CN102302455A - 一种包载亲水性药物的微球制剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，工艺简单，可控性好，包括：向含聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物的有机溶液加亲水性药物水溶液涡旋形成油包水型初乳；初乳加入到含乳化剂I的液体石蜡中，涡旋形成油包油包水型复乳；复乳加入到含乳化剂II的石油醚中，继续搅拌10分钟～60分钟，离心收集微球，洗涤、干燥后即得包载亲水性药物的微球制剂。

Description

一种包载亲水性药物的微球制剂的制备方法

技术领域

本发明涉及药物的微球制剂的制备领域，具体涉及一种包载亲水性药物的微球制剂的制备方法。

背景技术

微球(microsphere)是药物溶解或者分散在高分子材料基质中形成的微小球状实体，属于基质型骨架微粒，一般直径在微米级甚至纳米级。药物制成微球后，可实现药物浓集于靶区、缓释或控释药物、降低药物的毒副作用。

在微球给药系统中，载体材料的性质是决定药物释放的主要因素。聚酯类高分子材料是迄今为止国内外研究最多、应用最广的可生物降解的合成高分子材料，它们基本上都是乳酸或其内酯的聚合物，如聚乳酸(PLA)和聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)。聚酯类高分子的降解机制为在体内水解脱酯，使高分子主链断裂，分子量逐渐变小，最终生成乳酸单体，并在乳酸脱氢酶作用下氧化为丙酮酸，作为能量代谢物质参与体内三羧酸循环，终产物为水和二氧化碳，经肺、肾、皮肤排泄到体外。因此，目前聚酯类高分子材料被公认为良好的可生物降解的控释骨架，并已获美国食品和药物管理局(FDA)批准，广泛应用于药物缓释载体和其他人体植入装置中。

但聚酯类高分子材料中的PLA和PLGA表面是疏水基团，不利于药物以扩散方式释药和包载亲水性药物，目前PLA和PLGA多用于制备脂溶性药物微球制剂，如紫杉醇、喜树碱、地塞米松、利培酮等，用于制备亲水性药物的报道较少；而且PLA和PLGA的降解产物都是酸性物质，局部大量酸性物质的堆积，影响了其生物降解性以及缓控释系统的释药行为。

复乳法是研究时间最早、应用范围最广的一种制备微球的方法，现有文献(公开号为CN101940782A的中国专利申请；Fengying Sun，Cheng Sui，Lesheng Teng，et al.Studies on the preparation，characterization andpharmacological evaluation of tolterodine PLGA microspheres.Int J Pharm，2010，397：44-49.)多采用水包油包水(W1/O/W2)法制备亲水性药物微球，其制备方法常为：将药物水溶液与PLGA的二氯甲烷溶液混合，超声乳化形成油包水(W1/O)初乳，再将初乳倒入含有乳化剂的水溶液中高压均质或高速搅拌乳化制成复乳，搅拌过夜挥去有机溶剂，使微球析出，洗涤，冻干得到微球。但在制备过程中亲水性药物容易扩散到外水相中而导致包封率不高、载药量低，并存在明显的突释效应，从而增加药物的毒副作用、造成药物的浪费且无法维持药物的长期释放，存在着技术问题。

Deborah Mck.Ciombor等人(Encapsulation of BSA using a modifiedW/O/O emulsion solvent removal method.Journal of Microencapsulation，2006，23(2)：183-194)采用油包油包水(W/O1/O2)法制备亲水性药物微球，其制备方法常为：将药物水溶液与PLGA的二氯甲烷溶液混合，超声乳化形成油包水(W1/O)初乳，再将初乳倒入含有重量百分比20％二氯甲烷的硅油中涡旋制成复乳，最后倒入石油醚中提取二氯甲烷，使微球析出，洗涤，冻干得到微球。虽然用该法制备的亲水性药物的包封率有所提高，突释有所减少，但由于其材料PLGA表面是疏水基团，不利于药物以扩散方式释药和包载亲水性药物，且采用二氯甲烷溶解PLGA与药物水溶液形成初乳比较困难，需要超声或高压均质等特殊工艺方能完成。另外，在将初乳加入硅油中涡旋形成复乳的过程中，虽然事先已经加入了一定量的二氯甲烷饱和硅油以免初乳中的二氯甲烷迅速扩散至硅油中而析出沉淀，但形成的复乳仍然不够稳定，在石油醚中沉淀时形成的微球粒径较大，并有部分材料的碎片，存在着技术缺陷。

吴灿(超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的实验研究.重庆医科大学硕士学位论文，2010)以PLA-PEG为材料，采用水包油包水(W1/O/W2)法制备亲水性药物微球，其制备方法常为：硫酸链霉素溶液与超顺磁性壳聚糖Fe3O4纳米粒混匀，加入一定量聚乙烯醇(PVA)溶液，超声分散，得内水相；将PLA-PEG溶入二氯甲烷中成油相；混合内水相与油相超声乳化后得初乳，将初乳倾入含一定PVA的外水相中，高速均质形成复乳后倒入去离子水中，再经搅拌过夜挥发二氯甲烷，得到的微球经反复洗涤、冻干即得超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球。在超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的制备过程中亲水性药物容易扩散到外水相中而导致包封率不高，并存在明显的突释效应，从而增加药物的毒副作用、造成药物的浪费且无法维持药物的长期释放，仍存在着技术缺陷。

发明内容

本发明提供了一种包载亲水性药物的微球制剂，通过引入具有特定化学结构的聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物(PLA-mPEG)作为微球基质成分，可大大改善了疏水性材料PLA、PLGA的亲水性，以乙酸乙酯和乙腈的混合溶剂作为溶解材料，得到的微球制剂具有表面圆整、粒径均匀可控、包封率高、释药行为可控的特点。

本发明还提供了一种包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，以乙酸乙酯和乙腈的混合溶剂作为溶解聚合物材料的溶剂，采用油包油包水(W/O1/O2)复乳-相分离法制备亲水性药物微球，无需超声、高压均质等特殊乳化工艺，制备工艺简单，可控性好，易于工业化生产。

一种包载亲水性药物的微球制剂，由以下重量百分比的组分组成：

亲水性药物                          0.1％～40％；

聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物     0.1％～99％；

聚乳酸或聚乳酸羟基乙酸共聚物        0.1％～99％。

为了得到更好的发明效果，以下作为本发明的优选：

本发明中的亲水性药物的选择没有特殊的限制，亲水性药物作为本发明包载亲水性药物的微球制剂药效成分，选择不同的亲水性药物使得制得的包载亲水性药物的微球制剂具有不同的药效。

在本发明的包载亲水性药物的微球制剂还可以包括适当的药用辅料，药用辅料的选择可以根据本领域技术人员的常规选择，如可选用甘露醇、甘油、氯化钠、蔗糖、明胶等药用辅料中的一种或多种。

所述的亲水性药物可选用亲水性小分子药物、亲水性大分子药物中的一种或两种。

所述的亲水性小分子药物可选用盐酸多柔比星、盐酸米托蒽醌、硫酸长春新碱、5-氟尿嘧啶、博来霉素、盐酸阿糖胞苷、绿原酸等中的一种或者两种以上。

所述的亲水性大分子药物可选用醋酸曲普瑞林、醋酸亮丙瑞林、醋酸布舍瑞林、胸腺肽、醋酸奥曲肽、重组人胰岛素、重组人生长激素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、免疫球蛋白、肌红蛋白、超氧化物岐化酶、L-天门冬酰胺酶、阿糖苷酶、重组链激酶、葡激酶、红细胞生成素、重组人血管内皮抑制素、干扰素(αlb，α2b，α2a，γ)、白细胞介素-11、白细胞介素-2、重组人粒细胞集落刺激因子、重组改构人肿瘤坏死因子、重组人表皮生长因子、重组人脑利钠肽等中的一种或者两种以上。

所述的聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物(PLA-mPEG)具有特定化学结构，作为微球基质成分。所述的PLA-mPEG的制备方法为D，L-丙交酯与聚乙二醇单甲醚在辛酸亚锡的催化作用下熔融共聚。所述的聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物的数均分子量优选为0.5万～16万，聚乳酸与聚乙二醇单甲醚的质量比优选为40∶60～95∶5，其中，聚乙二醇单甲醚的数均分子量优选为2000～8000。

所述的聚乳酸(PLA)的数均分子量优选为0.5万～10万。

所述的聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)的数均分子量优选为0.5万～6万，其中，乳酸与羟基乙酸的质量比优选为50∶50～90∶10。

所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将亲水性药物溶解于水或者磷酸盐缓冲溶液中，得到亲水性药物溶液；

(2)将聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物与聚乳酸、聚乳酸羟基乙酸共聚物两者中的一种溶解于有机溶剂中，得到有机溶液；

(3)将步骤(2)得到的有机溶液与步骤(1)得到的亲水性药物溶液混合，涡旋形成油包水型初乳，其中，有机溶液与亲水性药物溶液体积比为1～20∶1；

(4)将步骤(3)中的油包水型初乳与含乳化剂I的液体石蜡混合，涡旋形成油包油包水型复乳，其中，油包水型初乳与含乳化剂I的液体石蜡体积比为1∶3～10；

(5)边搅拌边将步骤(4)中的油包油包水型复乳加入到含乳化剂II的石油醚中，继续搅拌10分钟～60分钟，离心收集微球，经石油醚洗涤、干燥后制得包载亲水性药物的微球制剂，其中，油包油包水型复乳与含乳化剂II的液体石蜡的体积比为1∶5～15。

亲水性药物、聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物和聚乳酸或聚乳酸羟基乙酸共聚物的原料的加入量保证制得的包载亲水性药物的微球制剂中对应组分的含量在限定范围(即处方设计的包载亲水性药物的微球制剂中对应组分的含量范围)。

步骤(2)中，所述的有机溶剂选用乙酸乙酯和乙腈的混合溶剂。聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物中聚乳酸链段溶于乙酸乙酯，聚乙二醇单甲醚链段不溶于乙酸乙酯，这一特殊结构致使其在乙酸乙酯中能够自组装形成反相胶束，因此，在步骤(3)中无需超声、高压均质等特殊工艺即可形成初乳，显著改进了微球制剂的制备工艺。

步骤(4)中，所述的乳化剂I选用卵磷脂，所述的含乳化剂I的液体石蜡中乳化剂I的重量百分比含量优选为0.1％～10％。

步骤(5)中，所述的乳化剂II选用卵磷脂、单硬脂酸甘油酯、司盘80中的一种或两种以上，所述的含乳化剂II的液体石蜡中乳化剂II的重量百分比含量为0.1％～5％。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明包载亲水性药物的微球制剂中聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物(PLA-mPEG)含有亲水链段(聚乙二醇单甲醚链段)和疏水链段(聚乳酸链段)，改善了疏水性聚酯材料的亲水性，易于调节材料亲水/疏水平衡，兼有高分子载体材料和油包水(W/O)型乳化剂的双重性质。其中，聚乙二醇单甲醚链段(mPEG)分子中存在的大量乙氧基，能够分别与水分子形成氢键，分子末端剩余的羟基通过适当方式活化后可与各类蛋白分子相偶联，具有优越的物理化学以及生物性质。聚乙二醇单甲醚链段(mPEG)在体内不降解，可直接被排出体外，从而减少了PLA和PLGA的局部产酸量，从而尽量避免药物的突释。聚乙二醇单甲醚链段(mPEG)亲水层也可为药物的扩散提供一个稳定的扩散层，从而能更好的以扩散机理释药。

本发明包载亲水性药物的微球制剂具有油包油包水(W/O1/O2)型结构，有利于药物以扩散方式释药，释药行为可控，可明显减少突释效应，能维持长时间稳定地释药，具有表面圆整、粒径均匀可控、包封率高的优点。

本发明包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，采用油包油包水(W/O1/O2)复乳-相分离法制备亲水性药物微球制剂。在初乳制备过程中，由于聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物的乳化作用，亲水性药物的水溶液能均匀分散于高分子载体材料的有机溶液中，形成具有纳米乳性质的稳定的油包水(W/O1)型初乳。更为关键的是，由于聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物的存在，药物及高分子载体材料在乙酸乙酯-乙腈这一溶剂体系中无需超声、高压均质等特殊工艺即可形成初乳，显著改进了微球制剂的制备工艺。采用油包油包水(W/O1/O2)复乳法，可以避免由于内水相中的亲水性药物大量扩散出来而出现的微球大量突释的情况。在将油包油包水(W/O1/O2)型复乳加入到含乳化剂II的石油醚的过程中，溶解高分子载体材料的乙酸乙酯和乙腈迅速扩散至石油醚中(相分离法)，微球固化析出。该制备方法具有包封率高、操作简单、可控性好，重现性好等优点。

附图说明

图1为实施例1中聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物的氢核磁谱图；

图2为实施例8制备的牛血清白蛋白微球制剂的微球显微镜图。

具体实施方式

实施例1

分别称取D，L-丙交酯4.5g和聚乙二醇5000单甲醚0.5g溶于100ml无水甲苯中，加入25mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为90∶10，数均分子量为5万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 20mg、PLGA(数均分子量为6万，乳酸与羟基乙酸的质量比为50∶50)80mg溶于0.8ml乙酸乙酯与0.2ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，醋酸亮丙瑞林15mg溶于0.2ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后形成油包水型初乳，加入6ml含有重量百分比2％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入80ml含有重量百分比3％司盘80的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得醋酸亮丙瑞林微球制剂。微球粒径74.3μm，包封率56％，载药量7.3％，24h累积释放百分率13％。

实施例2

分别称取D，L-丙交酯3.5g和聚乙二醇5000单甲醚1.5g溶于100ml无水甲苯中，加入20mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为70∶30，数均分子量为1.7万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 40mg、PLGA(数均分子量为5万，乳酸与羟基乙酸的质量比为75∶25)，乳酸与羟基乙酸的质量比为75∶25)60mg溶于1.5ml乙酸乙酯与0.3ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，盐酸多柔比星20mg溶于0.5ml 0.1M磷酸盐缓冲溶液(pH 6.0)中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入8ml含有重量百分比3％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入100ml含有重量百分比4％司盘80的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得盐酸多柔比星微球制剂。微球粒径52.9μm，包封率51％，载药量8.5％，24h累积释放百分率18％。

实施例3

分别称取D，L-丙交酯3.0g和聚乙二醇5000单甲醚2.0g溶于100ml无水甲苯中，加入20mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为60∶40，数均分子量为1.3万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 50mg、PLGA(数均分子量为2万，乳酸与羟基乙酸的质量比为80∶20)50mg溶于2ml乙酸乙酯与0.5ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，盐酸米托蒽醌10mg溶于0.5ml 0.1M磷酸盐缓冲溶液(pH6.0)中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入13ml含有重量百分比5％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入120ml含有重量百分比0.6％卵磷脂的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得盐酸米托蒽醌微球制剂。微球粒径52.5μm，包封率48％，载药量4.4％，24h累积释放百分率17％。

实施例4

分别称取D，L-丙交酯4.0g和聚乙二醇5000单甲醚1.0g溶于100ml无水甲苯中，加入30mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为80∶20，数均分子量为2.5万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 80mg、PLGA(数均分子量为1万，乳酸与羟基乙酸的质量比为70∶30)20mg溶于1.2ml乙酸乙酯与0.1ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，重组人血管内皮抑制素1mg溶于0.8ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入10ml含有重量百分比4％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入140ml含有重量百分比5％单硬脂酸甘油酯的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得重组人血管内皮抑制素微球制剂。微球粒径87.1μm，包封率89％，载药量0.8％，24h累积释放百分率9％。

实施例5

分别称取D，L-丙交酯3.75g和聚乙二醇5000单甲醚1.25g溶于100ml无水甲苯中，加入25mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为75∶25，数均分子量为2万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 10mg、PLGA(数均分子量为1万，乳酸与羟基乙酸的质量比为75∶25)90mg溶于1.5ml乙酸乙酯与0.4ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，干扰素α2b 0.5mg溶于0.1ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入9ml含有重量百分比6％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入90ml含有重量百分比0.8％单硬脂酸甘油酯和重量百分比1％司盘80的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，冷冻干燥24小时即制得干扰素α2b微球制剂。微球粒径54.6μm，包封率79％，载药量0.4％，24h累积释放百分率16％。

实施例6

分别称取D，L-丙交酯4.75g和聚乙二醇5000单甲醚0.25g溶于100ml无水甲苯中，加入30mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇单甲醚5000的质量比为95∶5，数均分子量为10万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 45mg、PLGA(数均分子量为0.5万，乳酸与羟基乙酸的质量比为90∶10)55mg溶于3ml乙酸乙酯与0.2ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，超氧化物歧化酶1mg溶于0.2ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入20ml含有重量百分比3％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入220ml含有重量百分比3％司盘80的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，冷冻干燥24小时即制得超氧化物歧化酶微球制剂。微球粒径72.4μm，包封率73％，载药量0.7％，24h累积释放百分率12％。

实施例7

分别称取D，L-丙交酯2.5g和聚乙二醇5000单甲醚2.5g溶于100ml无水甲苯中，加入20mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为50∶50，数均分子量为1万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 30mg、PLGA(数均分子量为6万，乳酸与羟基乙酸的质量比为85∶15)70mg溶于2.5ml乙酸乙酯与0.2ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，重组改构人肿瘤坏死因子2mg溶于0.2ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入18ml含有重量百分比0.5％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入220ml含有重量百分比0.1％卵磷脂和重量百分比4％单硬脂酸甘油酯的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，冷冻干燥24小时即制得重组改构人肿瘤坏死因子微球制剂。微球粒径79.1μm，包封率61％，载药量1.2％，24h累积释放百分率9％。

实施例8

分别称取D，L-丙交酯2.25g和聚乙二醇5000单甲醚2.75g溶于100ml无水甲苯中，加入15mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为45∶55，数均分子量为0.9万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 35mg、PLGA(数均分子量为6万，乳酸与羟基乙酸的质量比为85∶15)65mg溶于2.5ml乙酸乙酯与0.3ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，牛血清白蛋白5mg溶于0.4ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入25ml含有重量百分比2％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入300ml含有重量百分比3％单硬脂酸甘油酯和重量百分比2％司盘80的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得牛血清白蛋白微球制剂。微球粒径63.8μm，包封率84％，载药量4.0％，24h累积释放百分率11％。

实施例9

分别称取D，L-丙交酯4.25g和聚乙二醇5000单甲醚0.75g溶于100ml无水甲苯中，加入25mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇5000单甲醚的质量比为85∶15，数均分子量为3.3万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 90mg、PLA(数均分子量为8万)10mg溶于3ml乙酸乙酯与2ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，重组人胰岛素25mg溶于1ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入30ml含有重量百分比2％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入300ml含有重量百分比0.9％卵磷脂的石油醚中，持续搅拌30分钟，1000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得重组人胰岛素微球制剂。微球粒径23.5μm，包封率63％，载药量12.6％，24h累积释放百分率20％。

实施例10

分别称取D，L-丙交酯4.75g和聚乙二醇8000单甲醚0.25g溶于100ml无水甲苯中，加入30mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇8000单甲醚的质量比为95∶5，数均分子量为16万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 50mg、PLGA(数均分子量为0.5万，乳酸与羟基乙酸的质量比为90∶10)50mg溶于3ml乙酸乙酯与3ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，人血清白蛋白10mg溶于1.2ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入30ml含有重量百分比0.8％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入300ml含有重量百分比3％司盘80的石油醚中，持续搅拌1小时，2000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得人血清白蛋白微球制剂。微球粒径34.3μm，包封率76％，载药量6.9％，24h累积释放百分率34％。

实施例11

分别称取D，L-丙交酯3.25g和聚乙二醇8000单甲醚1.75g溶于100ml无水甲苯中，加入20mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇8000单甲醚的质量比为65∶35，数均分子量为2.3万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 10mg、PLGA(数均分子量为5万，乳酸与羟基乙酸的质量比为75∶25)90mg溶于2ml乙酸乙酯与3ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，重组人生长激素1mg溶于1ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入35ml含有重量百分比1％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入300ml含有重量百分比0.2％卵磷脂和重量百分比3％单硬脂酸甘油酯的石油醚中，持续搅拌1小时，2000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得重组人生长激素微球制剂。微球粒径36.9μm，包封率72％，载药量0.7％，24h累积释放百分率31％。

实施例12

分别称取D，L-丙交酯2.25g和聚乙二醇8000单甲醚2.75g溶于100ml无水甲苯中，加入15mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇8000单甲醚的质量比为45∶55，数均分子量为1.5万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 20mg、PLGA(数均分子量为6万，乳酸与羟基乙酸的质量比为50∶50)80mg溶于1ml乙酸乙酯与2ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，5-氟尿嘧啶35mg溶于1ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入21ml含有重量百分比8％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入130ml含有重量百分比0.7％卵磷脂的石油醚中，持续搅拌1小时，2000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得5-氟尿嘧啶微球制剂。微球粒径24.2μm，包封率59％，载药量15.3％，24h累积释放百分率27％。

实施例13

分别称取D，L-丙交酯3.0g和聚乙二醇2000单甲醚2.0g溶于100ml无水甲苯中，加入25mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇2000单甲醚的质量比为60∶40，数均分子量为0.5万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 75mg、PLGA(数均分子量为6万，乳酸与羟基乙酸的质量比为90∶10)25mg溶于3ml乙酸乙酯与1ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，胸腺肽65mg溶于0.8ml水中制得亲水性药物溶液，向有机溶液中加亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入20ml含有重量百分比10％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入220ml含有重量百分比2％司盘80的石油醚中，持续搅拌1小时，2000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得胸腺肽微球制剂。微球粒径37.1μm，包封率62％，载药量31％，24h累积释放百分率28％。

实施例14

分别称取D，L-丙交酯3.5g和聚乙二醇2000单甲醚2.5g溶于100ml无水甲苯中，加入25mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥24小时即得聚乳酸与聚乙二醇2000单甲醚的质量比为70∶30，数均分子量为0.7万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 85mg、PLA(数均分子量为5万)15mg溶于3ml乙酸乙酯与1.2ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，重组链激酶36mg溶于1ml水中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入25ml含有重量百分比8％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入300ml含有重量百分比1％单硬脂酸甘油酯和重量百分比2％司盘80的石油醚中，持续搅拌1小时，2000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得重组链激酶微球制剂。微球粒径41.4μm，包封率56％，载药量14.8％，24h累积释放百分率25％。

实施例15

分别称取D，L-丙交酯4.5g和聚乙二醇2000单甲醚0.5g溶于100ml无水甲苯中，加入30mg辛酸亚锡为催化剂，在氮气保护下，130℃油浴中回流反应24h后，减压蒸馏除去部分甲苯，浓缩液倒入无水乙醚中沉淀，过滤收集产物，真空干燥即得聚乳酸与聚乙二醇2000单甲醚的质量比为90∶10，数均分子量为2万的PLA-mPEG。

称取上述PLA-mPEG 95mg、PLGA(数均分子量为3万，乳酸与羟基乙酸的质量比为80∶20)5mg溶于2ml乙酸乙酯与1.2ml乙腈的混合溶剂制得有机溶液，盐酸阿糖胞苷35mg溶于0.6ml 0.05M磷酸盐缓冲溶液(pH6.0)中制得亲水性药物溶液，两相涡旋混合60秒后，加入20ml含有重量百分比9％卵磷脂的液体石蜡，再次涡旋60秒，迅速倒入220ml含有重量百分比5％司盘80的石油醚中，持续搅拌1小时，2000rpm离心收集微球，石油醚洗涤，室温真空干燥24小时即制得盐酸阿糖胞苷微球制剂。微球粒径45.7μm，包封率59％，载药量15.3％，24h累积释放百分率28％。

Claims (10)

1.一种包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)将亲水性药物溶解于水或者磷酸盐缓冲溶液中，得到亲水性药物溶液；

(2)将聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物与聚乳酸、聚乳酸羟基乙酸共聚物两者中的一种溶解于有机溶剂中，得到有机溶液；

(3)将步骤(2)得到的有机溶液与步骤(1)得到的亲水性药物溶液混合，涡旋形成油包水型初乳，其中，有机溶液与亲水性药物溶液体积比为1～20∶1；

(4)将步骤(3)中的油包水型初乳与含乳化剂I的液体石蜡混合，涡旋形成油包油包水型复乳，其中，油包水型初乳与含乳化剂I的液体石蜡体积比为1∶3～10；

(5)边搅拌边将步骤(4)中的油包油包水型复乳加入到含乳化剂II的石油醚中，继续搅拌10分钟～60分钟，离心收集微球，经石油醚洗涤、干燥后制得包载亲水性药物的微球制剂，其中，油包油包水型复乳与含乳化剂II的石油醚的体积比为1∶5～15。

2.根据权利要求1所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的亲水性药物为亲水性小分子药物、亲水性大分子药物中的一种或两种。

3.根据权利要求2所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，所述的亲水性小分子药物为盐酸多柔比星、盐酸米托蒽醌、硫酸长春新碱、5-氟尿嘧啶、博来霉素、盐酸阿糖胞苷、绿原酸中的一种或者两种以上。

4.根据权利要求2所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，所述的亲水性大分子药物为醋酸曲普瑞林、醋酸亮丙瑞林、醋酸布舍瑞林、胸腺肽、醋酸奥曲肽、重组人胰岛素、重组人生长激素、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、免疫球蛋白、肌红蛋白、超氧化物岐化酶、L-天门冬酰胺酶、阿糖苷酶、重组链激酶、葡激酶、红细胞生成素、重组人血管内皮抑制素、干扰素、白细胞介素-11、白细胞介素-2、重组人粒细胞集落刺激因子、重组改构人肿瘤坏死因子、重组人表皮生长因子、重组人脑利钠肽中的一种或者两种以上。

5.根据权利要求1所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物的数均分子量为0.5万～16万，其中，聚乳酸与聚乙二醇单甲醚的质量比为40∶60～95∶5，聚乙二醇单甲醚的数均分子量为2000～8000。

6.根据权利要求1所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的聚乳酸的数均分子量为0.5万～10万；

所述的聚乳酸羟基乙酸共聚物的数均分子量为0.5万～6万，其中，乳酸与羟基乙酸的质量比为50∶50～90∶10。

7.根据权利要求1所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的有机溶剂为乙酸乙酯和乙腈的混合溶剂。

8.根据权利要求1所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，所述的乳化剂I为卵磷脂，所述的含乳化剂I的液体石蜡中乳化剂I的重量百分比含量为0.1％～10％。

9.根据权利要求1所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的乳化剂II为卵磷脂、单硬脂酸甘油酯、司盘80中的一种或两种以上，所述的含乳化剂II的石油醚中含乳化剂II的重量百分比含量为0.1％～5％。

10.根据权利要求1所述的包载亲水性药物的微球制剂的制备方法，其特征在于，步骤(5)中，所述的包载亲水性药物的微球制剂，由以下重量百分比的组分组成：

亲水性药物                         0.1％～40％；

聚乳酸-聚乙二醇单甲醚嵌段共聚物    0.1％～99％；

聚乳酸或聚乳酸羟基乙酸共聚物       0.1％～99％。

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