CN101625368B - 一种酪蛋白快速检测卡及其检测方法 - Google Patents

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Abstract

一种酪蛋白快速检测卡及其检测方法，属于奶制品检测技术领域。本发明酪蛋白快速检测卡外壳内有测试条，由支承背板上依次粘贴样品垫、胶体金膜、硝酸纤维素膜和吸水膜所组成；胶体金膜为含抗酪蛋白抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有两条检测带，一条为含酪蛋白的检测带，另一条为含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带。本发明优点是应用免疫学的方法直接检测液态奶、奶粉和奶制品样品酪蛋白的含量。本发明酪蛋白快速检测卡易于制备，使用方便快速，结果准确。

Description

一种酪蛋白快速检测卡及其检测方法
技术领域
本发明涉及一种酪蛋白快速检测卡及其检测方法，是一种检测酪蛋白的检测器具，属于奶制品检测技术领域。
背景技术
牛奶是人们日常生活重要的食品，牛奶营养丰富，是人类重要的食品，其主要成份有：每100克牛奶含水分87克、蛋白质3.3克、脂肪4克、碳水化合物5克、钙120毫克、磷93毫克、铁0.2毫克、维生素A 140国际单位、维生素B10.04毫克、维生素B20.13毫克、尼克酸0.2毫克、维生素C1毫克。而牛奶蛋白质更是牛奶中的关键营养成分，鲜牛奶包装上都会标明蛋白质含量。正常情况下，牛乳所含有的蛋白总量大约为3.3％，其中2.5％左右是酪蛋白，0.6％是乳清蛋白。酪蛋白是一类磷酸蛋白，占牛乳真蛋白的80％左右。
收购生鲜牛奶、生产过程中、产品出厂时和市场上，都需检测蛋白质的含量，以判定牛奶的质量。根据蛋白质的化学性质，有几种蛋白检测方法。食品工业上普遍采用的被定为国家标准的是凯氏定氮法。这是19世纪后期丹麦人约翰·凯达尔发明的方法，原理很简单：蛋白质含有氮元素，用强酸处理样品，让蛋白质中的氮元素释放出来，测定氮的含量，就可以算出蛋白质的含量。牛奶蛋白质的含氮率约16％，根据国家标准，把测出的氮含量乘以6.38，就是蛋白质含量。
但凯氏定氮法实际上测的不是蛋白质含量，而是通过测氮含量来间接推算蛋白质的含量，如果样品中还有其他化合物含有氮，这个方法的准确性就存在问题。在通常情况下，牛奶中的主要成分只有蛋白质含有氮，其他主要成分(碳水化合物、脂肪)都不含氮，因此凯氏定氮法是一种很准确的测定蛋白质含量的方法。但是如果有人往样品中添加含氮的其他物质，通过凯氏定氮法将错误，就获得虚假的蛋白质含量。
为此，本发明拟发明一种基于蛋白质抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测牛奶样品中的酪蛋白。根据检测卡样品测试线(T)和对照线(C)的有无来判定牛奶样品中的酪蛋白含量。反应是利用牛奶蛋白抗原性而建立的一种蛋白检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，既可以在实验室进行，也可在超市、家庭、车间等实地进行测定。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。结果准确，液态奶样品灵敏度为2500ppm，准确率大于95％。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能检测酪蛋白的检测器具，直接应用免疫学的方法直接检测液态奶、奶粉和奶制品样品酪蛋白的含量，克服现有凯氏定氮法非特异性检测的缺陷，建立基于免疫学特异性的检测方法。
本发明的技术方案：一种酪蛋白快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4；测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7；胶体金膜为含抗酪蛋白抗体胶体金标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含酪蛋白的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
采用上述酪蛋白快速检测卡，检测样品可以是液态奶、奶粉和奶制品等样品。
样品的处理方法是：
针对液态奶样品的处理方法是：液态奶用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测。
针对奶粉样品的处理方法是：称取1克奶粉样品，加入9mL样品稀释液，在试管中搅拌均匀，再用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测。
针对奶制品样品的处理方法是：取1g捣碎后的奶制品样品，加入9mL样品稀释液，在试管中搅拌均匀，再用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测。
所用样品稀释液为pH 7.6、10mmol PBST溶液。
当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，检测结果为阳性，表示被检测样品中酪蛋白含量低于正常值；
当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中酪蛋白含量正常；
当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。
所述正常值为样品中酪蛋白含量不低于质量浓度2.5％。
本发明的优点是能同时检测液态奶、奶粉和奶制品等样品中含有的酪蛋白，易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
附图说明
图1酪蛋白快速检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。1、外壳，2、测试条，3、检测窗孔，4、加样孔。
图2测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹示意图。6、硝酸纤维素膜，10、检测带，11、质控带。
图3酪蛋白快速检测卡的测试条结构示意图。5、支承背板，6、硝酸纤维素膜，7、胶体金膜，8、样品垫，9、吸水膜。
具体实施方式
本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下：
实施例1
一种酪蛋白快速检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。
测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约60mm，片宽约4mm，厚度约2.5mm。测试条2是多层结构：底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约0.5mm，长60mm，宽4mm；支承背板5中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0.5mm，长20-25mm，宽4mm。硝酸纤维素膜6上有二条间隔开的横向显示印迹带，参见附图2，二条显示印迹带中，一条是检测带10，含酪蛋白；另一条是质控带11，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5一端部上叠置粘贴吸水膜9，支承背板5另一端部上叠置粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜6一端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜7，胶体金膜7是含抗酪蛋白单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7厚0.5-0.8mm，长5mm，宽4mm。样品垫8厚0.5-0.8mm，长20mm，宽4mm。吸水膜9厚0.5-0.8mm，长16-20mm，宽4mm。胶体金膜7、样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜搭接长度为1-2mm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。
本发明酪蛋白检测卡用于检测液态奶、奶粉和奶制品等样品中的酪蛋白的检测。
实施例2
样品的处理方法是：
针对液态奶样品的处理方法是：液态奶应用样品稀释液(pH 7.610mmolPBST)进行10倍稀释后用于检测。
针对奶粉样品的处理方法是：称取1克奶粉样品，加入9mL样品稀释液(pH7.610mmol PBST)，在试管中搅拌均匀，再应用样品稀释液(pH 7.610mmolPBST)进行10倍稀释后用于检测。
针对奶制品样品的处理方法是：取1g捣碎后的奶制品样品，加入9mL样品稀释液(pH 7.610mmol PBST)，在试管中搅拌均匀，再应用样品稀释液(pH 7.610mmol PBST)进行10倍稀释后用于检测。
使用酪蛋白快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔4中滴注入酪蛋白快速检测卡测试条2的样品垫8上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7所含的抗酪蛋白单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散，5-10分钟内观察结果。
检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试带上分别与所含酪蛋白，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。若样品中有待检酪蛋白存在，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会与检测带所含的酪蛋白反应，从而不显色。主要反应的结果有以下3种情况：
1、当显示检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阳性，说明被检测样品中酪蛋白含量低于正常值(2.5％wt％)。
2、当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阴性，说明被检测样品中酪蛋白含量正常(≥2.5％wt％)。
3、当检测带10和质控带11均不显色，则表明检测试条已失效。

Claims (2)

1.一种酪蛋白快速检测卡，其特征在于：它是在检测卡外壳(1)中设置测试条(2)，检测卡外壳(1)为长条扁平薄壳状外壳，长70mm，宽20mm，厚5mm，薄壳壁厚1mm，由工程塑料制成，检测卡外壳(1)由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳(1)壳盖上有检测窗孔(3)和加样孔(4)，测试条(2)放置在检测卡外壳(1)的壳座内；
测试条(2)是多层结构的窄条薄片，片长60mm，片宽4mm，厚度2.5mm；测试条(2)是多层结构：底层是支承背板(5)，为聚氯乙烯塑料薄片，厚0.5mm，长60mm，宽4mm；支承背板(5)中部叠置粘贴硝酸纤维素膜(6)，硝酸纤维素膜厚0.5mm，长20-25mm，宽4mm；硝酸纤维素膜(6)上有二条间隔开的横向显示印迹带，二条显示印迹带中，一条是检测带(10)，含酪蛋白；另一条是质控带(11)，含抗兔抗体或抗鼠抗体；支承背板(5)一端部上叠置粘贴吸水膜(9)，支承背板(5)另一端部上叠置粘贴样品垫(8)，吸水膜(9)内端与样品垫(8)内端各自分别与硝酸纤维素膜(6)一端搭接，在样品垫(8)与硝酸纤维素膜(6)的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜(7)，胶体金膜
(7)是含抗酪蛋白单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜；胶体金膜(7)厚0.5-0.8mm，长5mm，宽4mm；样品垫(8)厚0.5-0.8mm，长20mm，宽4mm；吸水膜(9)厚0.5-0.8mm，长16-20mm，宽4mm；胶体金膜(7)、样品垫(8)及吸水膜(9)与硝酸纤维素膜搭接长度为1-2mm；吸水膜(9)材料是吸水纸，样品垫(8)材料是吸水玻璃纤维膜。
2.用权利要求1所述的酪蛋白快速检测卡的检测方法，其特征是应用免疫学的方法直接检测样品中酪蛋白的含量，检测样品为液态奶、奶粉或其它奶制品，对于各种不同的检测样品用不同的处理方法；
针对液态奶样品的处理方法是：液态奶应用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测；
针对奶粉样品的处理方法是：称取1克奶粉样品，加入9mL样品稀释液，在试管中搅拌均匀，再应用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测；
针对奶制品样品的处理方法是：取1g捣碎后的奶制品样品，加入9mL样品稀释液，在试管中搅拌均匀，再应用样品稀释液进行10倍稀释后用于检测；
所用样品稀释液为pH 7.6、10mmol PBST溶液；
使用酪蛋白快速检测卡进行检测时，先将待检测的样品液从加样孔(4)中滴注入酪蛋白快速检测卡测试条(2)的样品垫(8)上，由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜(7)所含的抗酪蛋白单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜(6)扩散，5-10分钟内观察结果；
检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试带上分别与所含酪蛋白，以及质控带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带；若样品中有待检酪蛋白存在，当样品加入后即与抗体发生反应，而不会与检测带所含的酪蛋白反应，从而不显色；主要反应的结果有以下3种情况：
(1)当显示检测带(10)和质控带(11)同时显现棕红色印迹带，表示检测结果为阳性，说明被检测样品中酪蛋白含量低于正常值2.5％wt％；
(2)当检测带(10)不显示颜色，只有质控带(11)显现棕红色印迹，检测结果为阴性，说明被检测样品中酪蛋白含量正常，≥2.5％wt％；
(3)当检测带(10)和质控带(11)均不显色，则表明检测试条已失效。
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Granted publication date: 20130102

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