CN102305860A - 一种苯乙醇胺类物质快速检测卡及其检测方法 - Google Patents

Abstract

一种苯乙醇胺类物质快速检测卡及其检测方法，属于苯乙醇胺类物质检测技术领域。本发明苯乙醇胺类物质快速检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金（或乳胶颗粒）膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金（或乳胶颗粒）膜为含抗苯乙醇胺单克隆抗体胶体金（或乳胶颗粒）标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜横向上有两条检测带，一条为含苯乙醇胺蛋白质偶联物的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本发明优点是应用免疫学的方法直接检测饲料、组织样品、尿液或血清等样品中苯乙醇胺类饲料添加剂的含量。本发明苯乙醇胺类物质快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。

Description

一种苯乙醇胺类物质快速检测卡及其检测方法

技术领域

本发明涉及一种检测β-受体兴奋剂的器具，特别是涉及一种苯乙醇胺类非法饲料添加剂的快速检测卡及其检测方法，属于苯乙醇胺类物质检测技术领域。

背景技术

β-受体兴奋剂是一类化学合成的苯乙醇胺类物质，可分为苯胺型（如克伦特罗）、苯酚型（如沙丁胺醇）和苯二酚型（如特布他林）等三大类。这类药物在早期开发时主要用于防治人、动物支气管哮喘和痉挛，后来发现该类药物添加到饲料中后具有营养再分配作用，可以明显提高动物的瘦肉率，曾一度被作为药物促生长添加剂受到广泛关注，但是人们食用了含有该类药物残留的动物源性食品后会出现面色潮红、头痛、胸闷、心悸和四肢麻木等不良反应，严重时可能危及生命。

到现在为止仍不断有新的苯乙醇胺类药物发明出来被添加到饲料中，而目前现有技术中有针对各种苯乙醇胺类非法添加剂的检测试剂盒或试纸条，但是，没有针对这类非法添加剂共同的化学结构苯乙醇胺的检测器具。苯乙醇胺的化学分子式为C₈H₁₀NO，化学结构式如式1所示。以苯乙醇胺为共同化学结构衍生而成的非法饲料添加剂有盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗、西布特罗等，它们的结构式分别如式2-8所示，本发明统称其为苯乙醇胺类物质。

本发明拟发明一种基于小分子物质苯乙醇胺偶联蛋白质后而具有抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金（或乳胶颗粒）标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测饲料或组织等样品中的苯乙醇胺类非法饲料添加剂。反应是利用苯乙醇胺蛋白质偶联物抗原性而建立的一种检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，适合现场操作。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，灵敏度高，准确率大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能检测苯乙醇胺类非法饲料添加剂的检测器具，直接应用免疫学的方法检测饲料或组织(肌肉、肝脏和肾脏)等样品中苯乙醇胺类非法饲料添加剂的含量，克服现有色谱法检测的操作繁琐等缺点，建立基于免疫学特异性的检测方法。

本发明的技术方案：一种苯乙醇胺类物质快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4；测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金（或乳胶颗粒）膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金（或乳胶颗粒）膜7；胶体金（或乳胶颗粒）膜为含抗苯乙醇胺抗体胶体金（或乳胶颗粒）标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含苯乙醇胺蛋白质偶联物的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

采用上述苯乙醇胺类物质快速检测卡，检测样品为尿样或血清、饲料或组织样品等，处理方法如下：

A、尿样或血清：尿液或血清直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，须先经滤纸过滤或离心10min（15℃,4000r/min）。

B、饲料：称取0.5-1g饲料样品，加入1-2mL样品抽提液，在试管中搅拌1 min，静置10 min后，取清亮上层液作测试样品。

C、组织样品(肌肉、肝脏或肾脏)：取0.5-1g剪碎或匀浆过的动物组织、肉、肝脏或肾脏样品，置于含1-2mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品1 min后，经100℃水浴5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品。

样品抽提液为：0.01mol/L  PBST溶液（pH7.4），内含0.15mol/LNaCl，含质量浓度0.5%吐温-20。

当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中苯乙醇胺类物质含量未超标。

当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中苯乙醇胺类物质含量超标。

当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。

被检测样品中苯乙醇胺类物质为：苯乙醇胺、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗和/或西布特罗含量的总和。

本发明的有益效果：本发明的优点是能检测饲料、组织样品(肌肉、肝脏和肾脏)等样品中含有的苯乙醇胺类非法饲料添加剂，本快速检测卡易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

附图说明

图1苯乙醇胺类物质快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条，3、检测窗孔，4、加样孔。

图2测试条的硝酸玻璃纤维膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带，11、质控带。

图3苯乙醇胺类物质快速检测卡的测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜，7、胶体金（或乳胶颗粒）膜，8、样品垫，9、吸水膜。

具体实施方式

本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下：

实施例1

一种苯乙醇胺类物质快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。

测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2.5mm。测试条2是多层结构：底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0.5mm，长60mm，宽4mm；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0.5mm，长20-25mm，宽4mm。硝酸纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2，二条显示印迹带中，一条是检测带10，含苯乙醇胺蛋白质偶联物；另一条是质控带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5一端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6一端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金（或乳胶颗粒）膜7，胶体金（或乳胶颗粒）膜7是含抗苯乙醇胺单克隆抗体胶体金（或乳胶颗粒）标记物的玻璃纤维膜。胶体金（或乳胶颗粒）膜7厚0.5-0.8mm，长5mm，宽4mm。样品垫8厚0.5-0.8mm，长20mm，宽4mm。吸水膜9厚0.5-0.8mm，长16-20mm，宽4mm。胶体金（或乳胶颗粒）膜7、样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为1-2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。

本发明苯乙醇胺类物质快速检测卡用于检测饲料、组织样品(肌肉、肝脏和肾脏)等样品中的苯乙醇胺类非法饲料添加剂的检测。

实施例2

样品的处理方法如下：

A、尿样或血清：尿液或血清直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，须先经滤纸过滤或离心10min（15℃,4000r/min）。

B、饲料：称取0.5克饲料样品，加入1mL样品抽提液，在试管中搅拌1 min，静置10 min后，取清亮上层液作测试样品。

C、组织样品(肌肉、肝脏或肾脏)：取1g剪碎或匀浆过的动物组织、肉、肝脏或肾脏样品，置于含2mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品1 min后，经100℃水浴5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品。

样品抽提液PBST为含0.15mol/L NaCl、含0.5%吐温-20 pH7.4的0.01mol/L PBST溶液。

使用苯乙醇胺类物质快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入苯乙醇胺类物质快速检测卡的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金（或乳胶颗粒）膜7所含的抗苯乙醇胺单克隆抗体胶体金（或乳胶颗粒）标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10min内观察结果。

检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的

胶体金（或乳胶颗粒）标记的抗体，在测试带上分别与含苯乙醇胺蛋白质偶联物，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有待检苯乙醇胺类物质存在，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会与检测带所含的苯乙醇胺蛋白质偶联物反应，从而检测带不显色。主要反应的结果有以下3种情况：

1、当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，表示检测结果为阴性，说明被检测样品中苯乙醇胺类物质含量未超标。

2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，说明被检测样品中苯乙醇胺类物质含量超标。

3、当检测带10和质控带12均不显色，则表明检测试条已失效。

被检测样品中苯乙醇胺类物质为：苯乙醇胺、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗和/或西布特罗含量的总和。

Claims (2)

1.一种苯乙醇胺类物质快速检测卡，其特征在于：在长条扁平薄壳状的检测卡外壳（1）中设置测试条（2），检测卡外壳表面有检测窗孔（3）和加样孔（4）；测试条（2）是由支承背板（5）上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫（8）、胶体金膜或乳胶颗粒膜（7）、硝酸纤维素膜（6）、和吸水膜（9）所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜（6），支承背板一端叠置粘贴吸水膜（9），另一端叠置粘贴样品垫（8），吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜（7）；胶体金膜为含抗苯乙醇胺抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，或乳胶颗粒膜为含抗苯乙醇胺抗体乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含苯乙醇胺蛋白质偶联物的检测带（10），含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带（11），测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

2.用权利要求1所述的苯乙醇胺类物质快速检测卡的检测方法，其特征是应用免疫学的方法直接检测样品中苯乙醇胺类物质的含量，检测样品为饲料、组织样品、尿液或血清，处理方法如下：

A、尿样或血清：尿液或血清直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，须先经滤纸过滤或15℃、4000r/min离心10min；

B、饲料：称取0.5-1g饲料样品，加入1-2mL样品抽提液，在试管中搅拌1 min，静置10 min后，取清亮上层液作测试样品；

C、组织样品： 取0.5-1g剪碎或匀浆过的动物组织：肌肉、肝脏或肾脏组织，置于含1-2mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品1min后，经100℃水浴5 min，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品；

样品抽提液为：pH7.4、0.01mol/L PBST溶液，内含0.15mol/L NaCl，含质量浓度0.5%吐温-20；

当检测带（10）和质控带（11）同时显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中苯乙醇胺类物质含量未超标；

当检测带（10）不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中苯乙醇胺类物质含量超标；

当检测带（10）和质控带（11）均不显色，则表明测试条已失效；

被检测样品中苯乙醇胺类物质为：苯乙醇胺、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、苯乙醇胺A、班布特罗和/或西布特罗含量的总和。

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