率13.52cGy/min。

2.3给药方法阳性对照组“500”组和WR2721组恒河猴在照射前30min肌肉注射给药，rhTPO组恒河猴分别照射后30min和24h各一次皮下注射rhTPO，给药剂量见表1。所有实验动物根据体征给予抗生素、止血药、输血、维持水电解质、酸碱平衡和补充营养等对症治疗，各组动物对症用药原则一致。

2.4观察指标

2.4.1一般体征：观察恒河猴食欲、排泻物性状及体表有无出血或感染灶，测量体温、体重。

2.4.2存活情况：记录每只猴死亡时间，大体解剖分析死亡原因。

2.4.3外周血象：照射前两次，照射后隔天一次用XE-2100血细胞分析仪检测外周血象。

2.4.4骨髓造血祖细胞集落培养：照射后39天抽取恒河猴骨髓并分离造血祖细胞体外进行集落培养，计数各组形成造血祖细胞集落的数目。

3实验结果

3.1rhTPO早期干预可以明显提高7.0Gyγ射线全身照射恒河猴活存率并改善动物体征。

恒河猴经7.0Gy⁶⁰Coγ射线全身照射后7天出现腹泻，IR、“500”、WR2721和TPO组腹泻猴分别有2、4、5和3只，其中IR组腹泻症状较其它组持续时间长。IR、“500”和WR2721组恒河猴自第13天始陆续出现发热症状，体温高达40.0℃以上(见表2)，进食量减少；TPO组恒河猴无明显发热症状。照射后1周内照射对照、“500”和WR2721组猴平均体重减轻，而rhTPO组略增加。

对照组动物在照射后16～21天内死亡4/6，主要死于严重感染与出血并发症。各组动物活存情况见表2，TPO组恒河猴全部存活，且活存猴精神状态良好，体征无明显异常。

表27.0Gy⁶⁰Coγ射线全身照射恒河猴活存情况及体征

3.2rhTPO早期干预可显著促进7.0Gyγ射线全身照射恒河猴造血功能恢复，其效果优于“500”和WR2721。

实验结果表明，7.0Gy⁶⁰Coγ射线全身照射后恒河猴造血功能严重受抑，表现为造血细胞迅速减少且持续低下，动物出现感染与出血症状。照射后30min和24h各一次皮下注射rhTPO 10μg/kg可以明显促进7.0Gyγ射线全身照射恒河猴造血功能恢复，不仅可以明显提高外周血血小板最低值、缩短血小板低值持续时间，使其恢复时间提前，还可促进白细胞和中性粒细胞数恢复。具体如下：

血小板(PLT)照射猴外周血小板数在照射后5天开始下降，IR、“500”和WR2721组进行性急剧下降至13天达最低值(＜50×10⁹/L)，rhTPO组较前三组下降幅度缓慢，最低值明显提高(图2，表3，P＜0.01)。TPO组恒河猴血小板减少(PLT＜100×10⁹/L)和血小板(PLT)缺乏(PLT＜50×10⁹/L)持续时间均较IR、“500”和WR2721组显著缩短(P＜0.01)。照射后3周开始，照射猴外周血PLT开始恢复，rhTPO组较其他组开始恢复时间提前。

表3 7.0Gy⁶⁰Coγ射线照射后恒河猴外周血血小板数变化

注：开始恢复时间为PLT＞100×10⁹/L开始时间。较rhTPO组，**P＜0.01；其它各组间无统计学差异。

白细胞(WBC)和中性粒细胞(NEUT)数照射猴外周血白细胞数急剧下降，IR组于照射后5天WBC＜1.0×10⁹/L并持续降低，最低值仅为(0.24±0.14)×10⁹/L，白细胞减少(WBC＜2.0×10⁹/L)持续时间长达15.5天，至第3周才开始恢复。较之IR组，“500”组白细胞数最低值略升高；WR2721组于第7～30天白细胞绝对值高于同期IR组，但白细胞减少和缺乏持续时间均无缩短。如图3和表4所示，较之前三组，TPO组白细胞减少(WBC＜2.0×10⁹/L)和缺乏(WBC＜1.0×10⁹/L)持续时间均缩短，最低值明显升高，开始恢复时间提前。各组外周血中性粒细胞数变化趋势与白细胞变化基本一致，“500”、WR2721和TPO给药组中性粒细胞最低值均高于IR组，以TPO组表现最明显(图4)。

表4 7.0Gy⁶⁰Coγ射线照射后恒河猴外周血白细胞数变化

注：开始恢复时间为WBC＞2.0×10⁹/L开始时间。较rhTPO组，*P＜0.05，**P＜0.01。

红细胞(RBC)数恒河猴外周血红细胞数在照射后呈缓慢下降(见图5)，各组间无显著差异。

3.3照射后早期给予rhTPO干预有利于7.0Gyγ射线全身照射恒河猴恢复期巨核系、粒系和混合系造血细胞生成。

照射后第39天骨髓造血细胞集落形成实验结果显示，“500”、WR2721和TPO组猴骨髓细胞均能形成一定数量的集落，其中rhTPO治疗猴CFU-MK、CFU-GM和CFU-Mix克隆数高于“500”组，BFU-E和CFU-GM数高于WR2721组，而CFU-E数量较“500”和WR2721组低(见表5)。

表5给药组恒河猴照后39天骨髓血细胞集落形成单位数(个/2×10⁴单个核细胞)

较rhTPO组，*P＜0.05。

3.4rhTPO可以简化受照射恒河猴的对症治疗措施。

TPO组防治感染和出血治疗持续时间均较IR组显著缩短(见表6)。当恒河猴PLT＜50×10⁹/L时静脉输注新鲜全血，IR、“500”和WR2721组每只猴平均输血总体积见表6，而rhTPO治疗猴无需输血。

表6各组对症治疗情况

较rhTPO组，*P＜0.05，**P＜0.01；较IR组，^#P＜0.05。

Claims

1.重组人血小板生成素在制备预防和/或治疗辐射损伤药物中的应用。

2.一种预防和/或治疗辐射损伤药物，其活性成分为重组人血小板生成素。

3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于：所述药物为注射剂。

4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于：所述药物在辐射前或辐射后24小时内经皮下注射给药。